一种叔丁基对苯二酚标准溶液配制方法与流程

1.本发明属于食品检测标准物质的制备领域，具体涉及一种叔丁基对苯二酚标准溶液的配制方法。


背景技术：

2.叔丁基对苯二酚为脂溶性抗氧化剂，我国《gb 2760-2011食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定：叔丁基对苯二酚可用于脂肪、油和乳化脂肪制品、基本不含水的脂肪和油、熟制坚果与籽类、坚果与籽类罐头、油炸面制品、方便米面制品、月饼、饼干、焙烤食品馅料及表面用挂浆、腌腊肉制品类、风干、烘干、压干等水产品、膨化食品，其最大使用量为0.2g/kg(以油脂中的含量计)。
3.《gb 5009.32-2016食品安全国家标准食品中9种抗氧化剂的测定》、《sn/t 1050-2014出口油脂中抗氧化剂的测定高效液相色谱法》、《sn/t 3849-2014出口食品中多种抗氧化剂的测定》等多个国家标准均涉及到包括叔丁基对苯二酚在内的多种食品中抗氧化剂的测定。在检测中均需要用到叔丁基对苯二酚标准溶液，但因其易氧化的性质，导致叔丁基对苯二酚标准溶液配制出来极易被氧化。标准储备液浓度降低会导致检测样品的浓度偏高，进而影响检测结果。
4.因此，寻找一种稳定的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备对于食品中抗氧化剂含量的准确检测具有重要意义。


