包含成纤维细胞活化蛋白配体的化合物及其用途的制作方法

1.本发明涉及化合物；成纤维细胞活化蛋白(fap)抑制剂；分别包含所述化合物和抑制剂的组合物；分别用于疾病诊断方法的所述化合物、所述抑制剂和所述组合物；分别用于疾病治疗方法的所述化合物、所述抑制剂和所述组合物；分别用于疾病的诊断和治疗(也称作“治疗诊断(thera(g)nosis)”或“治疗诊断学(thera(g)nostics)”)方法的所述化合物、所述抑制剂和所述组合物；分别用于将效应物递送至表达fap的组织的方法所述的所述化合物、抑制剂和所述组合物；分别使用所述化合物、所述抑制剂和所述组合物用于疾病诊断的方法；分别使用所述化合物、所述抑制剂和所述组合物用于疾病治疗的方法；分别使用所述化合物、所述抑制剂和所述组合物用于疾病诊断和治疗(也称作“治疗诊断”或“治疗诊断学”)的方法；分别使用所述化合物、所述抑制剂和所述组合物将效应物递送至表达fap的组织的方法。


背景技术：

2.尽管治疗选择越来越多，但癌症仍然是全球第二大死亡原因。治疗策略主要集中在靶向恶性癌细胞本身，而忽略了限制癌细胞治疗剂进入的始终存在的围绕肿瘤的微环境(tme)(valkenburg,et al.,nat rev clin oncol,2018,15:366)。tme是肿瘤团块的一部分，不仅包含异质的癌细胞群，还包含各种驻留和浸润的宿主细胞、分泌因子和细胞外基质蛋白(quail,et al.,nat med,2013,19:1423)。在tme中发现的主要细胞类型是癌症相关成纤维细胞(caf)(kalluri,nat rev cancer,2016,16:582)。许多不同的细胞类型已被描述为caf的来源和起源，例如成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞或内皮细胞(madar,et al.,trends mol med,2013,19:447)。caf表现出间充质样特征，并且通常是实体瘤团块中的主要细胞类型。caf作为肿瘤进展和体内平衡的参与者受到越来越多的关注(gascard,et al.,genes dev,2016,30:1002；lebleu,et al.,dis model mech,2018,11)。
3.近年来，成纤维细胞活化蛋白(fap)作为caf的标志物而广为人知(shiga,et al.,cancers(basel),2015,7:2443；pure,et al.,oncogene,2018,37:4343；jacob,et al.,curr mol med,2012,12:1220)。由于肿瘤内caf和间质无所不在，fap被发现是放射性药物诊断的合适标志物和放射性药物治疗的合适靶点(siveke,j nucl med,2018,59:1412)。
4.成纤维细胞活化蛋白α(fap)是ii型跨膜丝氨酸蛋白酶和s9脯氨酰寡肽酶家族的成员(park,et al.,j biol chem,1999,274:36505)。最接近的家庭成员dpp4与fap有53％的同源性。与其他dpp酶(dpp4、dpp7、dpp8、dpp9)一样，fap具有后脯氨酸外肽酶活性。此外，fap具有内肽酶活性，类似于脯氨酰寡肽酶/内肽酶(pop/prep)。fap基因在不同物种中高度保守。人fap的胞外域与小鼠和大鼠fap具有90％的氨基酸序列相同性。小鼠fap与大鼠fap具有97％的序列相同性。
5.在结构上，fap是一种760个氨基酸的跨膜蛋白，包含一个短的n末端胞质尾区(6个氨基酸)、一个单一的跨膜结构域(20个氨基酸)和一个734个氨基酸的胞外域(aertgeerts,
et al.,j biol chem,2005,280:19441)。这个胞外域由一个八叶β-螺旋(eight-bladedβ-propeller)和一个α/β水解酶结构域组成。催化三联体包含ser624、asp702和his734，位于β-螺旋和水解酶结构域的界面。可通过β-螺旋域的中心孔或通过β-螺旋与水解酶结构域之间的狭窄空腔接近活性位点。fap单体没有活性，但与dpp4形成活性同二聚体以及异二聚体(ghersi,et al.,cancer res,2006,66:4652)。还描述了可溶的同二聚体fap(keane,et al.,febs open bio,2013,4:43；lee,et al.,blood,2006,107:1397)。
6.fap具有双重酶活性(hamson,et al.,proteomics clin appl,2014,8:454)。其二肽基肽酶活性允许裂解在脯氨酸残基后的n末端的两个氨基酸。通过其二肽基肽酶活性快速裂解的fap底物是神经肽y、肽yy、p物质和b型利钠肽。已表明胶原蛋白i和iii、fgf21和α
2-抗纤溶酶被fap的内肽酶活性裂解。虽然fap无法裂解天然胶原蛋白，但通过其他蛋白酶如基质金属蛋白酶的预消化促进fap进一步裂解胶原蛋白。胶原蛋白的加工可能影响癌细胞的迁移能力。除了通过细胞外基质的重塑增加癌细胞的侵润性外，还提出了其他几种fap介导的肿瘤促进作用，包括增殖和增加血管生成。此外，fap的间质表达与各种癌症的免疫监视脱逃有关，表明其在抗肿瘤免疫中的作用(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343)。
7.fap在正常发育过程中短暂表达，但很少在健康的成年组织中表达。在转基因小鼠中，已证明fap由脂肪组织、骨骼肌、皮肤、骨骼和胰腺表达(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343；roberts,et al.,j exp med,2013,210:1137)。然而，fap敲除小鼠具有健康的表型，表明在正常条件下具有多余的作用(niedermeyer,et al.,mol cell biol,2000,20:1089)。在活跃的组织重塑部位，包括伤口愈合、纤维化、关节炎、动脉粥样硬化和癌症，fap在间质细胞中高度上调(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343)。
8.在单克隆抗体f19的使用下，于1990年首次报道了fap在90％的上皮癌的肿瘤间质中的表达(garin-chesa,et al.,proc natl acad sci u s a,1990,87:7235；rettig,et al.,cancer res,1993,53:3327)。表达fap的间质细胞被进一步鉴定为癌症相关成纤维细胞(caf)和癌症相关周细胞(cremasco,et al.,cancer immunol res,2018,6:1472)。恶性上皮细胞上的fap表达也有报道，但其意义仍有待确定(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343)。下表1摘自busek et al.(busek,et al.,front biosci(landmark ed),2018,23:1933)，总结了fap在各种恶性肿瘤中的表达，指示了肿瘤类型和细胞表达。
9.表1：在人恶性肿瘤中的fap表达(来自busek et al.)
10.11.[0012][0013]
几乎所有癌和肉瘤都显示了fap在caf中的表达(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343；busek,et al.,front biosci(landmark ed),2018,23:1933)。此外，caf存在于血液系统恶性肿瘤中(raffaghello,et al.,oncotarget,2015,6:2589)。因此，将fap用作治疗靶标不限于某些肿瘤实体。
[0014]
许多表达fap的caf被描述为与不良预后相关。在广泛的人肿瘤适应症中，fap表达被描述为与较高的肿瘤等级和较差的总生存率相关(pure,et al.,oncogene,2018,37:4343)。
[0015]
如上所述，表明存在于肿瘤微环境中的fap以及表达fap的细胞显著影响肿瘤进展(hanahan,et al.,cancer cell,2012,21:309)。此外，如下所述，由于其在肿瘤中的相对选择性表达，fap被视为治疗和诊断剂的合适靶标(siveke,j nucl med,2018,59:1412；christiansen,et al.,neoplasia,2013,15:348；zi,et al.,mol med rep,2015,11:3203)。
[0016]
在发现后不久，fap就被用作癌症的治疗靶标。直到今天，已经探索了各种策略，包括例如fap酶活性的抑制、fap阳性细胞的消融或细胞毒性化合物的靶向递送。
[0017]
在2007年，point therapeutics开发了fap和dpp4抑制剂talabostat(val-boro-pro，pt-100)(例如美国专利号6,890,904、wo9916864中所述)。pennisi等人(pennisi,et al.,br j haematol,2009,145:775)在多发性骨髓瘤动物模型以及癌症同源小鼠模型中观察到肿瘤生长减少。此外，已经开发并报道了几种其他的脯氨酰硼酸衍生物作为fap的推定选择性抑制剂。这些衍生物在生理ph值的水相环境中表现出不稳定性(coutts,et al.,j med chem,1996,39:2087)并且与其他酶具有非特异性反应性。
[0018]
wo 2008/116054公开了六肽衍生物，其中化合物包含c-末端双氨基或硼酸官能团。
[0019]
us 2017/0066800公开了对fap有效的假肽抑制剂，例如m83。这些抑制剂在免疫缺陷小鼠的肺癌和结肠癌异种移植物中进行了评估。观察到肿瘤生长的抑制(jackson,et al.,neoplasia,2015,17:43)。这些假肽抑制脯氨酰寡肽酶(pop/prep)和fap的活性，因此
al.,j nucl med,2019,mar 8(epub ahead of print)；giesel,et al.,eur j nucl med mol imaging,2019,46:1754；kratochwil,et al.,j nucl med,2019,60:801)。
[0028]
对
131
i标记的人源化形式的f19抗体(sibrotuzumab)的临床评估显示了在结直肠癌或非小细胞肺癌患者中被肿瘤而不是被正常组织选择性摄取(scott,et al.,clin cancer res,2003,9:1639)。这可能是由于抗体的循环时间长，使其不适用于涉及放射性核素的诊断、治疗或治疗诊断方法。
[0029]
wo 2011/040972公开了识别人和鼠fap抗原的高亲和力抗体作为强力的放射免疫缀合物。esc11 igg1诱导表面fap的下调和内在化(fischer,et al.,clin cancer res,2012,18:6208)。wo 2017/211809公开了组织靶向性钍-227络合物，其中靶向部分对fap具有特异性。然而，抗体的长循环时间使其不适合涉及放射性核素的诊断、治疗或治疗诊断方法。
[0030]
fap还被描述为涉及除肿瘤学适应症以外的其他疾病，其示例如下。
[0031]
患者类风湿性关节炎关节中的成纤维细胞样滑膜细胞显示fap的表达显著增加(bauer,et al.,arthritis res ther,2006,8:r171；milner,et al.,arthritis res ther,2006,8:r23)。在类风湿性关节炎中，间质细胞通过产生细胞外基质成分、募集浸润性免疫细胞和分泌炎症介质，在关节滑膜组织结构的组构中发挥重要作用。存在大量证据支持这些细胞在驱动炎症和关节损伤持续存在方面的作用(bartok,et al.,immunol rev,2010,233:233；turner,et al.,curr opin rheumatol,2015,27:175)。在类风湿性关节炎中，至少通过促进蛋白多糖损失和随后的软骨降解，fap在软骨转换中具有病理学作用(bauer,et al.,arthritis res ther,2006,8:r171；waldele,et al.,arthritis res ther,2015,17:12)。因此，其可以作为患者分层的标志，用于对治疗成功进行评估和随访，或作为治疗靶标(bauer,et al.,arthritis res ther,2006,8:r171)。在小鼠中，使用
99m
tc标记的抗fap抗体的spect/ct成像证明了治疗反应(van der geest,et al.,rheumatology(oxford),2018,57:737；laverman,et al.,j nucl med,2015,56:778；van der geest,et al.,j nucl med,2017,58:151)。
[0032]
此外，fap不仅被认为是损伤反应中活化的成纤维细胞的标志物(tillmanns,et al.,int j cardiol,2013,168:3926)，而且还是伤口愈合过程中的重要参与者(ramirez-montagut,et al.,oncogene,2004,23:5435)。jing等人证明了大鼠烧伤后fap表达变化的时间依赖性过程(jing,et al.,nan fang yi ke da xue xue bao,2013,33:615)。在瘢痕疙瘩疤痕(常见的良性纤维增生性网状真皮病变)中抑制反应性创伤成纤维细胞中的fap活性可能提供预防疾病进展的治疗选择(dienus,et al.,arch dermatol res,2010,302:725)。
[0033]
在纤维化疾病中，观察到fap表达上调，例如在特发性肺纤维化、crohn病和肝纤维化中。在crohn病(一种特征在于过度的失衡的细胞外基质(ecm)沉积的慢性肠道炎性疾病)的离体模型中，观察到fap表达上调。fap抑制重建了细胞外基质稳态(truffi,et al.,inflamm bowel dis,2018,24:332)。egger等人(egger,et al.,eur j pharmacol,2017,809:64)使用肺纤维化鼠模型也进行了类似的观察。fap的抑制导致纤维化病理减少。fap也在慢性损伤肝脏的组织重塑区表达(wang,et al.,front biosci,2008,13:3168)，肝星状细胞的fap表达与肝病的组织学严重程度相关(gorrell,et al.,adv exp med biol,2003,
524:235)。因此，fap也是治疗肝纤维化的一个很有前景的靶标(lay,et al.,front biosci(landmark ed),2019,24:1)。
[0034]
fap在动脉硬化病变中表达并在活化的血管平滑肌细胞中上调(monslow,et al.,circulation,2013,128:a17597)。monslow等人表明在动脉硬化病变中靶向抑制fap可以降低整体病变负担，抑制炎症细胞归巢，并经由其通过有利于富含基质的病变而非炎症来改变病变结构的能力来增加病变稳定性。更重要的是，大多数动脉硬化病变具有共同的致病特征：动脉粥样硬化斑块破裂引起动脉硬化病变(davies,et al.,br heart j,1985,53:363；falk,am j cardiol,1989,63:114e)。晚期动脉粥样硬化斑块中纤维帽的破裂是急性冠状动脉综合征的关键触发因素，可以导致心肌梗塞和心源性猝死。促进斑块不稳定的关键事件之一是纤维帽的降解，这将潜在的血栓形成斑块核心暴露于血流，从而导致血栓形成和随后的血管闭塞(farb,et al.,circulation,1996,93:1354；virmani,et al.,j am coll cardiol,2006,47:c13)。brokopp等人表明fap有助于纤维帽中i型胶原蛋白分解(brokopp,et al.,eur heart j,2011,32:2713)。开发了放射性标记的示踪剂，并显示了其对动脉粥样硬化成像的适用性(meletta,et al.,molecules,2015,20:2081)。


技术实现要素：

[0035]
本发明所基于的问题是提供适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话。本发明所基于的另一个问题是提供适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话，从而所述化合物是fap活性的有力抑制剂；优选所述化合物的pic50等于或大于6.0。本发明所基于的另一个问题是提供在疾病诊断和/或治疗中适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话，其中病变细胞和/或病变组织表达fap。本发明所基于的再一个问题是提供一种化合物，所述化合物适于分别将诊断和/或治疗有效药剂递送至病变细胞和/或病变组织，更特别地是表达fap的病变细胞和/或病变组织，优选所述病变组织包含或含有癌症相关的成纤维细胞。另外，本发明所基于的问题是提供用于诊断疾病的方法、用于治疗和/或预防疾病的方法，以及用于组合地诊断与治疗疾病的方法；优选地，这种疾病是涉及表达fap的细胞和/或组织，更特别是表达fap的病变细胞和/或病变组织的疾病，优选所述病变组织包含或含有癌症相关的成纤维细胞。本发明所基于的另一个问题是提供用于鉴定个体的方法，其中所述个体对疾病的治疗可能有反应或可能没有反应；用于从一组个体选择个体的方法，其中所述个体对疾病的治疗可能有反应或可能没有反应。此外，本发明所基于的问题是提供含有具有上述特征的化合物的药物组合物。进一步地，本发明所基于的问题是提供适用于任何上述方法的药盒。
[0036]
需要适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话。此外，需要适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话，从而所述化合物是fap活性的有力抑制剂；优选所述化合物的pic50等于或大于6.0。此外，需要在疾病诊断和/或治疗中适合作为诊断剂和/或药剂的化合物，特别是如果与诊断和/或治疗活性效应物缀合的话，其中病变细胞和/或病变组织表达fap。此外，需要一种化合物，其适于分别将诊断和/或治疗有效药剂递送至病变细胞和/或病变组织，更特别地是表达fap的病变细胞和/或病变组织，优选所述病变组织包含或含有癌症
相关的成纤维细胞。另外，需要用于诊断疾病的方法、用于治疗和/或预防疾病的方法，以及组合地诊断和治疗疾病的方法；优选地，这种疾病是涉及表达fap的细胞和/或组织，更特别是表达fap的病变细胞和/或病变组织的疾病，优选所述病变组织包含或含有癌症相关的成纤维细胞。进一步地，需要用于鉴定个体的方法，其中所述个体对疾病的治疗可能有反应或可能没有反应；用于从一组个体选择个体的方法，其中所述个体对疾病的治疗可能有反应或可能没有反应。此外，需要含有具有上述特征的化合物的药物组合物。此外，需要适用于任何上述方法的药盒。本发明满足了这些需要。
[0037]
这些和其他问题由所附权利要求的主题解决。
[0038]
本发明所基于的这些和其他问题也由以下实施方案解决。
[0039]
实施方案1.化合物，其选自：
[0040]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3554)
[0041]
及
[0042]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3407)
[0043][0044]
实施方案2.根据实施方案1的化合物，其中所述化合物是具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3554)
[0045][0046]
实施方案3.根据实施方案1的化合物，其中所述化合物是具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3407)
[0047][0048]
实施方案4.根据实施方案1至3中任一项的化合物，其中可以被氧化的任何s原子、优选硫醚基团的s原子以-s-、-s(o)-或-s(o2)-或其混合物形式存在。
[0049]
实施方案5.根据实施方案1至4中任一项的化合物，其中所述化合物能结合成纤维细胞活化蛋白(fap)。
[0050]
实施方案6.根据实施方案1至5中任一项的化合物，其中所述化合物包含诊断活性核素或治疗活性核素。
[0051]
实施方案7.根据实施方案6的化合物，其中所述化合物选自：
[0052]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(indota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3590)
[0053][0054]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(ludota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3591)
[0055][0056]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(gadota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3592)
[0057][0058]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(eudota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3661)
[0059][0060]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(indota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3623)
[0061][0062]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(ludota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3624)
[0063][0064]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(eudota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3662)
[0065][0066]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(gadota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3949)
[0067][0068]
具有下式的化合物hex-[cys-(tmebn(cudota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-4293)
[0069]
及
[0070]
具有下式的化合物hex-[cys-(tmebn(zndota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-4343)
[0071][0072]
实施方案8.根据实施方案6和7中任一项的化合物，其中所述诊断活性核素是诊断活性放射性核素。
[0073]
实施方案9.根据实施方案8的化合物，其中所述诊断活性放射性核素选自
43
sc、
44
sc、
51
mn、
52
mn、
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cu、
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i。
[0074]
实施方案10.根据实施方案6和7中任一项的化合物，其中所述治疗活性核素是治疗活性放射性核素。
[0075]
实施方案11.根据实施方案10的化合物，其中所述治疗活性放射性核素选自
47
sc、
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i和
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at。
[0076]
实施方案12.根据实施方案1-11中任一项的化合物，其中所述化合物与成纤维细胞活化蛋白(fap)相互作用，优选与具有seq id no:1的氨基酸序列的人fap或其同系物相互作用，其中所述同系物的氨基酸序列与seq id no:1的氨基酸序列具有至少85％的相同性。
[0077]
实施方案13.根据实施方案12的化合物，其中所述化合物是所述成纤维细胞活化蛋白(fap)的抑制剂。
[0078]
实施方案14.用于诊断疾病的方法的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合物。
[0079]
实施方案15.用于根据实施方案14的用途的化合物，其中所述疾病是涉及成纤维细胞活化蛋白(fap)、优选成纤维细胞活化蛋白(fap)的表达上调的疾病。
[0080]
实施方案16.用于根据实施方案14至15中任一项的用途的化合物，其中所述疾病涉及显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0081]
实施方案17.用于根据实施方案14至16中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是瘤，优选癌症或肿瘤。
[0082]
