一种金针菇的选育方法与流程

1.本发明涉及食用菌育种技术领域，具体涉及一种金针菇的选育方法。


背景技术：

2.金针菇，隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、口蘑科、金钱菌属,别称冬菇、毛柄金钱菌、朴菇等，口感脆嫩，有较高的营养价值和显著的保健功能，具有广阔的开发利用前景。
3.金针菇培养周期较短，生长同步性较好，极为适宜规模化工厂化生产，但金针菇的工厂化栽培也存在一定的技术瓶颈，菌种常出现适应性差，产量低的问题。


技术实现要素：

4.本发明提供一种金针菇的选育方法，以解决背景技术中提出的问题。
5.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种金针菇的选育方法，其特征在于：包括以下步骤：
6.步骤一：选取遗传背景不同的金针菇菌种，作为杂交的两个亲本菌种。即两亲本优良性状互补，且将两个亲本菌种同时接种在同一个培养皿中，培养基为寒天培养基，在18℃下培养8天，切取菌块，将两个亲本菌块接种在同一个具有寒天培养基的培养皿中，继续在18℃下培养，可出现拮抗反应；
7.步骤二：选取步骤一中亲本发育完全的子实体菌盖部分，挑取直径8.5mm-10.5mm的菌盖用于担孢子的收集；摘取菌盖后，用75％的酒精对菌盖进行擦拭消毒，因为含有杂菌，不消毒会收集失败，切掉菇柄，将菌盖置于已灭菌的玻璃培养皿中，将培养皿静置8-10小时，揭去菌盖，即可收集到菌盖喷射的孢子印；
8.步骤三：准备已灭菌的装有无菌水的离心管5-10支，选取步骤二得到的孢子印进行冲洗，冲洗后得到金针菇孢子悬浮液，将金针菇孢子悬浮液转移至无菌水中进行稀释，稀释到浓度为2.5
×
102个/ml，取稀释后的金针菇孢子悬浮液，转移到装有pda培养基的培养皿中，进行涂布稀释，再在黑暗，18℃条件下培养4-5天，获得由单个担孢子长出的单核菌落；
9.步骤四：将单核菌落转接至含有培养基的试管中，在黑暗18℃条件下培养12天，对单核菌株进行筛选，选择生长速度快，粉孢子少，菌丝均匀的单核菌株用于后续的杂交(两个亲本菌种均采用步骤二-步骤四的方法培养)；
10.步骤五：将步骤四得到的两个亲本菌种的单核菌株分别在培养皿中培养10天，刮掉菌落表面菌丝，在菌落边缘进行打孔，后将两株单核菌株的菌块转移至同一培养皿中，相距1.5cm，在18℃，黑暗条件下进行培养9-10天，对菌丝进行镜检，选择菌丝上有锁状联合结构的组合，取中间突起部分切割菌块，转移到新的培养基中继续培养，获得杂交菌株；
11.步骤六：将步骤五中得到的杂交菌株在17℃，黑暗条件下，培养9天，刮去表面菌丝，在菌丝尖端位置呈环状打孔，打孔后取菌块放入液体培养基中培养，获得金针菇液体菌种；
12.步骤七：将金针菇液体菌种接种于栽培瓶中，每瓶接种25-30ml,在18℃，黑暗条件下进行菌丝培养，在5-8℃条件下进行出菇培养，在菌丝培养和出菇培养中测定其农艺学性状与明确其栽培模式，筛选出符合生产需求且产量、质量均优于亲本的菌种。
13.进一步，步骤一中判断亲本菌种间的遗传背景差异的步骤为：观察成熟菇体，选取农艺学性状能够优势互补的两品种作为亲本，并对这两个亲本菌种进行菌落培养8天后，用打孔器在距离菌丝尖端位置打孔，打孔后取两个亲本菌块接种于同一培养皿，培养基为寒天培养基，相距1.5cm，在黑暗，18℃条件下进行培养，待长至相交部位，观查两菌落之间是否有拮抗线产生，有拮抗线产生表明两亲本之间遗传背景差异大。
