一种从黄栌中提取漆黄素的发酵前处理方法与流程

1.本发明涉及一种天然产物提取的前处理方法，具体涉及一种从黄栌中提取漆黄素的发酵前处理方法，属于天然产物提取领域。


背景技术：

2.黄栌(cotinuscoggygriascop.)为漆树科黄栌属cotinus l.植物，主要分布于南欧，伊朗，巴基斯坦，印度北部，中国西南、华北和浙江等地。黄栌通常作为保持水土的防护林和园林绿化的景观植物，有“烟树”的美誉。黄栌含有的黄酮、没食子酸等多种化学成分，也是我国传统药用植物，可用于治疗黄疽型肝炎、水火烫伤和漆疮；其枝主要用于除烦热、解酒疽、去目黄；叶含芳香油，有抗炎、抗菌、收敛作用，主要用于清热解毒、散疲止痛，内服治黄疽性肝炎，以及水、火烫伤、漆疮、胃肠炎等病症，外敷可治外伤；黄栌根皮医治妇女产后劳损黄栌药用部位为其干燥叶和嫩枝，夏季采收，清利湿热，用于急性传染性肝炎。
3.漆黄素(fisetin)是从黄栌中分离得到的天然黄酮类化合物，化学名3,3',4',7-四羟基黄酮，又称漆树黄酮、漆黄酸、非瑟酮、非瑟素。研究表明，漆黄素具有抑制脉粥样硬化、调节免疫、改善认知损伤、抗炎、抗氧化及抗肿瘤等药理作用，还对心肌缺血再灌注损伤有保护作用，可治疗感冒、高血压、黄疸等。由于黄栌的经济价值较高，因此其价格较高。漆黄素的分子结构式如下：
[0004][0005]
cn104072465a公开了一种从黄栌中提取漆黄素的工艺，包括黄栌原料粉碎、乙醇预处理、超声提取、大孔树脂吸附与洗脱、高速逆流色谱分离纯化、结晶等步骤。
[0006]
cn102924419a公开了一种从黄杨木(即黄栌)中提取漆黄素的方法包括原料粉碎、提取、结晶等步骤。
[0007]
cn102442987a公开了一种漆黄素的提取方法，包括黄栌干燥枝叶粉碎、饱和石灰水溶液浸泡提取、大孔树脂柱吸附、乙醇洗脱、结晶、5％碳酸钠溶液溶解后依次用正丁醇、乙酸乙酯萃取、沉淀物重结晶等步骤。
[0008]
为更好地开发、利用黄栌的药用价值，提高黄栌漆黄素的产量，降低漆黄素的生产成本，还需要深入研究漆黄素的提取技术。上述提取技术均是对黄栌药材进行直接提取，漆黄素的产量和收得率均受制于药材本身漆黄素的含量。发明人长期研究漆黄素提取制备方法，在大量的试验研究中惊喜地发现，黄栌鲜药材粉碎后利用黄栌药材中自身的生物酶及有益菌进行固体自然发酵前处理，可显著提高药材中漆黄素的含量，从而提高了黄栌的漆黄素产量，完成了本发明。


