一种具有解酒保肝护胃功效的组合物的制作方法

1.本发明涉及包含低聚肽和益生菌作为有效成分的、具有缓解酒精伤害和保护胃肠黏膜功效的组合物及包含所述组合物的产品。


背景技术：

2.随着经济的发展和社交活动的增多，饮酒已成为全世界蔓延的生活习惯。适当饮酒带来的愉悦感可以缓解紧张，有利于社交及增进友谊。但过量饮酒可引起恶心、呕吐、口渴、头痛及肌肉痛，影响日常工作生活。近年来，全球人均酒精耗量呈上升趋势，国内外酒精性肝病患者越来越多。据统计，80％的嗜酒者表现出一定程度的酒精性肝损伤特征，其中10％～35％可发展成为酒精性肝炎，10％-20％可发展为酒精性肝硬化。who报告显示，2016年酒精造成大约300万人死亡，占全球死亡人数的5.3％。
3.急性或长期饮酒都会影响胃功能。酗酒者具有较高的胃黏膜萎缩发病率，胃分泌能力低下。胃酸分泌降低削弱了对病菌的杀伤力，有更多的有害菌进入小肠定居。动物及人体试验研究发现，10％以上酒精会破坏胃黏膜，增加黏膜的通透性。短期暴露于酒精的变化是快速可逆的。但长期暴露会干扰微循环、导致进展性黏膜结构损伤。(bode c and bode jc.alcohol’s role in gastrointestinal tract disorders.alcohol health&research world,1997,21:76-83)。
4.过量饮酒常常引起十二指肠前段黏膜损伤。正常人一次过量饮酒也会导致十二指肠腐蚀和出血。乙醇会破坏黏膜上皮的完整性，并诱导释放有害信号分子，如细胞因子、组胺和白三烯。这些分子损伤小肠黏膜中小血管壁或毛细管，诱生血凝，进而撕裂绒毛，导致一些大分子，如内毒素等细菌毒素，进入血管和淋巴。动物实验研究显示，乙醇增加小肠黏膜的通透性，一些大分子可以乘机进入血液。内毒素及其他细菌毒素进入血液，随后到达肝脏。早期酒精性肝损伤病人体内能检测到内毒素。嗜酒者的空肠中产内毒素的细菌含量高于正常人，加上黏膜通透性增加，会有更多的内毒素进入血液中到达肝脏，加剧肝脏损伤(rao rk,et al.recent advances in ethanolic liver disease i.role of intestinal permeability and endotoxemia in ethanolic liver disease.american journal of physiology gastrointest liver physiology,2004,286:g881-884)。
5.酒精在体内吸收后，主要在肝脏中代谢，代谢产物主要是乙醛和乙酸。参与酒精代谢过程的酶有乙醇脱氢酶(adh，alcohol dehydrogenase)和醛脱氢酶(aldh，aldehyde dehydrogenase)。首先在adh催化下，酒精转化为乙醛；然后在aldh催化下，乙醛转化为乙酸。乙醛具有毒性，使人产生疲劳感、睡眠障碍、心悸亢进、颤抖、呕吐等各种症状。乙醛最容易导致肝损伤，作为主要的毒性物质，它能够阻止线粒体的氧化从而使这一毒性物质不断地增加。乙醛可以与肝脏内多种蛋白质结合形成乙醛蛋白的加合物，改变蛋白表面电荷构象，导致功能性蛋白质变性，甚至暴露一些表面抗原，从而刺激机体产生抗体引起自身免疫反应，导致肝脏损伤(tuma dj,casey ca.dangerous byproducts of alcohol breakdown-focus on adducts.alcohol research&health,2003,27:285-290)。未被及时代谢的酒精
沿着血液传递至脑，以刺激中枢神经系统，从而影响脑的功能，导致判断能力降低。
