一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法

技术特征：
1.一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)样品前处理：在96孔板中加入30～100μl血液样品，按照血液样品：萃取剂的体积：质量比为1：(0.54
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0.2)的比例加入萃取剂，并加入固定体积的乙腈，涡旋混匀后离心取上清液，氮吹浓缩后使用100μl的乙腈复溶；(2)上机测定：通过uplc-q-exactive液质联用对前处理后的样品进行全扫描分析检测；(3)样品峰提取：将步骤(2)中仪器分析得到的有机污染物谱图结果保存为raw文件，使用格式转换器转为abf文件后导入msdial ver 4.48软件中提取样品峰；(4)污染物识别：根据步骤(3)中提取的样品峰，通过库匹配污染物靶向识别，和/或无法靶向识别的污染物利用分子网络工具进行识别。2.根据权利要求1所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，所述萃取剂为硫酸镁-氯化钠混合物。3.根据权利要求1或2所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，所述固定体积的乙腈为300～400μl。4.根据权利要求3所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，所述样品前处理还包括过程空白，用等体积的fisher水代替血液样品重复样品前处理流程。5.根据权利要求3或4所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，步骤(2)中uplc-q-exactive液质联用条件为：色谱仪：ultimate 3000超高效液相色谱(thermo fisher，美国)；色谱柱：c18柱(2.1mm
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50mm，2.5μm，)；柱温：40℃；流速：0.3ml/min；正离子模式流动相：0.1％甲酸-水溶液(a相)，甲醇(b相)；负离子模式流动相：2mm乙酸铵水溶液(a相)，甲醇(b相)；梯度洗脱表：质谱仪：q-exactive静电场轨道阱高分辨质谱；全扫描模式：数据依赖扫描模式；离子源：正负电喷雾电离源；全扫描质量范围：一级80-1000da，二级50-800da；碰撞能：
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35ev；碰撞能扩散：15ev；离子源温度：412.5℃。
6.根据权利要求5所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，步骤(3)中所述样品峰提取的参数设置为：提峰质量范围：80-1000da；提峰质量误差：0.01da；提峰信噪比：s:n>3；提峰保留时间：1-50min。7.根据权利要求6所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，步骤(3)中所述样品峰提取还包括对齐校正，样品峰对齐校正的参数设置为：对齐保留时间误差：0.1min；对齐质量误差：0.015da。8.根据权利要求7所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，步骤(3)中所述样品峰提取还包括过滤，样品峰过滤的参数设置为：依据3σ原则，保留大于空白样品峰面积average 3std的样品峰面积。9.根据权利要求8所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，步骤(4)中所述库匹配污染物靶向识别包括在msdial软件中分别加载正负离子模式的msp数据库文件，与样品峰列表进行比对与匹配，匹配标签包括精确质量数、保留时间、同位素分布和二级谱图信息；和/或所述利用分子网络工具进行识别包括基于gnps，根据相似性对样本的质谱碎片进行聚类并注释。10.根据权利要求9所述的一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，其特征在于，所述上述msdial中设置的匹配参数为：质量误差：一级0.002da，二级0.01da；保留时间容许误差：2min；打分值阈值：80分；所述匹配特征离子的参数设置为：质量误差：0.005da；保留时间容许误差：0.1min；和/或所述基于gnps平台构建分子网络的参数设置为：min paris cos:0.7；network topk:10；maximum connected component size:100；minimum matched fragment ions:2；minimum cluster size:1；使用的gnps数据库有mona、berkeley-lab、bilelib19、casmi、sciex、nih-clinicalcollection1、nih-clinicalcollection2、selleckchem-fda-part1、selleckchem-fda-part2、nih-naturalproductslibrary、nist14-matches、ioba-nhc、pnnl-lipids、iqamdb、ldb_positive、ldb_positive、mmv_positive、nih-smallmoleculepharmacologicallyactive。
库搜索参数设置为：library search min matched:2；score threshold:0.7；maximum analog search mass difference:100。

技术总结
本发明公开了一种基于微量样本的高通量识别血液中痕量有机污染物的方法，属于生物化学和分析化学领域，上述方法包括(1)样品前处理：提取污染物；(2)上机测定：通过UPLC-Q-Exactive液质联用对前处理后的样品进行全扫描分析检测；(3)样品峰提取；(4)污染物识别：根据提取的样品峰，通过库匹配污染物靶向识别，和/或无法靶向识别的污染物利用分子网络工具进行识别。本发明的方法仅需要微量体积(30-100μL)的血液样品，大幅减少了样品的使用量，结合靶向识别和非靶向筛查技术确保了样品中有机化合物的检出，实现了低样本量、高通量、高灵敏识别并鉴定体内有机污染物，为环境暴露与人体健康关系的研究提供科学依据。人体健康关系的研究提供科学依据。人体健康关系的研究提供科学依据。


技术研发人员：韦斯 李莱辉 于南洋 王学兵 于红霞
受保护的技术使用者：南京大学
技术研发日：2022.01.06
技术公布日：2022/4/15