一种促进白芨萌发的培养基及其制备方法与流程

1.本发明涉及培养基技术领域，具体涉及一种促进白芨萌发的培养基及其制备方法。


背景技术：

2.白芨，又名白及，为兰科白及属多年生草本植物。以干燥块茎药用，具有收敛止血，消肿生肌之功效。临床上常用于治疗肺结核咳血、胃溃疡吐血、便血以及外伤出血等疾病。白芨的块茎含有丰富的白芨多糖，其主要成分是葡萄甘露聚糖，目前这种物质被广泛地应用于食品工业、医学卫生材料和日化工业化中。
3.由于白芨的应用价值高，白芨的组织培养技术成为了当前研究的热点。白芨组织培养的相关技术已经成熟，但由于培养周期较长，培育的原球茎较小，影响后期炼苗以及栽培的成活率。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种促进白芨萌发的培养基及其制备方法，在培养基体中加入有机液和促生长基质，在有机液和促生长基质的影响上，对白芨萌发有很好的促进作用。
5.本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
6.一种促进白芨萌发的培养基，包括以下重量份原料：培养基体50-60份、有机液10-15份、大量元素基液10-15份，促生长基质1-3份、无菌水50-70份；
7.其中，培养基体的浓度为ms培养基、蔗糖200-300mg/l、naa5-12mg/l，6ba20-25mg/l、腺嘌呤20-25mg/l、琼脂50-100mg/l；
8.有机液的用量为维生素0.1-0.3mg/l、甘氨酸20-30mg/l、肌醇50-100mg/l、椰子汁100-150ml/l；
9.大量元素基液的用量为硝酸钾2-3g/l、硫酸铵450-500mg/l、二水合氯化钙150-200mg/l、七水合硫酸镁150-200mg/l、磷酸二氢钾300-350mg/l；
10.促生长基质的用量为iaa0.1-0.5mg/l、tdz0.1-0.5mg/l、玉米胚乳0.8-4mg/l。
11.作为本发明进一步的方案：所述有机液由如下方法制成：
12.s1：将维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁一起加入到蒸馏水中，混合均匀，转移至发酵罐后加入乳酸菌和酵母菌，在5-7℃下培养12h；
13.其中，维生素为盐酸吡哆醇与烟酸的用量比为1:1；
14.s2：保持通气量与液体体积比值为1.2。
15.作为本发明进一步的方案：所述大量元素基液是将硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾加入蒸馏水中，混合均匀制得。
16.作为本发明进一步的方案：所述促生长基质的制备包括以下步骤：
17.w1：将iaa用体积分数为95％的酒精溶解，加入蒸馏水中，混合均匀，得到生长素母
液，备用；
18.w2：将玉米胚乳用体积分数为95％的酒精溶解，加入蒸馏水中，混合均匀，得到玉米胚乳母液，备用；
19.w3：将tdz先用1mol/l的hcl溶解，然后再加入蒸馏水中，混合均匀，得到细胞分裂素母液，备用；
20.w4：将上述生长素母液、玉米胚乳母液和细胞分裂素母液按重量比1:8:1混合均匀，得到该促生长基质。
21.作为本发明进一步的方案：所述生长素母液的浓度为1mg/ml，所述玉米胚乳母液的浓度为1mg/ml，所述细胞分裂素母液的浓度为1mg/ml。
22.一种促进白芨萌发的培养基的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：
23.步骤一：将培养基体、有机液、大量元素基液和促生长基质缓慢加入无菌水中，加热至40-50℃，不停搅拌直至全部溶解均匀；
24.步骤二：对溶液后的物质进行冷却，并通过高温灭菌，得到该所述培养基。
25.作为本发明进一步的方案：步骤二中，高温灭菌是将物质置于120-125℃灭菌22-24分钟。
26.本发明的有益效果：
27.(1)本发明有机液是由维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁的复配物，维生素采用盐酸吡哆醇与烟酸复配制成，能够有效以辅酶形式参与细胞组织的蛋白质代谢、脂肪代谢和糖代谢生命活动，并配合肌醇参与碳水化合物代谢和离子平衡，从而有效促进白芨组织的生长和胚状体及芽的形成；
28.(2)本发明中通过加入iaa、tdz和玉米乳汁支撑的促生长基质，能够有效促进白芨组织细胞的分裂和组织分化，有利于植物生长生根。
具体实施方式
29.对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
