具有增加的NEP稳定性的控制释放CNP激动剂的制作方法

具有增加的nep稳定性的控制释放cnp激动剂
1.本案是申请日为2017年1月5日，发明名称为具有增加的nep稳定性的控制释放cnp激动剂，申请号为201780006097.9的案件的分案申请。
2.本发明涉及控制释放cnp激动剂，其在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少5倍的降解半衰期，本发明还涉及包含所述控制释放cnp激动剂的药物组合物、它们的用途和治疗方法。
3.软骨发育不全(ach)是由fgfr3中的功能获得性突变引起的。cnp与其受体利尿钠肽受体b(npr-b)的结合抑制fgfr3下游信号传导，并由此触发软骨内生长和骨骼过度生长，如在过表达cnp的小鼠和人中所观察到的那样。cnp在软骨中的过度产生或通过静脉内(iv)输注连续递送cnp使得软骨发育不全的小鼠的侏儒症正常化，这提示在超生理(supraphysiological)水平下施用cnp是治疗ach的策略。
4.然而，由于cnp-22半衰期短(静脉内施用后2min)，所以cnp作为治疗剂在儿科人群中具有挑战性，因为它需要连续输注。此外，由于cnp在皮下组织中广泛失活，所以需要静脉内输注。
5.potter(febs journal 278(2011)1808
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1817)描述了cnp通过两种降解途径发生清除：受体介导的降解和胞外蛋白酶引起的降解。cnp通过中性内肽酶24.11(nep)的作用被降解，通过利尿钠肽清除受体npr-c从体循环中被除去，所述npr-c结合cnp并使其沉积入溶酶体中，在溶酶体中cnp被降解。
6.通过这些清除路径中的一个或两个减少降解将有助于延长cnp的半衰期。
7.由于其活性位点空腔的大小有限，nep优选识别小于约3kda的底物。us 8,377,884 b2描述了cnp的变体，其任选地与peg聚合物持久地缀合以增加对nep裂解的抗性。然而，发现向野生型cnp添加peg(甚至小至0.6kda)也降低cnp活性，向cnp或其变体添加大于约2或3kda的peg以尺寸依赖性方式降低cnp功能活性。因此，连接大于2-3kda的peg分子以降低nep降解伴随着活性的损失，这会降低这类分子的治疗潜力。
8.除了对肽的活性产生负面影响之外，peg或另一种大分子与cnp的缀合还可阻止向生长面的有效分布。farnum等人(anat rec a discov mol cell evol biol.2006年1月；288(1):91
–
103)证明，分子从系统脉管系统到生长面的分布是尺寸依赖性的，小分子(至多10kda)可以分布至生长面，而40kda和更大的分子尺寸则阻止进入生长面。
9.在the american journal of human genetics 91,1108
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1114中描述了产生nep抗性cnp分子并使其能皮下施用的不同方法。bmn-111是修饰的重组人c-型利尿钠肽(cnp)，其中已添加17个氨基酸以形成39个氨基酸的cnp药理学类似物。bmn-111模拟cnp在生长面上的药理学活性，并且由于中性内肽酶(nep)抗性具有延长的半衰期，其使得可以每天一次皮下(sc)施用。由于bmn-111是非天然存在的肽，所以与天然肽相比，诱导免疫应答的风险增加，并且如martz在“sfgfr for achondroplasia”(scibx,biocentury 2013年10月)中所述，在动物研究中已经观察到了对bmn-111免疫应答，其中存在不影响药物的药理学活性的抗体。然而，bmn-111仅具有20分钟的半衰期，其与每天一次给药时暴露于有效药物水平的时间短相关。
10.为了增加对有效药物水平的暴露，可以增加具有cnp活性的药物的剂量。由于利尿钠肽是一族可影响血容量和血压的激素，所以剂量的增加可能与心血管不良作用相关。bmn-111在动物和人中的研究表明，随着剂量增加，动脉血压下降，心率增加。在健康志愿者中高达15μg/kg的bmn-111剂量与轻度低血压相关。因此，增加具有cnp活性的药物的剂量以增加药物暴露可能与不可接受的心血管副作用相关。
11.因此，增加具有cnp活性的药物的剂量以增加药物暴露可能与不可接受的心血管副作用例如低血压相关。
12.总之，需要更有效、更安全的cnp治疗方法。
13.因此，本发明的一个目的是至少部分克服上述缺点。
14.该目的通过控制释放cnp激动剂得以实现，其中所述控制释放cnp激动剂释放一种或多种cnp激动剂，并且其中在体外nep降解测定法中所述控制释放cnp激动剂具有比相应的释放的cnp激动剂长至少5倍的降解半衰期。
15.令人惊讶地发现，控制释放cnp激动剂的应用提供了有效的防止nep降解的保护，这增加了cnp激动剂的半衰期。由于本发明的控制释放cnp激动剂也释放cnp激动剂，所以所述cnp激动剂能显示出其全部活性并且其对生长面的进入不受限制。
16.本发明涉及如下方案：
17.1.控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂释放一种或多种cnp激动剂，并且其中所述的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少5倍的降解半衰期。
18.2.项1的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少15倍的降解半衰期。
19.3.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少25倍的降解半衰期。
20.4.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少6小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。
21.5.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少24小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。
22.6.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少48小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。
23.7.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少168小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。
24.8.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂优选包含选自小分子、天然产物、寡核苷酸、多肽和蛋白质的cnp激动剂。
25.9.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的cnp激动剂是多肽。
26.10.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的cnp激动剂是cnp。
27.11.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂是水不溶性的。
28.12.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂选自晶体、纳米粒、微粒、纳米球和微球。
29.13.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放激动剂是包含至少一种
cnp激动剂的囊泡，并且其中所述的囊泡是胶束、脂质体或聚合物囊泡。
30.14.项1或2的控制释放cnp激动剂，其中所述的控制释放cnp激动剂是水溶性的。
31.15.药物组合物，其包含项1或2的控制释放cnp激动剂和至少一种赋形剂。
32.16.项1或2的控制释放cnp激动剂或项15的药物组合物，其用作药剂。
33.17.项16的用作药剂的控制释放cnp激动剂或药物组合物，其中所述药剂用于治疗软骨发育不全。
34.18.项1或2的控制释放cnp激动剂或项15的药物组合物在制备用于治疗能用cnp治疗的疾病的药剂中的用途。
35.19.项18的用途，其中所述的疾病选自：软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不全、神经纤维瘤病、勒格斯综合征、豹斑综合征、努南综合征、遗传性龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、勒格斯综合征、心面皮肤综合征、柯斯特洛综合征、shox缺乏、特发性身材矮小症、生长激素缺乏、骨关节炎、锁骨颅骨发育不全、颅缝早闭、指(趾)畸形、短指(趾)、屈曲指、多指(趾)、并指(趾)、节段性发育不良、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷佝偻病、雅-利综合征、马方综合征、麦-奥综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。
36.20.项18或19的用途，其中所述的疾病是软骨发育不全。
37.在本发明中使用的术语具有如下含义。
38.本文所用的术语“cnp激动剂”是指活化利尿钠肽受体b(npr-b)且具有比cnp-22(seq id no:1)的npr-b活性高至多50-倍的ec
50
的任何化合物。
39.本文所用的关于控制释放cnp激动剂和cnp激动剂的“ec
50”是指引起半数最大cgmp产生的控制释放cnp激动剂和cnp激动剂浓度。控制释放cnp激动剂、释放的cnp激动剂和cnp-22的其ec
50
形式的npr-b活性是如下测量的：培养在其细胞表面上表达npr-b的nih-3t3(鼠胚胎成纤维细胞系)细胞，将所述细胞分别与控制释放cnp激动剂、相应的释放的cnp激动剂或cnp-22一起孵育，用标准cgmp测定法测定细胞内第二信使cgmp的产生。具体地，该测定法如下进行：
40.(1)将表达内源性npr-b的鼠nih-3t3细胞在含有5％fbs和5mm谷氨酰胺的dmem f-12培养基中在37℃和5％co2下培养；
41.(2)对于每次测定，将50,000个细胞重新混悬于具有ibmx的dulbecco pbs中，与控制释放cnp激动剂、相应的释放的cnp激动剂或cnp-22一起孵育；各自在不同的浓度下进行；
42.(3)在37℃和5％co2下孵育30min后，裂解细胞并测定cgmp水平；和
43.(4)由所测定的cgmp水平生成ec
50
值。
44.优选地，步骤(2)中的ibmx浓度优选为0.5mm。
45.步骤(3)可以使用任何测定cgmp的测定法来进行，这是本领域技术人员公知的标
准方法。优选地，步骤(3)用cgmp tr-fret测定法进行，更优选地用来自cisbio,cat.no.62gm2peb的cgmp tr-fret测定法进行。
46.由于在这类实验过程中控制释放cnp激动剂释放一定量的cnp激动剂，该释放的cnp激动剂会扭曲结果，所以控制释放cnp激动剂的npr-b活性的测量优选以不释放cnp激动剂的稳定类似物的形式进行。
47.本文所用的术语“控制释放cnp激动剂”是指包含至少一种cnp激动剂并且从其中以至少6小时的释放半衰期释放所述的至少一种cnp激动剂的任意的化合物、缀合物、晶体或混合物。
48.本文所用的术语“cnp激动剂当量”是指控制释放cnp激动剂中所包含的cnp激动剂的摩尔含量。
49.本文所用的术语“降解半衰期”是指在体外nep降解测定法中全部cnp激动剂分子的一半被降解所需的时间。
50.本文所用的术语“释放半衰期”是指在生理条件下从控制释放cnp激动剂中释放所有cnp激动剂分子的一半所需的时间。
51.以t
0-时间点为参照监测未消化的cnp激动剂(用内标五氟苯酚(pfp)校准)随时间推移的降低的适合的体外nep降解测定法如下：
52.(1)将重组人nep和内标pfp分别加入到在消化缓冲液中的控制释放cnp激动剂和释放的cnp激动剂中；
53.(2)将溶液在37℃下孵育，在不同的时间间隔取样，通过合并的还原和热变性停止反应；
54.(3)使用hplc-ms分析所得反应产物；和
55.(4)通过cnp变体和pfp的hplc-uv峰面积随时间的比率变化来计算控制释放cnp激动剂和释放的cnp激动剂这二者的半衰期。
56.优选地，所述消化缓冲液是50mm tris-hcl，ph 7.4，10mm nacl。
57.应当理解的是，在nep降解测定法中降解时间受以下因素影响：a)消化测定法中使用的nep浓度，和b)所使用的nep质量和批次的蛋白水解活性。本领域技术人员能调整测定法中所使用的nep浓度以获得适合的消化半衰期。
58.优选nep(订购号bml-se532-0010)获自enzo life sciences gmbh(loerrach,德国)。
59.优选地，在消化测定法中使用2.5μg/ml的最终nep浓度。
60.本文所用的术语“cnp”是指所有cnp多肽，优选来自哺乳动物物种的cnp多肽，更优选来自人和哺乳动物物种的cnp多肽，更优选来自人和鼠物种的cnp多肽，以及它们的变体、类似物、直向同源物、同源物(homolog)和衍生物及其片段，其特征在于调节软骨生长面软骨细胞的生长、增殖和分化。优选地，术语“cnp”是指seq id no:24的cnp多肽以及基本上显示相同生物学活性、即调节软骨生长面软骨细胞的生长、增殖和分化的其变体、同源物和衍生物。更优选地，术语“cnp”是指seq id no:24的多肽。
61.在另一个实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:20的多肽。
62.在另一个实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:21的多肽。
63.在另一个实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:22的多肽。
64.在另一个优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:23的多肽。
65.在另一个实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:30的多肽。
66.天然存在的cnp-22(seq id no:1)具有如下序列：
67.glskgcfglkldrigsmsglgc,
68.其中6和22位上的半胱氨酸通过二硫键连接，如图1中所示。
69.seq id no:24具有如下序列：
70.lqehpnarkykgankkglskgcfglkldrigsmsglgc,
71.其中22位和38位上的半胱氨酸通过二硫键连接。
72.术语“cnp”还包括wo 2009/067639 a2和wo 2010/135541 a2中所公开的所有cnp变体、类似物、直向同源物、同源物和衍生物及其片段，通过引用将这两篇文献合并入本文。
73.因此，术语“cnp”还优选指如下肽序列：
74.75.76.77.78.79.[0080][0081]
应当理解，seq id no:24的22和38位上的半胱氨酸的等价物在seq id no:2-92中也通过二硫键连接。
[0082]
更优选地，术语“cnp”是指seq id no:2,19,20,21,22,23,24,25,26,30,32,38,39,40,41,42,43,91,92的序列。甚至更优选地，术语“cnp”是指seq id no:23,24,25,26,38,39,91和92的序列。在一个特别优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:24的序列。在一个同等优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:30的序列。在一个同等优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:20的序列。在一个同等优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:21的序列。在一个同等优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:22的序列。在一个同等优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:23的序列。
[0083]
在另一个优选的实施方案中，术语“cnp”是指seq id no:93的序列
[0084]
其中x1、x2、x3、x4、x5和x6彼此独立地选自k、r、p、s和q，条件是x1、x2、x3、x4、x5和x6中至少一个选自r、p、s和q；优选地x1、x2、x3、x4、x5和x6选自k和r，条件是x1、x2、x3、x4、x5和x6中至少一个是r；
[0085]
甚至更优选是指seq id no:94的序列
[0086][0087]
其中x1、x2、x3和x4彼此独立地选自k、r、p、s和q，条件是x1、x2、x3和x4中至少一个选自r、p、s和q；优选地x1、x2、x3和x4选自k和r，条件是x1、x2、x3和x4中至少一个是r；
[0088]
最优选是指seq id no:95的序列
[0089][0090]
其中x1x2选自kr、rk、kp、pk、ss、rs、sr、qk、qr、kq、rq、rr和qq。
[0091]
应当理解，seq id no:24的22和38位的半胱氨酸的等价物在seq id no:2-95中也通过二硫键连接。
[0092]
应当理解，本发明还涵盖cnp变体，其中任意一个或多个、直至所有对脱酰胺化或脱酰胺样反应(例如异构化)敏感的残基可以通过脱酰胺或脱酰胺样反应被转化成一种或多种其它残基，每个被转化的残基以任意程度、直至100％的转化率被转化。在某些实施方案中，本技术的公开内容涵盖cnp变体，其中：
[0093]
(1)任意一个或多个、多至所有天冬酰胺(asn/n)残基可以通过脱酰胺被转化成天冬氨酸或天冬氨酸根和/或被转化成异天冬氨酸或异天冬氨酸根，每个被转化的残基以至多约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的转化率被转化；或
[0094]
(2)任意一个或多个、多至所有谷氨酰胺(gln/q)残基可以通过脱酰胺被转化成谷氨酸或谷氨酸根和/或被转化成异谷氨酸或异谷氨酸根，每个被转化的残基以至多约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的转化率被转化；
[0095]
(3)任意一个或多个、多至所有天冬氨酸或天冬氨酸根(asp/d)残基可以通过脱酰胺样反应(也称作异构化)被转化成异天冬氨酸或异天冬氨酸根，每个被转化的残基以至多约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的转化率被转化；或
[0096]
(4)任意一个或多个、直至所有谷氨酸或谷氨酸根(glu/e)残基可以通过脱酰胺样反应(也称作异构化)被转化成异谷氨酸或异谷氨酸根，每个被转化的残基以至多约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的转化率被转化；或
[0097]
(5)n-末端谷氨酰胺(如果存在的话)可以以至少约5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的转化率被转化成焦谷氨酸；或
[0098]
(6)上述的组合。
[0099]
本文所用的术语“cnp多肽变体”是指与参比cnp多肽不同的来自相同物种的多肽。优选地，所述参比cnp多肽序列是seq id no:24的序列。通常，差异是有限的，使得参比的氨基酸序列和变体总体上非常相似，并且在许多区域是相同的。优选地，cnp多肽变体与参比cnp多肽、优选seq id no:24的cnp多肽至少70％、80％、90％或95％相同。具有与查询氨基酸序列至少例如95％“相同”的氨基酸序列的多肽是指，所述多肽的氨基酸序列与查询序列相同，不同之处在于所述多肽序列在查询氨基酸序列的每100个氨基酸中可包括至多五个氨基酸改变。参比序列的这些改变可以出现在参比氨基酸序列的氨基末端(n-末端)或羧基末端(c-末端)位置或者出现在这些末端位置之间的任意位置，其各自散布在参比序列的残基中或者散布在参比序列内的一个或多个邻接组中。查询序列可以是参比序列的本文所述的整个氨基酸序列或给出的任意片段。优选地，查询序列是seq id no:24的序列。
[0100]
这类cnp多肽变体可以是天然存在的变体，例如占据染色体或生物体上给定基因座的cnp的几种替代形式之一编码的天然存在的等位基因变体，或来源于单个初级转录物的天然存在的剪接变体编码的同工型。或者，cnp多肽变体可以是不知道是否天然存在且可通过本领域已知的诱变技术制备的变体。
[0101]
本领域已知，可以在生物学功能没有实质性损失的情况下从生物活性肽或蛋白质的n-末端或c-末端删除一个或多个氨基酸。这类n-和/或c-末端删除也被术语cnp多肽变体所涵盖。
[0102]
本领域普通技术人员也认识到，可以在不显著影响肽的结构或功能的情况下改变cnp多肽的一些氨基酸序列。这类突变体包括根据本领域已知的一般规则选择的删除、插入、倒位、重复和置换，以至于对活性几乎没有影响。例如，bowie等人(1990),science 247:
1306-1310提供了关于如何进行表型不变的氨基酸替换的指导，通过引用将该文献全部内容合并入本文，其中作者指出研究氨基酸序列对改变的耐受性有两种主要方法。
[0103]
术语cnp多肽也涵盖由cnp类似物、直向同源物和/或物种同源物编码的所有cnp多肽。本文所用的术语“cnp类似物”是指不同的且不相关的生物体的cnp，其在各生物体中执行相同功能，但不来源于生物体祖先共有的祖先结构。相反，类似的cnp分别产生，然后进化为执行相同或类似功能。换言之，类似的cnp多肽是具有非常不同的氨基酸序列、但执行相同生物学活性、即调节软骨生长面软骨细胞的生长、增殖和分化的多肽。
[0104]
本文所用的术语“cnp直向同源物”是指其序列通过祖先物种中共同的同源cnp彼此相关、但已经进化为彼此不同的两个不同物种内的cnp。
[0105]
本文所用的术语“cnp同源物”是指在各生物体中执行相同的功能并且来源于生物体祖先共有的祖先结构的不同生物体的cnp。换言之，同源cnp多肽是执行相同的生物活性、即调节软骨生长面软骨细胞的生长、增殖和分化的具有非常相似的氨基酸序列的多肽。优选地，cnp多肽同源物可以被定义为与参比cnp多肽、优选seq id no:24的cnp多肽显示出至少40％、50％、60％、70％、80％、90％或95％同一性的多肽。
[0106]
因此，本发明的cnp多肽可以是例如这样的cnp多肽：(i)其中氨基酸残基中至少一个被保守或非保守氨基酸残基、优选保守氨基酸残基置换，并且所述被置换的氨基酸残基可以是或可以不是由遗传密码编码的氨基酸残基；和/或(ii)其中氨基酸残基中至少一个包括取代基；和/或(iii)其中cnp多肽与另一个化合物、例如增加多肽的半衰期的化合物(例如聚乙二醇)融合；和/或(iv)其中另外的氨基酸融合cnp多肽，例如igg fc融合区肽或前导序列或分泌序列或用于纯化上述形式的多肽或前蛋白质序列的序列。
[0107]
本文所用的术语“cnp多肽片段”是指包含cnp多肽、优选seq id no:24的多肽的氨基酸序列的一部分的邻接跨度的任意肽。
[0108]
更特定地，cnp多肽片段包含cnp多肽、更优选seq id no:24的多肽的至少6个、例如至少8个、至少10个或至少17个连续氨基酸。还可以将cnp多肽片段描述为包含至少6个氨基酸的cnp多肽亚属，其中“至少6个”被定义为6与表示cnp多肽、优选seq id no:24的多肽的c-末端氨基酸的整数之间的任何整数。还包括长度为至少6个氨基酸的cnp多肽片段种类，如上文所述，根据它们的n-末端和c-末端位置其被进一步规定。术语“cnp多肽片段”作为单独的种类还涵盖长度为至少6个氨基酸的所有cnp多肽片段，如上所述，其可以用n-末端和c-末端位置被特别规定。也就是说，本发明包括在cnp多肽、优选seq id no:24的cnp多肽的任何给定氨基酸序列上能占据至少6个连续氨基酸残基长度的片段的n-末端和c-末端位置的每个组合。
[0109]
术语“cnp”还包括具有如上所述的序列、但具有包含酰胺键和非酰胺键例如酯键这二者的骨架的聚(氨基酸)缀合物，如缩肽。缩肽是其中骨架既包含酰胺(肽)键、又包含酯键的氨基酸残基链。因此，本文所用的术语“侧链”是指与氨基酸原子团(moiety)的α-碳连接的原子团(如果氨基酸原子团通过胺键连接，例如在多肽中)，或者是指与聚(氨基酸)缀合物的骨架连接的任意包含碳原子的原子团，例如在缩肽的情况下。优选地，术语“cnp”是指具有通过酰胺(肽)键形成的骨架的多肽。
[0110]
由于术语cnp包括上文所述的cnp的变体、类似物、直向同源物、同源物、衍生物和片段，所以所有对参比序列内特定位置的提及也包括cnp原子团的变体、类似物、直向同源
物、同源物、衍生物和片段中的等同位置，即使没有具体提及也是如此。
[0111]
本文所用的术语“环原子团”是指位于形成分子内二硫键的两个半胱氨酸残基之间或通过化学连接基连接的同源氨基酸残基之间的cnp药物或原子团的一段连续氨基酸残基。优选地，环原子团位于形成分子内二硫键的两个半胱氨酸残基之间。这两个半胱氨酸对应于cnp-38(seq id no:24)的序列中22位和38位的半胱氨酸。因此，如果所述cnp药物或原子团具有cnp-38的序列，则氨基酸23至37位于所述的环原子团中。
[0112]
野生型cnp的环原子团的序列为fglkldrigsmsglg(seq id no:96)，这与cnp原子团的长度无关。
[0113]
如上文所述，术语“cnp”涉及具有不同氨基酸数量的cnp药物或原子团。本领域技术人员理解，在不同长度的cnp药物或原子团中，等价氨基酸的位置可变，本领域技术人员可以无困难地鉴定形成二硫键的两个半胱氨酸或它们的通过更长、更短和/或其他方式修饰的cnp形式中的化学连接基彼此连接的两个同源氨基酸残基。
[0114]
由于术语cnp包括上文所述的cnp的变体、类似物、直向同源物、同源物、衍生物和片段，所以术语“环原子团”还包括seq id no:96的序列的相应变体、类似物、直向同源物、同源物、衍生物和片段。因此，所有对参比序列内特定位置的提及也包括cnp原子团的变体、类似物、直向同源物、同源物、衍生物和片段中的等同位置，即使没有具体提及也是如此。
[0115]
本文所用的术语“无规卷曲”是指采用/具有/形成、优选具有基本上缺少确定的二级和三级结构的构象的肽或蛋白质，如通过在环境温度和ph 7.4下在水性缓冲液中进行的圆二色谱法所测定的。优选地，环境温度是约20℃，即18℃至22℃，最优选地，环境温度是20℃。
[0116]
本文所用的术语“胶束”意指分散在液体胶体中的两亲分子的聚集体。在水溶液中，典型的胶束形成聚集体，其中表面活性剂分子的亲水性原子团朝向外层溶剂，表面活性剂分子的疏水性原子团朝向内部，也称为“正相胶束”。“反向胶束”具有朝向内部的亲水性原子团和朝向外层溶剂的疏水性原子团。
[0117]
本文所用的术语“脂质体”是指具有至少一个脂质双层的囊泡(vesicle)，优选球形囊泡。优选地，脂质体包含磷脂，甚至更优选磷脂酰胆碱。术语“脂质体”是指各种结构和尺寸，例如，平均直径为100-1000nm的具有多于一个的同心脂质双层的多层脂质体囊泡(mlv)、具有至少一个脂质双层且平均直径为25-100nm的小单层脂质体囊泡(suv)、具有一个脂双层且平均直径为约1000μm的大单层脂质体囊泡(luv)和具有一个脂双层且平均直径为1-10μm的巨大单层囊泡(guv)。术语“脂质体”还包括弹性囊泡，例如转质体(transferosome)和醇质体(ethosome)。
[0118]
本文所用的术语“水质体(aquasome)”是指直径为60-300nm的球形纳米粒，其包含至少三层自组装结构，即涂覆有低聚膜的固相纳米结晶芯，在对药物进行修饰或不进行修饰的情况下药物分子被吸附于其上。
[0119]
本文所用的术语“醇质体”是指包含磷脂和相对高浓度的乙醇和/或异丙醇以及水的脂质囊泡，其尺寸在几十纳米至微米范围内。
[0120]
本文所用的术语“leciplex”是指荷正电的基于磷脂的囊泡系统，其包含大豆pc、阳离子物质和生物相容性溶剂如peg300、peg400、二甘醇一乙醚、四氢糠醇聚乙二醇醚或2-吡咯烷酮或n-甲基-2-吡咯烷酮。
[0121]
本文所用的术语“诺质体(niosome)”是指包含非离子表面活性剂的单层或多层囊泡。
[0122]
本文所用的术语“药质体(pharmacosome)”是指来自与生物活性部分共价结合的脂质的超细囊泡、胶束或六角形聚集体。
[0123]
本文所用的术语“前质体(proniosome)”是指表面活性剂涂覆的载体的干燥制剂，其经再水化和适度搅拌将产生诺质体。
[0124]
本文所用的术语“聚合物囊泡(polymersome)”是指包含由两亲性合成嵌段共聚物形成的膜的人造球形囊泡，其可以任选地在其核芯中包含水性溶液。聚合物囊泡具有50nm-5μm以及更大的直径。该术语也包括syntosome，其是被改造成包含通道的聚合物囊泡，所述通道使得某些化学物质穿过膜进入或离开囊泡。
[0125]
本文所用的术语“鞘质体(sphingosome)”是指同心双层囊泡，其中水体积全部被主要由天然或合成鞘脂构成的膜状脂质双层围绕。
[0126]
本文所用的术语“转质体”是指包含水性核芯的超柔性脂质囊泡，其由共同的极性和适合的边缘活化的脂质的混合物形成，所述脂质促进形成高度弯曲的双层，所述高度弯曲的双层使得所述转质体高度可变形。
[0127]
本文所用的术语“不饱和质体(ufasome)”是指包含不饱和脂肪酸的囊泡。
[0128]
本文所用的术语“适配体”是指结合特定分子的寡核苷酸或肽分子。术语“适体”包括dna、rna、xna和肽适体。
[0129]
本文所用的术语“寡核苷酸”是指至多100个碱基的短核酸聚合物。
[0130]
本文所用的术语“多肽”是指包含至多50个氨基酸单体的肽，且包括50个氨基酸单体的肽。仅对于cnp药物和cnp部分而言，为了简便，具有多于50的氨基酸的序列也将称作“多肽”。
[0131]
本文所用的术语“蛋白质”是指多于50个的氨基酸残基的肽。优选地，蛋白质包含至多20000个氨基酸残基，例如至多15000个氨基酸残基，例如至多10000个氨基酸残基，例如至多5000个氨基酸残基，例如至多4000个氨基酸残基，例如至多3000个氨基酸残基，例如至多2000个氨基酸残基，例如至多1000个氨基酸残基。
[0132]
本文所用的术语“小分子药物”和“小分子生物活性原子团”是指为分子量不超过1kda、例如至多900kda的有机化合物的药物和生物活性原子团。
[0133]
本文所用的术语“天然产物”是指通过初级或二次代谢途径产生的从天然来源分离得到的纯化的有机化合物。
[0134]
本文所用的术语“生理条件”是指ph 7.4,37℃的水性缓冲液。
[0135]
本文所用的术语“药物组合物”是指含有一种或多种活性成分例如本发明的控制释放cnp激动剂和一种或多种赋形剂的组合物，以及直接或间接由组合物的成分中的任意两种或更多种的组合、络合作用(complexation)或聚集或者由所述成分中的一种或多种的解离或者由所述成分中的一种或多种的其它类型的反应或相互作用产生的任意产品。因此，本发明的药物组合物涵盖通过混合一种或多种本发明的控制释放cnp激动剂和药学上可接受的赋形剂而制成的任何组合物。
[0136]
本文所用的术语“液体组合物”是指包含水溶性控制释放cnp激动剂和一种或多种溶剂例如水的混合物。
[0137]
术语“混悬组合物”涉及包含水不溶性控制释放cnp激动剂和一种或多种溶剂例如水的混合物。
[0138]
本文所用的术语“干燥组合物”意指以干燥形式提供的药物组合物。适合的干燥方法是喷雾干燥和冻干，即冷冻干燥。根据karl fischer所测定的，本发明的控制释放cnp激动剂的这类干燥组合物具有最大10％、优选小于5％、更优选小于2％的残留水含量。优选地，本发明的药物组合物通过冻干干燥。
[0139]
本文所用的术语“药物”是指用于治疗、治愈、预防或诊断疾病或用于在其它方面增强身体或精神健康的物质。如果药物与另一原子团缀合，则所得产物的源自该药物的原子团被称为“生物活性原子团”。
[0140]
本文所用的术语“前药”是指通过可逆前药连接基原子团可逆地共价连接至专门的保护基上的生物活性原子团，所述可逆前药连接基原子团是包含与生物活性原子团的可逆的键的连接基原子团，其中所述的专门的保护基改变或消除母体分子中不期望的性质。这也包括增强药物的期望的性质和抑制不期望的性质。专门的无毒的保护基被称为“载体”。前药以其相应药物的形式释放可逆地共价结合的生物活性原子团。换言之，前药是缀合物，其包含生物活性部分，该生物活性原子团经由可逆前药连接基原子团与载体部分共价可逆地缀合，载体与可逆前药连接基原子团的该共价可逆缀合直接是间隔基或通过间隔基进行。这类缀合物以游离药物的形式释放先前缀合的生物活性原子团。
[0141]“生物可降解的键”或“可逆的键”是在生理条件下(ph 7.4,37℃的水性缓冲液)在不存在酶的情况下可水解降解(即可裂解)的连接，其半衰期为1小时至六个月，优选一小时至四个月，甚至更优选一个小时至三个月，甚至更优选一小时至两个月，甚至更优选一小时至一个月。因此，稳定的键是在生理条件下(ph 7.4,37℃的水性缓冲液)具有超过6个月的半衰期的键。
[0142]
因此，“可逆前药连接基原子团”是通过可逆的键与生物活性原子团如cnp激动剂原子团共价缀合并且还与载体原子团如-z或-z'共价缀合的原子团，其中与所述载体原子团的共价缀合直接进行或通过间隔基原子团进行，所述间隔基原子团例如-l
2-。优选地，-z或-z'与-l
2-之间的键是稳定的键。
[0143]
本文所用的术语“无痕前药连接基原子团”意指经裂解释放游离形式的药物的可逆前药连接基。本文所用的术语药物的“游离形式”意指未经修饰的药理学活性形式的药物。
[0144]
本文所用的术语“赋形剂”是指与治疗剂例如药物或前药一起施用的稀释剂、佐剂或介质。这类药物赋形剂可以是无菌液体，例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，包括但不限于花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物口服施用时，水是优选的赋形剂。当药物组合物静脉内施用时，盐水和葡萄糖水溶液是优选的赋形剂。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液优选用作可注射溶液的液体赋形剂。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、海藻糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。如果需要，药物组合物还可以包含少量的润湿剂或乳化剂、ph缓冲剂，例如乙酸盐、琥珀酸盐、tris、碳酸盐、磷酸盐、hepes(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、mes(2-(n-吗啉代)乙磺酸)，或者可以含有洗涤剂，如吐温、泊洛沙姆、poloxamine、chaps、igepal或氨基酸，例如甘氨酸、赖氨酸或组氨酸。
这些药物组合物可以采取溶液、混悬剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放制剂等形式。可以用传统的粘合剂和赋形剂如甘油三酯将药物组合物配制成栓剂。口服制剂可以包括标准赋形剂，例如药用级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。这类组合物含有治疗有效量的药物或生物活性原子团以及适量的赋形剂，以便为患者提供恰当施用的形式。所述制剂应适合施用方式。
[0145]
本文所用的术语“试剂”意指包含至少一个用于与另一个化合物或药物的官能团进行反应的官能团的化合物。应当理解，包含官能团(例如伯胺或仲胺或羟基官能团)的药物也是试剂。
[0146]
本文所用的术语“原子团”意指分子的一部分，其与相应的试剂相比缺少一个或多个原子。例如，如果式“h-x-h”的试剂与另一种试剂反应并且成为反应产物的一部分，则所述反应产物的相应原子团具有结构“h-x
‑”
或
“‑
x
‑”
，而每个
“‑”
表示与另一原子团连接。因此，生物活性原子团作为药物从前药中释放。
[0147]
应当理解，如果提供了一组原子的序列或化学结构，则该组原子与两个原子团连接或者将原子团中断，则所述序列或化学结构可以以两种方向中的任何一种方向与两个原子团连接，另有明确说明的除外。例如，原子团
“‑
c(o)n(r1)
‑”
可以与两个原子团连接或以
“‑
c(o)n(r1)
‑”
或
“‑
n(r1)c(o)
‑”
的形式中断原子团。类似地，原子团可以与两个原子团连接或者可以以或的形式中断原子团。
[0148]
本文所用的术语“官能团”意指可以与其它组的原子反应的一组原子。官能团包括但不限于下列基团：羧酸(
–
(c＝o)oh)，伯胺或仲胺(
–
nh2,
–
nh
–
)，马来酰亚胺，硫醇(-sh)，磺酸(
–
(o＝s＝o)oh)，碳酸酯，氨基甲酸酯(
–
o(c＝o)n《)，羟基(
–
oh)，醛(
–
(c＝o)h)，酮(
–
(c＝o)
–
)，肼(》n-n《)，异氰酸酯，异硫氰酸酯，磷酸(
–
o(p＝o)ohoh)，膦酸(
–
o(p＝o)ohh)，卤代乙酰基，烷基卤，丙烯酰基，芳基氟，羟基胺，二硫化物，磺酰胺，硫酸，乙烯基砜，乙烯基酮，重氮烷，环氧乙烷和氮丙啶。
[0149]
在本发明的控制释放cnp激动剂包含一个或多个酸性或碱性基团的情况下，本发明还包括它们相应的药学上或毒理学上可接受的盐，特别是它们的药学上可利用的盐。因此，根据本发明可以使用包含酸性基团的本发明的控制释放cnp激动剂，例如碱金属盐、碱土金属盐或铵盐。这类盐的更精确的例子包括钠盐、钾盐、钙盐、镁盐或与氨或有机胺例如乙胺、乙醇胺、三乙醇胺或氨基酸的盐。包含一个或多个碱性基团(即可被质子化的基团)的本发明的控制释放cnp激动剂可以存在，并且可以根据本发明以它们与无机酸或有机酸形成的加成盐的形式使用。适合的酸的实例包括氯化氢、溴化氢、磷酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、萘二磺酸、草酸、乙酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、甲酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富马酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯基丙酸、葡糖酸、抗坏
血酸、异烟酸、柠檬酸、己二酸和本领域技术人员已知的其它酸。对于本领域技术人员，已知用于将碱性基团转化为阳离子的其它方法，如胺基团的烷基化产生带正电荷的铵基团和盐的适宜的抗衡离子。如果本发明的控制释放cnp激动剂同时包含酸性和碱性基团，则除了所提及的盐形式之外，本发明还包括内盐或甜菜碱(两性离子)。相应的盐可以通过本领域技术人员已知的常规方法获得，例如通过使这些前药与有机或无机的酸或碱在溶剂或分散剂中接触，或通过与其它盐进行阴离子交换或阳离子交换。本发明还包括本发明的前药的所有盐，其由于低的生理学相容性而不直接适用于药物，但其可用作例如化学反应的中间体或用于制备药学上可接受的盐。
[0150]
术语“药学上可接受的”意指当施用于患者时确实造成伤害的物质，优选意指由管理机构例如ema(欧洲)和/或fda(美国)和/或任何其它国家的管理机构批准用于动物、优选用于人。
[0151]
本文所用的术语“约”与数值组合用于表示所述数值加减不超过所述数值的10％、更优选不超过所述数值的8％、甚至更优选不超过所述数值的5％、最优选不超过所述数值的2％的范围，包括所述数值加减不超过所述数值的10％、更优选不超过所述数值的8％、甚至更优选不超过所述数值的5％、最优选不超过所述数值的2％本身。例如，短语“约200”用于表示200 /-10％的范围且包括200 /-10％本身，即从180到220并且包括180和220；优选地，表示200 /-8％的范围且包括200 /-8％本身，即从184到216并且包括184和216；甚至更优选地，表示200 /-5％的范围且包括200 /-5％本身，即从190到210且包括190和210；最优选地，表示200 /-2％的范围且包括200 /-2％本身，即从196到204并且包括196和204。应当理解，以“约20％”给出的百分比不意指“20％ /-10％”，即从10％到30％并且包括10％和30％本身，而是“约20％”意指从18％到22％并且包括18％和22％本身，即加减20这一数值的10％。
[0152]
本文所用的术语“聚合物”意指包含以线性、环形、分枝、交联或树枝状方式或其组合方式通过化学键连接的重复结构单元(即单体)的分子，其可以是合成的或生物来源的或是二者的组合。应当理解，聚合物还可以包含一个或多个其它化学基团和/或原子团，例如一个或多个官能团。优选地，可溶性聚合物具有至少0.5kda的分子量，例如，至少1kda的分子量、至少2kda的分子量、至少3kda的分子量或至少5kda的分子量。如果聚合物是可溶的，则其优选具有至多1000kda、例如至多750kda、例如至多500kda、例如至多300kda、例如至多200kda、例如至多100kda的分子量。应当理解，对于不溶性聚合物，例如水凝胶，不能提供有意义的分子量范围。应当理解，即使各氨基酸的侧链可能不同，但是蛋白质也是一种聚合物，其中氨基酸是重复结构单元。
