分离、检测和分析胎儿细胞的组合物和方法与流程

技术特征：
1.一种用于检测来自怀孕受试者的样品中的胎儿细胞的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与第一抗体接触，其中所述样品包含多个细胞；(b)分离结合至所述第一抗体的细胞以产生富集样品；(c)使所述富集样品与第二抗体接触；以及(d)将结合至所述第二抗体的细胞鉴定为胎儿细胞，其中所述第一抗体或所述第二抗体：(i)是与髓系细胞触发受体样转录因子2(treml2)蛋白结合的抗体；或者(ii)包含与treml2蛋白结合的抗原结合片段。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述胎儿细胞是胎儿有核红细胞(fnrbc)。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述第一抗体与一个或多个磁性颗粒缀合。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其中步骤(b)包括使所述样品经受磁场。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)偶联，所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。8.根据权利要求7所述的方法，其中步骤(a)包括添加第二eaef以诱导所述磁性颗粒的聚集，所述第二eaef包含所述特异性结合对的另一成员。9.根据权利要求8所述的方法，其中步骤(b)包括向所述富集样品中添加所述特异性结合对的成员以逆转所述富集样品中所述磁性颗粒的聚集。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，向所述样品中添加至少一种选自还原剂、免疫复合物、螯合剂和二氨基丁烷的聚集抑制剂。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述聚集抑制剂是螯合剂，其为edta。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二抗体是与treml2蛋白结合的抗体或包含与treml2蛋白结合的抗原结合片段。13.根据权利要求12所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(d)之前，分离单个胎儿细胞。14.根据权利要求13所述的方法，其中通过分离结合至所述第二抗体的单个胎儿细胞来分离单个胎儿细胞。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述第二抗体与标记缀合。16.根据权利要求15所述的方法，其中所述标记是荧光标记。17.根据权利要求16所述的方法，其中分离单个胎儿细胞是基于免疫荧光技术。18.根据权利要求17所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离单个胎儿细胞。19.根据权利要求17所述的方法，其中通过deparray分离单个细胞。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(d)包括进行测序分析。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述测序分析包含短串联重复(str)分析。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法进一步包括分析所述胎儿细胞。23.根据权利要求22所述的方法，其中分析所述胎儿细胞包括进行基因组或遗传分析。24.根据权利要求23所述的方法，其中进行遗传分析包括检测所述胎儿细胞中一种或多种遗传异常的存在或不存在。25.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一抗体是与treml2蛋白结合的抗体或包含与treml2蛋白结合的抗原结合片段。26.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中与treml2蛋白结合的所述抗体或与treml2蛋白结合的抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(i)包含seq id no:6的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)互补决定区(cdr)1；(ii)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(iii)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(iv)包含seq id no:9的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)cdr1；(v)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(vi)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。27.一种用于检测来自怀孕受试者的样品中的胎儿细胞的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与磁性试剂接触，其中所述样品包含多个细胞，其中所述磁性试剂包含与第一抗体缀合的磁性颗粒，并且其中所述第一抗体与选自epcam、cd105和cd71的蛋白质结合；(b)使所述样品与抗treml2抗体或其抗原结合片段接触；以及(c)将结合至所述抗treml2抗体的细胞鉴定为胎儿细胞。28.根据权利要求27所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(c)之前，分离结合至所述第一抗体的细胞。29.根据权利要求或28所述的方法，其中分离细胞包括使所述样品经受磁场以使所述样品富集结合至所述第一抗体的细胞。30.根据权利要求27-29中任一项所述的方法，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。32.根据权利要求27-31中任一项所述的方法，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)进一步偶联，所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。33.根据权利要求32所述的方法，所述方法包括在步骤(a)期间添加第二eaef以诱导所述颗粒的聚集，其中所述第二eaef包含所述特异性结合对的另一成员。34.根据权利要求33所述的方法，所述方法进一步包括向所述富集样品中添加所述特异性结合对的成员以逆转所述样品的聚集，从而促进所述细胞的鉴定。35.根据权利要求27-34中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，向所述样品中添加至少一种选自还原剂、免疫复合物、螯合剂、二氨基丁烷的聚集抑制剂。36.根据权利要求35所述的方法，其中所述聚集抑制剂是螯合剂。37.根据权利要求36所述的方法，其中所述螯合剂是edta。
rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。56.根据权利要求54所述的试剂盒，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的互补决定区(cdr)：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。57.根据权利要求56所述的试剂盒，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。58.根据权利要求54-57中任一项所述的试剂盒，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段与标记缀合以产生缀合的抗体。59.根据权利要求58所述的试剂盒，其中所述标记选自藻红蛋白(pe)、别藻蓝蛋白(apc)、辣根过氧化物酶(hrp)和生物素。60.根据权利要求54-59中任一项所述的试剂盒，其中所述胶体磁性颗粒的尺寸小于200nm。61.根据权利要求54-60中任一项所述的试剂盒，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体颗粒。62.根据权利要求54-61中任一项所述的试剂盒，其中所述胶体磁性颗粒与抗体或其抗原结合片段缀合。63.根据权利要求62所述的试剂盒，其中所述抗体是抗treml2抗体。64.根据权利要求63所述的试剂盒，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。65.根据权利要求65所述的试剂盒，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。66.根据权利要求54-65中任一项所述的试剂盒，其进一步包含选自还原剂、免疫复合物、螯合剂、二氨基丁烷的抑制剂。67.根据权利要求66所述的试剂盒，其中所述螯合剂是edta。68.根据权利要求54-67中任一项所述的试剂盒，其进一步包含外源性聚集增强因子(eaef)，其中所述eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨
基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。69.一种试剂盒，其包含(a)能够与胎儿细胞表面上表达的蛋白质结合的第一抗体，其中所述第一抗体结合至胶体磁性颗粒；和(b)抗treml2抗体或其抗原结合片段。70.根据权利要求65所述的试剂盒，其中所述第一抗体与选自epcam、cd105和cd71的蛋白质结合。71.根据权利要求69或27所述的试剂盒，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体颗粒。72.根据权利要求69-71中任一项所述的试剂盒，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。73.根据权利要求72所述的试剂盒，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。74.根据权利要求69-73中任一项所述的试剂盒，其进一步包含选自还原剂、免疫复合物、螯合剂、二氨基丁烷的抑制剂。75.根据权利要求74所述的试剂盒，其中所述螯合剂是edta。76.根据权利要求69-75中任一项所述的试剂盒，其进一步包含外源性聚集增强因子(eaef)，其中所述eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。77.一种用于基于细胞的胎儿遗传测试的方法，所述方法包括：(a)使获自怀孕受试者的样品与抗treml2抗体或其抗原结合片段接触，其中所述样品包含多个细胞；(b)分离结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的细胞；(c)分析来自结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的所述细胞的一种或多种核酸分子；以及(d)基于对所述一种或多种核酸分子的分析生成报告，其中所述报告提供胎儿具有一种或多种遗传异常的可能性。78.根据权利要求77所述的方法，其中结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的所述细胞是胎儿细胞。79.根据权利要求78所述的方法，其中所述胎儿细胞是胎儿成红细胞。80.根据权利要求78所述的方法，其中所述胎儿细胞是胎儿滋养层细胞。81.根据权利要求77-80中任一项所述的方法，其中分析所述一种或多种核酸分子包括进行核型分析。82.根据权利要求77-80中任一项所述的方法，其中分析所述一种或多种核酸分子包括
进行测序分析。83.根据权利要求82所述的方法，其中所述测序分析包含短串联重复(str)分析。84.根据权利要求77-83中任一项所述的方法，其中所述一种或多种遗传异常选自三体性、性染色体异常和结构异常。85.根据权利要求84所述的方法，其中所述三体性选自3三体、4三体、6三体、7三体、8三体、9三体、10三体、11三体、12三体、13三体、16三体、17三体、18三体、20三体、21三体和22三体。86.根据权利要求85所述的方法，其中所述性染色体异常选自x单体、x三体和克兰费尔特综合征。87.根据权利要求86所述的方法，其中所述结构异常是拷贝数变异(cnv)。88.根据权利要求87所述的方法，其中所述结构异常是cnv的缺失或cnv的重复。89.根据权利要求77-88中任一项所述的方法，其中所述抗treml2抗体与磁性颗粒缀合。90.根据权利要求89所述的方法，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。91.根据权利要求90所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。92.根据权利要求89-91中任一项所述的方法，其中步骤(b)包括使所述样品经受磁场。93.根据权利要求77-88中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，使所述样品与第一抗体接触，其中所述第一抗体与选自epcam、cd105和cd71的蛋白质结合。94.根据权利要求93所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，分离结合至所述第一抗体的细胞。95.根据权利要求93或94所述的方法，其中所述第一抗体与磁性颗粒缀合。96.根据权利要求95所述的方法，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。97.根据权利要求96所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。98.根据权利要求95-97中任一项所述的方法，其中分离结合至所述第一抗体的细胞包括使所述样品经受磁场。99.