一种中药提取液、抑菌液及制备方法和应用与流程

1.本发明涉及中药提取物技术领域，尤其涉及一种中药提取液及其制备方法和应用，以及用该中药提取液制成的抑菌液及其制备方法。


背景技术：

2.病原微生物引发的呼吸道感染和胃肠道感染等疾病严重威胁着人类的健康，而随着抗生素滥用现象的加剧，细菌的耐药问题日趋严重。细菌耐药性的产生会导致部分药物失效，临床用药困难，耐药菌的增加使其引起的感染病死率提高，已成为严重的公共卫生问题。我国的中草药资源非常丰富，许多中草药具有抗菌消炎的作用，在治疗感染性疾病方面取得了优秀的成果。现代研究发现，中药抑菌作用机制与西药不同，且临床效果优良，安全性较高，对多数耐药菌有效。其中苦寒类中药因具有味苦性寒凉的特征，抗菌谱广且具有一定的抑菌效果。
3.由于中草药具有来源广泛、价格便宜、副作用小、不易残留等优点，一些中药制剂已经得到了广泛应用。中草药成分复杂，其抑菌成分可能是单一的，也可能是多种的，故不同的中草药或不同提取方式得到的提取物在抑菌效果上有很大差异，可能呈现出不同的抗菌活性。因此，并非所有苦寒类中药或任意方法提取所得提取物均具有显著的抑菌效果。


技术实现要素：

4.针对以上技术问题，本发明提供一种中药提取液、抑菌液及制备方法和应用，该中药提取液以及含有该中药提取液的抑菌液具有良好的抑菌作用，且对皮肤和粘膜刺激性低，并能促进溃疡愈合。
5.为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案：
6.一方面，本发明实施例提供一种中药提取液，由质量比为0.8～1.2:1的金银花和连翘叶共同煎煮而成。
7.连翘叶能够清热解毒、散结消痈、生津止渴、利咽润喉，具有解热、抗炎、抗菌、抗病毒的作用，抗菌谱广。金银花清热解毒，凉散风热，可用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热血毒痢，风热感冒，温病发热，甘寒清热而不伤胃，芳香透达又可祛邪。本发明通过试验研究发现，将连翘叶与金银花在特定比例下共同煎煮，所得提取液具有优异的抗菌抗病毒效果，且对皮肤和粘膜几乎无刺激。并且该中药提取液与单方的连翘叶提取液、金银花提取液及其混合物相比，具有更好的促进溃疡、皮肤修复的作用。
8.优选地，所述金银花和连翘叶的质量比为1:1。当金银花和连翘叶采用等质量比时，所得中药提取液具有更高的抑菌率，且无刺激性，并且促进溃疡、皮肤修复的作用更为显著。
9.第二方面，本发明实施例还提供了上述中药提取液的制备方法，将所述金银花和连翘叶用相当于其总质量10～12倍水煮沸，然后文火煎煮25～35min，过滤去渣，得所述中药提取液。
10.通过该制备方法制得的中药提取液具有最佳的抑菌效果和促进溃疡、皮肤修复的作用。
11.优选地，用200目筛过滤去渣。
12.第三方面，本发明实施例还提供了上述中药提取液在制备抑菌产品中的应用。
13.上述中药提取液抑菌率高，安全可靠，具有促进溃疡、皮肤修复等功效，可用于制成食品级或日化级的抑菌产品，以满足不同的实际使用和市场需求。
14.第四方面，本发明实施例还提供了一种日化级抑菌液，包括上述中药提取液和非活性成分，具体包括以下重量份数的成分：
15.所述中药提取液
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10～30份；
16.甘油
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10～40份；
17.1，2-己二醇
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3～5份。
18.本发明的日化级抑菌液所选用的非活性成分为日化产品的常用组分。该日化级抑菌液采用以上成分在特定用量下配比使用，具有无刺激性、安全可靠、抑菌效果优异等优点，可直接作为日化产品使用，也可作为日化产品添加剂使用。
19.优选地，所述日化级抑菌液包括以下重量份数的成分：
20.所述中药提取液
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20～30份；
21.甘油
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20～40份；
22.1，2-己二醇
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3～5份。
23.优选地，所述日化级抑菌液包括以下重量份数的成分：