[0153]
本文所用的术语“聚合的”意指包含一种或多种聚合物或聚合物原子团的试剂或原子团。聚合物试剂或原子团还可以任选地包含一个或多个其它原子团，它们优选选自：
[0154]
·c1-50
烷基、c
2-50
烯基、c
2-50
炔基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、苯基、萘基、茚基、茚满基和1,2,3,4-四氢化萘基；和
[0155]
·
选自以下的键：
[0156][0157]
其中
[0158]
虚线表示与所述原子团或试剂的其余部分连接，且
[0159]-r和-ra彼此独立地选自-h、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
[0160]
本领域技术人员可以理解，从聚合反应获得的聚合产物并不都具有相同的分子量，而是表现出分子量分布。因此，本文所用的聚合物的分子量范围、分子量、单体的数量范围和聚合物中单体的数量是指单体的数均分子量和数均值，即是指聚合物或聚合物原子团的分子量的算术平均值和聚合物或聚合物原子团的单体数目的算术平均值。
[0161]
因此，在包含“x”个单体单元的聚合物原子团中，对“x”给出的任何整数因此对应于单体的算术平均值。对“x”给出的整数的任意范围提供了其中单体的算术平均值所在的整数范围。以“约x”的形式给出的“x”的整数意指单体的算术平均值处于x /-10％、优选x /-8％、更优选x /-5％、最优选x /-2％范围内。
[0162]
本文所用的术语“数均分子量”意指各个聚合物的分子量的普通算数平均值。
[0163]
当提及载体时本文所用的术语“水溶性的”意指当所述载体是本发明的控制释放cnp激动剂的一部分时，至少1g包含所述水溶性载体的控制释放cnp激动剂在20℃下可溶解在一升水中，形成均质的溶液。因此，当提及载体时术语“水不溶性的”意指当所述载体是本发明的控制释放cnp激动剂的一部分时，少于1g包含所述水不溶性载体的控制释放cnp激动剂在20℃下可溶解在于1升水中，形成均质的溶液。
[0164]
本文所用的术语“水凝胶”意指由均聚物或共聚物构成的亲水性或两亲性聚合物网状结构，由于存在共价化学交联其是不溶性的。所述交联提供网状结构和物理完整性。
[0165]
本文所用的术语“热凝胶化”意指一种化合物，其是液体或低粘度溶液，在低温下在约0.1℃/秒的剪切速率下在25℃下粘度小于500cps，所述低温是约0℃至约10℃，但是其在较高的温度下在约0.1℃/秒的剪切速率下在25℃下小于10000cp的高粘度化合物，所述较高的温度为约30℃至约40℃，例如在约37℃下。
[0166]
本文所用的与原子团或试剂有关的术语“基于peg的”意指所述原子团或试剂包含peg。优选地，基于peg的原子团或试剂包含至少10％(w/w)peg，例如至少20％(w/w)peg，例如至少30％(w/w)peg，例如至少40％(w/w)peg，例如至少50％(w/w)，例如至少60(w/w)peg，例如至少70％(w/w)peg，例如至少80％(w/w)peg，例如至少90％(w/w)peg，例如至少95％(w/w)peg。基于peg的原子团或试剂的其余重量百分比是其它原子团，其选自下列原子团和键：
[0167]
·c1-50
烷基、c
2-50
烯基、c
2-50
炔基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、苯基、萘基、茚基、茚满基和1,2,3,4-四氢化萘基；和
[0168]
·
选自以下的键：
[0169][0170]
其中
[0171]
虚线表示与所述原子团或试剂的其余部分连接，且
[0172]-r和-ra彼此独立地选自-h、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
[0173]
本文所用的与原子团或试剂有关的术语“包含至少x％peg的基于peg的”意指所述原子团或试剂包含至少x％(w/w)乙二醇单元(-ch2ch2o-)，其中乙二醇单元可以按嵌段(blockwise)、交替排列或者可以随机分布在所述原子团或试剂内，优选所述原子团或试剂的所有乙二醇单元存在一个嵌段(block)中；基于peg的原子团或试剂的其余重量百分比是其它原子团，其优选选自以下原子团和键：
[0174]
·c1-50
烷基、c
2-50
烯基、c
2-50
炔基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、苯基、萘基、茚基、茚满基和1,2,3,4-四氢化萘基；和
[0175]
·
选自以下的键：
[0176][0177]
其中
[0178]
虚线表示与所述原子团或试剂的其余部分连接，且
[0179]-r和-ra彼此独立地选自-h、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
[0180]
术语“包含至少x％透明质酸的基于透明质酸的”被相应地使用。
[0181]
本文所用的术语“取代”意指分子或原子团的一个或多个-h原子被不同的原子或一组原子替换，所述不同的原子或一组原子被称作“取代基”。
[0182]
优选地，一个或多个另外的任选的取代基彼此独立地选自卤素、-cn、-coor
x1
、-or
x1
、-c(o)r
x1
、-c(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2n(r
x1rx1a
)、-s(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2r
x1
、-s(o)r
x1
、-n(r
x1
)s(o)2n(r
x1arx1b
)、-sr
x1
、-n(r
x1rx1a
)、-no2、-oc(o)r
x1
、-n(r
x1
)c(o)r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)2r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)r
x1a
、-n(r
x1
)c(o)or
x1a
、-n(r
x1
)c(o)n(r
x1arx1b
)、-oc(o)n(r
x1rx1a
)、-t0、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t0、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代，并且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t
0-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
x3
)-、-s(o)2n(r
x3
)-、-s(o)n(r
x3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
x3
)s(o)2n(r
x3a
)-、-s-、-n(r
x3
)-、-oc(or
x3
)(r
x3a
)-、-n(r
x3
)c(o)n(r
x3a
)-和-oc(o)n(r
x3
)-；
[0183]-r
x1
、-r
x1a
、-r
x1b
彼此独立地选自-h、-t0、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t0、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代，并且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t
0-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
x3
)-、-s(o)2n(r
x3
)-、-s(o)n(r
x3
)-；-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
x3
)s(o)2n(r
x3a
)-、-s-、-n(r
x3
)-、-oc(or
x3
)(r
x3a
)-、-n(r
x3
)c(o)n(r
x3a
)-和-oc(o)n(r
x3
)-；
[0184]
t0各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂双环基；其中t0各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代；
[0185]-r
x2
各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor
x4
、-or
x4
、-c(o)r
x4
、-c(o)n(r
x4rx4a
)、-s(o)2n(r
x4rx4a
)、-s(o)n(r
x4rx4a
)、-s(o)2r
x4
、-s(o)r
x4
、-n(r
x4
)s(o)2n(r
x4arx4b
)、-sr
x4
、-n(r
x4rx4a
)、-no2、-oc(o)r
x4
、-n(r
x4
)c(o)r
x4a
、-n(r
x4
)s(o)2r
x4a
、-n(r
x4
)s(o)r
x4a
、-n(r
x4
)c(o)or
x4a
、-n(r
x4
)c(o)n(r
x4arx4b
)、-oc(o)n(r
x4rx4a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0186]-r
x3
、-r
x3a
、-r
x4
、-r
x4a
、-r
x4b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
[0187]
更优选地，所述一个或多个另外的任选的取代基彼此独立地选自卤素、-cn、-coor
x1
、-or
x1
、-c(o)r
x1
、-c(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2n(r
x1rx1a
)、-s(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2r
x1
、-s(o)r
x1
、-n(r
x1
)s(o)2n(r
x1arx1b
)、-sr
x1
、-n(r
x1rx1a
)、-no2、-oc(o)r
x1
、-n(r
x1
)c(o)r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)2r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)r
x1a
、-n(r
x1
)c(o)or
x1a
、-n(r
x1
)c(o)n(r
x1arx1b
)、-oc(o)n(r
x1rx1a
)、-t0、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中-t0、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代，并且其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t
0-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
x3
)-、-s(o)2n(r
x3
)-、-s(o)n(r
x3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
x3
)s(o)2n(r
x3a
)-、-s-、-n(r
x3
)-、-oc(or
x3
)(r
x3a
)-、-n(r
x3
)c(o)n(r
x3a
)-和-oc(o)n(r
x3
)-；
[0188]-r
x1
、-r
x1a
、-r
x1b
、-r
x3
、-r
x3a
各自独立地选自-h、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0189]
t0各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂双环基；其中t0各自独立地任选地被一个或多个相同或不同
的-r
x2
取代；
[0190]-r
x2
各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor
x4
、-or
x4
、-c(o)r
x4
、-c(o)n(r
x4rx4a
)、-s(o)2n(r
x4rx4a
)、-s(o)n(r
x4rx4a
)、-s(o)2r
x4
、-s(o)r
x4
、-n(r
x4
)s(o)2n(r
x4arx4b
)、-sr
x4
、-n(r
x4rx4a
)、-no2、-oc(o)r
x4
、-n(r
x4
)c(o)r
x4a
、-n(r
x4
)s(o)2r
x4a
、-n(r
x4
)s(o)r
x4a
、-n(r
x4
)c(o)or
x4a
、-n(r
x4
)c(o)n(r
x4arx4b
)、-oc(o)n(r
x4rx4a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0191]-r
x4
、-r
x4a
、-r
x4b
各自独立地选自-h、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0192]
甚至更优选地，所述一个或多个另外的任选的取代基彼此独立地选自卤素、-cn、-coor
x1
、-or
x1
、-c(o)r
x1
、-c(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2n(r
x1rx1a
)、-s(o)n(r
x1rx1a
)、-s(o)2r
x1
、-s(o)r
x1
、-n(r
x1
)s(o)2n(r
x1arx1b
)、-sr
x1
、-n(r
x1rx1a
)、-no2、-oc(o)r
x1
、-n(r
x1
)c(o)r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)2r
x1a
、-n(r
x1
)s(o)r
x1a
、-n(r
x1
)c(o)or
x1a
、-n(r
x1
)c(o)n(r
x1arx1b
)、-oc(o)n(r
x1rx1a
)、-t0、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；其中-t0、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代，并且其中c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t
0-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
x3
)-、-s(o)2n(r
x3
)-、-s(o)n(r
x3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
x3
)s(o)2n(r
x3a
)-、-s-、-n(r
x3
)-、-oc(or
x3
)(r
x3a
)-、-n(r
x3
)c(o)n(r
x3a
)-和-oc(o)n(r
x3
)-；
[0193]-r
x1
、-r
x1a
、-r
x1b
、-r
x2
、-r
x3
、-r
x3a
各自独立地选自-h、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0194]
t0各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂双环基；其中t0各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r
x2
取代。
[0195]
优选地，任选地被取代的分子最多6个-h原子独立地被取代基替换，例如，5个-h原子独立地被取代基替换，4个-h原子独立地被取代基替换，3个-h原子独立地被取代基替换，2个-h原子独立地被取代基替换，或1个-h原子被取代基替换。
[0196]
术语“中断”意指原子团插入两个碳原子之间，或者—如果所述插入是在原子团的一个末端—插入碳或杂原子与氢原子之间，优选插入碳与氢原子之间。
[0197]
本文所用的术语“c
1-4
烷基”单独使用或组合使用意指具有1-4个碳原子的直链或支链烷基。如果存在于分子的末端，则直链或支链c
1-4
烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。当分子的两个原子团通过c
1-4
烷基连接时，这类c
1-4
烷基的实例是-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-、-c(ch3)
2-。c
1-4
烷基碳的每个氢可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，c
1-4
烷基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0198]
本文所用的术语“c
1-6
烷基”单独使用或组合使用意指具有1-6个碳原子的直链或支链烷基。如果存在于分子的末端，则直链或支链c
1-6
烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基丁基、2,2-二甲基丙基、正己基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基和3,3-二甲基丙基。当分子的两个原子团通过c
1-6
烷基连接时，这类c
1-6
烷基的实例是-ch
2-、-ch
2-ch
2-、-ch(ch3)-、-ch
2-ch
2-ch
2-、-ch(c2h5)-和-c(ch3)
2-。c
1-6
碳的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，c
1-6
烷基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0199]
因此，“c
1-10
烷基”、“c
1-20
烷基”或“c
1-50
烷基”分别意指具有1-10、1-20或1-50个碳原子的烷基链，其中c
1-10
、c
1-20
或c
1-50
碳的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，c
1-10
或c
1-50
烷基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0200]
本文所用的术语“c
2-6
烯基”单独使用或组合使用意指包含至少一个碳-碳双键的具有2-6个碳原子的直链或支链烃基。如果存在于分子的末端上，则实例是-ch＝ch2、-ch＝ch-ch3、-ch
2-ch＝ch2、-ch＝chch
2-ch3和-ch＝ch-ch＝ch2。当分子的两个原子团通过c
2-6
烯基连接时，这类c
2-6
烯基的实例还是-ch＝ch-。c
2-6
烯基的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，c
2-6
烯基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0201]
因此，“c
2-10
烯基”、“c
2-20
烯基”或“c
2-50
烯基”单独使用或组合使用意指包含至少一个碳-碳双键的具有2-10、2-20或2-50个碳原子的直链或支链烃基。c
2-10
烯基、c
2-20
烯基或c
2-50
烯基的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，c
2-10
烯基、c
2-20
烯基或c
2-50
烯基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0202]
本文所用的术语“c
2-6
炔基”单独使用或组合使用意指包含至少一个碳-碳三键的具有2-6个碳原子的直链或支链烃基。如果存在于分子的末端，则实例是-c≡ch、-ch
2-c≡ch、ch
2-ch
2-c≡ch和ch
2-c≡c-ch3。当分子的两个原子团通过炔基连接时，这类c
2-6
炔基的实例是-c≡c-。c
2-6
炔基的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，可存在一个或多个双键。任选地，c
2-6
炔基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0203]
因此，本文所用的术语“c
2-10
炔基”、“c
2-20
炔基”和“c
2-50
炔基”单独使用或组合使用分别意指包含至少一个碳-碳三键的具有2-10、2-20或2-50个碳原子的烃基。c
2-10
炔基、c
2-20
炔基和c
2-50
炔基的每个氢原子可以任选地被上文所定义的取代基替换。任选地，可存在一个或多个双键。任选地，c
2-10
炔基、c
2-20
炔基和c
2-50
炔基可以被下文所定义的一个或多个原子团中断。
[0204]
如上所述，c
1-4
烷基、c
1-6
烷基、c
1-10
烷基、c
1-20
烷基、c
1-50
烷基、c
2-6
烯基、c
2-10
烯基、c
2-20
烯基、c
2-50
烯基、c
2-6
炔基、c
2-10
炔基、c
2-20
烯基或c
2-50
炔基可以任选地被一个或多个原子团中断，所述原子团优选自：
[0205][0206]
其中
[0207]
虚线表示与所述原子团或试剂的其余部分连接，且
[0208]-r和-ra彼此独立地选自-h、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
[0209]
本文所用的术语“c
3-10
环烷基”意指具有3-10个碳原子的环烷基链，其可以是饱和
的或不饱和的，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基。c
3-10
环烷基碳的每个氢原子可以被上文所定义的取代基替换。术语“c
3-10
环烷基”也包括桥连双环，如降冰片烷或降冰片烯。
[0210]
术语“8-至30-元碳多环基”或“8-至30-元碳多环”意指具有8-30个环原子的两个或更多个环的环状原子团，其中两个相邻的环共享至少一个环原子并且可以含有至多为最大数量的双键(芳族环或完全饱和的、部分饱和的或不饱和的非芳族环)。优选地，8-至30-元碳多环基意指2、3、4或5个环、更优选2、3或4个环的环状原子团。
[0211]
本文所用的术语“3-至10-元杂环基”或“3-至10-元杂环”意指具有3、4、5、6、7、8、9或10个环原子的环，其可以含有至多为最大数量的双键(芳族环或完全饱和的、部分饱和的或不饱和的非芳族环)，其中至少一个环原子、至多4个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括＝n(o)-)的杂原子替换，并且其中所述环通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。3-至10-元杂环的实例包括但不限于氮丙啶、环氧乙烷、硫杂丙环、1h-氮杂环丙烯、环氧乙烯、硫杂丙烯环、氮杂环丁烷、氧杂环丁烷、硫杂环丁烷、呋喃、噻吩、吡咯、吡咯啉、咪唑、咪唑啉、吡唑、吡唑啉、唑、唑啉、异唑、异唑啉、噻唑、噻唑啉、异噻唑、异噻唑啉、噻二唑、噻二唑啉、四氢呋喃、四氢噻吩、吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、唑烷、异唑烷、噻唑烷、异噻唑烷、噻二唑烷、环丁砜、吡喃、二氢吡喃、四氢吡喃、咪唑烷、吡啶、哒嗪、吡嗪、嘧啶、哌嗪、哌啶、吗啉、四唑、三唑、三唑烷、四唑烷、二氮杂环庚烷(diazepane)、氮杂和高哌嗪(homopiperazine)。3-至10-元杂环基或3-至10-元杂环基的每个氢原子可以被下文所定义的取代基替换。
[0212]
本文所用的术语“8-至11-元杂双环基”或“8-至11-元杂双环”意指具有8-11个环原子的两个环的杂环基，其中至少一个环原子由两个环共享，其可以含有至多为最大数量的双键(芳族环或完全饱和的、部分饱和的或不饱和的非芳族环)，其中至少一个环原子至多6个环原子被选自硫(包括-s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括＝n(o)-)的杂原子替换，并且其中该环通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。8-至11-元杂双环的实例是吲哚、二氢吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并唑、苯并异唑、苯并噻唑、苯并异噻唑、苯并咪唑、苯并咪唑啉、喹啉、喹唑啉、二氢喹唑啉、喹啉、二氢喹啉、四氢喹啉、十氢喹啉、异喹啉、十氢异喹啉、四氢异喹啉、二氢异喹啉、苯并氮杂、嘌呤和蝶啶。术语8-至11-元杂双环也包括两个环的螺环结构例如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷或桥连杂环如8-氮杂-双环[3.2.1]辛烷。8-至11-元杂双环基或8-至11-元杂双环碳的每个氢原子可以被下文所定义的取代基替换。
[0213]
类似地，术语“8-至30-元杂多环基”或“8-至30-元杂多环”意指具有8-30个环原子的多于两个环的、优选3、4或5个环的杂环基，其中两个相邻的环共享至少一种环原子，其可以含有至多为最大数量的双键(芳族环或完全饱和的、部分饱和的或不饱和的非芳族环)，其中至少一个环原子至多10个环原子被选自硫(包括
–
s(o)-、-s(o)
2-)、氧和氮(包括＝n(o)-)的杂原子替换，并且其中该环通过碳或氮原子与分子的其余部分连接。
[0214]
应当理解，与结构的原子团相关的短语“基团对r
x
/ry与它们所连接的
原子一起形成c
3-10
环烷基或3-至10-元杂环基”意指r
x
和ry形成如下结构：
[0215][0216]
其中r是c
3-10
环烷基或3-至10-元杂环基。
[0217]
还应当理解，与结构的原子团相关的短语“基团对r
x
/ry与它们所连接的原子一起形成环a”意指r
x
和ry形成如下结构：
[0218][0219]
本文所用的“卤素”意指氟、氯、溴或碘。通常优选卤素是氟或氯。
[0220]
通常，术语“包含”或“包括”也涵盖“由
…
组成”。
[0221]
本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少5倍的降解半衰期。优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少10倍的降解半衰期。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少15倍的降解半衰期。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少20倍的降解半衰期。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少25倍的降解半衰期。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在体外nep降解测定法中具有比相应的释放的cnp激动剂长至少30倍的降解半衰期。
[0222]
本发明的cnp激动剂在生理条件下以至少6小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少12小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少24小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少48小时的释放半衰期释放至少一种cnp激活剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少72小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少96小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少120小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的cnp激动剂在生理条件下以至少144小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少168小时的释放半衰期释放至少一种cnp激动剂。甚至更优选地，本发明的控制释放cnp激动剂在生理条件下以至少192小时的释放半衰期释放
至少一种cnp激动剂。
[0223]
控制释放cnp激动剂优选包含选自小分子、天然产物、寡核苷酸、多肽和蛋白质的cnp激动剂。
[0224]
在一个实施方案中，所述cnp激动剂包含小分子。优选地，所述cnp激动剂是小分子。
[0225]
在另一个实施方案中，所述cnp激动剂包含天然产物。优选地，所述cnp激动剂是天然产物。
[0226]
在另一个实施方案中，所述cnp激动剂包含寡核苷酸。优选地，所述寡核苷酸选自反义寡核苷酸、适配体、rnai和sirna。优选地，所述cnp激动剂是寡核苷酸，更优选选自反义寡核苷酸、适配体、rnai和sirna。
[0227]
在另一个实施方案中，所述cnp激动剂包含蛋白质。优选地，所述cnp激动剂是蛋白质。
[0228]
在优选的实施方案中，所述cnp激动剂包含多肽。更优选地，所述cnp激动剂是多肽。优选地，所述cnp激动剂包含cnp分子或原子团。更优选地，所述cnp激动剂是cnp。甚至更优选地，所述cnp激动剂包含具有seq id no:24、seq id no:25或seq id no:30的序列的cnp分子或原子团。甚至更优选地，所述cnp激动剂是具有seq id no:24、seq id no:25或seq id no:30的序列的cnp。在一个实施方案中，所述cnp激动剂是具有seq id no:24的序列的cnp。在另一个实施方案中，所述cnp激动剂是具有seq id no:25的序列的cnp。在另一个实施方案中，所述cnp激动剂是是具有seq id no:30的序列的cnp。
[0229]
在一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是水不溶性的。
[0230]
优选地，所述控制释放cnp激动剂选自晶体、纳米粒、微粒、纳米球和微球。
[0231]
在一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的晶体。
[0232]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的纳米粒。
[0233]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的微粒。
[0234]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的纳米球。
[0235]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的微球。
[0236]
在一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的囊泡。优选地，所述包含至少一种cnp激动剂的囊泡是胶束、脂质体或聚合物囊泡。
[0237]
在一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的胶束。
[0238]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的脂质体。优选地，所述脂质体选自水质体；非离子表面活性剂囊泡，例如诺质体和前质子体；阳离子脂质体，例如leciplex；转质体(transfersome)；醇质体；不饱和质体；鞘质体；和药质体。
[0239]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是包含至少一种cnp激动剂的聚合物囊泡。
[0240]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂包含非共价包埋在水不溶性聚合
物中的至少一种cnp激动剂。优选地，所述不溶性聚合物包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱(2-methylaryloyl-oxyethyl phosphoyl cholins)、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)(poly(aspartamides))、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯(polybutylene terephthalates)、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)(poly(ethyl phosphates))、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)(poly(lactic-co-glycolic acids))、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)(poly(organophosphazenes))、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[0241]
在优选的实施方案中，所述控制释放cnp包含非共价包埋在聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)中的至少一种cnp激动剂。
[0242]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂包含与水不溶性聚合物共价可逆地缀合的至少一种cnp激动剂。优选地，所述水不溶性聚合物包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[0243]
优选地，所述包含与水不溶性聚合物共价可逆地缀合的至少一种cnp激动剂的控制释放cnp激动剂是包含缀合物d-l的cnp激动剂前药，其中
[0244]-d是cnp激动剂原子团；且
[0245]-l包含可逆前药连接基原子团-l
1-；
[0246]
其中-l
1-被-l
2-z’取代且任选地进一步被取代；其中
[0247]-l
2-是单化学键或间隔基原子团；且
[0248]-z’是水不溶性载体原子团。
[0249]
应当理解，许多原子团-l
2-l
1-d与水不溶性载体-z’连接。
[0250]
水不溶性载体-z’优选是水凝胶。优选地，所述水凝胶包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[0251]
如果载体-z’是水凝胶，其优选是包含peg或透明质酸的水凝胶。最优选地，所述水凝胶包含peg。在同等优选的实施方案中，所述水凝胶包含透明质酸。
[0252]
甚至更优选地，载体-z’是wo 2006/003014 a2、wo 2011/012715 a1或wo 2014/056926 a1中所述的水凝胶，通过引用将该文献全部内容合并入本文。
[0253]
在另一个实施方案中，-z’是通过聚合物链的物理聚集形成的聚合物网状结构，该物理聚集优选是由氢键、结晶、螺旋(helix)形成或络合作用导致的。在一个实施方案中，所述聚合物网状结构是热凝胶化聚合物。
[0254]
在另一个实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是水溶性的。
[0255]
在一个实施方案中，所述cnp激动剂是多肽或蛋白质，并且所述控制释放cnp激动剂是包含与一个或多个另外的多肽或蛋白质原子团融合的这类多肽或蛋白质cnp激动剂原子团的融合蛋白。优选地，所述cnp激动剂通过酶裂解从融合蛋白质中被释放。优选地，所述至少一个或多个另外的多肽或蛋白质原子团选自：us 2012/0035101 a1中所述的绒毛膜促性腺激素的羧基-末端肽，通过引用将该文献合并入本文；白蛋白；wo 2011123813 a2中所述的xten序列，通过引用将该文献合并入本文；wo 2011/144756 a1中所述的脯氨酸/丙氨酸无规卷曲序列，通过引用将该文献合并入本文；wo 2008/155134 a1和wo 2013/024049 a1中所述的脯氨酸/丙氨酸/丝氨酸无规卷曲序列，通过引用将该文献合并入本文；和fc融合蛋白。
[0256]
在优选的实施方案中，所述控制释放cnp激动剂是式(ia)或(ib)的cnp激动剂前药：
[0257]
[0258][0259]
其中
[0260]-d是cnp激动剂原子团；
[0261]-l
1-是可逆前药连接基原子团
[0262]-l
2-是单化学键或间隔基原子团；
[0263]-z是水溶性载体原子团；
[0264]
x是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16的整数；且
[0265]
y是选自1、2、3、4和5的整数。
[0266]
优选地，式(ia)的x是选自1、2、3、4、6和8的整数。更优选地，式(ia)的x是选自1、2、4和6的整数。甚至更优选地，式(ia)的x是选自1、4和6的整数，最优选地，式(ia)的x是1。
[0267]
优选地，式(ib)的y是选自2、3、4和5的整数，甚至更优选地，是选自2、3或4的整数，最优选地，是选自2或3的整数。
[0268]
在另一个实施方案中，式(ib)的y是选自1、2或3的整数。在一个优选的实施方案中，式(ib)的y是1。在一个同等优选的实施方案中，式(ib)的y是2。
[0269]
优选地，所述控制释放cnp激动剂是式(ia)的cnp激动剂前药，其中x＝1。
[0270]
原子团-l
1-是药物即游离形式的cnp激动剂由其释放的可逆前药连接基，即-l
1-是无痕迹前药连接基。适合的前药连接基在本领域中是已知的，例如wo 2005/099768 a2、wo 2006/136586a2、wo 2011/089216 a1和wo2013/024053 a1中公开的可逆前药连接基原子团，通过引用将这些文献合并入本文。
[0271]
在另一个实施方案中，-l
1-是wo 2011/012722 a1、wo 2011/089214 a1、wo 2011/089215 a1、wo 2013/024052 a1和wo 2013/160340 a1中所述的可逆前药连接基，通过引用将这些文献合并入本文。
[0272]
原子团-l
1-可以通过任何类型的键与-d连接，条件是所述键是可逆的。优选地，-l
1-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯、缩醛、缩醛胺、亚胺、肟、腙、二硫化物和酰基胍的键与d连接。甚至更优选地，-l
1-通过选自酰胺、酯、氨基甲酸酯和酰基胍的键与-d连接。应当理解，这些键本身可能不是可逆的，但是包含在-l
1-中的相邻基团可以使所述键可逆。
[0273]
在优选的实施方案中，原子团-l
1-通过酰胺键与-d连接。
[0274]
特别优选的原子团-l
1-公开在wo 2009/095479 a2中。因此，在一个优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(ii)的原子团：
[0275][0276]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0277][0278]-x-是-c(r4r
4a
)-；-n(r4)-；-o-；-c(r4r
4a
)-c(r5r
5a
)-；-c(r5r
5a
)-c(r4r
4a
)-；-c
(r4r
4a
)-n(r6)-；-n(r6)-c(r4r
4a
)-；-c(r4r
4a
)-o-；-o-c(r4r
4a
)-；或-c(r7r
7a
)-；
[0279]
x1是c；或s(o)；
[0280]-x
2-是-c(r8r
8a
)-；或-c(r8r
8a
)-c(r9r
9a
)-；
[0281]
＝x3是＝o；＝s；或＝n-cn；
[0282]-r1、-r
1a
、-r2、-r
2a
、-r4、-r
4a
、-r5、-r
5a
、-r6、-r8、-r
8a
、-r9、-r
9a
独立地选自-h；和c
1-6
烷基；
[0283]-r3、-r
3a
独立地选自-h；和c
1-6
烷基，条件是在-r3、-r
3a
之一或二者都不是-h的情况下，它们通过sp
3-杂化碳原子与它们所连接的n连接；
[0284]-r7是-n(r
10r10a
)；或-nr
10-(c＝o)-r
11
；
[0285]-r
7a
、-r
10
、-r
10a
、-r
11
彼此独立地是-h；或c
1-6
烷基；
[0286]
任选地，基团对-r
1a
/-r
4a
、-r
1a
/-r
5a
、-r
1a
/-r
7a
、-r
4a
/-r
5a
、-r
8a
/-r
9a
中的一对或多对形成化学键；
[0287]
任选地，基团对-r1/-r