实施方案18.用于根据实施方案17的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自实体瘤、上皮瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胆管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵
巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌和甲状腺癌。
[0083]
实施方案19.用于根据实施方案18的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自乳腺癌、结直肠癌、胆管癌、头颈癌、肺癌、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和鳞状细胞癌。
[0084]
实施方案20.用于根据实施方案14至16中任一项的用途的化合物，其中所述疾病选自炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫性疾病和纤维化疾病。
[0085]
实施方案21.用于根据实施方案20的用途的化合物，其中所述疾病是炎症性疾病。
[0086]
实施方案22.用于根据实施方案21的用途的化合物，其中所述疾病是动脉粥样硬化、关节炎或类风湿关节炎。
[0087]
实施方案23.用于根据实施方案20的用途的化合物，其中所述疾病是心血管疾病。
[0088]
实施方案24.用于根据实施方案23的用途的化合物，其中所述疾病是涉及动脉粥样硬化斑块的心血管疾病。
[0089]
实施方案25.用于根据实施方案24的用途的化合物，其中所述疾病是由于斑块破裂所致的动脉粥样硬化病变、急性冠脉综合征、心肌梗塞、血栓形成或血管闭塞。
[0090]
实施方案26.用于根据实施方案20的用途的化合物，其中所述疾病是纤维化疾病。
[0091]
实施方案27.用于根据实施方案26的用途的化合物，其中所述疾病选自特发性肺纤维化、crohn病和肝纤维化。
[0092]
实施方案28.用于根据实施方案14-27中任一项的用途的化合物，其中所述化合物包含诊断活性核素，优选诊断活性放射性核素。
[0093]
实施方案29.用于根据实施方案28的用途的化合物，其中所述诊断活性核素选自
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i。
[0094]
实施方案30.用于根据实施方案14-29中任一项的用途的化合物，其中所述诊断方法是成像方法。
[0095]
实施方案31.用于根据实施方案30的用途的化合物，其中所述成像方法选自闪烁扫描术、单光子发射计算机断层显像术(spect)和正电子发射断层摄影术(pet)。
[0096]
实施方案32.用于根据实施方案14-31中任一项的用途的化合物，其中所述方法包括向个体、优选哺乳动物施用诊断有效量的所述化合物，其中所述哺乳动物选自人、伴侣动物、宠物和家畜，更优选所述个体选自人、狗、猫、马和牛，最优选所述个体是人。
[0097]
实施方案33.用于治疗疾病的方法的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合物。
[0098]
实施方案34.用于根据实施方案34的用途的化合物，其中所述疾病是涉及成纤维细胞活化蛋白(fap)、优选成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的疾病。
[0099]
实施方案35.用于根据实施方案33至34中任一项的用途的化合物，其中所述疾病涉及显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0100]
实施方案36.用于根据实施方案33至35中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是瘤，优选癌症或肿瘤。
[0101]
实施方案37.用于根据实施方案36的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自实体瘤、上皮瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胆管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌和甲状腺癌。
[0102]
实施方案38.用于根据实施方案37的用途的化合物，其中所述肿瘤赘生物、癌症和肿瘤各自且独立地选自乳腺癌、结直肠癌、胆管癌、头颈癌、肺癌、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和鳞状细胞癌。
[0103]
实施方案39.用于根据实施方案33-35中任一项的用途的化合物，其中所述疾病选自炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病。
[0104]
实施方案40.用于根据实施方案39的用途的化合物，其中所述疾病是炎症性疾病。
[0105]
实施方案41.用于根据实施方案40的用途的化合物，其中所述疾病是动脉粥样硬化、关节炎或类风湿关节炎。
[0106]
实施方案42.用于根据实施方案39的用途的化合物，其中所述疾病是心血管疾病。
[0107]
实施方案43.用于根据实施方案42的用途的化合物，其中所述疾病是涉及动脉粥样硬化斑块的心血管疾病。
[0108]
实施方案44.用于根据实施方案43的用途的化合物，其中所述疾病是由于斑块破裂导致的动脉粥样硬化病变、急性冠脉综合征、心肌梗塞、血栓形成或血管闭塞。
[0109]
实施方案45.用于根据实施方案39的用途的化合物，其中所述疾病是纤维化疾病。
[0110]
实施方案46.用于根据实施方案45的用途的化合物，其中所述疾病选自特发性肺纤维化、crohn病和肝纤维化。
[0111]
实施方案47.用于根据实施方案33-38中任一项的用途的化合物，其中所述化合物包括治疗活性核素，优选治疗活性放射性核素。
[0112]
实施方案48.用于根据实施方案47的用途的化合物，其中所述治疗活性核素选自
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[0113]
实施方案49.用于根据实施方案33-48中任一项的用途的化合物，其中所述方法包括向个体、优选哺乳动物施用治疗有效量的所述化合物，其中所述哺乳动物选自人、伴侣动物、宠物和家畜，更优选所述个体选自人、狗、猫、马和牛，最优选所述个体是人。
[0114]
实施方案50.用于鉴定个体的方法的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中所述个体对疾病的治疗可能有反应或可能无反应，其中所述用于鉴定个体的方法包括使用根据实施方案1-13中任一项的化合物进行诊断方法，优选进行如实施方案14-33中任一项所描述的用于诊断疾病的方法。
[0115]
实施方案51.用于从一组个体选择个体的方法的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中所述个体对于疾病的治疗可能有反应或可能无反应，其中所述用于从一组个体选择个体的方法包括使用根据实施方案1-13中任一项的化合物进行诊断方法，优选进行如实施方案14-32中任一项所描述的用于诊断疾病的方法。
[0116]
实施方案52.用于将一组个体分层为对于疾病的治疗可能有反应的个体以及分层为对于疾病的治疗可能无反应的个体的方法的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合
物，其中所述对一组个体分层的方法包括使用根据实施方案1-13中任一项的化合物进行诊断方法，优选进行如实施方案14-32中任一项所描述的用于诊断疾病的方法。
[0117]
实施方案53.用于根据实施方案50-52中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是涉及成纤维细胞活化蛋白(fap)、优选成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的疾病。
[0118]
实施方案54.用于根据实施方案50-53中任一项的用途的化合物，其中所述疾病涉及显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0119]
实施方案55.用于根据实施方案50-54中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是瘤，优选癌症或肿瘤。
[0120]
实施方案56.用于根据实施方案55的用途的化合物，其中所述瘤、癌症或肿瘤各自且独立地选自实体瘤、上皮瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胆管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌和甲状腺癌。
[0121]
实施方案57.用于根据实施方案56的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自乳腺癌、结直肠癌、胆管癌、头颈癌、肺癌、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和鳞状细胞癌。
[0122]
实施方案58.用于根据实施方案50-54中任一项的用途的化合物，其中所述疾病选自炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病。
[0123]
实施方案59.用于根据实施方案58的用途的化合物，其中所述疾病是炎症性疾病。
[0124]
实施方案60.用于根据实施方案59的用途的化合物，其中所述疾病是动脉粥样硬化、关节炎或类风湿关节炎。
[0125]
实施方案61.用于根据实施方案58的用途的化合物，其中所述疾病是心血管疾病。
[0126]
实施方案62.用于根据实施方案61的用途的化合物，其中所述疾病是涉及动脉粥样硬化斑块的心血管疾病。
[0127]
实施方案63.用于根据实施方案62的用途的化合物，其中所述疾病是由于斑块破裂导致的动脉粥样硬化病变、急性冠脉综合征、心肌梗塞、血栓形成或血管闭塞。
[0128]
实施方案64.用于根据实施方案58的用途的化合物，其中所述疾病是纤维化疾病。
[0129]
实施方案65.用于根据实施方案64的用途的化合物，其中所述疾病选自特发性肺纤维化、crohn病和肝纤维化。
[0130]
实施方案66.用于根据实施方案50-65中任一项的用途的化合物，其中所述诊断方法是成像方法。
[0131]
实施方案67.用于根据实施方案66的用途的化合物，其中所述成像方法选自闪烁扫描术、单光子发射计算机断层扫描显像术(spect)和正电子发射断层摄影术(pet)。
[0132]
实施方案68.用于根据实施方案50-67中任一项的用途的化合物，其中所述化合物包括诊断活性核素，优选诊断活性放射性核素。
[0133]
实施方案69.用于根据实施方案68的用途的化合物，其中所述诊断活性核素选自
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[0134]
实施方案70.用于在将效应物递送至成纤维细胞活化蛋白(fap)、优选人成纤维细胞活化蛋白(fap)的方法中的用途的根据实施方案1-13中任一项的化合物，其中所述效应物选自诊断活性剂和治疗活性剂。
[0135]
实施方案71.用于根据实施方案70的用途的化合物，其中所述效应物选自诊断活性核素和治疗活性核素。
[0136]
实施方案72.用于根据实施方案71的用途的化合物，其中所述诊断活性核素是诊断活性放射性核素。
[0137]
实施方案73.用于根据实施方案72的用途的化合物，其中所述诊断活性放射性核素选自
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i。
[0138]
实施方案74.用于根据实施方案70-73中任一项的用途的化合物，其中所述成纤维细胞活化蛋白(fap)由细胞表达，优选由成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达，更优选由人成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达，最优选由显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的人成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达。
[0139]
实施方案75.用于根据实施方案74的用途的化合物，其中所述细胞包含于组织中或者是组织的一部分，所述组织优选是患病个体的病变组织。
[0140]
实施方案76.用于根据实施方案75的用途的化合物，其中所述疾病涉及显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0141]
实施方案77.用于根据实施方案75至76中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是瘤，优选癌症或肿瘤。
[0142]
实施方案78.用于根据实施方案77的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自实体瘤、上皮瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胆管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌和甲状腺癌。
[0143]
实施方案79.用于根据实施方案78的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自乳腺癌、结直肠癌、胆管癌、头颈癌、肺癌、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肉瘤和鳞状细胞癌。
[0144]
实施方案80.用于根据实施方案75至76中任一项的用途的化合物，其中所述疾病选自炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病。
[0145]
实施方案81.用于根据实施方案80的用途的化合物，其中所述疾病是炎症性疾病。
[0146]
实施方案82.用于根据实施方案81的用途的化合物，其中所述疾病是动脉粥样硬化、关节炎或类风湿关节炎。
[0147]
实施方案83.用于根据实施方案80的用途的化合物，其中所述疾病是心血管疾病。
[0148]
实施方案84.用于根据实施方案83的用途的化合物，其中所述疾病是涉及动脉粥样硬化斑块的心血管疾病。
[0149]
实施方案85.用于根据实施方案84的用途的化合物，其中所述疾病是由于斑块破
裂导致的动脉粥样硬化病变、急性冠脉综合征、心肌梗塞、血栓形成或血管闭塞。
[0150]
实施方案86.用于根据实施方案80的用途的化合物，其中所述疾病是纤维化疾病。
[0151]
实施方案87.用于根据实施方案86的用途的化合物，其中所述疾病选自特发性肺纤维化、crohn病和肝纤维化。
[0152]
实施方案88.用于根据实施方案71的用途的化合物，其中所述治疗活性核素是治疗活性放射性核素。
[0153]
实施方案89.用于根据实施方案88的用途的化合物，其中所述治疗活性放射性核素选自
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[0154]
实施方案90.用于根据实施方案88至89中任一项的用途的化合物，其中所述成纤维细胞活化蛋白(fap)由细胞表达，优选由成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达，更优选由人成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达，最优选由显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的人成纤维细胞、间充质干细胞、平滑肌细胞、上皮来源的细胞、或内皮细胞表达。
[0155]
实施方案91.用于根据实施方案90的用途的化合物，其中所述细胞包含于组织中或者是组织的一部分，所述组织优选是患病个体的病变组织。
[0156]
实施方案92.用于根据实施方案91的用途的化合物，其中所述疾病涉及显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0157]
实施方案93.用于根据实施方案90-92中任一项的用途的化合物，其中所述疾病是瘤，优选癌症或肿瘤。
[0158]
实施方案94.用于根据实施方案93的用途的化合物，其中所述瘤、癌症和肿瘤各自且独立地选自实体瘤、上皮瘤、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结直肠癌、胆管癌、子宫内膜癌、食管癌、胃癌、胃肠道间质瘤、头颈癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤、间皮瘤、神经内分泌肿瘤和癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、肾细胞癌、涎腺癌、肉瘤、鳞状细胞癌和甲状腺癌。
[0159]
实施方案95.组合物，优选药物组合物，其中所述组合物包含根据实施方案1-13中任一项的化合物及药物可接受的赋形剂。
[0160]
实施方案96.根据实施方案95的组合物，其用于前述权利要求中任一项所定义的任何方法。
[0161]
实施方案97.用于诊断个体的疾病的方法，其中所述方法包括向所述个体施用诊断有效量的根据实施方案1-13中任一项的化合物。
[0162]
实施方案98.根据实施方案97的方法，其中所述化合物包括诊断活性剂，由此所述药剂优选是放射性核素。
[0163]
实施方案99.用于治疗个体的疾病的方法，其中所述方法包括向个体施用治疗有效量的根据实施方案1-13中任一项的化合物。
[0164]
实施方案100.根据实施方案99的方法，其中所述化合物包括治疗活性剂，由此所述药剂优选是放射性核素。
[0165]
实施方案101.根据实施方案97-100中任一项的方法，其中所述疾病是涉及成纤维
细胞活化蛋白(fap)、优选成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的疾病。
[0166]
实施方案102.根据实施方案97-101中任一项的方法，其中所述疾病涉及示显示纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞，优选含有显示成纤维细胞活化蛋白(fap)表达上调的细胞的病变组织，更优选涉及肿瘤相关成纤维细胞的疾病。
[0167]
实施方案103.根据实施方案91-102中任一项的方法，其中所述疾病选自瘤，优选癌症或肿瘤，以及炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病。
[0168]
实施方案104.药盒，其包含根据实施方案1-13任一项的化合物、一种或多种任选的赋形剂和任选存在的一种或多种装置，其中所述装置选自标记装置、纯化装置、操作装置、放射防护装置、分析装置或施用装置。
[0169]
实施方案105.根据实施方案104的药盒，其用于前述权利要求中任一项所定义的任何方法中。
[0170]
更具体地，本发明所基于的问题在第一方面通过选自以下的化合物得以解决：
[0171]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3554)
[0172]
及
[0173]
具有下式的化合物hex-[cys(tmebn(dota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3407)
[0174][0175]
更具体地，本发明所基于的问题在第二方面通过根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物在用于诊断疾病的方法中的用途而得以解决。
[0176]
更具体地，本发明所基于的问题在第三方面通过根据第一方面、包括其任何实施
方案的化合物在用于治疗疾病的方法中的用途而得以解决。
[0177]
更具体地，本发明所基于的问题在第四方面通过根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物在用于鉴定个体的方法中的用途而得以解决，其中所述个体对于疾病的治疗可能有反应或可能没有反应，其中所述鉴定个体的方法包括使用根据第一方面的化合物、包括其任何实施方案进行诊断方法。
[0178]
更具体地，本发明所基于的问题在第五方面通过根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物在用于从一组个体选择个体的方法中的用途而得以解决，其中所述个体对于疾病的治疗可能有反应或可能无反应，其中所述从一组个体选择个体的方法包括使用根据第一方面的化合物、包括任何实施方案进行诊断方法。
[0179]
更具体地，本发明所基于的问题在第六方面通过根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物在将一组个体分层为对于疾病的治疗可能有反应的个体以及分层为对于疾病的治疗可能无反应的个体的方法中的用途而得以解决，其中所述对一组个体进行分层的方法包括使用根据第一方面的化合物、包括其任何实施方案进行诊断方法。
[0180]
更具体地，本发明所基于的问题在第七方面通过组合物、优选药物组合物而得以解决，其中所述组合物包含根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物以及药学上可接受的赋形剂。
[0181]
更具体地，本发明所基于的问题在第八方面通过用于诊断个体的疾病的方法而得以解决，其中所述方法包括向所述个体施用诊断有效量的根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物。
[0182]
更具体地，本发明所基于的问题在第九方面通过治疗个体的疾病的方法而得以解决，其中所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的根据第一方面、包括任何其实施方案的化合物。
[0183]
更具体地，本发明所基于的问题在第十方面通过包含根据第一方面、包括其任何实施方案的化合物、一种或多种任选的赋形剂和任选存在的一种或多种装置的药盒而得以解决，其中所述装置选自标记装置、纯化装置、操作装置、放射防护装置、分析装置或施用装置。
[0184]
本领域技术人员会认识到，本发明的一种或所述化合物是本文公开的任何化合物，包括但不限于任何上述实施方案和任何以下实施方案中描述的任何化合物。
[0185]
本领域技术人员将认识到，本发明的一种或所述方法是本文公开的任何方法，包括但不限于任何上述实施方案和任何以下实施方案中描述的任何方法。
[0186]
本领域技术人员将认识到，本发明的一种或所述组合物是本文公开的任何组合物，包括但不限于任何上述实施方案和任何以下实施方案中描述的任何组合物。
[0187]
本领域技术人员将认识到，本发明的一种或所述药盒是本文公开的任何药盒，包括但不限于任何上述实施方案和任何以下实施方案中描述的任何药盒。
[0188]
本发明基于本发明人的惊人发现，即本发明的化合物、更特别是其环状肽提供包含这种环状肽的化合物与成纤维细胞活化蛋白(fap)的高度特异性结合，因为迄今为止尚未描述具有纳摩尔亲和性的基于fap特异性环状肽的抑制剂。
[0189]
最后，本发明人发现本发明的化合物在血浆中惊人地稳定，而且惊人地可用作显像剂以及有效地缩小肿瘤。
[0190]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，螯合剂是能形成螯合剂的化合物，其中螯合剂是化合物，优选其中金属或具有电子间隙或孤对电子的部分参与环形成的环状化合物。更优选地，螯合剂是这类化合物，其中单个配体在中心原子处占据多于一个的配位点。
[0191]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，诊断活性化合物是适于或可用于诊断疾病的化合物。
[0192]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，诊断剂或诊断活性剂是适于或可用于诊断疾病的化合物。
[0193]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，治疗活性化合物适于或可用于治疗疾病的化合物。
[0194]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，治疗剂或治疗活性剂是适于或可用于治疗疾病的化合物。
[0195]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，治疗诊断活性化合物是适于或可用于诊断和治疗疾病的化合物。
[0196]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，治疗诊断剂或治疗诊断活性剂是适于或可用于诊断和治疗疾病的化合物。
[0197]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，治疗诊断是用于组合地诊断和治疗疾病的方法；优选地，用于治疗诊断法中的组合的诊断和治疗活性化合物是放射标记的。
[0198]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，疾病的治疗是疾病的治疗和/或预防。
