一种用于检测细胞焦亡的荧光探针组合以及一种利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法

技术特征：
1.一种用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，包括dio细胞探针和hoechst 33342染料。2.根据权利要求1所述的用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，所述dio细胞探针，是dio细胞探针染液。3.根据权利要求2所述的用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，所述dio细胞探针染液是通过如下步骤制备得到：(1)dio细胞探针储存液制备：将dio细胞探针用dmso(dimethyl sulfoxide)或ethylalcohol(etoh)配置成浓度0.4-40mm的dio细胞探针储存液；(2)工作液制备：用无血清培养基稀释dio细胞探针储存液，配制浓度为0.2-20μm的dio细胞探针染液工作液，即得。4.根据权利要求1所述的用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，所述hoechst 33342染料，是hoechst 33342细胞染液。5.根据权利要求4所述的用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，所述hoechst 33342细胞染液是通过如下步骤制备得到：(1)hoechst 33342储存液制备：将hoechst 33342用pbs配置成浓度0.1-10mg/ml的hoechst 33342储存液；(2)工作液制备：用无血清培养基稀释hoechst 33342储存液，配制浓度为0.1-20μg/ml的hoechst 33342细胞染液工作液，即得。6.根据权利要求3所述的用于检测细胞焦亡的荧光探针组合，其特征在于，所述缓冲液是无血清培养基dmem或rpmi-1640。7.一种利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法，其特征在于，采用dio细胞探针和hoechst 33342染料对细胞进行染色，然后进行观察。8.根据权利要求7所述的利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法，其特征在于，所述dio细胞探针，是dio浓度为0.2-20μm的dio细胞探针染液。9.根据权利要求7所述的利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法，其特征在于，所述hoechst 33342，是hoechst 33342浓度为0.1-10μg/ml的hoechst 33342细胞染液。10.根据权利要求7所述的利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：(1)dio细胞探针染液制备：a：dio细胞探针储存液制备：将dio细胞探针用dmso或etoh配置成浓度0.4-40mm的dio细胞探针储存液；b：工作液制备：用无血清培养基稀释dio细胞探针储存液，配制浓度为0.2-20μm的dio细胞探针染液工作液，即得；(2)hoechst 33342细胞染液制备：a：hoechst 33342储存液制备：将hoechst 33342用pbs配置成浓度1mg/ml的hoechst 33342储存液；b：工作液制备：用无血清培养基稀释hoechst 33342储存液，配制浓度为0.1-10μg/ml的hoechst 33342细胞染液工作液，即得；(3)细胞染色处理：向需要染色的细胞中加入dio细胞探针染液，使dio的工作液浓度为
0.2-20μm，在5％co2，37℃的温箱中孵育1-60min，然后加入hoechst 33342细胞染液，使hoechst 33342的工作液浓度为0.1-10μg/ml，在5％co2，37℃的温箱中孵育1-60min；(4)荧光检测：细胞膜和核均匀染色后，将激光共聚焦皿放置到倒置荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下，打开550nm/460nm的滤光器进行hoechst 33342染色完细胞核后的观察及定位，确定合适观察位置后打开484/501nm进行dio染色完细胞膜的观察。

技术总结
本发明涉及细胞显微技术领域，具体是一种用于检测细胞焦亡的荧光探针组合以及一种利用双荧光标记实现细胞焦亡检测的方法。本发明所用的DIO(3,3


技术研发人员：黄海 夏英 刘宝 金泳 程树强 杜洪
受保护的技术使用者：贵州医科大学附属医院
技术研发日：2022.01.13
技术公布日：2022/5/30