一种中药复方组合物的制作方法

1.本发明涉及一种中药复方组合物，特别是抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的中药复方组合物，更特别地是抗过敏的中药复方组合物。本发明的中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草的提取物，可用于皮肤护理，特别是用于预防和缓解皮肤过敏、皮肤炎症、皮肤过敏、皮肤发红、皮肤刺激和痒痛。本发明还涉及所述中药复方组合物的制备方法及其在制备用于抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的产品中的用途。本发明进一步涉及含有所述中药复方组合物的药物制剂或化妆品。


背景技术：

2.随着环境日益变差，不良化妆品的过度使用等，问题肌肤，例如炎症、红肿、过敏、干裂、痒痛等比例越来越高，如何解决肌肤的这些问题具有很大的现实意义。
3.丹皮：即牡丹皮，为毛萇科植物牡丹paeonia suffruticosa andr.的干燥根皮。具有活血化瘀、清热等功效。研究表明牡丹皮提取物能抑制毛细血管扩张、通透性增加、渗出性水肿为主的炎症早期反应。钟以泽教授以桑白皮、地骨皮和牡丹皮为主配制的“三皮止痒汤(胶囊)”和“三皮消痤汤”，用于治疗皮肤疾病。
4.金银花：又名忍冬花，为忍冬科植物忍冬lonicera japonica thunb.的干燥花蕾或带初开的花。自古即被誉为清热解毒的良药。研究表明金银花提取物，主要含挥发性油、黄酮类、有机酸、三萜类及无机元素，可作为药品、保健品、化妆品的原料，主要有抑菌、舒敏、延缓衰老、防止紫外线损伤等作用。
5.苦参：为豆科植物苦参sophora flavescens ait.的干燥根。具有清热燥湿等作用，可用于湿疹，湿疮，皮肤瘙痒等疾病的治疗。研究表明苦参提取物能够抑制大鼠的炎性细胞浸润其具有明显的抗炎，减少毛细血管通透性的功能。
6.白鲜皮：为芸香科植物白鲜dictamnus dasycarpus的干燥根皮。具有清热燥湿、祛风解毒的功效，用于湿热疮毒、湿疹、风疹等症。研究表明其具有抗菌、抗炎、抗过敏、抗氧化等多种活性。
7.虎耳草：为虎耳草科植物虎耳草saxifraga stolonifera curtis，是一种多年生草本植物。虎耳草不仅具有祛风清热、凉血解毒之功效,还兼具抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等多种药用价值。研究表明虎耳草提取液在较高浓度时的抗氧化功效与维生素c相当，对酪氨酸酶活性有抑制作用。
8.目前的研究开始着眼于比较安全的传统中药领域，但很多市售抗皮肤过敏剂(特别是化妆品)的问题是，功效达不到预期目的，产品不稳定，给使用者带来很大的困扰。因此，目前存在对效果明确、安全、无不良反应的抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的中药复方组合物的强烈需求。


技术实现要素：

9.本发明通过含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草的中药复方组合物、其制备方法及其用途解决了现有技术中存在的问题。本发明提供了一种强效的抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的中药复方组合物。本发明的中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草。本发明的中药复方组合物可用于皮肤护理，特别是用于预防和缓解皮肤过敏、皮肤炎症、皮肤过敏、皮肤发红、皮肤刺激和痒痛。
10.在本发明的第一方面涉及一种中药复方组合物，所述中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草，或由丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草组成。
11.在一些实施方案中，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮0-40％、金银花0-60％、苦参0-60％、白鲜皮0-80％和/或虎耳草0-40％；或由它们组成。
12.在本发明的第二方面涉及一种中药复方组合物的制备方法，所述中药复方组合物含有第一方面中描述的各原料药及其重量百分比。
13.在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：称取原料药并粉碎，所述原料药包括丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草；将粉碎的原料药用水提取，然后用含10％-70％的c2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到提取物组合物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，即本发明的中药复方组合物。
14.在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：分别称取丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草原料药并粉碎；将粉碎的原料药分别按照下面方法提取：首先用水提取，然后用含10％-70％的c2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到各单独的原料药提取物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到各单独的原料药提取物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，再按照各单独的原料药提取物的如下重量百分比进行混合：丹皮0-40％、金银花0-60％、苦参0-60％、白鲜皮0-80％和/或虎耳草0-40％，即得本发明的中药复方组合物。