[0199]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，涉及fap的疾病是这样的疾病，其中表达(优选以上调方式)fap的细胞(包括但不限于成纤维细胞)以及表达fap或者含有或包含优选以上调方式表达fap的细胞(例如成纤维细胞)的组织分别是疾病和/或疾病的症状的原因，或者是疾病潜在病理的一部分。优选的表达fap的细胞是癌症相关成纤维细胞(caf)。在所述疾病的实施方案中，优选当与疾病的治疗、处理和/或疗法结合使用时，分别影响所述细胞、所述组织和病理导致疾病和/或疾病症状的治愈、治疗或改善。在所述疾病的实施方案中，优选当与疾病的诊断和/或进行诊断结合使用时，对表达fap的细胞和/或表达fap的组织进行标记允许将所述细胞和/或所述组织与健康的或不表达fap的细胞和/或健康的或不表达fap的组织加以区别或区分。更优选地，这种区别或区分分别形成所述诊断和进行诊断的基础。在其实施方案中，标记是指可检测标记与表达fap的细胞和/或表达fap的组织或含有这种表达fap的细胞的组织直接或间接的相互作用；更优选地，这种相互作用涉及或基于所述标记或带有这种标记的化合物与fap的相互作用。
[0200]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，靶细胞是这样的细胞，其表达fap并且是疾病和/或疾病症状的原因，或者是疾病潜在病理的一部分。
[0201]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，非靶细胞是指这样的细胞，其不表达fap和/或不是疾病和/或疾病症状的原因，或不是疾病潜在病理的一部分。
[0202]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，瘤是细胞的异常新生长。瘤中的细胞比正常细胞更快生长，如果不治疗则会继续生长。瘤可以是良性的或恶性的。
[0203]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，肿瘤是团块病变，其可以是良性的或恶性的。
[0204]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，癌症是恶性瘤。
[0205]
本领域技术人员会理解，本文提供的肽的氨基酸序列以典型的肽序列格式描述。例如，常规氨基酸的三个字母代码、或非常规氨基酸的代码、或其他构件的缩写表示所述氨基酸或构件在肽序列中的特定位置存在。每个氨基酸或构件的代码通过连字符(通常代表酰胺键)连接于序列中下一个和/或前一个氨基酸或构件的代码。
[0206]
在氨基酸含有多于一个氨基和/或羧基的情况中，这个氨基酸的所有方向原则上都是可能的，但在α-氨基酸中，优选利用α-氨基和α-羧基，其他优选方向是明确指定的。
[0207]
对于氨基酸，在其缩写中，第一个字母表示c-α-原子的立体化学(如果适用)。例如，大写的首字母表示肽序列中存在l型氨基酸，而小写的首字母表示肽序列中存在d型的相应氨基酸。
[0208]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，芳族l-α-氨基酸是包含芳基基团的任何种类的l-α-氨基酸。
[0209]
在一个实施方案中以及如本文优选使用的，杂芳族l-α-氨基酸是包含杂芳基的任何种类的l-α-氨基酸。
[0210]
除非有相反说明，否则氨基酸序列在本文中以n末端至c末端方向呈现。
[0211]
本发明的化合物通常包含如本文所提供的氨基酸序列。常规的氨基酸(也称为天然氨基酸)是根据其标准的三字母缩写和一个字母缩写进行识别，如表2所示。
[0212]
表2：常规氨基酸及其缩写
[0213]
氨基酸3个字母的缩写1个字母的缩写丙氨酸alaa精氨酸argr天冬酰胺asnn天冬氨酸aspd半胱氨酸cysc谷氨酸glue谷氨酰胺glnq甘氨酸glyg组氨酸hish异亮氨酸ilei亮氨酸leul赖氨酸lysk甲硫氨酸metm苯丙氨酸phef脯氨酸prop丝氨酸sers苏氨酸thrt色氨酸trpw酪氨酸tyry缬氨酸valv
[0214]
非常规氨基酸(也称为非天然氨基酸)是包含氨基和羧基而且不是常规氨基酸的任何类型的非低聚化合物。
[0215]
用于构建本发明的化合物的非常规氨基酸和其他构件的实例根据表3中其缩写或名称进行识别。一些构件的结构用将所述构件引入肽的示例性反应物(例如羧酸样)描绘，或者这些构件以完全连接到另一结构例如肽或氨基酸的残基示出。氨基酸的结构显示为明确的氨基酸，而不是氨基酸残基(它们以此方式在执行后呈现在肽序列中)。为清楚起见，还示出了由多于一个部分组成的一些较大的化学部分。
[0216]
表3：非天然氨基酸及其他构件和化学部分的缩写、名称和结构
[0217]
[0218]
[0219][0220]
根据本技术，dota表示1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸。
[0221]
本领域技术人员会进一步意识到，如果没有另外说明，则所述螯合剂在本发明化合物中的存在包括所述螯合剂与任何金属络合物配偶体(即理论上可以被所述螯合剂络合的任何金属)络合的可能。明确提及的本发明化合物的螯合剂或与本发明化合物相关的通用术语螯合剂是指未络合的螯合剂本身，或是指结合任何金属络合物配偶体的螯合剂，其中所述金属络合物配偶体是任何放射性或非放射性金属络合物配偶体。优选所述螯合剂金属络合物，即金属络合物配偶体所结合的螯合剂，是稳定的螯合剂金属络合物。
[0222]
非放射性螯合剂金属络合物有多种应用，例如用于评估诸如稳定性或活性的难以确定的特性。一个方面是金属络合物配偶体的放射性形式的冷变体(例如实施例中描述的
非放射性镓、镥或铟络合物)可以充当放射性化合物的替代物。此外，它们是在体外或体内鉴定代谢物以及评估本发明化合物的毒性性质的有价值的工具。此外，螯合剂金属络合物可用于结合测定中，利用一些具有不同配体的金属络合物(例如铕盐)荧光特性。
[0223]
本领域技术人员会认可，要分别考虑待治疗的疾病和/或待诊断的疾病和/或分别考虑待治疗和待诊断的患者和患者组的特性，来选择与或者要与本发明的化合物连接的放射性核素。
[0224]
在本发明的一个实施方案中，所述放射活性核素也称为放射性核素。放射性衰变是不稳定原子的原子核通过发射电离粒子(电离辐射)而失去能量的过程。有不同类型的放射性衰变。当具有一种类型原子核的原子(称为母体放射性核素)转变为具有不同状态的原子核或包含不同数量的质子和中子的原子核时，导致能量衰减或损失。这些产物中的任何一个都被命名为子体核素。在某些衰变中，母体和子体是不同的化学元素，因此衰变过程会导致核嬗变(产生新元素的原子)。例如，放射性衰变可以是α衰变、β衰变和γ衰变。当原子核喷射出一个α粒子(氦核)时，发生α衰变。这是最常见的发射核子的过程，但在更罕见的衰变类型中，原子核可以喷射质子，或其他元素的特定核子(在这个过程中称为簇衰变)。在质子变成中子的过程中或者相反，在原子核发射电子(β-‑
衰变)或正电子(β
-衰变)和一种类型中微子时，发生β衰变。相比之下，存在不会导致嬗变的放射性衰变过程。受激核的能量可以在γ衰变中以γ射线的形式发射，或用于通过与受激核在称为内部转换的过程中相互作用而喷射轨道电子，或用于从电子壳层吸收内部原子电子，从而核质子转变为中子导致为电子俘获(ec)的过程中发射电子中微子，或者在称为同质异能跃迁(it)的过程中可以在不改变质子和中子数量的情况下发射。一种形式的放射性衰变，即自发裂变(sf)，仅在非常重的化学元素中发现，导致自发分解成较小的原子核和一些孤立的核粒子。
[0225]
在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素可用于标记本发明的化合物。
[0226]
在本发明的一个实施方案中，所述放射性核素适合与螯合剂络合，形成放射性核素螯合络合物。
[0227]
在另一个实施方案中，本发明化合物的一个或多个原子具有非天然同位素组成，优选这些原子是放射性核素；更优选碳、氧、氮、硫、磷和卤素的放射性核素：这些放射性原子通常是本发明化合物的氨基酸(在某些情况下是含卤素的氨基酸)和/或构件(在某些情况下是卤化构件)的一部分。
[0228]
在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素具有允许诊断和/或治疗性医学用途的半衰期。具体来说，所述半衰期为1分钟至100天。
[0229]
在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素具有允许诊断和/或治疗性医学用途的衰变能。具体地，对于γ发射同位素，对于诊断用途而言，衰变能为0.004至10mev，优选0.05至4mev。对于正电子发射同位素，对于诊断用途而言，衰变能为0.6至13.2mev，优选1至6mev。对于粒子发射同位素，对于治疗用途而言，衰变能为0.039至10mev，优选0.4至6.5mev。
[0230]
在本发明的优选实施方案中，所述放射性核素是工业生产的，以用于医学用途。具体来说，所述放射性核素可达到gmp质量。
[0231]
在本发明的优选实施方案中，放射性核素的放射性衰变后的子体核素与诊断和/或治疗性医学用途相容。此外，子体核素是稳定的，或以不干扰或甚至支持诊断和/或治疗
性医学用途的方式进一步衰变。可结合本发明使用的代表性放射性核素总结在表4中。
[0232]
表4：相关放射性核素的关键性质—半衰期、衰变类型和衰变能
[0233]
[0234]
[0235]
[0236]
[0237]
[0238]
[0239]
[0240]
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[0244]
[0245]
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[0247]
[0248]
[0249]
[0250]
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[0254]
[0255]
[0256]
[0257]
[0258]
[0259]
[0260]
[0261]
[0262]
[0263]
[0264]
[0265][0266]
在本发明的一实施方案中，所述放射性核素用于诊断。优选地，所述放射性同位素选自但不限于
43
sc、
44
sc、
51
mn、
52
mn、
64
cu、
67
ga、
68
ga、
86
y、
89
zr、
94m
tc、
99m
tc、
111
in、
152
tb、
155
tb、
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lu、
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tl、
203
pb、
18
f、
76
br、
77
br、
123
i、
124
i、
125
i。更优选地，所述放射性核素选自
43
sc、
44
sc、
64
cu、
67
ga、
68
ga、
86
y、
89
zr、
99m
tc、
111
in、
152
tb、
155
tb、
203
pb、
18
f、
76
br、
77
br、
123
i、
124
i、
125
i。甚至更优选地，所述放射性核素选自
64
cu、
68
ga、
89
zr、
99m
tc、
111
in、
18
f、
123
i和
124
i。然而，本领域技术人员也会意识到，所述放射性核素的用途不限于诊断目的，而是包括在与本发明的化合物缀合时在治疗和治疗诊断中的用途。
[0267]
在本发明的个实施方案中，所述放射性核素用于治疗。优选地，所述放射性同位素选自
47
sc、
67
cu、
89
sr、
90
y、
111
in、
153
sm、
149
tb、
161
tb、
177
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pb、
213
bi、
223
ra、
225
ac、
226
th、
227
th、
131
i、
211
at。更优选地，所述放射性同位素选自
47
sc、
67
cu、
90
y、
177
lu、
188
re、
212
pb、
213
bi、
225
ac、
227
th、
131
i、
211
at。甚至更优选地，所述放射性核素选自
90
y、
177
lu、
225
ac、
227
th、
131
i和
211
at。然而，本领域技术人员还会意识到，所述放射性核素的用途不限于治疗目的，而是包括在与本发明的化合物缀合时在诊断和治疗诊断中的用途。
[0268]
在一实施方案中，本发明的化合物以药学可接受的盐的形式呈现。
[0269]
本发明化合物的“药学可接受的盐”优选是这样的酸盐或碱盐，其被本领域普遍认为适用于与人或动物组织接触而无过度毒性或致癌性，并且优选没有刺激性、过敏反应或者其他问题或并发症。此类盐包括碱性残基如胺的无机酸盐和有机酸盐，以及酸性残基如羧酸的碱金属盐或有机盐。本发明的化合物能够形成内盐，其也是药学上可接受的盐。
[0270]
合适的药学上可接受的盐包括但不限于酸的盐，例如盐酸、磷酸、氢溴酸、苹果酸、乙醇酸、富马酸、硫酸、氨基磺酸、磺胺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乙二磺酸、2-羟基乙基磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、水杨酸、戊二酸、抗坏血酸、双羟萘酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、丙酸、羟基马来酸、氢碘酸、苯乙酸、链烷酸如乙酸、hooc-(ch2)
n-cooh，其中n是0至4的任何整数，即0、1、2、3、或4，等等。类似地，药学上可接受的阳离子包括但不限于钠、钾、钙、铝、锂和铵。本领域普通技术人员会认识到本文提供的化合物的其他药学上可接受的盐。一般而言，可通过任何常规化学方法从含有碱性或酸性部分的母体化合物合成药学上可接受的酸或碱盐。简而言之，可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的合适碱或酸在水中、在有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备这种盐。一般来说，优选使用非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙
腈。
[0271]
本发明化合物的“药学上可接受的溶剂化物”优选是通过一种或多种溶剂分子与本发明化合物的一个或多个分子缔合形成的本发明化合物的溶剂化物。优选地，所述溶剂是本领域通常认为适合用于与人或动物的组织接触而没有过度毒性或致癌性，并且优选没有刺激性、过敏反应或者其他问题或并发症的溶剂。此类溶剂包括有机溶剂，如醇、醚、酯和胺。
[0272]
本发明化合物的“水合物”是通过一个或多个水分子与本发明化合物的一个或多个分子缔合而形成。这种水合物包括但不限于半水合物、一水合物、二水合物、三水合物和四水合物。与水合物组成无关，所有水合物通常被认为是药学上可接受的。
[0273]
本发明化合物对fap具有高结合亲和性，以及对fap具有高抑制活性。由于该高结合亲和性，本发明的化合物作为靶向剂以及在与另一部分缀合时作为靶向部分是有效的、有用的和/或适合的。如本文优选使用的，靶向剂是与靶分子相互作用的制剂，所述靶分子在本此情况中为所述fap。就本发明的化合物由此靶向的细胞和组织而言，表达所述fap的任何细胞和组织分别被靶向或可以被靶向。
[0274]
在一实施方案中，所述化合物与成纤维细胞活化蛋白(fap)相互作用，优选与具有seq id no:1的氨基酸序列的人fap或其同系物相互作用，其中所述同系物的氨基酸序列与fap具有相同性，所述相同性为seq id no:1的氨基酸序列的至少85％。在优选的实施方案中，所述相同性为90％，优选95％、96％、97％、98％或99％。
[0275]
可以如本领域技术人员已知的那样确定两个核酸分子之间的相同性。更具体地，基于指定的程序参数，可以使用序列比较算法来计算测试序列相对于参考序列的序列同源性百分比。测试序列优选是这样的序列或蛋白质或多肽，其相对于不同的蛋白质或多肽，被称为是相同的，或被测试是否相同以及如果相同，在多大程度上相同，其中这种不同的蛋白质或多肽也被称为参考序列并且优选是野生型的蛋白质或多肽，更优选是seq id no:1的人fap。
[0276]
用于比较的序列的最佳比对可以例如通过smith&waterman的局部同源算法(smith,et al.,advances in applied mathematics,1981,2:482)、通过needleman&wunsch的同源比对算法(needleman,et al.,j mol biol,1970,48:443)、通过pearson&lipman的相似性搜索方法(pearson,et al.,proc natl acad sci u s a,1988,85:2444)、通过这些算法的计算机化执行程序(gap，bestfit，fasta和tfasta，在wisconsin genetics软件包中，genetics computer group,575 science dr.,madison,wis.)，或通过目视检查而进行。
[0277]
适用于确定序列相同性百分比的算法的一个实例是在局部序列比对检索基本工具中使用的算法(以下称为“blast”)，见例如altschul等人,1990(altschul,et al.,j mol biol,1990,215:403)和altschul et al.,1997(altschul,et al.,nucleic acids res,1997,25:3389)。用于执行blast分析的软件可通过国家生物技术信息中心(以下简称ncbi)公开获得。mcginnis等人(mcginnis,et al.,nucleic acids res,2004,32:w20)描述了使用得自ncbi的软件确定序列相同性的默认参数，所述软件例如是blastn(用于核苷酸序列)和blastp(用于氨基酸序列)。
[0278]
在本发明的范围内，本发明的化合物用于或供用于治疗如本文公开的疾病的方
法。这种方法优选包括向有需要的个体施用治疗有效量的本发明化合物的步骤。这种方法包括但不限于治愈性或辅助性癌症治疗。其在不可能治愈且以局部疾病控制或症状缓解为目的的情况中用作姑息治疗，或在治疗具有生存获益的情况中用作治疗性治疗且其可以是治愈性的。
[0279]
治疗本文公开的疾病的方法包括治疗本文公开的疾病，包括肿瘤和癌症，并且可以用作主要疗法或用作二线、三线、四线或最终疗法。将本发明的化合物与其他治疗方法联合使用也在本发明范围内。本领域技术人员众所周知，包括治愈性、辅助性、新辅助性、治疗性或姑息性治疗在内的精确治疗意图会取决于肿瘤类型、位置和阶段以及患者的总体健康状况。
[0280]
在本发明的一实施方案中，所述疾病选自：瘤nos，良性瘤，不确定良性还是恶性的瘤，恶性瘤，转移性瘤，不确定原发还是转移的恶性瘤，良性肿瘤细胞，不确定良性或恶性的肿瘤细胞，恶性肿瘤细胞，小细胞型恶性肿瘤，巨细胞型恶性肿瘤，梭形细胞型恶性肿瘤，上皮瘤nos，良性上皮肿瘤，原位癌nos，癌nos，癌转移nos，癌扩散，良性上皮瘤，恶性上皮瘤，大细胞癌nos，未分化型癌nos，间变型癌nos，多形性癌，巨细胞和梭形细胞癌，巨细胞癌，梭形细胞癌，假肉瘤，多角细胞癌，球状细胞癌，微小瘤，小细胞癌nos，燕麦形细胞癌，小细胞癌，梭形细胞型、乳头状和鳞状细胞瘤，乳头状瘤nos，原位乳头状癌，乳头状癌nos，疣状乳头状瘤，疣状癌nos，鳞状细胞乳头状瘤，乳头状鳞状细胞癌，倒置乳头状瘤，乳头状瘤病nos，原位鳞状细胞癌nos，鳞状细胞癌nos，鳞状细胞癌转移nos，角化型鳞状细胞癌nos(squamous cell carcinoma,keratinizing type nos,)，大细胞非角化型鳞状细胞癌，小细胞非角化型鳞状细胞癌，梭形细胞型鳞状细胞癌，腺样鳞状细胞癌，不确定基质侵袭的原位鳞状细胞癌，微浸润型鳞状细胞癌，queyrat增殖性红斑，bowen病，淋巴上皮癌，基底细胞瘤，基底细胞肿瘤，基底细胞癌nos，多中心基底细胞癌，硬斑病型基底细胞癌，纤维上皮型基底细胞癌，基底鳞状癌，异型癌，jadassohn表皮内上皮瘤，毛上皮瘤，毛囊瘤，外毛根鞘瘤，毛母质瘤，移行细胞乳头状瘤和癌，移行细胞乳头状瘤nos，尿路上皮乳头状瘤，原位移行细胞癌，移行细胞癌nos，施奈德乳头状瘤，倒置型移行细胞乳头状瘤，施奈德癌，梭形细胞型移行细胞癌，基底细胞样癌，泄殖腔癌，乳头状移行细胞癌，腺瘤和腺癌，腺瘤nos，支气管腺瘤nos，原位腺癌，腺癌nos，转移性腺癌nos，硬腺癌，皮革状囊胃，表浅扩散性腺癌，肠型腺癌，扩散型癌，单形性腺瘤，基底细胞腺瘤，胰岛细胞腺瘤，胰岛细胞癌，胰岛瘤nos，恶性胰岛瘤，胰高血糖素瘤，恶性胰高血糖素瘤nos，胃泌素瘤nos，恶性胃泌素瘤，混合型胰岛细胞和外分泌腺癌，胆管腺瘤，胆管癌，胆管囊腺瘤，胆管囊腺癌，肝细胞腺瘤，肝细胞癌nos，良性肝胆管瘤，肝细胞癌合并胆管癌，小梁腺瘤，小梁腺癌，胚胎性腺瘤，外分泌腺真皮圆柱瘤，腺样囊性癌，筛状癌，腺瘤性息肉nos，腺瘤性息肉中的腺癌，管状腺瘤nos，管状腺癌，腺瘤性结肠息肉病，腺瘤性结肠息肉病中的腺癌，多发性腺瘤性息肉，实体癌nos，单纯癌，类癌瘤nos，恶性类癌瘤，类癌瘤银质瘤nos，恶性类癌瘤银质瘤，类癌瘤非银质瘤nos，恶性类癌瘤非银质瘤，恶性黏液类癌，复合类癌，肺腺瘤病，细支气管-肺泡腺癌，肺泡腺瘤，肺泡腺癌，乳头状腺瘤nos，乳头状腺癌nos，绒毛状腺瘤nos，绒毛状腺瘤中腺癌，绒毛状腺癌，管状绒毛状腺瘤，嫌色细胞腺瘤，嫌色细胞癌，嗜酸细胞腺瘤，嗜酸细胞癌，混合型嗜酸细胞-嗜碱细胞腺瘤，混合型嗜酸细胞-嗜碱细胞癌，亲氧性腺瘤，亲氧性腺癌，嗜碱细胞腺瘤，嗜碱细胞癌，透明细胞腺瘤，透明细胞腺癌nos，肾性肿瘤，肾细胞癌，透明细胞腺纤维瘤，颗
粒细胞癌，主细胞腺瘤，水透明细胞腺瘤，水透明细胞腺癌，混合细胞腺瘤，混合细胞腺癌，脂肪腺瘤，滤泡状腺瘤，滤泡状腺癌nos，高分化型滤泡状腺癌，小梁型滤泡状腺癌，微滤泡腺瘤，大滤泡腺瘤，乳头状和滤泡状腺癌，无包膜硬化型癌，多发性内分泌腺瘤，肾小球旁肿瘤，肾上腺皮质腺瘤nos，肾上腺皮质癌，紧凑细胞型肾上腺皮质腺瘤，重度色素变异型肾上腺皮质腺瘤，透明细胞型肾上腺皮质腺瘤，肾小球细胞型肾上腺皮质腺瘤，混合细胞型肾上腺皮质腺瘤，子宫内膜样腺瘤nos，子宫内膜样腺瘤，交界性恶性肿瘤，子宫内膜样癌，子宫内膜样腺纤维瘤nos，子宫内膜样腺纤维瘤交界性恶性肿瘤，恶性子宫内膜样腺纤维瘤，附件和皮肤附属器肿瘤，皮肤附属器腺瘤，皮肤附属器癌，汗腺腺瘤，汗腺肿瘤nos，汗腺腺癌，顶泌腺瘤，顶泌腺癌，小汗腺顶螺旋体瘤，小汗腺螺旋腺瘤，汗腺囊瘤，乳头状汗腺囊瘤,乳头状汗腺腺瘤，汗管瘤nos，皮脂腺瘤，皮脂腺癌，蜡样腺瘤，蜡样腺癌，粘液表皮样肿瘤赘生物，粘液表皮样肿瘤，粘液表皮样囊性癌，粘液性和浆液性肿瘤，囊腺瘤nos，囊腺癌nos，浆液性囊腺瘤nos，浆液性囊腺瘤交界性恶性肿瘤，浆液性囊腺癌nos，乳头状囊腺瘤nos，乳头状囊腺瘤交界性恶性肿瘤，乳头状囊腺癌nos，乳头状浆液性囊腺瘤nos，乳头状浆液性囊腺瘤交界性恶性肿瘤，乳头状浆液性囊腺癌，浆液性表面乳头状瘤nos，浆液性表面乳头状瘤交界性恶性肿瘤，浆液性表面乳头状癌，粘液性囊腺瘤nos，粘液性囊腺瘤交界性恶性肿瘤，粘液性囊腺癌nos，乳头状粘液性囊腺瘤nos，乳头状粘液性囊腺瘤交界性恶性肿瘤，乳头状粘液性囊腺癌，粘液性腺瘤，粘液性腺癌，腹膜假粘液瘤，产生粘蛋白的腺癌，印戒细胞癌，转移的印戒细胞癌，导管，小叶和髓质肿瘤，非浸润性导管内癌nos，浸润性导管癌，粉刺性癌，非浸润性粉刺性癌nos，青少年乳腺癌，导管内乳头状瘤，非浸润性导管内乳头状腺癌，囊内乳头状腺瘤，非浸润性囊内癌，导管内乳头状瘤病nos，乳晕下导管乳头瘤病，髓样癌nos，髓样癌伴淀粉样基质，髓样癌伴淋巴样基质，原位小叶癌，小叶癌nos，浸润性导管癌，炎性癌，乳腺佩吉特病，佩吉特病和乳腺浸润性导管癌，乳腺外佩吉特病，腺泡细胞肿瘤赘生物，腺泡细胞腺瘤，腺泡细胞肿瘤，腺泡细胞癌，复杂上皮肿瘤，腺鳞癌，腺淋巴瘤，腺癌伴鳞状上皮化生，腺癌伴软骨和骨化生，腺癌伴梭形细胞化生，腺癌伴大汗腺化生，良性胸腺瘤，恶性胸腺瘤，特化性腺瘤，性索间质瘤，泡膜细胞瘤nos，膜细胞癌，黄体瘤nos，颗粒细胞瘤nos，恶性颗粒细胞瘤，颗粒细胞膜细胞瘤，良性雄性细胞瘤，男性母细胞瘤nos，恶性男性母细胞瘤，间质细胞瘤，男性细胞瘤，管状男性母细胞瘤nos，支持细胞癌，具有脂质储存的管状男性母细胞瘤，良性支持细胞瘤，支持细胞瘤nos，恶性支持细胞瘤，门细胞瘤，卵巢脂质细胞瘤，肾上腺剩余肿瘤，副神经节瘤和血管球瘤，副神经节瘤nos，恶性副神经节瘤，交感神经副神经节瘤，副交感神经节瘤，颈静脉球瘤，主动脉体瘤，颈动脉体瘤，肾上腺外副神经节瘤nos，恶性肾上腺外副神经节瘤，嗜铬细胞瘤nos，恶性嗜铬细胞瘤，血管球肉瘤，血管球肿瘤，血管球瘤，痣和黑色素瘤，色素痣nos，恶性黑色素瘤nos，结节性黑色素瘤，气球状细胞痣，气球细胞黑色素瘤，晕痣，鼻部纤维性丘疹，真皮内痣，巨细胞痣，无色素痣，无黑素性黑素瘤，交界痣，交界痣恶性黑色素瘤，癌前黑色素沉着病nos，恶性癌前黑色素沉着病，哈金森黑色素雀斑，哈金森黑色素雀斑中恶性黑色素瘤，浅表扩散性黑色素瘤，皮内痣，复合痣，巨大色素痣，巨大色素痣中恶性黑色素瘤，上皮样和梭形细胞痣，上皮样细胞黑色素瘤，梭形细胞黑色素瘤nos，梭形细胞黑色素瘤a型，梭形细胞黑色素瘤b型，混合上皮样和梭形细胞黑色素瘤，蓝色痣nos，恶性蓝色痣，细胞蓝痣，软组织肿瘤和肉瘤nos，软组织肿瘤，良性肉瘤nos，肉瘤病nos，梭形细胞肉瘤，巨细胞肉瘤，小细胞肉瘤，上皮样细胞肉瘤，纤维