24.所述中药提取液
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20份；
25.甘油
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30份；
26.1，2-己二醇
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4份。
27.第五方面，本发明实施例还提供了一种食品级抑菌液，包括上述中药提取液和非活性成分，具体包括以下重量份数的成分：
[0028][0029]
本发明的食品级抑菌液所采用的非活性成分均为食品常用添加剂，所得产品更加安全，可用于口腔制品。并且，以上特定成分与配比的非活性成分能够显著延缓该中药提取液变质速度，延长其有效期，使该食品级抑菌液具有更长的货架期，且使用期间质量稳定。
该食品级抑菌液可直接或稀释后用于对食品、口腔、皮肤表面进行消毒，也可作为食品添加剂使用。
[0030]
优选地，所述食品级抑菌液具体包括以下重量份数的成分：
[0031][0032]
优选地，所述食品级抑菌液具体包括以下重量份数的成分：
[0033]
具体实施方式
[0034]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
[0035]
以下实施例中所采用的实验方法如无特殊说明，均为本领域的常规方法。
[0036]
以下实施例中所使用的金银花符合《中国药典》(2015年版)一部正文各药材项下的有关规定。
[0037]
以下实施例中所采用的原料、试剂等，如无特殊说明，均从商业途径获得。
[0038]
实施例1
[0039]
本发明实施例提供了一种中药提取液，由质量比为1:1的金银花和连翘叶共同煎
煮而成，其制备方法为：
[0040]
将金银花和连翘叶用去离子水冲洗两遍后控水，晾干，装入药材袋，放入200目滤布袋中，用相当于其总质量10倍水煮沸，然后文火煎煮30min，200目滤布过滤去渣，即得。
[0041]
实施例2
[0042]
本发明实施例提供了一种中药提取液，由质量比为0.8:1的金银花和连翘叶共同煎煮而成，其制备方法为：
[0043]
将金银花和连翘叶用相当于其总质量10倍水煮沸，然后文火煎煮25min，200目筛过滤去渣，即得。
[0044]
实施例3
[0045]
本发明实施例提供了一种中药提取液，由质量比为1.2:1的金银花和连翘叶共同煎煮而成，其制备方法为：
[0046]
将金银花和连翘叶用相当于其总质量12倍水煮沸，然后文火煎煮35min，200目筛过滤去渣，即得。
[0047]
实施例4～8
[0048]
本发明实施例4～8提供了用实施例1所得中药提取液制得的日化级抑菌液，各实施例中包括以下如表1所示的重量份数配比的成分：
[0049]
表1实施例4～8日化级抑菌液
[0050][0051][0052]
以上日化级抑菌液的制备方法为：
[0053]
将中药提取液与甘油、1，2-己二醇混合，用200目滤布过滤，即得。
[0054]
实施例9～16
[0055]
本发明实施例9～16提供了用实施例1所得中药提取液制得的食品级抑菌液，各实施例中包括以下如表2所示的重量份数配比的成分：
[0056]
表2实施例9～16食品级抑菌液
[0057][0058]
以上食品级抑菌液的制备方法为：
[0059]
将中药提取液与羟苯甲酯、乙醇、柠檬酸、柠檬酸钠、甘油、山梨糖醇、苯甲酸钠混合，4000rpm离心，取上清液，即得。
[0060]
对比例1
[0061]
本对比例提供了连翘叶提取液，其制备方法为：
[0062]
将连翘叶用去离子水冲洗两遍后控水，晾干，装入药材袋，放入200目滤布袋中，用相当于其质量10倍水煮沸，然后文火煎煮30min，200目滤布过滤去渣，即得。
[0063]
对比例2
[0064]
本对比例提供了金银花提取液，其制备方法为：
[0065]
将金银花用去离子水冲洗两遍后控水，晾干，装入药材袋，放入200目滤布袋中，用相当于其质量10倍水煮沸，然后文火煎煮30min，200目滤布过滤去渣，即得。
[0066]
对比例3
[0067]
本对比例提供了一种提取液混合物，其制备方法为：
[0068]
按对比例1、2的方法分别制备连翘提取液和金银花提取液，按生药质量比为1:1的比例将连翘提取液和金银花提取液混合，即得。
[0069]
试验例1
[0070]
本试验例对以上实施例4～8所得日化级抑菌液的抑菌效果进行了考察。
[0071]