15.本发明的第三方面涉及由如在本发明第二方面所限定的制备方法获得的本发明的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物包含丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草。进一步地，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定。
16.本发明的第四方面涉及用于抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。
17.在本发明的第五方面涉及中药复方组合物在用于抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的产品中的用途。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述产品是药物制剂或化妆品。
18.在本发明的第六方面涉及一种药物制剂或化妆品，其中所述药物制剂或化妆品包含中药复方组合物，该中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草，或由
它们组成。
19.在本发明的第七方面涉及一种美容方法，其包括涂抹含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草的中药复方组合物。
附图说明
20.图1显示不同浓度的实施例3和对比例1-4的中药复方组合物对炎症因子il-8的抑制作用。
21.图2显示不同浓度的实施例3和对比例1-4的中药复方组合物对炎症因子nf-kb的抑制作用。
22.图3显示不同浓度的实施例3和对比例1-4的中药复方组合物对24h后人体皮肤发红程度变化的影响。
23.发明详述
24.定义
25.在本文中使用的术语“中药组合物”、“中药复方组合物”和“组合物”具有类似的含义，若没有特别说明，可以互换使用。在本文中术语“重量％”与“重量百分比”可以互换使用，若没有特别说明，百分比是指重量百分比。
26.在本文中使用的术语“室温”是指25℃
±
1℃。同时，若没有具体指明实验温度，均为室温。
27.在本文中使用的术语“s”、“min”和“h”分别代表“秒”、“分钟”和“小时”。
28.在本文中使用的术语“约”是指该术语所修饰的数值的
±
10％，更优选为
±
5％，最优选为
±
2％，因此本领域的普通技术人员能够清楚地根据所修饰的数值确定术语“约”的范围。
29.在本文中使用的术语“由丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草组成”是指除了所限定的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草之外，不含有其它活性成分，但是并不排除辅料、赋形剂以及载体等辅助成分。
30.在本文中使用的术语“将原料药粉碎”是指将丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草一起粉碎或者分别粉碎。
31.在本发明的第一方面涉及一种中药复方组合物，所述中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草，或由丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草组成。
32.在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物中的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草作为原料药选自如下重量百分比：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、33.3％、33.4％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％以及任意上述重量百分比之间的范围，例如，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮0-40％、金银花0-60％、苦参0-60％、白
鲜皮0-80％和/或虎耳草0-40％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮10-30％、金银花20-40％、苦参20-40％、白鲜皮20-60％、虎耳草0-20％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮10-30％、金银花20-40％、苦参20-40％、白鲜皮20-60％、虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-28％、金银花20-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-24％、金银花20-28％、苦参20-24％、白鲜皮20-28％和/或虎耳草2-6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮18-24％、金银花20-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参24-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮24-28％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草4-6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮12％、金银花32％、苦参20％、白鲜皮36％和/或虎耳草2％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮18％、金银花20％、苦参28％、白鲜皮28％和/或虎耳草6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和/或虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％和/或虎耳草8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和/或虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮18％、金银花20％、苦参28％、白鲜皮28％和虎耳草6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％和虎耳草8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和虎耳草4％；或由它们组成。