1a
、-r2/-r
2a
、-r4/-r
4a
、-r5/-r
5a
、-r8/-r
8a
、-r9/-r
9a
中的一对或多对与它们所连接的原子一起形成c
3-10
环烷基；或3-至10-元杂环基；
[0288]
任选地，基团对-r1/-r4、-r1/-r5、-r1/-r6、-r1/-r
7a
、-r4/-r5、-r4/-r6、-r8/-r9、-r2/-r3的一对或多对与它们所连接的原子一起形成环a；
[0289]
任选地，r3/r
3a
与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环；
[0290]
a选自苯基；萘基；茚基；茚满基；1,2,3,4-四氢化萘基；c
3-10
环烷基；3-至10-元杂环基；和8-至11-元杂双环基；且
[0291]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，并且其中-l
1-任选地进一步被取代，
[0292]
条件是式(ii)中的用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换；
[0293]
其中
[0294]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0295]-z是水溶性载体；且
[0296]-z’是水不溶性载体。
[0297]
优选地，式(ii)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0298]
在一个实施方案中，式(ii)的-l
1-不进一步被取代。
[0299]
应当理解，如果式(ii)的-r3/-r
3a
与它们所连接的氮原子一起形成3-至10-元杂环，则仅可以形成其中直接与氮连接的原子是sp
3-杂化碳原子的这类3-至10-元杂环。换言之，由-r3/-r
3a
与它们所连接的氮原子一起形成的这类3-至10-元杂环具有如下结构：
[0300][0301]
其中
[0302]
虚线表示与-l
1-的其余部分连接；
[0303]
环包含3-10个原子，所述3-10个环原子包含至少一个氮；且
[0304]r#
和r
##
表示sp
3-杂化碳原子。
[0305]
还应当理解，3-至10-元杂环可以进一步被取代。r3a
均是-h。在另一个同等优选的实施方案中，式(ii)的-r3和-r
3a
均是甲基。
[0322]
优选地，式(ii)的-r3是-h，式(ii)的-r
3a
是甲基。
[0323]
优选地，式(ii)的-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(ii)的-r4和-r
4a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(ii)的-r4和-r
4a
均是-h。
[0324]
优选地，原子团-l
1-是式(iia)的原子团：
[0325][0326]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0327]-r1、-r
1a
、-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
、-r4、-r
4a
和-x
2-如式(ii)中所定义的那样被使用；且
[0328]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，并且其中-l
1-任选地进一步被取代，
[0329]
条件是式(iia)中用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换。
[0330]
优选地，式(iia)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0331]
优选地，式(iia)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0332]
优选地，式(iia)的-r1和-r
1a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iia)的-r1和-r
1a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iia)的-r1和-r
1a
均是-h。
[0333]
优选地，式(iia)的-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iia)的-r4和-r
4a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iia)的-r4和-r
4a
均是-h。
[0334]
优选地，式(iia)的-x
2-是-c(r8r
8a
)-。
[0335]
优选地，式(iia)的-r8和-r
8a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iia)的-r8和-r
8a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iia)的-r8和-r
8a
均是-h。
[0336]
优选地，式(iia)的-r2和-r
2a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iia)的-r2和-r
2a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iia)的-r2和-r
2a
均是h。
[0337]
优选地，式(iia)的-r3和-r
3a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(iia)的-r3和-r
3a
中至少一个是甲基。在一个同等优选的实施方案中，式(iia)的-r3和-r
3a
均是-h。在另一个同等优选的实施方案中，式(iia)的-r3和-r
3a
均是甲基。
[0338]
优选地，式(iia)的-r3是-h，式(iia)的-r
3a
是甲基。
[0339]
优选地，原子团-l
1-是式(iib)的原子团：
[0340][0341]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0342]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-x
2-如式(ii)中所定义的那样被使用；且
[0343]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iib)
中用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换。
[0344]
优选地，式(iib)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0345]
优选第，式(iib)的原子团-l
1-不被进一步取代。
[0346]
优选地，式(iib)的-x
2-是-c(r8r
8a
)-。
[0347]
优选地，式(iib)的-r8和-r
8a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iib)的-r8和-r
8a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iib)的-r8和-r
8a
均式-h。
[0348]
优选地，式(iib)的-r2和-r
2a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iib)的-r2和-r
2a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iib)的-r2和-r
2a
均是h。
[0349]
优选地，式(iib)的-r3和-r
3a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(iib)的-r3和-r
3a
中至少一个是甲基。在一个同等优选的实施方案中，式(iib)的-r3和-r
3a
均是-h。在另一个同等优选的实施方案中，式(iib)的-r3和-r
3a
均是甲基。
[0350]
最优选地，式(iib)的-r3是-h，式(iib)的-r
3a
是甲基。
[0351]
甚至更优选地，原子团-l
1-是式(iib’)的原子团：
[0352][0353]
其中
[0354]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的d的氮连接；
[0355]
用星号标记的虚线表示与-l
2-连接；
[0356]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-x
2-如式(ii)中所定义的那样被使用；且
[0357]
其中-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iib’)中用星号标记的氢不被取代基替换。
[0358]
优选地，式(iib’)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0359]
优选地，式(iib’)的-x
2-是-c(r8r
8a
)-。
[0360]
优选地，式(iib’)的-r8和-r
8a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iib’)的-r8和-r
8a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iib’)的-r8和-r
8a
均是-h。
[0361]
优选地，式(iib’)的-r2和-r
2a
独立地选自-h、甲基和乙基。更优选地，式(iib’)的-r2和-r
2a
中至少一个是-h。甚至更优选地，式(iib’)的-r2和-r
2a
均是h。
[0362]
优选地，式(iib’)的-r3和-r
3a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(iib’)的-r3和-r
3a
中至少一个是甲基。在一个同等优选的实施方案中，式(iib’)的-r3和-r
3a
均是-h。在另一个同等优选的实施方案中，式(iib’)的-r3和-r
3a
均是甲基。
[0363]
最优选地，式(iib’)的-r3是-h，式(iib’)的-r
3a
是甲基。
[0364]
优选地，原子团-l
1-是式(iic)的原子团：
[0365][0366]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的的-d的氮连接；且
[0367]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，并且其中-l
1-任选地进一步被取代，
[0368]
条件是式(iic)中用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换。
[0369]
优选地，式(iic)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0370]
优选地，式(iic)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0371]
在另一个实施方案中，原子团-l
1-是式(iic-a)的原子团：
[0372][0373]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0374]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，并且其中-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iic-a)中用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换。
[0375]
优选地，式(iic-a)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0376]
优选地，式(iic-a)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0377]
在另一个优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(iic-b)的原子团：
[0378][0379]
其中虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0380]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，并且其中-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iic-b)中用星号标记的氢不被-l
2-z或-l
2-z’或取代基替换。
[0381]
优选地，式(iic-b)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0382]
优选地，式(iic-b)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0383]
甚至更优选地，原子团-l
1-选自式(iic-i)、(iic-ii)、(iic-iii)、(iic-iv)和(iic-v)：
[0384][0385][0386]
其中
[0387]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0388]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接；且
[0389]-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iic-i)、(iic-ii)、(iic-iii)、(iic-iv)和(iic-v)中用用星号标记的氢不被取代基替换。
[0390]
优选地，式(iic-i)、(iic-ii)、(iic-iii)、(iic-iv)和(iic-v)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0391]
在一个特别优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(iic-ii)的原子团：
[0392][0393]
其中
[0394]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0395]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接。
[0396]
优选地，式(iic-ii)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0397]
在一个同等优选的实施方案中，原子团-l
1-选自式(iic-i’)、(iic-ii’)、(iic-iii’)、(iic-iv’)和(iic-v’)：
[0398][0399]
其中
[0400]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0401]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接，且
[0402]-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iic-i’)、(iic-ii’)、(iic-iii’)、(iic-iv’)和(iic-v’)中用星号标记的氢不被取代基替换。
[0403]
优选地，式(iic-i’)、(iic-ii’)、(iic-iii’)、(iic-iv’)和(iic-v’)的原子团-l
1-不进一步被取代。
[0404]
在另一个特别优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(iic-ii’)的原子团：
[0405][0406]
其中
[0407]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0408]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接。
[0409]
优选地，式(iic-ii’)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0410]
在一个同等优选的实施方案中，原子团-l
1-选自式(iic-i”)、(iic-ii”)、(iic-iii”)和(iic-iv”)：
[0411][0412]
其中
[0413]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0414]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接；且
[0415]-l
1-任选地进一步被取代，条件是式(iic-i”)、(iic-ii”)、(iic-iii”)和(iic-iv”)中用星号标记的氢不被取代基替换。
[0416]
优选地，式(iic-i”)、(iic-ii”)、(iic-iii”)和(iic-iv”)的原子团-l
1-不被进一步取代。
[0417]
在另一个特别优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(iic-ii”)的原子团
[0418][0419]
其中
[0420]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0421]
用星号标记的虚线表示与-l
2-z或-l
2-z’连接。
[0422]
优选地，式(iic-ii”)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0423]
式(ii)、(iia)、(iib)、(iib’)、(iic)、(iic-a)、(iic-b)、(iic-i)、(iic-ii)、(iic-iii)、(iic-iv)、(iic-v)、(iic-i’)、(iic-ii’)、(iic-iii’)、(iic-iv’)、(iic-v’)、(iic-i”)、(iic-ii”)、(iic-iii”)、(iic-iv”)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0424]
另一个优选的原子团-l
1-公开在wo2016/020373a1中。因此，在另一个优选的实施方案中，原子团-l
1-是式(iii)的原子团：
[0425][0426]
其中
[0427]
虚线表示分别通过形成酰胺或酯键与为cnp原子团的-d的伯胺或仲胺或羟基连接；
[0428]-r1、-r
1a
、-r2、-r
2a
、-r3和-r
3a
彼此独立地选自-h、-c(r8r
8ar8b
)、-c(＝o)r8、-c≡n、-c(＝nr8)r
8a
、-cr8(＝cr
8ar8b
)、-c≡cr8和-t；
[0429]-r4、-r5和-r
5a
彼此独立地选自-h、-c(r9r
9ar9b
)和-t；
[0430]
a1和a2彼此独立地是0或1；
[0431]-r6、-r
6a
、-r7、-r
7a
、-r8、-r
8a
、-r
8b
、-r9、-r
9a
、-r
9b
各自彼此独立地选自-h、卤素、-cn、-coor
10
、-or
10
、-c(o)r
10
、-c(o)n(r
10r10a
)、-s(o)2n(r
10r10a
)、-s(o)n(r
10r10a
)、-s(o)2r
10
、-s(o)r
10
、-n(r
10
)s(o)2n(r
10ar10b
)、-sr
10
、-n(r
10r10a
)、-no2、-oc(o)r
10
、-n(r
10
)c(o)r
10a
、-n(r
10
)s(o)2r
10a
、-n(r
10
)s(o)r
10a
、-n(r
10
)c(o)or
10a
、-n(r
10
)c(o)n(r
10ar10b
)、-oc(o)n(r
10r10a
)、-t、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基；其中-t、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
11
取代，且其中c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
12
)-、-s(o)2n(r
12
)-、-s(o)n(r
12
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
12
)s(o)2n(r
12a
)-、-s-、-n(r
12
)-、-oc(or
12
)(r
12a
)-、-n(r
12
)c(o)n(r
12a
)-和-oc(o)n(r
12
)-；
[0432]-r
10
、-r
10a
、-r
10b
各自独立地选自-h、-t、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基；其中-t、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
11
取代，且其中c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c
(o)-、-c(o)n(r
12
)-、-s(o)2n(r
12
)-、-s(o)n(r
12
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
12
)s(o)2n(r
12a
)-、-s-、-n(r
12
)-、-oc(or
12
)(r
12a
)-、-n(r
12
)c(o)n(r
12a
)-和-oc(o)n(r
12
)-；
[0433]
t各自彼此独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基和8-至11-元杂双环基；其中t各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r
11
取代；
[0434]-r
11
各自彼此独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor
13
、-or
13
、-c(o)r
13
、-c(o)n(r
13r13a
)、-s(o)2n(r
13r13a
)、-s(o)n(r
13r13a
)、-s(o)2r
13
、-s(o)r
13
、-n(r
13
)s(o)2n(r
13ar13b
)、-sr
13
、-n(r
13r13a
)、-no2、-oc(o)r
13
、-n(r
13
)c(o)r
13a
、-n(r
13
)s(o)2r
13a
、-n(r
13
)s(o)r
13a
、-n(r
13
)c(o)or
13a
、-n(r
13
)c(o)n(r
13ar13b
)、-oc(o)n(r
13r13a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0435]-r
12
、-r
12a
、-r
13
、-r
13a
、-r
13b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0436]
任选地，基团对-r1/-r
1a
、-r2/-r
2a
、-r3/-r
3a
、-r6/-r
6a
、-r7/-r
7a
中的一对或多对与它们所连接的原子一起形成c
3-10
环烷基或3-至10-元杂环基；
[0437]
任选地，基团对-r1/-r2、-r1/-r3、-r1/-r4、-r1/-r5、-r1/-r6、-r1/-r7、-r2/-r3、-r2/-r4、-r2/-r5、-r2/-r6、-r2/-r7、-r3/-r4、-r3/-r5、-r3/-r6、-r3/-r7、-r4/-r5、-r4/-r6、-r4/-r7、-r5/-r6、-r5/-r7、-r6/-r7中的一对或多对与它们所连接的原子一起形成环a；
[0438]
a选自苯基；萘基；茚基；茚满基；1,2,3,4-四氢化萘基；c
3-10
环烷基；3-至10-元杂环基；和8-至11-元杂双环基；
[0439]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0440]
其中
[0441]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0442]-z是水溶性载体；且
[0443]-z’是水不溶性载体。
[0444]
式(iii)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0445]
优选地，式(iii)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0446]
在一个实施方案中，式(iii)的-l
1-不进一步被取代。
[0447]-l
1-的另外的优选实施方案公开在ep1536334b1、wo2009/009712a1、wo2008/034122a1、wo2009/143412a2、wo2011/082368a2和us8618124b2中，通过引用将这些文献的全部内容合并入本文。
[0448]-l
1-的另外的优选实施方案公开在us8946405b2和us8754190b2中，通过引用将这些文献的全部内容合并入本文。因此，优选的原子团-l
1-是式(iv)的原子团：
[0449][0450]
其中
[0451]
虚线表示与为cnp激动剂原子团的-d连接，并且其中连接是通过-d的选自-oh、-sh
和-nh2的官能团进行的；
[0452]
m是0或1；
[0453]-r1和-r2中至少一个或这二者均彼此独立地选自-cn、-no2、任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、-c(o)r3、-s(o)r3、-s(o)2r3和-sr4；
[0454]-r1和-r2之一且仅一个选自-h、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基烷基和任选被取代的杂芳基烷基；
[0455]-r3选自-h、任选被取代的烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基烷基、-or9和-n(r9)2；
[0456]-r4选自任选被取代的烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基烷基、任选被取代的杂芳基和任选被取代的杂芳基烷基；
[0457]-r5各自独立地选自-h、任选被取代的烷基、任选被取代的烯基烷基、任选被取代的炔基烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基烷基、任选被取代的杂芳基和任选被取代的杂芳基烷基；
[0458]-r9选自-h和任选被取代的烷基；
[0459]-y-不存在，且x-是-o-或-s-；或
[0460]-y-是-n(q)ch
2-，且-x-是-o-；
[0461]
q选自任选被取代的烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基烷基、任选被取代的杂芳基和任选被取代的杂芳基烷基；
[0462]
任选地，-r1和-r2可以连接形成3至8-元环；且
[0463]
任选地，两个-r9与它们所连接的氮一起形成杂环；
[0464]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0465]
其中
[0466]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0467]-z是水溶性载体；且
[0468]-z’是水不溶性载体。
[0469]
式(iv)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0470]
优选地，式(iv)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0471]
在一个实施方案中，式(iv)的-l
1-不进一步被取代。
[0472]
仅在式(iv)的语境中，所用术语具有如下含义：
[0473]
本文所用的术语“烷基”包括1-8个碳、在一些实施方案中是1-6个或1-4个碳原子的直链、支链或环状的饱和烃基。
[0474]
术语“烷氧基”包括与氧键合的烷基，包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙氧基、环丁氧基等。
[0475]
术语“烯基”包括具有碳-碳双键的非芳族不饱和烃。
[0476]
术语“炔基”包括具有碳-碳三键的非芳族不饱和烃。
[0477]
术语“芳基”包括6-18个碳、优选6-10个碳的芳族烃基，包括例如苯基、萘基和蒽基等基团。术语“杂芳基”包括包含3-15个碳的、含有至少一个n、o或s原子的芳族环，优选包含3-7个碳、含有至少一个n、o或s原子的芳族环，包括例如吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、
唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、吲哚基、茚基等基团。
[0478]
在一些情况中，烯基、炔基、芳基或杂芳基原子团可以通过亚烷基键与分子的其余部分偶联。在这些情况中，取代基被称为烯基烷基、炔基烷基、芳基烷基或杂芳基烷基，这表示亚烷基原子团位于烯基、炔基、芳基或杂芳基原子团与所述烯基、炔基、芳基或杂芳基与之偶联的分子之间。
[0479]
术语“卤素”包括溴、氟、氯和碘。
[0480]
术语“杂环”是指包含3-7个碳原子和至少一个n、o或s原子的4-8元芳族或非芳族环。实例为哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、吡咯烷和四氢呋喃基，以及上文针对术语“杂芳基”所提供的举例性基团。
[0481]
当环系任选被取代时，适合的取代基选自烷基、烯基、炔基或另外的环，它们各自任选地进一步被取代。包括上述基团在内的任何基团上的任选的取代基包括卤素、硝基、氰基、-or、-sr、-nr2、-ocor、-nrcor、-coor、-conr2、-sor、-so2r、-sonr2、-so2nr2，其中r各自独立地是烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基，或者两个r基团与它们所连接的原子一起形成环。
[0482]-l
1-的另外的优选实施方案公开在wo2013/036857a1中，通过引用将该文献的全部内容合并入本文。因此，优选的原子团-l
1-是式(v)的原子团：
[0483][0484]
其中
[0485]
虚线表示与为cnp激动剂原子团的-d连接，并且其中连接通过-d的胺官能团进行；
[0486]-r1选自任选被取代的c
1-c6直链、支链或环状烷基；任选被取代的芳基；任选被取代的杂芳基；烷氧基；和-nr
52
；
[0487]-r2选自-h；任选被取代的c
1-c6烷基；任选被取代的芳基；和任选被取代的杂芳基；
[0488]-r3选自-h；任选被取代的c
1-c6烷基；任选被取代的芳基；和任选被取代的杂芳基；
[0489]-r4选自-h；任选被取代的c
1-c6烷基；任选被取代的芳基；和任选被取代的杂芳基；
[0490]-r5各自彼此独立地选自-h；任选被取代的c
1-c6烷基；任选被取代的芳基；和任选被取代的杂芳基；或者两个-r5可以一起是烷基或环杂烷基；
[0491]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0492]
其中
[0493]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0494]-z是水溶性载体；且
[0495]-z’是水不溶性载体。
[0496]
式(v)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0497]
优选地，式(v)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0498]
在一个实施方案中，式(v)的-l
1-不进一步被取代。
[0499]
仅在式(v)的语境中，所用术语具有如下含义：
[0500]“烷基”、“烯基”和“炔基”包括1-8个碳或1-6个碳或1-4个碳的直链、支链或环状烃
基，其中烷基是饱和的烃，烯基包括一个或多个碳-碳双键，炔基包括一个或多个碳-碳三键，除非另有说明，否则这些基团含有1-6个c。
[0501]“芳基”包括6-18个碳、优选6-10个碳的芳族烃基，包括例如苯基、萘基和蒽等基团。“杂芳基”包括包含3-15个碳、含有至少一个n、o或s原子的芳族环，优选包含3-7个碳、含有至少一个n、o或s原子的芳族环，包括例如吡咯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、唑基、异唑基、噻唑基、异噻唑基、喹啉基、吲哚基、茚基及类似基团等基团。
[0502]
术语“取代”意指包含一个或多个取代基用以替换一个或多个氢原子的烷基、烯基、炔基、芳基或杂芳基。取代基一般可选自：卤素，包括f、cl、br和i；低级烷基，包括直链、支链和环状的低级烷基；低级卤代烷基，包括氟代烷基、氯代烷基、溴代烷基和碘代烷基；oh；低级烷氧基，包括直链、支链和环状的低级烷氧基；sh；低级烷硫基，包括直链、支链和环状的低级烷硫基；氨基，烷基氨基，二烷基氨基，硅烷基，包括烷基硅烷基、烷氧基硅烷基和芳基硅烷基；硝基；氰基；羰基；羧酸；羧酸酯，羧酰胺，氨基羰基；氨基酰基；氨基甲酸酯；脲；硫代氨基甲酸酯；硫脲；酮；砜；磺酰胺；芳基，包括苯基、萘基和蒽基；杂芳基，包括5-元杂芳基，包括吡咯、咪唑、呋喃、噻吩、唑、噻唑、异唑、异噻唑、噻二唑、三唑、二唑和四唑；6-元杂芳基，包括吡啶、嘧啶、吡嗪，和稠合杂芳基，包括苯并呋喃、苯并噻吩、苯并唑、苯并咪唑、吲哚、苯并噻唑、苯并异唑和苯并异噻唑。
[0503]-l
1-的另外优选的实施方案公开在us7585837b2中，通过引用将该文献的全部内容合并入本文。因此，优选的原子团-l
1-是式(vi)的原子团：
[0504][0505]
其中
[0506]
虚线表示与为cnp激动剂原子团的-d连接，且其中连接通过-d的胺官能团进行；
[0507]
r1和r2独立地选自氢、烷基、烷氧基、烷氧基烷基、芳基、烷芳基、芳烷基、卤素、硝基、-so3h、-so2nhr5、氨基、铵、羧基、po3h2和opo3h2；
[0508]
r3、r4和r5独立地选自氢、烷基和芳基；
[0509]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0510]
其中
[0511]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0512]-z是水溶性载体；且
[0513]-z’是水不溶性载体。
[0514]
式(vi)的适合的取代基是烷基(例如c
1-6
烷基)、烯基(例如c
2-6
烯基)、炔基(例如c
2-6
炔基)、芳基(例如苯基)、杂烷基、杂烯基、杂炔基、杂芳基(例如4-7元芳族杂环)或卤素原子团。
[0515]
优选地，式(vi)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0516]
式(vi)的-l
1-的任选的另外的取代基式(vi)的-l
1-优选如上文所述。
[0517]
在一个实施方案中，式(vi)的-l
1-不进一步被取代。
[0518]
仅在式(vi)的语境中，所用的术语具有如下含义：
[0519]
术语“烷基”、“烷氧基”、“烷氧基烷基”、“芳基”、“烷芳基”和“芳烷基”意指1-8个、优选1-4个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基和丁基，以及6-10个碳原子的芳基，例如苯基和萘基。术语“卤素”包括溴、氟、氯和碘。
[0520]-l
1-的另外优选的实施方案公开在wo2002/089789a1中，通过引用将该文献的全部内容合并入本文。因此，优选的原子团-l
1-是式(vii)的原子团：
[0521][0522]
其中
[0523]
虚线表示与为cnp激动剂原子团的-d连接，且其中连接通过-d的胺
[0524]
官能团进行；
[0525]
l1是双官能连接基；
[0526]
y1和y2独立地是o、s或nr7；
[0527]
r2、r3、r4、r5、r6和r7独立地选自氢、c
1-6
烷基、c
3-12
支链烷基、c
3-8
环烷基、c
1-6
取代的烷基、c
3-8
取代的环烷基、芳基、取代的芳基、芳烷基、c
1-6
杂烷基、取代的c
1-6
杂烷基、c
1-6
烷氧基、苯氧基和c
1-6
杂烷氧基；
[0528]
ar是当包括在式(vii)中时形成多取代的芳族烃或多取代的杂环基的原子团；
[0529]
x是主动转入靶细胞的化学键或原子团、疏水性原子团或其组合，
[0530]
y是0或1；
[0531]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0532]
其中
[0533]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0534]-z是水溶性载体；且
[0535]-z’是水不溶性载体。
[0536]
优选地，式(vii)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0537]
式(vii)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0538]
在一个实施方案中，式(vii)的-l
1-不进一步被取代。
[0539]
仅在式(vii)的语境中，所用的术语具有如下含义：
[0540]
术语“烷基”应理解为包括例如直链的、支链的、取代的c
1-12
烷基，包括烷氧基、c
3-8
环烷基或取代的环烷基等。
[0541]
术语“取代”应理解为包括向官能团或化合物内加入一个或多个不同的原子或用
一个或多个不同的原子替换官能团或化合物内含有的一个或多个原子。
[0542]
取代的烷基包括羧基烷基、氨基烷基、二烷基氨基、羟基烷基和巯基烷基；取代的环烷基包括例如4-氯环己基等原子团；芳基包括例如萘基等原子团；取代的芳基包括例如3-溴-苯基等原子团；芳烷基包括例如甲苯甲酰基等原子团；杂烷基包括例如乙基噻吩等原子团；取代的杂烷基包括例如3-甲氧基噻吩等原子团；烷氧基包括例如甲氧基等原子团；苯氧基包括例如3-硝基苯氧基等原子团。卤代-应理解为包括氟、氯、碘和溴。
[0543]
在另一个实施方案中，-l
1-包括式(viii)的亚结构：
[0544][0545]
其中
[0546]
用星号标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0547]
未标记的虚线表示与-l
1-的其余部分连接；且
[0548]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0549]
其中
[0550]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0551]-z是水溶性载体；且
[0552]-z’是水不溶性载体。
[0553]
优选地，式(viii)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0554]
式(viii)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0555]
在一个实施方案中，式(viii)的-l
1-不进一步被取代。
[0556]
在另一个实施方案中，-l
1-包括式(ix)的亚结构：
[0557][0558]
其中
[0559]
用星号标记的虚线表示通过形成氨基甲酸酯键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[0560]
未标记的虚线表示与-l
1-的其余部分连接；且
[0561]
其中-l
1-被-l
2-z或-l
2-z’取代，且其中-l
1-任选地进一步被取代；
[0562]
其中
[0563]-l
2-是单化学键或间隔基；
[0564]-z是水溶性载体；且
[0565]-z’是水不溶性载体。
[0566]
式(ix)的-l
1-的任选的另外的取代基优选如上文所述。
[0567]
优选地，式(ix)的-l
1-被一个原子团-l
2-z或-l
2-z’取代。
[0568]
在一个实施方案中，式(ix)的-l
1-不进一步被取代。
[0569]
优选地，式(ia)、(ib)、(ii)、(iia)、(iib)、(iib’)、(iic)、(iic-a)、(iic-b)、(iic-i)、(iic-ii)、(iic-iii)、(iic-iv)、(iic-v)、(iic-i’)、(iic-ii’)、(iic-iii’)、(iic-iv’)、(iic-v’)、(iic-i”)、(iic-ii”)、(iic-iii”)、(iic-iv”)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)、(viii)和(ix)的-d是cnp原子团。原子团-d可以通过d-h的任意官能团与-l
