一种分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法与流程

1.本发明涉及药物分析和药物制剂领域，具体涉及一种分离纯化盐酸西那卡塞中间体杂质xnks-02-p
′
的方法。


背景技术：

2.中文名称：西那卡塞；中文别名：n-((1r)-1-(1-萘基)乙基)-3-(3-(三氟甲基)苯基)丙-1-胺；
3.英文名称：cinacalcet；英文别名：n-((1r)-1-(1-naphthyl)ethyl)-3-(3-(trifluoromethyl)phenyl)propan-1-amine；cinacalcel；n-[(1r)-1-(naphthalen-1-yl)ethyl]-3-[3-(trifluoromethyl)phenyl]propan-1-aminehydrochloride(1:1)；n-[(1r)-1-(naphthalen-1-yl)ethyl]-3-[3-(trifluoromethyl)phenyl]propan-1-amine
[0004]
cas：226256-56-0；
[0005]
分子式：c
22h22
f3n；
[0006]
结构式：
[0007][0008]
分子量：357.412；精确质量：357.17000；psa：12.03000；logp：6.53290。
[0009]
西那卡塞中间体杂质(xnks-02-p
′
)化学结构式具体如下：
[0010][0011]
盐酸西那卡塞是一种新型口服拟钙剂，由美国nps pharmaceuticals公司研发的拟钙剂，2004年3月8日fda批准amgen公司(nps制药公司该产品的许可权受让人)生产的盐酸西那卡塞上市，商品名为sensipar；2007年10月，麒麟制药公司生产的盐酸西那卡塞在日本上市，商品名为regpara，规格为25mg、75mg(以西那卡塞计)。
[0012]
西那卡塞能激活甲状旁腺中的钙受体，从而降低甲状旁腺素(pth)的分泌。用于治疗进行透析的慢性肾病(ckd)患者的继发性甲状旁腺功能亢进症(shpt)，继发性甲状旁腺功能亢进的特点是甲状旁腺素浓度升高，后者与钙、磷代谢改变以及痛、骨折和心血管原因死亡有关，西那卡塞能改变导致骨痛、骨折和心血管原因死亡的钙代谢和磷代谢，通过减少病人体内的甲状旁腺素分泌，降低血清钙、血清磷的浓度；副甲状腺癌能引起血清钙浓度显著升高，从而导致病人精神混乱、嗜睡、脱水、恶心、呕吐、便秘以及肾损害，该药治疗副甲状腺癌的作用相似，也是降低异常高的血清钙浓度。
[0013]
2018年，西那卡塞在美国的销售额为14.3亿美元。盐酸西那卡塞是目前唯一在中
国上市的拟钙剂，于2015年2月在中国上市，并被批准用于治疗“维持性透析患者的shpt”，随着专利过期，国内企业纷纷加速仿制药上市步伐。因此研究其杂质的分离方法对产品的提纯具有重要的意义。