根据权利要求77-88和93-98中任一项所述的方法，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段与标记缀合。100.根据权利要求99所述的方法，其中所述标记是荧光标记。101.根据权利要求100所述的方法，其中分离结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的细胞是基于免疫荧光技术。102.根据权利要求101所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的细胞。103.根据权利要求101所述的方法，其中通过deparray分离结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的细胞。104.根据权利要求77-92中任一项所述的方法，所述方法进一步包括使结合至所述抗treml2抗体或其抗原结合片段的所述细胞与第二抗体或其抗原结合片段接触。105.根据权利要求104所述的方法，其中所述第二抗体是抗treml2抗体或其抗原结合片段。106.根据权利要求104或105所述的方法，其中所述第二抗体与标记缀合。
107.根据权利要求106所述的方法，其中所述标记是荧光标记。108.根据权利要求107所述的方法，所述方法进一步包括分离结合至所述第二抗体或其抗原结合片段的细胞。109.根据权利要求108所述的方法，其中分离结合至所述第二抗体或其抗原结合片段的细胞是基于免疫荧光技术。110.根据权利要求109所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离结合至所述第二抗体或其抗原结合片段的细胞。111.根据权利要求109所述的方法，其中通过deparray分离结合至所述第二抗体或其抗原结合片段的细胞。112.根据权利要求77-111中任一项所述的方法，其中所述抗treml2抗体选自sc-109096、arp49877_p050、oaca04996、af3259、ma5-30973、pa5-47471、abin634968、abin928294、30-552、abin2463297、abin19999041、11655-r001、abin749888、bs-2737r、abin1999045、11655-rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。113.根据权利要求77-111中任一项所述的方法，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。114.根据权利要求113所述的方法，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。115.一种用于检测来自怀孕受试者的样品中的胎儿细胞的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与第一抗体接触，其中所述样品包含多个细胞，并且其中所述第一抗体与髓系细胞触发受体样转录因子2(treml2)蛋白(抗treml2抗体)或其抗原结合片段结合；以及(b)将结合至所述第一抗体的细胞鉴定为胎儿细胞。116.根据权利要求115所述的方法，其中所述胎儿细胞是胎儿有核红细胞(fnrbc)。117.根据权利要求115或116所述的方法，其中所述第一抗体与一个或多个磁性颗粒缀合。118.根据权利要求117所述的方法，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。119.根据权利要求118所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。120.根据权利要求117-119中任一项所述的方法，所述方法进一步包括使所述样品经受磁场。121.根据权利要求117-120中任一项所述的方法，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)偶联，其中所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合
物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。122.根据权利要求121所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(b)之前，添加第二eaef以诱导所述磁性颗粒的聚集，其中所述第二eaef包含所述特异性结合对的另一成员。123.根据权利要求122所述的方法，所述方法进一步包括分离结合至所述第一抗体的细胞以产生富集样品。124.根据权利要求123所述的方法，所述方法进一步包括向所述富集样品中添加第三eaef以逆转所述富集样品中所述磁性颗粒的聚集，其中所述第三eaef能够与所述第一eaef或所述第二eaef结合。125.根据权利要求124所述的方法，其中所述第三eaef是所述特异性结合对的成员。126.根据权利要求115-125中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，向所述样品中添加至少一种选自还原剂、免疫复合物、螯合剂和二氨基丁烷的聚集抑制剂。127.根据权利要求126所述的方法，其中所述聚集抑制剂是螯合剂。128.根据权利要求127所述的方法，其中所述螯合剂是edta。129.根据权利要求115或116所述的方法，其中所述第一抗体与标记缀合。130.根据权利要求129所述的方法，其中所述标记是荧光标记。131.根据权利要求130所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(b)之前，分离结合至所述第一抗体的细胞，其中分离细胞是基于免疫荧光技术。132.根据权利要求131所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离结合至所述第一抗体的细胞。133.根据权利要求131所述的方法，其中通过deparray分离结合至所述第一抗体的细胞。134.根据权利要求115-133中任一项所述的方法，其中步骤(b)包括进行测序分析。135.根据权利要求134所述的方法，其中所述测序分析包含短串联重复(str)分析。136.根据权利要求115-135中任一项所述的方法，所述方法进一步包括分析所述胎儿细胞。137.根据权利要求136所述的方法，其中分析所述胎儿细胞包括进行基因组或遗传分析。138.根据权利要求137所述的方法，其中进行遗传分析包括检测所述胎儿细胞中一种或多种遗传异常的存在或不存在。139.根据权利要求115-138中任一项所述的方法，其中所述第一抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。