33.在本发明的第二方面涉及一种中药复方组合物的制备方法，所述中药复方组合物含有第一方面中描述的各原料药及其重量百分比。
34.在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：称取原料药并粉碎，所述原料药包括丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草；将粉碎的原料药用水提取，然后用含10％-70％的c2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到提取物组合物通过过滤进行纯化，并得到浓缩液，即本发明的中药复方组合物。
35.在一些实施方案中，本发明的中药复方组合物的制备方法包括：分别称取丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草原料药并粉碎；将粉碎的原料药分别按照下面方法提取：首
先用水提取，然后用含10％-70％的c2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到各单独的原料药提取物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括将得到各单独的原料药提取物通过过滤进行纯化，并得到各浓缩液，再按照一定重量百分比的比例将丹皮提取物、金银花提取物、苦参提取物、白鲜皮提取物和/或虎耳草提取物进行混合，即得本发明的中药复方组合物。具体地，所述一定比例为选自以下的重量百分比：1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、33.3％、33.4％、34％、35％、36％、37％、38％、39％、40％、41％、42％、43％、44％、45％、46％、47％、48％、49％、50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％和99％以及任意上述重量百分比之间的范围，例如，在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮0-40％、金银花0-60％、苦参0-60％、白鲜皮0-80％和/或虎耳草0-40％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮10-30％、金银花20-40％、苦参20-40％、白鲜皮20-60％、虎耳草0-20％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮10-30％、金银花20-40％、苦参20-40％、白鲜皮20-60％、虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-28％、金银花20-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-24％、金银花20-28％、苦参20-24％、白鲜皮20-28％和/或虎耳草2-6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮18-24％、金银花20-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参24-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮24-28％和/或虎耳草2-8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12-24％、金银花28-32％、苦参20-28％、白鲜皮20-36％和/或虎耳草4-6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮12％、金银花32％、苦参20％、白鲜皮36％和/或虎耳草2％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮18％、金银花20％、苦参28％、白鲜皮28％和/或虎耳草6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和/或虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％和/或虎耳草8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和/或虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮18％、金银花
20％、苦参28％、白鲜皮28％和虎耳草6％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和虎耳草4％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％和虎耳草8％；在本发明的中药复方组合物中，所述组合物含有如下重量百分比的原料药提取物：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％和虎耳草4％；或由它们组成。在一些实施方案中，所述各浓缩液用水调整。进一步地，所述各浓缩液用水调整至所需的量，例如，1000g。