瘤性肿瘤，纤维瘤nos，纤维肉瘤nos，纤维粘液瘤，纤维粘液肉瘤，骨膜纤维瘤，骨膜纤维肉瘤，筋膜纤维瘤，筋膜纤维肉瘤，婴儿纤维肉瘤，弹性纤维瘤，侵袭性纤维瘤病，腹部纤维瘤病，成纤维性纤维瘤，纤维性组织细胞瘤nos，非典型纤维性组织细胞瘤，恶性纤维性组织细胞瘤，纤维黄瘤nos，非典型纤维黄瘤，恶性纤维黄瘤，皮肤纤维瘤nos，隆突性皮肤纤维瘤，皮肤纤维肉瘤nos，粘液瘤，粘液瘤nos，粘液肉瘤，脂肪瘤，脂肪瘤nos，脂肪肉瘤nos，纤维脂肪瘤，高分化型脂肪肉瘤，纤维粘液脂肪瘤，粘液样脂肪肉瘤，圆细胞脂肪肉瘤，多形脂肪肉瘤，混合型脂肪肉瘤，肌内脂肪瘤，梭形细胞脂肪瘤，血管平滑肌脂肪瘤，血管平滑肌脂肪肉瘤，血管脂肪瘤nos，浸润性血管脂肪瘤，骨髓脂肪瘤，蛰伏脂瘤，成脂细胞瘤病，肌瘤性肿瘤，平滑肌瘤nos，血管内平滑肌瘤，平滑肌肉瘤nos，上皮样平滑肌瘤，上皮样平滑肌肉瘤，细胞平滑肌瘤，奇异型平滑肌瘤，血管肌瘤，血管肌肉瘤，肌瘤，肌肉瘤，横纹肌瘤nos，横纹肌肉瘤nos，多形性横纹肌肉瘤，混合型横纹肌肉瘤，胎儿横纹肌瘤，成人横纹肌瘤，胚胎性横纹肌肉瘤，腺泡横纹肌肉瘤，复杂的混合和间质肿瘤，子宫内膜间质肉瘤，淋巴管内间质肌病，腺肌瘤，多形性腺瘤，混合瘤，恶性mullerian混合瘤nos，中胚层混合瘤，中胚层肾瘤，肾母细胞瘤nos，上皮性肾母细胞瘤，间叶性肾母细胞瘤，肝母细胞瘤，癌肉瘤nos，胚胎型癌肉瘤，肌上皮瘤，良性间质瘤，间质瘤nos，恶性间充质瘤，胚胎肉瘤，纤维上皮肿瘤，布伦纳瘤nos，布伦纳瘤，交界性恶性肿瘤，恶性布伦纳瘤，纤维腺瘤nos，管内型纤维腺瘤nos，管周型纤维腺瘤，腺纤维瘤nos，浆液性腺纤维瘤，粘液性腺纤维瘤，细胞管内纤维腺瘤，叶状囊肉瘤nos，恶性叶状囊肉瘤，幼年纤维腺瘤，滑膜肿瘤，良性滑膜瘤，滑膜肉瘤nos，梭形细胞型滑膜肉瘤，上皮细胞型滑膜肉瘤，双相型滑膜肉瘤，透明细胞肌腱和腱膜肉瘤，间皮瘤，良性间皮瘤，恶性间皮瘤，良性纤维间皮瘤，恶性纤维间皮瘤，良性上皮样间皮瘤，恶性上皮样间皮瘤，双相型良性间皮瘤，双相型恶性间皮瘤，腺瘤样肿瘤nos，生殖细胞肿瘤，无性细胞瘤，精原细胞瘤nos，未分化型精原细胞瘤，精母细胞性精原细胞瘤，生殖细胞瘤，胚胎癌nos，内胚窦瘤，多胚瘤，性腺胚细胞瘤，良性畸胎瘤，畸胎瘤nos，恶性畸胎瘤nos，畸胎癌，未分化型恶性畸胎瘤，中间型恶性畸胎瘤，皮样囊肿，恶性转化的皮样囊肿，甲状腺肿样卵巢瘤，恶性甲状腺肿样卵巢瘤，间质类癌，滋养细胞肿瘤，葡萄胎nos，侵袭性葡萄胎，绒毛膜癌，绒毛膜癌合并畸胎瘤，恶性滋养细胞畸胎瘤，中肾瘤，良性中肾瘤，中肾肿瘤，恶性中肾瘤，输卵管内膜瘤，血管肿瘤，血管瘤nos，血管肉瘤，海绵状血管瘤，静脉血管瘤，蔓状血管瘤，枯否细胞肉瘤，良性血管内皮瘤，血管内皮瘤nos，恶性血管内皮瘤，毛细血管瘤，肌内血管瘤，卡波西肉瘤，血管角质瘤，疣状角化性血管瘤，良性血管外皮细胞瘤，血管外皮细胞瘤nos，恶性血管外皮细胞瘤，血管纤维瘤nos，成血管细胞瘤，淋巴管肿瘤，淋巴管瘤nos，淋巴管肉瘤，毛细淋巴管瘤，海绵状淋巴管瘤，囊性淋巴管瘤，淋巴管肌瘤,淋巴管肌瘤增生，血管淋巴管瘤，骨瘤和骨肉瘤，骨瘤nos，骨肉瘤nos，成软骨细胞型骨肉瘤，成纤维细胞型骨肉瘤，毛细血管扩张型骨肉瘤，佩吉特骨病中的骨肉瘤，近皮质骨肉瘤，骨样骨瘤nos，成骨细胞瘤，软骨肿瘤，骨软骨瘤，骨软骨瘤病nos，软骨瘤nos，软骨瘤病nos，软骨肉瘤nos，近皮质软骨瘤，近皮质软骨肉瘤，成软骨细胞瘤nos，恶性成软骨细胞瘤，间叶性软骨肉瘤，软骨粘液样纤维瘤，巨细胞肿瘤，骨巨细胞肿瘤nos,恶性骨巨细胞瘤，软组织巨细胞瘤nos，软组织恶性巨细胞瘤，各种骨肿瘤，尤文氏肉瘤，长骨釉质瘤，骨化纤维瘤，牙源性肿瘤，良性牙源性肿瘤，牙源性肿瘤nos，恶性牙源性肿瘤，牙质瘤，牙骨质瘤nos，良性成牙骨质细胞瘤，牙骨质化纤维瘤，巨大牙骨质瘤，牙瘤nos，组合性牙瘤，混合性牙瘤，成釉细胞纤维性牙瘤，成
釉细胞性牙肉瘤，腺瘤样牙源性肿瘤，钙化性牙源性囊肿，成釉细胞瘤nos，恶性成釉细胞瘤，牙成釉细胞瘤，牙源性鳞状细胞肿瘤，牙源性粘液瘤，牙源性纤维瘤nos，成釉细胞纤维瘤，成釉细胞纤维肉瘤，钙化上皮牙源性肿瘤，其他肿瘤，颅咽管瘤，松果体瘤，松果体细胞瘤，松果体母细胞瘤，黑色素神经外胚层肿瘤，脊索瘤，胶质瘤，恶性胶质瘤，脑胶质瘤病，混合性胶质瘤，室管膜下血管内膜样胶质细胞瘤，室管膜下巨细胞星形细胞瘤，脉络丛乳头状瘤nos，恶性脉络丛乳头状瘤，室管膜瘤nos，变性型室管膜瘤间，乳头状室管膜瘤，粘液乳头状室管膜瘤，星形细胞瘤nos，间变性型星形细胞瘤，原生质星形细胞瘤，肥胖型星形胶质细胞瘤，纤维状星形细胞瘤，毛细胞型星形细胞瘤，成胶质细胞瘤nos，极性海绵状母细胞瘤，星形母细胞瘤，成胶质细胞瘤nos，巨细胞成胶质细胞瘤，具有肉瘤成分的成胶质细胞瘤，原始极性成胶质细胞瘤，少突神经胶质细胞瘤nos，间变型少突神经胶质细胞瘤，成少突神经胶质细胞瘤，成神经管细胞瘤nos，促结缔组织增生性髓母细胞瘤，髓成肌细胞瘤，小脑肉瘤nos，怪细胞肉瘤，神经上皮瘤样肿瘤，神经节瘤，成神经节细胞瘤，神经节瘤病，成神经细胞瘤nos，髓质上皮瘤nos，畸胎样髓上皮瘤，神经上皮瘤nos，海绵状神经母细胞瘤，神经节神经胶质瘤，神经节神经胶质瘤，pacinian肿瘤，视网膜母细胞瘤nos，分化型视网膜母细胞瘤，未分化型视网膜母细胞瘤，嗅觉神经源性肿瘤，感觉神经细胞瘤,嗅神经母细胞瘤，感觉神经上皮瘤，脑膜瘤，脑膜瘤nos，脑膜瘤病nos，恶性脑膜瘤,脑膜瘤性脑膜瘤，纤维性脑膜瘤，砂粒体型脑膜瘤，血管瘤性脑膜瘤，成血管细胞性脑膜瘤,血管外皮细胞性脑膜瘤，过渡型脑膜瘤，乳头状脑膜瘤，脑膜的肉瘤病，神经鞘肿瘤，神经纤维瘤nos，神经纤维瘤病nos，神经纤维肉瘤，黑色素型神经纤维瘤，丛状神经纤维瘤，神经鞘膜瘤nos，神经鞘瘤病，恶性神经鞘膜瘤，神经瘤nos，颗粒细胞肿瘤和腺泡状软组织肉瘤，颗粒细胞肿瘤nos，恶性颗粒细胞肿瘤，腺泡状软组织肉瘤，淋巴瘤nos或弥漫型、良性淋巴瘤肿瘤，恶性淋巴瘤nos，非霍奇金型恶性淋巴瘤，未分化细胞型恶性淋巴瘤nos，干细胞型恶性淋巴瘤，曲核细胞型恶性淋巴瘤nos，淋巴肉瘤nos，淋巴浆细胞型恶性淋巴瘤，免疫母细胞型恶性淋巴瘤，混合淋巴细胞-组织细胞型恶性淋巴瘤nos，中心母细胞-中心细胞弥漫型恶性淋巴瘤，恶性淋巴瘤滤泡中心细胞nos，淋巴细胞高分化型恶性淋巴瘤nos，淋巴细胞中等分化型恶性淋巴瘤nos,中心细胞型恶性淋巴瘤，滤泡中心细胞分裂型恶性淋巴瘤nos，淋巴细胞低分化型恶性淋巴瘤nos，幼淋巴细胞淋巴肉瘤，恶性淋巴瘤中心母细胞型nos，滤泡中心细胞非裂型恶性淋巴瘤，网状细胞肉瘤，网状细胞肉瘤nos，多形性细胞型网状肉瘤，结节型网状肉瘤，霍奇金病，霍奇金病nos，淋巴细胞优势型霍奇金病，混合细胞型霍奇金病，淋巴细胞耗竭型霍奇金病nos，淋巴细胞耗竭弥漫性纤维化型霍奇金病，淋巴细胞耗竭网状型霍奇金病，结节硬化型症霍奇金病，结节硬化型霍奇金病细胞期，霍奇金病副肉芽肿，霍奇金病肉芽肿，霍奇金肉瘤，结节或滤泡型淋巴瘤，结节型恶性淋巴瘤nos，混合淋巴细胞-组织细胞结节型恶性淋巴瘤，中心母细胞型-中心细胞滤泡型恶性淋巴瘤，淋巴细胞高分化结节型恶性淋巴瘤，淋巴细胞中等分化结节型恶性淋巴瘤，滤泡中心细胞分裂滤泡型恶性淋巴瘤，淋巴细胞低分化结节型恶性淋巴瘤，中心母细胞型滤泡型恶性淋巴瘤，滤泡中心细胞非分裂滤泡型恶性淋巴瘤，蕈样真菌病，蕈样真菌病，sezary病，各种网状内皮组织瘤，小神经胶质细胞瘤，恶性组织细胞增多病，组织细胞性髓性网状细胞增生症，letterer-siwe病，浆细胞肿瘤，浆细胞骨髓瘤，良性浆细胞瘤，浆细胞瘤nos，恶性浆细胞瘤，肥大细胞肿瘤，肥大细胞瘤nos，肥大细胞肉瘤，恶性肥大细胞增多症，burkitt肿瘤，burkitt肿瘤，白血病，白血病nos，急性白血
病nos，亚急性白血病nos，慢性白血病nos，非白血性白血病nos，复合型白血病，复合白血病，淋巴性白血病，淋巴性白血病nos，急性淋巴性白血病，亚急性淋巴性白血病，慢性淋巴性白血病，非白血性淋巴性白血病，幼淋巴细胞性白血病，浆细胞性白血病，浆细胞白血病，红白血病，红白血病，急性红细胞增多症，慢性红细胞增多症，淋巴肉瘤细胞性白血病，淋巴肉瘤细胞白血病，髓系白血病，髓系白血病nos，急性髓系白血病，亚急性髓系白血病，慢性髓系白血病，非白血性髓系白血病，中性粒细胞性白血病，急性早幼粒细胞白血病，嗜碱性粒细胞性白血病，嗜碱性粒细胞白血病，嗜酸性粒细胞性白血病，嗜酸性粒细胞白血病，单核细胞白血病，单核细胞白血病nos，急性单核细胞白血病，亚急性单核细胞白血病，慢性单核细胞白血病，非白血性单核细胞白血病，其他白血病，肥大细胞白血病，巨核细胞白血病，巨核细胞骨髓组织增生病，骨髓性肉瘤，毛细胞白血病，各种骨髓增生和淋巴增生性疾病，真性红细胞增多症，急性全髓白血病，慢性骨髓增生性疾病，骨髓硬化伴髓样化生，特发性血小板增多症，慢性淋巴增生性疾病。
[0281]
在本发明的一实施方案中，所述疾病选自胰腺肿瘤，胰腺腺癌，胰头肿瘤，胰体肿瘤，胰尾肿瘤，胰管肿瘤，胰岛肿瘤，胰颈肿瘤，前列腺肿瘤，前列腺腺癌，前列腺腺体，神经内分泌肿瘤，乳腺癌，乳房中央部分肿瘤，乳房内上象限，乳房内下象限，乳房外上象限，乳房外下象限,乳房腋尾，乳房的重叠病变，青少年乳腺癌，甲状旁腺肿瘤，骨髓瘤，肺癌，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，主支气管肿瘤，肺上叶肿瘤，肺中叶肿瘤，肺下叶肿瘤，结直肠癌，升结肠肿瘤，结肠肝曲肿瘤，横结肠肿瘤，结肠脾曲肿瘤，降结肠肿瘤，乙状结肠肿瘤，结肠的重叠病变，小肠肿瘤，肝脏肿瘤，肝细胞腺瘤，肝细胞癌，肝胆管瘤，联合的肝细胞癌和胆管癌，肝母细胞瘤，卵巢癌，肉瘤，骨肉瘤，纤维肉瘤，胃肠道间质瘤，胃肠道，胃癌，甲状腺癌，甲状腺髓样癌，甲状腺，肾细胞癌，肾盂肿瘤，膀胱肿瘤，膀胱癌，膀胱三角的肿瘤，膀胱顶肿瘤，膀胱侧壁肿瘤，膀胱后壁肿瘤，输尿管口肿瘤，脐尿管肿瘤，膀胱的重叠病变，基底细胞癌，基底细胞肿瘤赘生物，基底细胞肿瘤，基底细胞癌，多中心基底细胞癌，基底细胞样癌，基底细胞腺瘤，鳞状细胞癌，口腔鳞状细胞癌，喉鳞状细胞癌，宫颈癌，外子宫颈肿瘤，子宫颈的重叠病变，子宫颈治肿瘤，子宫峡部肿瘤，子宫肿瘤，卵巢肿瘤，食管肿瘤，食管胸段肿瘤，食管腹段肿瘤，食管上三分之一肿瘤，食管中三分之一肿瘤，食管下三分之一肿瘤，食管的重叠病变，子宫内膜癌，头颈癌，淋巴瘤，恶性间皮瘤，间皮肿瘤，间皮瘤，纤维间皮瘤，纤维间皮瘤，上皮样间皮瘤，上皮样间皮瘤，十二指肠癌，神经内分泌肿瘤，肺神经内分泌肿瘤，胰腺神经内分泌肿瘤，前肠神经内分泌肿瘤，中肠神经内分泌肿瘤，后肠神经内分泌肿瘤，胃肠胰神经内分泌肿瘤神经内分泌肿癌，乳腺神经内分泌肿瘤，卵巢神经内分泌肿瘤，睾丸癌，胸腺癌，胃肿瘤，胃底肿瘤，胃体肿瘤，胃窦肿瘤，幽门肿瘤，胃小弯肿瘤，胃大弯肿瘤，胃重叠病变，副神经节瘤，神经节瘤，黑色素瘤，恶性黑色素瘤，结节性黑色素瘤，无色素性黑色素瘤，浅表扩散性黑色素瘤，上皮样细胞黑色素瘤，梭形细胞黑色素瘤，混合上皮样和梭形细胞黑色素瘤。
[0282]
在又一实施方案中，前述适应症可以出现在选自以下的器官和组织：外上唇，外下唇，外唇nos，上唇粘膜，下唇粘膜，唇粘膜nos，唇连合处，唇重叠病变，舌底nos，舌背侧面nos，舌边缘，舌腹侧面nos，舌前2/3nos，舌扁桃体，舌重叠病变，舌nos，上牙龈，下牙龈，牙龈nos，口前底，口侧底，口底重叠病变，口底nos，硬腭，软腭nos，悬雍垂，腭重叠病变，腭nos，颊粘膜，口腔前庭，磨牙后区，口其他和非特定部分的重叠病变，口nos，腮腺，颌下腺，
舌下腺，大唾液腺重叠病变，大唾液腺nos，扁桃体窝，扁桃体柱，扁桃体重叠病变，扁桃体nos，会厌谷，会厌前面，侧壁口咽，后壁口咽，鳃裂，口咽的重叠病变，口咽nos，鼻咽上壁，鼻咽后壁，鼻咽侧壁，鼻咽前壁，鼻咽的重叠病变，鼻咽nos，梨状隐窝，环状软骨后区，杓状会厌皱襞喉咽面，喉咽后壁，喉咽的重叠病变，喉咽nos，咽nos，咽喉，咽部淋巴环，唇口腔和咽部重叠病变，食管颈段，食管胸段，食管腹段，食管上三分之一，食管中三分之一，食管下三分之一，食管的重叠病变，食管nos，贲门，胃底，胃体，胃窦，幽门，胃小弯nos，胃大弯nos，胃的重叠病变，胃nos，十二指肠，空肠，回肠，麦克尔憩室，小肠的重叠病变，小肠nos，盲肠，阑尾，升结肠，结肠肝曲，横结肠，结肠脾曲，降结肠，乙状结肠，结肠的重叠病变，结肠nos，直肠乙状结肠交界处，直肠nos，肛门nos，肛管，泄殖腔源性区，直肠肛门和肛管的重叠病变，肝脏，肝内胆管，胆囊，肝外胆管，肝胰管壶腹，胆道的重叠病变，胆道nos，胰头，胰体，胰尾，胰管，胰岛，胰颈，胰腺的重叠病变，胰腺nos，肠道nos，消化系统的重叠病变，胃肠道nos，鼻腔，中耳，上颌窦，筛窦，额窦，蝶窦，副鼻窦的重叠病变，副鼻窦nos，声门，声门上，声门下，喉软骨，喉的重叠病变，喉nos，气管，主支气管，肺上叶，肺中叶，肺下叶，肺的重叠病变，肺nos，胸腺，心脏，前纵隔，后纵隔，纵隔nos，胸膜nos，心脏纵隔和胸膜的重叠病变，上呼吸道nos，呼吸系统和胸内器官的重叠病变，呼吸道nos，上肢长骨关节，上肢短骨关节，下肢长骨关节，下肢短骨关节，四肢骨关节和关节软骨的重叠病变，四肢骨nos，颅面骨，下颌骨，脊柱，肋骨胸骨锁骨，盆骨，骨关节和关节软骨的重叠病变，骨nos，血液，骨髓，脾脏，网状内皮系统nos，造血系统，唇部皮肤nos，眼睑nos，外耳，面部皮肤，头皮颈部皮肤，躯干皮肤，上肢皮肤，下肢皮肤，头颈部周围神经，肩臂部周围神经，腿部周围神经，胸部周围神经，腹部周围神经，盆部周围神经，周围神经干，周围神经和自主神经系统的重叠病变，自主神经系统nos，腹膜后腔，腹膜，腹膜nos，腹膜后腔和腹膜的重叠病变，头部结缔组织，臂部结缔组织，腿部结缔组织，胸部结缔组织，腹部结缔组织，盆部结缔组织，躯干结缔组织nos，皮下结缔组织和其他软组织的重叠病变，结缔组织nos，乳头，乳房中央部分，乳房内上象限，乳房内下象限，乳房外上象限，乳房外下象限，乳房腋尾，乳房的重叠病变，乳房nos，大阴唇，小阴唇，阴蒂，外阴的重叠病变，外阴nos，阴道nos，子宫颈内膜，子宫颈外膜，子宫颈的重叠病变，子宫颈，子宫峡部，子宫内膜，子宫肌层，子宫底，子宫体的重叠病变，子宫体，子宫nos，卵巢，输卵管，阔韧带，圆韧带，子宫旁组织，子宫附件，沃尔夫氏体，女性生殖器官的重叠病变，女性生殖道nos，包皮，阴茎，阴茎体，阴茎的重叠病变，阴茎nos，前列腺，隐睾，下降睾丸，睾丸nos，附睾，精索，阴囊nos，鞘膜，男性生殖器官的重叠病变，男性生殖器官nos，肾nos，肾盂，输尿管，膀胱三角区，膀胱顶，膀胱侧壁，膀胱后壁，输尿管口，脐尿管，膀胱的重叠病变，膀胱nos，尿道，尿道旁腺，泌尿器官的重叠病变，泌尿系统nos，结膜，角膜，视网膜，脉络膜，睫状体，泪腺，眼眶nos，眼和附属器的重叠病变，眼nos，脑膜，脊膜，脑膜nos，大脑，额叶，颞叶，顶叶，枕叶，脑室，小脑nos，脑干，脑的重叠病变，脑nos，脊髓，马尾神经，嗅神经，视神经，听神经，颅神经nos，脑和中枢神经系统重叠病变，神经系统nos，甲状腺，肾上腺皮质，肾上腺髓质，肾上腺nos，甲状旁腺，脑垂体，颅咽管，松果体，颈动脉体，主动脉体，内分泌腺及相关结构的重叠病变，内分泌腺nos，头面部或颈部nos，胸部nos，腹部nos，盆部nos，上肢nos，下肢nos，其他不明确的部位，不明确部位的重叠病变，头面颈部淋巴结，胸腔内淋巴结，腹内淋巴结，腋下淋巴结，腿部淋巴结，腹股沟区淋巴结，盆腔淋巴结，多区域淋巴结，淋巴结nos，原发部位不明。
[0283]
用本技术公开和要求保护的化合物治疗的个体可以联合其他非手术抗增殖(例如抗癌)药物疗法进行治疗。在一实施方案中，所述化合物可以与抗癌化合物例如细胞生长抑制化合物联合施用。细胞抑制化合物是抑制细胞生长和/或增殖的化合物(例如，小分子、核酸或蛋白质)。在一些实施方案中，细胞抑制化合物针对肿瘤的恶性细胞。在其他实施方案中，细胞抑制化合物是抑制血管平滑肌细胞或成纤维细胞生长和/或增殖的化合物。
[0284]
与本技术公开和要求保护的化合物联合使用的合适的抗增殖药或细胞抑制化合物包括抗癌药。许多可以使用的抗癌药物是众所周知的，包括但不限于：阿西维辛(acivicin)；阿柔比星(aclarubicin)；盐酸阿考达唑(acodazole hydrochloride)；阿克罗宁(acronine)；阿多来新(adozelesin)；阿地白介素(aldesleukin)；六甲蜜胺(altretamine)；安波霉素(ambomycin)；乙酸阿美蒽醌(ametantrone acetate)；氨鲁米特(aminoglutethimide)；安吖啶(amsacrine)；阿那曲唑(anastrozole)；氨茴霉素(anthramycin)；天冬酰胺酶(asparaginase)；曲林菌素(asperlin)；阿扎胞苷(azacitidine)；阿扎替派(azetepa)；阿佐霉素(azotomycin)；巴马司他(batimastat)；苄替哌(benzodepa)；比卡鲁胺(bicalutamide)；盐酸比生群(bisantrene hydrochloride)；二甲磺酸双奈法德(bisnafide dimesylate)；比折来新(bizelesin)；硫酸博莱霉素(bleomycin sulfate)；布喹那钠(brequinar sodium)；溴匹立明(bropirimine)；白消安(busulfan)；放线菌素c(cactinomycin)；卡普睾酮(calusterone)；卡醋胺(caracemide)；卡贝替姆(carbetimer)；卡铂(carboplatin)；卡莫司汀(carmustine)；盐酸卡柔比星(carubicin hydrochloride)；卡折来新(carzelesin)；西地芬戈(cedefingol)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；西罗霉素(cirolemycin)；顺铂(cisplatin)；克拉屈滨(cladribine)；甲磺酸克雷斯托(crisnatol mesylate)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；阿糖孢苷(cytarabine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；放线菌素d(dactinomycin)；盐酸柔红霉素(daunorubicin hydrochloride)；地西他滨(decitabine)；右奥马铂(dexormaplatin)；地扎胍宁(dezaguanine)；甲磺酸地扎胍宁(dezaguanine mesylate)；亚丝醌(diaziquone)；多西他赛(docetaxel)；阿霉素(doxorubicin)；盐酸阿霉素(doxorubicin hydrochloride)；屈洛昔芬(droloxifene)；柠檬酸屈洛昔芬(droloxifene citrate)；丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)；达佐霉素(duazomycin)；依达曲沙(edatrexate)；盐酸依氟鸟氨酸(eflornithine hydrochloride)；依沙芦星(elsamitrucin)；恩洛铂(enloplatin)；恩普氨酯(enpromate)；依匹哌啶(epipropidine)；盐酸表阿霉素(epirubicin hydrochloride)；厄布洛唑(erbulozole)；盐酸依索比星(esorubicin hydrochloride)；雌莫司汀(estramustine)；雌莫司汀磷酸钠(estramustine phosphate sodium)；依他硝唑(etanidazole)；依托泊苷(etoposide)；磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)；艾托卜宁(etoprine)；盐酸法倔唑(fadrozole hydrochloride)；法扎拉滨(fazarabine)；维甲酰酚胺(fenretinide)；氟尿苷(floxuridine)；磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；fluorocitabine；磷喹酮(fosquidone)；福司曲星钠(fostriecin sodium)；吉西他滨(gemcitabine)；盐酸吉西他滨(gemcitabine hydrochloride)；羟基脲(hydroxyurea)；盐酸伊达比星(idarubicin hydrochloride)；异环磷酰胺(ifosfamide)；伊莫福新(ilmofosine)；干扰素alfa-2a；干扰素alfa-2b；干扰素alfa-n1；干扰素alfa-n3；干扰素beta-i a；干扰素gamma-i b；异丙铂
(iproplatin)；盐酸伊立替康(irinotecan hydrochloride)；醋酸兰瑞肽(lanreotide acetate)；来曲唑(letrozole)；醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)；盐酸利阿唑(liarozole hydrochloride)；洛美曲索钠(lometrexol sodium)；环己亚硝脲(lomustine)；盐酸洛索蒽醌(losoxantrone hydrochloride)；马索罗酚(masoprocol)；美登素(maytansine)；盐酸氮芥(mechlorethamine hydrochloride)；醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)；醋酸美伦孕酮(melengestrol acetate)；美法仑(melphalan)；美诺立尔(menogaril)；巯嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；甲氨蝶呤钠(methotrexate sodium)；氯苯氨啶(metoprine)；美妥替哌(meturedepa)；米丁度胺(mitindomide)；mitocarcin；mitocromin；米托洁林(mitogillin)；米托马星(mitomalcin)；丝裂霉素(mitomycin)；米托司培(mitosper)；米托坦(mitotane)；盐酸米托蒽醌(mitoxantrone hydrochloride)；霉酚酸(mycophenolic acid)；尼拉帕尼(niraparib)；诺考达唑(nocodazole)；诺加霉素(nogalamycin)；奥拉帕尼(olaparib)；奥马铂(ormaplatin)；奥昔舒仑(oxisuran)；紫杉醇(paclitaxel)；培门冬酶(pegaspargase)；培利霉素(peliomycin)；戊氮芥(pentamustine)；硫酸培洛霉素(peplomycin sulfate)；培磷酰胺(perfosfamide)；哌泊溴烷(pipobroman)；哌泊舒凡(piposulfan)；盐酸吡罗蒽醌(piroxantrone hydrochloride)；普卡霉素(plicamycin)；普洛美坦(plomestane)；卟吩姆钠(porfimer sodium)；甲基丝裂霉素(porfiromycin)；泼尼莫司汀(prednimustine)；盐酸丙卡巴肼(procarbazine hydrochloride)；嘌呤霉素(puromycin)；盐酸嘌呤霉素(puromycin hydrochloride)；吡唑呋喃菌素(pyrazofurin)；利波腺苷(riboprine)；罗谷亚胺(rogletimide)；卢卡帕尼(rucaparib)；沙芬戈(safingol)；盐酸沙芬戈(safingol hydrochloride)；司莫司汀(semustine)；辛曲秦(simtrazene)；sparfosate sodium；司帕霉素(sparsomycin)；盐酸锗螺胺(spirogermanium hydrochloride)；螺莫司汀(spiromustine)；螺铂(spiroplatin)；链霉黑素(streptonigrin)；链脲佐菌素(streptozocin)；磺氯苯脲(sulofenur)；talazoparib；他利霉素(talisomycin)；紫杉醇(taxol)；泰素帝(taxotere)；替可加兰钠(tecogalan sodium)；喃氟啶(tegafur)；盐酸替洛蒽醌(teloxantrone hydrochloride)；替莫卟吩(temoporfin)；替尼泊苷(teniposide)；替罗昔隆(teroxirone)；睾内酯(testolactone)；硫咪嘌呤(thiamiprine)；硫鸟嘌呤(thioguanine)；噻替派(thiotepa)；噻唑羧胺核苷(tiazofurin)；替拉扎明(tirapazamine)；盐酸拓扑替康(topotecan hydrochloride)；柠檬酸托瑞米芬(toremifene citrate)；乙酸曲托龙(trestolone acetate)；磷酸曲西立滨(triciribine phosphate)；三甲曲沙(trimetrexate)；三甲曲沙葡糖醛酸脂(trimetrexate glucuronate)；盐酸妥布氯唑(tubulozole hydrochloride)；乌拉莫司汀(uracil mustard)；乌瑞替派(uredepa)；伐普肽(vapreotide)；velaparib；维替泊芬(verteporfin)；硫酸长春花碱(vinblastine sulfate)；硫酸长春新碱(vincristine sulfate)；长春地辛(vindesine)；硫酸长春地辛(vindesine sulfate)；硫酸长春匹定(vinepidine sulfate)；硫酸长春甘酯(vinglycinate sulfate)；硫酸长春罗新(vinleurosine sulfate)；酒石酸长春瑞滨(vinorelbine tartrate)；硫酸长春罗定(vinrosidine sulfate)；硫酸长春利定(vinzolidine sulfate)；伏氯唑(vorozole)；折尼铂(zeniplatin)；净司他丁(zinostatin)；和盐酸佐柔比星(zorubicin hydrochloride).
