一种细胞传代方法与流程

1.本发明涉及细胞培养领域，具体涉及一种细胞传代方法。


背景技术：

2.现有技术中，在细胞培养过程中大多数采用转瓶生产工艺进行生产，基本都是采用通过用力甩动细胞瓶使细胞能从细胞瓶上分散开或脱落。如果传代或收获的瓶数较多，或使用较大规格的细胞瓶如10l、15l得瓶子，瓶子较重，则需要用较多的力气来甩瓶，同时有一些细胞其细胞间的连接比较紧密或者细胞贴壁较牢固的，通过轻轻的甩动细胞瓶很难让细胞均匀的分散开或从细胞瓶上脱离下来，通常是采用更多人力去用力的去甩瓶来完成，这样的结果是耗费人力，并且消化程度不够均匀。


技术实现要素：

3.为克服现有技术中的不足，本发明的目的在于提供一种高效率的细胞代方法。
4.为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
5.一种细胞传代方法，所述方法包括以下步骤：
6.1.细胞传代前准备：
7.1.1)将待传代的若干瓶细胞瓶口连接上带有进液口快接头和出液口快接头的塞子，准备好所需要的液体，将可加热的保温缓冲垫包覆到细胞瓶上，将包覆好保温缓冲垫的细胞瓶固定到旋转装置上；
8.1.2)细胞传代时，打开温度控制器，设置预定温度，使细胞传代过程当中细胞所处的环境温度稳定；
9.2.细胞清洗：
10.2.1)首先将细胞瓶的进液口与pbs瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的pbs溶液；
11.2.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，设定时间到了，电机停止转动，清洗结束；
12.3.细胞消化：
13.将细胞瓶的进液口与分散液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的分散液，开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间；结束后将细胞瓶的出液口与废液收集瓶通过快接头连接并开启蠕动泵将废液抽出；
14.4.终止消化：
15.4.1)细胞消化完成后，将细胞瓶的进液口与营养液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入适量营养液；
16.4.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶使营养液混合均匀，根据不同细胞设定对应的转速和时间；
17.4.3)补液分装：将细胞瓶出液口快接头与细胞分装瓶连接，将细胞分装至各个细胞瓶中。
18.进一步的，步骤1.2)中，st细胞传代设定温度38℃；marc-145细胞传代时设定温度37℃；vero细胞传代时设定温度36℃。
19.进一步的，步骤2.2)中，st细胞和marc-145细胞传代时设定转速60r/min，时间为20s；vero细胞传代时设定转速60r/min，时间为10s；清洗结束后将出液口快接头与废液收集装置连接并开启蠕动泵将废液抽出；其中st细胞、 marc-145细胞传代重复步骤2.1)和2.2)清洗2次，而vero细胞清洗一次。
20.进一步的，步骤3中，st细胞传代时设定转速为60r/min，时间为60s； marc-145细胞传代时设定转速为60r/min，时间为40s；vero细胞传代时设定转速为60r/min，时间为20s。
21.进一步的，步骤4.2)中，st细胞传代时设定转速为200r/min，时间为60s； marc-145细胞传代时设定转速为180r/min，时间为40s；vero细胞传代时设定转速为150r/min，时间为30s。
22.进一步的，所述保温垫含有5mm厚的保温层。
23.进一步的，所述旋转装置包括由电机驱动旋转的底座，底座上设有带有可调节卡扣的细胞瓶固定支架。
24.本发明采用以上技术方案，细胞传代的时候不再需要一瓶一瓶传代，同时需要传代几瓶细胞可以同时进行，节约时间，提高了效率。
具体实施方式
25.本发明一种细胞传代方法，方法包括以下步骤：
26.1.细胞传代前准备：