36.在一些实施方案中，将提取物组合物通过滤膜过滤以进行纯化，并得到浓缩液。在一些实施方案中，采用5000-10000道尔顿超滤膜过滤，收取滤液。在一些实施方案中，采用100-1000道尔顿的纳米滤膜过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
37.在一些实施方案中，本发明的提取物是水和/或c2-6醇提取物，提取用溶剂为水、c2-6醇或其组合。在一些实施方案中，所述c2-6醇为乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合，优选为丙二醇和乙醇。在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用10％-70％的c2-6醇的水溶液的提取，将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在进一步优选的实施方案中，先将粉碎的原料药用水提取物，然后用10％-50％的c2-6醇的水溶液提取，将两种提取液相混合，得到提取物组合物。
38.在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用10％-70％的丙二醇和/或乙醇的水溶液提取，再将两种提取物相混合，得到提取物组合物。在一些实施方案中，将原料药粉碎，先用水提取，然后用10％-50％的丙二醇和/或乙醇的水溶液提取，再将两种提取物相混合，得到提取物组合物。
39.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10-20目的粗粉，加入5-10倍的水进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液a1。残渣加2-10倍的乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。在一些实施方案中，将提取物组合物通过滤膜过滤以进行纯化，并得到浓缩液。在一些实施方案中，采用5000-10000道尔顿超滤膜过滤，收取滤液。在一些实施方案中，采用100-1000道尔顿的纳米滤膜过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
40.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10-20目的粗粉，加入5-10倍的水进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液a1；将残渣加2-10倍的乙醇、丙醇、丙二醇、正丁醇或其组合进行提取，提取温度为50-90℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。在一些实施方案中，所述原料药粉碎成10目或20目的粗粉。在一些实施方案中，加入5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或它们之间的倍数范围的水进行提取，提取温度为50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或它们之间的温度范围，获得提取液a1。在一些实施方案中，将残渣加2倍、3倍、4倍或它们之间的倍数范围的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1)进行提取，提取温度为50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、80℃、90℃或它们之间的温度范围，获得提取液a2。在一些实施方案中，所述乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)为10％-70％的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)。在一些实施方案中，所述乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)为10％、20％、30％、40％、50％或它们之间范围的乙醇或丙二醇或乙醇和丙二醇的混合物(按1:1体积百分比)。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整至1000g，即的表示浓度为
100％的提取液。
41.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；将残渣加入约3倍的约40％丙二醇进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
42.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；将残渣加入约3倍的约40％乙醇进行提取，提取温度约65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
43.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的10％乙醇 40％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
44.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
45.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍40％丙二醇溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
46.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍的40％乙醇溶剂进行提取，提取温度65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
47.在一些实施方案中，所述方法包括取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；将残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液。