[0285]
其他抗癌药物包括但不限于：20-epi-1,25二羟基维生素d3；5-乙炔基尿嘧啶；阿比特龙(abiraterone)；酰基富烯；腺环戊醇(adecypenol)；阿多来新(adozelesin)；all-tk拮抗剂；氨莫司汀(ambamustine)；amidox；氨磷汀(amifostine)；氨基乙酰丙酸；氨柔比星(amrubicin)；阿那格雷(anagrelide)；穿心莲内酯(andrographolide)；血管生成抑制剂；拮抗剂d；拮抗剂g；antarelix；抗背化形态发生蛋白-1(anti-dorsalizing morphogenetic protein-1)；抗雌激素；抗瘤酮(antineoplaston)；反义寡核苷酸；甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolin glycinate)；凋亡基因调节剂；凋亡调节剂；无嘌呤酸；ara-cdp-dl-ptba；精氨酸脱氨酶；asulacrine；阿他美坦(atamestane)；阿莫司汀(atrimustine)；axinastatin 1；axinastatin 2；axinastatin 3；阿扎司琼(azasetron)；azatoxin；重氮酪氨酸(azatyrosine)；浆果赤霉素(baccatin)iii衍生物；balanol；巴马司他(batimastat)；bcr/abl拮抗剂；benzochlorins；benzoylstaurosporine；β内酰胺衍生物；β-alethine；betaclamycin b；桦木酸；bfgf抑制剂；bisaziridinylspermine；双奈法德(bisnafide)；bistratene a；breflate；布朵替坦(budotitane)；丁硫氨酸亚砜胺(buthionine sulfoximine)；钙泊三醇(calcipotriol)；钙磷酸蛋白(calphostin)c；喜树碱衍生物；canarypox il-2；卡培他滨(capecitabine)；甲酰胺-氨基-三唑；羧基酰胺三唑；carest m3；carn 700；软骨衍生的抑制剂；酪蛋白激酶抑制剂(icos)；粟树精胺(castanospermine)；抗菌肽(cecropin)b；西曲瑞克(cetrorelix)；二氢卟吩(chlorins)；氯代喹喔啉磺酰胺(chloroquinoxaline sulfonamide)；西卡前列素(cicaprost)；顺-卟啉；氯米芬(clomifene)类似物；克霉唑(clotrimazole)；collismycin a；collismycin b；康普瑞汀(combretastatin)a4；康普瑞汀类似物；conagenin；crambescidin 816；crisnatol；cryptophycin 8；cryptophycin a衍生物；curacin a；cyclopentanthraquinones；cycloplatam；cypemycin；cytarabine ocfosfate；溶细胞因子；cytostatin；达昔单抗(dacliximab)；dehydrodidemnin b；德舍瑞林(deslorelin)；dexifosfamide；右雷佐生(dexrazoxane)；右维拉帕米(dexverapamil)；膜海鞘素(didemnin b)；didox；diethylnorspermin；二氢-5-氮杂胞苷；9-dihydrotaxol；dioxamycin；二苯基螺莫司汀(spiromustine)；二十二醇(docosanol)；多拉司琼(dolasetron)；去氧氟尿苷(doxifluridine)；屈大麻酚(dronabinol)；duocarmycin sa；依布硒啉(ebselen)；依考莫司汀(ecomustine)；依地福新(edelfosine)；依决洛单抗(edrecolomab)；eflomithine；榄香烯(elemene)；乙嘧替氟(emitefur)；表阿霉素(epirubicin)；依立雄胺(epristeride)；雌莫司汀类似物；雌激素激动剂；雌激素拮抗剂；依他硝唑(etanidazole)；磷酸依托泊苷(etoposide)；依西美坦(exemestane)；非格司亭(filgrastim)；非那雄胺(finasteride)；flavopiridol；氟卓斯汀(flezelastine)；fluasterone；氟达拉滨(fludarabine)；fluorodaunorunicin hydrochloride；福酚美克(forfenimex)；福美司坦(formestane)；福莫司汀(fotemustine)；gadolinium texaphyrin；硝酸镓；加洛他滨(galocitabine)；加尼瑞克(ganirelix)；明胶酶抑制剂；谷胱甘肽抑制剂；hepsulfam；调节蛋白(heregulin)；六亚甲基二乙酰胺；金丝桃素(hypericin)；伊班膦酸(ibandronic acid)；艾多昔芬(idoxifene)；伊决孟酮(idramantone)；伊莫福新(ilmofosine)；伊洛马司他(ilomastat)；imidazoacridones；咪喹莫特(imiquimod)；免疫刺激肽；胰岛素样生长因子-i受体抑制剂；干扰素激动剂；干扰
素；白介素；碘苄胍(iobenguane)；碘阿霉素(iododoxorubicin)；甘薯苦醇(ipomeanol),4-；伊立替康(irinotecan)；伊罗普拉(iroplact)；伊索拉定(irsogladine)；isobengazole；isohomohalicondrin b；伊他司琼(itasetron)；jasplakinolide；kahalalide f；片螺素i-n三醋酸酯；兰瑞肽(lanreotide)；leinamycin；来格司亭(lenograstim)；硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)；leptolstatin；白血病抑制因子；白细胞α干扰素；亮丙瑞林(leuprolide) 雌激素 黄体酮；亮丙瑞林(leuprorelin)；左旋咪唑(levamisole)；利阿唑(liarozole)；线性聚胺类似物；亲脂性二糖肽；亲脂性铂化合物；lissoclinamide 7；洛铂(lobaplatin)；蚯蚓磷脂(lombricine)；洛美曲索(lometrexol)；氯尼达明(lonidamine)；洛索蒽醌(losoxantrone)；洛伐他汀(lovastatin)；洛索立宾(loxoribine)；勒托替康(lurtotecan)；lutetium texaphyrin；lysofylline；裂解肽；美坦辛(maitansine)；mannostatin a；马立马司他(marimastat)；马索罗酚(masoprocol)；maspin；matrilysin抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；merbarone；meterelin；蛋氨酸酶(methioninase)；甲氧氯普胺(metoclopramide)；mif抑制剂；米非司酮(mifepristone)；米替福新(miltefosine)；米立司亭(mirimostim)；错配的双链rna；米托胍腙(mitoguazone)；二溴卫矛醇(mitolactol)；丝裂霉素(mitomycin)类似物；米托萘胺(mitonafide)；mitotoxin成纤维细胞生长因子-皂草素；莫法罗汀(mofarotene)；molgramostim；单克隆抗体，人绒毛膜促性腺激素；单磷酰脂a 分支杆菌细胞壁sk；莫哌达醇(mopidamol)；多药物抗体基因抑制剂；基于多肿瘤阻抑物1的疗法；氮芥抗癌化合物；mycaperoxide b；分支杆菌细胞壁提取物；myriaporone；n-乙酰地那林(dinaline)；n-取代的苯甲酰胺；那法瑞林(nafarelin)；nagrestip；纳洛酮 喷他佐辛；napavin；naphterpin；那托司亭(nartograstim)；奈达铂(nedaplatin)；奈莫柔比星(nemorubicin)；奈立膦酸(neridronic acid)；中性肽链内切酶；尼鲁米特(nilutamide)；nisamycin；氮氧化物调节剂；硝基氧抗氧化剂；nitrullyn；o6-benzylguanine；奥曲肽(octreotide)；okicenone；寡核苷酸；奥那司酮(onapristone)；昂丹司琼(ondansetron)；昂丹司琼(ondansetron)；oracin；口服细胞因子诱导剂；奥沙特隆(osaterone)；奥沙利铂(oxaliplatin)；oxaunomycin；紫杉醇(paclitaxel)类似物；紫杉醇衍生物；palauamine；palmitoylrhizoxin；帕米膦酸(pamidronic acid)；人参炔三醇(panaxytriol)；帕诺米芬(panomifene)；parabactin；pazelliptine；培门冬酶(pegaspargase)；peldesine；戊聚糖聚硫酸钠；喷司他丁(pentostatin)；pentrozole；全氟溴烷(perflubron)；培磷酰胺(perfosfamide)；紫苏醇(perillyl alcohol)；phenazinomycin；乙酸苯酯；磷酸酶抑制剂；沙培林(picibanil)；盐酸毛果芸香碱(pilocarpine hydrochloride)；吡柔比星(pirarubicin)；吡曲克辛(piritrexim)；placetin a；placetin b；纤溶酶原激活物抑制剂；铂络合物；铂化合物；铂-三胺络合物；卟吩姆钠(porfimer sodium)；甲基丝裂霉素(porfiromycin)；丙基双-吖啶酮；前列腺素j2；蛋白酶体抑制剂；基于蛋白质a的免疫调节剂；蛋白质激酶c抑制剂；蛋白质激酶c抑制剂，microalgal；蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂；嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂；羟基茜草素(purpurins)；pyrazoloacridine；pyridoxylated血红蛋白聚氧乙烯缀合物；raf拮抗剂；雷替曲塞(raltitrexed)；雷莫司琼(ramosetron)；ras法尼基蛋白质转移酶抑制剂；ras抑制剂；ras-gap抑制剂；脱甲基化瑞替普汀(retelliptine)；re 186依替膦酸铼；利索新(rhizoxin)；核酶；rii retinamide；罗希吐碱(rohitukine)；罗莫肽(romurtide)；罗喹美
克(roquinimex)；rubiginone b1；ruboxyl；saintopin；sarcnu；肌肉叶绿醇a(sarcophytol a)；沙格司亭(sargramostim)；sdi 1模拟物；源于衰老的抑制剂1；有义寡核苷酸；信号转导抑制剂；信号转导调节剂；单链抗原结合蛋白；sizofuran；索布佐生(sobuzoxane)；硼卡钠；苯乙酸钠；solverol；生长调节素结合蛋白；索纳明(sonermin)；sparfosic acid；spicamycin d；螺莫司汀(spiromustine)；斯耐潘定(splenopentin)；spongistatin 1；角鲨胺(squalamine)；干细胞抑制剂；干细胞分裂抑制剂；stipiamide；溶基质素抑制剂；sulfinosine；强效血管内皮肽拮抗剂；suradista；苏拉明(suramin)；苦马豆素(swainsonine)；合成的葡糖氨基葡聚糖；他莫司汀(tallimustine)；三苯氧胺甲碘化物(tamoxifen methiodide)；牛磺莫司汀(tauromustine)；他扎罗汀(tazarotene)；替可加兰钠(tecogalan sodium)；替加氟(tegafur)；tellurapyrylium；端粒酶抑制剂；替莫唑胺(temozolomide)；tetrachlorodecaoxide；tetrazomine；thaliblastine；沙利度胺(thalidomide)；thiocoraline；血小板生成素；血小板生成素模拟物；胸腺法新(thymalfasin)；促胸腺生成素受体激动剂；胸腺曲南(thymotrinan)；甲状腺刺激激素；tin ethyl etiopurpurin；二氯二茂钛(titanocene dichloride)；topsentin；托瑞米芬(toremifene)；全能干细胞因子；翻译抑制剂；维甲酸(tretinoin)；三乙酰尿苷；曲西立滨(triciribine)；托烷司琼(tropisetron)；妥罗雄脲(turosteride)；酪氨酸激酶抑制剂；tyrphostins(酪氨酸磷酸化抑制剂)；ubc抑制剂；乌苯美司(ubenimex)；泌尿生殖窦产生的生长抑制因子；尿激酶受体拮抗剂；variolin b；载体系统，红细胞基因治疗；维拉雷琐(velaresol)；藜芦胺(veramine)；verdins；长春瑞滨(vinorelbine)；vinxaltine；vitaxin；扎诺特隆(zanoterone)；亚苄维c(zilascorb)；以及净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)。
[0286]
本技术公开和要求保护的化合物还可以与以下任何治疗联合使用：
[0287]
联合聚(adp-核糖)聚合酶(parp)抑制剂的治疗，这是一类针对靶向具有缺陷的dna损伤修复的癌症的化疗剂(yuan,et al.,expert opin ther pat,2017,27:363)。这种parp抑制剂包括但不限于奥拉帕尼(olaparib)、rupacarib、velaparib、尼拉帕尼(niraparib)、talazoparib、pamiparib、iniparib、e7449和a-966492。
[0288]
联合导致dna单链和双链断裂修复的信号传导途径和机制例如核因子-κb信号传导的抑制剂(pilie,et al.,nat rev clin oncol,2019,16:81；zhang,et al.,chin j cancer,2012,31:359)的治疗。这种抑制剂包括但不限于atm和atr激酶、检查点激酶1和2、dna依赖性蛋白质激酶和wee1激酶(pilie,et al.,nat rev clin oncol,2019,16:81)的抑制剂。
[0289]
联合免疫调节剂(khalil,et al.,nat rev clin oncol,2016,13:394)、癌症疫苗(hollingsworth,et al.,npj vaccines,2019,4:7)、免疫检查点抑制剂(例如pd-1、pd-l1、ctla-4抑制剂)(wei,et al.,cancer discov,2018,8:1069)、细胞周期蛋白-d-激酶4/6抑制剂(goel,et al.,trends cell biol,2018,28:911)、能结合肿瘤细胞和/或转移瘤并能诱导抗体依赖性细胞毒性(adcc)的抗体(kellner,et al.,transfus med hemother,2017,44:327)、t细胞或nk细胞接合剂(例如双特异性抗体)(yu,et al.,j cancer res clin oncol,2019,145:941)、使用扩展的自体或同种异体免疫细胞(例如嵌合的抗原受体t(car-t)细胞)的细胞疗法(khalil,et al.,nat rev clin oncol,2016,13:394)的治疗。免疫检
查点抑制剂包括但不限于纳武单抗(nivolumab)、伊匹单抗(ipilimumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、阿维鲁单抗(avelumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab)和西米普利单抗(cemiplimab)。
[0290]
根据本发明，所述化合物可以在施用其他抗癌化合物之前、同时或之后施用。施用时间表可包括以交替方式施用不同的药剂。在其他实施方案中，所述化合物可以在用其他疗法治疗之前和期间、或期间和之后、或之前和之后递送。在一些情况下，所述化合物在其他抗增殖治疗施用前超过24小时时施用。在其他实施方案中，可以向个体施用多于一种的抗增殖疗法。例如，个体可以接受本发明化合物，联合手术和至少一种抗增殖化合物。或者，所述化合物可以与多于一种抗癌药联合施用。
[0291]
在一个实施方案中，本发明的化合物用于检测过度表达fap的细胞和组织，其中通过将可检测标记、优选可检测放射性核素与本发明化合物缀合来实现这种检测。在优选的实施方案中，检测的细胞和组织是病变细胞和组织和/或是疾病和/或疾病的症状的原因，或者是疾病潜在病理的一部分。在进一步优选的实施方案中，病变细胞和组织导致肿瘤适应症(例如瘤、肿瘤和癌症)或非肿瘤适应症(例如炎症性疾病，心血管疾病，自身免疫疾病和纤维化疾病)和/或是肿瘤学适应症(例如瘤、肿瘤和癌症)或非肿瘤学适应症(例如炎症性疾病，心血管疾病，自身免疫疾病和纤维化疾病)的一部分。
[0292]
在另一实施方案中，本发明的化合物用于治疗过度表达fap的细胞和组织。在一优选的实施方案中，所治疗的细胞和组织是病变细胞和组织和/或是疾病和/或疾病的症状的原因，或者是疾病潜在病理的一部分。在进一步优选的实施方案中，病变细胞和组织导致肿瘤适应症(例如瘤、肿瘤和癌症)和/或是肿瘤适应症的一部分，并且通过将治疗活性效应物、优选具有治疗活性的放射性核素与本发明的化合物缀合来实现治疗活性。在进一步优选的实施方案中，病变细胞和组织导致非肿瘤适应症(例如炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病)和/或是非肿瘤适应症(例如炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病)的一部分，而且治疗活性是通过抑制fap的酶活性实现的。
[0293]
在另一实施方案中，特别是如果所述疾病是非肿瘤疾病或非肿瘤适应症(例如炎症性疾病、心血管疾病、自身免疫疾病和纤维化疾病)，本发明的化合物以治疗有效量施用；优选地，本发明的化合物不包含治疗活性核素。有效量是所述化合物足以在施用所述化合物的个体中提供治疗或医学上合乎需要的结果或效果的剂量。所述有效量会随着所治疗的特定病症、所治疗对象的年龄和身体状况、病症的严重程度、治疗的持续时间、同时或联合治疗(如果有的话)的性质、具体施用途径和健康从业者的知识和技能范围内的类似因素而变化。例如，对于旨在治疗具有以异常细胞增殖为特征的病症的个体的方法而言，抑制增殖的有效量是足以减少或完全停止异常细胞增殖从而减缓或停止细胞团块如肿瘤的形成或进展的量。如在实施方案中使用的，“抑制”包括所有前述内容。
[0294]
在其他实施方案中，治疗有效量是在手术或药物治疗后延长微小转移的休眠或稳定任何残留的原发肿瘤细胞所需要的量。
[0295]
通常，当使用不含治疗活性放射性核素的未缀合化合物时，治疗有效量随着个体的年龄、状况、性别以及个体疾病的性质和程度而变化，所有这些都可以由本领域普通技术人员确定。所述剂量可由医生或兽医调整，特别是在出现任何并发症时。治疗有效量通常是但不限于0.1μg/kg至约2000mg/kg、或1.0μg/kg至约1000mg/kg、或约0.1mg/kg至约500mg/
kg、或约1.0mg/kg至约100mg/kg，每天施用一剂或多剂，施用一天或多天。如果需要，所述活性化合物的有效每日剂量可以作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量施用，例如在一天中以适当的间隔分开施用，任选以单位剂型施用。在一些实施方案中，所述化合物施用超过7天、超过10天、超过14天和超过20天。在其他实施方案中，所述化合物在数周或数月的时间段内施用。在其他实施方案中，所述化合物隔天施用。例如，所述制剂每两天、或每三天、或每四天、或每五天、或每六天、或每周、或每月施用。
[0296]
在一优选的实施方案中，本发明的化合物用于治疗和/或预防疾病，其中这种治疗是放射性核素疗法。
[0297]
优选地，放射性核素疗法利用或基于放射性核素发射的不同形式的辐射。这种辐射可以是例如以下中的任一种：光子辐射、电子辐射包括但不限于β-‑
粒子和auger电子辐射、质子辐射、中子辐射、正电子辐射、α-粒子辐射或离子束。根据所述放射性核素发射的粒子或辐射的种类，放射性核素疗法可分为例如光子放射性核素疗法、电子放射性核素疗法、质子放射性核素疗法、中子放射性核素疗法、正电子放射性核素疗法、α-粒子放射性核素疗法或离子射束放射性核素治疗。所有这些形式的放射性核素治疗都包含在本发明中，并且所有这些形式的放射性核素治疗均可以通过本发明的化合物来实现，优选条件是所述放射性核素连接于本发明的化合物，更优选作为这种辐射的效应物。
[0298]
放射性核素疗法优选通过破坏细胞的dna来起作用。所述破坏是由光子、电子、质子、中子、正电子、α-粒子或离子束直接或间接电离构成dna链的原子而导致的。间接电离是水电离的结果，形成自由基，特别是羟基自由基，然后其破坏dna。
[0299]
在最常见的放射性核素疗法中，大部分辐射效应是通过自由基产生的。由于细胞具有修复dna损害的机制，因此破坏双链dna被证明是改变细胞特性的最重要技术。由于癌细胞通常是未分化的和干细胞样的，与大多数健康的分化细胞相比，癌细胞繁殖更多以及修复亚致死损害的能力减弱。dna损害是通过细胞分裂遗传的，积累对癌细胞的损伤，导致癌细胞死亡或繁殖更慢。
[0300]
氧是一种强力的放射增敏剂，通过形成损害dna的自由基来增加给定剂量的辐射的效力。因此，可使用高压氧罐、携带增加的氧的血液替代品、低氧细胞放射增敏剂如米索硝唑(misonidazole)和甲硝唑(metronidazole)，以及低氧细胞毒素如替拉扎明(tirapazamine)。
[0301]
选择放射性剂量时考虑的其他因素包括患者是否正在接受化疗，放射治疗是在手术前还是手术后进行，以及手术的成功程度。
[0302]
总放射性剂量可以分次给予，即由于一些重要原因而在一次或多次治疗中随时间分次给予。分次给予允许正常细胞有时间恢复，而肿瘤细胞在分次给予之间的修复效率通常较低。分次给予还允许在一次治疗期间处于细胞周期相对抗辐射阶段的肿瘤细胞在下一个分次给予之前循环到周期的敏感阶段。类似地，慢性或急性缺氧并因此更具抗辐射性的肿瘤细胞可能会在分次给予之间再充氧，从而提高对肿瘤细胞的杀伤力。
[0303]
众所周知，不同的癌症对放射治疗的反应不同。癌症对辐射的反应是通过其辐射敏感性来描述的。高度辐射敏感的癌细胞会被中等剂量的辐射迅速杀死。这些包括白血病、大多数淋巴瘤和生殖细胞肿瘤。
[0304]
重要的是将在一定程度上是实验室测量的特定肿瘤的辐射敏感性与在实际的临
床实践中通过内部递送的放射性剂量对癌症的“可治愈性”进行区分例如，白血病通常无法通过放疗治愈，因为其在全身散播。如果淋巴瘤局限于身体的某一部位，则它可以从根本上治愈。同样，许多常见的中度放射反应性肿瘤如果处于早期阶段，可以用治愈剂量的放射性治疗例如，这适用于非黑色素瘤皮肤癌、头颈癌、非小细胞肺癌、宫颈癌、肛门癌、前列腺癌。
[0305]
肿瘤对放疗的反应也与其大小有关。由于复杂的原因，与较小的肿瘤或微观疾病相比，非常大的肿瘤对辐射的反应较差。使用各种策略来克服这种影响。最常见的技术是放疗前的手术切除。这在广泛局部切除或乳房切除术后辅助放疗的乳腺癌治疗中最为常见。另一种方法是在根治性放射性核素治疗之前用新辅助化疗缩小肿瘤。第三种技术是通过在放射治疗过程中给予某些药物来增强癌症的放射敏感性。放射增敏药物的实例包括但不限于顺铂(cisplatin)、尼莫拉唑(nimorazole)和西妥昔单抗(cetuximab)。
[0306]
术中放疗是一种特殊类型的放疗，是在手术切除癌症后立即进行。这种方法已用于乳腺癌(靶向术中放疗(targeted introperative radiotherapy))、脑肿瘤和直肠癌。
[0307]
放射性核素治疗本身是无痛的。许多低剂量姑息治疗引起的副作用很小或没有副作用。更高剂量的治疗可能会在治疗期间(急性副作用)、治疗后数月或数年(长期副作用)、或再治疗后(累积副作用)导致不同的副作用。副作用的性质、严重程度和持续时间取决于接受放射的器官、治疗(放射性核素的类型、剂量、分次、同步化疗)和患者自身情况。
[0308]
在本发明范围内，本发明的用于治疗疾病的方法可以实现本领域已知的每一种和任何一种上述策略，并且在此范围内构成本发明的进一步实施方案。
[0309]
本发明的化合物用于诊断如本文公开的疾病的方法也在本发明内。这种方法优选地包括为有需要的个体施用诊断有效量的本发明化合物的步骤。
[0310]
根据本发明，成像方法选自闪烁扫描、单光子发射计算机断层显像术(spect)和正电子发射断层摄影术(pet)。
[0311]
闪烁扫描是核医学中使用的一种诊断测试或方法，其中放射性药物被细胞、组织和/或器官内在化，优选在体内内在化，并且内在化的放射性药物发出的辐射被外部探测器(γ相机)捕获以形成和显示出二维图像。与之相反，spect和pet形成和显示出三维图像。因此，尽管spect和pet也使用γ相机来检测内部辐射，但它们被归类为与闪烁扫描法不同的技术。闪烁扫描不同于其中外部辐射穿过身体形成图像的诊断性x射线。
[0312]
单光子发射断层显像术(spect)扫描是一种使用γ射线的核成像技术。其与使用γ相机的常规核医学平面成像非常相似。在spect扫描之前，患者会被注射放射性标记的化学物质，这种化学物质会发射可被扫描仪检测到的γ射线。计算机从γ相机收集信息并将其转换为二维横截面。这些横截面可以再加在一起以形成器官或组织的三维图像。spect涉及检测由放射性标记化学品提供的放射性核素单一和连续发射的γ射线。为了获取spect图像，γ相机围绕患者旋转。在旋转期间，通常每旋转3-6度，在定义的点获取投影。在大多数情况下，使用完整的360度旋转来获得最佳重建。获得每个投影所花费的时间也是可变的，但通常是15至20秒。这样总扫描时间是15至20分钟。多头γ相机速度更快。由于spect采集与平面γ相机成像非常相似，因此可以使用相同的放射性药物。
[0313]
正电子发射断层摄影术(pet)是一种非侵入性的诊断成像技术，用于测量人体内细胞的生化状态或代谢活动。pet是独特的技术，因为其可以产生机体基本生物化学或功能的图像。传统的诊断技术例如x射线、ct扫描或mri，产生机体的解剖学或结构的图像。这些
技术的前提是可以看到与疾病相关的任何结构或解剖学的变化。生物化学过程也会因疾病而改变，并且可能在解剖学发生任何重大变化之前发生。pet是一种成像技术，可以将这一些早期生物化学变化可视化。pet扫描仪依靠患者发出的辐射来生成图像。给每位患者服用微量的放射性药物，这些药物与机体使用的天然物质非常相似，或者与受体或分子结构特异性结合。当放射性同位素经历正电子发射衰变(也称为正β衰变)时，其会发射正电子，即电子的反粒子对应物。在行进几毫米后，正电子遇到电子并湮灭，产生一对以相反方向运动的湮灭(γ)光子。当它们到达扫描设备中的闪烁材料时会被检测到，产生由光电倍增管或硅雪崩光电二极管检测到的一束光。所述技术取决于对光子对的同时或同步检测。不成对到达的光子，即未在几纳秒内到达的光子将被忽略。所有的同步都被转发到图像处理单元，在那里使用图像重建程序产生最终的图像数据。