14.进一步，步骤三中稀释的方法为：利用100μl无菌水冲洗孢子印后获得100μl孢子悬浮液，将孢子悬浮液打入900μl的无菌水中进行稀释，获得稀释10倍的孢子悬浮液，再从10倍的孢子悬浮液中吸取100μl打入下一支加有900μl无菌水的离心管中，即可获得稀释100倍的孢子悬浮液，重复上述稀释操作，对孢子液进行梯度稀释，直到获得浓度为2.5
×
102个/ml的孢子悬浮液。该梯度稀释液涂布平板时，使孢子在培养基表面更分散，更容易尽可能多的挑取到单核菌株。
15.进一步，步骤三中单核菌落的培养条件还包括：在黑暗环境中，温度为18℃。
16.进一步，步骤四中培养基配方为每1l培养基中包括：200g土豆，20g葡萄糖，15g琼脂粉，5g酵母粉，1g磷酸氢二甲，0.5g硫酸镁。
17.进一步，步骤四中选择筛选的条件还包括：粉孢子少，菌丝均匀的单核菌株。
18.进一步，步骤五中镜检所选择的菌丝为两菌落之间形成融合线状突起的杂交组合中间突起部分。
19.进一步，步骤五中培养基为寒天培养基，其配方为：淀粉200g，无水葡萄糖20g，琼脂15g，加水定容至1l。
20.进一步，步骤六中液体培养基配方包括：步骤六中液体培养基配方为每1l培养基中包括：3.3g豆粕，20g蔗糖，0.66g磷酸氢二钾，0.66g硫酸镁。
21.进一步，步骤七中栽培瓶配方为：11.9％玉米芯，10.5％米糠，2.3％麸皮，0.7％啤酒糟，1.2％大豆皮，1.75％棉籽壳，1.5％干豆渣，0.3％轻质碳酸钙，0.45％贝壳粉，1.4％甜菜粕，68％水。
22.进一步，步骤六中放入液体培养基中培养的条件是在18℃，黑暗条件下培养8天，且培养容器150rmp/min。
23.进一步，步骤四中同时收集的单核菌株较多，需要对单核菌株进行保藏，以便用于后续杂交；保藏方法为：取试管中的单核菌株呈3mm
×
3mm
×
2mm的方形菌块，放入装有1.5ml无菌水的2ml冻存管中，每管放置4块，置于4℃，黑暗条件下保藏，有效保藏期1年左右。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明通过选取遗传背景不同的菌种进行培养，收集孢子印，培养单核菌株，对获得的两个亲本菌种的单核菌株进行杂交，杂交后培养得到比亲本菌种更好的农艺学性状；利用本发明方法筛选出菌株的产量高，还能将金针菇不同品系间的优良性状集中到一起；本发明方法操作简单、成本低，适用于工业化大规模生产。
附图说明
25.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
26.图1为本发明亲本菌株t011品系10az菇体图；
27.图2为本发明亲本菌株t022品系13c菇体图；
28.图3为本发明亲本菌株t022品系13c孢子印图；
29.图4为本发明亲本菌株t011品系10az孢子印图；
30.图5为本发明亲本菌株t022品系13c分离单核菌株培养图片；
31.图6为本发明亲本菌株t011品系10az分离单核菌株培养图片；
32.图7为两个单核菌株间的杂交成功形成凸起状融合线图；
33.图8为本发明含有锁装联合结构杂交成功的菌株镜检图；
34.图9为本发明杂交双核菌株出菇图；
具体实施方式