48.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；将残渣加入约3倍的约40％丙二醇进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a2，合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮12％、金银花32％、苦参20％、白鲜皮36％、虎耳草2％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
49.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；将残渣加入约3倍的约40％乙醇进行提取，提取温度约65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮18％、金银花20％、苦参28％、白鲜皮28％、虎耳草6％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
50.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的10％乙醇 40％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
51.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％、虎耳草8％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
52.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别取原料药粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍40％丙二醇溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
53.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别取原料药粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍的40％乙醇溶剂进行提取，提取温度65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
54.在一些实施方案中，所述方法包括分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草，分别粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；将残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到各原料药提取物浓缩液，再按照一定重量百分比的比例进行组合，得到本发明的中药复方组合物。所述各提取物的一定比例为如下重量百分比：丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％。在一些实施方案中，所述浓缩液用水调整。进一步地，所述浓缩液用水调整至1000g。
55.本发明的第三方面涉及由如在本发明第二方面所限定的制备方法获得的本发明的中药复方组合物。在一些实施方案，通过所述方法获得的中药复方组合物具有抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的作用。在一些实施方案中，过敏、炎症、发红、瘙痒、刺激是由炎症因子引起的。在一些实施方案中，所述炎症因子是il-8和nf-kb。在
一些实施方案中，所述中药复方组合物包含丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草。进一步地，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定。
56.本发明的第四方面涉及用于抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的中药复方组合物。在一些实施方案中，过敏、炎症、发红、瘙痒、刺激是由炎症因子引起的。在一些实施方案中，所述炎症因子是il-8和nf-kb。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。
57.在本发明的第五方面涉及中药复方组合物在用于抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的产品中的用途。在一些实施方案中，过敏、炎症、发红、瘙痒、刺激是由炎症因子引起的。在一些实施方案中，所述炎症因子是il-8和nf-kb。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述产品是药物制剂或化妆品。
58.在本发明的第六方面涉及一种药物制剂或化妆品，其中所述药物制剂或化妆品包含中药复方组合物，该中药复方组合物含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草，或由它们组成。在一些实施方案，所述药物制剂或化妆品具有抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的作用。在一些实施方案中，过敏、炎症、发红、瘙痒、刺激是由炎症因子引起的。在一些实施方案中，所述炎症因子是il-8和nf-kb。在一些实施方案中，药物制剂或化妆品包含中药复方组合物作为活性成分以及一种或多种美容学或药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在一些实施方案中，所述药物制剂或化妆品是霜剂、乳液、糊剂、软膏剂、面膜、凝胶剂、洗剂或精华液。在一些实施方案中，本发明的药物制剂或化妆品还可以含有一种或多种其它成分，如植物提取物、营养性添加剂、表面活性剂、香精与香料、色素、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、紫外线吸收剂、收敛剂、助渗剂、ph值调节剂等。本领域技术人员可以根据他们的常识和具体需要进行选择。在一些实施方案中，在药物制剂或化妆品中，所述中药复方组合物按重量计占所述药物制剂或化妆品重量的约0.1-20％、优选2-15％，更优选5-10％。