技术实现要素：

[0014]
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，该方法对此杂质进行分离、制备、分析、纯化、冻干，得到高浓度的杂质对照品，从而实现对西那卡塞中间体的纯度监控。
[0015]
为了实现上述目标，本发明采用西那卡塞中间体杂质的hplc检测方法，具体的的技术方案如下：
[0016]
本发明的意义在于：通过制备液相色谱、分析液相色谱、冷冻干燥等技术，对此种杂质进行分离、纯化、冻干，对于西那卡塞的质量控制具有重要意义。
[0017]
本发明是一种分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，包括如下步骤：
[0018]
(1)西那卡塞中间体杂质品预处理得到西那卡塞中间体杂质水溶液；
[0019]
(2)制备色谱分离纯化，以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，进行第一次hplc纯化，收集西那卡塞中间体杂质洗脱液，去除绝大多数西那卡塞中间体片段杂质；
[0020]
(3)除去溶剂，得到西那卡塞中间体杂质第一步样品溶液；采用液相分析色谱仪，分析样品溶液纯度及其他杂质的存在情况；
[0021]
(4)以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，进行第二次hplc纯化，去除与其理化性能相近的杂质；
[0022]
(5)除去溶剂，得到西那卡塞中间体杂质样品溶液，通过冷冻干燥机进行冻干，得到西那卡塞中间体杂质。
[0023]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(1)中所述预处理的步骤为：将西那卡塞中间体杂质粗品溶于乙腈水溶液中，用0.45μm滤膜过滤除去不溶性颗粒，收集滤液，得到西那卡塞中间体杂质水溶液，备用。
[0024]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(2)第一次分离纯化的色谱条件为：
[0025]
仪器：lc6000-dac50；
[0026]
色谱柱：kromasil c4 10μm；
[0027]
固定相：纳微unisil反硅胶色谱填料；
[0028]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0029]
检测波长：210nm；
[0030]
流速：50ml/min；
[0031]
洗脱梯度：20-70(v/v)。
[0032]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(5)第二次分离纯化的色谱条件为：
[0033]
仪器：lc6000-dac50；
[0034]
色谱柱：kromasil c4 10μm；
[0035]
固定相：纳微unisil反硅胶色谱填料；
[0036]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0037]
检测波长：210nm；
[0038]
流速：50ml/min；
[0039]
洗脱梯度：30-65(v/v)。
[0040]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(3)所述的分析液相的条件为：
[0041]
仪器：戴安u3000；
[0042]
色谱柱：spursil c18 250
×
4.6mm；
[0043]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0044]
检测波长：210nm；
[0045]
检测温度：40℃；
[0046]
流速：1ml/min；
[0047]
洗脱梯度：35-70(v/v)。
[0048]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(3)和(5)，去除溶剂的方法是：用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。
[0049]
本发明所述的分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，其优选的技术方案是，步骤(5)冻干条件为-80℃，0.01mpa。
[0050]
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
[0051]
本发明方法经过两次hplc纯化，第一次得到的样品纯度达92％，第二次得到的样品纯度为99％，提高了西那卡塞中间体杂质的纯度和收率。
附图说明
[0052]
图1是本发明实施例1西那卡塞中间体杂质粗品的hplc图；
[0053]
图2是本发明实施例1第一次hplc纯化后西那卡塞中间体杂质的hplc图；
[0054]
图3是本发明实施例1第二次hplc纯化后西那卡塞中间体杂质的hplc图。
具体实施方式
[0055]
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
[0056]
一种纯化西那卡塞中间体杂质的方法，西那卡塞中间体杂质粗品采用常识方法制得，纯化西那卡塞中间体杂质的方法包括如下步骤：
[0057]
步骤1)西那卡塞中间体杂质粗品预处理得到西那卡塞中间体杂质水溶液；
[0058]
步骤2)制备色谱分离纯化，以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，进行第一次hplc纯化，收集西那卡塞中间体杂质洗脱液，去除绝大多数西那卡塞中间体片段杂质；
[0059]
步骤3)除去溶剂，得到西那卡塞中间体杂质第一步样品溶液；
[0060]
步骤4)采用液相分析色谱仪，分析样品溶液纯度及其他杂质的存在情况；
[0061]
步骤5)以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，以0.1％tfa为流动相a，100％乙
腈为流动相b，进行第二次hplc纯化，去除与其理化性能相近的杂质；
[0062]
步骤6)除去溶剂，得到西那卡塞中间体杂质样品溶液，通过冷冻干燥机进行冻干，得到此种杂质，并且低温保存。
[0063]
所述的制备液相的条件为：
[0064]
第一次分离纯化
[0065]
仪器：lc6000-dac50；
[0066]
色谱柱：kromasil c4 10μm；
[0067]
固定相：纳微unisil反硅胶色谱填料；
[0068]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0069]
检测波长：210nm；
[0070]
流速：50ml/min；
[0071]
洗脱梯度：20-70(v/v)；
[0072]
第二次分离纯化
[0073]
仪器：lc6000-dac50；
[0074]
色谱柱：kromasil c4 10μm；
[0075]
固定相：纳微unisil反硅胶色谱填料；
[0076]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0077]
检测波长：210nm；
[0078]
流速：50ml/min；
[0079]
洗脱梯度：30-65(v/v)；
[0080]