6.此外，酒精还会影响肠道微生物平衡(engen pa,et al.the gastrointestinal microbiome-alcohol effects on the composition of intestinal microbiota.alcohol research:current reviews,2015,37:223-236)。酒精经过胃进入小肠，由小肠吸收近80％，但小肠吸收速度较慢。肠道内长期高浓度酒精的存在，不仅可能导致肠道正常菌群失调，引起肠道益生菌数量减少，革兰氏阴性菌等致病菌过度生长，进而导致肠道内容物中内毒素增加；而且肠道中过量酒精和肠道菌群失衡还可能导致肠道通透性升高，进而引起肠道内容物中内毒素进入血液，导致血液中内毒素升高，引起肝脏损伤。
7.肠道微生物组包含100万亿个、至少2000种不同的微生物，大多数属于厚壁菌门(firmicutes)和拟杆菌门(bacteroidetes)。肠道微生物组中含有300万个以上独特基因，是人类基因数目的150倍。胃肠道和肠道微生物之间是一种共生关系。微生物有助于从食物中摄取能量、合成维生素和氨基酸，辅助建立对抗病原菌的屏障。肠道微生物生态平衡破坏，与炎症性肠病(ibd)、肠易激综合症(ibs)、乳糜泻(celiac disease)、食物过敏、i型糖尿病、ii型糖尿病、癌症、肥胖和心血管疾病等有关。
8.酒精灌胃会导致小鼠小肠内细菌过度生长，盲肠中生态失调。厚壁菌门数量下降，拟杆菌门和疣微菌门数量上升。长期饮酒导致人体内微生物组改变，拟杆菌门数量下降，变形菌门和梭菌门(革兰氏阴性细菌)数量增加，同时血液内毒素含量也增加。48位酗酒者和18位健康人群的结肠微生物组比对研究结果显示，与正常人群比较，微生态失调的酗酒者肠道中微生物拟杆菌门数量下降，变形菌门数量上升。这种变化与血清中内毒素水平升高密切相关。即使禁酒一段时间后，这种变化趋势仍然存在(mutlu ea,et al.colonic microbiome is altered in alcoholism.am j physiolgastrointest liver physiol,2012,302:g966
–
g978)。
9.综上所述，饮酒尤其是过量饮酒不仅对胃肠道、肝脏及大脑的伤害很大，而且破坏了肠道微生物的生态平衡，该影响是持续长久的。迫切需要一种能够加快酒精代谢减少其对人体伤害，保护胃肠道黏膜，并恢复肠道微生物平衡的产品。


技术实现要素：

10.本发明提供了一种减少饮酒对机体伤害、保护胃肠道和肝脏的组合物及包含所述组合物的产品，通过植物低聚肽、益生菌以及其他营养物质和辅料的组合，促进饮酒后的体内酒精代谢，保护胃肠道粘膜，维持肠道菌群平衡，并保护肝脏免受酒精伤害，具有解酒、保肝、护胃的功效。
11.本技术提供了一种具有解酒护肝护胃功效的组合物，每5g组合物中包含玉米低聚肽粉1000～5000mg、小麦低聚肽粉50～400mg和益生菌1
×
10
10
～10
×
10
10
菌落形成单位(cfu)。
12.本发明所述益生菌包含嗜酸乳杆菌la-10a(保藏编号cctcc no：m2019012)、嗜酸乳杆菌ncfm(市售)、保加利亚乳杆菌nj441(保藏编号为cctcc no.m2014249)、鼠李糖乳杆菌nj551(cctcc no：m2016157)和乳双歧杆菌nj241。这些益生菌可以以任意比例形成混合物，可通过市面购买进行混合，也可直接购买混合产品，例如直接购买善恩康生物科技(苏州)有限公司的益生菌或复合益生菌粉。
13.本发明所述的玉米低聚肽可通过市面购买获得，2010年经中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会批准作为新资源食品开始使用。
14.本发明所述的小麦低聚肽可通过市面购买获得，2012年经中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会批准作为新资源食品。
15.在某些实施方案中，每5g组合物中包含玉米低聚肽粉3000～5000mg，优选3500～4500mg，更优选4000mg。
16.在某些实施方案中，每5g组合物中包含小麦低聚肽粉100～300mg,，优选150～250mg，更优选200mg。
