一种多肽Cbf-14在制备镇痛药物中的应用的制作方法

一种多肽cbf-14在制备镇痛药物中的应用
技术领域
1.本发明涉及多肽，具体涉及一种多肽cbf-14在制备镇痛药物中的应用。


背景技术：

2.动物中药蛇毒性能，甘，咸，温，归肝经。功效为：祛风，通络，止痉，镇静，镇痛和催眠等作用。此外蛇毒还有美容养颜、减少皱纹的作用，蛇毒中含有促凝，纤容，抗癌，镇痛等方面的药理功能成分。它能阻止和治疗中风，脑血栓的形成，还能治疗闭塞性脉经管炎，冠心病，多发性大动脉炎，肢端动脉痉挛，视网膜动脉，静脉阻塞等病症，蛇毒对缓解晚期癌症病人的症状亦有一定的作用，尤其是镇痛作用，已导致世人的重视。有报道将眼镜蛇毒用于癌症患者以止痛,效果显著。用于各种顽固性疼痛和恶性肿瘤疼的治疗。近期研究显示,眼镜蛇神经毒素可以通过腺苷a1和a2受体产生中枢镇痛和高镇痛,镇痛作用强于吗啡，镇痛效果强、药效时间长、成瘾性小等特点,通过乳化法制备光控靶向蛇毒肽锌纳米制剂,形成蛇毒肽锌配合物,增强了蛇毒肽的稳定性;可以靶向释放蛇毒肽锌,实现蛇毒肽锌的靶向中枢镇痛作用。
3.发明人先期公开了来源于蛇毒的抗菌肽cbf-14（zl201310413721.0）具有抗耐药性细菌感染活性。
4.本发明在现有技术基础上首次发现抗菌肽cbf-14镇痛的作用。。
5.我国的蛇类资源丰富，从理论意义和长远的经济效益考虑，蛇毒的研究具有广阔应用前景，社会效益和经济效益显著。我们发现多肽不仅具有消炎、杀菌、而且镇痛功效更为显著。
6.