59.在本发明的第七方面涉及一种美容方法，其包括涂抹含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草的中药复方组合物。在一些实施方案，所述美容方法具有抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的作用。在一些实施方案中，过敏、炎症、发红、瘙痒、刺激是由炎症因子引起的。在一些实施方案中，所述炎症因子是il-8和nf-kb。在一些实施方案中，本发明涉及一种美容方法，其包括涂抹包含所述中药复方组合物的药物制剂或化妆品。在一些实施方案中，所述中药复方组合物如在本发明的第一方面所限定的。在一些实施方案中，所述中药复方组合物是如在本发明的第三方面所限定的制备方法获得的中药复方组合物。在一些实施方案中，所述药物制剂或化妆品如在本发明的第六方面所限定的。
60.本发明的有益效果如下：
61.根据本发明的含有丹皮、金银花、苦参、白鲜皮和/或虎耳草的中药复方组合物以及含有所述组合物的药物制剂或化妆品具有预料不到的技术效果，特别是具有强效的抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的作用，本发明的含有五种原料药的提取物与含有四种原料药提取物相比对皮肤的有益效果显著提高，具有更好的协同作用。
62.可选择的，也可以对单个原料药分别进行提取获得提取物，然后将得到的提取物合并，从而得到本发明的提取物组合物。可以采用已知的提取方法对原料药进行提取，但优选的，采用本发明说明书所述的方法进行提取。通过本发明方法制备的产品具有强效的抗过敏、抗炎、舒缓发红程度、止痒、抗刺激和/或修复皮肤的作用，更加稳定、安全、无副作用。
具体实施方式
63.本发明可通过以下实施方案进行实施，但本发明并不限于此。
64.本发明实施方案中涉及的百分比如无明确指示均为重量百分比。
65.本发明实施方案中采用的仪器设备均为本领域常规仪器设备并可采用符合相应标准的仪器设备替代。
66.本发明实施方案中采用的试剂如无明确指示均为市售分析纯试剂。
67.本发明所提及的原材料及仪器设备均为本领域常用原材料及仪器设备，仅为示例，并不旨在限定本发明的保护范围。本领域技术人员可以基于本发明的公开的内容选取等效的原材料及相关仪器设备。
68.1、中药复方组合物的制备
69.实施例1
70.取原料药1000g，其中丹皮12％、金银花32％、苦参20％、白鲜皮36％、虎耳草2％，粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；将残渣加入约3倍的约40％丙二醇进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a2；合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
71.实施例2
72.取原料药1000g，其中丹皮18％、金银花20％、苦参28％、白鲜皮28％、虎耳草6％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍的约40％乙醇进行提取，提取温度约65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
73.实施例3
74.取原料药1000g，其中丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的10％乙醇 40％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
75.实施例4
76.取原料药1000g，其中丹皮28％、金银花20％、苦参24％、白鲜皮20％、虎耳草8％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
77.实施例5
78.取原料药1000g，其中丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％，
粉碎成10目粗粉，加入约6倍的水进行提取，提取温度约60℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍40％丙二醇溶剂进行提取，提取温度70℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
79.实施例6
80.取原料药1000g，其中丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约80℃，获得提取液a1；残渣加入约3倍的40％乙醇溶剂进行提取，提取温度65℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
81.实施例7
82.取原料药1000g，其中丹皮24％、金银花28％、苦参20％、白鲜皮24％、虎耳草4％，粉碎成20目粗粉，加入约5倍的水进行提取，提取温度约70℃，获得提取液a1；残渣加入约4倍的40％乙醇 10％丙二醇的1:1的混合溶剂进行提取，提取温度55℃，获得提取液a2。合并提取液a1和a2，混合后过滤，回收溶剂，得到浓缩液，用水调整至1000g，即得标示浓度为100％的提取液。
83.实施例8
84.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例1方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例1的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
85.实施例9
