一种美白共载离子液体型脂质体及其制备方法

1.本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及一种美白共载离子液体型脂质体及其制备方法。


背景技术：

2.亚洲消费者对于皮肤白净的追求远超过其他地区，对美白淡斑效果的追求也很迫切。市面上，美白淡斑的原料层出不穷，从传统的原料(维生素c衍生物、果酸、曲酸及其双棕榈酸酯、β-熊果苷)到后来的传明酸、α-熊果苷、各种提取物等，达到几百种之多。但这些原料一般都要两三个月才能初步见效，消费者易失去耐心。近年来，多种间苯二酚的对位衍生物作为美白原料应用于化妆品配方，其中4-丁基间苯二酚被认为是一种非常有效的新型美白原料。研究人员在进行美白性能对比研究时，证明4-丁基间苯二酚美白效果比曲酸要强24倍，比熊果苷强310倍，可以强效抑制黑色素合成，被誉为“地表第二强美白成分”。四氢姜黄素是由姜科植物姜黄根基中分离提取的姜黄素氢化而来，目前已被证明具有抗炎、抗氧化、消除氧自由基、保护肝脏、抗纤维化、肿瘤活性和防止阿尔茨海默氏病等多种药理作用。由于四氢姜黄素广泛的生物学功效，近年来在化妆品领域的研究越来越广泛，研究发现四氢姜黄素在美白、抗炎和抗氧化等方面有显著功效作用，作为一种天然来源的功能性美白原料应用于化妆品领域。但是，4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素均存在难溶于水，刺激性大，且容易被氧化和容易变色等缺点，大大限制了其在化妆品中的应用。
3.脂质体亦称类脂小球，是指将生物活性物包埋于两亲性类脂分子所形成的磷脂双分子层结构内的封闭囊泡，与细胞膜结构类似，主要是由磷脂和胆固醇构成，又被称为人工生物膜。脂质体可以有效解决生物活性物的溶解度、稳定性、刺激性、气味、配方困难及生物利用度等问题。自1986年，法国lancome公司dior开发了世界上第一个脂质体化妆品“capture”以来，脂质体在化妆品领域受到越来越多的关注，目前已经广泛应用到该领域。传统的脂质体制备方法通常有逆向蒸发法、薄膜分散法、乙醇注入法、复乳法、冷冻干燥发、熔融法、冻融法、喷雾干燥法等。然而，这些脂质体的制备方法具有诸多缺点，如操作步骤复杂，有机溶剂利用较多，并且大规模量产困难，因此，传统的脂质体制备方法在化妆品领域应用受限。
4.离子液体是由阴离子和阳离子按照一定的化学计量比、在一定条件下形成的液态混合物。离子液体的制备工艺简单，具有挥发性低、稳定性高、电导率高和不易燃等优点，被广泛应用于各领域。苦参碱类离子液体是以苦参的提取物苦参碱为阳离子前驱体，以椰油氨基丁酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、omega-9脂肪酸中的一种或多种为阴离子前驱体，通过离子化改性复配成苦参碱长链脂肪酸离子液体，既具有苦参碱的抗病毒功效，又具有椰子油酸的滋润保湿作用。


技术实现要素：

5.本发明的第一目的在于提供一种美白共载离子液体型脂质体，本发明美白共载离
子液体型脂质体使用苦参碱类离子液体作为溶剂，包载美白活性物4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素，能够有效提高美白活性物的载药量、水溶性和稳定性，增加美白活性物透皮吸收量，提高美白活性物在皮肤中的滞留量，同时起到协同增效的美白作用。
6.本发明的第二目的在于提供一种上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，该制备方法避免使用有机溶剂，且制备方法简单，可工业化、大规模化生产。
7.为了达到上述目的，本发明的技术方案为：
8.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分：美白活性成分、离子液体、磷脂、胆甾醇、乳化剂、稳定剂、纯水。
9.进一步，所述组分质量百分比：美白活性成分：2.0-10.0％，离子液体：10.0-50.0％，磷脂：2.0-10.0％，胆甾醇：0.2-1.0％，乳化剂：5.0-15.0％，稳定剂：0.2-1.0％，余量为纯水，共计100％。
10.进一步，所述美白活性成分为4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素。
11.进一步，所述离子液体为苦参碱己酸离子液体、苦参碱辛酸离子液体、苦参碱癸酸离子液体、苦参碱月桂酸离子液体、苦参碱肉豆蔻酸离子液体、苦参碱棕榈酸离子液体中的至少一种。
12.进一步，所述磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、溶血卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的至少一种。