[0314]
spect/ct和pet/ct是spect和pet与计算机断层扫描(ct)的组合。组合这些模式的主要好处是提高读片者的信心和准确性。使用传统的pet和spect，异常区域发出的光子数量有限，产生非常低水平的背景，这使得很难对该区域进行解剖定位。加入ct有助于从解剖学角度确定异常区域的位置，并对代表疾病的可能性进行分类。
[0315]
在本发明范围内，本发明的诊断疾病的方法可以实现本领域已知的上述策略中的每一个和任何一个，并且在此范围内构成本发明的进一步实施方案。
[0316]
本发明的化合物可用于对患者进行分层，即在患者群体中创建子集，提供关于患者会如何响应给定药物的更详细信息。通过鉴别最有可能对新疗法产生反应的人群子集，分层可以成为将临床试验从负面或中性结果转变为具有积极结果的临床试验的关键组成部分。
[0317]
分层包括鉴别一组具有共同“生物学”特征的患者，为患者选择最佳管理方案，并在风险评估、风险预防和实现最佳治疗结果方面实现最佳可能结果。
[0318]
本发明的化合物可用于尽早评估或检测特定疾病(这是诊断用途)、发生疾病的风险(这是易感性/风险用途)、疾病的演变包括惰性与侵略性(这是预后用途)，以及可用于预测对给定治疗的反应和毒性(这是预测用途)。
[0319]
本发明的化合物用于治疗诊断方法也在本发明内。治疗诊断学的概念是将治疗药物与相应的诊断测试相结合，从而增加治疗药物的临床使用。治疗诊断学的概念正变得越来越有吸引力，并被广泛认为是通过帮助医生鉴别可能从特定治疗中获益的患者从而避免不必要的治疗来提高药物治疗效力的关键。
[0320]
治疗诊断学的概念是将治疗剂与诊断测试相结合，使医生能够确定哪些患者会从给定的治疗中获益最多。在一个实施方案中并且如本文优选使用的，本发明的化合物用于患者的诊断，即原发肿瘤块以及潜在的局部和远处转移的鉴定和定位。此外，可以确定肿瘤体积，特别是使用三维诊断方式如spect或pet。只有那些具有fap阳性肿瘤块并因此可能从给定疗法中获益的患者才会被选择用于特定疗法，从而避免不必要的治疗。优选地，这种疗法是使用本发明化合物的fap靶向疗法。在一个特定实施方案中，应用化学上相同的肿瘤靶向诊断，优选用于闪烁扫描、pet或spect和放射治疗的成像诊断。此类化合物仅在放射性核素方面不同，因此通常具有非常相似(如果不相同的话)的药代动力学特征。这可以使用螯合剂和诊断性或治疗性放射性金属来实现。或者，这可以使用用于放射性标记的前体和用诊断性或治疗性放射性核素进行放射性标记来实现。在一个实施方案中，诊断成像优选通
过本领域技术人员已知的对诊断性放射性核素的辐射进行量化和随后的放射量测定以及与易受副作用影响的器官相比在肿瘤中的药物浓度的预测而使用。因此，实现了针对患者的真正个体化药物剂量治疗。
[0321]
在一实施方案中并且如本文优选使用的，治疗诊断方法是通过仅一种治疗诊断性活性化合物实现的，所述化合物例如是用发射诊断上可检测射线(例如正电子或γ射线)以及治疗有效放射(例如电子或α粒子)的放射性核素标记的本发明化合物。
[0322]
本发明还考虑了在手术中鉴定/揭示个体中表达fap的患病组织的方法。这种方法使用本发明的化合物，其中此类本发明化合物优选包含诊断活性剂作为效应物。
[0323]
根据本发明的另一实施方案，本发明的化合物，特别是如果与放射性核素复合的话，可以用作任何其他肿瘤治疗方法的附加或辅助，所述肿瘤治疗方法包括作为治疗大多数孤立实体癌的主要方法的手术，涉及使用电离辐射以通过使用近距离放射疗法形式的密封内部源或外部源来尝试治愈或改善癌症的症状的放射疗法，化学疗法例如烷化剂、抗代谢物、蒽环类药物、植物生物碱、拓扑异构酶抑制剂以及其他抗肿瘤剂，调节肿瘤细胞行为而不直接攻击这些细胞的激素治疗，直接靶向某些类型癌症中的分子异常的靶向剂，包括单克隆抗体和酪氨酸激酶抑制剂，血管生成抑制剂，免疫疗法，癌症疫苗接种，姑息治疗，包括减少身体、情感、精神和心理-社会困境以提高患者的生活质量的措施，以及替代治疗，包括不是常规医学一部分的各种医疗保健系统、实践和产品。
[0324]
在本发明方法的一实施方案中，个体是患者。在一实施方案中，患者是已被诊断为患有、或被怀疑患有、或处于患有或形成疾病的风险中的个体，其中所述疾病是本文所述的疾病，优选涉及fap的疾病。
[0325]
在放射性核素被使用而且更特别地连接于或作为本发明化合物的一部分的情况中，分别用于实施治疗和诊断方法的剂量会根据例如要治疗的特定病症而变化，例如肿瘤类型的已知放射敏感性、肿瘤的体积和所需的治疗。一般来说，所述剂量是根据每个器官的放射性分布和观察到的靶摄取来计算的。γ-发射络合物可以一次或多次施用以用于诊断成像。在动物中，指定的剂量范围可以是0.1μg/kg至5mg/kg本发明化合物，其与例如1至200mbq的
111
in或
89
zr的络合。本发明化合物的β-发射络合物可以例如在1至3周或更长的时间段内在几个时间点施用。在动物中，指定的剂量范围可以是0.1μg/kg至5mg/kg本发明化合物，其与例如1至200mbq
90
y或
177
lu的络合。在较大的哺乳动物例如人类中，指定的剂量范围是0.1至100μg/kg本发明化合物，其与例如10至400mbq的
111
in或
89
zr的络合。在较大的哺乳动物例如人类中，指定的剂量范围是0.1至100μg/kg本发明化合物，其与例如10至5000mbq的
90
y或
177
lu的络合。
[0326]
在另一方面，本发明涉及组合物，尤其是药物组合物，其包含本发明的化合物。
[0327]
本发明的药物组合物包含至少一种本发明的化合物和任选存在的一种或多种载体物质、赋形剂和/或辅剂。所述药物组合物可另外包含例如下列中的一种或多种：水、缓冲剂例如中性缓冲盐水或磷酸盐缓冲盐水、乙醇、矿物油、植物油、二甲基亚砜、碳水化合物例如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇、蛋白质、辅剂、多肽或氨基酸如甘氨酸、抗氧化剂、螯合剂如edta或谷胱甘肽和/或防腐剂。此外，一种或多种其他活性成分可以但非必需包括在本发明的药物组合物中。
[0328]
本发明的药物组合物可以经配制用于任何合适的施用途径，包括例如局部施用，
例如经皮或眼部、口服、口腔粘膜、鼻腔、阴道、直肠或肠胃外施用。本文使用的术语肠胃外包括皮下、皮内、血管内例如静脉内、肌肉内、鞘内和腹膜内注射，以及任何类似的注射或输注技术。优选的施用途径是静脉内施用。
[0329]
在本发明的实施方案中，包含放射性核素的本发明化合物通过任何常规途径施用，特别是静脉内施用，例如以注射液或悬浮液的形式。本发明的化合物也可以有利地通过输注施用，例如通过输注30至60分钟。
[0330]
取决于肿瘤的部位，本发明的化合物可以尽可能靠近肿瘤部位施用，例如通过导管施用。这种施用可以直接给予肿瘤组织、肿瘤组织周围或输入血管中。本发明的化合物也可以重复施用，优选分剂量施用。
[0331]
根据本发明的优选实施方案，本发明的药物组合物包含稳定剂，例如自由基清除剂，其抑制本发明化合物的自辐解。合适的稳定剂包括例如血清白蛋白、抗坏血酸、视黄醇、龙胆酸或其衍生物，或氨基酸输注溶液，例如用于肠胃外蛋白质摄取，优选不含电解质和葡萄糖，例如可商购的氨基酸输注液例如ke nephro。优选抗坏血酸和龙胆酸。
[0332]
本发明的药物组合物可以包含另外的添加剂，例如用于调节ph值在7.2和7.4的制剂，例如乙酸钠或乙酸铵或na2hp04。优选地，将稳定剂加入到本发明的非放射性化合物中，在稳定剂的存在下在室温下或优选在40至120℃下进行放射性核素的导入，例如与放射性核素的络合。所述络合可以方便地在无空气条件下进行，例如在n2或ar下进行。在络合后可以向组合物中加入另外的稳定剂。
[0333]
本发明化合物的排泄，特别是当效应物是放射性核素时，基本上通过肾脏发生。进一步保护肾脏免于放射性积累可以通过施用赖氨酸或精氨酸或具有高含量赖氨酸和/或精氨酸的氨基酸溶液而实现，例如在注射本发明的化合物或与本发明的化合物一起注射之前，特别是如果效应物是放射性核素时，使用可商购的氨基酸溶液，例如-14或-10。作为输注氨基酸的代替或额外地施用血浆扩容剂例如佳乐施(gelofusine)也可以实现肾脏的保护。肾脏的保护也可以通过使用利尿剂来实现，这是一种强迫利尿的方法，可以提高排尿速度。这种利尿剂包括高效髓袢利尿剂、噻嗪类利尿剂、碳酸酐酶抑制剂、保钾利尿剂、保钙利尿剂、渗透性利尿剂和低效能利尿剂。除了本发明的化合物之外，本发明的药物组合物可包含这些其他化合物中的至少一种，旨在或适用于肾脏保护，优选施用本发明化合物的个体的肾脏保护。
[0334]
本领域技术人员会理解，本文公开了用于各种方法的本发明化合物。本领域技术人员会进一步理解，本发明的组合物和本发明的药物组合物可以同等地用于所述各种方法。本领域技术人员还会理解，在本文中公开的本发明组合物和药物组合物用于各种方法。本领域技术人员同样可以理解，本发明的化合物可以同样地用于所述各种方法中。
[0335]
本领域技术人员会意识到，本发明的组合物和本发明的药物组合物除了本发明的化合物之外还包含一种或多种其他化合物。就这样的一种或多种其他化合物在本文中公开为本发明组合物和/或本发明药物组合物的一部分而言，应理解这样的一种或多种其他化合物可与本发明的化合物分开单独给予暴露于本发明的方法的个体或者本发明方法的个体。这样的一种或多种其他化合物的施用可以在施用本发明化合物之前、同时或之后进行。本领域技术人员还会意识到，在本发明的方法中，除了本发明的化合物之外，可以为个体施用一种或多种其他化合物。所述一种或多种其他化合物的这种施用可以在施用本发明化合
物之前、同时或之后进行。就本文公开的这样的一种或多种其他化合物作为本发明方法的一部分施用而言，应当理解这样的一种或多种其他化合物是本发明组合物和/或药物组合物的一部分。在本发明范围内，本发明的化合物和一种或多种其他化合物可以包含在相同或不同的配制物中。也在本发明范围内的是本发明的化合物和一种或多种其他化合物不包含在同一配制物中，而是包含在具有包含本发明化合物的第一配制物和包含一种或多种其他化合物的第二配制物的同一包装中，由此所述配制物的类型可以相同或可以不同。
[0336]
在本发明范围内，本发明的组合物和/或本发明的药物组合物中包含多于一种类型的本发明化合物。在本发明的范围内，在本发明的方法中使用、优选施用多于一种类型的本发明化合物。
[0337]
应意识到，本发明的组合物和本发明的药物组合物可以以常规方式生产。
[0338]
作为放射性衰变的结果，放射性药物具有随时间而减少的放射性含量。放射性核素的物理半衰期通常是放射性药物诊断的短处。在这些情况下，最后的制备必须在施用于患者之前不久完成。用于断层扫描的正电子发射放射性药物(pet放射性药物)尤其如此。这种情况通常导致使用半成品，例如放射性核素发生器、放射性前体和药盒。
[0339]
优选地，本发明的药盒除了包含一种或多于一种的本发明化合物之外，通常包含以下中的至少一种：使用说明，最终制备和/或质量控制，一种或多种任选的赋形剂，一种或多种任选存在的用于标记程序的试剂，有或没有防护罩容器的任选存在的一种或多种放射性核素，以及任选存在的一个或多个装置，其中所述装置选自标记装置、纯化装置、分析装置、操作装置、放射防护装置或施用装置。
[0340]
用于放射性药物容器的一般操作和转运的被称作“猪”的带防护罩的容器具有各种配置，用于容纳放射性药物容器，例如瓶、小瓶、注射器等。一种形式通常包括允许进入所容纳的放射性药物容器的可移除的盖子。当猪盖就位时，辐射暴露是可以接受的
[0341]
标记装置选自开放式反应器、封闭式反应器、微流体系统、纳米反应器、药筒、压力容器、小瓶、温控反应器、混合或摇动反应器及其组合。
[0342]
纯化装置优选选自离子交换色谱柱或装置、尺寸排阻色谱柱或装置、亲和色谱柱或装置、气相或液相色谱柱或装置、固相提取柱或装置、过滤装置、离心瓶柱或装置。
[0343]
分析装置优选选自确定放射标记的化合物的身份、放射化学纯度、放射性核素纯度、放射性含量和比放射性的测试装置。
[0344]
操作装置优选选自混合、稀释、分配、标记、注射和给予个体放射性药物的装置。
[0345]
使用放射防护装置以在使用治疗性或诊断性放射性核素时保护医生和其他人员免受辐射。放射防护装置优选选自具有辐射吸收材料保护屏障的装置，所述辐射吸收材料选自铝、塑料、木材、铅、铁、铅玻璃、水、橡胶、塑料、布，确保与辐射源相距足够距离的装置，减少暴露于放射性核素的时间的装置，限制吸入、摄入或其他放射性物质进入身体的方式的装置，以及提供这些措施组合的装置。
[0346]
施用装置优选选自注射器、护罩注射器、针头、泵和输液装置。注射器护罩通常是空心圆柱形结构，可容纳注射器的圆柱体，由铅或钨制成，带有铅玻璃窗，使操作人员可以查看注射器柱塞和注射器内的液体体积。
[0347]
现在通过参考以下附图和实施例进一步示例说明本发明，从中可以获得本发明的进一步特征、实施方案和优点，其中
[0348]
图1示出在含有100mg/ml抗坏血酸盐和5mg/ml l-甲硫氨酸的配制缓冲液中的
177
lu-3bp-3407在合成后立即分析的放射色谱图；
[0349]
图2示出在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml l-甲硫氨酸的配制缓冲液中的
177
lu-3bp-3407在合成后6天分析的放射色谱图；
[0350]
图3示出在含有100mg/ml抗坏血酸盐和5mg/ml l-甲硫氨酸的配制缓冲液中的
177
lu-3bp-3554在合成后立即分析的放射色谱图；
[0351]
图4示出在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml l-甲硫氨酸的配制缓冲液中的
177
lu-3bp-3554在合成后6天分析的放射色谱图；
[0352]
图5示出在注射到小鼠模型中后1小时、3小时、6小时和24小时，通过
111
in-3bp-3407的spect成像测定的在肾、肝、血池和hek-fap肿瘤中的注射剂量百分比/克组织(％id/g)摄取；
[0353]
图6示出在注射到小鼠模型中后1小时、3小时、6小时和24小时，通过
111
in-3bp-3554的spect成像测定的在肾、肝、血池和hek-fap肿瘤中的注射剂量百分比/克组织(％id/g)摄取；
[0354]
图7示出在注射到具有hek-fap肿瘤的小鼠中后1小时、3小时、6小时、24小时和48小时
111
in-3bp-3554的spect图像；
[0355]
图8示出人成纤维细胞活化蛋白(fap)、人二肽基肽酶4(ddp4)和人脯氨酰内肽酶(prep)的氨基酸序列。
[0356]
图9a示出用载体、冷化合物
nat
lu-3bp-3554、30 mbq 177
lu-3bp-3554和60 mbq 177
lu-3bp-3554处理的具有hekfap肿瘤的小鼠中肿瘤随时间的生长；
[0357]
图9b示出用载体、冷化合物
nat
lu-3bp-3554、30 mbq(低剂量)
177
lu-3bp-3554和60 mbq(高剂量)
177
lu3bp-3554处理的具有hek-fap肿瘤的小鼠中体重随时间的变化百分比；
[0358]
图10a示出具有hek-fap肿瘤的小鼠中60 mbq 177
lu-3bp-3554随时间的生物分布的代表性spect/ct图像；
[0359]
图10b示出具有hek-fap肿瘤的小鼠中30 mbq 177
lu-3bp-3554随时间的生物分布的代表性spect/ct图像；
[0360]
图11a示出四种不同肉瘤pdx模型在施用
111
in-3bp-3554后3小时的代表性spect/ct图像；
[0361]
图11b示出注射后3小时，
111
in-3bp-3554在四种不同肉瘤pdx模型中的％id/g摄取；
[0362]
图12a示出在用载体、冷化合物
nat
lu-3bp-3554、30 mbq 177
lu-3bp-3554或60 mbq 177
lu-3bp-3554处理的具有肉瘤sarc4809 pdx肿瘤的小鼠中肿瘤随时间的生长；
[0363]
图12b示出用载体、冷化合物
nat
lu-3bp-3554、30 mbq 177
lu-3bp-3554或60 mbq 177
lu-3bp-3554处理的具有肉瘤sarc4809 pdx肿瘤的小鼠中体重随时间的变化。
[0364]
包括以下实施例以为本领域普通技术人员实践本公开的主题的代表性实施方案提供指导。根据本公开内容和本领域技术人员的一般水平，本领域技术人员可以理解以下实施例仅是示例性的，并且在不脱离本公开的主题的范围的情况下可以采用多种变化、修改和改变。以下的合成描述和具体实施例仅用于示例说明的目的，不应解释为以任何方式限制通过其他方法制备本公开的化合物。
实施例
[0365]
本技术及特别是以下实施例中所使用的缩如下所示：
[0366]
4pl表示四参数逻辑曲线拟合
[0367]
表示埃
[0368]
can表示乙腈
[0369]
ahx表示6-氨基己酸
[0370]
amc表示7-氨基-4-甲基香豆素
[0371]
amu表示原子质量单位
[0372]
aq.表示水
[0373]
auc
inf
表示外推到无穷大的曲线下的面积
[0374]
bsa表示牛血清白蛋白
[0375]
c0表示化合物的初始浓度
[0376]
caf表示癌症相关成纤维细胞
[0377]
cl表示清除率
[0378]
cm表示chemmatrix
tm
[0379]
ct表示计算机断层扫描
[0380]
cy5表示青色素-5(cyanine-5)
[0381]
dad表示二极管阵列检测仪
[0382]
dcm表示二氯甲烷
[0383]
dde表示n-(1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亚环己基)乙基)
[0384]
deg表示二乙二醇二甲基丙烯酸
[0385]
dic表示n,n'-二异丙基碳二亚胺
[0386]
dicom表示医学中的数字成像和通讯
[0387]
dipea表示二异丙基乙胺
[0388]
dmf表示n,n-二甲基甲酰胺
[0389]
dmso表示二甲基亚砜
[0390]
dota表示1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸
[0391]
dota(tbu)
3-oh表示三叔丁基-1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸盐
[0392]
dpp表示二肽基肽酶
[0393]
ec表示电子捕获
[0394]
ec
50
表示半数最大兴奋浓度
[0395]
ecacc表示european collection of authenticated cell cultures
[0396]
edc表示1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[0397]
emem表示eagle最小基本培养基
[0398]
eq或eq.表示当量
[0399]
esi表示电喷射离子化
[0400]
et2o表示二乙醚
[0401]
etoac表示乙酸乙酯
[0402]
facs表示荧光活化的细胞分选
[0403]
fap表示成纤维细胞活化蛋白
[0404]
fb表示背景荧光强度
[0405]
fbs表示胎牛血清
[0406]
fgf21表示成纤维细胞生长因子21
[0407]
fitc表示5(6)-异硫氰酸荧光素
[0408]
fmoc表示9-芴甲氧羰基
[0409]
fret表示荧光共振能量转移
[0410]
ft表示荧光强度
[0411]
gab表示γ-氨基丁酸
[0412]
gaba表示γ-氨基丁酸
[0413]
h表示小时
[0414]
hatu表示o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n
′
,n
′‑
四甲基六氟磷酸脲
[0415]
hbst表示spr运行缓冲液
[0416]
hek-fap表示表达人fap的人胚肾293细胞
[0417]
hepes表示4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸
[0418]
hfip表示六氟-2-异丙醇
[0419]
hoac表示乙酸
[0420]
hoat表示1-羟基-7-氮杂苯并三唑
[0421]
hplc表示高效液相色谱分析
[0422]
hplc/ms表示高效液相色谱/质谱分析
[0423]
ic
50
表示半数最大抑制浓度
[0424]
id/g表示每克注射剂量
[0425]
is表示同质异能跃迁
[0426]
itlc-sg表示快速薄层色谱-硅胶
[0427]
k2edta表示乙二胺四乙酸二钾
[0428]
kd表示解离常数
[0429]
kda表示1000dalton
[0430]ki
表示抑制常数
[0431]koff
表示解离速度
[0432]kon
表示结合速度
[0433]
lc/tof-ms表示液相色谱/飞行时间/质谱分析
[0434]
lc-ms表示高效液相色谱结合质谱分析
[0435]
ldh表示乳酸脱氢酶
[0436]
leu表示亮氨酸
[0437]
lioh表示氢氧化锂
[0438]
m表示摩尔或mol/l
[0439]
m/z表示质量除以电荷
[0440]
max.表示最大
[0441]
meoh表示甲醇
[0442]
mev表示兆电子伏特
[0443]
min表示分钟
[0444]
mmp表示基质金属蛋白酶
[0445]
mrm表示多反应监测
[0446]
mtbe表示甲基叔丁基醚
[0447]
mtt表示甲基三苯甲基
[0448]
mtv表示平均肿瘤体积
[0449]
mw表示分子量
[0450]
n.d.表示未测定
[0451]
na2so4表示硫酸钠
[0452]
nacl表示氯化钠
[0453]
nahco3表示碳酸氢钠
[0454]
nca表示非房室分析
[0455]
nhs表示n-羟基琥珀酰亚胺
[0456]
nmp表示1-甲基-2-吡咯烷酮
[0457]
nos表示非特指
[0458]
oic表示l-八氢吲哚-2-羧酸
[0459]
p.a.表示：出于分析目的(质量等级)
[0460]
p.i.表示注射后
[0461]
pbf表示2,2,4,6,7-五甲基-2,3-苯并二氢呋喃-5-磺酰
[0462]
pbs表示磷酸盐缓冲盐水
[0463]
pdx表示患者来源的异种移植物
[0464]
pet表示正电子发射断层摄影术
[0465]
pic50表示转换为摩尔时ic50值的负对数
[0466]
pop表示脯氨酰寡肽酶
[0467]
ppm表示百万分之几
[0468]
prep表示脯氨酰内肽酶
[0469]
prep.表示制备型
[0470]
ps表示聚苯乙烯
[0471]
q-tof表示四极飞行时间
[0472]
ref表示参考
[0473]
rfu表示相对荧光单位
[0474]
rlb表示放射性配体结合测定
[0475]
rmce表示重组酶介导的盒式交换
[0476]
rp表示反相
[0477]rt
表示保留时间
[0478]
rt表示室温
[0479]
ru表示共振单位
[0480]
sar表示结构活性关系
[0481]
sat.表示饱和的
[0482]
scid表示严重联合免疫缺陷
[0483]
sck表示单循环动力学
[0484]
sec或s表示秒
[0485]
sf表示自发裂变
[0486]
spect表示单光子发射计算机断层显像术
[0487]
spps表示固相肽合成
[0488]
t
1/2
表示终末半衰期
[0489]
tbu表示叔丁基
[0490]
tfa表示三氟乙酸盐或三氟乙酸
[0491]
tg表示tentagel
[0492]
tgi表示肿瘤生长抑制
[0493]
thf表示四氢呋喃
[0494]
tips表示三异丙基硅烷
[0495]
tlc表示薄层色谱分析
[0496]
tme表示肿瘤微环境
[0497]
tr表示保留时间
[0498]
uhplc表示超高效液相色谱
[0499]
uv表示紫外光
[0500]vss
表示稳态分布容积
[0501]vz
表示末期分布容积
[0502]
实施例1：材料和方法
[0503]
材料和方法以及一般方法通过以下实施例进一步说明。
[0504]
溶剂：
[0505]
溶剂按规定质量使用，无需进一步纯化。乙腈(super gradient，hplc，vwr，用于分析目的；prepsolv，merck，用于制备目的)；二氯甲烷(合成，roth)；乙酸乙酯(合成级，roth)；n,n-二甲基甲酰胺(肽合成级，biosolve)；1-甲基-2-吡咯烷酮(肽级，iris biotech)1,4-二噁烷(特纯，roth)；甲醇(p.a.，merck)。
[0506]
水：milli-q plus，millipore，去矿物质。
[0507]
化学品：
[0508]
化学品根据或类似于文献方法合成或购自：sigma-aldrich-merck(deisenhofen，germany)、bachem(bubendorf，switzerland)、vwr(darmstadt，germany)、novabiochem(merck group，darmstadt，germany)、acros organics(distribution company fisher scientific gmbh，schwerte，germany)、iris biotech(marktredwitz，germany)、amatek chemical(jiangsu，china)、roth(karlsruhe，deutschland)、molecular devices(chicago，usa)、biochrom(berlin、germany)、peptech(cambridge，ma，usa)、synthetech(albany，or，usa)、pharmacore(high point，nc，usa)、pcas biomatrix inc(saint-jean-sur-richelieu，quebec，canada)、alfa aesar(karlsruhe，germany)、tianjin nankai hecheng s&t co.、ltd(tianjin，china)、chematech(dijon，france)和anaspec(san jose，
ca，usa)或其他公司，以指定质量使用无需进一步纯化。
[0509]
细胞：
[0510]
ht29(ecacc cat.no.91072201)和wi-38(ecacc cat.no.90020107)购自ecacc，表达人fap(q12884)的hek293细胞由inscreenex gmbh(braunschweig,germany)通过使用重组酶介导的盒式交换(rmce)产生。所述rmce方法由nehlsen等人(nehlsen,et al.,bmc biotechnol,2009,9:100)描述。
[0511]
hplc/ms分析：
[0512]
hplc/ms析通过注入5μl样品溶液进行，对所有色谱图使用2步梯度(12分钟内5-65％的b，然后0.5分钟内65-90％的a(在水中的0.1％tfa)和b(在acn中0.1％tfa)。rp柱来自agilent(poroshell 120型，2.7μm，ec-c18，50