86.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例2方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例2的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
87.实施例10
88.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例3方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例3的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
89.实施例11
90.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例4方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例4的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
91.实施例12
92.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例5方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例5的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
93.实施例13
94.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例6方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例6的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
95.实施例14
96.分别取原料药丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草1000g，分别参照实施例7方法进行提取，最终得到标示浓度为100％的丹皮、金银花、苦参、白鲜皮、虎耳草提取液各1000g，再按照实施例7的比例进行组合，最终得到复合的标示浓度为100％的提取液。
97.对比实施例1
98.取原料药1000g，其中金银花26％、苦参26％、白鲜皮36％、虎耳草12％、采用与实施例3类似的方法进行提取。
99.对比实施例2
100.取原料药1000g，其中丹皮26％、苦参28％、白鲜皮38％、虎耳草8％、采用与实施例3类似的方法进行提取。
101.对比实施例3
102.取原料药1000g，其中丹皮26％、金银花30％、白鲜皮34％、虎耳草10％、采用与实施例3类似的方法进行提取。
103.对比实施例4
104.取原料药1000g，其中丹皮28％、金银花32％、苦参28％、虎耳草12％、采用与实施例3类似的方法进行提取。
105.2、在体功效测试对比
106.试剂来源：十二烷基硫酸钠(adamas)、氢化可的松乳膏(湖南迪诺制药有限公司)、右旋糖酐(adamas)、二甲苯(greagent)
107.试剂配制：
108.5％(w/w)的各实施例待测样品：取实施例1-4制备的标示浓度为100％的提取液5g，加入到95g生理盐水中，制得5％(w/w)的各实施例待测样品。
109.5％(w/w)的各对比实施例待测样品：取对比实施例1-4制备的标示浓度为100％的提取液5g，加入到95g生理盐水中，制得5％(w/w)的各对比实施例待测样品。
110.(1)抗敏测试实验(豚鼠刺激性)
111.以5％十二烷基硫酸钠为模型组，以氢化可的松乳膏(规格：100g/10mg)作为阳性对照组，剂量为0.1g/只。以生理盐水作为阴性对照样品(阴性对照造模组)，实验样品组为5％(w/w)的各实施例或对比实施例的待测样品，剂量为0.5g/只。将实验组、阳性对照组、阴性对照组的样品分别与5％十二烷基硫酸钠混合，按《化妆品安全技术规范》2015年版多次皮肤刺激试验方法进行涂抹和观察统计，p490-491，每组6只豚鼠，雌雄各半。观察涂抹部位的红肿状态。红肿为4-5分，轻微红肿为1-3分，无变化为0分。
112.(2)抗敏测试实验(右旋糖酐法)
113.体重18～22g健康小鼠，雌雄各半，按性别体重随机分组，每组10只。用1％硫化钠将动物背毛脱掉，脱毛皮肤区面积为1.5cm
×
1.5cm，2天后用于实验。各组动物背部脱毛区分别局部涂抹待测样品(1g/kg)。以氢化可的松乳膏(规格：100g/10mg)作为阳性对照组，剂量为0.1g/只。以生理盐水作为阴性对照样品(阴性对照造模组)，实验样品组为5％(w/w)的实施例或对比实施例制备的提取物。连续5天，于末次施用后30min，各小鼠尾静脉注射右旋糖酐0.95mg/kg。以小鼠前爪搔头部、后爪搔躯干、嘴咬全身各部位作为瘙痒指征，记录30分钟内小鼠瘙痒次数。
114.瘙痒抑制率＝(阴性对照组瘙痒次数-样品组瘙痒次数)
÷
阴性对照组瘙痒次数*
100％。
115.(3)抗炎测试实验(二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验)
116.体重18～22g健康小鼠，雌雄各半，按性别体重随机分组，每组10只。在小鼠右耳涂相应各组待测样品，0.2g/只，每天一次，连续3天。以氢化可的松乳膏(规格：100g/10mg)作为阳性对照组，剂量为0.1g/只。以生理盐水作为阴性对照样品(阴性对照造模组)，实验样品组为5％(w/w)的实施例或对比实施例制备的提取物。末次施用后30min，在小鼠右耳的前后两面涂100％二甲苯致炎液0.02ml/只，左耳不作任何处理，4小时后处死动物，立即剪下双耳，用8mm打孔器取相同部位耳片，在分析天平上称重，以右耳片重量减去左耳片重量为肿胀度，以(右耳重-左耳重)/左耳重
×
100％为耳肿胀率。
117.实验结果
118.表1抗敏抗炎测试结果
119.[0120][0121]
从上表结果可以看出，本发明要求保护的含有特定组分的中药复方组合物在抗过敏、抗炎、止痒、抗刺激和/或修复皮肤方面具有协同作用。
[0122]
3、体外功效测试对比
[0123]
(1)抗炎测试实验(对炎症因子il-8的抑制作用研究)