35.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
36.实施例一：一种金针菇的选育方法，包括以下步骤：
37.步骤一：杂交亲本的选取：选取遗传背景差异较大的菌株作为亲本菌株进行杂交。调查菌种来源，从多种菌种中挑选高度与产量相差大的t011和t022作为亲本菌种，明确t011和t022菌种生长周期，生理特性，以及菇体的农艺学性状，选择能够优势互补的菌株作为杂交亲本；具体选择方法为：观察用作亲本的菌株菌落培养阶段，液体菌种培养阶段，出菇阶段的生长状态表现，若有明显性状差异，表明亲本菌株间有遗传差异，选取能优势互补的菌株作为杂交亲本，如此培养可获得性状叠加的杂交菌株。菌落培养后选取菌块，将两个亲本菌块接种在同一个培养皿中，利用拮抗反应判断亲本菌种间的遗传背景差异，选取有拮抗线产生的两个亲本菌种；具体判断亲本菌种间的遗传背景差异的步骤为：选取t011和t022菌系的两个菌种，进行菌落培养8天后，用打孔器在距离菌丝尖端1cm左右位置打5mm直径的圆形菌块，并将两个亲本菌块同时接种于同一培养皿内，相距2cm，在黑暗，18℃条件下进行培养，待长至相交部位，观察两菌落之间是否有拮抗线产生；有拮抗线产生表明两亲本之间存在遗传背景差异，则两者相互杂交，出现优良杂交菌株的概率高。
38.步骤二：单核菌株的获取：将步骤一选取的亲本菌种进行培养，选取接种于栽培瓶后第49天，生长状态良好的亲本菌株，挑取直径8.5mm的菌盖用于担孢子的收集。摘取菌盖后，用75％的酒精对菌盖进行擦拭消毒，后用刀切掉菇柄，将菌盖置于已灭菌的玻璃培养皿中，每个培养皿中可放置8个菌盖。后将培养皿静置于超净工作台中8小时，揭去菌盖，即可收集到金针菇菌盖喷射的孢子印。
39.步骤三：担孢子的分离：准备已灭菌的2ml离心管5支，向每支离心管中加无菌水
900μl，再用移液枪吸取100μl无菌水，选取培养皿底部3个形状较为完整的的孢子印进行冲洗，冲洗孢子印后即可获得100μl孢子悬浮液，将100μl孢子悬浮液打入900μl的无菌水中进行稀释，即可获得稀释10倍的孢子悬浮液，再从10倍的孢子悬浮液中吸取100μl打入下一支加900μl有无菌水的离心管中，即可获得稀释100倍的孢子悬浮液，重复上述稀释操作，对孢子悬浮液进行梯度稀释，直到获得浓度为2.5
×
102个/ml的孢子悬浮液。将稀释好的孢子悬浮液吸取100μl，打到装有pda培养基的培养皿中，进行涂布稀释，在黑暗，18℃条件下培养4天，获得由单个担孢子长出的单核菌落。
40.步骤四：单核菌株的培养：用接种环挑取单菌落转接至含有培养基的试管中，在黑暗，17℃条件下进行培养。单核菌株的培养基成分如下：每1l培养基中含有：200g土豆，20g葡萄糖，15g琼脂粉，5g酵母粉，1g磷酸氢二甲，0.5g硫酸镁。培养12天后，即可对单核菌株进行一轮筛选，选择生长速度较快，粉孢子少，菌丝均匀的菌株用于后续的杂交。(两个亲本菌种均采用步骤二-步骤四的方法培养)。筛选出的两个亲本菌株一部分用于后续的杂交，一部分继续单独培养，单独培养的部分与杂交培养的部分培养条件与培养基均相同，用于后续的性状对比。