17.在某些实施方案中，每5g组合物中包含益生菌2
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10
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～10
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cfu，优选5
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～10
×
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cfu，更优选5
×
10
10
cfu。
18.在某些实施方案中，每个最小包装的产品包含：
19.玉米低聚肽粉，3000～5000mg，例如4000mg；
20.小麦低聚肽粉，150～250mg，例如200mg；
21.混合益生菌，2
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～10
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cfu，例如5
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cfu。含嗜酸乳杆菌la-10a、嗜酸乳杆菌ncfm、保加利亚乳杆菌nj441、鼠李糖乳杆菌nj551和乳双歧杆菌nj241。
22.本发明还提供一种产品，所述产品或所述产品的原料包含本发明所述的具有解酒护肝护胃功效的组合物。
23.本发明所述的产品通常是食品，例如一般食品或保健食品，例如酸奶、乳酸菌饮料、奶片、固体饮料或压片糖果。
24.本发明所述的产品可以按照本领域的常规方法制备，例如将所述组合物包含的成分进行混合、造粒或压片成型。
25.本发明还提供一种解酒保肝护胃组合物的方法，给予本发明所述的具有解酒护肝护胃功效的组合物。
26.本发明还提供本发明所述解酒保肝护胃功效的组合物用于制备产品的用途。
27.本发明所述的产品通常是食品，例如一般食品或保健食品，例如酸奶、乳酸菌饮料、奶片、固体饮料或压片糖果。
28.本发明还提供本发明所述解酒保肝护胃功效的组合物或本发明所述的产品在用于制备预防和/或辅助治疗化学性肝损伤(例如酒精性肝损伤)产品中的用途。
29.有益效果
30.本发明的组合物或产品可以改善饮酒后的不适感，缩短饮酒者的醉酒时间和/或醒酒时间，降低饮酒者血液乙醇含量和/或减少饮酒者血液中乙醇积累。在饮酒之前服用本发明的组合物或产品，可以起到预防醉酒的作用。此外，本发明的组合物或产品对酒精性肝损伤有辅助保护作用。
附图说明
31.图1.急性饮酒后血清中乙醇浓度测定。
32.图2.急性饮酒后胃组织中adh活性和aldh活性测定。
33.图3.急性饮酒后胃组织中tnf-α含量的测定。
34.图4.急性饮酒后肝脏组织中gsh、mda和tg含量测定。
35.图5.hp感染小鼠实验，血清中il-6水平和胃组织中adh活性。
36.图6.低聚肽粉益生菌组合物对长期饮酒小鼠肠道微生物组含量的影响。
具体实施方式
37.下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是，本领域技术人员将理解，下列附图和实施例仅用于说明本发明，而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的详细描述，本领域技术人员将很容易理解本发明的各种目的和有利方面。
38.实施例中的“低聚肽粉益生菌组合物”，每个最小包装(5g)含有：玉米低聚肽粉4g，小麦低聚肽粉0.2g，益生菌500亿。
39.实施例中的“蛋白粉益生菌组合物”，每个最小包装(5g)含有：市售蛋白粉4.2g，益生菌500亿。
