白头翁皂苷B4在制备治疗或预防子宫肌瘤的药物的用途的制作方法

白头翁皂苷b4在制备治疗或预防子宫肌瘤的药物的用途
技术领域
1.本发明涉及医药技术领域。更具体地说，本发明涉及一种白头翁皂苷b4在制备治疗或预防子宫肌瘤的药物的用途。


背景技术：

2.子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的一种良性肿瘤，也是人体中最常见的肿瘤之一，又称为纤维肌瘤、子宫纤维瘤，主要是由子宫平滑肌细胞增生而成。有关子宫肌瘤的病因迄今仍不十分清楚，可能涉及到正常肌层的细胞突变、性激素及局部生长因子间的较为复杂的相互作用。子宫肌瘤属于良性肿瘤，恶变几率非常小，而子宫癌(子宫内膜癌)属于恶性肿瘤，由性病的感染、长期子宫颈的损伤、破皮、糜烂、发炎等病因造成。两者的常见症状也存在差异。子宫肌瘤症状多表现在月经期间，多发生于黏膜下及肌壁间肌瘤，多表现为月经量过多、经期延长或缩短。子宫癌常见的症状有：阴道流血、不规则的月经周期及经间期出血以及绝经后阴道流血。子宫肌瘤治疗手段与子宫癌不同，子宫癌治疗方法主要由手术治疗、放射治疗、激素和化学治疗等；子宫肌瘤直径在2-3厘米以下，一般建议观察，不需要治疗，超过5厘米或位置特殊引起症状需要刮宫术、肌瘤剔除术或激素治疗，目前的药物治疗以促性腺激素释放激素激动剂、米非司酮、达那唑、他莫昔芬(三苯氧胺)、雄激素类药物等西药为主。因此治疗方法不同，治疗子宫癌的药物和方法不适用与子宫肌瘤。白头翁具有清热解毒、凉血等作用，目前对白头翁皂苷b4对防治子宫肌瘤尚未见报道。