41.步骤五：两个亲本菌株的单核菌株间杂交配对：将步骤四得到的两个亲本菌种的单核菌株分别在培养皿中培养10天，刮掉菌落表面菌丝，在菌落边缘用直径5mm的打孔器进行打孔，后将两株单核菌株的菌块转移到同一培养皿中，相距1.5cm，在18℃，黑暗条件下进行培养9天，即可挑取两菌落之间形成融合线状突起的杂交组合中间突起部分菌丝进行镜检，若菌丝上有锁状联合结构，表明杂交成功。将杂交成功的组合，取中间突起部分切割菌块，转移到新的培养基中继续培养，即可获得杂交双核菌株；杂交双核菌株培养基配方为寒天培养基，其配方为：淀粉200g，无水葡萄糖20g，琼脂15g，加水定容至1l。
42.步骤六：液体菌种制备：将步骤五中得到的杂交双核菌株在17℃，黑暗条件下，培养9天，刮去表面菌丝，在距离菌丝尖端1cm左右的位置呈环状进行打孔，打孔直径5mm，后取6块菌块放入600ml的三角瓶液体培养基中，在18℃，培养容器150rmp/min，黑暗条件下培养8天，即可获得金针菇液体菌种。液体培养基配方为每1l培养基中包括：3.3g豆粕，20g蔗糖，0.66g磷酸氢二钾，0.66g硫酸镁。
43.步骤七：出菇与筛选：将金针菇液体菌种接种于多个栽培瓶中，每个栽培瓶接种25ml,在18℃，黑暗条件下进行菌丝培养，在5℃，co2浓度10kppm，湿度60％条件下进行出菇培养，在菌丝培养和出菇培养中明确，其农艺学性状与栽培性状，筛选出符合生产需求且产量优于亲本的菌种。栽培瓶配方为：11.9％玉米芯，10.5％米糠，2.3％麸皮，0.7％啤酒糟，1.2％大豆皮，1.75％棉籽壳，1.5％干豆渣，0.3％轻质碳酸钙，0.45％贝壳粉，1.4％甜菜粕，68％水。
44.步骤四中同时收集的单核菌株较多，需要对单核菌株进行保藏，以便用于后续杂交；保藏方法为：取试管中的单核菌株呈3mm
×
3mm
×
2mm的方形菌块，放入装有1.5ml无菌水的2ml冻存管中，每管放置4块，置于4℃，黑暗条件下保藏，有效保藏期1年左右。
45.实施例二：一种金针菇的选育方法，包括以下步骤：
46.步骤一：杂交亲本的选取：选取遗传背景差异较大的菌株作为亲本菌株进行杂交。调查菌种来源，从多种菌种中挑选高度与产量相差大的t011和t022作为亲本菌种，明确t011和t022菌种生长周期，生理特性，以及菇体的农艺学性状，选择能够优势互补的菌株作
为杂交亲本；具体选择方法为：观察用作亲本的菌株菌落培养阶段，液体菌种培养阶段，出菇阶段的生长状态表现，若有明显性状差异，表明亲本菌株间有遗传差异，选取能优势互补的菌株作为杂交亲本，如此培养可获得性状叠加的杂交菌株。菌落培养后选取菌块，将两个亲本菌块接种在同一个培养皿中，利用拮抗反应判断亲本菌种间的遗传背景差异，选取有拮抗线产生的两个亲本菌种；具体判断亲本菌种间的遗传背景差异的步骤为：选取t011和t022菌系的两个菌种，进行菌落培养8天后，用打孔器在距离菌丝尖端1cm左右位置打5mm直径的圆形菌块，并将两个亲本菌块同时接种于同一培养皿内，相距2cm，在黑暗，18℃条件下进行培养，待长至相交部位，观查两菌落之间是否有拮抗线产生；有拮抗线产生表明两亲本之间存在遗传背景差异，则两者相互杂交，出现优良杂交菌株的概率高。
47.步骤二：单核菌株的获取将步骤一选取的亲本菌种进行培养，选取接种于栽培瓶后第49天，生长状态良好的亲本菌株，挑取直径9.5mm的菌盖用于担孢子的收集。摘取菌盖后，用75％的酒精对菌盖进行擦拭消毒，后用刀切掉菇柄，将菌盖置于已灭菌的玻璃培养皿中，每个培养皿中可放置8个菌盖。后将培养皿静置于超净工作台中9小时，揭去菌盖，即可收集到金针菇菌盖喷射的孢子印。