140.根据权利要求139所述的方法，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。141.根据权利要求115-138中任一项所述的方法，其中所述第一抗体选自sc-109096、arp49877_p050、oaca04996、af3259、ma5-30973、pa5-47471、abin634968、abin928294、30-552、abin2463297、abin19999041、11655-r001、abin749888、bs-2737r、abin1999045、11655-rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。142.一种抗treml2抗体或其抗原结合片段，所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。143.根据权利要求142所述的抗treml2抗体，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。144.根据权利要求142或143所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的两个或更多个cdr。145.根据权利要求142或143所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的三个或更多个cdr。146.根据权利要求142或143所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的四个或更多个cdr。147.根据权利要求142或143所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的五个或更多个cdr。148.根据权利要求142或143所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含(a)-(f)中的所有cdr。149.根据权利要求142-148中任一项所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段与标记缀合。150.根据权利要求149所述的抗treml2抗体，其中所述标记是荧光标记。151.根据权利要求142-148中任一项所述的抗treml2抗体，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段与磁性颗粒缀合。152.根据权利要求151所述的抗treml2抗体，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。153.根据权利要求152所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。154.根据权利要求152或153所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒小于200nm。155.根据权利要求152或153所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒在约80至200nm之间。156.根据权利要求152或153所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒在约90至
150nm之间。157.根据权利要求152-156中任一项所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒具有至少50％的磁质量。158.根据权利要求157所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒具有至少60％的磁质量。159.根据权利要求157所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒具有在70％至90％之间的磁质量。160.根据权利要求152-159中任一项所述的抗treml2抗体，其中所述胶体磁性颗粒包含被包衣分子包围的超顺磁性材料的结晶核。161.根据权利要求151-160中任一项所述的抗treml2抗体，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)偶联，其中所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。162.一种抗treml2抗体缀合物，其包含(a)抗treml2抗体或其抗原结合片段；和(b)磁性颗粒，其中所述磁性颗粒与所述抗treml2抗体缀合。163.根据权利要求155所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述磁性颗粒是胶体磁性颗粒。164.根据权利要求156所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。165.根据权利要求163或164所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒小于200nm。166.根据权利要求163或164所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒在约80至200nm之间。167.根据权利要求163或164所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒在约90至150nm之间。168.根据权利要求163-167中任一项所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒具有至少50％的磁质量。169.根据权利要求168所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒具有至少60％的磁质量。170.根据权利要求169所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒具有在70％至90％之间的磁质量。171.根据权利要求163-170中任一项所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述胶体磁性颗粒包含被包衣分子包围的超顺磁性材料的结晶核。172.根据权利要求162-171中任一项所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)偶联，其中所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。