技术实现要素：

5.为了解决现有技术中叔丁基对苯二酚标准溶液的不稳定问题，本发明提供一种叔丁基对苯二酚标准溶液的配制方法。在配制叔丁基对苯二酚标准溶液过程中，做到避光避氧，且加入β-疏基乙醇，以提高叔丁基对苯二酚标准溶液的稳定性，使得配制的叔丁基对苯二酚标准溶液的浓度值更接近理论值，延长标准溶液的有效期。
6.为解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：
7.叔丁基对苯二酚标准溶液的配制方法，该方法包括以下步骤：
8.1)在溶剂中通入氮气除氧得到除氧溶剂；
9.2)在暗室钠灯环境下，在手套箱内用高精度电子天平称取所需的叔丁基对苯二酚和β-疏基乙醇，质量精确至0.00001g；其中所需的标准物质叔丁基对苯二酚的质量和溶剂的体积是根据确定叔丁基对苯二酚标准溶液的浓度c0和体积v0计算后得到的；
10.3)将步骤2)称取的叔丁基对苯二酚和β-疏基乙醇用步骤1)得到的除氧溶剂完全溶解，恒温后定容得叔丁基对苯二酚标准溶液；
11.4)测定步骤3)得到的叔丁基对苯二酚标准溶液的浓度值，平行测定三次后取浓度的平均值c1，且将介于测量不确定度范围内的c1作为叔丁基对苯二酚标准溶液的检测浓度；
12.5)将步骤3)得到的叔丁基对苯二酚标准溶液在手套箱中灌装于玻璃安瓿瓶中，取出后迅速熔封。
13.进一步，如上所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备方法，步骤1)中所述溶剂为甲醇、乙醇或乙腈，这三种溶剂在国标中均有使用，且不与叔丁基对苯二酚发生反应。
14.进一步，如上所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备方法，步骤1)中，在溶剂中通入氮气除氧，通入氮气时间为30-40min。
15.进一步，如上所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备方法，步骤2)所述的β-疏基乙醇称样量为叔丁基对苯二酚的5％-15％。
16.进一步，如上所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备方法，步骤4)所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的浓度值采用高效液相色谱仪-二极管阵列检测器定性和定量检测。
17.进一步，如上所述的叔丁基对苯二酚标准溶液的制备方法，步骤4)所述测量不确定范围为0.98c
0-1.02c0。
18.采用上述技术方案后，本发明的有益效果在于：通过本发明所述方法制备的叔丁基对苯二酚标准溶液，使用除氧溶剂，配制时避氧避光，并加入β-疏基乙醇大大提高了产品的稳定性，使得产品浓度更接近理论值，检测结果更准确、可靠。
附图说明
19.图1为叔丁基对苯二酚标准溶液制备方法的流程图
20.图2为乙腈中叔丁基对苯二酚的高效液相色谱图
21.图3为乙腈中叔丁基对苯二酚标准溶液运输稳定性趋势图
具体实施方式
22.下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是对本发明的解释，决不作为对本发明及其应用或使用的任何限制。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
23.本发明实验过程如下：
24.首先，根据指令要求的叔丁基对苯二酚标准溶液的溶剂、体积和浓度信息，选择对应足够使用量的溶剂、叔丁基对苯二酚和β-疏基乙醇，并要求所有原料必须拥有有效的原料证书证明其可溯源性。然后准备相应的容量瓶、烧杯、胶头滴管、称量舟、称量勺等称量用具。
25.所用溶剂通氮气除氧后使用得到除氧溶剂。
26.根据浓度值和配制体积计算出所需原料的用量，在手套箱中完成标准溶液的配制。
27.在手套箱中，将标准溶液分装到安瓿瓶中，安瓿瓶从手套箱中取出后迅速熔封。
28.下面结合具体的实施例对本发明进行进一步的说明。
29.实施例1
30.下面以乙腈中叔丁基对苯二酚，浓度为1000μg/ml的标准溶液对本发明进行详细的说明。
31.(1)溶液配制：首先，将所用的乙腈溶剂，使用氮吹仪进行通入氮气除氧30min。将除氧乙腈、叔丁基对苯二酚原料、β-疏基乙腈原料及准备好的称量工具，一起转移进入手套
箱中。在手套箱中，先称量5mg左右β-疏基乙腈，加入100ml容量瓶中，用除氧乙腈充分溶解。再称量100mg叔丁基对苯二酚，加入容量瓶用除氧乙腈充分溶解。待容量瓶温度稳定至室温后用除氧乙腈定容至100ml将所述标准溶液灌装于2ml玻璃安瓿瓶中，用封口膜封住安瓿瓶口。将安瓿瓶从手套箱内转移出来，迅速熔封，得到乙腈中叔丁基对苯二酚标准溶液。
32.(2)浓度检测：对配制得到的乙腈中叔丁基对苯二酚标准溶液采用高效液相色谱仪-二极管阵列检测器定性和定量检测。
33.检测参数为：
34.检测器：dad检测器，色谱柱：c18，流动相：a 0.1％甲酸水溶液、b乙腈，检测波长：294nm。
35.乙腈中叔丁基对苯二酚样品经三次检测，测试结果如表1所示：
36.表1乙腈中叔丁基对苯二酚样品浓度测定值
[0037][0038]
根据检测浓度平均值c1为1007.02μg/ml，浓度值为1000μg/ml的标准溶液的不确定度范围为980μg/ml～1020μg/ml，该平均值在测量不确定度范围内，满足实验要求。
[0039]
均匀性检验
[0040]
根据jjf1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》，当样品分装单元数≤200支时，抽取单元数不少于11支。抽样规则采用：取分装首、末各1支、中间过程随机抽取9支，共11支，使用经确认的液相色谱法进行分析，每支测定3次。
[0041]
本次研制的溶液标准物质的均匀性检验采用单因素方差分析法。均匀性检验结果如表2所示。
[0042]
表2标准溶液的均匀性检验结果
[0043][0044]
结论：均匀性检验结果表明：组内和组间方差无显著性差异，f(10,22)》f，从而可以判定该标准物质是均匀的。
[0045]
稳定性检验
[0046]
根据jjf1343-2012《标准物质定值的通用原则及统计学原理》，本研究中采用的是经典稳定性评估方案。
[0047]
稳定性检验采用液相色谱法进行分析。
[0048]
运输稳定性检验：溶液在50℃条件下，保存12天，在不同的时间内(0，1，3，5，7，12天)每天随机取样1支，重复测定3次，取平均值作为监测结果。以浓度对时间顺序作趋势图，通过斜率来判断是否稳定。表3为运输稳定性检验结果。
[0049]
表3标准溶液的运输稳定性检验结果
[0050][0051]
结论：由趋势图和通过t-检验法可知，斜率不显著，结果随机分布，未见明显单一方向上升或下降趋势，说明该标准物质在50℃条件下可稳定保存12天，在运输过程中能够保持量值稳定。
[0052]
实施例2
[0053]
乙醇中叔丁基对苯二酚标准溶液的制备：在乙醇溶剂中通入氮气40min，钠灯下，手套箱内配制标准溶液。称取7.5mg左右β-疏基乙醇，充分溶解于除氧乙醇中，再准确称取50mg叔丁基对苯二酚纯品，充分溶解于除氧乙醇中。待容量瓶冷却至室温后定容至50ml，充分摇匀，分装于2ml安瓿瓶中，并在安瓿瓶口用封口膜封口。从手套箱中取出分装好的安瓿瓶，匀速熔封，得到浓度为1000μg/ml的乙醇中叔丁基对苯二酚标准溶液。
[0054]
实施例3
[0055]
甲醇中叔丁基对苯二酚标准溶液的制备：在甲醇溶剂中通入氮气40min，钠灯下，手套箱内配制标准溶液。称取1mg左右β-疏基甲醇，充分溶解于除氧甲醇中，再准确称取10mg叔丁基对苯二酚纯品，充分溶解于除氧甲醇中。待容量瓶冷却至室温后定容至100ml，充分摇匀，分装于2ml安瓿瓶中，并在安瓿瓶口用封口膜封口。从手套箱中取出分装好的安瓿瓶，匀速熔封，得到浓度为100μg/ml的甲醇中叔丁基对苯二酚标准溶液。
[0056]
本发明通过避光避氧且加入β-疏基乙醇的方式来配制叔丁基对苯二酚标准溶液，可以有效避免叔丁基对苯二酚被氧化而导致的稳定性差问题，提高叔丁基对苯二酚检测的准确性。
[0057]
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。