48.步骤三：担孢子的分离：准备已灭菌的2ml离心管8支，向每支离心管中加无菌水900μl，再用移液枪吸取100μl无菌水，选取培养皿底部3个形状较为完整的的孢子印进行冲洗，冲洗孢子印后即可获得100μl孢子悬浮液，将100μl孢子悬浮液打入900μl的无菌水中进行稀释，即可获得稀释10倍的孢子悬浮液，再从10倍的孢子悬浮液中吸取100μl打入下一支加900μl有无菌水的离心管中，即可获得稀释100倍的孢子悬浮液，重复上述稀释操作，对孢子悬浮液进行梯度稀释，直到获得浓度为2.5
×
102个/ml的孢子悬浮液。将稀释好的孢子悬浮液吸取100μl，打到装有pda培养基的培养皿中，进行涂布稀释，在黑暗，18℃条件下培养4.5天，获得由单个担孢子长出的单核菌落。
49.步骤四：单核菌株的培养：用接种环挑取单菌落转接至含有培养基的试管中，在黑暗，17℃条件下进行培养。单核菌株的培养基成分如下：每1l培养基中含有：200g土豆，20g葡萄糖，15g琼脂粉，5g酵母粉，1g磷酸氢二甲，0.5g硫酸镁。培养12天后，即可对单核菌株进行一轮筛选，选择生长速度较快，粉孢子少，菌丝均匀的菌株用于后续的杂交。(两个亲本菌种均采用步骤二-步骤四的方法培养)。筛选出的两个亲本菌株一部分用于后续的杂交，一部分继续单独培养，单独培养的部分与杂交培养的部分培养条件与培养基均相同，用于后续的性状对比。
50.步骤五：两个亲本菌株的单核菌株间杂交配对：将步骤四得到的两个亲本菌种的单核菌株分别在培养皿中培养10天，刮掉菌落表面菌丝，在菌落边缘用直径5mm的打孔器进行打孔，后将两株单核菌株的菌块转移到同一培养皿中，相距1.5cm，在18℃，黑暗条件下进行培养9-10天，即可挑取两菌落之间形成融合线状突起的杂交组合中间突起部分菌丝进行镜检，若菌丝上有锁状联合结构，表明杂交成功。将杂交成功的组合，取中间突起部分切割菌块，转移到新的培养基中继续培养，即可获得杂交双核菌株；杂交双核菌株培养基配方为寒天培养基，其配方为：淀粉200g，无水葡萄糖20g，琼脂15g，加水定容至1l。
51.步骤六：液体菌种制备：将步骤五中得到的杂交双核菌株在17℃，黑暗条件下，培养9天，刮去表面菌丝，在距离菌丝尖端1cm左右的位置呈环状进行打孔，打孔直径5mm，后取6块菌块放入600ml的三角瓶液体培养基中，在18℃，培养容器150rmp/min，黑暗条件下培养
8天，即可获得金针菇液体菌种。液体培养基配方为每1l培养基中包括：3.3g豆粕，20g蔗糖，0.66g磷酸氢二钾，0.66g硫酸镁。
52.步骤七：出菇与筛选：将金针菇液体菌种接种于多个栽培瓶中，每个栽培瓶接种27ml,在18℃，黑暗条件下进行菌丝培养，在7℃，co2浓度19kppm，湿度75％条件下进行出菇培养，在菌丝培养和出菇培养中明确，其农艺学性状与栽培性状，筛选出符合生产需求且产量优于亲本的菌种。栽培瓶配方为：11.9％玉米芯，10.5％米糠，2.3％麸皮，0.7％啤酒糟，1.2％大豆皮，1.75％棉籽壳，1.5％干豆渣，0.3％轻质碳酸钙，0.45％贝壳粉，1.4％甜菜粕，68％水。
53.步骤四中同时收集的单核菌株较多，需要对单核菌株进行保藏，以便用于后续杂交；保藏方法为：取试管中的单核菌株呈3mm
×
3mm
×
2mm的方形菌块，放入装有1.5ml无菌水的2ml冻存管中，每管放置4块，置于4℃，黑暗条件下保藏，有效保藏期1年左右。