下述实验中所采用的营养琼脂培养基的成分配比为：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000ml；
[0072]
沙氏培养基的成分为：蛋白胨10g、琼脂20g、葡萄糖40g，蒸馏水1l。
[0073]
试验菌株：金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(atcc10231)。
[0074]
1、实验方法
[0075]
将试验菌第5代的营养琼脂培养基斜面培养物(24h)用5ml 0.03mol/l磷酸盐缓冲液(以下简称pbs)洗下菌苔，用上述pbs稀释，制成浓度为5
×
104cfu/ml的菌悬液。
[0076]
以实施例4～8所得的日化级抑菌液作为被试样液，取被试样液(5ml)和对照样液(经灭菌处理的去离子水)各7管。
[0077]
分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl上述菌悬液，均匀混合，开始计时，
作用2min、5min、10min、30min，将混合后的样液(0.5ml)投入含5ml pbs的试管内，充分混匀，分别吸取0.5ml，置于两个平皿，用凉至40～50℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃
±
2℃培养48h(细菌)或72h(酵母菌)，作活菌菌落计数。
[0078]
试验重复3次，按下式计算抑菌率：
[0079]
x＝(a-b)/a
×
100％；
[0080]
式中：x为抑菌率，a为对照样液平均菌落数；b为被试样液平均菌落数。
[0081]
2、实验结果
[0082]
记录各实施例的日化级抑菌液在不同作用时间下的抑菌率平均值，结果见表3～表5。
[0083]
表3日化级抑菌液对大肠杆菌的抑菌率
[0084][0085]
表4日化级抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌率
[0086][0087]
表5日化级抑菌液对白色念珠菌的抑菌率
[0088][0089]
由以上结果可见，本发明提供的食品级抑菌液具有优异的抑菌效果，其中实施例4～6的抑菌效果最好。
[0090]
试验例2
[0091]
本试验例对以上实施例9～16中食品级抑菌液的抑菌效果进行了考察。
[0092]
下述实验中所采用的营养琼脂培养基的成分配比为：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂17g，蒸馏水1000ml；
[0093]
沙氏培养基的成分为：蛋白胨10g、琼脂20g、葡萄糖40g，蒸馏水1l。
[0094]
试验菌株：金黄色葡萄球菌(atcc6538)、大肠杆菌(8099)、白色念珠菌(atcc10231)、铜绿假单胞菌(atcc15442)。
[0095]
1、实验方法
[0096]
将试验菌第5代的营养琼脂培养基斜面培养物(24h)用5ml 0.03mol/l磷酸盐缓冲液(以下简称pbs)洗下菌苔，用上述pbs稀释，制成浓度为5
×
104cfu/ml的菌悬液。
[0097]
以实施例9～16所得食品级抑菌液作为被试样液，取被试样液(5ml)和对照样液(经灭菌处理的去离子水)各7管。
[0098]
分别在每个被试样液和对照样液内滴加100μl上述菌悬液，均匀混合，开始计时，作用2min、5min、10min、20min，将混合后的样液(0.5ml)投入含5ml pbs的试管内，充分混匀，分别吸取0.5ml，置于两个平皿，用凉至40～50℃的营养琼脂培养基(细菌)或沙氏琼脂培养基(酵母菌)15ml作倾注，转动平皿，使其充分均匀，琼脂凝固后翻转平板，35℃
±
2℃培养48h(细菌)或72h(酵母菌)，作活菌菌落计数。
[0099]
试验重复3次，按下式计算抑菌率：
[0100]
x＝(a-b)/a
×
100％；
[0101]
式中：x为抑菌率，a为对照样液平均菌落数；b为被试样液平均菌落数。
[0102]
3、实验结果
[0103]
记录各实施例的日化级抑菌液在不同作用时间下的抑菌率平均值，结果见表6～表9。
[0104]
表6食品级抑菌液对大肠杆菌的抑菌率
[0105][0106]
表7食品级抑菌液对金黄色葡萄球菌的抑菌率
[0107][0108]
表8食品级抑菌液对白色念珠菌的抑菌率
[0109]
[0110][0111]
表9食品级抑菌液对铜绿假单胞菌的抑菌率
[0112][0113]
由以上结果可见，本发明提供的食品级抑菌液具有优异的抑菌效果，其中实施例9、11、12的抑菌效果最好。