1-连接，优选通过d-h的胺官能团与-l
1-连接。这可以是n-末端胺官能团或赖氨酸侧链、即在9、11、15、16、20和26位上的赖氨酸提供的胺官能团，条件是cnp具有seq id no:24的序列。
[0570]
令人惊奇地发现，与cnp的n-末端或非环部分相比，-l
1-与cnp原子团的环连接显著降低cnp前药对npr-b的亲和性，这种降低的对npr-b的亲和性转而降低心血管副作用例如低血压的风险。
[0571]
因此，-l
1-优选与-d的所述环原子团的氨基酸残基的侧链缀合或者与-d的所述环原子团的骨架缀合。甚至更优选地，-l
1-共价可逆地与-d的所述环原子团的氨基酸残基的侧链缀合。如果-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团，则-l
1-优选与相应药物d-h的26位上的赖氨酸所提供的胺官能团缀合。
[0572]
原子团-l
2-是化学键或间隔基原子团。
[0573]
在一个实施方案中，-l
2-是化学键。
[0574]
在另一个实施方案中，-l
2-是间隔基原子团。
[0575]
原子团-l
2-可以通过替换存在的任意-h与-l
1-连接，有明确排除的除外。
[0576]
当-l
2-不是单化学键时，-l
2-优选自-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y1
)-、-s(o)2n(r
y1
)-、-s(o)n(r
y1
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y1
)s(o)2n(r
y1a
)-、-s-、-n(r
y1
)-、-oc(or
y1
)(r
y1a
)-、-n(r
y1
)c(o)n(r
y1a
)-、-oc(o)n(r
y1
)-、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t-、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y3
)-、-s(o)2n(r
y3
)-、-s(o)n(r
y3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y3
)s(o)2n(r
y3a
)-、-s-、-n(r
y3
)-、-oc(or
y3
)(r
y3a
)-、-n(r
y3
)c(o)n(r
y3a
)-和-oc(o)n(r
y3
)-；
[0577]-r
y1
和-r
y1a
彼此独立地选自-h、-t、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y4
)-、-s(o)2n(r
y4
)-、-s(o)n(r
y4
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y4
)s(o)2n(r
y4a
)-、-s-、-n(r
y4
)-、-oc(or
y4
)(r
y4a
)-、-n(r
y4
)c(o)n(r
y4a
)-和-oc(o)n(r
y4
)-；
[0578]
t各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中t各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代；
[0579]-r
y2
各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor
y5
、-or
y5
、-c(o)r
y5
、-c(o)n(r
y5ry5a
)、-s(o)2n(r
y5ry5a
)、-s(o)n(r
y5ry5a
)、-s(o)2r
y5
、-s(o)r
y5
、-n(r
y5
)s(o)2n(r
y5ary5b
)、-sr
y5
、-n(r
y5ry5a
)、-no2、-oc(o)r
y5
、-n(r
y5
)c(o)r
y5a
、-n(r
y5
)s(o)2r
y5a
、-n(r
y5
)s(o)r
y5a
、-n(r
y5
)c(o)or
y5a
、-n(r
y5
)c(o)n(r
y5ary5b
)、-oc(o)n(r
y5ry5a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被
一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0580]-r
y3
、-r
y3a
、-r
y4
、-r
y4a
、-r
y5
、-r
y5a
和-r
y5b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
[0581]
当-l
2-不是单化学键时，-l
2-甚至更优选地选自-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y1
)-、-s(o)2n(r
y1
)-、-s(o)n(r
y1
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y1
)s(o)2n(r
y1a
)-、-s-、-n(r
y1
)-、-oc(or
y1
)(r
y1a
)-、-n(r
y1
)c(o)n(r
y1a
)-、-oc(o)n(r
y1
)-、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t-、c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代，且其中c
1-20
烷基、c
2-20
烯基和c
2-20
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y3
)-、-s(o)2n(r
y3
)-、-s(o)n(r
y3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y3
)s(o)2n(r
y3a
)-、-s-、-n(r
y3
)-、-oc(or
y3
)(r
y3a
)-、-n(r
y3
)c(o)n(r
y3a
)-和-oc(o)n(r
y3
)-；
[0582]-r
y1
和-r
y1a
彼此独立地选自-h、-t、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；其中-t、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代，且其中c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y4
)-、-s(o)2n(r
y4
)-、-s(o)n(r
y4
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y4
)s(o)2n(r
y4a
)-、-s-、-n(r
y4
)-、-oc(or
y4
)(r
y4a
)-、-n(r
y4
)c(o)n(r
y4a
)-和-oc(o)n(r
y4
)-；
[0583]
t各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中t各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代；
[0584]-r
y2
选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor
y5
、-or
y5
、-c(o)r
y5
、-c(o)n(r
y5ry5a
)、-s(o)2n(r
y5ry5a
)、-s(o)n(r
y5ry5a
)、-s(o)2r
y5
、-s(o)r
y5
、-n(r
y5
)s(o)2n(r
y5ary5b
)、-sr
y5
、-n(r
y5ry5a
)、-no2、-oc(o)r
y5
、-n(r
y5
)c(o)r
y5a
、-n(r
y5
)s(o)2r
y5a
、-n(r
y5
)s(o)r
y5a
、-n(r
y5
)c(o)or
y5a
、-n(r
y5
)c(o)n(r
y5ary5b
)、-oc(o)n(r
y5ry5a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0585]-r
y3
、-r
y3a
、-r
y4
、-r
y4a
、-r
y5
、-r
y5a
和-r
y5b
各自彼此独立地选自-h和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
[0586]
当-l
2-不是单化学键，-l
2-甚至更优选地选自-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y1
)-、-s(o)2n(r
y1
)-、-s(o)n(r
y1
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y1
)s(o)2n(r
y1a
)-、-s-、-n(r
y1
)-、-oc(or
y1
)(r
y1a
)-、-n(r
y1
)c(o)n(r
y1a
)-、-oc(o)n(r
y1
)-、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中-t-、c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r
y2
取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r
y3
)-、-s(o)2n(r
y3
)-、-s(o)n(r
y3
)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r
y3
)s(o)2n(r
y3a
)-、-s-、-n(r
y3
)-、-oc(or
y3
)(r
y3a
)-、-n(r
y3
)c(o)n(r
y3a
)-和-oc(o)n(r
y3
)-；
[0587]-r
y1
和-r
y1a
独立地选自-h、-t、c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基；
[0588]
t各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；
[0589]-r
y2
各自独立地选自卤素和c
1-6
烷基；且
[0590]-r
y3
、-r
y3a
、-r
y4
、-r
y4a
、-r
y5
、-r
y5a
和-r
y5b
各自彼此独立地选自-h和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代。
[0591]
甚至更优选地，-l
2-是c
1-20
烷基链，其任选地被一个或多个独立地选自以下的基团
中断：-o-、-t-和-c(o)n(r
y1
)-；且所述c
1-20
烷基链任选地被一个或多个独立地选自以下的基团取代：-oh、-t和-c(o)n(r
y6ry6a
)；其中-r
y1
、-r
y6
、-r
y6a
独立地选自h和c
1-4
烷基，且其中t选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基。
[0592]
优选地，-l
2-具有在14g/mol-750g/mol范围中的分子量。
[0593]
优选地，-l
2-包含选自以下的原子团：
[0594]
[0595]
其中
[0596]
虚线表示分别与-l
2-、-l
1-、-z和/或-z'的其余部分连接；且
[0597]-r和-ra彼此独立地选自-h、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。
[0598]
在一个优选的实施方案中，-l
2-具有1-20个原子的链长。
[0599]
本文所用的与原子团-l
2-相关的术语“链长”是指-l
1-与-z之间的最短连接中存在的-l
2-的原子数。
[0600]
优选地，-l
2-是式(i)的原子团：
[0601][0602]
其中
[0603]
用星号标记的虚线表示与-l
1-连接；
[0604]
未标记的虚线表示与-z或-z'连接；
[0605]-r1选自-h、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基；
[0606]
n选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17和18；且
[0607]
其中式(i)的原子团任选地进一步被取代。
[0608]
优选地，式(i)的-r1选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。甚至更优选地，式(i)的-r1选自-h、甲基、乙基和丙基。甚至更优选地，式(i)的-r1选自-h和甲基。最优选地，式(i)的-r1是甲基。
[0609]
优选地，式(i)的n选自0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和10。甚至更优选地，式(i)的n选自0、1、2、3、4和5。甚至更优选地，式(i)的n选自0、1、2和3。甚至更优选地，式(i)的n选自0和1。最优选地，式(i)的n是0。
[0610]
在一个优选的实施方案中，-l
2-是选自以下的原子团：
[0611]
[0612][0613]
其中
[0614]
用星号标记的虚线表示与-l
1-连接；
[0615]
未标记的虚线表示与-z或-z'连接；且
[0616]
其中原子团(ii)、(iii)、(iv)、(v)、(vi)、(vii)、(viii)、(ix)、(x)、(xi)、(xii)、(xiii)、(xiv)、(xv)、(xvi)和(xvii)任选地进一步被取代。
[0617]
在优选的实施方案中，-l
2-选自
[0618]
[0619][0620]
其中
[0621]
用星号标记的虚线表示与-l
1-连接；且
[0622]
未标记的虚线表示与-z或-z'连接。
[0623]
甚至更优选的-l
2-选自
[0624][0625]
其中
[0626]
用星号标记的虚线表示与-l
1-连接；且
[0627]
未标记的虚线表示与-z或-z'连接。
[0628]
甚至更优选地，-l
2-是式(xvi)的原子团：
[0629][0630]
其中
[0631]
用星号标记的虚线表示与-l
1-连接；且
[0632]
未标记的虚线表示与-z或-z'连接。
[0633]
在一个优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-选自
[0634]
[0635][0636]
其中
[0637]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0638]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0639]
在一个甚至更优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-ii)的原子团：
[0640][0641]
其中
[0642]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0643]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0644]
在一个最优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-ii’)的原子团
[0645][0646]
其中
[0647]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0648]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0649]
在另一个优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-选自
[0650][0651]
其中
[0652]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0653]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0654]
在一个甚至更优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-iia)的原子团
[0655][0656]
其中
[0657]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0658]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0659]
在一个最优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-iia’)的原子团
[0660][0661]
其中
[0662]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0663]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0664]
在另一个实施方案中，原子团-l
1-l
2-选自
[0665][0666]
其中
[0667]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0668]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0669]
在一个甚至更优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-iib)的原子团
[0670][0671]
其中
[0672]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0673]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0674]
在一个最优选的实施方案中，原子团-l
1-l
2-是式(iid-iib’)的原子团
[0675][0676]
其中
[0677]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[0678]
用星号标记的虚线表示与-z或-z’连接。
[0679]
优选地，式(ia)或(ib)的-z具有5-200kda的分子量。甚至更优选地，式(ia)或(ib)
的-z具有8-100kda、甚至更优选10-80kda、甚至更优选12-60、甚至更优选15-40的分子量，最优选地，式(ia)或(ib)的-z具有约20kda的分子量。在另一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z具有约40kda的分子量。
[0680]
式(ia)或(ib)的载体-z包含c
8-24
烷基原子团或聚合物。优选地，式(ia)或(ib)的-z包含聚合物，优选选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[0681]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含脂肪酸衍生物。优选的脂肪酸衍生物是wo 2005/027978 a2和wo 2014/060512 a1中所公开的那些，通过引用将这些文献合并入本文。
[0682]
在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含蛋白质。优选的蛋白质选自：us 2012/0035101 a1中所述的绒毛膜促性腺激素的羧基-末端肽，通过引用将该文献合并入本文；白蛋白；wo 2011123813 a2中所述的xtne序列，通过引用将该文献合并入本文；wo2011/144756a1中所述的脯氨酸/丙氨酸无规卷曲序列，通过引用将该文献合并入本文；wo2008/155134a1和wo 2013/024049 a1中所述的脯氨酸/丙氨酸/丝氨酸无规卷曲序列，通过引用将该文献合并入本文；和fc融合蛋白。
[0683]
在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是聚肌氨酸。
[0684]
在另一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含聚(n-甲基甘氨酸)。
[0685]
在一个特别优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团。
[0686]
在一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含一个无规卷曲蛋白质原子团。
[0687]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含两个无规卷曲蛋白质原子团。
[0688]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含三个无规卷曲蛋白质原子团。
[0689]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含四个无规卷曲蛋白质原子团。
[0690]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含五个无规卷曲蛋白质原子团。
[0691]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含六个无规卷曲蛋白质原子团。
[0692]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含七个无规卷曲蛋白质原子团。
[0693]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含八个无规卷曲蛋白质原子团。
[0694]
优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团包含至少25个氨基酸残基和至多2000个氨基酸。甚至更优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团包含至少30个氨基酸残基和至多1500个氨基酸残基。甚至更优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团包含至少50个氨基酸残基和至多500个氨基酸残基。
[0695]
在优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团，其中形成所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸总数的至少80％、优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少98％、最优选至少99％选自丙氨酸和脯氨酸。甚至更优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸残基总数的至少10％、但少于75％、优选少于65％是脯氨酸残基。优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团如wo 2011/144756 a1中所述，通过引用将该文献的全部内容合并入本文。甚至更优选地，-z包含至少一个选自以下的原子团：wo2011/144756中所公开的seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4、seq id no:5、seq id no:6、seq id no:7、seq id no:8、seq id no:9、seq id no:10、seq id no:11、seq id no:12、seq id no:13、seq id no:14、seq id no:15、seq id no:16、seq id no:17、seq id no:51和seq id no:61，通过引用将该文献合并入本文。包含所述含有丙氨酸和脯氨酸的无规卷曲蛋白质的原子团称为“pa”或“pa原子团”。
[0696]
因此，式(ia)或(ib)的-z包含pa原子团。
[0697]
在一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团，其中形成所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸总数的至少80％、优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少98％、最优选至少99％选自丙氨酸、丝氨酸和脯氨酸。甚至更优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸残基总数的至少4％、但少于40％是脯氨酸残基。优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团如wo 2008/155134 a1中所述，通过引用将该文献的全部内容合并入本文。甚至更优选地，式(ia)或(ib)的-z包含至少一个选自以下的原子团：wo 2008/155134 a1中所公开的seq id no:2、seq id no:4、seq id no:6、seq id no:8、seq id no:10、seq id no:12,seq id no:14、seq id no:16、seq id no:18、seq id no:20、seq id no:22、seq id no:24、seq id no:26、seq id no:28、seq id no:30、seq id no:32、seq id no:34、seq id no:36、seq id no:40、seq id no:42、seq id no:44、seq id no:46、seq id no:50、seq id no:52、seq id no:54和seq id no:56，通过引用将该文献合并入本文。包含所述包含丙氨酸、丝氨酸和脯氨酸的无规卷曲蛋白质原子团的原子团称为“pas”或“pas原子团”。
[0698]
因此，式(ia)或(ib)的-z包含pas原子团。
[0699]
在一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团，其中形成所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸总数的至少80％、优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少98％、最优选至少99％选自丙氨酸、丝
氨酸和脯氨酸。包含所述包含丙氨酸、丝氨酸和脯氨酸的无规卷曲蛋白质原子团的原子团称为“pag”或“pag原子团”。
[0700]
因此，式(ia)或(ib)的-z包含pag原子团。
[0701]
在一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团，其中形成所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸总数的至少80％、优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少98％、最优选至少99％选自脯氨酸和甘氨酸。包含所述包含脯氨酸和甘氨酸的无规卷曲蛋白质原子团的原子团称为“pg”或“pg原子团”。
[0702]
优选地，所述pg原子团包含式(a-0)的原子团：
[0703]
[(gly)
p-pro-(gly)q]r(a-0)；
[0704]
其中
[0705]
p选自0、1、2、3、4和5；
[0706]
q选自0、1、2、3、4和5；
[0707]
r是10-1000且包括10和1000本身的范围中的整数；
[0708]
条件是p和q中至少一个至少是1；
[0709]
优选地，式(a-0)的p选自1、2和3。
[0710]
优选地，式(a-0)的q选自0、1和2。
[0711]
甚至更优选地，pg原子团包含seq id:no 97的序列:
[0712]
ggpggpgpggpggpgpggpg。
[0713]
甚至更优选地，pg原子团包含式(a-0-a)的序列：
[0714]
(ggpggpgpggpggpgpggpg)v(a-0-a),
[0715]
其中
[0716]
v是1-50且包括1和50本身的范围中的整数。
[0717]
应当理解，式(a-0-a)的序列包含seq id no:97的序列的v复制(replicate)。
[0718]
因此，式(ia)或(ib)的-z包含pg原子团。
[0719]
在一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含无规卷曲蛋白质原子团，其中形成所述无规卷曲蛋白质原子团的氨基酸总数的至少80％、优选至少85％、甚至更优选至少90％、甚至更优选至少95％、甚至更优选至少98％、最优选至少99％选自丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸和脯氨酸。优选地，所述无规卷曲蛋白质原子团如wo 2010/091122 a1中所述，通过引用将该文献合并入本文。甚至更优选地，式(ia)或(ib)的-z包含至少一个选自以下的原子团：wo2010/091122a1中所公开的seq id no:182、seq id no:183、seq id no:184；seq id no:185、seq id no:186、seq id no:187、seq id no:188、seq id no:189、seq id no:190、seq id no:191、seq id no:192、seq id no:193、seq id no:194、seq id no:195、seq id no:196、seq id no:197、seq id no:198、seq id no:199、seq id no:200、seq id no:201、seq id no:202、seq id no:203、seq id no:204、seq id no:205、seq id no:206、seq id no:207、seq id no:208、seq id no:209、seq id no:210、seq id no:211、seq id no:212、seq id no:213、seq id no:214、seq id no:215、seq id no:216、seq id no:217、seq id no:218、seq id no:219、seq id no:220、seq id no:221、seq id no:759、seq id no:760、seq id no:761、seq id no:762、seq id no:763、seq id no:
764、seq id no:765、seq id no:766、seq id no:767、seq id no:768、seq id no:769、seq id no:770、seq id no:771、seq id no:772、seq id no:773、seq id no:774、seq id no:775、seq id no:776、seq id no:777、seq id no:778、seq id no:779、seq id no:1715、seq id no:1716、seq id no:1718、seq id no:1719、seq id no:1720、seq id no:1721和seq id no:1722，通过引用将该文献合并入本文。包含所述包含丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸和脯氨酸的无规卷曲蛋白质原子团的原子团按照wo 2010/091122 a1中的命名方式称为“xten”或“xten原子团”。
[0720]
因此，式(ia)或(ib)的-z包含xten原子团。
[0721]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是基于透明质酸的聚合物。
[0722]
在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是wo 2013/024047 a1中公开的载体，通过引用将该文献合并入本文。
[0723]
在另一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是wo 2013/024048 a1中公开的载体，通过引用将该文献合并入本文。
[0724]
在另一个优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是基于peg的聚合物。甚至更优选地，-z是支化或多臂的基于peg的聚合物。
[0725]
在优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是支化聚合物。在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是具有1、2、3、4、5或6个支化点的支化聚合物。优选地，式(ia)或(ib)的-z是具有1、2或3个支化点的支链聚合物。在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是具有1个支化点的支化聚合物。在另一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是具有2个支化点的支化聚合物。在另一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是具有3个支化点的支化聚合物。
[0726]
支化点优选选自-n《、-ch《和》c《。
[0727]
优选地，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z是基于peg的。
[0728]
在一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z具有5kda-500kda且包括5kda和500kda本身的范围中、更优选10kda-250da且包括10kda和250da本身的范围中、甚至更优选10kda-150kda且包括10kda和150kda本身的范围中、甚至更优选12kda-100kda且包括12kda和100kda本身的范围中、最优选15kda-80kda且包括15kda和80kda本身的范围中的分子量。
[0729]
优选地，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z具有10kda-80kda且包括10kda和80kda本身的范围中的分子量。在一个实施方案中，分子量为约10kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约20kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约30kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约40kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约50kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约60kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约70kda。在另一个实施方案中，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约80kda。最优选地，所述式(ia)或(ib)的支化原子团-z的分子量为约40kda。
[0730]
申请人发现，原子团-l
1-l
2-z的n-末端连接在nep-稳定性方面比内部位点的连接显著更有效，并且在nep-稳定性方面最低效连接位点在cnp原子团的环上。然而，申请人令人惊讶地发现，在nep-稳定性方面与环连接的这种缺点可以通过使用具有至少10kda、例如
至少12kda、例如至少15kda、例如至少18kda、例如至少20kda、例如至少24kda、例如至少25kda、例如至少27kda、例如至少30kda的分子量的支化原子团-z来弥补。优选地，所述支化原子团-z具有不超过500kda、优选不超过250kda、优选不超过200da、优选不超过150kda、最优选不超过100kda的分子量。最优选地，所述支化原子团-z具有约40kda的分子量。因此，在cnp原子团的环部分上使用所述支化原子团-z不仅导致nep-稳定性增加，而且合并了增加的nep-稳定性与减少的与连接至环相关的npr-b结合。
[0731]
令人惊讶地发现，即使环原子团参与npr-c结合，5kda载体与环原子团的连接对npr-c亲和性没有显著影响。此外，还令人惊讶地发现，与环原子团连接的4
×
10kda载体、即具有4个10kda臂的支化载体在降低npr-c亲和性方面比2
×
20kda载体、即具有2个20kda臂的支化载体更有效，即使总分子量相同也是如此。因此，不仅与环原子团连接的载体的总分子量、而且载体的特定支化模式都影响npr-c结合亲和性。
[0732]
这一发现还得到了用仍表现出高npr-c亲和性的具有不同支化模式的4-臂40kda载体测定的npr-c亲和性的支持。
[0733]
总之，令人惊讶地发现，用与环状原子团连接的多分支载体能有效地降低npr-c亲和力，所述载体靠近cnp原子团、例如距离cnp原子团少于300个原子、优选距离cnp原子团200个原子、甚至更优选距离cnp原子团100个原子、甚至更优选距离cnp原子团小于50个原子、甚至更优选距离cnp原子团小于25个原子、最优选距离cnp原子团小于10个原子具有第一个分支点。
[0734]
甚至更优选地，一个或多个另外的分支点位于距离cnp原子团小于500个原子内，甚至更优选距离cnp原子团300个原子，甚至更优选距离cnp原子团小于200个原子，甚至更优选距离cnp原子团少于100个原子，甚至更优选距离cnp原子团小于75个原子，甚至更优选距离cnp原子团小于50个原子，甚至更优选距离cnp原子团小于40个原子，最优选距离cnp原子团小于35个原子。
[0735]
此外还发现，所述分支模式有利于cnp原子团的体内稳定性，即针对蛋白水解降解的保护作用。令人惊讶地发现，与4
×
10kda载体相比，当使用2
×
20kda载体时，n-末端降解更强。同样，使用具有不同分支模式的4-臂40kda载体表现出甚至更强的n-末端降解。
[0736]
优选地，-z或-z'包含原子团
[0737]
在一个同等优选的实施方案中，-z或-z'包含酰胺键。
[0738]
在一个实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含式(a)的原子团
[0739][0740]
其中
[0741]
虚线表示与-l
2-连接或与-z的其余部分连接；
[0742]
bpa是选自-n《、-cr《和》c《的支化点；
[0743]-r选自-h和c
1-6
烷基；
[0744]
如果bpa是-n《或-cr《，则a是0，并且如果bpa是》c《，则a是1；-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
和-sa”’-彼此独立地是化学键或选自c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，并且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r2)-、-s(o)2n(r2)-、-s(o)n(r2)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r2)s(o)2n(r
2a
)-、-s-、-n(r2)-、-oc(or2)(r
2a
)-、-n(r2)c(o)n(r
2a
)-和-oc(o)n(r2)-；
[0745]-t-各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中-t-各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代；
[0746]-r1各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0747]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-r
3b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0748]-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地是聚合的原子团。
[0749]