173.根据权利要求162-171中任一项所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(a)包含seq id no:6的氨基酸序列的hcvr cdr1；(b)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(c)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(d)包含seq id no:9的氨基酸序列的lcvr cdr1；(e)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(f)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。174.根据权利要求173所述的抗treml2抗体缀合物，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。175.根据权利要求173或174所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的两个或更多个cdr。176.根据权利要求173或174所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的三个或更多个cdr。177.根据权利要求173或174所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的四个或更多个cdr。178.根据权利要求173或174所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含选自(a)-(f)的五个或更多个cdr。179.根据权利要求173或174所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体或其抗原结合片段包含(a)-(f)中的所有cdr。180.根据权利要求162-171中任一项所述的抗treml2抗体缀合物，其中所述抗treml2抗体选自sc-109096、arp49877_p050、oaca04996、af3259、ma5-30973、pa5-47471、abin634968、abin928294、30-552、abin2463297、abin19999041、11655-r001、abin749888、bs-2737r、abin1999045、11655-rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。181.一种从获自怀孕受试者的母体样品制备胎儿细胞样品的方法，所述方法包括：(a)使包含胎儿细胞和母体细胞的所述母体样品与第一抗体缀合物接触，其中所述第一抗体缀合物包含(i)第一抗体；和(ii)胶体磁性颗粒，其中所述第一抗体与所述胶体磁性颗粒缀合；以及(b)通过使所述母体样品经受磁场来分离结合至所述第一抗体缀合物的细胞，从而制备胎儿细胞样品。182.根据权利要求181所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒小于200nm。183.根据权利要求181所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约80至200nm之间。184.根据权利要求181所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约90至150nm之间。185.根据权利要求181-184中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少50％的磁质量。186.根据权利要求185所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少60％的磁质量。187.根据权利要求185所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有在70％至90％之间的磁质量。
188.根据权利要求181-187中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒包含被包衣分子包围的超顺磁性材料的结晶核。189.根据权利要求181-188中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。190.根据权利要求181-189中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)进一步缀合，其中所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。191.根据权利要求190所述的方法，所述方法进一步包括向所述母体样品中添加第二eaef，其中所述第二eaef包含所述特异性结合对的另一成员。192.根据权利要求181-191中任一项所述的方法，其中所述第一抗体是抗treml2抗体。193.根据权利要求181-191中任一项所述的方法，其中所述第一抗体是抗cd71抗体。194.根据权利要求181-191中任一项所述的方法，其中所述第一抗体与选自epcam和cd105的蛋白质结合。195.根据权利要求194所述的方法，其中制备所述胎儿细胞样品进一步包括使分离自所述母体样品的所述细胞与第二抗体接触。196.根据权利要求195所述的方法，其中所述第二抗体与标记缀合。197.根据权利要求196所述的方法，其中所述标记是荧光标记。198.根据权利要求197所述的方法，其中制备所述胎儿细胞样品进一步包括分离结合至所述第二抗体的细胞。199.根据权利要求198所述的方法，其中分离结合至所述第二抗体的细胞是基于免疫荧光技术。200.根据权利要求199所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离结合至所述第二抗体的细胞。201.根据权利要求199所述的方法，其中通过deparray分离结合至所述第二抗体的细胞。202.根据权利要求26所述的方法，其中与treml2蛋白结合的所述抗体或与treml2蛋白结合的抗原结合片段包含选自(i)-(vi)的2、3、4、5或6个cdr。203.根据权利要求26所述的方法，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。204.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒小于200nm。205.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约80至200nm之间。206.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约90至150nm之间。207.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少50％的磁质量。