13.进一步，所述乳化剂为peg-40氢化蓖麻油、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80、聚甘油-10-月桂酸酯、聚甘油-10-油酸酯、聚甘油-10-肉豆蔻酸酯中的至少一种。
14.进一步，所述稳定剂为edta-2na、焦亚硫酸钠，生育酚(维生素e)、生育酚乙酸乙酯中的至少一种。
15.一种上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
16.(1)制备油相：将美白活性成分、离子液体、磷脂、胆甾醇在50-70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
17.(2)制备水相：将乳化剂、稳定剂和纯水在50-70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
18.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为5000-10000rpm；剪切温度为50-70℃；剪切时间为3-8min，即得初乳；
19.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为500-1000bar；均质温度为50-70℃；循环次数为5-10次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
20.进一步，所述步骤(3)中，剪切转速为6000-9000rpm；剪切温度为55-65℃；剪切时间为4-6min。
21.进一步，所述步骤(4)中，均质压力为600-800bar；均质温度为55-65℃；循环次数为6-8次。
22.本发明的有益效果在于：
23.本发明美白共载离子液体型脂质体具有稳定性高，包封率高，载药量高，在皮肤中有良好的透皮吸收、较长滞留时间、具有缓释以及美白活性物可协同增效等优点。
24.本发明制备方法采用具有抗病毒的苦参碱类离子液体作为溶剂，一方面避免使用
有机溶剂，环保无污染；同时制备方法简单，可工业化、规模化生产。另一方面所制备的美白共载离子液体型脂质体还可以发挥抗病毒的功效作用。
附图说明
25.图1为美白共载离子液体型脂质体的外观图。
26.图2为美白共载离子液体型脂质体粒径图。
27.图3为美白共载离子液体型脂质体粒径稳定性测试结果图。
28.图4为4-丁基间苯二酚含量测试结果图；其中，577为4-丁基间苯二酚。
29.图5为四氢姜黄素含量测试结果图，其中，thc为四氢姜黄素。
30.图6为美白共载离子液体型脂质体累积透过量测试结果图；其中，577为4-丁基间苯二酚；thc为四氢姜黄素。
31.图7为美白共载离子液体型脂质体累积滞留量测试结果图；其中，577为4-丁基间苯二酚；thc为四氢姜黄素。
32.图8为美白共载离子液体型脂质体累积释放率测试结果图；其中，577为4-丁基间苯二酚；thc为四氢姜黄素。
33.图9为酪氨酸酶活性测试结果图。
具体实施方式
34.下面通过具体实施方式进一步详细说明：
35.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
36.本发明一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：美白活性成分：2.0-10.0％，离子液体：10.0-50.0％，磷脂：2.0-10.0％，胆甾醇：0.2-1.0％，乳化剂：5.0-15.0％，稳定剂：0.2-1.0％，余量为纯水，共计100％。其中，美白活性成分为4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素。离子液体为苦参碱己酸离子液体、苦参碱辛酸离子液体、苦参碱癸酸离子液体、苦参碱月桂酸离子液体、苦参碱肉豆蔻酸离子液体、苦参碱棕榈酸离子液体中的至少一种。磷脂为大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、溶血卵磷脂、蛋黄卵磷脂中的至少一种。乳化剂为peg-40氢化蓖麻油、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-60、聚山梨醇酯-80、聚甘油-10-月桂酸酯、聚甘油-10-油酸酯、聚甘油-10-肉豆蔻酸酯中的至少一种。稳定剂为edta-2na、焦亚硫酸钠，生育酚(维生素e)、生育酚乙酸乙酯中的至少一种。
37.本发明上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
38.(1)制备油相：将美白活性成分、离子液体、磷脂、胆甾醇在50-70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