54.实施例三：一种金针菇的选育方法，包括以下步骤：
55.步骤一：杂交亲本的选取：选取遗传背景差异较大的菌株作为亲本菌株进行杂交。调查菌种来源，从多种菌种中挑选高度与产量相差大的t011和t022作为亲本菌种，明确t011和t022菌种生长周期，生理特性，以及菇体的农艺学性状，选择能够优势互补的菌株作为杂交亲本；具体选择方法为：观察用作亲本的菌株菌落培养阶段，液体菌种培养阶段，出菇阶段的生长状态表现，若有明显性状差异，表明亲本菌株间有遗传差异，选取能优势互补的菌株作为杂交亲本，如此培养可获得性状叠加的杂交菌株。菌落培养后选取菌块，将两个亲本菌块接种在同一个培养皿中，利用拮抗反应判断亲本菌种间的遗传背景差异，选取有拮抗线产生的两个亲本菌种；具体判断亲本菌种间的遗传背景差异的步骤为：选取t011和t022菌系的两个菌种，进行菌落培养8天后，用打孔器在距离菌丝尖端1cm左右位置打5mm直径的圆形菌块，并将两个亲本菌块同时接种于同一培养皿内，相距2cm，在黑暗，18℃条件下进行培养，待长至相交部位，观查两菌落之间是否有拮抗线产生；有拮抗线产生表明两亲本之间存在遗传背景差异，则两者相互杂交，出现优良杂交菌株的概率高。
56.步骤二：单核菌株的获取将步骤一选取的亲本菌种进行培养，选取接种于栽培瓶后第49天，生长状态良好的亲本菌株，挑取直径10.5mm的菌盖用于担孢子的收集。摘取菌盖后，用75％的酒精对菌盖进行擦拭消毒，后用刀切掉菇柄，将菌盖置于已灭菌的玻璃培养皿中，每个培养皿中可放置8个菌盖。后将培养皿静置于超净工作台中10小时，揭去菌盖，即可收集到金针菇菌盖喷射的孢子印。
57.步骤三：担孢子的分离：准备已灭菌的2ml离心管5-10支，向每支离心管中加无菌水900μl，再用移液枪吸取100μl无菌水，选取培养皿底部3个形状较为完整的的孢子印进行冲洗，冲洗孢子印后即可获得100μl孢子悬浮液，将100μl孢子悬浮液打入900μl的无菌水中进行稀释，即可获得稀释10倍的孢子悬浮液，再从10倍的孢子悬浮液中吸取100μl打入下一支加900μl有无菌水的离心管中，即可获得稀释100倍的孢子悬浮液，重复上述稀释操作，对孢子悬浮液进行梯度稀释，直到获得浓度为2.5
×
102个/ml的孢子悬浮液。将稀释好的孢子悬浮液吸取100μl，打到装有pda培养基的培养皿中，进行涂布稀释，在黑暗，18℃条件下培养5天，获得由单个担孢子长出的单核菌落。
58.步骤四：单核菌株的培养：用接种环挑取单菌落转接至含有培养基的试管中，在黑暗，17℃条件下进行培养。单核菌株的培养基成分如下：每1l培养基中含有：200g土豆，20g
葡萄糖，15g琼脂粉，5g酵母粉，1g磷酸氢二甲，0.5g硫酸镁。培养12天后，即可对单核菌株进行一轮筛选，选择生长速度较快，粉孢子少，菌丝均匀的菌株用于后续的杂交。(两个亲本菌种均采用步骤二-步骤四的方法培养)。筛选出的两个亲本菌株一部分用于后续的杂交，一部分继续单独培养，单独培养的部分与杂交培养的部分培养条件与培养基均相同，用于后续的性状对比。
59.步骤五：两个亲本菌株的单核菌株间杂交配对：将步骤四得到的两个亲本菌种的单核菌株分别在培养皿中培养10天，刮掉菌落表面菌丝，在菌落边缘用直径5mm的打孔器进行打孔，后将两株单核菌株的菌块转移到同一培养皿中，相距1.5cm，在18℃，黑暗条件下进行培养10天，即可挑取两菌落之间形成融合线状突起的杂交组合中间突起部分菌丝进行镜检，若菌丝上有锁状联合结构，表明杂交成功。将杂交成功的组合，取中间突起部分切割菌块，转移到新的培养基中继续培养，即可获得杂交双核菌株；杂交双核菌株培养基配方为寒天培养基，其配方为：淀粉200g，无水葡萄糖20g，琼脂15g，加水定容至1l。
