一种提高线性多肽生物表达的方法与流程

技术特征：
1.一种多肽表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：将eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签与目标多肽融合表达所述目标多肽；其中，所述eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签包括seq id no.1所示的氨基酸序列。2.一种制备多肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：将eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签与目标多肽融合表达，得到融合蛋白；将所述融合蛋白复性；采用与所述联合标签相适应的特异蛋白酶切除复性后融合蛋白中的sumo标签，即得所述目标多肽；其中，所述eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签包括seq id no.1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述目标多肽为抗菌肽、线性肽和毒肽中的任意一种。4.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述复性过程中采用的缓冲液为1-1.5mtris-hcl，ph 7-8，2.5-10％甘油，1-10mm三(2-羧乙基)膦盐酸盐。5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述联合标签相适应的特异蛋白酶为sumo蛋白酶；所述切除复性后融合蛋白中的sumo标签方法为的向浓度为0.8-1.2mg复性融合蛋白/ml复性液中添加sumo蛋白酶。6.根据权利要求2所述方法，其特征在于，包括以下步骤：将eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签与目标多肽融合表达，得到融合蛋白；将所述融合蛋白复性；采用与所述联合标签相适应的特异蛋白酶切除复性后融合蛋白中sumo标签，纯化，即得所述目标多肽；其中，所述纯化为采用c8反相柱纯化；所述c8反相柱的参数为碳含量：9％，比表面积：280m2/g粒径：40-75μm平均孔径：7.一种eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签，其特征在于，包括seq id no.1所示的氨基酸序列。8.一种编码权利要求7所述eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签的基因，其特征在于，包括seq id no.2所示的核苷酸序列。9.一种蛋白表达载体，其特征在于，包括权利要求7所述的eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签。10.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求6所述的eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签，或权利要求7所述的编码eddie(c69e、c168e)-sumo联合标签的基因，或权利要求8所述的蛋白表达载体。

技术总结
本发明公开了一种提高线性多肽生物表达的方法，将EDDIE(C69E、C168E)-Sumo联合标签与目标多肽融合表达，得到融合蛋白；将所述融合蛋白复性；采用与所述联合标签相适应的特异蛋白酶切除复性后融合蛋白中的Sumo标签，即能提高线性多肽生物表达。本发明结合EDDIE和SUMO蛋白两种标签的优点，首次利用EDDIE(C69E、C168E)加SUMO联合标签在C端融合目的多肽，并利用SUMO蛋白酶切除标签，采用固相萃取小柱C8反相柱纯化酶切产物，获得多肽，以此建立大肠杆菌高效表达系统，从而得到高表达、高纯度的目的多肽，主要用于线性多肽的生物合成，具有产量高、成本低、易于纯化的优点。易于纯化的优点。易于纯化的优点。


技术研发人员：苗林 邹升 潘明娜 王芹芹 王新波 李义龙 刘文革 刘惠清 李向群
受保护的技术使用者：湖南中晟全肽生化有限公司
技术研发日：2022.02.25
技术公布日：2022/5/31