39.(2)制备水相：将乳化剂、稳定剂和纯水在50-70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
40.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为5000-10000rpm；剪切温度为50-70℃；剪切时间为3-8min，即得初乳；
41.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为500-1000bar；均质温度为50-70℃；循环次数为5-10次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
42.优选的，步骤(3)中，剪切转速为6000-9000rpm；剪切温度为55-65℃；剪切时间为4-6min。步骤(4)中，均质压力为600-800bar；均质温度为55-65℃；循环次数为6-8次。
43.本发明制备方法避免使用有机溶剂，且制备方法简单，可工业化、规模化应用于化妆品中。
44.下面将结合实施例对本发明的技术方案进行进一步地说明。
45.实施例1
46.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：1.0％4-丁基间苯二酚、1.0％四氢姜黄素、10.0％苦参碱月桂酸离子液体、2.0％氢化卵磷脂、0.2％胆甾醇、2.0％peg-40氢化蓖麻油、3.0％聚山梨醇酯-80、0.1％edta-2na、0.1％焦亚硫酸钠和余量纯水，共计100％。
47.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
48.(1)制备油相：将1.0％4-丁基间苯二酚、1.0％四氢姜黄素、10.0％苦参碱月桂酸离子液体、2.0％氢化卵磷脂、0.2％胆甾醇在50℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
49.(2)制备水相：将2.0％peg-40氢化蓖麻油、3.0％聚山梨醇酯-80、0.1％edta-2na、0.1％焦亚硫酸钠和80.6％纯水在50℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
50.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为5000rpm，剪切温度为50℃，剪切时间为3min，即得初乳；
51.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为500bar，均质温度为50℃，循环次数为5次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
52.实施例2
53.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：2.0％4-丁基间苯二酚、2.0％四氢姜黄素、50.0％苦参碱己酸离子液体、2.0％大豆卵磷脂、1.0％蛋黄卵磷脂、0.3％胆甾醇、5.0％peg-40氢化蓖麻油、2.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.1％edta-2na、0.1％焦亚硫酸钠和余量纯水，共计100％。
54.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
55.(1)制备油相：将2.0％4-丁基间苯二酚、2.0％四氢姜黄素、50.0％苦参碱己酸离子液体、2.0％大豆卵磷脂、1.0％蛋黄卵磷脂、0.3％胆甾醇在55℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
56.(2)制备水相：将5.0％peg-40氢化蓖麻油、2.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.1％edta-2na、0.1％焦亚硫酸钠和35.5％纯水在55℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
57.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为6000rpm，剪切温度为55℃，剪切时间4min，即得初乳；
58.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为600bar，均质温度为55℃，循环次数为6次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
59.实施例3
60.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：3.0％4-丁基间苯二酚、2.0％四氢姜黄素、40.0％苦参碱辛酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、0.5％胆甾醇、