[0114]
试验例3
[0115]
本试验例对以上实施例9、11、12所得食品级抑菌液的进行了最小抑菌浓度的考察。
[0116]
采用琼脂稀释法将不同浓度的食品级抑菌剂混合溶解在琼脂培养基中，然后点种细菌，通过细菌的生长与否，确定抗(抑)菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，mic)。结果如表10所示：
[0117]
表10最小抑菌浓度结果
[0118]
[0119][0120]
以上试验数据说明，本发明提供的食品级抑菌液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌有较强的抑菌作用，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度均＞100000mg/kg。
[0121]
试验例4
[0122]
本试验例考察了上述实施例4～8所得日化级抑菌液的抑菌效果的刺激性。
[0123]
1、实验方法
[0124]
采用10日龄鸡胚，每组6只。暴露出鸡胚绒毛尿囊膜(cam)，取待测抑菌液0.2ml均匀涂布于cam上，接触30秒，然后观察5分钟内cam血管变化，记录cam血管的出血、凝血和血管融解情况并判分，按公式计算刺激分值。
[0125]
判分标准：
[0126]
出血：血液从cam的血管或毛细管流出。根据无出血、轻度出血、中度出血、重度出血分别判予0、1、2、3分；
[0127]
凝血：指血管内外蛋白变性，表现为血栓、管壁肿胀、血管内外的凝血点出现、血管外乳浊状浑浊等状况。根据无凝血、轻度凝血、中度凝血、重度凝血分别判予0、1、2、3分；
[0128]
血管融解：指cam膜上血管消融。根据无血管融解、轻度血管融解、中度血管融解、重度血管融解分别判予0、1、2、3分。
[0129]
刺激分值计算公式：
[0130][0131]
结果如表11所示。
[0132]
表11日化级抑菌液对鸡胚尿囊膜刺激试验结果
[0133][0134]
由表11结果可见，本发明提供的日化级抑菌液刺激性小，其中实施例4提供的日化级抑菌液无刺激性。
[0135]
试验例5
[0136]
本试验例考察了上述实施例9、11、12所得食品级抑菌液的抑菌效果的刺激性。
[0137]
实验方法同试验例4，结果如表12所示。
[0138]
表12食品级抑菌液对鸡胚尿囊膜刺激试验结果
[0139][0140]
由表12结果可见，本发明提供的食品级抑菌液刺激性小，其中实施例9、12提供的食品级抑菌液无刺激性。但实施例12提供的食品级抑菌液略呈浑浊，使其在实际应用中不适合用于透明产品，故以实施例9提供的食品级抑菌液为最优。
[0141]
试验例6
[0142]
本试验例对上述实施例1、4、9和对比例1～3制备所得产品进行了其对加速口腔溃疡愈合的效果。
[0143]
1、实验动物
[0144]
spf级wistar大鼠，雌雄各半，体重200g
±
20g。
[0145]
2、试验方法
[0146]
将大鼠随机分为实施例1组、实施例4组、实施例9组、对比例1组、对比例2组、对比例3组和空白对照组，每组10只。将各组大鼠用乙醚麻醉，仰卧固定，用浸透900g/l苯酚溶液、直径约6mm的棉球在大鼠一侧颊黏膜上灼烧60s，可见颊黏膜上出现直径约5mm左右的白色损害；次日可见大鼠口唇边潮湿，流口水，颊黏膜处红肿，表示造模成功。记录各组大鼠在给药前的溃疡面直径。
[0147]
取实施例1、4、9和对比例1～3制备所得产品，每天分别对实施例1组、实施例4组、实施例9组、对比例1组、对比例2组、对比例3组大鼠在溃疡处喷4次，相邻两次之间间隔2h。空白对照组不给药。每次给药后禁食禁水30min，连续给药6d。给药期间内，每天最后一次给药后记录口腔溃疡愈合的总只数，在最后一次给药后12h时记录各组大鼠溃疡面直径，结果如表13所示。
[0148]
表13各组口腔抑菌液对加速口腔溃疡愈合的试验结果
[0149][0150]
注：a与空白对照组相比p＜0.05；b与实施例1组相比，p＜0.05
[0151]
由表13的结果可见，与空白对照组以及单方的连翘叶提取液、金银花提取液及其混合物相比相比，本发明实施例1提供的中药提取液能够显著加速口腔溃疡的愈合并更有效地促进使溃疡面直径缩小。本发明实施例4、9提供日化级抑菌液和食品级抑菌液也具有加速口腔溃疡的愈合和促进使溃疡面直径缩小的作用。
[0152]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。