技术实现要素：

7.发明目的：本发明提供多肽cbf-14的新用途。
8.技术方案：一种多肽cbf-14在制备镇痛药物中的应用，其特征在于所述的多肽cbf-14的氨基酸序列为：rllrkffrklkksv。
9.所述的疼痛包括：机械性痛如外伤和手术导致的疼痛；温度性痛如烧烫伤；化学性痛如化学试剂烧烫伤；炎症性痛如感染疼痛；病理生理性疼痛如结石、癌症；精神心理性疼痛如中枢神经性痛，周围神经性痛,植物神经性痛；躯体疼痛如头痛、尖酸背痛、肢体痛、胸痛、腹痛或腰痛。
10.有益效果1、本发明采用现代生物技术手段，建立小鼠福尔马林炎性痛模型及小鼠醋酸扭体镇痛实验动物模型，考察多肽研究动物的止痛功效。结果表明cbf-14在两种不同实验动物模型中表现出显著的镇痛活性。本发明拓宽抗菌肽cbf-14的临床应用。
11.2、本发明安全性高。本发明涉及的cbf-14最初为抗菌肽，其与大多数具有镇痛活
性的蛇毒多肽的序列有着本质区别，同时根据现有技术表面该多肽无毒副作用，多数蛇毒蛋白或多肽有着严重的毒副作用，例如凝血，溶血等。而本发明多肽无上述作用。
附图说明
12.图1. 小鼠福尔马林模型。小鼠腹腔给药30 min后，给予小鼠左后足底皮下注射10 μl的2.5%福尔马林溶液，统计小鼠每5 min内的舔足和抖足时间，共记录45 min。
13.图2. 小鼠福尔马林模型。多肽cbf-14对小鼠福尔马林一相痛 (0
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10 min ) 及二相痛 (10
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45 min) 的镇痛作用。
14.图3. 小鼠醋酸扭体模型。小鼠腹腔给药30 min后，给予小鼠腹腔注射100 μl的1%冰醋酸溶液，统计小鼠每45 min内扭体次数（表现为腹部收内凹、腹前壁紧贴笼底、臀部歪扭和后肢伸张）。
具体实施方式
15.本发明中所有统计均采用单因素方差分析one-way anova做两组间统计，以p＜0.05 为有统计学差异（*表示p《0.05，**表示p《0.01，***表示p《0.001）。所有统计数据均采用graphpad prism9.0软件进行制图。
16.实施例1小鼠福尔马林镇痛实验动物模型：实验动物：选用全雄 c57bl/6j 雄性小鼠 (20 g
ꢀ±ꢀ
2g)， 14只。
17.分组与剂量：实验分为多肽cbf-14（10 mg/ml）治疗组和对照组0.9%生理盐水 1%bsa，每组7只。
18.给药方式；腹腔注射100μl/只，30min后左后足底皮下注射10 μl 2.5% (v/v) 福尔马林溶液。
19.记录方式：我们用摄像机采用720p清晰度来记录整个过程后通过回放统计小鼠的疼痛行为, 记录45 min。
20.数据统计：小鼠左后足底皮下注射福尔马林后，观察记录小鼠每5 min内发生疼痛行为（如：舔足，抖足等）的持续时间，并分别统计phase i (0
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10 min) 和phase ii (10
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45 min) 内发生疼痛行为的时间总和，实验时间为45 min。
21.实验结果：如图2所示，在小鼠福尔马林模型中，多肽cbf-14对小鼠福尔马林一相痛 (0
ꢀ–ꢀ
10 min ) 及二相痛 (10
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45 min) 的镇痛作用，其中，与1% bsa的0.9%生理盐水溶液相比，多肽cbf-14对小鼠福尔马林一相痛 (0
ꢀ–ꢀ
10 min ) 及二相痛 (10
ꢀ–ꢀ
45 min) 都有显著的镇痛作用p 《 0.001。
22.实施例2小鼠醋酸扭体镇痛实验动物模型：实验动物：选用全雄 c57bl/6j 雄性小鼠 (20 g
ꢀ±ꢀ
2g)，14只。
23.分组与剂量：实验分为多肽cbf-14（10 mg/ml）治疗组和生理盐水阴性对照组0.9%生理盐水 1%bsa，每组7只。
24.给药方式；腹腔注射100μl/只，30min后腹腔注射100μl 1% (v/v)冰醋酸溶液。
25.记录方式：我们用摄像机采用720 p清晰度来记录整个过程后通过回放统计小鼠的疼痛行为, 记录45 min。
26.数据统计：小鼠腹腔注射醋酸后，观察记录小鼠45 min内的扭体次数，具体表现为腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起。取平均值作为该组小鼠的扭体次数。按下列公式计算给药组小鼠的扭体反应抑制率：抑制率 %=(对照组扭体次数-给药组扭体次数)/对照组扭体次数
×
100%实验结果见图3，小鼠醋酸扭体模型，小鼠腹腔给药30 min后，给予小鼠腹腔注射100 μl的1%冰醋酸溶液，统计小鼠每45 min内扭体次数（表现为腹部收内凹、腹前壁紧贴笼底、臀部歪扭和后肢伸张）。(n ≥ 6, * p 《 0.05, ** p 《 0.01, *** p 《 0.001)，其中，与1% bsa的0.9%生理盐水溶液相比，多肽cbf-14具有显著的镇痛活性p 《 0.001，对小鼠扭体次数的抑制率均大于90%。
27.综合图1-3可以看出，多肽cbf-14具有明显的生物止痛功效。


技术特征：
1.一种多肽cbf-14在制备镇痛药物中的应用，其特征在于所述的多肽cbf-14的氨基酸序列为：rllrkffrklkksv。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的疼痛包括：机械性痛如外伤和手术导致的疼痛；温度性痛如烧烫伤；化学性痛如化学试剂烧烫伤；炎症性痛如感染疼痛；病理生理性疼痛如结石、癌症；精神心理性疼痛如中枢神经性痛，周围神经性痛,植物神经性痛；躯体疼痛如头痛、尖酸背痛、肢体痛、胸痛、腹痛或腰痛。

技术总结
本发明涉及多肽，具体涉及一种多肽Cbf-14在制备镇痛药物中的应用。本发明采用现代生物技术手段，建立小鼠福尔马林炎性痛模型及小鼠醋酸扭体镇痛实验动物模型，用多肽研究动物的止痛功效。结果表明Cbf-14在两种不同实验动物模型中表现出显著的镇痛活性。本发明拓宽抗菌肽Cbf-14的临床应用。14的临床应用。14的临床应用。


技术研发人员：贾源宾 张嘉鑫 卢悟广 吕慰秋 曾文权 周长林
受保护的技术使用者：南京映海月生物科技有限公司
技术研发日：2022.03.17
技术公布日：2022/5/30