任选地，式(a)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0750]
在一个实施方案中，式(a)的bpa是-n《。
[0751]
在另一个实施方案中，式(a)的bpa是-cr《。优选地，-r是-h。因此，式(a)的a优选是0。
[0752]
在另一个实施方案中，式(a)的bpa是》c《。
[0753]
在一个实施方案中，式(a)的-s
a-是化学键。
[0754]
在另一个实施方案中，式(a)的-s
a-选自c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，所述c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r4)-、-s(o)2n(r4)-、-s(o)n(r4)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r4)s(o)2n(r
4a
)-、-s-、-n(r4)-、-oc(or4)(r
4a
)-、-n(r4)c(o)n(r
4a
)-和-oc(o)n(r4)-；其中-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-s
a-选自甲基、乙基、丙基、丁基，它们任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-o-、-c(o)-和-c(o)n(r4)-。
[0755]
在一个实施方案中，式(a)的-sa’-是化学键。
[0756]
在另一个实施方案中，式(a)的-sa’-选自c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，所述c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r4)-、-s(o)2n(r4)-、-s(o)n(r4)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r4)s(o)2n(r
4a
)-、-s-、-n(r4)-、-oc(or4)(r
4a
)-、-n(r4)c(o)n(r
4a
)-和-oc(o)n(r4)-；其中-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-sa’-选自甲基、乙基、丙基、丁基，它们任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-o-、-c(o)-和-c(o)n(r4)-。
[0757]
在一个实施方案中，式(a)的-s
a”‑
是化学键。
[0758]
在另一个实施方案中，式(a)的-s
a”‑
选自c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，所述c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r4)-、-s(o)2n(r4)-、-s(o)n(r4)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r4)s(o)2n(r
4a
)-、-s-、-n(r4)-、-oc(or4)(r
4a
)-、-n(r4)c(o)n(r
4a
)-和-oc(o)n(r4)-；其中-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-s
a”‑
选自甲基、乙基、丙基、丁基，它们任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-o-、-c(o)-和-c(o)n(r4)-。
[0759]
在一个实施方案中，式(a)的-sa”’-是化学键。
[0760]
在另一个实施方案中，式(a)的-sa”’-选自c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基，所述c
1-10
烷基、c
2-10
烯基和c
2-10
炔基任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r4)-、-s(o)2n(r4)-、-s(o)n(r4)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r4)s(o)2n(r
4a
)-、-s-、-n(r4)-、-oc(or4)(r
4a
)-、-n(r4)c(o)n(r
4a
)-和-oc(o)n(r4)-；其中-r4和-r
4a
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。优选地，式(a)的-sa”’-选自甲基、乙基、丙基、丁基，它们任选地被一个或多个选自以下的化学基团中断：-o-、-c(o)-和-c(o)n(r4)-。
[0761]
优选地，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[0762]
优选地，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地具有5kda-50kda且包括5kda和50kda本身的范围中的分子量，更优选具有5kda-40kda且包括5kda和40kda本身的范围中、甚至更优选7.5kda-35kda且包括7.5kda和35kda本身的范围中、甚至更优选7.5kda-30kda且包括7.5kda和30kda本身的范围中、甚至更优选10kda-30kda且包括10kda和30kda本身的范围中
的分子量。
[0763]
在一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约5kda的分子量。
[0764]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约7.5kda的分子量。
[0765]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约10kda的分子量。
[0766]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约12.5kda的分子量。
[0767]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约15kda的分子量。
[0768]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
具有约20kda的分子量。
[0769]
更优选地，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地包含基于peg的原子团。甚至更优选地，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地包含含有至少20％peg、甚至更优选至少30％peg、甚至更优选至少40％peg、甚至更优选至少50％peg、甚至更优选至少60％peg、甚至更优选至少70％peg、甚至更优选至少80％peg、最优选至少90％peg的基于peg的原子团。
[0770]
在一个同等优选的实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
独立地包含蛋白质原子团，更优选无规卷曲蛋白质原子团，最优选选自pa、pas、pag、pg和xten原子团的无规卷曲蛋白质原子团。
[0771]
在一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
是pa原子团。
[0772]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
是pas原子团。
[0773]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
是pag原子团。
[0774]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
是pg原子团。
[0775]
在另一个实施方案中，式(a)的-p
a’、-p
a”和-pa”’
是xten原子团。
[0776]
在一个实施方案中，-z包含一个式(a)的原子团。
[0777]
在另一个实施方案中，-z包含两个式(a)的原子团。
[0778]
在另一个实施方案中，-z包含三个式(a)的原子团。
[0779]
在另一个实施方案中，-z包含四个式(a)的原子团。
[0780]
在另一个实施方案中，-z包含五个式(a)的原子团。
[0781]
在另一个实施方案中，-z包含六个式(a)的原子团。
[0782]
在优选的实施方案中，-z包含两个式(a)的原子团。
[0783]
在优选的实施方案中，-z包含式(b)的原子团
[0784][0785]
其中
[0786]
虚线表示与-l
2-连接或与-z的其余部分连接；
[0787]
b1选自0、1、2、3、4、5、6、7和8；
[0788]
b2选自1、2、3、4、5、6、7和8；
[0789]
b3是150-1000且包括150和1000本身的范围中的整数；优选150-500且包括150和500本身的范围中的整数；最优选200-460且包括200和460本身的范围中的整数；且
[0790]
b4是150-1000且包括150和1000本身的范围中的整数；优选150-500且包括150和500本身的范围中的整数；最优选200-460且包括200和460本身的范围中的整数。
[0791]
任选地，式(b)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0792]
优选地，式(b)的b3和b4是相同的整数。
[0793]
在一个优选的实施方案中，b3和b4均是200-250的整数，最优选地，式(b)的b3和b4约是225。
[0794]
在另一个实施方案中，b3和b4均是400-500的整数，最优选地，式(b)的b3和b4约是450。
[0795]
优选地，式(b)的b1选自0、1、2、3和4。更优选地，式(b)的b1选自1、2和3。最优选地，式(b)的b1是2。
[0796]
优选地，式(b)的b2选自0、1、2、3、4和5。更优选地，式(b)的b2选自2、3和4。最优选地，式(b)的b2是3。
[0797]
在一个特别优选的实施方案中，式(b)的b1是2，式(b)的b2是3，且b3和b4均是约450。
[0798]
在另一个特别优选的实施方案中，式(b)的b1是2，式(b)的b2是3，且b3和b4均是约225。
[0799]
在一个实施方案中，-z包含一个(b)的原子团。
[0800]
在另一个实施方案中，-z包含两个式(b)的原子团。
[0801]
在另一个实施方案中，-z包含三个式(b)的原子团。
[0802]
在另一个实施方案中，-z包含四个式(b)的原子团。
[0803]
在另一个实施方案中，-z包含五个式(b)的原子团。
[0804]
在另一个实施方案中，-z包含六个式(b)的原子团。
[0805]
在优选的实施方案中，-z包含两个式(b)的原子团。
[0806]
在一个甚至更优选的实施方案中，-z包含式(c)的原子团
[0807][0808]
其中
[0809]
虚线表示与-l
2-连接或与-z的其余部分连接；
[0810]
c1和c2独立地是150-500且包括150和500本身的范围中的整数；
[0811]
优选200-460且包括200和460本身的范围中的整数。
[0812]
任选地，式(c)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0813]
优选地，式(c)的c1和c2是相同的整数。
[0814]
在一个优选的实施方案中，式(c)的c1和c在200-250且包括200和250本身的范围，最优选是约225。在另一个实施方案中，式(c)的c1和c2在400-500且包括400和500本身的范围中，最优选是约450。
[0815]
在优选的实施方案中，原子团-z是包含至少10％peg的支化的基于peg的聚合物，
具有一个支化点和两个基于peg的聚合物臂，并且具有约40kda的分子量。因此，两个基于peg的聚合物臂各自具有约20kda的分子量。优选地，支化点是-ch《。
[0816]
在一个实施方案中，-z包含一个式(c)的原子团。
[0817]
在另一个实施方案中，-z包含两个式(c)的原子团。
[0818]
在另一个实施方案中，-z包含三个式(c)的原子团。
[0819]
在另一个实施方案中，-z包含四个式(c)的原子团。
[0820]
在另一个实施方案中，-z包含五个式(c)的原子团。
[0821]
在另一个实施方案中，-z包含六个式(c)的原子团。
[0822]
在优选的实施方案中，-z包含两个式(c)的原子团。
[0823]
在一个优选的实施方案中，原子团-z是式(d)的原子团
[0824][0825]
其中
[0826]
虚线表示与-l
2-连接；
[0827]-z
b-选自c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，并且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r2)-、-s(o)2n(r2)-、-s(o)n(r2)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r2)s(o)2n(r
2a
)-、-s-、-n(r2)-、-oc(or2)(r
2a
)-、-n(r2)c(o)n(r
2a
)-和-oc(o)n(r2)-；
[0828]
–
t-各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中-t-各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代；
[0829]-r1各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0830]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-r
3b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0831]
且
[0832]-za是
[0833][0834]
其中
[0835]
bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”、-pa”’
和a如针对式(a)所定义的那样被使
用。
[0836]
任选地，式(d)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0837]
式(d)的bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”、-pa”’
的优选实施方案如上文针对式(a)所定义。
[0838]
优选地，式(d)的-za是式(b)的原子团。b1、b2、b3和b4的优选实施方案如针对式(b)所述的那样。
[0839]
在一个甚至更优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的原子团-z是式(e)的原子团，
[0840][0841]
其中
[0842]
虚线表示与-l
2-连接；
[0843]
e选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15；且
[0844]-za是
[0845][0846]
其中
[0847]
b1、b2、b3和b4如针对式(b)所定义的那样被使用。
[0848]
任选地，式(e)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0849]
式(e)的b1、b2、b3和b4的优选实施方案如上文针对式(b)所定义。
[0850]
在一个实施方案中，式(e)的e是1。在另一个实施方案中，式(e)的e是2。在另一个实施方案中，式(e)的e是3。在另一个实施方案中，式(e)的e是4。在另一个实施方案中，式(e)的e是5。在另一个实施方案中，式(e)的e是6。在另一个实施方案中，式(e)的e是7。在另一个实施方案中，式(e)的e是8。在另一个实施方案中，式(e)的e是9。在另一个实施方案中，式(e)的e是10。在另一个实施方案中，式(e)的e是11。在另一个实施方案中，式(e)的e是12。在另一个实施方案中，式(e)的e是13。在另一个实施方案中，式(e)的e是14。在另一个实施方案中，式(e)的e是15。
[0851]
优选地，式(e)的e选自2、3、4、5、6、7、8和9。甚至更优选地，式(e)的e选自3、4、5和6。最优选地，式(e)的e是5。
[0852]
优选地，式(e)的e是5，式(e)的b1是2，式(e)的b2是3，且式(e)的b3和b4均是约450。
[0853]
在一个同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的原子团-z是式(e-i)或(e-i’)的
原子团：
[0854][0855]
其中
[0856]
虚线表示与-l
2-连接；
[0857]
e选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14和15；
[0858]-za是
[0859][0860]
其中
[0861]
b1、b2、b3和b4如针对式(b)所定义的那样被使用。
[0862]
式(e-i)和(e-i’)的b1、b2、b3和b4的优选实施方案如上文针对式(b)所定义。
[0863]
式(e-i)和(e-i’)的e的优选实施方案如针对式(e)所述。
[0864]
优选地，式(e-i)和(e-i’)的b1是2，式(e-i)和(e-i’)的b2是3，且式(e-i)和(e-i’)的b3和b4均是约450。
[0865]
在优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是式(e-i)的原子团。
[0866]
在另一个实施方案中，原子团-z是包含至少10％peg的支化的基于peg的聚合物，具有支化点和4个基于peg的聚合物臂，并且具有约40kda的分子量。因此，所述4个基于peg的聚合物臂各自具有约10kda的分子量。优选地，3个支化点各自是-ch《。
[0867]
在优选的实施方案中，原子团-z是式(f)的原子团
[0868][0869]
其中
[0870]
虚线表示与-l
2-连接；
[0871]
bpf是选自-n《、-cr《和》c《的支化点；
[0872]-r选自-h和c
1-6
烷基；
[0873]
如果bpf是-n《或-cr《，则f是0；如果bpf是》c《，则f是1；
[0874]-s
f-、-sf’-、-s
f”‑
和-sf”’-独立地是化学键或独立地选自c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r2)-、-s(o)2n(r2)-、-s(o)n(r2)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r2)s(o)2n(r
2a
)-、-s-、-n(r2)-、-oc(or2)(r
2a
)-、-n(r2)c(o)n(r
2a
)-和-oc(o)n(r2)-；
[0875]-t-各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中-t-各自独立地任选地被一个或多肽相同或不同的-r1取代；
[0876]
r1各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0877]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-r
3b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0878]
且
[0879]-z
a’、-z
a”和-za”’
独立地是
[0880][0881]
其中
[0882]
bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”、-pa”’
和a如针对式(a)所定义的那样被使用。
[0883]
任选地，式(f)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0884]
式(f)的bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”和-pa”’
的优选实施方案如上文针对式(a)所定义。
[0885]
优选地，式(f)的bpf是-cr《，且r是0。优选地，-r是-h。
[0886]
优选地，式(f)的-s
f-是化学键。
[0887]
优选地，式(f)的-z
a’、-z
a”和-za”’
具有相同的结构。优选地，式(f)的-z
a’、-z
a”和-za”’
是式(b)的原子团。
[0888]
b1、b2、b3和b4的优选实施方案如针对式(b)所述。
[0889]
优选地，式(f)的-s
f-是化学键，式(f)的bpa是-cr《，其中-r是-h。甚至更优选地，式
(f)的-s
f-是化学键，式(f)的bpa是-cr《，其中-r是-h，且式(f)的-z
a’、-z
a”和-za”’
是式(b)的原子团。
[0890]
甚至更优选地，-z是式(g)的原子团
[0891][0892]
其中
[0893]
虚线表示与-l
2-连接；
[0894]-s
g-、-sg’-和
–sg”‑
独立地选自c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或个相同或不同的-r1取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r2)-、-s(o)2n(r2)-、-s(o)n(r2)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r2)s(o)2n(r
2a
)-、-s-、-n(r2)-、-oc(or2)(r
2a
)-、-n(r2)c(o)n(r
2a
)-和-oc(o)n(r2)-；
[0895]-t-各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中-t-各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代；
[0896]
r1各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0897]-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-r
3b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0898]
且
[0899]-za和-z
a’独立地是
[0900]
[0901]
其中
[0902]
bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”、-pa”’
和a如针对式(a)所定义的那样被使用。
[0903]
任选地，式(g)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0904]
式(g)的bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”和-pa”’
的优选实施方案如上文针对式(a)所定义。
[0905]
优选地，式(g)的-s
g-选自c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，它们任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，
[0906]
其中
[0907]-r1选自卤素、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0908]-r3、-r
3a
和-r
3b
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。
[0909]
甚至更优选地，式(g)的-s
g-选自c
1-6
烷基。
[0910]
优选地，式(g)的-sg’-选自c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，它们任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，
[0911]
其中
[0912]-r1选自卤素、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0913]-r3、-r
3a
和-r
3b
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。
[0914]
甚至更优选地，式(g)的-sg’-选自c
1-6
烷基。
[0915]
优选地，式(g)的-s
g”‑
选自c
1-6
烷基、c
2-6
烯基和c
2-6
炔基，它们任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，
[0916]
其中
[0917]-r1选自卤素、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；且
[0918]-r3、-r
3a
和-r
3b
独立地选自-h、甲基、乙基、丙基和丁基。
[0919]
甚至更优选地，式(g)的-s
g”‑
选自c
1-6
烷基。
[0920]
优选地，式(g)的-za和-z
a’具有相同的结构。优选地，式(g)的-za和-z
a’是式(b)原子团。
[0921]
在供替代选择的甚至更优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z是式(g-i)的原子团
[0922][0923]
其中
[0924]
虚线表示与-l
2-连接；
[0925]-s
g-、-sg’-和-s
g”‑
独立地选自c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基；其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代，且其中c
1-50
烷基、c
2-50
烯基和c
2-50
炔基任选地被一个或多个选自以下的基团中断：-t-、-c(o)o-、-o-、-c(o)-、-c(o)n(r2)-、-s(o)2n(r2)-、-s(o)n(r2)-、-s(o)
2-、-s(o)-、-n(r2)s(o)2n(r
2a
)-、-s-、-n(r2)-、-oc(or2)(r
2a
)-、-n(r2)c(o)n(r
2a
)-和-oc(o)n(r2)-；
[0926]-t-各自独立地选自苯基、萘基、茚基、茚满基、1,2,3,4-四氢化萘基、c
3-10
环烷基、3-至10-元杂环基、8-至11-元杂双环基、8-至30-元碳多环基和8-至30-元杂多环基；其中-t-各自独立地任选地被一个或多个相同或不同的-r1取代；
[0927]
r1各自独立地选自卤素、-cn、氧代(＝o)、-coor3、-or3、-c(o)r3、-c(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2n(r3r
3a
)、-s(o)n(r3r
3a
)、-s(o)2r3、-s(o)r3、-n(r3)s(o)2n(r
3ar3b
)、-sr3、-n(r3r
3a
)、-no2、-oc(o)r3、-n(r3)c(o)r
3a
、-n(r3)s(o)2r
3a
、-n(r3)s(o)r
3a
、-n(r3)c(o)or
3a
、-n(r3)c(o)n(r
3ar3b
)、-oc(o)n(r3r
3a
)和c
1-6
烷基；其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；-r2、-r
2a
、-r3、-r
3a
和-r
3b
各自独立地选自-h和c
1-6
烷基，其中c
1-6
烷基任选地被一个或多个相同或不同的卤素取代；
[0928]-y
a1-和-y
a1
‘-是
[0929][0930]
且
[0931]-za和-za‘
独立地是
[0932][0933]
其中
[0934]
bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”、-pa”’
和a如针对式(a)所定义的那样被使用。
[0935]
任选地，式(g-i)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0936]
优选地，式(g-i)的-y
a1-和-y
a1
‘-均是其中用星号标记的虚线分别与-za或-z
a’连接。
[0937]
式(g-i)的bpa、-s
a-、-sa’-、-s
a”‑
、-sa”’-、-p
a’、-p
a”和-pa”’
的优选实施方案如上文针对式(a)所定义。
[0938]
式(g-i)的-s
g-、-sg’-和-s
g”‑
的优选实施方案如针对式(g)所定义。
[0939]
优选地，式(g-i)的-za和-za‘
具有相同的结构。优选地，式(g-i)的-za和-z
a’是式(b)的原子团。b1、b2、b3和b4的优选实施方案如针对式(b)所述。
[0940]
甚至更优选地，-z是式(h)的原子团
[0941][0942]
其中
[0943]
虚线表示与-l
2-连接；且
[0944]-zc各自是原子团
[0945][0946]
其中
[0947]
c1各自独立地是约200-250的整数。
[0948]
任选地，式(h)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0949]
优选地，式(h)的两个c1相同。
[0950]
优选地，式(h)的两个c1均是约225。
[0951]
甚至更优选地，式(ia)或(ib)的-z是式(h-a)的原子团
[0952][0953]
其中
[0954]
虚线表示与-l
2-连接；
[0955]
k各自彼此独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[0956]-y
a1-和-y
a1
‘-是
[0957][0958]
且
[0959]-zc各自是原子团
[0960][0961]
其中
[0962]
c1各自独立地是约200-250的整数。
[0963]
任选地，式(h-a)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0964]
优选地，式(h-a)的k各自独立地选自2、3、4、5、6和7。优选地，式(h-a)的两个k相同。
[0965]
优选地，式(h-a)的两个c1相同。
[0966]
优选地，式(h-a)的两个c1均是约225。
[0967]
优选地，式(h-a)的-y
a1-和-y
a1
‘-均是其中用星号标记的虚线是与-zc连接。
[0968]
在甚至更优选的实施方案中，原子团-z是式(h-i)的原子团
[0969][0970]
其中
[0971]
虚线表示与-l
2-连接；且
[0972]-zc各自是原子团
[0973][0974]
c1各自独立地是200-250的整数。
[0975]
任选地，式(h-i)的原子团被一个或多个取代基取代。
[0976]
优选地，式(h-i)的两个c1相同。
[0977]
优选地，式(h-i)的两个c1均是约225。
[0978]
在供替代选择的甚至更优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的原子团-z是式(h-ia)的原子团
[0979][0980]
其中
[0981]
虚线表示与-l
2-连接；
[0982]
k各自彼此独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[0983]-y
a1-和-y
a1
‘-是
[0984][0985]
且
[0986]-zc各自是原子团
[0987][0988]
c1各自独立地是200-250的整数。
[0989]
优选地，式(h-ia)的k各自独立地选自2、3、4、5、6和7。优选地，式(h-ia)的两个k相同。
[0990]
优选地，式(h-ia)的两个c1相同。
[0991]
优选地，式(h-ia)的两个c1均是约225。
[0992]
优选地，式(h-ia)的-y
a1-和-y
a1
’-均是其中用星号标记的虚线与-zc连接。
[0993]
在同等优选的实施方案中，式(ia)或(ib)的-z包含选自以下的原子团：
[0994]
[0995]
[0996][0997]
其中
[0998]
虚线表示与-l
2-连接；
[0999]
s1、s2、s3、s4、s5、s6、s7、s8、s9、s10、s11、s12、s13、s14和s15彼此独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10；
[1000]-x
d1
、-x
d2
、-x
d3
和-x
d4
彼此独立地选自-oh、-sh和-nr
g1rg2
；优选-oh；
x
e1
、-x
e2
、-x
e3
和-x
e4
是-h；且式(j-iii)的s1、s2和s3是4。
[1015]
优选地，式(j-iv)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
、-x
f4
、-x
f5
和-x
f6
是-h；式(j-iv)的s1、s2、s3、s4、s5、s6和s7选自1、2、3、4、5、6和7；-y
d1-和-y
d2-选自
[1016]
和。在甚至更优选的实施方案中，式(j-iv)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
、-x
f4
、-x
f5
和-x
f6
是-h；式(j-iv)的s1是3，式(j-iv)的s2是5，式(j-iv)的s3是2，式(j-iv)的s4是4，式(j-iv)的s5是5，式(j-iv)的s6是2，且式(j-iv)的s7是4；且式(j-iv)的-y
d1-和-y
d2-是。在同等优选的实施方案中，式(j-iv)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
、-x
f4
、-x
f5
和-x
f6
是-h；式(j-iv)的s1是3，式(j-iv)的s2是5，式(j-iv)的s3是2，式(j-iv)的s4是4，式(j-iv)的s5是5，式(j-iv)的s6是2，且式(j-iv)的s7是4；且式(j-iv)的-y
d1-和-y
d2-是
[1017][1018]
其中用星号表标记的虚线分别朝向于-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
，未标记的虚线朝向于-l
2-。
[1019]
优选地，式(j-v)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
和-x
f4
是-h；式(j-v)的s1、s2、s3、s4和s5选自1、2、3、4、5、6和7；式(j-v)的-y
d1-和-y
d2-选自和。在甚至更优选的实施方案中，式(j-v)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
和-x
f4
是-h；式(j-v)的s1是3，式(j-v)的s2是2，式(j-v)的s3是1，式(j-v)的s4是2，且式(j-v)的s5是1；且式(j-v)的-y
d1-和-y
d2-是。在同等优选的实施方案中，式(j-v)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
和-x
f4
是-h；式(j-v)的s1是3，式(j-v)的s2是2，式(j-v)的s3是1，式(j-v)的s4是2，且式(j-v)的s5是1；且式(j-v)的-y
d1-和-y
d2-是
vii)的s6是5，式(j-vii)的s7是2，式(j-vi)的s8是4，式(j-vii)的s9是4，式(j-vii)的s10是5，式(j-vii)的s11是2，式(j-vii)的s12是4，式(j-vii)的s13是5，式(j-vii)的s14是2，且式(j-vii)的s15是4；且式(j-vii)的-y
d1-、-y
d2-、-y
d3-和-y
d4-是在同等优选的实施方案中，式(j-vii)的-x
f1
、-x
f2
、-x
f3
、-x
f4
、-x
f5
、-x
f6
、-x
f7
、-x
f8
、-x
f9
、-x
f10
、-x
f11
、-x
f12
、-x
f13
和-x
f14
是-h；是-h；式(j-vii)的s1是4，式(j-vii)的s2是4，式(j-vii)的s3是5，式(j-vii)的s4是2，式(j-vii)的s5是4，式(j-vii)的s6是5，式(j-vii)的s7是2，式(j-vi)的s8是4，式(j-vii)的s9是4，式(j-vii)的s10是5，式(j-vii)的s11是2，式(j-vii)的s12是4，式(j-vii)的s13是5，式(j-vii)的s14是2，且式(j-vii)的s15是4；且式(j-vii)的-y
d1-、-y
d2-、-y
d3-和-y
d4-是
[1029][1030]
其中用星号标记的虚线分别朝向于-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
，未标记的虚线朝向于-l
2-。
[1031]
优选地，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
具有相同的结构。
[1032]
在一个实施方案中，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
是pa原子团。
[1033]
在另一个实施方案中，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
是pas原子团。
[1034]
在另一个实施方案中，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
是pag原子团。
[1035]
在另一个实施方案中，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
是pg原子团。
[1036]
在另一个实施方案中，式(j-i)、(j-ii)、(j-iii)、(j-iv)、(j-v)、(j-vi)和(j-vii)的-z
d1
、-z
d2
、-z
d3
和-z
d4
是xten原子团。
[1037]
在优选的实施方案中，本发明的cnp激动剂前药是式(iie)
[1038][1039]
其中
[1040]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1041]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1042]
连接,
[1043]
其中
[1044]
c1各自独立地是400-500的整数。
[1045]
优选地，式(iie)的c1是约450。
[1046]
在同等优选的实施方案中，本发明的cnp激动剂前药是式(iie-i)
[1047][1048]
其中
[1049]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1050]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1051]
连接,
[1052]
其中
[1053]
c1各自独立地是400-500的整数。
[1054]
优选地，式(iie-i)的c1是约450。
[1055]
在另一个同等优选的实施方案中，本发明的cnp激动剂前药是式(iie-ii)
[1056][1057]
其中
[1058]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1059]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1060]
连接,
[1061]
其中
[1062]
c1各自独立地是400-500的整数。
[1063]
优选地，式(iie-ii)的c1是约450。
[1064]
优选地，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是cnp原子团，即式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的前药是cnp前药。甚至更优选地，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:24、seq id no:25或seq id no:30的序列的cnp原子团。最优选地，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团cnp。还优选的是，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:20的序列的cnp原子团cnp。还优选的是，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:21的序列的cnp原子团cnp。还优选的是，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:22的序列的cnp原子团cnp。还优选的是，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:23的序列的cnp原子团cnp。还优选的是，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是具有seq id no:30的序列的cnp原子团cnp。