30.实施例1
31.一种促进白芨萌发的培养基，包括以下重量份原料：培养基体50份、有机液10份、大量元素基液10份，促生长基质1份、无菌水50份；
32.其中，培养基体包括以下重量份原料：ms培养基、蔗糖200份、naa5份，6ba20份、腺嘌呤20份、琼脂5份；
33.有机液包括以下重量份原料：维生素0.1份、甘氨酸20份、肌醇50份、椰子汁100份；
34.大量元素基液包括以下重量份原料：硝酸钾2000份、硫酸铵450份、二水合氯化钙150份、七水合硫酸镁150份、磷酸二氢钾300份；
35.生长调节剂包括以下重量份原料：iaa0.1份、tdz0.1份、玉米胚乳0.8份。
36.一种促进白芨萌发的培养基的制备方法，包括以下步骤:
37.步骤一：将培养基体、有机液、大量元素基液和促生长基质缓慢加入无菌水中，加热至40-50℃，不停搅拌直至全部溶解均匀；
38.其中，培养基体是将ms培养基、蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂混合均匀，杀菌备用；
39.培养基体中蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂的重量比为200:5:20:20:50，其中杀菌温度120℃，杀菌时间20分钟；
40.其中，有机液是将维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁一起加入到蒸馏水中，混合均匀，转移至发酵罐后加入乳酸菌和酵母菌，在5-7℃下培养12h，保持通气量与液体体积比值为1.2；
41.有机液中维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁的重量比为0.1:20:50:100；
42.其中，大量元素基液是将硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾加入蒸馏水中，混合均匀制得；
43.大量元素基液中硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾的重量比为：2000:450:150:150:300；
44.其中，促生长基质是将iaa、tdz和玉米胚乳分别用体积分数95％的酒精溶解，然后分别加入蒸馏水中，混合均匀，再将混合后的溶液按质量比1:8:1混合均匀；
45.其中，促生长基质中iaa、tdz和玉米胚乳的重量比为0.1:0.1:0.8；
46.步骤二：对溶解后的物质进行冷却，并通过高温灭菌，得到该所述培养基；
47.其中，培养基体、有机液、大量元素基液、促生长基质和无菌水按照重量比为50g:10g:10mg:1mg:50mg。
48.实施例2
49.一种促进白芨萌发的培养基，包括以下重量份原料：培养基体55份、有机液12份、大量元素基液12份，促生长基质2份、无菌水60份；
50.其中，培养基体包括以下重量份原料：ms培养基、蔗糖300份、naa7.5份，6ba30份、腺嘌呤30份、琼脂7.5份；
51.有机液包括以下重量份原料：维生素1.5份、甘氨酸30份、肌醇75份、椰子汁150份；
52.大量元素基液包括以下重量份原料：硝酸钾3000份、硫酸铵675份、二水合氯化钙225份、七水合硫酸镁225份、磷酸二氢钾450份；
53.生长调节剂包括以下重量份原料：iaa0.15份、tdz0.15份、玉米胚乳1.2份。
54.一种促进白芨萌发的培养基的制备方法，包括以下步骤:
55.步骤一：将培养基体、有机液、大量元素基液和促生长基质缓慢加入无菌水中，加热至40-50℃，不停搅拌直至全部溶解均匀；
56.其中，培养基体是将ms培养基、蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂混合均匀，杀菌备用；
57.培养基体中蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂的重量比为300:7.5:30:30:75，其中杀菌温度120℃，杀菌时间20分钟；
58.其中，有机液是将维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁一起加入到蒸馏水中，混合均匀，转移至发酵罐后加入乳酸菌和酵母菌，在5-7℃下培养12h，保持通气量与液体体积比值为1.2；
59.有机液中维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁的重量比为0.15:30:75:150；