60.步骤六：液体菌种制备：将步骤五中得到的杂交双核菌株在17℃，黑暗条件下，培养9天，刮去表面菌丝，在距离菌丝尖端1cm左右的位置呈环状进行打孔，打孔直径5mm，后取6块菌块放入600ml的三角瓶液体培养基中，在18℃，培养容器150rmp/min，黑暗条件下培养8天，即可获得金针菇液体菌种。液体培养基配方为每1l培养基中包括：3.3g豆粕，20g蔗糖，0.66g磷酸氢二钾，0.66g硫酸镁。
61.步骤七：出菇与筛选：将金针菇液体菌种接种于多个栽培瓶中，每个栽培瓶接种30ml,在18℃，黑暗条件下进行菌丝培养，在8℃，co2浓度25kppm，湿度60-90％条件下进行出菇培养，在菌丝培养和出菇培养中明确，其农艺学性状与栽培性状，筛选出符合生产需求且产量优于亲本的菌种。栽培瓶配方为：11.9％玉米芯，10.5％米糠，2.3％麸皮，0.7％啤酒糟，1.2％大豆皮，1.75％棉籽壳，1.5％干豆渣，0.3％轻质碳酸钙，0.45％贝壳粉，1.4％甜菜粕，68％水。
62.步骤四中同时收集的单核菌株较多，需要对单核菌株进行保藏，以便用于后续杂交；保藏方法为：取试管中的单核菌株呈3mm
×
3mm
×
2mm的方形菌块，放入装有1.5ml无菌水的2ml冻存管中，每管放置4块，置于4℃，黑暗条件下保藏，有效保藏期1年左右。
63.由本发明金针菇的选育方法所选出的杂交双核菌株的出菇率比t011亲本菌株的出菇率、t022亲本菌株的出菇率至少提升10％；生长发育周期与t011亲本菌株、t022亲本菌株相比，可提前2-5天进行采收；可见本发明筛选出的杂交菌种节约了生产成本，提高了生产效益。
64.对实施例1-3的筛选出的杂交菌株和t011亲本菌株、t022亲本菌株的平均产量进行对比，结果如表1所示。
[0065] 杂交双核菌株产量t011菌株产量t022菌株产量实施例一453.5g359.50g416.55g实施例二455.6g360.14g418.33g实施例三457.19g362.20g418.57g
[0066]
从表1可以看出，利用本发明金针菇的选育方法所选出的杂交双核菌株培养所得的产量均比t011菌株的产量和t022菌株的产量高。
[0067]
对实施例1-3的筛选出的杂交菌株和t011亲本菌株、t022亲本菌株的平均高度进
行对比，结果如表2所示。
[0068] 杂交双核菌株(cm)t011菌株(cm)t022菌株(cm)实施例一13.912.113.5实施例二13.912.313.6实施例三13.712.313.5
[0069]
从表2可以看出，利用本发明金针菇的选育方法所选出的杂交双核菌株培养所得的高度比t011菌株的高度高，与t022菌株的高度相似，说明采用本选育方法选出的菌株以及培养所得到的金针菇获得了优良的性状。
[0070]
通过以上栽培试验结果可以看出，杂交新菌株与亲本菌株间存在显著差异性，确定为新菌株，证明该种选育方法的可行性。
[0071]
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。