[1065]
在一个实施方案中，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是cnp原子团，其通过cnp的n-末端胺官能团的氮与-l
1-连接。
[1066]
在优选的实施方案中，式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的-d是cnp原子团，其通过cnp
原子团的赖氨酸侧链的胺官能团提供的氮与-l
1-连接。
[1067]
在一个实施方案中，如果cnp原子团是seq id no:24，则所述赖氨酸侧链不是22和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1068]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过9位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1069]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过11位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1070]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过15位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1071]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过16位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1072]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过20位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1073]
在优选的实施方案中，如果cnp原子团是seq id no:24，则所述赖氨酸侧链不是22和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1074]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iie)、(iie-i)和(iie-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1075]
应当理解，上文所提到的半胱氨酸和赖氨酸的位置根据cnp原子团的长度而变化，并且本领域技术人员可毫无困难地鉴别在更长或更短形式的cnp原子团中相应的半胱氨酸和赖氨酸，还应当理解，例如，一些赖氨酸在更短的cnp原子团中可能不存在。还应当理解，作为例如位点导向性诱变的结果，在cnp原子团的非成环部分和/或成环部分中可能存在更多的赖氨酸残基。
[1076]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1077]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1078]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1079]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1080]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，所述cnp部分具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1081]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1082]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，cnp原子团具
有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1083]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1084]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1085]
在一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1086]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1087]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1088]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1089]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1090]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1091]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1092]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1093]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iie-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1094]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)
[1095]
[1096]
其中
[1097]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1098]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1099][1100]
其中
[1101]-za各自是
[1102][1103]
其中
[1104]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1105]
优选地，式(iif)的c1各自是约225。
[1106]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)
[1107][1108]
其中
[1109]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1110]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1111][1112]
其中
[1113]-za各自是
[1114][1115]
其中
[1116]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1117]
优选地，式(iif-i)的c1各自是约225。
[1118]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)
[1119][1120]
其中
[1121]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；且
[1122]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接
[1123][1124]
其中
[1125]-za各自是
[1126][1127]
其中
[1128]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1129]
优选地，式(iif-ii)的c1各自是约225。
[1130]
优选地，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的-d是cnp原子团，即式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的前药是cnp前药。甚至更优选地，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的-d是具有seq id no:24、seq id no:25或seq id no:30的序列的cnp原子团。最优选地，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团cnp。
[1131]
在另一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:30的序列。
[1132]
在另一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:20的序列。
[1133]
在另一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:21的序列。
[1134]
在另一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:22的序列。
[1135]
在另一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:23的序列。
[1136]
在一个实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的-d是cnp原子团，其通过cnp的n-末端胺官能团的氮与-l
1-连接。
[1137]
在优选的实施方案中，式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的-d是cnp原子团，其通过cnp原子团的赖氨酸侧链的胺官能团提供的氮与-l
1-连接。
[1138]
在一个实施方案中，如果cnp原子团是seq id no:24，则所述赖氨酸侧链不是22位和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1139]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过9位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1140]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过11位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1141]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过15位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1142]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过16位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1143]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过20位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1144]
在优选的实施方案中，如果cnp原子团是seq id no:24，则所述赖氨酸侧链是22位和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1145]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iif)、(iif-i)和(iif-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1146]
应当理解，上文所提到的半胱氨酸和赖氨酸的位置根据cnp原子团的长度而变化，并且本领域技术人员可毫无困难地鉴别在更长或更短形式的cnp原子团中相应的半胱氨酸和赖氨酸，还应当理解，例如，一些赖氨酸在更短的cnp原子团中可能不存在。还应当理解，作为例如位点导向性诱变的结果，在cnp原子团的非成环部分和/或成环部分中可能存在更多的赖氨酸残基。
[1147]
在一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1148]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1149]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1150]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1151]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:20的序列的cnp原子团并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1152]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1153]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1154]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:21的序列的cnp原子团并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1155]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1156]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1157]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:22的序列的cnp原子团并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1158]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1159]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1160]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:23的序列的cnp原子团并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1161]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1162]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1163]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif)，其中c1是约225，-d是具有seq id no:30的序列的cnp原子团并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1164]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1165]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii)，其中c1是约225，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1166]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif’)
[1167][1168]
其中
[1169]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1170]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1171][1172]
其中
[1173]
za各自是
[1174][1175]
其中
[1176]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1177]
优选地，式(iif’)的c1各自是约225。
[1178]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-i’)
[1179][1180]
其中
[1181]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1182]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1183][1184]
其中
[1185]
za各自是
[1186][1187]
其中
[1188]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1189]
优选地，式(iif-i’)的c1各自是约225。
[1190]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif-ii’)
[1191][1192]
其中
[1193]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1194]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1195][1196]
其中
[1197]
za各自是
[1198][1199]
其中
[1200]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1201]
优选地，式(iif-ii’)的c1各自是约225。
[1202]
在同等优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)
[1203][1204]
其中
[1205]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[1206]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1207]
用星号标记的虚线表示与原子团连接,
[1208]
其中
[1209]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1210]
优选地，式(iiea)的c1是约450。
[1211]
优选地，式(iiea)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1212]
在同等优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)
[1213][1214]
其中
[1215]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[1216]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1217]
用星号标记的虚线表示与原子团连接,
[1218]
其中
[1219]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1220]
优选地，式(iiea-i)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1221]
优选地，式(iiea-i)的c1是约450。
[1222]
在另一个同等优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)
[1223][1224]
其中
[1225]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp激动剂原子团的-d的氮连接；
[1226]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1227]
用星号标记的虚线表示与原子团连接,
[1228]
其中
[1229]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1230]
优选地，式(iiea-ii)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1231]
优选地，式(iiea-ii)的c1是约450。
[1232]
优选地，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是cnp原子团，即式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的前药是cnp前药。甚至更优选地，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:24、seq id no:25或seq id no:30的序列的cnp原子团。最优选地，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团cnp。
[1233]
还优选的是，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:20的序列的cnp原子团cnp。
[1234]
还优选的是，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:21的序列的cnp原子团cnp。
[1235]
还优选的是，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:22的序列的cnp原子团cnp。
[1236]
还优选的是，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:23的序列的cnp原子团cnp。
[1237]
还优选的是，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是具有seq id no:30的序列的
cnp原子团cnp。
[1238]
在一个实施方案中，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是通过cnp的n-末端胺官能团的氮与-l
1-连接的cnp原子团。
[1239]
在优选的实施方案中，式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的-d是通过cnp原子团的赖氨酸侧链的胺官能团提供的氮与-l
1-连接的cnp原子团。
[1240]
在一个实施方案中，如果cnp原子团是seq id no:24，则所述赖氨酸侧链不是22位和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1241]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过9位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1242]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过11位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1243]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过15位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1244]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过16位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1245]
在另一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过20位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1246]
在优选的实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则所述赖氨酸侧链是22位和38位上的半胱氨酸残基之间的二硫键形成的环的组成部分。
[1247]
因此，在一个实施方案中，如果cnp具有seq id no:24的序列，则cnp原子团通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与式(iiea)、(iiea-i)和(iiea-ii)的cnp前药中的-l
1-连接。
[1248]
应当理解，上文所提到的半胱氨酸和赖氨酸的位置根据cnp原子团的长度而变化，并且本领域技术人员可毫无困难地鉴别在更长或更短形式的cnp原子团中相应的半胱氨酸和赖氨酸，还应当理解，例如，一些赖氨酸在更短的cnp原子团中可能不存在。还应当理解，作为例如位点导向性诱变的结果，在cnp原子团的非成环部分和/或成环部分中可能存在更多的赖氨酸残基。
[1249]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:24的序列的cnp原子团并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1250]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1251]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，
cnp原子团具有seq id no:24的序列并且通过26位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1252]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:20的序列的cnp原子团并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1253]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1254]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:20的序列并且通过30位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1255]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:21的序列的cnp原子团并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1256]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1257]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:21的序列并且通过29位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1258]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:22的序列的cnp原子团并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1259]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1260]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:22的序列并且通过28位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1261]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有seq id no:23的序列的cnp原子团并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1262]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1263]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:23的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1264]
在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea)，其中c1是约450，-d是具有
seq id no:30的序列的cnp原子团并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1265]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1266]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii)，其中c1是约450，cnp原子团具有seq id no:30的序列并且通过27位上的赖氨酸侧链提供的胺官能团与-l
1-连接。
[1267]
因此，在优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea’)
[1268][1269]
其中
[1270]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；
[1271]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1272]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1273]
连接，
[1274]
其中
[1275]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1276]
优选地，式(iiea’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1277]
优选地，式(iiea')的c1各自是约450。
[1278]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-i’)
[1279][1280]
其中
[1281]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；
[1282]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1283]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1284]
连接，
[1285]
其中
[1286]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1287]
优选地，式(iiea-i’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1288]
优选地，式(iiea-i')的c1各自是约450。
[1289]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iiea-ii’)
[1290][1291]
其中
[1292]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；
[1293]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；且
[1294]
用星号标记的虚线表示与原子团
[1295]
连接，
[1296]
其中
[1297]
c1各自独立地是400-500范围中的整数。
[1298]
优选地，式(iiea-ii’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1299]
优选地，式(iiea-ii')的c1各自是约450。
[1300]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iifa)
[1301][1302]
其中
[1303]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp原子团的-d的氮连接；
[1304]
且
[1305]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1306][1307]
其中
[1308]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1309]-za各自是
[1310][1311]
其中
[1312]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1313]
优选地，式(iifa)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1314]
优选地，式(iifa)的c1各自是约225。
[1315]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iifa-i)
[1316][1317]
其中
[1318]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp原子团的-d的氮连接；
[1319]
且
[1320]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1321][1322]
其中
[1323]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1324]-za各自是
[1325][1326]
其中
[1327]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1328]
优选地，式(iifa-i)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1329]
优选地，式(iifa-i)的c1各自是约225。
[1330]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iifa-ii)
[1331][1332]
其中
[1333]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与为cnp原子团的-d的氮连接；
[1334]
且
[1335]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1336][1337]
其中
[1338]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1339]-za各自是
[1340][1341]
其中
[1342]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1343]
优选地，式(iifa-ii)的c1各自是约225。
[1344]
在一个实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:25的序列。
[1345]
在另一个实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:30的序列。
[1346]
在另一个实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:20的序列。
[1347]
在另一个实施方案中，的cnp前药的cnp原子团式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)具有seq id no:21的序列。
[1348]
在另一个实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:22的序列。
[1349]
在另一个实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:23的序列。
[1350]
在优选的实施方案中，式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp前药的cnp原子团具有seq id no:24的序列。
[1351]
在一个实施方案中，cnp原子团通过cnp的n-末端胺官能团的氮与式(iifa)、(iifa-i)和(iifa-ii)的cnp的前药中的-l
1-连接。
[1352]
在另一个实施方案中，本发明的cnp前药是式(iif a’)
[1353][1354]
其中
[1355]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1356]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1357][1358]
其中
[1359]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1360]
za各自是
[1361][1362]
其中
[1363]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1364]
优选地，式(iifa’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1365]
优选地，式(iifa’)的c1各自是约225。
[1366]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iifa-i’)
[1367][1368]
其中
[1369]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1370]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1371][1372]
其中
[1373]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1374]
za各自是
[1375][1376]
其中
[1377]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1378]
优选地，式(iifa-i’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1379]
优选地，式(iifa-i’)的c1各自是约225。
[1380]
在另一个优选的实施方案中，本发明的cnp前药是式(iifa-ii’)
[1381][1382]
其中
[1383]
未标记的虚线表示通过形成酰胺键与seq id no:24的cnp原子团的26位上的赖氨酸侧链提供的氮连接；且
[1384]
用星号标记的虚线表示与具有如下结构的-z连接：
[1385][1386]
其中
[1387]
k选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12；
[1388]
za各自是
[1389][1390]
其中
[1391]
c1各自独立地是200-250范围中的整数。
[1392]
优选地，式(iifa-ii’)的k选自2、3、4、5、6和7。
[1393]
优选地，式(iifa-ii’)的c1各自是约225。
[1394]
本发明的另一个方面是药物组合物，其包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂和至少一种赋形剂。
[1395]
