改善的负载MRNA的脂质纳米颗粒和其制备方法与流程

技术特征：
1.一种用于向有需要的受试者递送mrna的脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种peg修饰的脂质和一种或多种包封所述mrna的辅助脂质，其中所述一种或多种辅助脂质包括1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(depe)。2.如权利要求1所述的脂质纳米颗粒，其中与具有相同脂质组分和量的第二脂质纳米颗粒中的相同mrna的表达相比，向所述受试者施用所述脂质纳米颗粒导致所述mrna的表达增强，不同之处在于所述第二脂质纳米颗粒包含不同的一种或多种辅助脂质并且不包含depe。3.如权利要求2所述的脂质纳米颗粒，其中所述不同的一种或多种辅助脂质包括二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dlope)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(pope)和/或其组合。4.如权利要求2或3所述的脂质纳米颗粒，其中表达相对于所述第二脂质纳米颗粒增强至少两倍。5.如任一项前述权利要求所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒中的所述depe以10摩尔％至50摩尔％的浓度存在。6.如任一项前述权利要求所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包含一至四条各自具有c
10-c
16
长度的烷基链。7.如权利要求1至5中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种阳离子脂质是包含四条脂族链的类脂质。8.如权利要求7所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包括下式的阳离子脂质：或其药学上可接受的盐；其中每个r1和r2独立地是h或c
1-c6脂族；每个m独立地是具有1至4的值的整数；每个a独立地是共价键或亚芳基；每个l1独立地是酯、硫酯、二硫键或酸酐基团；每个l2独立地是c
2-c
10
脂族；每个x1独立地是h或oh；并且每个r3独立地是c
6-c
20
脂族。9.如权利要求8所述的脂质纳米颗粒，其中每个r3独立地是c
8-c
16
脂族。10.如任一项前述权利要求所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种peg修饰的脂质包含长度为最多5kda的聚乙二醇链，所述聚乙二醇链共价连接至具有长度为c
6-c
20
的烷基链的脂质。11.如任一项前述权利要求所述的脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒还包含一种或多种固醇。12.如权利要求11所述的脂质纳米颗粒，其中所述一种或多种固醇包括基于胆固醇的脂质。
13.如权利要求12所述的脂质纳米颗粒，其中所述基于胆固醇的脂质是胆固醇和/或peg化的胆固醇。14.如任一项前述权利要求所述的脂质纳米颗粒，其中所述mrna是编码在体内翻译为治疗性蛋白质或肽的蛋白质的mrna。15.如权利要求14所述的脂质纳米颗粒，其中编码所述蛋白质或肽的所述mrna被全身递送，并且在施用后24小时或更长时间在肝脏或血清中可检测到所翻译的蛋白质或肽。16.如权利要求15所述的脂质纳米颗粒，其中所述多肽是治疗性多肽。17.如权利要求16所述的脂质纳米颗粒，其中所述治疗性多肽是(a)抗体轻链或抗体重链，或(b)所述受试者中不存在或缺乏的多肽。18.如权利要求14所述的脂质纳米颗粒，其中编码蛋白质的所述mrna编码肽。19.如权利要求18所述的脂质纳米颗粒，其中所述肽是抗原。20.一种用于向有需要的受试者递送mrna的方法，所述方法包括向所述受试者施用脂质纳米颗粒，所述脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种peg修饰的脂质和一种或多种包封所述mrna的辅助脂质，其中所述一种或多种辅助脂质包括1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(depe)。21.如权利要求20所述的方法，其中与具有相同脂质组分和量的第二脂质纳米颗粒中的相同mrna的表达相比，向所述受试者施用所述脂质纳米颗粒导致所述mrna的表达增强，不同之处在于所述第二脂质纳米颗粒包含不同的一种或多种辅助脂质并且不包含depe。22.如权利要求21所述的方法，其中所述不同的一种或多种辅助脂质包括二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dlope)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(pope)和/或其组合。