8.0％聚甘油-10-油酸酯、5.0％聚山梨醇酯-20、0.2％edta-2na、0.2％生育酚乙酸乙酯和余量纯水，共计100％。
61.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
62.(1)制备油相：将3.0％4-丁基间苯二酚、2.0％四氢姜黄素、40.0％苦参碱辛酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、0.5％胆甾醇在60℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
63.(2)制备水相：将8.0％聚甘油-10-油酸酯、5.0％聚山梨醇酯-20、0.2％edta-2na、0.2％生育酚乙酸乙酯和36.1％纯水在60℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
64.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为7000rpm，剪切温度为60℃，剪切时间5min，即得初乳；
65.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为700bar，均质温度为60℃，循环次数为7次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
66.实施例4
67.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：3.0％4-丁基间苯二酚、3.0％四氢姜黄素、30.0％苦参碱癸酸离子液体、2.0％大豆卵磷脂、4.0％溶血卵磷脂、1.0％胆甾醇、5.0％聚甘油-10-月桂酸酯、5.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和余量纯水，共计100％。
68.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
69.(1)制备油相：将3.0％4-丁基间苯二酚、3.0％四氢姜黄素、30.0％苦参碱癸酸离子液体、2.0％大豆卵磷脂、4.0％溶血卵磷脂、1.0％胆甾醇在65℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
70.(2)制备水相：将5.0％聚甘油-10-月桂酸酯、5.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和46.0％纯水在65℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
71.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为8000rpm，剪切温度为65℃，剪切时间6min，即得初乳；
72.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为800bar，均质温度为65℃，循环次数为8次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
73.实施例5
74.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：4.0％4-丁基间苯二酚、4.0％四氢姜黄素40.0％苦参碱癸酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、5.0％溶血卵磷脂、1.0％胆甾醇、5.0％聚甘油-10-月桂酸酯、5.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和余量纯水，共计100％。
75.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
76.(1)制备油相：将4.0％4-丁基间苯二酚、4.0％四氢姜黄素40.0％苦参碱癸酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、5.0％溶血卵磷脂、1.0％胆甾醇在70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
77.(2)制备水相：将5.0％聚甘油-10-月桂酸酯、5.0％聚甘油-10-肉豆蔻酸酯、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和30.0％纯水在70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