在一个实施方案中，包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂和至少一种赋形剂的药物组合物是液体或混悬剂制剂。应当理解，如果所述至少一种控制释放cnp激动剂是水不溶性的，则该药物组合物是混悬剂制剂。
[1396]
在另一个实施方案中，包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂和至少一种赋形剂的药物组合物是干燥制剂。
[1397]
所述液体、混悬剂或干燥药物组合物包含至少一种赋形剂。肠胃外制剂中使用的赋形剂可以分类为例如缓冲剂、等张(isotonicity)调节剂、防腐剂、稳定剂、抗-吸附剂、氧化保护剂、增粘剂/粘度增强剂、或其它辅料。然而，在一些情况下，一种赋形剂可具有双重或三重功能。优选地，本发明的药物组合物中所包含的所述至少一种赋形剂选自
[1398]
(i)缓冲剂：用于将ph保持在期望范围内的生理学上耐受的缓冲剂，例如磷酸钠、碳酸氢钠、琥珀酸盐、组氨酸、柠檬酸盐和乙酸盐、硫酸盐、硝酸盐、氯化物、丙酮酸盐；也可以使用抗酸剂，例如mg(oh)2或znco3mg；
[1399]
(ii)等张性调节剂：将注射贮库处渗透压差引起的细胞损伤所导致的疼痛减至最低；甘油和氯化钠是实例；有效浓度可通过渗透压测定法使用推定的血清重量渗克分子浓度285-315mosmol/kg通过渗透压力测定法测定；
[1400]
(iii)防腐剂和/或抗微生物剂：多剂量肠胃外制剂需要添加足够将注射后患者感染的风险减至最低的浓度的防腐剂并且已建立相应的监管要求；典型的防腐剂包括间甲酚、苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、三氯叔丁醇、苄醇、硝酸苯汞、硫柳汞(thimerosol)、山梨酸、山梨酸钾、苯甲酸、氯甲酚和苯扎氯铵；
[1401]
(iv)稳定剂：通过加强稳定蛋白质的力、通过使变性状态去稳定、或通过赋形剂与蛋白质的直接结合实现稳定化；稳定剂可以是氨基酸例如丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸、糖例如葡萄糖、蔗糖、海藻糖、多元醇例如甘油、甘露醇、山梨醇、盐例如磷酸钾、硫酸钠、螯合剂例如edta、六磷酸盐(hexaphosphate)/配体例如二价金属离子(锌、钙等)、其它盐或有机分子例如苯酚衍生物；此外，可以使用低聚物或聚合物例如环糊精、葡聚糖、树枝状聚合物、peg或pvp或鱼精蛋白或hsa；
[1402]
(v)抗-吸附剂：主要使用离子或非离子表面活性剂或其它蛋白质或可溶性聚合物
来竞争性地涂覆或吸附到制剂容器的内表面；例如，泊洛沙姆(pluronic f-68)、peg十二烷基醚(brij 35)、聚山梨酯20和80、葡聚糖、聚乙二醇、peg-聚组氨酸、bsa和has和明胶；选择的赋形剂的浓度和类型取决于要避免的作用，但典型地在刚高于cmc值时在界面上形成表面活性剂单层；
[1403]
(vi)氧化保护剂：抗氧化剂例如抗坏血酸、四氢嘧啶(ectoine)、甲硫氨酸、谷胱甘肽、一硫代甘油、桑色素、聚乙烯亚胺(pei)、没食子酸丙酯和维生素e；也可以使用螯合剂例如柠檬酸、edta、六磷酸盐和巯基乙酸；
[1404]
(vii)增粘剂或粘度增强剂：减缓颗粒在小瓶和注射器中的沉降，并且用于促进颗粒的混合和重新混悬并使混悬剂更容易注射(即，对注射器内芯施加小的力)；适合的增粘剂或粘度增强剂是例如卡波姆增粘剂如carbopol 940、carbopol ultrez 10、纤维素衍生物如羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素，hpmc)或二乙基氨基乙基纤维素(deae或deae-c)、胶体硅酸镁(veegum)或硅酸钠、羟基磷灰石凝胶、磷酸三钙凝胶、黄原胶、角叉菜胶如satia gum utc 30、脂族聚(羟基酸)例如聚(d,l-或l-乳酸)(pla)和聚乙醇酸(pga)及其共聚物(plga)、d,l-丙交酯、乙交酯和己内酯的三元共聚物、泊洛沙姆、亲水性聚(氧乙烯)嵌段和疏水性聚(氧丙烯)嵌段以构成聚(氧乙烯)-聚(氧丙烯)-聚(氧乙烯)三元嵌段(例如，)、聚醚酯共聚物例如聚对苯二甲酸乙二醇酯/聚对苯二甲酸丁二醇酯共聚物、乙酸异丁酸蔗糖酯(sucrose acetate isobutyrate,saib)、葡聚糖或其衍生物、葡聚糖和peg的组合、聚二甲基硅氧烷、胶原蛋白、脱乙酰壳多糖、聚乙烯醇(pva)及其衍生物、聚烷基酰亚胺(polyalkylimide)、聚(丙烯酰胺-共-二烯丙基二甲基铵(dadma))、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、糖胺聚糖(gag)例如硫酸皮肤素、硫酸软骨素、硫酸角质素、肝素、硫酸乙酰肝素、透明质烷(hyaluronan)、疏水性a-嵌段构成的aba三嵌段或ab嵌段共聚物例如聚丙交酯(pla)或聚(丙交酯-共-乙交酯)(plga)，和亲水性b-嵌段例如聚乙二醇(peg)或聚乙烯吡咯烷酮；这类嵌段共聚物以及上述泊洛沙姆可表现出可逆热凝胶化行为(在室温下是流体状态以促进施用，注射后在体温下超过溶液-凝胶转变温度而为凝胶状态)；
[1405]
(viii)铺展剂或扩散剂：通过水解空隙(intrastitial space)中的细胞外基质的组分而改变结缔组织的渗透性，所述组分例如但不限于透明质酸、在结缔组织的细胞间隙中发现的多糖；铺展剂例如但不限于透明质酸酶暂时性地降低细胞外基质的粘度并促进注射的药物扩散；和
[1406]
(ix)其他辅料：例如湿润剂、粘度调节剂、抗生素、透明质酸酶；酸和碱例如盐酸和氢氧化钠是制备过程中ph调节所必需的辅料。
[1407]
本发明的另一个方面是本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物，其用作药剂。
[1408]
优选地，所述药剂用于治疗选自以下的疾病：软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症(short stature)、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全(homozygous achondroplasia)、屈肢骨发育不良(camptomelic dysplasia)、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征(short-rib polydactyly syndromes)、肢根型点状软骨发育异常(rhizomelic type of chondrodysplasia punctata)、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良(spondyloepiphyseal dysplasia congenita)、骨发育不全症
(atelosteogenesis)、畸型发育不全(diastrophic dysplasia)、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良(langer-type mesomelic dysplasia)、nievergelt型肢中骨发育不良(nievergelt-type mesomelic dysplasia)、罗宾诺综合征(robinow syndrome)、赖因哈特综合征(reinhardt syndrome)、肢端骨发育不全(acrodysostosis)、周围性骨发育不全(peripheral dysostosis)、kniest发育异常、纤维软骨增生(fibrochondrogenesis)、罗伯茨综合征(roberts syndrome)、肢端肢中发育不全(acromesomelic dysplasia)、细肢、莫尔基奥综合征(morquio syndrome)、克尼斯特综合征(kniest syndrome)、后生营养性发育不良(metatrophic dysplasia)、脊椎骨骺干骺端发育不全(spondyloepimetaphyseal dysplasia)、神经纤维瘤病、勒格斯综合征(legius syndrome)、豹斑综合征、努南综合征(noonan syndrome)、遗传性龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、勒格斯综合征、心面皮肤综合征(cardiofaciocutaneous syndrome)、柯斯特洛综合征(costello syndrome)、shox缺乏(shox deficiency)、特发性身材矮小症、生长激素缺乏、骨关节炎、锁骨颅骨发育不全、颅缝早闭(例如穆恩柯综合征(muenke sydrome)、克鲁宗综合征(crouzon syndrome)、阿佩尔综合征(apert sydrome)、杰克逊-韦斯综合征(jackson-weiss syndrome)、普法伊弗综合征(pfeiffer syndrome)或克鲁宗皮肤骨骼综合征(crouzonodermoskeletal syndrome))、指(趾)畸形(dactyly)、短指(趾)、屈曲指、多指(趾)、并指(趾)、节段性发育不良(dyssegmental dysplasia)、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷佝偻病、雅-利综合征、马方综合征(marfan syndrome)、麦-奥综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。
[1409]
在另一个实施方案中，所述药剂用于治疗眼科障碍，例如青光眼和/或眼内压升高。
[1410]
在另一个实施方案中，所述药剂用于治疗与fgfr3的过度活化相关的癌症疾病，例如多发性骨髓瘤、骨髓增生性疾病(myeloproliferative syndrome)、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌。
[1411]
在另一个实施方案中，所述药剂用于治疗血管平滑肌障碍，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性代偿失调性心力衰竭(acute decompensated heart failure)、充血性心力衰竭、心源性水肿、肾水肿(nephredema)、肝病性水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。
[1412]
在另一个实施方案中，所述药剂用于治疗出血性休克。
[1413]
优选地，所述药剂用于治疗软骨发育不全表型，其选自生长迟缓、颅骨畸形(skull deformities)、口腔正畸缺陷(orthodontic defects)、颈髓压迫(cervical cord compression)、椎管狭窄(spinal stenosis)、脑积水、因慢性耳炎导致的听力损失、心血管疾病、神经系统疾病和肥胖。
[1414]
最优选地，所述药剂用于治疗软骨发育不全。
[1415]
本发明的另一个方面是本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物，其用于治疗能用cnp激动剂治疗的疾病的方法中。
[1416]
优选地，所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指
(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不全、神经纤维瘤病、勒格斯综合征、豹斑综合征、努南综合征、遗传性龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、勒格斯综合征、心面皮肤综合征、柯斯特洛综合征、shox缺乏、特发性身材矮小症、生长激素缺乏、骨关节炎、锁骨颅骨发育不全、颅缝早闭(例如穆恩柯综合征、克鲁宗综合征、阿佩尔综合征、杰克逊-韦斯综合征、普法伊弗综合征或克鲁宗皮肤骨骼综合征)、指(趾)畸形、短指(趾)、屈曲指、多指(趾)、并指(趾)、节段性发育不良、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷佝偻病、雅-利综合征、马方综合征、麦-奥综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。
[1417]
在另一个实施方案中，所述疾病是眼科障碍，例如青光眼和/或眼内压升高。
[1418]
在另一个实施方案中，所述疾病与癌症例如多发性骨髓瘤、骨髓增生性疾病、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌中的fgfr3的过度活化相关。
[1419]
在另一个实施方案中，所述疾病是血管平滑肌障碍，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性代偿失调性心力衰竭、充血性心力衰竭、心源性水肿、肾水肿、肝病性水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。
[1420]
在另一个实施方案中，所述疾病是出血性休克。
[1421]
在另一个实施方案中，所述疾病是软骨发育不全表型，其选自生长迟缓、颅骨畸形、口腔正畸缺陷、颈髓压迫、椎管狭窄、脑积水、因慢性耳炎导致的听力损失、心血管疾病、神经系统疾病和肥胖。
[1422]
最优选地，所述疾病是软骨发育不全。
[1423]
在一个实施方案中，经历本发明的治疗方法的患者是哺乳动物患者，优选人患者。在一个实施方案中，该人患者是成年人。在优选的实施方案中，所述人患者是儿科患者。
[1424]
本发明的另一个方面是本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物在制备用于治疗能用cnp治疗的疾病的药剂中的用途。
[1425]
优选地，所述疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不全、神经纤维瘤病、勒格斯综合征、豹斑综合征、努南综合征、遗传性龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、勒格斯综合征、心面皮肤综合征、柯斯特洛综合征、shox缺乏、特发性身材矮小症、生长激素缺乏、骨关节炎、锁骨颅骨发育不全、颅缝早闭(例如穆恩柯综合征、克鲁宗综合征、阿佩尔综合征、杰克
逊-韦斯综合征、普法伊弗综合征或克鲁宗皮肤骨骼综合征)、指(趾)畸形、短指(趾)、屈曲指、多指(趾)、并指(趾)、节段性发育不良、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷佝偻病、雅-利综合征、马方综合征、麦-奥综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。
[1426]
在另一个实施方案中，所述疾病是眼科障碍，例如青光眼和/或眼内压升高。
[1427]
在另一个实施方案中，所述疾病与癌症例如多发性骨髓瘤、骨髓增生性疾病、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌中的fgfr3的过度活化相关。
[1428]
在另一个实施方案中，所述疾病是血管平滑肌障碍，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性代偿失调性心力衰竭、充血性心力衰竭、心源性水肿、肾水肿、肝病性水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。
[1429]
在另一个实施方案中，所述疾病是出血性休克。
[1430]
在另一个实施方案中，所述疾病是软骨发育不全表型，其选自生长迟缓、颅骨畸形、口腔正畸缺陷、颈髓压迫、椎管狭窄、脑积水、因慢性耳炎导致的听力损失、心血管疾病、神经系统疾病和肥胖。
[1431]
最优选地，所述疾病是软骨发育不全。
[1432]
在一个实施方案中，用本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物治疗的疾病发生于哺乳动物患者，优选人患者。在一个实施方案中，该人患者是成年人。在优选的实施方案中，所述人患者是儿科患者。
[1433]
本发明的另一个方面是在需要治疗能用cnp激动剂治疗的一种或多种疾病的哺乳动物患者、优选人患者中治疗、控制、延迟或预防所述疾病的方法，所述方法包括给所述有需要的患者施用治疗有效量的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物的步骤。在一个实施方案中，所述人患者是成年人。在优选的实施方案中，所述人患者是儿科患者。
[1434]
优选地，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病选自软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良、脊椎骨骺干骺端发育不全、神经纤维瘤病、勒格斯综合征、豹斑综合征、努南综合征、遗传性龈纤维瘤病、1型神经纤维瘤病、勒格斯综合征、心面皮肤综合征、柯斯特洛综合征、shox缺乏、特发性身材矮小症、生长激素缺乏、骨关节炎、锁骨颅骨发育不全、颅缝早闭(例如穆恩柯综合征、克鲁宗综合征、阿佩尔综合征、杰克逊-韦斯综合征、普法伊弗综合征或克鲁宗皮肤骨骼综合征)、指(趾)畸形、短指(趾)、屈曲指、多指(趾)、并指(趾)、节段性发育不良、内生软骨瘤病、纤维性结构不良、遗传性多发性外生骨疣、低磷佝偻病、雅-利综合征、马方综合征、麦-奥综合征、骨硬化病和脆弱性骨硬化。
[1435]
在另一个实施方案中，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病是眼科障碍，例如青光眼和/或眼内压升高。
[1436]
在另一个实施方案中，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病与癌症例如多发性骨髓瘤、骨髓增生性疾病、白血病、浆细胞白血病、淋巴瘤、胶质母细胞瘤、前列腺癌、膀胱癌或乳腺癌中的fgfr3的过度活化相关。
[1437]
在另一个实施方案中，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病是血管平滑肌障碍，优选选自高血压、再狭窄、动脉硬化、急性代偿失调性心力衰竭、充血性心力衰竭、心源性水肿、肾水肿、肝病性水肿、急性肾功能不全和慢性肾功能不全。
[1438]
在另一个实施方案中，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病是出血性休克。
[1439]
在另一个实施方案中，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病是软骨发育不全表型，其选自生长迟缓、颅骨畸形、口腔正畸缺陷、颈髓压迫、椎管狭窄、脑积水、因慢性耳炎导致的听力损失、心血管疾病、神经系统疾病和肥胖。
[1440]
最优选地，所述能用cnp治疗的一种或多种疾病是软骨发育不全。
[1441]
本发明的另一个方面是施用本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物的方法，其中该方法包括通过以下途径施用控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物的步骤：局部、肠内或肠胃外施用和通过外部施用的方法、注射或输注，包括关节内、关节周围、皮内、皮下、肌内、静脉内、骨内、腹膜内、鞘内、囊内、眼眶内、玻璃体内、鼓室内、膀胱内、心内、经气管、表皮下、囊下、蛛网膜下、脊柱内、心室内、胸骨内注射和输注，通过植入的装置直接递送至脑，所述植入的装置允许将本发明等递送至脑组织或脑流体(例如ommaya reservoir)，直接脑室内注射或输注，注射或输注入脑或脑相关区域，注射入脉络膜下腔、眼眶后注射和眼内滴注，优选通过皮下注射。
[1442]
在优选的实施方案中，本发明涉及本发明的控制释放cnp激动剂或包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂的药物组合物，其通过皮下注射用于治疗软骨发育不全。
[1443]
在另一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含至少一种本发明的控制释放cnp激动剂或其药学上可接受的盐，其中该药物组合物包含至少一种另外的生物活性原子团或药物。
[1444]
所述至少一种另外的生物活性原子团或药物可以是其游离形式(即游离药物形式)，可以是稳定的缀合物的形式，或者可以是控制释放化合物的形式。
[1445]
在一个实施方案中，所述至少一种另外的生物活性原子团或药物是其游离形式的药物，即本发明的药物组合物包含至少一种控制释放cnp激动剂和至少一种另外的药物。
[1446]
优选地，所述至少一种另外的药物选自：抗组胺药；人抗-fgfr3抗体；可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3；酪氨酸激酶抑制剂；他汀类(statin)；cnp激动剂；生长激素；igf-1；anp；bnp；肽酶和蛋白酶抑制剂；和npr-c抑制剂。
[1447]
优选的抗组胺药是美克洛嗪。
[1448]
优选的酪氨酸激酶抑制剂是nvp-bgj398。
[1449]
优选的他汀类是罗苏伐他汀。
[1450]
对于所述至少一种另外的药物而言优选的cnp激动剂是vosoritide。
[1451]
优选的肽酶和蛋白酶抑制剂是nep和弗林蛋白酶抑制剂。
[1452]
优选的nep抑制剂是硫甲基氧代苯丙甘氨酸(thiorphan)和坎沙曲。
[1453]
优选的npr-c抑制剂是seq id no:98的片段(fgipmdrigrnpr)和抗体b701。
[1454]
优选的酪氨酸激酶抑制剂如美国专利6329375和6344459中所公开，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1455]
在一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是抗组胺药。
[1456]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是人抗-fgfr3抗体。
[1457]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)。
[1458]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是酪氨酸激酶抑制剂。
[1459]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是他汀类。
[1460]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是生长激素。
[1461]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是cnp激动剂。
[1462]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是igf-1。
[1463]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是anp。
[1464]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是bnp。
[1465]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是肽酶和蛋白酶抑制剂。
[1466]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的药物是npr-c抑制剂。
[1467]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的生物活性原子团或药物是稳定缀合物的形式。
[1468]
在一个实施方案中，所述的稳定缀合物的形式的至少一种另外的生物活性原子团包含通过稳定的键直接或通过间隔基原子团与聚合物原子团、优选与水溶性聚合物原子团共价缀合的至少一种生物活性原子团。
[1469]
优选地，所述聚合物原子团、甚至更优选地水溶性聚合物原子团包括选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[1470]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团通过稳定的键与白蛋白结合原子团共价缀合。优选地，所述白蛋白结合原子团是c
8-24
烷基原子团或脂肪酸衍生物。优选的脂肪酸衍生物是wo 2005/027978 a2和wo 2014/060512 a1
中公开的那些，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1471]
优选地，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含选自以下的生物活性原子团：抗组胺药；人抗-fgfr3抗体；可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)；酪氨酸激酶抑制剂；他汀类；cnp激动剂；生长激素；igf-1；anp；bnp；肽酶和蛋白酶抑制剂；和npr-c抑制剂。
[1472]
优选的抗组胺药是美克洛嗪。
[1473]
优选的酪氨酸激酶抑制剂是nvp-bgj398。
[1474]
优选的他汀类是罗苏伐他汀。
[1475]
对于所述至少一种另外的药物而言优选的cnp激动剂是vosoritide。
[1476]
优选的肽酶和蛋白酶抑制剂是nep和弗林蛋白酶抑制剂。
[1477]
优选的nep抑制剂是硫甲基氧代苯丙甘氨酸和坎沙曲。
[1478]
优选的npr-c抑制剂是seq id no:98的片段(fgipmdrigrnpr)和抗体b701。
[1479]
优选的酪氨酸激酶抑制剂如美国专利6329375和6344459中所公开，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1480]
在一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含抗组胺药原子团。
[1481]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含人抗-fgfr3抗体原子团。
[1482]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)原子团。
[1483]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含酪氨酸激酶抑制剂原子团。
[1484]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含他汀类原子团。
[1485]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含生长激素原子团。
[1486]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含cnp激动剂原子团。
[1487]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含igf-1原子团。
[1488]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含anp原子团。
[1489]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含bnp原子团。
[1490]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含肽酶和蛋白酶抑制剂原子团。
[1491]
在另一个实施方案中，所述的稳定缀合物形式的至少一种另外的生物活性原子团包含npr-c抑制剂原子团。
[1492]
在另一个实施方案中，所述至少一种另外的生物活性原子团或药物是控制释放化
合物的形式。
[1493]
优选地，所述的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含选自以下的至少一种生物活性原子团或药物：抗组胺药；人抗-fgfr3抗体；可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3；他汀类；cnp激动剂；生长激素；igf-1；anp；bnp；肽酶和蛋白酶抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；和npr-c抑制剂。
[1494]
优选的抗组胺药是美克洛嗪。
[1495]
优选的酪氨酸激酶抑制剂是nvp-bgj398。
[1496]
优选的他汀类是罗苏伐他汀。
[1497]
对于所述至少一种另外的药物而言优选的cnp激动剂是vosoritide。
[1498]
优选的肽酶和蛋白酶抑制剂是nep和费林蛋白酶抑制剂。
[1499]
优选的nep抑制剂是硫甲基氧代苯丙甘氨酸和坎沙曲。
[1500]
优选的npr-c抑制剂是seq id no:98的片段(fgipmdrigrnpr)和抗体b701。
[1501]
优选的酪氨酸激酶抑制剂如美国专利6329375和6344459中所公开，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1502]
在一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含抗组胺药原子团或药物。
[1503]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含人抗-fgfr3抗体原子团或药物。
[1504]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)原子团或药物。
[1505]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含酪氨酸激酶抑制剂原子团或药物。
[1506]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含他汀类原子团或药物。
[1507]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含生长激素原子团或药物。
[1508]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含cnp激动剂原子团或药物。
[1509]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含igf-1原子团或药物。
[1510]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含anp原子团或药物。
[1511]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含bnp原子团或药物。
[1512]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含肽酶和蛋白酶抑制剂原子团或药物。
[1513]
在另一个实施方案中，所述的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含npr-c抑制剂原子团或药物。
[1514]
在一个实施方案中，所述的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子
团或药物是水不溶性的。
[1515]
优选地，所述的水不溶性的控制释放化合物选自晶体、纳米粒、微粒、纳米球和微球。
[1516]
在一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的晶体。
[1517]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的纳米粒。
[1518]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的微粒。
[1519]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的纳米球。
[1520]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的微球。
[1521]
在一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的囊泡。优选地，所述包含至少一种药物或生物活性原子团的囊泡是胶束、脂质体或聚合物囊泡。
[1522]
在一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的胶束。
[1523]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的脂质体。优选地，所述脂质体选自水质体；非离子表面活性剂囊泡，如诺质体和前质体；阳离子脂质体，例如leciplex；转质体；醇质体；不饱和质体；鞘质体；和药质体。
[1524]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是包含至少一种药物或生物活性原子团的聚合物囊泡。
[1525]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含非共价包埋在水不溶性聚合物中的至少一种生物活性原子团或药物。优选地，所述水不溶性聚合物包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的
聚合物、木聚糖及其共聚物。
[1526]
在优选的实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含非共价包埋在聚(乳酸-共-乙醇酸)(plga)中的至少一种药物或生物活性原子团。
[1527]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含与水不溶性聚合物共价可逆地缀合的至少一种生物活性原子团。优选地，所述水不溶性聚合物包含选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[1528]
优选地，所述的水不溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含至少一种生物活性原子团或药物，其选自：抗组胺药；人抗-fgfr3抗体；可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3；酪氨酸激酶抑制剂；他汀类；cnp激动剂；生长激素；igf-1；anp；bnp；肽酶和蛋白酶抑制剂；和npr-c抑制剂。
[1529]
优选的抗组胺药是美克洛嗪。
[1530]
优选的酪氨酸激酶抑制剂是nvp-bgj398。
[1531]
优选的他汀类是罗苏伐他汀。
[1532]
对于所述的至少一种另外的药物而言优选的cnp激动剂是vosoritide。
[1533]
优选的肽酶和蛋白酶抑制剂是nep和费林蛋白酶抑制剂。
[1534]
优选的nep抑制剂是硫甲基氧代苯丙甘氨酸和坎沙曲。
[1535]
优选的npr-c抑制剂是seq id no:98的片段(fgipmdrigrnpr)和抗体b701。
[1536]
优选的酪氨酸激酶抑制剂如美国专利6329375和6344459中所公开，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1537]
在一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含抗组胺药原子团或药物。
[1538]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含人抗-fgfr3抗体原子团或药物。
[1539]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)原子团或药物。
[1540]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含酪氨酸激酶抑制剂原子团或药物。
[1541]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含他汀类原子团或药物。
[1542]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含生长激素原子团或药物。
[1543]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含cnp激动剂原子团或药物。
[1544]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含igf-1原子团或药物。
[1545]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含anp原子团或药物。
[1546]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含bnp原子团或药物。
[1547]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含肽酶和蛋白酶抑制剂原子团或药物。
[1548]
在另一个实施方案中，所述的水不溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含npr-c抑制剂原子团或药物。
[1549]
在另一个实施方案中，所述的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物是水溶性的。
[1550]
在一个实施方案中，所述的水溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含通过可逆键直接或通过间隔基原子团与水溶性聚合物原子团共价缀合的至少一种生物活性原子团。
[1551]
优选地，所述水溶性聚合物原子团选自以下的聚合物：2-甲基丙烯酰基-氧基乙基磷酰胆碱、聚(丙烯酸)、聚(丙烯酸酯)、聚(丙烯酰胺)、聚(烷氧基)聚合物、聚(酰胺)、聚(酰氨基胺)、聚(氨基酸)、聚(酸酐)、聚(天冬氨酰胺)、聚(丁酸)、聚(乙醇酸)、聚对苯二甲酸丁二醇酯、聚(己内酯)、聚(碳酸酯)、聚(氰基丙烯酸酯)、聚(二甲基丙烯酰胺)、聚(酯)、聚(乙烯)、聚(乙二醇)、聚(环氧乙烷)、聚(磷酸乙酯)、聚(乙基唑啉)、聚(乙醇酸)、聚(丙烯酸羟乙酯)、聚(羟乙基-唑啉)、聚(羟基甲基丙烯酸酯)、聚(羟丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羟丙酯)、聚(羟丙基唑啉)、聚(亚氨基碳酸酯)、聚(乳酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚(甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸酯)、聚(甲基唑啉)、聚(有机磷腈)、聚(原酸酯)、聚(唑啉)、聚(丙二醇)、聚(硅氧烷)、聚(氨基甲酸酯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯胺)、聚(乙烯基甲基醚)、聚(乙烯吡咯烷酮)、硅酮、纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、壳多糖、脱乙酰壳多糖、葡聚糖、糊精、明胶、透明质酸及其衍生物、官能化的透明质酸、甘露聚糖、果胶、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖、淀粉、羟烷基淀粉、羟乙基淀粉和其它基于碳水化合物的聚合物、木聚糖及其共聚物。
[1552]
在另一个实施方案中，所述的水溶性的控制释放化合物形式的至少一种另外的生物活性原子团通过稳定的键与白蛋白结合原子团共价缀合。优选地，所述的白蛋白结合原
子团是c
8-24
烷基原子团或脂肪酸衍生物。优选的脂肪酸衍生物是wo 2005/027978 a2和wo 2014/060512 a1中公开的那些，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1553]
优选地，所述的水溶性的控制释放形式的至少一种另外的生物活原子团包含选自以下的生物活性原子团：抗组胺药；人抗-fgfr3抗体；可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3；酪氨酸激酶抑制剂；他汀类；cnp激动剂；生长激素；igf-1；anp；bnp；肽酶和蛋白酶抑制剂；和npr-c抑制剂。
[1554]
优选的抗组胺药是美克洛嗪。
[1555]
优选的酪氨酸激酶抑制剂是nvp-bgj398。
[1556]
优选的他汀类是罗苏伐他汀。
[1557]
对于所述的至少一种另外的药物而言优选的cnp激动剂是vosoritide。