技术实现要素：

3.本发明的目的是解决至少上述问题，提供一种白头翁皂苷b4在制备治疗或预防子宫肌瘤的药物的用途，其能够对雌激素负荷法造模的大鼠的子宫肌瘤具有较好的治疗作用。
4.为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种白头翁皂苷b4作为唯一活性成分在制备治疗或预防子宫肌瘤的药物的用途。
5.优选的是，所述药物含有治疗有效量的白头翁皂苷b4和药学上可接受的载体。
6.优选的是，所述药物含有治疗有效量的白头翁皂苷b4的盐酸盐、高氯酸盐、甲磺酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或硫酸盐和药学上可接受的载体。
7.优选的是，药学上可接受的载体包括稀释剂、增溶剂、潜溶剂、崩解剂、分散剂、润滑剂、矫味剂、抗氧剂、粘合剂、吸收剂、湿润剂、缓冲剂、交联剂。
8.优选的是，所述药物被制成药学上允许的剂型。
9.优选的是，所述剂型包括丸剂、片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、滴丸、滴剂、喷雾剂、注射剂、混悬液、膏剂、凝胶剂、栓剂。
10.优选的是，白头翁皂苷b4的给药剂量为不低于1mg/kg
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d。
11.本发明至少包括以下有益效果：
12.本发明中，白头翁皂苷b4作为唯一活性成分治疗或预防子宫肌瘤，对于雌激素负
荷法造模的大鼠，白头翁皂苷b4能够改善脱毛症状和性情，改善子宫囊肿、结节及肿胀，改善子宫平滑肌形态，改善子宫系数，降低雌二醇水平、雌激素受体水平、孕酮水平，另外，壳聚糖、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯以及二者联用对b4的促吸收作用不明显；
13.本实验中使用口服给药方式最低剂量是20mg/kg，与注射剂型比较，生物利用度相对较低，在使用注射给药时，最低剂量不低1mg/kg。
14.本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
15.图1为本发明的各组大鼠子宫组织病理学观察图；
16.图2为本发明的各组大鼠子宫系数图；
17.图3为本发明的各组大鼠血清和组织雌二醇表达情况图；
18.图4为本发明的各组大鼠血清和组织雌激素受体表达情况图；
19.图5为本发明的各组大鼠血清和组织孕酮表达情况图。
具体实施方式
20.下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
21.需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
22.1材料
23.1.1动物
24.cd(sd)大鼠，雌性，未孕，体重200-220g，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司，spf级，生产许可证号：scxk(浙)2019-0001，合格证编号：20210624aazz0619000227。动物饲养房自然明暗周期，室温，动物自由摄氏、饮水。
25.1.2药物与试剂
26.苯甲酸雌二醇注射液，2mg/ml，宁波第二激素厂，批号：(2016)110252511；黄体酮注射液，10mg/ml，宁波第二激素厂，批号：110251670；白头翁皂苷b4，由实验室制备提供；壳聚糖，阿拉丁有限公司，批号：9012-76-4；15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯，凤礼精求有限公司，批号：73059868e0；米非司酮，麦克林有限公司，批号：m830038。
27.大鼠雌二醇(e2)elisa试剂盒：江苏酶免实业有限公司，批号：mm-0575r1，
28.大鼠雌激素受体(er)elisa试剂盒：江苏酶免实业有限公司，批号：mm-0567r1，
29.大鼠孕激素受体(p)elisa试剂盒：江苏酶免实业有限公司，批号：mm-0551r1。
30.2方法
31.2.1分组
32.按体重随机分为7组，空白对照组、模型对照组、阳性对照组各8只，白头翁皂苷b4 20mg/kg组、白头翁皂苷b4 20mg/kg 壳聚糖50mg/kg组、白头翁皂苷b4 20mg/kg 15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯50mg/kg组、白头翁皂苷b4 20mg/kg (壳聚糖 15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯)50mg/kg组各7只，为了方便简述，以上各组在附图中分别用control(con)、mol、p、b4、b4 k、
b4 j、b4 k j表示。
33.2.2模型制备
34.大鼠适应性饲养3天后，采用雌激素负荷法造模：除空白对照组外，其余六组大鼠每天均给予肌肉注射苯甲酸雌二醇(0.5mg/kg)，隔天每只大鼠增加注射黄体酮(1mg/kg)，连续注射9周，每天称重一次，并根据体重调整造模药物用量。经大鼠子宫病理学显示腺体增生及肌纤维明显增生提示造模成功。
35.2.3给药
36.除空白对照组外，其余六组大鼠于造模成功后给药，阳性对照组每天腹腔注射米非司酮1.25mg/kg，四个b4给药组灌胃给予b4 20mg/kg加(或不加)促吸收剂50mg/kg，空白对照组、模型对照组每天给予等量生理盐水。
37.2.4大鼠子宫病理学检查
38.给药4周后处理大鼠，打开腹腔，观察子宫和肌瘤形态，沿子宫膀胱连接处剪取子宫，剥离脂肪，拍照，称重，计算子宫脏器系数。并将新鲜病变组织于多聚甲醛中固定，进行he染色。
39.3结果
40.3.1造模及后大鼠一般行为学变化
41.造模前各组大鼠性情温和，毛色润泽柔顺，进食饮水良好。造模三周左右，各造模组出现毛色发黄、皮毛凌乱，部分大鼠还有脱毛症状，且随造模时间延长，脱毛面积增大，且大鼠处于易激怒状态，不易抓取，喜斗殴。给药后情况有所改善。
42.3.2子宫大体形态观察
43.实验结束后，解剖各组大鼠子宫：空白对照组子宫组织质地均匀，颜色鲜亮，两侧子宫对称，呈y形，未见结节或囊肿。模型对照组部分子宫根部明显增粗，颜色黯淡，并可触摸导有不同程度米粒大小肿块。阳性对照组、四个b4给药组的子宫质地均匀，颜色较淡，未见明显的囊肿、结节及肿胀。
44.3.3子宫组织病理学观察
45.从he染色结果可见，空白对照组大鼠子宫平滑细胞排列整齐，紧密，形态正常，色泽均一，肌层未见炎性细胞浸润，未出现增生；模型对照组大鼠子宫平滑肌增厚，细胞边界不清晰，细胞核出现扁圆形状，肌纤维排列紊乱无序，可见明显炎性细胞浸润。阳性对照组、四个b4给药组的大鼠子宫平滑细胞排列整齐，形态正常，色泽均一，肌层炎性细胞浸润减少，如图1所示。
46.3.4子宫系数
47.正常情况下大鼠子宫重量与体重的比值是比较恒定的，当大鼠子宫状态受损发生变化后，子宫系数也会随之改变。子宫系数＝子宫重量/体重*100％，当子宫系数增大，表示子宫发生了充血、水肿或增生肥大等。
48.本研究发现，与空白对照组比较，模型对照组的子宫系数明显增加，而与模型对照组相比较，阳性对照组、四个b4给药组的子宫系数明显降低。这说明，药物对子宫肌瘤具有显著的治疗作用，如图2所示，
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49.3.5雌二醇表达情况
50.雌二醇(e2)是体内主要由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素，能促使子宫内膜
增生，增强子宫平滑肌的收缩。临床上，e2的升高通常是由卵巢疾病所引起的。因此，通过检测e2的表达水平也作为卵巢及子宫疾病的诊断指标。
51.本实验通过检测大鼠血清及子宫组织中的e2水平发现，与空白对照组比较，模型对照组的e2水平显著增加，而与模型对照组相比较，阳性对照组、四个b4给药组的e2水平明显降低。这说明，药物对子宫肌瘤具有显著的治疗作用，如图3所示，左侧为血清、右侧为组织，
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52.3.6雌激素受体表达情况
53.雌激素受体(er)一种蛋白质分子，可与激素发生特异性结合而形成激素-受体复合物，使雌激素发挥其生物学效应。临床研究发现，er的增高往往伴随着子宫肌瘤增大，抑制或降低雌激素水平可防止肌瘤生长，缩小肌瘤及改善临床症状。
54.本实验通过检测大鼠血清及子宫组织中的er水平发现，与空白对照组比较，模型对照组的er水平显著增加，而与模型对照组相比较，阳性对照组、四个b4给药组的er水平明显降低。这说明，药物对子宫肌瘤具有显著的治疗作用，如图4所示，左侧为血清、右侧为组织，
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55.3.7孕酮表达情况
56.孕酮(p)，是一种由卵巢黄体分泌的天然孕激素。有研究报道，孕酮是最先引起子宫肌瘤生长的激素。
57.本实验通过检测大鼠血清及子宫组织中的p水平发现，与空白对照组比较，模型对照组的p水平显著增加，而与模型对照组相比较，阳性对照组、四个b4给药组的p水平明显降低。这说明，药物对子宫肌瘤具有显著的治疗作用，如图5所示，左侧为血清、右侧为组织，
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58.4结论
59.b4对大鼠子宫肌瘤具有较好的治疗作用。但壳聚糖、15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯以及二者联用对b4的促吸收作用不明显。
60.本实验中使用口服给药方式最低剂量是20mg/kg，与注射剂型比较，生物利用度相对较低，在使用注射给药时，最低剂量不低1mg/kg。
61.这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
62.尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。