78.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为9000rpm，剪切温度为70℃，剪切时间7min，即得初乳；
79.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为900bar，均质温度为70℃，循环次数为9次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
80.实施例6
81.一种美白共载离子液体型脂质体，包括如下组分及质量百分比：5.0％4-丁基间苯二酚、5.0％四氢姜黄素40.0％苦参碱棕榈酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、1.0％胆甾醇、5.0％聚山梨醇酯-60、10.0％聚山梨醇酯-80、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和余量纯水，共计100％。
82.上述美白共载离子液体型脂质体的制备方法，包括如下步骤：
83.(1)制备油相：将5.0％4-丁基间苯二酚、5.0％四氢姜黄素40.0％苦参碱棕榈酸离子液体、5.0％大豆卵磷脂、1.0％胆甾醇在70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
84.(2)制备水相：将5.0％聚山梨醇酯-60、10.0％聚山梨醇酯-80、0.2％edta-2na、0.2％焦亚硫酸钠、0.6％生育酚(维生素e)和28.0％纯水在70℃水浴温度下溶解，磁力搅拌混匀，备用；
85.(3)高速剪切：将油相在剪切条件下缓慢加入水相，剪切转速为10000rpm，剪切温度为70℃，剪切时间8min，即得初乳；
86.(4)高压均质：将初乳经高压均质处理，均质压力为1000bar，均质温度为70℃，循环次数为10次，冷却至室温，即得美白共载离子液体型脂质体。
87.实施例7
88.美白共载离子液体型脂质体霜剂的制备方法，包括如下步骤：
89.(1)按照常规霜剂制备方法，以2.0％peg-10聚二甲基硅氧烷、1.0％蔗糖硬脂酸酯、1.0％硬脂醇、4.5％单硬脂酸甘油酯、3.0％霍霍巴油作为油相，于75℃水浴中熔融；以5.0％甘油、5.0％丙二醇、0.3％三乙醇胺、0.2％卡波姆2020和78.0％纯水作为水相，于75℃水浴中溶解；将油相和水相搅拌混匀，并乳化，即得空白霜剂。
90.(2)将空白霜剂与实施例6所得美白共载离子液体型脂质体按质量比4:1复配，得到含量为1.0％4-丁基间苯二酚和1.0％四氢姜黄素的美白共载离子液体型脂质体霜剂，简称脂质体霜。
91.对比例1
92.将1.0％4-丁基间苯二酚、1.0％四氢姜黄素分别溶解在乙醇中。
93.对比例2
94.将1.0％4-丁基间苯二酚和1.0％四氢姜黄素加入实施例7所得空白霜剂中，即得美白原料霜剂，简称原料霜。
95.原料霜和脂质体霜含相同含量的4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素，区别在于原料霜中添加的是游离活性成分，脂质体霜添加的是脂质体包载后的活性成分。
96.实验例1
97.观察本发明实施例1所得的美白共载离子液体型脂质体的外观。
98.结果如图1所示，其中，a为实施例1所得美白共载离子液体型脂质体原液，b为原液稀释10倍，c为原液稀释100倍。结果说明本发明制备方法制得的美白共载离子液体型脂质
体外观良好，透光度高。
99.实验例2
100.对本发明实施例1-6所得的美白共载离子液体型脂质体进行粒径、pdi、电位、包封率的检测，其结果如表1所示，其中实施例1所得的美白共载离子液体型脂质体的粒径图如图2所示。
101.表1：实施例1-6所得的美白共载离子液体型脂质体粒径、pdi、电位、包封率的检测结果
102.组别粒径(nm)pdi电位(mv)包封率(％)实施例149.680.192-32.1299.89实施例254.710.158-30.8499.68实施例378.240.189-34.7798.61实施例483.760.150-36.1899.01实施例590.520.212-34.6598.12实施例686.450.209-38.4598.33
103.由表1可知，本发明所得的美白共载离子液体型脂质体将两种美白活性物同时进行包裹，包封率高达98％，且粒径小于100nm，能更好的促进活性物进入皮肤发挥美白功效。pdi小于0.3，说明粒径分布均匀。zeta电位可用来预测脂质体分散体系的物理稳定性，电位绝对值越高表示体系越稳定。本发明方法制备的美白共载离子液体型脂质体的电位绝对值大于30mv，表明本方法制备的美白共载离子液体型脂质体的稳定性高。
104.实验例3