40.实施例中的“低聚肽粉”，每个最小包装(4.2g)含有：玉米低聚肽粉4g，小麦低聚肽粉0.2g。
41.主要原料：
42.玉米低聚肽粉：中食都庆(山东)生物技术有限公司。
43.小麦低聚肽粉：中食都庆(山东)生物技术有限公司。
44.混合益生菌粉：善恩康生物科技(苏州)有限公司，包含嗜酸乳杆菌la-10a、嗜酸乳杆菌ncfm、保加利亚乳杆菌nj441、鼠李糖乳杆菌nj551和乳双歧杆菌nj241。
45.市售蛋白粉：汤臣倍健植物蛋白粉。
46.实施例1、低聚肽益生菌组合物对急性酒精中毒小鼠的保护作用
47.将适应性饲养一周的40只昆明小鼠(6周龄，雄性，体重范围20
±
2g。南京君科生物科技有限公司)，随机分为4组即正常对照组、模型对照组、蛋白粉益生菌组合物组(蛋白粉组)、低聚肽粉益生菌组合物组(低聚肽组)，每组10只。实验前对每组小鼠进行标号、称重并记录。自第二周起，每天早上9点，进行灌胃，灌胃体积为每只0.4ml，连续灌胃10天，正常组和模型组灌胃相同体积的生理盐水，蛋白粉组含有65mg蛋白粉益生菌组合物，低聚肽粉组含有65mg低聚肽粉益生菌组合物(按人体剂量的5倍换算)。
48.第10天各组灌胃完成后禁食不禁水12h，于第11天按照上述方法继续进行灌胃，30min后除正常组外，其他各组小鼠均以0.28ml/20g体重的体积灌胃56
°
红星二锅头白酒。
49.小鼠灌胃1h后进行摘眼球取血，获取血清，测定血清中乙醇浓度。
50.采用颈椎脱臼法处死小鼠，剖腹取胃。将胃组织用生理盐水漂洗，滤纸吸干，称量胃重并记录，制备胃组织匀浆，测定胃组织中乙醇脱氢酶(adh)活性、乙醛脱氢酶(aldh)活性和tnf-α含量。
51.取小鼠部分肝脏，置于生理盐水中制成10％肝匀浆，进行还原型谷胱甘肽(gsh)、丙二醛(mda)和甘油三酯(tg)检测。
52.血清中乙醇浓度采用血乙醇测试盒(南京建成生物工程研究所)测定，按说明书操作。
53.胃组织中adh活性测定采用adh试剂盒(南京建成生物工程研究所)，按照说明书操作。其原理根据adh催化乙醇和nad 转化为乙醛和nadh，测定小鼠胃组织匀浆中在340nm处
吸光度的变化率得出adh活性。
54.胃组织中aldh活性采用aldh试剂盒(南京建成生物工程研究所)，按照说明书操作。其原理根据aldh催化乙醛和nad 转化为乙酸和nadh，测定小鼠胃组织匀浆中在340nm处吸光值变化，计算得到aldh活性。
55.胃组织中tnf-α含量测定采用tnf-α试剂盒(南京建成生物工程研究所)，按照说明书操作。
56.肝脏组织中gsh、mda和tg等指标也采用相应的试剂盒测定(南京建成生物工程研究所)，按照说明书操作。
57.血清中乙醇浓度测定结果(图1)表明，与模型组和蛋白粉组比较，口服低聚肽粉益生菌组合物明显降低血清中乙醇浓度(p《0.01)。说明口服低聚肽粉益生菌组合物可以促进乙醇代谢，具有解酒作用。
58.胃组织中adh活性和aldh活性测定结果(图2)表明，与其它各组比较，低聚肽组胃组织中的adh活性和aldh活性均明显增加(p《0.01)。说明口服低聚肽粉益生菌混合物可以增强酒精的胃首过代谢作用，减少酒精进入血液中的量，降低肝脏代谢压力。
59.胃组织中tnf-α含量测定(图3)表明，与模型组比较，低聚肽组胃组织中的tnf-α含量明显降低(p《0.01)，接近正常对照组。说明口服低聚肽粉益生菌混合物可以降低酒精对胃组织的炎症反应，具有护胃作用。
60.肝脏组织中gsh、mda和tg等测定结果(图4)表明，低聚肽组的gsh含量明显高于模型组(p《0.01)，mda含量明显低于模型组(p《0.01)，tg含量也明显低于模型组(p《0.01)，说明口服低聚肽粉益生菌组合物可以抗氧化及降低肝脂，具有护肝功能。
61.本实施例结果说明，口服低聚肽粉益生菌组合物，具有解酒、保肝和护胃功效。
62.实施例2、低聚肽益生菌组合物对感染幽门螺杆菌(hp)小鼠的改善作用