208.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少60％的磁质量。209.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有在70％至90％之间的磁质量。210.根据权利要求4、5、30、31、90、91、96、97、118和119中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒包含被包衣分子包围的超顺磁性材料的结晶核。211.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述抗treml2抗体选自sc-109096、arp49877_p050、oaca04996、af3259、ma5-30973、pa5-47471、abin634968、abin928294、30-552、abin2463297、abin19999041、11655-r001、abin749888、bs-2737r、abin1999045、11655-rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。212.一种用于检测来自怀孕受试者的样品中的胎儿细胞的方法，所述方法包括：(a)使所述样品与第一抗体缀合物接触，其中所述样品包含多个细胞，并且其中所述第一抗体包含与胶体磁性颗粒缀合的第一抗体；(b)通过使所述样品经受磁场来分离结合至所述第一抗体的细胞，从而产生富集样品；(c)使所述富集样品与第二抗体接触，其中所述第二抗体与胎儿细胞表面上的标记物结合；以及(d)将结合至所述第二抗体的细胞鉴定为胎儿细胞。213.根据权利要求212所述的方法，其中所述胎儿细胞是胎儿有核红细胞(fnrbc)。214.根据权利要求212或213所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒是铁磁流体磁性颗粒。215.根据权利要求212-214中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒小于200nm。216.根据权利要求212-214中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约80至200nm之间。217.根据权利要求212-214中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒在约90至150nm之间。218.根据权利要求212-217中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少50％的磁质量。219.根据权利要求212-217中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有至少60％的磁质量。220.根据权利要求212-217中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒具有在70％至90％之间的磁质量。221.根据权利要求212-220中任一项所述的方法，其中所述胶体磁性颗粒包含被包衣分子包围的超顺磁性材料的结晶核。222.根据权利要求212-221中任一项所述的方法，其中所述磁性颗粒与第一外源性聚集增强因子(eaef)偶联，所述第一eaef包含选自以下的特异性结合对的一个成员：生物素-链霉亲和素、抗原-抗体、受体-激素、受体-配体、激动剂-拮抗剂、凝集素-碳水化合物、蛋白a-抗体fc、和亲和素-生物素、生物素类似物-亲和素、脱硫生物素-链霉亲和素、脱硫生物素-亲和素、亚氨基生物素-链霉亲和素以及亚氨基生物素-亲和素。
223.根据权利要求222所述的方法，其中步骤(a)包括添加第二eaef以诱导所述磁性颗粒的聚集，所述第二eaef包含所述特异性结合对的另一成员。224.根据权利要求223所述的方法，其中步骤(b)包括向所述富集样品中添加所述特异性结合对的成员以逆转所述富集样品中所述磁性颗粒的聚集。225.根据权利要求212-224中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(a)之前，向所述样品中添加至少一种选自还原剂、免疫复合物、螯合剂和二氨基丁烷的聚集抑制剂。226.根据权利要求225所述的方法，其中所述聚集抑制剂是螯合剂。227.根据权利要求226所述的方法，其中所述螯合剂是edta。228.根据权利要求212-227中任一项所述的方法，其中所述第二抗体是与treml2蛋白结合的抗体或包含与treml2蛋白结合的抗原结合片段。229.根据权利要求228所述的方法，所述方法进一步包括，在步骤(d)之前，分离单个胎儿细胞。230.根据权利要求229所述的方法，其中通过分离结合至所述第二抗体的单个胎儿细胞来分离单个胎儿细胞。231.根据权利要求230所述的方法，其中所述第二抗体与标记缀合。232.根据权利要求231所述的方法，其中所述标记是荧光标记。233.根据权利要求232所述的方法，其中分离单个胎儿细胞是基于免疫荧光技术。234.根据权利要求233所述的方法，其中通过荧光激活细胞分选(facs)分离单个胎儿细胞。235.根据权利要求233所述的方法，其中通过deparray分离单个细胞。236.根据权利要求212-233中任一项所述的方法，其中步骤(d)包括进行测序分析。237.根据权利要求236所述的方法，其中所述测序分析包含短串联重复(str)分析。238.根据权利要求212-237中任一项所述的方法，所述方法进一步包括分析所述胎儿细胞。239.根据权利要求238所述的方法，其中分析所述胎儿细胞包括进行基因组或遗传分析。240.根据权利要求239所述的方法，其中进行遗传分析包括检测所述胎儿细胞中一种或多种遗传异常的存在或不存在。241.根据权利要求212-240中任一项所述的方法，其中所述第一抗体是与treml2蛋白结合的抗体或包含与treml2蛋白结合的抗原结合片段。242.根据权利要求228-235和241中任一项所述的方法，其中与treml2蛋白结合的所述抗体或与treml2蛋白结合的抗原结合片段包含一个或多个选自以下的cdr：(i)包含seq id no:6的氨基酸序列的重链可变区(hcvr)互补决定区(cdr)1；(ii)包含seq id no:7的氨基酸序列的hcvr cdr2；(iii)包含seq id no:8的氨基酸序列的hcvr cdr3；(iv)包含seq id no:9的氨基酸序列的轻链可变区(lcvr)cdr1；(v)包含seq id no:10的氨基酸序列的lcvr cdr2；和(vi)包含seq id no:11的氨基酸序列的lcvr cdr3。
243.根据权利要求242所述的方法，其中与treml2蛋白结合的所述抗体或与treml2蛋白结合的抗原结合片段包含选自(i)-(vi)的2、3、4、5或6个cdr。244.根据权利要求242或243所述的方法，其中seq id no:6-11中的任一个独立地包含一个或多个氨基酸取代、添加或缺失。245.根据权利要求228-235和241中任一项所述的方法，其中与treml2蛋白结合的所述抗体选自sc-109096、arp49877_p050、oaca04996、af3259、ma5-30973、pa5-47471、abin634968、abin928294、30-552、abin2463297、abin19999041、11655-r001、abin749888、bs-2737r、abin1999045、11655-rp02、abin293207、abin2387613、t8282-40、abin4249314、nbp1-70737-20ul和bd563661。

技术总结
提供了用于分离、检测和分析胎儿细胞的组合物、试剂盒和方法。本文还提供了用于制备胎儿细胞样品和用于进行胎儿遗传测试的方法。所述组合物、试剂盒和方法能够包含或使用抗TREML2抗体。可替代地或另外地，所述组合物、试剂盒和方法包含或使用与胶体磁性颗粒和/或外源性聚集增强因子缀合的抗体。源性聚集增强因子缀合的抗体。源性聚集增强因子缀合的抗体。


技术研发人员：P
受保护的技术使用者：美纳里尼生物标记新加坡有限公司
技术研发日：2020.07.14
技术公布日：2022/5/5