105.对本发明实施例1所得的美白共载离子液体型脂质体进行粒径稳定性测试。
106.实验方法如下：将美白共载离子液体型脂质体分别放置在常温避光(rt)、常温光照(光照)、4℃光照(4℃)、45℃光照(45℃)条件下，分别在制备当天(0表示)、1个月后、2个月后以及3个月后测定其粒径。
107.测试结果如图3所示，由结果可知，在各个条件下美白共载离子液体型脂质体的粒径没有明显的变化，表明本发明的美白共载离子液体型脂质体热力学稳定性良好。
108.实验例4
109.对本发明实施例1所得的美白共载离子液体型脂质体和对比例1乙醇溶液进行4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素含量稳定性测试。
110.实验方法如下：
111.(1)4-丁基间苯二酚标准溶液的配制
112.准确称取4-丁基间苯二酚粉末100mg于棕色容量瓶中，加入50ml甲醇超声溶解5min，甲醇定容至100ml，配制成1000μg/ml的4-丁基间苯二酚溶液。分别精密量取50、100、200、400、600、800、1000μl溶液于10ml棕色容量瓶中，甲醇定容至刻度线，得浓度分别为5、10、20、40、60、80、100μg/ml的4-丁基间苯二酚标准溶液。
113.(2)4-丁基间苯二酚色谱条件
114.agilent tc-c18色谱柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相为甲醇：乙腈：水＝43:42:15；流速为1ml/min；检测波长为230nm；柱温为30℃；进样量为10μl。
115.(3)四氢姜黄素标准溶液的配制
116.准确称取四氢姜黄素粉末100mg于棕色容量瓶中，加入50ml甲醇超声溶解5min，甲醇定容至100ml，配制成1000μg/ml的四氢姜黄素溶液。分别精密量取50、100、200、400、600、800、1000μl溶液于10ml棕色容量瓶中，甲醇定容至刻度线，得浓度分别为5、10、20、40、60、80、100μg/ml的四氢姜黄素标准溶液。
117.(4)四氢姜黄素色谱条件
118.agilent tc-c18色谱柱(4.6mm
×
250mm，5μm)；流动相为乙腈：0.1％甲酸水溶液＝50:50；流速为1ml/min；检测波长为280nm；柱温为35℃；进样量为20μl。
119.(5)将对比例1乙醇溶液和实施例1所得美白共载离子液体型脂质体放置在45℃光照条件下，分别在制备当天(0表示)、1个月后、2个月后以及3个月后，检测4-丁基间苯二酚、四氢姜黄素的含量。取相同质量的对比例1乙醇溶液、实施例1所得美白共载离子液体型脂质体于棕色的容量瓶中，甲醇定容，室温下超声30min，使美白共载离子液体型脂质体破乳，4-丁基间苯二酚、四氢姜黄素完全溶解于甲醇中，摇匀，用0.22μm滤膜过滤，按上述高效液相色谱检测方法，分别检测4-丁基间苯二酚、四氢姜黄素含量。
120.测试结果如图4和图5所示，由结果可知，对比例1乙醇溶液与实施例1所得美白共载离子液体型脂质体相比，美白共载离子液体型脂质体对4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素都具有保护作用，明显提高了保留率，增加了稳定性。
121.实验例5
122.对本发明实施例7所得的脂质体霜和对比例2所得的原料霜进行体外透皮测试。
123.实验方法如下：
124.(1)实验前用植皮刀制备厚度为300
±
50μm的皮肤模型，然后将其剪成接收池大小的圆形小块，放入生理盐水中备用。本实验使用含5％吐温80的磷酸盐缓冲液(ph＝7.4)作为接收介质。实验时将皮肤模型固定于释放池和接收池之间，使角质层的一侧朝向释放池，真皮层一侧朝向接收池，并且保证皮肤与接收液紧密贴合，两者之间不得有气泡出现。随后向皮肤表面均匀涂抹实施例7所得脂质体霜，接收池的温度维持在37
±
0.5℃，接收池内放入磁子，实验过程中保持其在转速300rpm。本实验对照组为对比例2所得原料霜，对照组和实验组均设置三个重复。
125.(2)分别在0.5、1、2、4、6、8、10、24h取样1ml，同时补加1ml相同温度的新鲜接收介质，将所取样品使用0.22μm滤膜过滤，按上述高效液相色谱检测方法进样分析，即为美白共载离子液体型脂质体经皮渗透量。
126.(3)体外经皮行为考察24h以后，将皮肤取下，将表面残留霜剂擦拭干净，取透皮处皮肤，剪碎，加入1.5ml乙醇匀浆，超声处理1h以浸取皮肤中的4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素，匀浆液转移至离心管中，涡旋混匀，12000rpm/min离心10min，残渣用1ml乙醇重提一次，合并两次上清液，混匀取上清液，使用0.22μm滤膜过滤，按上述高效液相色谱检测方法进样分析，即为美白共载离子液体型脂质体经皮滞留量。