23.如权利要求21或22所述的脂质纳米颗粒，其中表达相对于所述第二脂质纳米颗粒增强至少两倍。24.如权利要求20至23中任一项所述的脂质纳米颗粒，其中所述脂质纳米颗粒中的所述depe以10摩尔％至50摩尔％的浓度存在。25.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包括ckk-e12。26.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包括ice(咪唑胆固醇酯)。27.如权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包括下式的阳离子脂质：或其药学上可接受的盐；其中每个r1和r2独立地是h或c
1-c6脂族；每个m独立地是具有1至4的值的整数；每个a独
立地是共价键或亚芳基；每个l1独立地是酯、硫酯、二硫键或酸酐基团；每个l2独立地是c
2-c
10
脂族；每个x1独立地是h或oh；并且每个r3独立地是c
6-c
20
脂族。28.如权利要求27所述的方法，其中所述一种或多种阳离子脂质是或者包括化合物1。29.如权利要求20至28中任一项所述的方法，其中所述一种或多种peg修饰的脂质是或者包含长度为最多5kda的聚乙二醇链，所述聚乙二醇链共价连接至具有长度为c
6-c
20
的烷基链的脂质。30.如权利要求20至29中任一项所述的方法，所述方法还包括一种或多种固醇。31.如权利要求30所述的方法，其中所述一种或多种固醇包括基于胆固醇的脂质。32.如权利要求31所述的方法，其中所述基于胆固醇的脂质是胆固醇和/或peg化的胆固醇。33.如权利要求21至32中任一项所述的方法，其中所述mrna是编码在体内翻译为治疗性蛋白质的蛋白质的mrna。34.如权利要求33所述的方法，其中编码蛋白质的所述mrna编码多肽。35.如权利要求34所述的方法，其中所述多肽是治疗性多肽。36.如权利要求35所述的方法，其中所述治疗性多肽是(a)抗体轻链或抗体重链，或(b)所述受试者中不存在或缺乏的多肽。37.如权利要求33述的方法，其中编码蛋白质的所述mrna编码肽。38.如权利要求37所述的方法，其中所述肽是抗原。39.一种用于制备包封mrna的脂质纳米颗粒的方法，所述方法包括(a)提供一种或多种阳离子脂质、一种或多种peg修饰的脂质和一种或多种辅助脂质的混合物，其中所述一种或多种辅助脂质包括1,2-二芥酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(depe)；以及(b)由步骤(a)中提供的所述混合物形成脂质纳米颗粒；其中所述方法还包括将所述mrna包封到所述脂质纳米颗粒中，其中在步骤(b)中形成所述脂质纳米颗粒之前或之后进行包封。40.如权利要求39所述的方法，其中包封所述mrna的所述脂质纳米颗粒是稳定的。41.如权利要求39或40所述的方法，其中所述一种或多种辅助脂质不包括二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(dlope)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(pope)和/或其组合中的任一者。42.如权利要求39至41中任一项所述的方法，其中所述depe以10摩尔％至50摩尔％的浓度存在于所述混合物中。43.如权利要求39至42中任一项所述的方法，其中所述混合物中的所述一种或多种peg修饰的脂质包含长度为最多5kda的聚乙二醇链，所述聚乙二醇链共价连接至具有长度为c
6-c
20
的烷基链的脂质。44.如权利要求39至43中任一项所述的方法，其中所述混合物还包含一种或多种固醇。45.如权利要求44所述的方法，其中所述一种或多种固醇包括基于胆固醇的脂质。46.如权利要求45所述的方法，其中所述基于胆固醇的脂质是胆固醇和/或peg化的胆固醇。47.如权利要求39至46中任一项所述的方法，其中所述mrna编码治疗性肽、多肽或蛋白
质。48.如权利要求39至47中任一项所述的方法，其中将所述mrna包封在预先形成的脂质纳米颗粒中。49.如权利要求39至48中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在包封所述mrna之前和/或之后使所述脂质纳米颗粒经受切向流过滤(tff)。50.如权利要求39至49中任一项所述的方法，其中所述方法还包括在海藻糖溶液中配制所述脂质纳米颗粒。

技术总结
本发明提供了一种包封mRNA的改进的脂质纳米颗粒调配物，其包含DEPE作为辅助脂质。其包含DEPE作为辅助脂质。其包含DEPE作为辅助脂质。


技术研发人员：S
受保护的技术使用者：川斯勒佰尔公司
技术研发日：2020.07.08
技术公布日：2022/4/22