一种高效低耗检测盐酸平阳霉素原料中痕量铜元素的方法与流程

1.本发明属于药物分析检测领域，具体是种高效、低耗检测盐酸平阳霉素原料中痕量铜元素的方法。


背景技术：

2.平阳霉素是由我国自主研发的博来霉素类抗肿瘤抗生素，主治唇癌、舌癌、齿痕癌、鼻咽癌等颈部鳞癌，且肺毒性低于博来霉素，不抑制机体的免疫功能，无常用抗癌药物所引起的白细胞减少症状。1994年进入首批国家基本药物目录并收载于《中国药典》。
3.我国学者在1969年从浙江省平阳山区土壤中分离出来的轮枝链霉菌平阳新变种(streptomyces verticillus var.pingyangensis n.sp.)发酵液离分离出来的碱性糖肽类抗肿瘤抗生素，平阳霉素在发酵液中不稳定，加入铜离子形成螯合物，有助于发酵过程中保持产品的稳定性，本品为静脉注射用粉针剂，过量的铜对人身体造成危害，因此有必要对残留的铜盐含量进行控制。
4.目前，《中国药典》2020版收载的铜的检查采用金属试剂络合，紫外分光光度法进行限度检查，操作步骤繁多，同时，实验中发现，加入铜试剂后对照品溶液和样品溶液颜色差别大，吸光度值相差10倍，且供试品吸光度值仅0.016，远远低于分光光度读数准确范围0.2～0.8，实验误差大。


技术实现要素：

5.本发明的目的是针对以上问题，提供了1、一种高效低耗检测盐酸平阳霉素原料中痕量铜元素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.(1)供试品溶液和空白溶液的制备：取样品40mg置10ml量瓶中，用2％的硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，同时做空白实验；空白溶液为2％的硝酸溶液
7.(2)标准铜溶液的制备：
8.精密量取2ml标准铜溶液，置于10ml量瓶中，用2％的硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得标准铜溶液贮备液；
9.精密量取2ml标准铜溶液贮备液，置于100ml量瓶中，用2％的硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得标准铜溶液；
10.(3)采用火焰法依次将步骤2)制备的标准铜溶液引入原子吸收光谱仪，测定标准铜溶液的吸光度值，以标准铜溶液的吸光度值对铜浓度进行线性回归，模拟出线性回归方程；
11.(4)将步骤(1)制备供试品溶液引入原子吸收光谱仪，测定供试品溶液的吸光度值，根据吸光度值和浓度关系，计算得到样品中铜元素的含量。
12.所述院子吸收光谱仪的测定条件为：
13.检测波长：324.8nm
14.灯电流：75％
15.狭缝宽度0.5nm
16.燃烧器高度：7.0mm
17.空气流量：5.0l/ml
18.雾化器提升量：5.0ml/min。
19.与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
20.本发明建立了原子吸收-火焰法测定盐酸平阳霉素中铜元素含量的测定方法，该方法快速简单、稳定、无干扰、结果准确，同时使用更少的试剂，检测成本消耗低，适合企业大批量产品的质量监测。
附图说明
21.附图1为标准铜溶液吸光度值与铜浓度的标准曲线。
具体实施方式
22.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.1.仪器与试药
24.仪器：赛默飞ice-3000原子吸收光谱仪；
25.德国梅特勒xs205电子天平；
26.milli-q纯水仪；
27.试剂：硝酸为色谱纯，水为实验室自制超纯水。
28.对照品：标准铜溶液(中国计量科学研究院，批号：gsb04-1725-2019，1000μg/ml)，
29.供试品：盐酸平阳霉素原料4批(批号：y190401、y200901、y200902、200322)。
30.2.仪器测定条件：
31.表1 cu的仪器测定条件
[0032][0033]
3.溶液的制备
[0034]
空白溶液：2％硝酸。
[0035]
标准铜溶液贮备液的制备：精密量取2ml标准铜溶液，置于10ml量瓶中，用2％的硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得标准铜溶液贮备液。
[0036]
标准铜溶液：精密量取2ml标准铜溶液贮备液，置于100ml量瓶中，用2％的硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得标准铜溶液。
[0037]
供试品溶液的制备：取样品40mg置10ml量瓶中，用2％的硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0038]
对照品溶液：取样品40mg置10ml量瓶中，加入标准铜溶液1ml，用2％的硝酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0039]
酸破坏溶液：取样品40mg，置10ml量瓶中，加入1mol/l盐酸溶液1ml溶解,室温静置1h，加入1mol/l氢氧化钠溶液1ml，加水稀释至刻度摇匀。
[0040]
碱破坏溶液：取样品40mg，置10ml量瓶中，加入1mol/l氢氧化钠溶液1ml溶解，室温静置1h，加入1mol/l盐酸溶液1ml，加水稀释至刻度摇匀。
[0041]
氧化破坏溶液：取样品40mg，置10ml量瓶中，加入30％h2o2溶液1ml溶解，室温静置1h，加水稀释至刻度摇匀。
[0042]
光照破坏溶液：取样品40mg，置10ml量瓶中，加水4ml溶解，置254nm光照射24h后，加水稀释至刻度摇匀。
[0043]
高温破坏溶液：取样品40mg，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，于100℃水浴加热1h。
[0044]
4.方法学验证
[0045]
4.1检测限测定
[0046]
取空白溶液，连续测定11次，计算相对偏差值，结果如下表。照《中国药典》四部指导原则，3倍偏差(0.001433)与斜率(0.004878)的比值为检出限，即0.029μg/ml。
[0047]
表2检测限的测定
[0048][0049]
4.2线性及范围
[0050]
精密量取对照品贮备液0.1ml、1ml、2ml、4ml、8ml、10ml置100ml量瓶中，加2.0％硝酸溶液稀释至刻度，作为线性溶液(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)，精密量取上述溶液注入原子吸收光谱仪，记录色谱图，测定结果见下表。
[0051]
表3线性关系测定结果
[0052]
[0053]
4.3专属性考察
[0054]
取空白溶液、辅料(明胶)溶液、以及强制降解试验(酸、碱、热、光照、氧化)溶液，按拟建立方法测定，结果见下表，经与样品溶液(批号y190401)比对，未对测定产生影响。
[0055]
表4专属性考察
[0056][0057][0058]
4.4耐用性考察
[0059]
对照品贮备液和盐酸平阳霉素原料1批(批号：y190901)，照拟修订方法平行制备3分，分别用浓度为1.8％硝酸溶液、2.0％硝酸溶液和2.2％硝酸溶液溶液，测定，结果见下表，硝酸溶液浓度小幅变化对测定结果无影响。
[0060]
表5耐用性考察
[0061][0062]
5.样品中铜元素含量测定
[0063]
取原料4批(批号：200322、y190401，y200901，y200902)，照《中国药典》四部通则0304原子吸收分光光度法第二法——标准加入法测定并计算铜含量，同时对比药典方法，结果见下表。
[0064]
表6样品测定结果
[0065][0066]
由上表样品测定结果可知，现有国内生产厂家的盐酸平阳霉素原料中，铜元素含量远低于现行药典标准中规定的限度值0.1％，参照欧洲药典收录的同品种抗生素——硫酸博来霉素质量标准中铜盐检查项的限度值200ppm(0.02％)，将限度值提高至0.01％，高于国外药典标准。
[0067]
同时将原标准杂质含量测定改为杂质限度检查法，简化了操作步骤，降低了检验难度，节约了检验成本，新修订的方法对盐酸平阳霉素原料中铜元素残留可控。
[0068]
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
[0069]
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。