127.测试结果如图6、图7所示，由结果可知，本发明的美白共载离子液体型脂质体霜中4-丁基间苯二酚、四氢姜黄素在皮肤中的透过量明显高于未包载的原料霜。因此，与未包载的原料霜相比，本发明的美白共载离子液体型脂质体霜中4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素在测试时间内具有良好的透皮吸收；同时，本发明的美白共载离子液体型脂质体霜中4-丁基间苯二酚在皮肤中的滞留量是原料霜的2.6倍，四氢姜黄素在皮肤中的滞留量是原料霜的
3.6倍，说明本发明的美白共载离子液体型脂质体霜中的美白活性物经过包裹后在皮肤中有较高滞留量。
128.实验例6
129.对美白共载离子液体型脂质体进行体外释放测试。
130.实验方法如下：
131.本实验采用透析法进行体外释放测试。透析袋预处理：将透析袋剪成10cm的小段，在大体积的2％(m/v)碳酸氢钠和1mmol/l edta(ph＝8)中将透析袋煮沸10min，用纯水彻底漂洗后，再置于1mmol/l edta(ph＝8)中煮沸10min。透析袋冷却后用纯水清洗，30％乙醇冷藏保存，确保透析袋始终浸没在液体中。从此时起用透析袋必须戴手套，用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净。设定空气浴摇床温度为37
±
0.5℃，振荡频率为恒速100r/min。每组设置3个平行样，取实施例1所得美白共载离子液体型脂质体2ml置透析袋中，排出气泡，用扎带将两端扎紧，置于30ml含有1％吐温80的pbs溶液(ph 7.0)中，分别在0.5、1、2、4、6、8、10、24h取样1ml，同时补加1ml相同温度的新鲜释放介质。将所取样品使用0.22μm滤膜过滤。同法以相同质量浓度4-丁基间苯二酚乙醇溶液和四氢姜黄素乙醇溶液作为对照进行体外释放试验。按上述检测方法进样分析，计算累积释放率，并绘制释药曲线。
132.测试结果如图8所示，由结果可知，4-丁基间苯二酚乙醇溶液在10h时已经完全释放，四氢姜黄素乙醇溶液在24h是也已经完全释放，而美白共载离子液体型脂质体中的4-丁基间苯二酚在24h时累积释放率为69.78
±
3.44％，四氢姜黄素在24h时的累积释放率为61.34
±
2.36％。因此，本发明的美白共载离子液体型脂质体对4-丁基间苯二酚和四氢姜黄素均具有一定的缓释效果。
133.实验例7
134.美白共载离子液体型脂质体对酪氨酸酶活性抑制率测试。酪氨酸酶是催化黑色素合成的关键酶，抑制酪氨酸酶的活性，能够阻断黑色素的合成，从而达到皮肤美白的效果。
135.实验方法如下：
136.(1)以3
×
104个细胞/0.2ml的细胞密度将b16黑色素瘤细胞播种到96孔板后，置于在37℃培养箱内，以添加有10％胎牛血清、1％抗真菌抗生素的dmem培养基培养24h，然后用100μl的pbs缓冲液清洗细胞，再将100μl 1％tritonx-100的pbs缓冲液加入各孔中，用37℃的混合机溶解30min后，取50μl上清液至另一个96孔板内，添加50μl用pbs溶解的各样品。
137.(2)pbs与实施例1所得美白共载离子液体型脂质体按质量比9:1混匀，得到含0.1％4-丁基间苯二酚和0.1％四氢姜黄素的pbs美白共载离子液体型脂质体溶液。
138.(3)配制仅含0.1％4-丁基间苯二酚的pbs溶液，作为对照组1。
139.(4)配制仅含0.1％四氢姜黄素的pbs溶液，作为对照组2。
140.(5)以不含任何美白成分的pbs作为空白对照组。
141.(6)向上述样品中加入50μl 0.1％l-dopa溶液(用0.1m ph＝6.8的pbs冲液配制，该反应混合液应在配制后2h内使用)，反应温度37℃，于475nm波长处检测反应0min和10min时的吸光度值。根据吸光度值，算出将空白对照组设为100％时，对照组1、对照组2和实施例1的抑制率。
142.测试结果如图9所示，由结果可知，本发明的实施例1所得美白共载离子液体型脂质体有良好的抑制酪氨酸酶活性，其效果明显强于单一的美白活性物，说明复配后，具有协
同增效的抑制酪氨酸酶活性作用。
143.需要说明的是，在本文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
144.以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体结构及特性等常识在此未作过多描述，所属领域普通技术人员知晓申请日或者优先权日之前发明所属技术领域所有的普通技术知识，能够获知该领域中所有的现有技术，并且具有应用该日期之前常规实验手段的能力，所属领域普通技术人员可以在本技术给出的启示下，结合自身能力完善并实施本方案，一些典型的公知结构或者公知方法不应当成为所属领域普通技术人员实施本技术的障碍。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。