63.选用6周龄雄性昆明小鼠30只(雄性，体重范围20
±
2g。南京君科生物科技有限公司)，随机分为3组，分别为空白组、hp模型组、低聚肽粉益生菌组合物干预组，每组10只小鼠。造模期间，空白组用生理盐水灌胃，0.5ml/d/只；hp模型组和干预组用hp灌胃，0.5ml/d/只。每天1次，连续2周。hp灌胃结束1周后，选择造模成功的小鼠，空白组和hp模型组用生理盐水(0.5ml/d/只)灌胃，干预组用含有65mg低聚肽粉益生菌混合物的生理盐水灌胃，连续10d，灌胃结束1周后将小鼠处死。留取血清样和胃组织样。测定小鼠外周血中抗hp-igg水平、il-6水平，并测定胃组织中adh活性。
64.抗hp-igg检测(采用h.pylori胃幽门螺旋杆菌抗体检测试剂盒，上海凯创生物技术有限公司)结果表明，干预组有30％(3/10)小鼠检测不出hp感染，hp模型组全部可以检测出hp感染(10/10)。
65.血清中il-6含量测定(il-6测试盒，南京建成生物工程研究所)结果(图5)表明，hp模型组上清中il-6空白组，干预组上清中il-6低于hp模型组。说明口服低聚肽益生菌组合物可以降低hp感染导致的炎症反应。
66.胃组织中adh活性测定结果(图5)表明，hp感染明显降低胃组织中adh活性，即酒精的首过代谢下降，饮酒后有更多酒精进入血液中，增加肝脏代谢负荷。但在口服口服低聚肽粉益生菌组合物可以提高hp感染胃组织中adh活性，促进酒精代谢，具有保肝护胃的作用。
67.本实施例结果说明，口服低聚肽粉益生菌组合物可以降低hp感染或治疗hp感染，
同时可以促进酒精的首过代谢，对hp感染人群的饮酒也有保护作用。
68.实施例3、对长期饮酒小鼠肠道微生物菌群变化的影响
69.40只昆明小鼠(雄性，体重范围20
±
2g。南京君科生物科技有限公司)，随机分为4组即正常对照组、模型对照组、实验i组(低聚肽粉组，不含益生菌)、实验ii组(低聚肽粉益生菌组合物组)，每组10只。实验前对每组小鼠进行标号、称重并记录。适应性饲养一周后开始正式实验，每天，正常对照组和模型对照组的动物用0.4ml生理盐水灌胃，实验i组动物用含有55mg低聚肽粉(不含益生菌)的0.4ml生理盐水灌胃，实验ii组动物用含有65mg低聚肽粉益生菌混合物的0.4ml生理盐水灌胃。30min后，模型对照组、实验i组和实验ii组的每只动物以0.09ml/20g体重的体积灌胃56
°
红星二锅头白酒。实验进行4周。
70.最后一次灌胃后，小鼠禁食12h，禁水1h后，将小鼠断颈处死后立即置于超净工作台上，无菌采集回肠内容物，混匀后置于冰上备用。分别称取一定量各组动物回肠内容物置于洁净的锥形瓶中，以无菌生理盐水稀释后加入15
–
20颗无菌玻璃珠，37℃振荡培养20min，使微生物充分分散。取分散液进行适当稀释，分别取稀释液0.1ml，涂布接种于ttc营养琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、mrs琼脂平板和bbl琼脂平板(这些培养基均购于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司)，每个稀释度做3个重复。ttc营养琼脂培养基用于测定细菌总数。伊红美蓝琼脂培养基用于大肠菌群和粪大肠菌群。mrs琼脂培养基用于食品中乳酸菌总数测定。bbl琼脂培养基用于双岐杆菌分离培养。大肠杆菌、细菌37℃培养24h计数，双歧杆菌和乳酸菌37℃厌氧培养24h计数。每一个稀释度重复做3次，计算并求其平均值作为每克肠道内容物所含菌落数。
71.图6结果显示，长期饮酒会降低肠道中乳酸菌和双歧杆菌的数量(p《0.01),口服低聚肽粉益生菌组合物可以改善小鼠肠道微生物组(与模型组比较，p《0.01)，增加乳酸菌和双歧杆菌等益生菌的含量，且优于单纯的低聚肽组(p《0.05)。
72.本实施例结果说明，口服低聚肽粉益生菌组合物可以提高肠道中有益菌群，有助于长期饮酒人群恢复肠道微生物菌群的平衡。