×
3.00mm，流速0.8ml，hplc室温)；质谱仪：agilent 6230lc/tof-ms，esi电离。masshunter qualitative analysis b.07.00sp2用作软件。uv检测在λ＝230nm进行。保留时间(r
t
)以十进制表示(例如1.9分钟＝1分钟54秒)并且指的是uv光谱仪中的检测。为了评估观察到的化合物质量，使用“find compounds by formula”功能。特别地，单独的“化合物的中性质量(以daltons为单位)”值和相应的同位素分布模式用于确认化合物的身份。质谱仪的准确度约为
±
5ppm。
[0513]
制备型hplc：
[0514]
使用反相柱(kinetex 5μxb-c18 150
×
30mm，来自phenomenex，或rlrp-s 8μ,150
×
25mm)作为固定相进行制备型hplc分离。使用在水中0.1％tfa(a)和在acn中0.1％tfa(b)作为流动相，以线性二元梯度混合。梯度描述如下：“30分钟内10％至40％的b”，这意味着在30分钟内运行从10％的b(及相应90％的a)至40％的b(相应60％的a)的线性梯度。流速在30至50ml/min范围内。用于纯化本发明化合物的典型梯度以5-25％的b开始并在30分钟后以35-50％的b结束，在结束和开始时的b百分比之间的差异为至少10％。常用的梯度是“30分钟内15％至40％的b”。
[0515]
自动/半自动固相合成的一般程序：
[0516]
肽和聚酰胺的自动固相在tetras肽合成仪(advanced chemtech)上以50μmol和100μmol的规模进行。在配备玻璃料(frits)的塑料注射器(材料pe，roland vetter laborbedarf ohg，ammerbuch，germany)中进行手动步骤。除非另有说明，否则所述方案中的试剂量对应于100μmol规模。
[0517]
在聚苯乙烯(与1,4-二乙烯基苯(ps)或二(乙二醇)二甲基丙烯酸酯(deg)交联)、chemmatrix(cm)或tentagel(tg)树脂上进行固相合成。树脂接头是三苯甲基、wang和rink amide。
[0518]
树脂加载：
[0519]
在三苯甲基接头的情况下，如下进行第一个构件的连接(树脂加载)。将树脂(聚苯乙烯(ps)三苯甲基氯，初始加载：1.8mmol/g)在dcm(5ml)中溶胀30分钟，随后用dcm洗涤(3ml，1分钟)。然后用相应构件(0.5mmol，5eq.)和dipea(350μl，3.5mmol，35eq.)在dcm(4ml)中的混合物处理树脂1小时。之后用甲醇(5ml，5分钟)和dmf(3ml，2
×
1分钟)洗涤树脂。
[0520]
在wang接头的情况下，使用预加载的树脂(聚苯乙烯(ps)和tentagel(tg))。
[0521]
在rink amide接头的情况下，树脂(cm，deg)的第一个残基的连接使用与链组装相
同的程序进行，如下所述。
[0522]
烯丙氧羰基/烯丙基脱保护：
[0523]
在dmf中溶胀后，将树脂用dmf和dcm洗涤。通过使氮气流经过搅拌的溶剂而使dcm脱氧。使用无氧溶剂洗涤树脂三次。然后在树脂中加入2ml在无氧dcm中的2m巴比妥酸溶液和1ml在无氧dcm中的25μm四(三苯基膦)钯(0)溶液。将树脂搅动1小时，然后用dcm、meoh、dmf、在dmf中的5％dipea、在dmf中的5％二硫代氨基甲酸酯、dmf和dcm洗涤(每个洗涤步骤重复3次，每次3ml洗涤1分钟)。
[0524]
fmoc-去保护：
[0525]
在dmf中溶胀后，将树脂用dmf洗涤，然后用哌啶/dmf(1:4，3ml，2和20分钟)处理，随后用dmf洗涤(3ml，5
×
1分钟)。
[0526]
dde-去保护：
[0527]
在dmf中溶胀后，将树脂用dmf洗涤，然后用水合肼/dmf(2/98，3ml，2
×
10分钟)处理，随后用dmf洗涤(3ml，5
×
1分钟)。
[0528]
mtt-去保护：
[0529]
在dcm中溶胀后，将树脂用dcm洗涤，然后用hfip/dcm处理(7/3，4-6ml，4小时)，随后用dcm(3ml，3
×
1分钟)、dmf(3ml，3
×
1分钟)和dipea(在dmf中0.9m，3ml，1分钟)洗涤。
[0530]
试剂的溶液：
[0531]
构件(在dmf或nmp中0.3m)，dipea(在dmf中0.9m)，hatu(在dmf中0.4m)，乙酸酐(在dmf中0.75m)。
[0532]
偶联：构件/氨基酸的偶联(链组装)：
[0533]
除非另有说明，否则构件的偶联如下进行：在随后加入相应构件的溶液(1.7ml，5eq.)、dipea溶液(1.15ml，10eq.)和hatu溶液(1.25ml，5eq.)之后，将树脂振摇45分钟。如有必要，用dmf洗涤树脂(3ml，1分钟)并重复偶联步骤。
[0534]
末端乙酰化：
[0535]
在加入dipea溶液(1.75ml，16eq.)和乙酸酐溶液(1.75ml，13eq.)后，将树脂振摇10分钟。然后用dmf洗涤树脂(3ml，6
×
1分钟)。
[0536]
裂解方法a：从过酸不稳定树脂上裂解受保护的片段：
[0537]
在完成序列组装后，将树脂最后用dcm洗涤(3ml，4
×
1分钟)，然后真空干燥。然后将树脂用hfip/dcm(7/1，4ml，4小时)处理并将收集的溶液蒸发至干。剩余物用制备型hplc纯化或不经进一步纯化而使用。
[0538]
裂解方法b：未保护片段的裂解(完全树脂裂解)：
[0539]
在序列组装完成后，最后用dcm(3ml，4
×
1分钟)洗涤树脂，真空干燥过夜，用tfa、edt、水和tips(94/2.5/2.5/1)处理2小时(除非另有说明)。然后将裂解液倒入冷却的mtbe和环己烷混合物中(1/1，与裂解液体积相比过量10倍)，在4℃离心5分钟，收集沉淀并真空干燥。在纯化或进一步修饰之前，将剩余物从水/乙腈中冻干。
[0540]
裂解方法c：在溶液中肽的保护性基团的裂解
[0541]
将受保护/部分受保护的化合物在tfa、水和tips(95/2.5/2.5)中溶解2小时(除非另有说明)。然后将裂解溶液倒入冷却的mtbe和环己烷混合物中(1/1，与裂解溶液体积相比过量10倍)，在4℃离心5分钟，收集沉淀并真空干燥。在纯化或进一步修饰之前，将剩余物从
水/乙腈中冻干。
[0542]
更多相关fmoc-固相-肽合成方法在“fmoc solid phase peptide synthesis”editors w.chan,p.white,oxford university press,usa,2000中详细描述。适当时，化合物的命名使用mestrenova第12版mnova iupac name插件(mestrelab research,s.l.)或autonom 2.2版(beilstein informationssysteme1988-1998,beilstein institut f
ü
r literatur der organischen chemie，许可给beilstein chemiedaten and software gmbh)适当命名。
[0543]
化合物的制备：
[0544]
以下实施例提供制备本发明化合物的具体实施方案。除非另有说明，否则所有起始材料和试剂均为标准商品级，无需进一步纯化即可使用，或可通过常规方法由这种材料轻而易举地制备。根据本公开内容，有机合成领域的技术人员会认识到可以改变所述起始材料和反应条件，包括用于产生本发明所涵盖的化合物的额外步骤。
[0545]
本发明化合物的一种通用合成路线包括：
[0546]
1.具有两个硫醇部分的线性肽前体的固相肽合成(spps)。
[0547]
2.该线性肽前体与以下衍生物的硫醇位点特异性环化：
[0548]
a.双(溴甲基)苯衍生物，或
[0549]
b.三(溴甲基)苯衍生物。
[0550]
3.在与三(溴甲基)苯衍生物环化的情况下，环化反应中形成的中间体与能够连接螯合剂的接头进一步反应。
[0551]
实施例2：合成hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3554)
[0552]
标题化合物的合成是通过最初在固相上合成线性肽前体以及随后进行溶液相环化(实施例2a，在非水溶液中(方法a)或在水溶液中(方法b))，或者通过在固相上进行所有步骤，包括固相环化(实施例2b)。
[0553]
实施例2a：在溶液中通过两种可供选择的环化方法合成
[0554]
如“自动/半自动固相合成的一般程序”中所述，将fmoc-cys(trt)-oh以50μmol规模加载到三苯甲基树脂上。根据“自动/半自动固相合成的一般程序”将肽的序列(hex-cys-pro-pro-thr-gln-phe-cys-oh)组装在这个树脂上。在进行“裂解方法b”步骤之后，将粗制肽通过两种替代方法在溶液中冻干和环化。
[0555]
环化方法a：
[0556]
将粗制肽(基于50μmol树脂加载量)溶解在10ml的1:1乙醇和乙腈混合物中。首先向该混合物中加入35μl dipea，然后加入23.7mg 1,3,5-三(溴甲基)苯(66.6μmol，与初始树脂加载加载量相比为1.3eq)。将溶液搅拌1小时，然后加入42.8mg巯基乙胺(555μmol，与初始树脂加载量相比为11eq)。1小时后，真空除去溶剂，加入25ml的1:1乙腈和水的混合物(加入含有50μl tfa)。通过冷冻干燥除去溶剂。对剩余物进行hplc纯化(30分钟内15％至45％的b，kinetex)，产生17.8mg(16.4μmol)的中间体hex-[cys(tmebn(h-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(32.8％)。
[0557]
环化方法b：
[0558]
将粗制肽(基于50μmol树脂负载)溶解在60ml的1:1的碳酸氢铵溶液(50mm，ph＝
8.5)和乙腈混合物中。向该混合物中加入在0.5ml乙腈中26.8mg的1,3,5-三(溴甲基)苯溶液(75μmol，与初始树脂加载量相比为1.5eq)。将溶液搅拌1小时，然后加入38.6mg的巯基乙胺(500μmol，与初始树脂加载量相比为10eq)。2小时后，加入50μl tfa并通过冻干除去溶剂。对剩余物进行hplc纯化(30分钟内15％至45％的b，kinetex)，产生19.47mg(18μmol)中间体hex-[cys(tmebn(h-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(35.9％)。
[0559]
这两种环化方法性能相似，获得类似的产量和相似纯度。
[0560]
向在300μl dmso中的中间体hex-[cys(tmebn(h-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(在这个实施例中通过环化方法b获得)溶液中，加入5μl dipea以将ph值调节至约7.5-8。然后加入在200μl dmso中的20.5mg dota-nhs(27μmol，与肽中间体相比为1.5eq)。在lc/tof-ms监测的反应过程中，3次加入5μl dipea以将ph值重新调节至起始值。反应完成后，将溶液进行hplc纯化(30分钟内15％至45％的b，kinetex)，产生20.44mg纯的标题化合物(总收率27.8％)。hplc：r
t
＝5.9分钟。lc/tof-ms：准确质量1469.640(计算值1469.639)。c
67h99n13o18
s3(mw＝1470.780)。
[0561]
实施例2b：包括固相环化法的合成
[0562]
对于结合树脂的标题化合物的合成，使用fmoc-cys(trt)-wang tentagel树脂作为起始材料。在后者上，根据“自动化/半自动化固相合成的一般程序”将肽的序列(hex-cys(trt)-pro-pro-thr(tbu)-gln(trt)-phe-cys-oh)以1mmol规模组装。完成序列组装后，用dcm洗涤树脂(3
×
1分钟)。然后从用tfa、tips和dcm(5/5/90，5
×
5分钟)的溶液处理的树脂中选择性地去除三苯甲基保护基。将树脂用dcm、dmf、在dmf中0.9m dipea、dmf、dcm溶液洗涤(3/3/2/3/3)并在真空中干燥。以200μmol的部分进行以下环化。为此，将树脂在dmf中溶胀，然后用在2ml dmf中的1,3,5-三(溴甲基)苯(86mg，240μmol，1.2eq)、dipea(235μl，1mmol，5eq)溶液在50℃处理90分钟。除去溶液，用dmf洗涤树脂，然后将巯基乙胺溶液(154.3mg，2mmol，10eq)加入树脂中。将树脂在50℃再搅拌90分钟。用dmf和dcm(3/3)洗涤树脂后，将肽树脂(hex-[cys(tmebn(h-aet))-pro-pro-thr(tbu)-gln(trt)-phe-cys]-o-wang-tentagel)干燥。通过这个程序，谷氨酰胺中的三苯甲基可能会部分或完全去保护。在任何情况下，这都不会干扰aet游离氨基的任选衍生化。
[0563]
对于用dota进行的最终衍生化，以50μmol规模使用肽树脂(hex-[cys(tmebn(h-aet))-pro-pro-thr(tbu)-gln(trt)-phe-cys]-o-wang-tentagel)。根据“自动/半自动固相合成的一般程序”，偶联dota(tbu)
3-oh。干燥后，将树脂进行“裂解方法b”。将粗制肽冻干，然后通过制备型hplc纯化(30分钟内15％至45％的b，kinetex)，产生11.0mg(7.5μmol)纯的标题化合物(15％)。hplc：r
t
＝5.9分钟。lc/tof-ms：准确质量1469.640(计算值1469.639)。c
67h99n13o18
s3(mw＝1470.780)。
[0564]
实施例3：合成hex-[cys(tmebn(dota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3407)
[0565]
a)通过两种不同环化方法合成中间体hex-[cys(tmebn(h-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2[0566]
肽的序列(hex-cys-pro-pro-thr-gln-phe-cys-asp-nh2)根据“自动/半自动固相合成的一般程序”以50μmol规模在rink amide树脂上组装。在进行“裂解方法b”的步骤后，将粗制肽通过两种替代方法进行冻干和环化。
[0567]
环化方法a：
[0568]
将粗制肽(基于50μmol树脂加载量)溶解在10ml的1:1乙醇和乙腈混合物中。首先向该混合物中加入30μl dipea，然后加入26.8mg的1,3,5-三(溴甲基)苯(75μmol，与初始树脂加载量相比为1.5eq)。将溶液搅拌45分钟后，加入在200μl的1:1乙醇/乙腈混合物中43mg哌嗪溶液(500μmol，与初始树脂加载量相比为10eq)。1小时后真空除去溶剂，加入25ml的1:1的乙腈和水混合物(含50μl tfa)，通过冻干除去溶剂。将剩余物进行hplc纯化(在30分钟内15％至40％的b，kinetex)，产生15.3mg(12.7μmol)的肽中间体hex-cys(tmebn(h-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(25.3％)。
[0569]
环化方法b：
[0570]
将粗制肽(基于50μmol树脂加载量)溶解在60ml的1:1的碳酸氢铵溶液(50mm，ph＝8.5)和乙腈混合物中。向该混合物中加入26.8mg的1,3,5-三(溴甲基)苯(75μmol，与初始树脂加载量相比为1.5eq)。将溶液搅拌1小时，加入43mg哌嗪(500μmol，与初始树脂加载量相比为10eq)。6小时后，加入100μl tfa，通过冻干除去溶剂。将剩余物进行hplc纯化(在30分钟内15％至40％的b，kinetex)，产生17.2mg(14.2μmol)的肽中间体hex-cys(tmebn(h-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(28.4％)。
[0571]
这两种环化方法的执行程序相似，获得类似产量和相似纯度。
[0572]
b)合成hex-[cys(tmebn(dota-pp))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-asp-nh2(3bp-3407)的最终步骤：dota偶联和纯化
[0573]
向在200μl dmso中的中间体(通过环化方法b获得)溶液加入2.5μl dipea，以将ph值调节至大约7.5-8。然后加入在100μl dmso中的16.3mg的dota-nhs(21.4μmol，与肽中间体相比为1.5eq)。在lc/tof-ms监测的反应过程中，加入5次2.5μl dipea以将ph值重新调整到起始值。反应完成后，将溶液进行hplc纯化(在30分钟内15％至40％的b，kinetex)，产生19.1mg(12.0μmol)纯的标题化合物(85％)。hplc：r
t
＝5.70分钟。lc/tof-ms：准确质量1592.737(计算值1592.737)。c
73h108n16o20
s2(mw＝1593.866)。
[0574]
实施例4：本发明化合物的dota-过渡金属络合物的制备
[0575]
a.从包含未络合dota的相应肽制备包含dota-过渡金属络合物的肽的一般程序
[0576]
将在以下溶液中包含未络合的dota的0.1mm肽溶液用在水中的0.1mm相应金属盐溶液稀释：
[0577]
·
0.4m乙酸钠，ph＝5(缓冲液a)(在cu(ii)、zn(ii)、in(iii)、lu(iii)或ga(iii)络合物的情况下)或
[0578]
·
0.1m乙酸铵，ph＝8(缓冲液b)(在eu(iii)络合物的情况下)
[0579]
由此将肽与金属的摩尔比调节至1:3。以如下条件搅拌溶液：
[0580]
·
在50℃搅拌20分钟(本文也称为条件a)(在in(iii)、lu(iii)、ga(iii)、zn(ii)或cu(ii)络合物的情况下)，或
[0581]
·
在室温下过夜(本文也称为条件b)(在eu(iii)络合物的情况下)。
[0582]
然后将该溶液进行：
[0583]
hplc纯化(本文也称为纯化方法a)，或
[0584]
固相萃取(本文也称为纯化方法b)。
[0585]
在固相萃取的情况下，将250mg varian bondesil-env置于15ml聚苯乙烯注射器
(mw＝1642.723)。
[0599]
h.hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3949)的镓络合物
[0600]
从溶解在缓冲液a中的7.9mg肽3bp-3554(5.4μmol)开始制备络合物，将其用条件a处理的ga(no3)3×
h2o溶液稀释。在纯化步骤中，使用“纯化方法b”，产生4.2mg纯的标题化合物(51％收率)。hplc：r
t
＝6.6分钟。lc/tof-ms：准确质量1535.543(计算值1535.541)。c
67h96
gan
13o18
s3(mw＝1537.479)。
[0601]
i.hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-3662)的铕络合物
[0602]
从溶解在缓冲液b中的3.4mg肽3bp-3554(2.3μmol)开始制备络合物，将其用条件b处理的eucl3×
6h2o溶液稀释。在纯化步骤中，使用“纯化方法b”，产生3.1mg纯的标题化合物(收率83％)。hplc：r
t
＝5.9分钟。lc/tof-ms：准确质量1617.541(计算值1617.536)。c
67h96
eun
13o18
s3(mw＝1619.721)。
[0603]
j.hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-4293)的铜(ii)络合物
[0604]
从溶解在缓冲液a中的18mg肽3bp-3554(12.2μmol)开始制备络合物，将其用条件a处理的cu(oac)2的溶液稀释。在纯化步骤中，使用“纯化方法b”，产生16.5mg纯的标题化合物(88％收率)。hplc：r
t
＝6.5分钟。lc/tof-ms：准确质量1530.553(计算值1530.553)。c
67h97
cun
13o18
s3(mw＝1532.310)。
[0605]
k.hex-[cys(tmebn(dota-aet))-pro-pro-thr-gln-phe-cys]-oh(3bp-4343)的锌络合物
[0606]
从溶解在缓冲液a中的20mg肽3bp-3554(13.6μmol)开始制备络合物，将其用条件a处理的zncl2溶液稀释。在纯化步骤中，使用“纯化方法b”，产生16.1mg纯的标题化合物(收率77％)。hplc：r
t
＝6.4分钟。lc/tof-ms：准确质量1531.553(计算值1531.553)。c
67h97n13o18
s3zn(mw＝1534.160)。
[0607]
实施例5：血浆稳定性测定
[0608]
为了测定所选的本发明化合物在人和小鼠血浆中的稳定性，进行血浆稳定性测定。这种血浆稳定性测定测量本发明化合物在血浆中的降解。降解是化合物作为除前药外的化合物的一个重要特征，前药在血浆中迅速降解，一般在体内表现出较差的功效。结果表明，这些化合物在人和小鼠血浆中高度稳定。所述稳定性对于本发明的这些化合物的诊断、治疗和治疗诊断应用是足够的。
[0609]
血浆稳定性样品是通过用在dmso中1μl的0.5mm化合物储备溶液对50μl血浆等分试样(全部为k2edta)掺加示踪剂(spiking)而制备。涡旋后，将样品在恒温混匀仪(thermomixer)中在37℃温育0、4和24小时。温育后，将样品在冰上储存直至进一步处理。所有样品均一式两份制备。
[0610]
将合适的内标加入每个样品中(在dmso中1μl的0.5mm储备溶液)。根据表5中所示的化合物条件，使用两种不同的方法进行蛋白质沉淀。
[0611]
a)加入250μl含有1％三氟乙酸的乙腈。在室温温育30分钟后，通过离心分离沉淀物，将150μl上清液用150μl的1％甲酸水溶液稀释。
[0612]
b)加入150μl含有78％的0.1m硫酸锌和22％乙腈的硫酸锌沉淀剂。在室温温育30分钟后，通过离心分离沉淀物。如果化合物含有游离dota部分，则向100μl上清液中加入10μl的1％甲酸，然后在60℃进一步温育10分钟以完成锌螯合物的形成。
[0613]
在与agilent 6530 q-tof质谱仪联用的agilent 1290 uhplc系统上测定清洁样品溶液中的待分析物。在phenomenex biozen xb-c18 hplc柱(50
×
2mm，1.7μm粒径)上梯度洗脱进行色谱分离，使用作为洗脱液a的在水中的0.1％甲酸和作为洗脱液b的乙腈的混合物(在7分钟内2％的b至41％，800μl/分钟，40℃)。在正离子esi模式中通过以2/秒的采样率扫描从m/z 50至3000质量范围进行质谱检测。
[0614]
从质谱原始数据中，针对化合物和内标二者提取双电荷或三电荷单一同位素信号的离子流。
[0615]
使用集成的分析物信号通过外部基质校准和内部标准进行定量。
[0616]
此外，回收率是通过在用一定量的化合物处理后仅包含内标的纯血浆样品进行掺加示踪剂来确定的。
[0617]
通过分析最高校准样品后的空白样品(20％乙腈)来评估残留。
[0618]
对根据本发明的一些化合物进行的这个测定的结果在下表5中给出。结果以“24小时后剩余的完整化合物的百分比”表述，是指通过lc-ms定量方法，基于在实验开始时材料的量，在实验结束时检测到未变化的材料的百分比。由于所有化合物在至少24小时后保持50％以上的完整性，因此它们被认为对于诊断和治疗应用是足够稳定的。
[0619]
表5：血浆稳定性测定结果
[0620][0621]
实施例6：facs结合测定
[0622]
为了测定根据本发明的化合物与表达fap的细胞的结合，建立了竞争性facs结合测定。
[0623]
将表达fap的人wi-38成纤维细胞(ecacc)在包含15％胎牛血清、2mm l-谷氨酰胺和1％非必需氨基酸的emem中培养。用accutase(biolegend，#bld-423201)分离细胞并在facs缓冲液(包括1％fbs的pbs)中洗涤。将细胞在facs缓冲液中稀释至终浓度为100000个细胞/ml，将200μl细胞悬液移至u形非结合96孔平板(greiner)中。将细胞在冰冷的facs缓冲液中洗涤并与3nm的cy5标记的化合物(h-met-[cys(3mebn)-pro-pro-thr-glu-phe-cys]-asp-his-phe-arg-asp-ttds-lys(cy5so3)-nh2)在存在肽浓度增加的条件下在4℃温育1小时。将细胞用facs缓冲液洗涤两次并重悬于200μl的facs缓冲液中。在attune nxt流式细胞仪中分析细胞。中值荧光强度(cy5通道)通过attune nxt软件计算并针对肽浓度作图。使用activitybase软件进行四参数逻辑(4pl)曲线拟合和pic50计算。对于根据本发明的每种化合物，这个测定以及根据实施例7进行的fap蛋白酶活性测定的结果列于表6中(在
实施例7中示出)。pic50类别a表示pic50值》8.0，类别b表示pic50值在7.1和8.0之间，类别c表示pic50值在6.1和7.0之间，以及类别d表示pic50值≤6.0。
[0624]
实施例7：fap蛋白酶活性测定
[0625]
为了测定实施例6的肽的抑制活性，建立了基于fret的fap蛋白酶活性测定。
[0626]
在测定缓冲液(50mm tris、1m nacl、1mg/ml bsa，ph 7.5)中将重组人fap(r&d systems，#3715-se)稀释至3.6nm的浓度。将25μl fap溶液与25μl的3倍连续稀释的测试化合物混合，并在白色96孔proxiplate(perkin elmer)中温育5分钟。作为特异性fap底物，使用fret肽hilytefluortm488-vs(d-)p sqg k(520)-nh2(bainbridge,et al.,sci rep,2017,7:12524)。加入在测定缓冲液中稀释的25μl的30μm底物溶液。所有溶液在使用前均在37℃平衡。在spectramax m5读板器中在37℃以动力学模式测量5分钟底物裂解和荧光增加(485nm激发和538nm发射)。通过softmax pro软件计算rfu/sec，并根据肽浓度作图。使用activitybase软件进行四参数逻辑(4pl)曲线拟合和pic50计算。表6(实施例6)中给出了本发明每种化合物的这个测定的结果。pic50类别a代表pic50值》8.0，类别b代表pic50值在7.1和8.0之间，类别c代表pic50值在6.1和7.0之间，类别d表示pic50值≤6.0。
[0627]
如表6所示，本发明的化合物在facs结合测定和fap蛋白酶活性测定中均显示出惊人的优异结果。
[0628]
表6：通过hplc确定的化合物id、序列、准确的计算质量、准确的实测质量、保留时间(分钟)以及facs结合和fap活性测定的pic50类别
[0629][0630]
实施例8：表面等离子共振测定