[0124]
n-hacat细胞，dmem培养液(sigma)，血清，培养箱(赛默飞)，荧光酶标仪(美谷md)，il-8检测试剂盒(sigma)，细胞裂解液，dpbs(dulbecco磷酸盐缓冲溶液)，胰酶(sigma)，96孔板。
[0125]
待测样品
[0126]
实施例3的待测样品：样品浓度0.05％、0.1％、0.5％(v/v)。取实施例3制备的标示浓度为100％的提取液适量，加入dmem培养液中，配得上述体积浓度样品。
[0127]
对比实施例1-4与待测样品的配制方法相同。样品浓度均为0.05％、0.1％、0.5％。
[0128]
试剂：表没食子儿茶素没食子酸酯(egcg，50um)，tnf-α(10ng/ml)。
[0129]
实验方法
[0130]
自培养箱取出培养的n-hacat细胞，经消化离心，制成悬浊液，调整细胞密度为1*105个/ml至5*105个/ml，每孔135μl，接种96孔板，继续培养12-24h。培养完毕后向孔板中加入预先配好的各个浓度的待测样品(实施例3提取物、对比实施例1-4提取物、egcg，以dpbs作为阴性对照)15μl，继续培养12-24h后，向孔板中每孔加入tnf-α16.5μl(对照组每孔加入16.5μl dpbs)。继续培养12-24h，培养完毕后收集培养液，采用il-8检测试剂盒(购自sigma)，按试剂盒说明书进行操作，放入荧光酶标仪于od450nm处读值。
[0131]
实验结果
[0132]
实验结果表明，实施例3提取物以及对比实施例1-4提取物对炎症因子il-8的释放均有一定程度的抑制作用。随着浓度升高，实施例3对炎症因子il-8的释放表现出更显著的抑制作用p《0.001，并呈剂量依赖性。但是，对比实施例组对炎症因子il-8的释放并没有表现出显著的抑制作用。具体实验数据请参见图1。
[0133]
(2)抗炎测试实验(对炎症因子nf-kb的抑制作用研究)
[0134]
实验试剂及器材
[0135]
n-hacat细胞，dmem培养液(sigma)，血清，培养箱(赛默飞)，荧光酶标仪(美谷md)，荧光素酶检测试剂盒(购自上海易英生物技术有限公司)，细胞裂解液(得自荧光素酶检测试剂盒)，dpbs(dulbecco磷酸盐缓冲溶液)，胰酶(sigma)，96孔板。
[0136]
待测样品
[0137]
实施例3的待测样品：样品浓度0.05％、0.1％、0.5％(v/v)。取实施例3制备的标示浓度为100％的提取液适量，加入dmem培养液中，配得上述体积浓度的待测样品。
[0138]
对比实施例1-4与待测样品的配制方法相同。样品浓度均为0.05％、0.1％、0.5％。
[0139]
实验方法
[0140]
自培养箱取出培养的n-hacat细胞，经消化离心，制成悬浊液，调整细胞密度为1*105个/ml至5*105个/ml，每孔135μl，接种96孔板，继续培养12-24h。培养完毕后向孔板中加入预先配好的各个浓度的待测样品(实施例3混合提取物、对比实施例1-4提取物、egcg，以dpbs作为阴性对照)15μl，继续培养12-24h后，向孔板中每孔加入tnf-α16.5μl(对照组每孔加入16.5μl dpbs)。继续培养12-24h，培养完毕后向孔板中每孔加入裂解液100μl(得自荧光素酶检测试剂盒，参见试剂盒使用说明书)，按照荧光素酶检测试剂盒(得自上海易英生物技术有限公司)说明书进行操作，放入荧光酶标仪lum模式读值。
[0141]
实验结果
[0142]
实验结果表明，实施例3提取物以及对比实施例1-4提取物对炎症因子nf-kb的表达均有一定程度的抑制作用。随着浓度升高，实施例3对炎症因子nf-kb的表达呈现出更显著的抑制作用p《0.001，并呈剂量依赖性。但是，对比实施例组对炎症因子nf-kb的表达并没有呈现出显著的抑制作用。具体实验数据请参见图2。
[0143]
4、人体功效测试实验
[0144]
测试目的
[0145]
通过封闭式斑贴致红模型评估实施例3溶液的舒缓发红的能力，并对比同浓度下对比实施例1-4的舒缓功效，旨在证明实施例3的复方组分的协同功效。
[0146]
材料与方法
[0147]
受试者19-60岁身体健康中国人,符合《化妆品安全技术规范2015版》，人体皮肤斑贴试验中“5.受试者的选择”，p541。
[0148]
测试样品
[0149]
致红造模药：十二烷基磺酸钠(sigma)
[0150]
斑室器：finn chamber 8mm
[0151]
实施例3的待测样品：如在体功效测试对比中试剂配制所述，取实施例3制备的标示浓度为100％的提取液适量，加入到空白乳液中，配得所需重量浓度的待测样品，即5％(w/w)。
[0152]
对比实施例1-4的待测样品的配制方法与之相同。
[0153]
实验方法
[0154]
受试者由工作人员对背部测试区域进行肌肤筛选(bl)。选择无影响评估因素的肌肤区域进行斑贴。在每个斑室器小孔中加入致红造模药，即十二烷基磺酸钠。并贴敷于背部24小时。为了防止斑试器的脱落，四周可用医用胶带固定。
[0155]
24小时后揭去致红造模药，由临床皮肤科医生根据《化妆品安全技术规范2015版》人体皮肤斑贴试验中“6.方法”中的“表1皮肤封闭型斑贴实验皮肤反应分级标准”进行评估(致红后-t0.5)。样品分为6组：空白对照(水)组、5％的实施例3、5％对比实施例1-4。不同斑室器小室对应添加等量的样品，并贴敷于致红区域24小时后揭去，由临床皮肤科医生再次进行评估(舒缓后-t24)。
[0156]
实验结果
[0157]
有效完成32位受试者致红模型建立及6组样品的舒缓发红程度功效性评估，结果表明：
[0158]
实施例3待测样品处理后皮肤的发红评估数值显著降低，且存在显著性差异(p＜0.05)，表示实施例3待测样品对皮肤发红的症状有明显缓解作用。对比实施例1-4舒缓前后发红数值无明显差异(p＞0.05)，表明对比实施例提取物在这些浓度下对皮肤发红症状没有缓解作用。
[0159]
空白对照(水)在作用前后发红数值变化不明显，表明作为样品稀释剂的水不存在舒缓发红程度的效果。综上所述，5％的实施例3溶液能够显著舒缓皮肤的发红症状，但在同样浓度下的对比实施例提取物作用不明显，表明本发明要求保护的含有特定组分的中药复方组合物在舒缓发红程度方面具有协同作用。具体实验数据请参见图3。