技术实现要素：

[0009]
针对现有技术中的不足，本发明提供一种从黄栌中提取漆黄素的发酵前处理方法。
[0010]
本发明的技术方案是：
[0011]
提供一种从黄栌中提取漆黄素的发酵前处理方法，包括黄栌药材粉碎和固体自然发酵的步骤，得到漆黄素提取原料。
[0012]
在一些实施方案中，采用新鲜黄栌药材或黄栌干药材进行固体自然发酵，发酵前将药材粉碎成10～60目粗粉，优选粉碎成20～40目粗粉。
[0013]
在一些实施方案中，所述固体自然发酵的温度为40℃～60℃，优选45℃～55℃，更优选为48℃～52℃。
[0014]
在一些实施方案中，所述固体自然发酵的空气相对湿度为75％～98％，优选85％～95％，更优选为90％～92％。
[0015]
在一些实施方案中，所述固体自然发酵的周期为3～15天，优选8～13天，更优选为10～11天。
[0016]
在一些实施方案中，向粉碎的黄栌药材发酵料中加入适量水，使所述发酵料的含水量为40％～80％，优选50％～70％，更优选为60％；可选地，在发酵过程中喷淋适量的水使发酵料保持上述含水量。
[0017]
在一些实施方案中，将新鲜的黄栌药材粉碎成30～40目粗粉，加入适量水使其含水量达到60％，在50℃、空气相对湿度90％条件下固体自然发酵10～11天，得漆黄素提取原料。
[0018]
在一些实施方案中，将黄栌干药材粉碎成30～40目粗粉，加入适量水使其含水量达到60％，在50℃、空气相对湿度90％条件下固体自然发酵10～11天，得漆黄素提取原料。
[0019]
漆黄素粗提物的制备方法：称取适量黄栌(发酵或未发酵样品)，用80-100％甲醇回流提取2-3次，每次90min，合并提取液，减压浓缩至干，真空拉干，得漆黄素粗提物。
[0020]
漆黄素含量的hplc检测方法：
[0021]
一、色谱条件：
[0022]
1.色谱柱：zorbax extend c-18 4.6
×
250mm 5μm
[0023]
2.流动相：乙腈︰0.1％磷酸溶液＝26︰74
[0024]
3.流速：1ml/min
[0025]
4.检测波长：368nm
[0026]
5.进样量：20μl
[0027]
6.柱温：30℃
[0028]
二、样品配制：
[0029]
1.对照品配制：精密称取漆黄素对照品10
㎎
于100ml容量瓶中，加入50ml 50％甲醇，超声溶解，超声10min，再加入50％甲醇超声20min，冷却后定容。
[0030]
2.供试品配制：精密称取供试品适量(依含量而定称样量)于100ml容量瓶中，加入50ml 50％甲醇，超声溶解，超声10min，再加入50％甲醇超声20min，冷却后定容。
[0031]
三、样品测定
[0032]
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各约10ml，弃去初滤液，注入液相
色谱仪，20μl定量环定量，测定，外标法计算漆黄素的含量。
[0033]
四、含量计算：
[0034][0035]
其中：m
标样
—为漆黄素标准品重量，
[0036]c标样
—为漆黄素标准品含量，
[0037]a样品
—为样品峰面积，
[0038]a标样
—为漆黄素标准品峰面积，
[0039]m样品
—为样品重量。
[0040]
发酵过程中取样检测漆黄素含量，样品的hplc图谱显示两个主峰，峰一保留时间约为10min，为漆黄素峰，峰二保留时间约为15min，随着发酵时间的延长，可以观察到峰一与峰二面积的相对变化，表现出漆黄素峰即峰一面积相对增加，而相应地峰二面积相对减少，即明显地观察到峰二的成分转化为峰一的漆黄素。
[0041]
本发明提供的从黄栌中提取漆黄素的前处理方法具有以下优点：
[0042]
(1)首次发现利用黄栌药材中自身的生物酶及有益菌进行自然发酵可提高药材中漆黄素的含量，通过对粉碎的黄栌药材进行固体自然发酵前处理，使有关成分发生向漆黄素的生物转化，显著提高了发酵料中漆黄素的含量，大幅提升了漆黄素产量，降低了漆黄素的生产成本；
[0043]
(2)处理工艺简便易行，成本低廉，经济价值显著；
[0044]
(3)降低了漆黄素生产中黄栌药材的使用量，节约了资源。
附图说明
[0045]
图1为实施例1发酵前原料样品的hplc图谱及相关分析数据列表。
[0046]
图2为实施例1发酵第3天样品的hplc图谱及相关分析数据列表。
[0047]
图3为实施例1发酵第5天样品的hplc图谱及相关分析数据列表。
[0048]
图4为实施例1发酵第8天样品的hplc图谱及相关分析数据列表。
[0049]
图5为实施例1发酵第10天样品的hplc图谱及相关分析数据列表。
具体实施方式
[0050]
以下结合实施例对本发明作进一步的详细描述，但并非对本发明的限制，凡按照本发明公开内容所作的任何本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
[0051]
实施例1
[0052]
取100kg新鲜黄栌药材(含水量30％，烘干后测其干药材样品漆黄素含量为0.76％)，粉碎成30～40目粗粉，补加适量水使其含水量达到60％，在相对湿度90％、温度50℃下进行固体自然发酵10天，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为3.90％。
[0053]
实施例2
[0054]
取100kg黄栌干药材(测其干药材样品漆黄素含量为0.78％)，粉碎成40目粗粉，加
适量水拌湿使其含水量达到65％，在相对湿度85％、温度45℃下进行固体自然发酵11天，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为3.19％。
[0055]
实施例3
[0056]
取50kg黄栌干药材(测其干药材样品漆黄素含量为0.75％)，粉碎成20目粗粉，加适量水拌湿使其含水量达到40％，在相对湿度95％、温度55℃下进行固体自然发酵8天(发酵过程中喷淋适量的水使发酵料保持40％含水量)，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为3.02％。
[0057]
实施例4
[0058]
取200kg新鲜黄栌药材(含水量30％，烘干后测其干药材样品漆黄素含量为0.73％)，粉碎成10～20目粗粉，补加适量水使其含水量达到75％，在相对湿度80％、温度60℃下进行固体自然发酵4天，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为2.88％。
[0059]
实施例5
[0060]
取50kg新鲜黄栌药材(含水量30％，烘干后测其干药材样品漆黄素含量为0.80％)，粉碎成40～60目粗粉，补加适量水使其含水量达到40％，在相对湿度98％、温度40℃下进行固体自然发酵13天(发酵过程中喷淋适量的水使发酵料保持40％含水量)，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为3.27％。
[0061]
实施例6
[0062]
取150kg黄栌干药材(测其干药材样品漆黄素含量为0.81％)，粉碎成30目粗粉，加适量水拌湿使其含水量达到45％，在相对湿度75％、温度48℃下进行固体自然发酵9天，烘干后检测黄栌中漆黄素含量为3.33％。