27.1.1)将待传代的若干瓶细胞瓶口连接上带有进液口快接头和出液口快接头的塞子，准备好所需要的液体(pbs、分散液、营养液等)，将可加热的保温缓冲垫包覆到细胞瓶上，将包覆好保温缓冲垫的细胞瓶固定到旋转装置上；
28.1.2)细胞传代时，打开温度控制器，设置预定温度(st细胞传代设定温度 38℃，marc-145细胞传代时设定温度37℃，vero细胞传代时设定温度36℃)，使细胞传代过程当中细胞所处的环境温度稳定；
29.2.细胞清洗：
30.2.1)首先将细胞瓶的进液口与pbs瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的pbs溶液，通过蠕动泵的加量，pbs溶液的量是可以固定的，相比人工倒入pbs溶液更加的精确；
31.2.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中st细胞和marc-145细胞传代时设定转速 60r/min，时间为20s；vero细胞传代时设定转速60r/min，时间为10s；清洗结束后将出液口快接头与废液收集装置连接并开启蠕动泵将废液抽出；其中st 细胞、marc-145细胞传代重复步骤2.1)和2.2)清洗2次，而vero细胞清洗一次。
32.设定时间到了，电机停止转动，清洗结束；
33.3.细胞消化：
34.将细胞瓶的进液口与分散液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入200ml的分散液，通过蠕动泵的加量，分散液的量是可以固定的，相比人工倒入分散液更加的精确，开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中，st细胞传代时设定转速为60r/min，时间为60s；marc-145细胞传代时设定转速为60r/min，时间为40s；vero细胞传代时设定转速为60r/min，时间为20s；结束后将细胞瓶的出液口与废液收集瓶通过快接头连接并开启蠕动泵将废液抽出；
35.4.终止消化：
36.4.1)细胞消化完成后，将细胞瓶的进液口与营养液瓶通过快接头连接，连接完成后通过蠕动泵往细胞瓶中加入适量营养液，通过蠕动泵的加量，营养液的量是可以固定的，相比人工倒入营养液更加的精确；
37.4.2)开启转速和时间控制器，采用电机转动的方式来转动细胞瓶使营养液混合均匀，根据不同细胞设定对应的转速和时间，其中，st细胞传代时设定转速为200r/min，时间为60s；marc-145细胞传代时设定转速为180r/min，时间为40s；vero细胞传代时设定转速为150r/min，时间为30s。该操作与人工甩动细胞相比力度更加的稳定，时间精确可控，特别当这种细胞是难分散开的，如 st细胞消化，它需要使用较大的力气甩动细胞才能将细胞分散开细胞消化完成，通过该方法则可以轻松的消化细胞；
38.4.3)补液分装：将细胞瓶出液口快接头与细胞分装瓶连接，将细胞分装至各个细胞瓶中。
39.本发明中的保温垫含有5mm厚的保温层，可以起到缓冲作用，可减少装置在转动过程中与细胞瓶的碰撞。此外，旋转装置包括由电机驱动旋转的底座，底座上设有带有可调节卡扣的细胞瓶固定支架。其中，细胞瓶固定支架共由6组，可以同时固定6瓶细胞进行传代。
40.本发明通过电机转动的方式来转动细胞瓶，通过转速控制器来控制消化的强度，通过电子定时器设定时间，能更精确控制消化程度。并且通过串联的方式能同时实现多瓶细胞同时甩瓶的技术。保温垫可以根据细胞消化或者细胞液收获所需要的不同温度进行调节，同时该保温垫为活动装置，可以根据所需要传代细胞瓶的大小来调节，使该保温垫贴合瓶壁。
41.通过本发明方法，细胞传代的时候不需要一瓶一瓶传代，需要传代几瓶细胞可以同时进行，节约时间，提高了效率，比如原量传代一瓶细胞需要花20min，本次需要传代12瓶细胞，需要4h，使用了本发明方法之后只需要1h就可以传代12瓶细胞。
[0042][0043]
上面对本发明的实施加以描述，但是本发明不局限于上述的具体实施方式，上述
的具体实施方式是示意性而不是加以局限本发明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。