60.其中，大量元素基液是将硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾加入蒸馏水中，混合均匀制得；
61.大量元素基液中硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾的重
量比为：3000:675:225:225:450；
62.其中，促生长基质是将iaa、tdz和玉米胚乳分别用体积分数95％的酒精溶解，然后分别加入蒸馏水中，混合均匀，再将混合后的溶液按质量比1:8:1混合均匀；
63.其中，促生长基质中iaa、tdz和玉米胚乳的重量比为0.15:0.15:1.2；
64.步骤二：对溶解后的物质进行冷却，并通过高温灭菌，得到该所述培养基；
65.其中，培养基体、有机液、大量元素基液、促生长基质和无菌水按照重量比为55g:12g:12mg:2mg:60mg。
66.实施例3
67.一种促进白芨萌发的培养基，包括以下重量份原料：培养基体60份、有机液15份、大量元素基液15份，促生长基质3份、无菌水70份；
68.其中，培养基体包括以下重量份原料：ms培养基、蔗糖400份、naa10份，6ba40份、腺嘌呤40份、琼脂10份；
69.有机液包括以下重量份原料：维生素0.2份、甘氨酸40份、肌醇100份、椰子汁200份；
70.大量元素基液包括以下重量份原料：硝酸钾4000份、硫酸铵900份、二水合氯化钙300份、七水合硫酸镁300份l、磷酸二氢钾600份；
71.生长调节剂包括以下重量份原料：iaa0.2份、tdz0.2份、玉米胚乳1.6份。
72.一种促进白芨萌发的培养基的制备方法，包括以下步骤:
73.步骤一：将培养基体、有机液、大量元素基液和促生长基质缓慢加入无菌水中，加热至40-50℃，不停搅拌直至全部溶解均匀；
74.其中，培养基体是将ms培养基、蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂混合均匀，杀菌备用；
75.培养基体中蔗糖、naa，6ba、腺嘌呤和琼脂的重量比为400:10:40:40:100，其中杀菌温度120℃，杀菌时间20分钟；
76.其中，有机液是将维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁一起加入到蒸馏水中，混合均匀，转移至发酵罐后加入乳酸菌和酵母菌，在5-7℃下培养12h，保持通气量与液体体积比值为1.2；
77.有机液中维生素、甘氨酸、肌醇和椰子汁的重量比为0.2:40:100:200；
78.其中，大量元素基液是将硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾加入蒸馏水中，混合均匀制得；
79.大量元素基液中硝酸钾、硫酸铵、二水合氯化钙、七水合硫酸镁和磷酸二氢钾的重量比为：4000:900:300:300:600；
80.其中，促生长基质是将iaa、tdz和玉米胚乳分别用体积分数95％的酒精溶解，然后分别加入蒸馏水中，混合均匀，再将混合后的溶液按质量比1:8:1混合均匀；
81.其中，促生长基质中iaa、tdz和玉米胚乳的重量比为0.2:0.2:1.6；
82.步骤二：对溶解后的物质进行冷却，并通过高温灭菌，得到该所述培养基；
83.其中，培养基体、有机液、大量元素基液、促生长基质和无菌水按照重量比为60g:15g:15mg:3mg:70mg。
84.对比例1
85.本对比例未加入任何有机液和促生长基质，为空白对照组；
86.对比例2
87.本对比例与实施例1相比，未加入有机液；
88.对比例3
89.本对比例与实施1相比，未加入促生长基质；
90.促进白芨萌发的培养基试验方法：在无菌条件下,纵向剖开蒴果,用镊子夹取蒴果外壳,将粉末状的种子分别轻轻抖落到实验组培养基和对照组培养基上。
91.将培养温度设定为24～26℃,光照强度2000～2500lx，光照12～18h/d。种子萌发期间暗培养，25天以后观察,统计种子的发芽率，见其表1；
92.表1
[0093] 萌发率％生根率％苗生长势实施例1》92》90快实施例2》92.63》91.76快实施例3》91.85》91.07快对比例130-4035-50慢对比例270-8075-85适中对比例365-7570-75适中
[0094]
从上表中，可以看出在培养基上添加有机物和促生长基质，对促进白芨的增殖具有很好的促进作用，使得白芨的萌发率和生根率较高，能够达到90％以上。
[0095]
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。