一种基于肝癌四项联合检测的早期诊断试剂盒及应用的制作方法

技术特征：
1.一种用于肝癌诊断的联合检测试剂盒，其特征在于，包含针对所述的肿瘤标志物：醛酮还原酶1b10、甲胎蛋白、甲胎蛋白异质体和异常凝血酶原在受试者样本中的浓度的检测试剂。2.如权利要求1中所述试剂盒，其特征在于，用于肝癌或高危人群的早期筛查、诊断、疗效判断、预后评估或复发监测。3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，其包括分别包装的第一试剂是检测akr1b10所需的试剂组分；第二试剂是检测afp所需的试剂组分；第三试剂是分离afp-l3所需的试剂组分；和第四试剂是检测dcp所需的试剂组分;以及分别容纳不同浓度的akr1b10、afp和dcp抗原的校准品与质控品。4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于：所述第一试剂是生物素标记akr1b10抗体和吖啶酯标记akr1b10抗体；第二试剂是生物素标记afp抗体和吖啶酯标记afp抗体；第三试剂是用于分离afp-l3蛋白的lca磁珠、清洗液和洗脱液；第四试剂是生物素标记dcp抗体和吖啶酯标记dcp抗体。5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：第一试剂为生物素标记兔抗akr1b10多克隆抗体和吖啶酯标记的鼠抗akr1b10单克隆抗体；第二试剂为生物素标记兔抗afp多克隆抗体和吖啶酯标记的鼠抗afp单克隆抗体；第四试剂生物素标记兔抗dcp多克隆抗体和吖啶酯标记的鼠抗dcp单克隆抗体。6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述生物素标记akr1b10、afp和dcp抗体，是分别将鼠抗akr1b10单克隆抗体、鼠抗afp单克隆抗体和鼠抗cdp单克隆抗体与生物素耦联制备而成；所述吖啶酯标记akr1b10、afp和dcp抗体，是分别将鼠抗akr1b10单克隆抗体、鼠抗afp单克隆抗体和鼠抗cdp单克隆抗体与吖啶酯耦联制备而成；所述用于分离afp-l3蛋白的lca磁珠，是用凝集素耦联nhs磁珠制备而成。7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述清洗液由tris-hcl、pbs或nahco3制备而成的溶液，优选的清洗液是：50mm tris
•
hcl（ph7.5
±
0.1）；所述洗脱液tris-hcl、pbs、蔗糖、葡聚糖或d-甘露糖苷制备而成的溶液，优选的洗脱液是：0.2m pbs，ph7.0
±
0.1，5m d-甘露糖苷。8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述清洗液是：50mm tris
•
hcl，ph7.5
±
0.1；所述洗脱液是：0.2m pbs，ph7.0
±
0.1，5m d-甘露糖苷。9.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述不同浓度akr1b10、afp和dcp抗原的校准品与质控品，包括：akr1b10校准品cal1 300pg/ml，cal2 6000 pg/ml；akr1b10质控品qc1 330 pg/ml，qc2 1800 pg/ml；afp校准品cal1 15ng/ml，cal2 180 ng/ml；afp质控品qc1 10ng/ml，qc2 100ng/ml；dcp校准品cal1 200mau/ml，cal2 8000mau /ml；dcp质控品qc1 150mau /ml，qc2 4500mau /ml；缓冲液为0.1m pbs（ph7.0
±
0.1），1% bsa，0.05%tween 20，0.05% proclin300。10.根据权利要求1至9任一项所述的试剂盒，其特征在于，受试者样本选自血清、尿液、乳汁、肠液、大便或组织样本。

技术总结
本发明属于免疫检测技术领域，公开了一种基于四项肝癌肿瘤标志物：醛酮还原酶1B10（AKR1B10）、异常凝血酶原（DCP）、甲胎蛋白（AFP）和甲胎蛋白异质体（AFP-L3）的联合检测试剂盒。所述试剂盒包括：链酶亲和素磁珠；生物素标记AKR1B10、DCP、AFP抗体；吖啶酯标记AKR1B10、DCP和AFP抗体；LCA磁珠、清洗液和洗脱液；AKR1B10、DCP和AFP校准品与质控品。通过同时检测受试者血清中四种肿瘤标志物的含量，分析判断所述受试者潜在发展为肝癌的风险。本项发明采用四项肿瘤标志物联合检测来提高肝癌早期诊断的灵敏度、特异性，为肝癌的临床诊断提供更加可靠的依据。的依据。


技术研发人员：曹哲 祝跃球
受保护的技术使用者：湖南莱拓福生物科技有限公司
技术研发日：2021.09.23
技术公布日：2022/4/29