分析液相的条件为：
[0081]
仪器：lc6000-dac50；
[0082]
色谱柱：spursil c18 250*4.6mm；
[0083]
流动相：以0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b；
[0084]
检测波长：210nm；
[0085]
检测温度：40℃；
[0086]
流速：1ml/min；
[0087]
洗脱梯度：35-70(v/v)；
[0088]
制备液相色谱条件
[0089]
我们通过对制备柱型号、流动相组合及配比、ph值、流速等进行了优化，得到了以下分离条件。
[0090]
第一次分离制备液相条件：kromasil c4 10μm，0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，20-70(v/v)梯度洗脱，检测波长：210nm，流速50ml/min；
[0091]
第二次分离制备液相条件：kromasil c4 10μm，0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，30-65(v/v)梯度洗脱，检测波长：210nm，流速50ml/min；
[0092]
分析液相条件为：spursil c18 250*4.6mm，0.1％tfa为流动相a，100％乙腈为流动相b，35-70(v/v)梯度洗脱，检测波长：210nm，检测温度：40℃，流速：1ml/min；
[0093]
冷冻干燥：将纯化后的组分，先进行预冷，随后放在-80℃以及0.01mpa压力下的冷冻干燥机进行冻干，产品低温保存。
[0094]
本发明通过制备液相色谱、分析液相色谱、冷冻干燥等技术，对此种杂质进行分离、纯化、冻干，对于西那卡塞的质量控制具有重要意义。
[0095]
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
[0096]
为了证明本发明的纯化方法，能够去除杂质，得到纯度高，收率高的西那卡塞中间体杂质成品，用含3g、8g、16g西那卡塞中间体杂质粗肽样品用本方法做纯化实验，实验过程如下所示：
[0097]
实施例1,
[0098]
取西那卡塞中间体杂质粗品，其hplc图参照图1；
[0099]
样品处理：将含3g西那卡塞中间体杂质(粗品：4.6g)样品溶于乙腈水溶液，完全溶解后用0.45μm滤膜过滤。收集过滤后的西那卡塞中间体杂质粗品水溶液备用。
[0100]
第一步hplc纯化
[0101]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；上样量为4.6g。以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0102][0103]
收取纯度大于92％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。得到第一步西那卡塞中间体杂质样品溶液。其hplc图参照图2；
[0104]
第二步hplc纯化
[0105]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；上样量为3.8g。
[0106]
以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0107][0108]
收取纯度大于99％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。溶液经对照品定量含西那卡塞中间体杂质
2.20g，收率达73.3％。其hplc图参照图3。
[0109]
实施例2
[0110]
取西那卡塞中间体杂质粗品
[0111]
样品处理：将含8g西那卡塞中间体杂质(粗品：12.2g)样品溶于乙腈水溶液，完全溶解后用0.45μm滤膜过滤。收集过滤后的粗品水溶液备用。
[0112]
第一步hplc纯化
[0113]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；单次上样量为6.1g。
[0114]
以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0115][0116]
收取纯度大于92％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。得到第一步西那卡塞中间体杂质样品溶液。
[0117]
第二步hplc纯化
[0118]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；单次上样量为4.8g。
[0119]
以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0120][0121]
收取纯度大于99％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。溶液经对照品定量含西那卡塞中间体杂质5.65g，收率达70.6％。
[0122]
实施例3
[0123]
取西那卡塞中间体杂质粗品
[0124]
样品处理：将含16g西那卡塞中间体杂质(粗品：24.4g)样品溶于乙腈水溶液，完全溶解后用0.45μm滤膜过滤。收集过滤后的西那卡塞中间体杂质粗品水溶液备用。
[0125]
第一步hplc纯化
[0126]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；单次上样量为6.1g。
[0127]
以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0128][0129]
收取纯度大于92％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。得到第一步西那卡塞中间体杂质样品溶液。
[0130]
第二步hplc纯化
[0131]
色谱条件：以纳微unisil反硅胶色谱填料为固定相，kromasil c4 10μm的色谱柱；以0.1％tfa(取1000ml水，加1mltfa，混合均匀)为流动相a；以乙腈为流动相b；流速为50ml/min；检测波长为210nm；单次上样量为5.0g。
[0132]
以下表洗脱梯度进行洗脱。
[0133][0134]
收取纯度大于99％的西那卡塞中间体杂质样品的馏分。用旋转蒸发器水浴温度在30℃，真空度在-0.09mpa以下除去部分乙腈。溶液经对照品定量含西那卡塞中间体杂质11.6g，收率达72.5％。
[0135] 含索玛鲁肽样品/g纯化后的索玛鲁肽的质量/g收率纯度实施例132.2073.3％大于99.0％实施例285.6570.6％大于99.0％实施例31611.672.5％大于99.0％
[0136]
经常规的方法进行确认，以上3个实施例所得的中间体杂质为西那卡塞中间体杂质(xnks-02-p
′
)，化学结构式具体如下：
[0137][0138]
由3个实施例可知，通过本发明方法分离纯化西那卡塞中间体杂质粗品，得到的西那卡塞中间体杂质的纯度大于99.0％。
[0139]
本发明提供一种分离纯化西那卡塞中间体杂质的方法，本发明经过两次hplc纯化，第一次得到的样品纯度达71.35％，第二次得到的样品纯度为99.41％，提高了西那卡塞中间体杂质的纯度和收率。