[0631]
使用biacore
tm t200 spr系统进行表面等离子体共振研究。简而言之，偏振光被导向金标记的传感器表面，并检测到最小强度的反射光。反射光的角度随着分子结合和解离发生变化。金标记的传感器表面加载了带有fap靶蛋白的fap抗体，因此抗体结合不会发生在fap的底物结合位点。将测试化合物与加载的表面接触，与fap配体的实时相互作用数据记录在传感图中。实时测量结合相互作用的结合和解离，从而能够计算结合和解离速率常数以及相应的亲和性常数。重要的是，由于运行和样品缓冲液的折射率不同，以及测试化合物与流动池表面的非特异性结合，导致产生背景响应。这个背景是在没有固定的fap的情况下，通过将样品在相同密度捕获抗体包被的对照流动池上运行而测量和减去。此外，还对结合数据进行了基线漂移校正，这是由于捕获的fap从固定的抗体上缓慢解离造成的。这种漂移是通过将运行缓冲液注射过具有固定在传感器表面上的抗体和fap的流动池而测量的。
[0632]
使用biacore
tm cm5传感器芯片。将人抗fap抗体(mab3715，r&d systems)在10mm乙酸盐缓冲液(ph4.5)中稀释至终浓度为50μg/ml。将150μl等分试样移至塑料瓶中并放入biacore
tm t200仪器的样品架中。将胺偶联试剂盒试剂(amine coupling kit reagent)溶液移至塑料瓶中并放入样品架：90μl的0.4m 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(edc)，和90μl的0.1m n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)。将130μl等分的1m乙醇胺-hcl(ph8.5)移至
塑料瓶中并放入样品架中。biacore
tm
液体系统的设置如下：将装有蒸馏水(1l)、运行缓冲液(500ml)的单独瓶子以及用于废物的空瓶放在缓冲液托盘上。使用预装的固定程序，固定级别为7000ru。固定在25℃进行。进行抗fap抗体的固定程序，如表7中所述。
[0633]
表7：cm5传感器芯片上使用的抗fap抗体的固定方案
[0634]
步骤注射的溶液接触时间流速表面处理50mm naoh300s10μl/min表面活化edc/nhs420s10μl/min洗涤乙醇胺90s10μl/min配体结合在乙酸盐缓冲液中稀释的人/小鼠抗体420s10μl/min洗涤运行缓冲液40s10μl/min反应的非配体结合表面的去活化1m乙醇胺420s10μl/min洗涤运行缓冲液30s10μl/min
[0635]
将人重组fap在运行缓冲液中稀释至终浓度为20μg/ml。将100μl等分的人fap工作溶液移至塑料瓶中并放入样品架中。通过将每种化合物溶解在dmso中制备0.5mm化合物储备溶液。对于每个测试化合物，将化合物储备溶液在运行缓冲液(hbst)中以500nm稀释，并进一步用hbst-dmso缓冲液(0.1％dmso)稀释。二元络合物的spr结合分析在25℃下以sck模式进行。表8描述了捕获和评估结合动力学的方案。在三次sck测量之后，通过将运行缓冲液注入流动池来评估基线漂移，其中抗体和fap固定在传感器表面。
[0636]
表8：评估结合动力学的方案
[0637][0638]
对于每个测试化合物，使用biacore
tm t200控制软件将共振单位(ru)形式的spr原始数据绘制为传感图。从测试化合物传感图(空白校正)的信号中减去来自空白传感图的信号。通过减去没有测试化合物的sck运行(仅运行缓冲液)的传感图，针对基线漂移对空白校正的传感图进行校正。结合率(k
on
)、解离率(k
off
)、解离常数(kd)和t
1/2
从来自biacore
tm t200评估软件的1:1langmuir结合模型从空白标准化spr数据计算。原始数据和拟合结果以文本文件形式输入idbs。pkd值(解离常数的负十进制对数)在idbs excel模板中计算。
[0639]
用于选择本发明的化合物的这个测定的结果呈现在表9中。类别a代表pkd值》8.0，
类别b代表pkd值在7.1和8.0之间，类别c代表pkd值在6.1和7.0之间。
[0640]
表9：biacore测定的化合物id、序列和pkd类别
[0641]
id序列pkd类别3bp-3407hex
‑‑
[c(tmebn(dota
‑‑
pp))-pptqfc]d-nh2a3bp-3554hex
‑‑
[c(tmebn(dota
‑‑
aet))-pptqfc]-oha3bp-3590hex
‑‑
c([tmebn(indota
‑‑
pp))-pptqfc]d-nh2a3bp-3591hex
‑‑
c([tmebn(ludota
‑‑
pp))-pptqfc]d-nh2a3bp-3592hex
‑‑
c([tmebn(gadota
‑‑
pp))-pptqfc]d-nh2a3bp-3623hex
‑‑
c([tmebn(indota
‑‑
aet))-pptqfc]-oha3bp-3624hex
‑‑
c([tmebn(ludota
‑‑
aet))-pptqfc]-oha3bp-3949hex
‑‑
[c(tmebn(gadota
‑‑
aet))-pptqfc]-oha
[0642]
实施例9：prep和dpp4蛋白酶活性测定
[0643]
为了测试fap结合肽对prep和dpp4两者的选择性，与上述fap活性测定类似地进行蛋白酶活性测定，但有以下例外。
[0644]
用重组人prep(r&d systems，#4308-se)测量prep活性。使用50μm z-gp-amc(bachem，#4002518)作为底物。dpp4活性测定在dpp测定缓冲液(25mm tris，ph 8.0)中进行。重组人dpp4购自r&d systems(#9168-se)。20μm gp-amc(santa cruz biotechnology，#115035-46-6)用作底物。
[0645]
在37℃在spectramax m5平板读器中以动力学模式测量裂解后amc的荧光(在380nm激发和在460nm发射)。rfu/sec通过softmax pro软件计算，并针对肽浓度作图。使用activitybase软件进行四参数逻辑(4pl)曲线拟合和pic50计算。下表10中给出了根据本发明的一些化合物的这个测定的结果。
[0646]
表10：prep和dpp4活性测定的结果(pic50值)
[0647]
idpic50(prep)pic50(dpp4)3bp-3407《6《63bp-3554《6《6
[0648]
实施例10：特异性筛选
[0649]
进行特异性筛选，以及早期鉴定本发明化合物的显著脱靶相互作用。使用由bowes等人(bowes,et al.,nat rev drug discov,2012,11:909)推荐的包含44个选定靶标和与其结合的化合物(称为“参考化合物”，ref.化合物)的标准测定组合(“safetyscreen44
tm panel”)测试特异性。参考化合物作为各自测定的阳性对照，因此预期用这些参考化合物检测抑制作用。然而，预期本发明的化合物在这些试验中不会表现出抑制作用。这些结合和酶抑制测定由eurofins cerep sa(celle l’evescault,france)进行。
[0650]
3bp-3407和3bp-3554以10μm进行测试。化合物结合计算为特异于每个靶标的放射性标记配体结合的抑制百分比％(分别为“特异性结合的抑制百分比％”(3bp-3407)或(3bp-3554))。化合物酶抑制作用计算为对照酶活性的抑制百分比％。
[0651]
显示高于50％的抑制或刺激作用的结果被认为代表测试化合物的显著效果。在下表11中列出的任何研究的受体中均没有观察到这种效应。这个测定的结果总结在下表11中。
[0652]
表11：针对10μm 3bp-3407和10μm 3bp-3554的特异性筛选的结果(safetyscreen44tmpanel)
[0653]
[0654]
[0655][0656]
此外，bps biosciences进行了蛋白酶特异性筛选，以进一步确定本发明化合物的特异性(turk,nat rev drug discov,2006,5:785；overall,et al.,nat rev cancer,2006,6:227；anderson,et al.,handb exp pharmacol,2009,189:85)。
[0657]
3bp-3407和3bp-3554以1μm和10μm一式两份进行测试。在不存在化合物的情况下，每个数据集中的荧光强度(ft)定义为100％活性。在不存在酶的情况下，每个数据集中的背景荧光强度(fb)定义为0％活性。在每种化合物存在下的活性百分比根据以下等式计算：％活性＝(f-fb)/(ft-fb)，其中f＝化合物存在下的荧光强度。根据以下公式计算抑制百分比：％抑制＝100％-％活性。显示高于50％抑制作用的结果被认为代表了测试化合物的显著效果。这个测定的结果在下表12中给出。
[0658]
表12：针对1μm和10μm 3bp-3407以及1μm和10μm 3bp-3554的特异性蛋白酶筛选结果
[0659]
[0660]
[0661][0662]
实施例11：所选择的化合物的
111
in-和
177
lu-标记
[0663]
为了用作诊断、治疗或治疗诊断的活性剂，需要用放射性同位素标记化合物。标记程序需要适当地确保本发明的放射性标记化合物的高放射化学收率和纯度。这个实施例表明本发明化合物适用于放射性标记，可以高放射化学收率和纯度进行标记。
[0664]
将30至100mbq的
111
incl3(在0.02m hcl中)与每30mbq的1nmol化合物(在0.1m hepes中200μm储备溶液，ph 7)和缓冲液(1m乙酸钠缓冲液ph 5或含有25mg/ml甲硫氨酸的1m乙酸钠/抗坏血酸缓冲液ph 5)混合，最终缓冲液浓度为0.1至0.2m。将混合物加热至80℃持续20-30分钟。冷却后，分别以0.2mm和0.1％的终浓度加入dtpa和tween-20。
[0665]
将0.2至2.0gbq的
177
lucl3(在0.04m hcl中)与每45mbq的1nmol化合物(在0.1m hepes中200μm储备溶液，ph 7)和缓冲液(含有25mg/ml甲硫氨酸的1m乙酸钠/抗坏血酸缓冲液，ph 5)混合，最终缓冲液浓度为约0.4m。将混合物加热至90℃持续20分钟。
[0666]
通过薄层色谱(tlc)和hplc分析标记效力。对于tlc分析，将1至2μl稀释的标记溶液应用于一条itlc-sg色谱纸(agilent，7.6
×
2.3mm)并在柠檬酸-葡萄糖溶液(sigma)中展开。然后将itlc条切成3块，使用γ计数器测量相关的放射性。在溶剂前沿测量的放射性代表游离放射性核素和胶体，而起点处的放射性代表放射性标记化合物。对于hplc，使用poroshell sb-c18 2.7μm(agilent)分析5μl稀释的标记溶液。洗脱液a：mecn，洗脱液b：h2o，0.1％tfa，梯度为15分钟内从5％b至70％b，流速0.5ml/min；检测仪：nai(raytest)，dad 230nm。用死体积洗脱的峰代表游离放射性核素，用未标记样品确定的肽特异性保留时间洗脱的峰代表放射性标记化合物。
[0667]
合成结束时放射性核素掺入率≥95％，放射化学纯度≥90％。
111
in标记化合物的示例性放射化学纯度示于表13中。适合人使用的配制物中
177
lu标记化合物在合成后高达6天保持≥90％的放射化学纯度(表14)。所选化合物的放射色谱图如图1至4所示，其中图1显示了在合成结束时立即分析的
177
lu-3bp-3407在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml的l-甲硫氨酸的配制物缓冲液中的放射色谱图，图2显示了在合成结束后6天分析的
177
lu-3bp-3407在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml的l-甲硫氨酸的配制物缓冲液中放射色谱图，图3显示
了在合成结束时立即分析的
177
lu-3bp-3554在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml的l-甲硫氨酸的配制物缓冲液中的放射色谱图，图4显示了在合成结束后6天分析的
177
lu-3bp-3554在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml的l-甲硫氨酸的配制物缓冲液中的放射色谱图。
[0668]
表13：通过hplc分析的
111
in-标记的化合物的放射化学纯度
[0669][0670]
表14：在合成结束后第0天和第6天，通过hplc分析
177
lu标记化合物在含有100mg/ml抗坏血酸和5mg/ml l-甲硫氨酸的配制物缓冲液中的放射化学纯度
[0671] hplc保留时间[min]第0天的hplc面积％第6天的hplc面积％
177
lu-3bp-34077.595.794.0
177
lu-3bp-35547.697.295.6
[0672]
实施例12：成像和生物分布研究
[0673]
放射性标记的化合物可以通过成像方法例如spect和pet检测。此外，通过这些技术获得的数据可以通过直接测量从注射了放射性标记的本发明化合物的动物中制备的各个器官中所含的放射性来确认。因此，可以测定和分析放射性标记的化合物的生物分布(各个器官中的放射性测量)。这个实施例表明本发明的化合物示出适合于肿瘤的诊断成像和治疗性处理的生物分布。
[0674]
所有动物实验均符合德国动物保护法。将雄性scid beige(6至8周龄，charles river，sulzfeld，germany)在一侧肩部接种5
×
106个hek-fap细胞(通过基因工程技术表达高水平fap的人胚胎肾293细胞)。当肿瘤达到》150mm3的大小时，小鼠接受通过尾静脉静脉内施用的约30mbq的
111
in-标记的本发明化合物(用pbs稀释至100μl)。在nanospect/ct系统(mediso medical imaging systems,budapest,hunger)上获得图像，使用以下示例的采集和重建参数(表15)。
[0675]
表15：nanospect/ct成像的采集和重建参数
[0676][0677]
成像数据保存为dicom文件并使用vivoquant
tm
软件(invicro，boston，usa)进行分析。结果表示为每克组织注射剂量的百分比(％id/g)。对于生物分布研究，在注射后24小时或8小时通过颈椎脱臼处死动物，然后解剖。收集不同器官和组织并称重，通过γ-计数测定放射性。每个时间点使用两只动物。结果表示为每克组织注射剂量的百分比(％id/g)。
[0678]
所选化合物的成像和生物分布研究的结果在图5-7中示出。
[0679]
实施例13：功效研究-hek-fap
[0680]
放射性标记的化合物可用于治疗和诊断各种疾病，尤其是癌症。本实施例表明本发明的化合物具有适用于治疗肿瘤的抗肿瘤活性。
[0681]
所有动物实验均符合德国动物保护法。雌性瑞士裸鼠(7至8周龄，charles river laboratories，france)在一个肩部接种5
×
106个hek-fap细胞，当肿瘤达到平均肿瘤体积160
±
44mm3时给予治疗。将小鼠分成4个不同组，每组10只动物/组：第1组，载体对照组；第2组，冷化合物
nat
lu-3bp-3554组；第3组，30mbq 177
lu-3bp-3554组(低剂量)；和第4组，60mbq 177
lu-fap-3554组(高剂量)。在第0天通过以4ml/kg(100μl/小鼠)静脉注射到尾静脉进行治疗。在第0天(即施用放射性示踪剂的第一天)测量肿瘤体积和体重，然后每周三次直到研究完成。
[0682]
在每个给药组3只小鼠中通过spect成像确定注射
177
lu标记的3bp-3554的小鼠体内的示踪剂分布。随后，在spect之后，进行ct扫描以获取解剖信息。在注射后3小时、24小时、48小时和120小时，使用nanospect/ct系统(mediso medical imaging systems，budapest,hungary)进行成像，示例性地使用以下采集和重建参数(表16)。
[0683]
表16：nanospect/ct成像的采集和重建参数
[0684][0685]
成像数据保存为dicom文件并使用vivoquant
tm
软件(invicro,boston,usa)进行分析。结果表示为每克组织注射剂量的百分比(％id/g)。
[0686]
载体和冷化合物
nat
lu-3bp-3554处理的小鼠中的肿瘤在第14天分别达到1338
±
670mm3和1392
±
420mm3的平均肿瘤体积(mtv)(图9a)。在两个治疗组的小鼠中均观察到具有统计学意义(p《0.01)的抗肿瘤活性。与载体治疗组相比，单剂量30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠在第14天的肿瘤生长抑制(tgi)分别为111％和113％。用
177
lu-3bp-3554治疗的所有小鼠的mtv在第14天降低至≤70mm3。在第42天(代表研究结束日)监测肿瘤的再生长情况，用30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠分别有3/10和9/10的小鼠无肿瘤(《10mm3)，表明这个模型存在潜在的剂量反应。在整个研究中没有观察到与治疗相关的体重减轻(图9b)。在第2天观察到所有组的体重下降3-5％后，动物的体重随时间增加。
[0687]
两种
177
lu标记治疗组的3只动物的spect/ct成像示出在所有检查时间点(注射后(p.i.)3-120小时)期间均示出肿瘤与背景高对比度。观察到高达120小时的高肿瘤保留时间。最高的非靶向摄取的器官是肾脏，在用30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠中在注射后3h的肿瘤-肾比率分别为8.6
±
0.6和8.0
±
1.6。这些比率随着时间的推移而增加，在用30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠中，在120小时达到最高值，肿瘤与肾的比率分别为40
±
7.9和32
±
7.4。作为高剂量动物的小鼠5的一组示例spect/ct图像示于图10a，而作为低剂量动物的小鼠1的一组示例spect/ct图像示于图10b。
[0688]
实施例14：成像研究-肉瘤pdx模型
[0689]
据报道肉瘤肿瘤表达fap，对四种不同的肉瘤患者来源的异种移植(pdx)肿瘤模型进行成像以评估3bp-3554的摄取。sarc4183、sarc4605、sarc4809和sarc12616 pdx模型分别来自横纹肌肉瘤、骨肉瘤、未分化肉瘤和未分化多形性肉瘤患者(experimental pharmacology&oncology berlin-buch,germany)。将肿瘤碎片皮下移植到8周龄nmri nu/nu小鼠(janvier labs，france)的左侧腹部。所有动物实验均符合德国动物保护法。移植后
47天(sarc4183、sarc4809)或46天(sarc4605、sarc12616)，在单次静脉注射30mbq 111
in-3bp-3554后3小时对每个模型2-3只小鼠进行成像。如实施例12中所述进行成像。
[0690]
111
in-3bp-3554的成像结果示出注射后3h的高肿瘤摄取和肿瘤与背景高对比度。代表性的spect/ct图像在图11a中示出。分别对携带pdx的两只(sarc4605、sarc12616)或三只(sarc4183、sarc4809)小鼠的肿瘤摄取进行量化，表明％id/g值为4.9
±
1.7(sarc4183)、5.2
±
0.8(sarc4605)、4.4
±
0.7(sarc4809)和6.1
±
0.6(sarc12616)，如图11b所示。这些结果表明
111
in-3bp-3554在所有4种肉瘤模型中的摄取。肿瘤-肾比率为4.7
±
1.2(sarc4183)、3.2
±
0.4(sarc4605)、4.1
±
0.7(sarc4809)和4.3
±
1.2(sarc12616)。
[0691]
实施例15：功效研究-肉瘤sarc4809 pdx模型
[0692]
在人肉瘤pdx肿瘤模型sarc4809中研究了
177
lu-3bp-3554的功效。这种未分化肉瘤模型显示
111
in-3bp-3554摄取(实施例14)，并且还通过免疫组织化学显示表达fap。
[0693]
所有动物实验均符合德国动物保护法。将sarc4809肿瘤碎片皮下移植到8周龄nmri nu/nu小鼠(janvier labs，france)的左侧腹部。移植后23天开始治疗，平均肿瘤体积为187.08
±
123.8mm3。小鼠被分成四组，每组10只动物：第1组，载体对照组；第2组，冷化合物
nat
lu-fap-3554组；第3组，30mbq 177
lu-3bp-3554组；第4组，60mbq 177
lu-fap-3554组。在第0天通过以4ml/kg(100μl/小鼠)静脉注射到尾静脉进行治疗。在第0天(即施用放射性示踪剂的第一天)确定肿瘤体积和体重，然后每周三次直到研究完成。
[0694]
在整个研究的随访期间，所有肿瘤都持续生长，直到第42天。载体组和
nat
lu-3bp-3554治疗的小鼠(对照组)中的肿瘤在第31天分别达到894
±
610mm3和1225
±
775mm3的mtv(在最后一天，每组至少有50％的小鼠仍存活)。用单剂量30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠肿瘤在第31天分别达到635
±
462和723
±
391mm3(图12a)。在两个治疗组的小鼠中均观察到具有统计学意义(p《0.05)的抗肿瘤活性。与载体治疗组相比，单剂量的30或60mbq的
177
lu-3bp-3554治疗的小鼠在第31天的肿瘤生长抑制(tgi)分别为61％和73％。在整个研究过程中没有观察到与治疗相关的体重减轻(bwl)。在研究随访期间，所有组的体重均增加(图12b)。
[0695]
实施例16：药代动力学研究
[0696]
在小鼠和大鼠中评估所选化合物的药代动力学性能。化合物药代动力学性能的这种鉴定使人们能够对化合物的分布和消除以及暴露的计算有新的了解。
[0697]
在pbs中稳定配制不同量的化合物。将配制物经静脉内施用于小鼠的剂量为4nmol/kg、40nmol/kg和400nmol/kg，施用于大鼠的剂量为2nmol/kg、20nmol/kg和200nmol/kg(3bp-3554)或40nmol/kg和400mol/kg(3bp-3623)。假设从人到小鼠的异速增长剂量转换因子(allometric translation factor)为12.3，从人到大鼠的异速增长剂量转换因子为6.2(nair ab,jacob s.journal of basic and clinical pharmacy,2016,7(2):27-31)，施用的剂量代表人剂量范围为0.325nmol/kg至32.5nmol/kg。
[0698]
在不同时间(5分钟、15分钟、30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时)从尾静脉(大鼠)或眼球后(小鼠)采集血样。
[0699]
在通过离心将血细胞与血浆分离后，进行蛋白质沉淀程序，对制备的血浆样品中的化合物进行定量。加入150μl含有78％的0.1m硫酸锌和22％乙腈的硫酸锌沉淀剂。在室温温育30分钟后，通过离心分离沉淀物。如果化合物含有游离的dota部分，向100μl上清液中
加入10μl的1％甲酸，然后在60℃进一步温育10分钟以完成锌螯合剂的形成。
[0700]
在与agilent 6470三重四极杆质谱仪联用的agilent 1290 uhplc系统上确定清洁样品溶液中的待分析物。在phenomenex biozen peptide xb-c18 hplc柱(50
×
2mm，1.7μm粒径)上在40℃梯度洗脱进行色谱分离，使用作为洗脱液a的在水中0.1％甲酸和作为洗脱液b的乙腈的混合物(在5％的b等度洗脱1分钟，然后以4分钟内至43％的b的线性梯度，500μl/分钟)。
[0701]
质谱检测以正离子esi模式通过多反应监测(mrm)进行。
[0702]
表17：质谱分析检测参数
[0703][0704]
测试项目的定量是使用agilent masshunter软件套件的定量分析软件完成的。二次回归是用1/x的加权因子进行的。
[0705]
结合如下结果对血浆水平进行非房室分析(nca)：化合物的初始浓度(c0)、稳态分布容积(v
ss
)、终末分布容积(vz)、终末半衰期(t
1/2
)、清除率(cl)和外推至无穷大的曲线下面积(auc
inf
)。3bp-3554的nca参数概括在表18中针对小鼠血浆中3bp-3554呈现，在表19中针对大鼠血浆中3bp-3554呈现，3bp-3623的nca参数概括在表20中针对小鼠血浆中3bp-3623呈现，在表21中针对大鼠血浆中3bp-3623呈现。
[0706]
表18：小鼠血浆中3bp-3554的nca参数概括
[0707]
pk参数4nmol/kg40nmol/kg400nmol/kgc025.6nm177nm4970nmv
ss
0.21l/kg0.32l/kg0.10l/kgvz0.26l/kg1.02l/kg0.21l/kgauc
inf
8.3nm h56nm h961nm ht
1/2
23min59min40mincl0.482l/kg h0.711l/kg h0.482l/kg h
[0708]
表19：大鼠血浆中3bp-3554的nca参数概括
[0709][0710]
[0711]
表20：小鼠血浆中3bp-3623的nca参数概括
[0712]
pk参数4nmol/kg40nmol/kg400nmol/kgc017.6nm228nm2134nmv
ss
0.36l/kg0.31l/kg0.20l/kgvz0.44l/kg0.53l/kg0.64l/kgauc
inf
7.7nm h55nm h532nm ht
1/2
35min30min35mincl0.518l/kg h0.722l/kg h0.752l/kg h
[0713]
表21：大鼠血浆中3bp-3623的nca参数概括
[0714]
pk参数40nmol/kg400nmol/kgc0127nm1408nmv
ss
0.48l/kg0.32l/kgvz0.58l/kg0.93l/kgauc
inf
74nm h738nm ht
1/2
45min71mincl0.541l/kg h0.542l/kg h
[0715]
结果表明，分布主要是在血液和间质液中，肽的典型清除率在小鼠中终末半衰期是在23分钟和59分钟之间，在大鼠中是在45分钟和71分钟之间。如通过auc描述的暴露与注射剂量几乎呈线性相关，清除率在特定动物模型中对于所有应用剂量都是恒定的。这些观察结果表明药代动力学行为没有首次人剂量计算需要考虑的显著非线性。
[0716]
在说明书、权利要书求、序列表和/或附图中公开的本发明的特征可以单独和以其任意组合作为以各种形式实现本发明的材料。
[0717]
i.参考文献
[0718]
本文引用的每个及任何文献的公开内容均通过援引加入。