[1558]
优选的肽酶和蛋白酶抑制剂是nep和费林蛋白酶抑制剂。
[1559]
优选的nep抑制剂是硫甲基氧代苯丙甘氨酸和坎沙曲。
[1560]
优选的npr-c抑制剂是seq id no:98的片段(fgipmdrigrnpr)和抗体b701。
[1561]
优选的酪氨酸激酶抑制剂如美国专利6329375和6344459中所公开，通过引用将这两篇文献合并入本文。
[1562]
在一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含抗组胺药原子团或药物。
[1563]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含人抗-fgfr3抗体原子团或药物。
[1564]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含可溶性形式的人成纤维细胞生长因子受体3(sfgfr3)原子团或药物。
[1565]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含酪氨酸激酶抑制剂原子团或药物。
[1566]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含他汀类原子团或药物。
[1567]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含生长激素原子团或药物。优选的水溶性控制释放生长激素化合物是wo2016/079114a1的实施例2的化合物2。因此，优选的水溶性控制释放生长激素化合物具有如下结构：
[1568][1569]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含cnp激动剂原子团或药物。
[1570]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含igf-1原子团或药物。
[1571]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含anp原子团或药物。
[1572]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含bnp原子团或药物。
[1573]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含肽酶和蛋白酶抑制剂原子团或药物。
[1574]
在另一个实施方案中，所述的水溶性控制释放形式的至少一种另外的生物活性原子团或药物包含npr-c抑制剂原子团或药物。
[1575]
本发明的另一个方面是本发明的药物组合物，其用作药剂。
[1576]
本发明的另一个方面是本发明的药物组合物，其用于治疗患有受益于刺激生长的障碍的患者。
[1577]
优选地，所述患者是哺乳动物患者，更优选人患者。
[1578]
优选地，所述的受益于刺激生长的障碍选自：软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良和脊椎骨骺干骺端发育不全。最优选地，所述的受益于刺激生长的障碍是软骨发育不全。
[1579]
本发明的另一个方面是通过施用本发明的药物组合物来治疗患有受益于刺激生长的障碍的患者的方法。
[1580]
优选地，所述患者是哺乳动物患者，更优选人患者。
[1581]
优选地，所述的受益于刺激生长的障碍选自：软骨发育不全、软骨发育不良、身材矮小症、侏儒症、骨软骨发育不良、致死性发育不良、成骨不全、软骨成长不全、点状软骨发育异常、纯合型软骨发育不全、屈肢骨发育不良、先天性致死型低磷酸酯酶症、围产期致死型成骨不全、短肋多指(趾)综合征、肢根型点状软骨发育异常、jansen型骨骺端发育不全、先天性脊椎骺发育不良、骨发育不全症、畸型发育不全、先天性短股骨、langer型肢中骨发育不良、nievergelt型肢中骨发育不良、罗宾诺综合征、赖因哈特综合征、肢端骨发育不全、周围性骨发育不全、kniest发育异常、纤维软骨增生、罗伯茨综合征、肢端肢中发育不全、细肢、莫尔基奥综合征、克尼斯特综合征、后生营养性发育不良和脊椎骨骺干骺端发育不全。最优选地，所述的受益于刺激生长的障碍是软骨发育不全。
[1582]
如果cnp激动剂是多肽，则可以通过标准固相合成方法、例如通过boc化学(r.b.merrifield,j.am.chem.soc.,85(14):2149-2154(1963))来制备这类多肽。或者，可以使用fmoc(芴基甲氧基羰基)化学。
[1583]
可用本领域已知的方法来改善纯度和/或收率，包括使用假脯氨酸(pseudoproline)或其它二肽结构模块、片段偶联等(j.wade等人,lett.pept.sci.,7(2):107-122(2000)；y.fujiwara等人,chem.pharm.bull.,44(7):1326-1331(1996)；p.cherkupally等人,eur.j.org.chem.,6372
–
6378(2013))。
[1584]
或者，如果cnp激动剂是多肽，可以通过重组合成方法生产这类多肽。
[1585]
图1：seq id no:1的cnp的结构。
实施例
[1586]
材料和方法
[1587]
cnp seq id no:1得自bachem ag,bubendorf,瑞士(cnp-22,人,目录号h-1296)。cnp-34seq id no:40和cnp-38seq id no:24得自caslo aps,kongens lyngby,丹麦。
[1588]
具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys26的侧链的在ctc树脂上的侧链被保护的cnp-38(通过fmoc-策略合成)得自caslo aps,kongens lyngby,丹麦。
[1589]
具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys12、lys16或lys22的侧链的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-34(通过fmoc-策略合成)得自peptide specialty laboratories gmbh,heidelberg,德国。具有游离的n-末端的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-38(通过fmoc-策略合成)得自peptide specialty laboratories gmbh,heidelberg,德国。
[1590]
甲氧基peg胺5kda得自rapp polymere gmbh,tuebingen,德国。这项工作中所用的所有其它peg均获自nof europe n.v.,grobbendonk,比利时。
[1591]
fmoc-n-me-asp(otbu)-oh得自bachem ag,bubendorf,瑞士。s-三苯甲基-6-巯基己酸购自polypeptide,strasbourg,法国。hatu得自merck biosciences gmbh,schwalbach/ts,德国。
[1592]
2,4-二甲基苄醇得自abcr gmbh,karlsruhe,德国。
[1593]
fmoc-n-me-asp(obn)-oh得自peptide international inc.,louisville,ky,美国。
[1594]
中性内肽酶(nep)得自enzo life sciences gmbh,德国。
824.36[m h]
1
(c-末端)。用氘代cnp-38肽作为内标。
[1612]
如下制备在空白血浆中的cnp-38缀合物的校正标准品：首先将解冻的li-肝素短尾猴血浆匀浆，然后离心5分钟。将cnp-38缀合物制剂在dmso中稀释至10μg/ml的工作溶液(缀合物cnp-38eq.)，以9.3ng/100μl(缀合物cnp-38eq.)与139.5ng/100μl(缀合物cnp-38eq.)之间的浓度掺入到空白血浆中。这些溶液被用于产生校正曲线。对于两种特征肽(n-末端和c-末端)，校正曲线加权为1/x2。为了质量控制，相应地制备了三种质量控制样品，其含量为116.2ng/100μl(高qc,缀合物cnp-38eq.)、69.75ng/100μl(中qc,缀合物cnp-38eq.)和23.25ng/100μl(低qc,缀合物cnp-38eq.)。
[1613]
为了样品制备，通过向100μl血浆样品中加入300μl预冷却(0℃)的甲醇进行蛋白质沉淀。将200μl上清液转移到新的孔-板中并蒸发至干(在35℃、温和的氮气流下)。使用100μl重构溶剂(thermo消化缓冲液，订单号60109-101,thermo fisher scientific gmbh,dreieich,德国)溶解残余物。将20μg胰蛋白酶(订单号v5111,promega gmbh,mannheim,德国)溶于20μl 10mm乙酸中。将2μl胰蛋白酶溶液加入各腔室中。
[1614]
在37℃(水浴)下孵育4小时后，将5μl 0.5m tcep溶液加入各腔室中，在96℃下再次孵育5min。将样品冷却至室温后，加入3μl乙腈。将洗脱液转移到小瓶中。将10μl进样到uplc-ms系统中。
[1615]
实施例1
[1616]
连接基试剂1f的合成
[1617]
根据下面的方案合成了连接基试剂1f：
[1618][1619]
向n-甲基-n-boc-乙二胺(2g,11.48mmol)和nacnbh3(819mg,12.63mmol)在meoh(20ml)中的溶液中分份加入2,4,6-三甲氧基苯甲醛(2.08g,10.61mmol)。将该混合物在室温搅拌90min，用3m hcl(4ml)酸化，再搅拌15min。将反应混合物加入到饱和nahco3溶液(200ml)中，用ch2cl2萃取5
×
。用na2so4干燥合并的有机相，减压蒸发溶剂。真空干燥得到的n-甲基-n-boc-n
’‑
tmob-乙二胺1a，将其不经进一步纯化即用于下一反应步骤。
[1620]
收率：3.76g(11.48mmol,89％纯度,1a:双tmob保护的产物＝8:1)
[1621]
ms:m/z 355.22＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝354.21)。
[1622]
向1a(2g,5.65mmol)在ch2cl2(24ml)中的溶液中加入comu(4.84g,11.3mmol)、n-fmoc-n-me-asp(obn)-oh(2.08g,4.52mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(2.65ml,20.34mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，用ch2cl2(250ml)稀释，用0.1m h2so4(100ml)洗涤三次，用盐水(100ml)洗涤三次。再用ch2cl2(100ml)反萃取水相。用na2so4干燥合并的有机相，过滤，将残余物浓缩至体积24ml。使用闪式色谱法纯化1b。
[1623]
收率:5.31g(148％,6.66mmol)
[1624]
ms:m/z 796.38＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝795.37)。
[1625]
向1b(5.31g,最多4.52mmol，称为n-fmoc-n-asp(obn)-oh)在thf(60ml)中的溶液中加入dbu(1.8ml,3％v/v)。将该溶液在室温搅拌12min，用ch2cl2(400ml)稀释，用0.1m h2so4(150ml)洗涤三次，用盐水(150ml)洗涤三次。用ch2cl2(100ml)反萃取水相。用na2so4干
燥合并的有机相，过滤。蒸发溶剂后分离得到1c，将其不经进一步纯化即用于下一反应。
[1626]
ms:m/z 574.31＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝573.30)。
[1627]
将1c(5.31g,4.52mmol,粗品)溶于乙腈(26ml)和comu(3.87g,9.04mmol)，加入6-三苯甲基巯基己酸(2.12g,5.42mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(2.35ml,18.08mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h，用ch2cl2(400ml)稀释，用0.1m h2so4(100ml)洗涤三次，用盐水(100ml)洗涤三次。用ch2cl2(100ml)反萃取水相。用na2so4干燥合并的有机相，过滤，蒸发溶剂后分离得到1d。通过闪式色谱法纯化产物1d。
[1628]
收率：2.63g(62％,94％纯度)
[1629]
ms:m/z 856.41＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝855.41)。
[1630]
向1d(2.63g,2.78mmol)在i-proh(33ml)和h2o(11ml)中的溶液中加入lioh(267mg,11.12mmol)，将反应混合物在室温搅拌70min。用ch2cl2(200ml)稀释该混合物，用0.1m h2so4(50ml)洗涤三次，用盐水(50ml)洗涤三次。用ch2cl2(100ml)反萃取水相。用na2so4干燥合并的有机相，过滤，蒸发溶剂后分离得到1e。通过闪式色谱法纯化1e。
[1631]
收率：2.1g(88％)
[1632]
ms:m/z 878.4＝[m na]

,(计算的单同位素质量＝855.40)。
[1633]
向1e(170mg,0.198mmol)在无水dcm(4ml)中的溶液中加入dcc(123mg,0.59mmol)和催化量的dmap。5min后，加入n-羟基-琥珀酰亚胺(114mg,0.99mmol)，将反应混合物在室温搅拌1h。过滤反应混合物，真空除去溶剂，将残余物用90％乙腈 0.1％tfa(3.4ml)吸收。通过rp-hplc纯化粗混合物。用0.5m ph 7.4磷酸盐缓冲液中和产物级分，浓缩。用dcm萃取剩余的水相，蒸发溶剂后分离得到1f。
[1634]
收率：154mg(81％)
[1635]
ms:m/z 953.4＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝952.43)。
[1636]
实施例2
[1637]nεk4/εk10-cnp单连接基硫醇2、n
εk4-cnp单连接基硫醇2c和n
εk10-cnp单连接基硫醇2d的合成
[1638][1639]
通过将cnp-22(5.2μmol)溶于0.6ml dmso制备n
εk4/εk10-cnp单连接基硫醇(带有在lys4或lys10的侧链氨基上缀合的连接基的区域异构体的混合物)2。加入用氢氧化四丁基铵水合物调至ph 8.5的0.15ml 0.375m硼酸盐缓冲液、60μl dipea和在0.34ml dmso中的1f(6.1mg,7.1μmol)，将该混合物在室温搅拌30min。用2ml乙腈/水1/1(v/v)和200μl acoh稀释反应混合物，通过rp-hplc从反应混合物中分离出被保护的n
εk4/εk10-cnp单连接基缀合物。
[1640]
优化的rp-hplc梯度可用于分离n
εk4-cnp单连接基硫醇2a和n
εk10-cnp单连接基硫
醇2b。
[1641]
通过在室温用0.6ml 90/10/2/2(v/v/v/v)hfip/tfa/tes/水处理冻干的产物级分1小时来影响保护基的除去。通过rp-hplc纯化脱保护的n
εk4/εk10-cnp单连接基硫醇2。通过esi-lcms确定产物的身份和纯度。
[1642]
照样可以分别由2a和2b得到脱保护的n
εk4-cnp单连接基硫醇2c和n
εk10-cnp单连接基硫醇2d。
[1643]
实施例3
[1644]nαg1-cnp单连接基硫醇3的合成
[1645][1646]
通过以下方法制备n
αg1-cnp单连接基硫醇3：将cnp-22(5.2μmol)溶于0.6ml dmso。加入0.25ml 0.5m磷酸盐缓冲液ph 7.4和在0.34ml dmso中的1f(6.1mg,7.1μmol)，将该混合物在室温搅拌几小时。用2ml乙腈/水1/1(v/v)和200μl acoh稀释反应混合物，通过rp-hplc从该反应混合物中分离被保护的n
αg1-cnp单连接基硫醇。
[1647]
通过在室温用0.6ml 90/10/2/2(v/v/v/v)hfip/tfa/tes/水处理冻干的产物级分1小时来影响保护基的除去。通过rp-hplc纯化脱保护的n
αg1-cnp单连接基硫醇3。通过esi-lcms确定产物的身份和纯度。
[1648]
实施例4
[1649]
cnp单连接基硫醇2c、2d和3的peg化
[1650][1651]
将1μmol cnp单连接基硫醇2c溶于0.5ml乙腈/0.2m琥珀酸盐缓冲液ph 3.8 1/1(v/v)，加入1.2μmol线性40kda peg-马来酰亚胺，将该混合物在室温搅拌。通过添加20μl acoh使反应停止，通过制备型rp-hplc纯化cnp缀合物4。
[1652]
照样由1μmol cnp单连接基硫醇2d和3制备cnp缀合物5和6。
[1653]
在酸性条件下完全水解后通过定量氨基酸分析测定cnp含量。
[1654]
实施例5
[1655]
体外释放动力学
[1656]
将cnp缀合物4、5和6以约2mg/ml的浓度溶于60mm磷酸钠,3mm edta,0.01％tween-20,ph 7.4，无菌过滤。将各混合物在37℃孵育。在各时间点抽取等分试样，通过rp-hplc和esi-ms分析。对与释放的cnp相关的uv-信号进行积分，对孵育时间作图。
[1657]
用曲线-拟合软件估算相应的释放半衰期。
[1658]
实施例6
[1659]
在大鼠中的药动学和cgmp产生
[1660]
给正常大鼠静脉内和皮下注射等摩尔剂量的cnp-22、cnp缀合物4、5或6。如文献(美国专利8,377,884b2)中所述的那样测定随时间变化的血浆cnp和cgmp水平。
[1661]
实施例7
[1662]
dmb保护的6-巯基己酸7的合成
[1663]
根据以下方案合成了化合物7：
[1664]
[1665]
向6-巯基己酸(7.10g,47.90mmol)在三氟乙酸(20ml)中的溶液中加入2,4-二甲基苄醇(13.5g,95.80mmol)。将该混合物在室温搅拌60min，真空除去三氟乙酸。将残余物溶于95.8ml lioh(3m)和thf(81ml)的混合物，在室温搅拌60min。真空除去溶剂，用etoac(200ml)萃取水性残余物三次。用mgso4干燥合并的有机相，真空除去溶剂。通过rp-hplc纯化7。
[1666]
收率：2.27g(8.52mmol,18％)
[1667]
ms:m/z 267.01＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝266.13)。
[1668]
实施例8
[1669]
连接基试剂8c的合成
[1670]
根据以下方案合成了连接基试剂8c：
[1671][1672]
向1b(21.6g,27.18mmol)在异丙醇(401ml)中的溶液中加入水(130ml)和lioh(3.90g,163.06mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后将其用甲苯(300ml)稀释，用0.1m hcl(200ml)洗涤三次。用甲苯(100ml)洗涤合并的水相三次。用4m naoh(4ml)将水相碱化至ph 8.5，用ch2cl2(200ml)萃取八次。用盐水(50ml)洗涤合并的ch2cl2相，用na2so4干燥。蒸发溶剂后分离得到8b，将其不经进一步纯化即用于下一反应。
[1673]
收率：11.89g(24.59mmol,90％)
[1674]
ms:m/z 484.16＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝483.26)。
[1675]
在n
2-气氛下向7(293mg,1.10mmol)和pybop(572mg,1.10mmol)在thf(10ml)中的溶液中加入diea(0.52ml,3.00mmol)。将反应混合物在室温搅拌60min。加入溶8b(484mg,1.00mmol)在thf(2ml)中的溶液中，将反应再搅拌60min。用2m柠檬酸溶液(10ml)使反应停止，真空除去thf。然后用etoac(15ml)萃取得到的水相两次，用水(10ml)和盐水(10ml)洗涤合并的有机层，用mgso4干燥。真空除去溶剂，通过rp hplc纯化8c。
[1676]
收率：330mg(0.451mmol,45％)
[1677]
ms:m/z 732.34＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝731.38)。
[1678]
实施例9
[1679]
连接基试剂9的合成
[1680]
根据以下方案合成了连接基试剂9：
[1681][1682]
向8b(2.00g,4.14mmol)和fmoc-cl(1.07g,4.14mmol)在二烷(20ml)中的溶液中加入1m na2co3溶液(20ml)。将反应混合物在室温搅拌40min。加入水(100ml)和乙醚(100ml)，用乙醚(100ml)萃取水相两次。用浓hcl酸化水相至ph 1，再用乙醚萃取三次。用na2so4干燥合并的有机相，真空除去溶剂。将9不经进一步纯化即用于下一步。
[1683]
收率：2.63g(3.73mmol,90％)
[1684]
ms:m/z 728.32＝[m na]

,(计算的单同位素质量＝705.33)。
[1685]
实施例10
[1686]
可逆lys26 cnp-38 peg 2x20kda缀合物10f的合成
[1687]
根据以下方案合成了缀合物10f：
[1688]
[1689]
[1690][1691]
根据材料和方法中给出的操作对2.00g(0.21mmol)具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys26的侧链的在ctc树脂上的侧链被保护的cnp-38进行ivdde脱保护，得到10a。将连接基试剂8c(336mg,0.46mmol)、pybop(239mg,0.46mmol)和diea(182μl,1.04mmol)在dmf(5ml)中的溶液在室温孵育10min，然后加入到树脂10a中。将混悬液在室温振摇2h。将树脂用dmf(10ml)洗涤10次，用dcm(10ml)洗涤10次，真空干燥15min。通过用15ml预冷却(-18℃)的裂解混合物68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v)tfa/dtt/茴香硫醚/苯酚/水/tips处理树脂完成从树脂上裂解肽和除去保护基。将该混合物温热至室温，搅拌60min。过滤出树脂，用预冷却的乙醚(-18℃)沉淀粗10c。将沉淀物溶解在acn/水中，通过rp-hplc纯化。将合并的hplc级分直接用于下一步。ms:m/z 1124.60＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1124.59)。
[1692]
向合并的10c的hplc级分(250ml)中加入40ml 0.5m柠檬酸(ph＝5.00)和7ml 0.01m的2,2
’‑
二硫代双(吡啶-n-氧化物)溶液在1/1(v/v)乙腈/水中的溶液。在室温孵育5min后，反应完全。将混合物用500ml含有0.1％tfa(v/v)的水稀释，用acoh(20ml)酸化至ph约2。通过rp-hplc纯化10d。
[1693]
收率：101mg(17.3μmol,9％)cnp-38-连接基-dmb*10tfa
[1694]
ms:m/z 1124.10＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1124.09)。
[1695]
通过以下方法实现dmb保护基的裂解：将30ml预冷却的(-18℃)裂解混合物100/5/3/2/1(v/v/w/v/v)tfa/msa/dtt/水/茴香硫醚加入到10d(101mg,17.3μmol)中，在0℃搅拌3h。用预冷却(-18℃)的乙醚沉淀粗10e。将沉淀物溶解在含有0.1％tfa(v/v)的水中，孵育10min，以便水解任意tfa酯。通过rp-hplc纯化10e。合并产物级分，冷冻干燥。
[1696]
收率：46mg(8.34μmol,48％)cnp-38-连接基-硫醇*10tfa
[1697]
ms:m/z 1094.58＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1094.57)。
[1698]
向10e(46mg,8.43μmol)在1.15ml含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液中加入peg 2
×
20kda马来酰亚胺(sunbright gl2-400ma,870mg,21.75μmol)在4.35ml含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液，然后加入0.5m乳酸缓冲液(1.07ml,ph＝4.20)。将混合物在室温搅拌4h。通过rp-hplc纯化缀合物10f。
[1699]
收率：233mg(5.21μmol,62％)缀合物10f*10hcl
[1700]
实施例11
[1701]
可逆lys26 cnp-38 peg4
×
10kda缀合物11i的合成
[1702]
根据以下方案合成了缀合物11i：
[1703]
[1704]
2x10kda马来酰亚胺(sunbright gl2-200ma,1.12g,56.03μmol)在6.1ml含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液，然后加入0.5m乳酸缓冲液(1.46ml,ph＝4.00)。将该混合物在室温搅拌4h。通过rp-hplc纯化缀合物11i。
[1718]
收率：227mg(4.96μmol,83％)缀合物11i*10hcl
[1719]
实施例12
[1720]
持久的lys26 cnp-38 peg4x10kda缀合物12g的合成
[1721]
根据以下方案合成缀合物12g：
[1722]
[1723][1724]
向fmoc-lys(fmoc)-oh(365mg,0.62mmol)and pybop(322mg,0.62mmol)在dmf(4.6ml)中的溶液中加入diea(0.11ml,0.62mmol)。将该混合物抽取到树脂10a(2.0g,0.21mmol)上。将混悬液在室温振摇2h。将树脂用dmf(7ml)洗涤10次。用hobt(1.35g,9.99mmol)、哌嗪(6.00g,69.66mmol)在dmf(94ml)中的溶液进行12a中的fmoc保护基的裂
解。因此，在室温下，将树脂与裂解混合物一起孵育5次，每次15min，得到树脂12b。然后将树脂用dmf(7ml)洗涤7次。
[1725]
向7(283mg,1.06mmol)和pybop(552mg,1.06mmol)在dmf(6.5ml)中的溶液中加入diea(185μl,1.06mmol)，将该混合物抽取到树脂12b(2.07g,0.10mmol/g,0.21mmol)上。将该混合物在室温振摇2h。然后将树脂用dmf(7ml)和ch2cl2(7ml)各洗涤10次，真空干燥。
[1726]
通过以下方法实现肽从树脂上的裂解和保护基的除去：将树脂用15ml预冷却(-18℃)的裂解混合物68.5/10/10/5/3.5/1(v/w/v/v/v/v)tfa/dtt/茴香硫醚/苯酚/水/tips处理。将该混合物温热至室温，搅拌2.5h。过滤出树脂，与预冷却的乙醚(-18℃)沉淀粗12d，通过rp-hplc纯化。将合并的hplc级分直接用于下一步。
[1727]
ms:m/z 1172.37＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1172.37)。
[1728]
向合并的12d的hplc产物级分(390ml)中加入58.5ml 0.5m柠檬酸缓冲液(ph＝5.00)和8.9ml 10mm 2,2
’‑
二硫代双(吡啶-n-氧化物)在1/1(v/v)乙腈/水中的溶液。将该混合物在室温搅拌10min，然后用400ml含有0.1％tfa(v/v)的水稀释。通过rp-hplc纯化12e。
[1729]
收率：100mg(17.5μmol,6步的收率8％)cnp-38-连接基-dmb*9tfa
[1730]
ms:m/z 1171.87＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1171.86)。
[1731]
通过以下方法实现dmb保护基的裂解：将65ml预冷却(-18℃)的裂解混合物100/5/3/2/1(v/v/w/v/v)tfa/msa/dtt/水/茴香硫醚加入到12e(100mg,17.5μmol)中，在0℃搅拌3.5h。在预冷却(-18℃)的乙醚中沉淀粗12f。将沉淀物溶解在含有0.1％tfa(v/v)的水中，在室温孵育2h，以便水解任意tfa酯。通过rp-hplc纯化12f。
[1732]
收率：43.4mg(7.92μmol,45％)cnp-38-连接基-硫醇*9tfa
[1733]
ms:m/z 1112.83＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1112.82)。
[1734]
向12f(39.6mg,7.22μmol)在1ml含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液中加入peg 2x10kda马来酰亚胺(sunbright gl2-200ma,1.22g,59.94μmol)在6.16ml含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液，然后加入0.5m乳酸缓冲液(1.41ml,ph＝4.20)。将该混合物在室温搅拌4h。通过rp-hplc纯化缀合物12g。
[1735]
收率：204mg(4.48μmol,57％)缀合物12g*9hcl
[1736]
实施例13
[1737]
peg5kda硫醇13c的合成
[1738]
根据以下方案合成了peg5kda硫醇13c：
[1739][1740]
向13b(58.6mg,0.15mmol)、hobt(22.9mg,0.15mmol)和edc盐酸盐(28.8mg,0.15mmol)在dcm(1.00ml)中的溶液中加入2,4,6-三甲基吡啶(121mg,1.00mmol)。然后加入甲氧基peg胺5kda 13a(500mg,0.10mmol)在dcm(4.00ml)中的溶液，将该混合物在室温搅拌16h。蒸发溶剂，将该混合物溶于acn/水，通过rp-hplc纯化。真空减少溶剂的量，用dcm(1
×
100ml,2
×
50ml)萃取水性残余物。真空减少合并的有机层至20ml。加入tfa(1.6ml)和tes(3.5ml)，将该混合物在室温搅拌4.5h。用乙醚沉淀13c，储存在-20℃过夜，过滤，真空干燥。
[1741]
收率：372mg(72μmol,72％)
[1742]
实施例14
[1743]
持久的n-末端cnp-34peg 5kda缀合物14e的合成
[1744]
根据以下方案合成了缀合物14e：
[1745][1746]
使具有游离的n-末端的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-34,14a(0.78g,70μmol)在dmf中预溶胀30min。将马来酰亚氨基己酸(85.3mg,0.40mmol)、dic(50.9mg,0.40mmol)和oxyma(57.4ml,0.40mmol)在dmf(6ml)中的溶液抽取到树脂上，将混合物在室温振摇30min。然后将偶联用新鲜制备的偶联溶液重复一次。将树脂用dmf和ch2cl2各自洗涤10次，真空干燥，得到14b。
[1747]
通过以下方法实现肽从树脂上的裂解和保护基的除去：在室温下将树脂用6ml裂解混合物100/3/2/1(v/v/v/v)tfa/tes/水/茴香硫醚处理1.5h，用预冷却(-18℃)的乙醚沉淀出粗肽。
[1748]
ms:m/z 937.77＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝937.74)。
[1749]
将沉淀物溶解在15ml tfa中。加入二苯基亚砜(68.06mg,0.34mmol)和茴香醚(0.18ml,1.68mmol)在5ml tfa中的溶液。加入三氯甲基硅烷(0.47ml,4.17mmol)，将该混合物在室温搅拌15min。加入氟化铵(0.38g,10.3mmol)。将该溶液再搅拌2min。用预冷却(-18
℃)的乙醚沉淀粗物质，通过rp-hplc纯化，得到14d。
[1750]
收率：8.30mg(1.78μmol,82％纯度,3步的收率1.4％)cnp-34-malhx*8tfa
[1751]
ms:m/z 937.26＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝937.23)。
[1752]
向14d(7.34mg,1.57μmol)在200μl含有0.1％tfa(v/v)的1/1(v/v)乙腈/水中的溶液中加入13c(20mg,3.90μmol)在200μl含有0.1％tfa(v/v)的水中的溶液，然后加入200μl 0.5m乙酸盐缓冲液(ph＝5.00)。将该混合物在室温孵育30min。通过rp-hplc纯化缀合物14e。
[1753]
收率：9.92mg(1.01μmol,57％)缀合物14e*8tfa
[1754]
实施例15
[1755]
持久的n-末端cnp-38 peg 5kda缀合物15e的合成
[1756]
根据以下方案合成缀合物15e：
[1757][1758]
如针对14d所述的那样合成化合物15d，不同之处在于用具有游离的n-末端的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-38,15a(1.34g,0.12mmol)作为原料。
[1759]
收率：15.6mg(2.94μmol,6.6％)cnp-38-malhx*9tfa
[1760]
ms:m/z 1064.05＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1064.04)。
[1761]
如针对14e所述的那样合成化合物15e，不同之处在于用15d(8.34g,1.58mmol)作
为原料。
[1762]
收率：9.47mg(0.91μmol,31％)缀合物15e*9tfa
[1763]
实施例16
[1764]
持久的lys12 cnp-34peg 5kda缀合物16e的合成
[1765]
根据以下方案合成了缀合物16e：
[1766][1767]
根据材料和方法中给出的操作对1.00g(0.10mmol)具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys12的侧链的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-34进行ivdde脱保护，得到16a。
[1768]
如针对16d所述的那样合成化合物16d，不同这之处在于用树脂16a(1.00g,0.10mmol)作为原料。
[1769]
收率：17.0mg(3.65μmol,3.7％)cnp-34-lys12-malhx*8tfa
[1770]
ms:m/z 937.25＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝937.23)。
[1771]
如针对16e所述的那样合成化合物16e，不同之处在于用16d(17mg,3.65μmol)作为原料。
[1772]
收率：12.2mg(1.25μmol,34％)缀合物16e*8tfa
[1773]
实施例17
[1774]
持久的lys16 cnp-34peg 5kda缀合物17e的合成
[1775]
根据以下方案合成了缀合物17e：
[1776][1777]
根据材料和方法中给出的操作对0.78g(0.07mmol)具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys16的侧链的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-34进行ivdde脱保护，得到17a。
[1778]
如针对14d所述的那样合成化合物17d，不同之处在于用树脂17a(0.78g,0.13mmol)作为原料。
[1779]
收率：5.39mg(1.16μmol,1.7％)cnp-34-lys16-malhx*8tfa
[1780]
ms:m/z 937.26＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝937.23)。
[1781]
如针对14e所述的那样合成化合物17e，不同之处在于用树脂17d(5.39mg,1.16μmol)作为原料。
[1782]
收率：10.7mg(1.09μmol,94％)缀合物17e*8tfa
[1783]
实施例18
[1784]
持久的lys22 cnp-34peg 5kda缀合物18e的合成
[1785]
根据以下方案合成了缀合物18e：
[1786][1787]
根据材料和方法中给出的操作对1.07g(0.11mmol)具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys22的侧链的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-34进行ivdde脱保护，得到18a。
[1788]
如针对14d所述的那样合成化合物18d，不同之处在于用树脂18a(1.07g,0.11mmol)作为原料。
[1789]
收率：5.20mg(1.12μmol,1.0％)cnp-34-lys22-malhx*8tfa
[1790]
ms:m/z 937.26＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝937.23)。
[1791]
如针对14e所述的那样合成化合物18e，不同之处在于用树脂18d(5.2mg,1.12μmol)作为原料。
[1792]
收率：4.20mg(0.43μmol,38％)缀合物18e*8tfa
[1793]
实施例19
[1794]
持久的lys26 cnp-38 peg 5kda缀合物19e的合成
[1795]
根据以下方案合成了缀合物19e：
[1796][1797]
根据材料和方法中给出的操作对(0.865g,0.10mmol)具有boc保护的n-末端和ivdde保护的lys26的侧链的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-38进行ivdde脱保护，得到19a。
[1798]
如针对14d所述的那样合成化合物19d，不同之处在于用树脂19a(0.865g,0.10mmol)作为原料。
[1799]
收率：10.3mg(1.95μmol,2.0％)cnp-38-lys26-malhx*9tfa
[1800]
ms:m/z 1064.05＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1064.04)。
[1801]
如针对14e所述的那样合成化合物19e，不同之处在于用树脂19d(4.70mg,1.10μmol)作为原料。
[1802]
收率：3.20mg(0.31μmol,28％)缀合物19e*9tfa
[1803]
实施例20
[1804]
体外释放动力学
[1805]
将cnp缀合物10f和11i以约1mg缀合物/ml的浓度溶于含有3mm edta和10mm甲硫氨酸的ph 7.4的pbs缓冲液中。将该溶液无菌过滤并在37℃下孵育。在各时间点取出等分试样并通过rp-hplc和esi-ms分析。将与释放的cnp相关的uv信号积分并且对孵育时间作图。
[1806]
用曲线-拟合软件估算相应的释放半衰期。
[1807]
结果：
[1808]
对于缀合物10f，得到8.5d(
±
1d)的释放半衰期。
[1809]
对于缀合物11i，得到9.5d(
±
1.5d)的释放半衰期。
[1810]
实施例21
[1811]
用中性内肽酶体外消化cnp变体
[1812]
为了测定在中性内肽酶(nep)存在下包括不同肽链长度和用不同peg化位点和peg分子进行的peg化的各种cnp变体的体外稳定性，建立了nep消化测定法。该测定法监测了未消化的cnp变体(用内标pfp标准化)以t
0-时间点为参比随时间的减少。
[1813]
详细而言，将重组人nep(2.5μg/ml终浓度)和标准五氟苯酚(pfp；40μg/ml终浓度)加入到在消化缓冲液(50mm tris-hcl,ph 7.4,10mm nacl)中的cnp变体(100μg cnp当量/ml)中。将该溶液在37℃和500rpm下孵育长达4天。在不同的时间间隔取样。通过加入tcep(三(2-羧基乙基)膦；25mm终浓度)并且将该混合物在95℃、500rpm孵育5分钟用合并的还原和热变性使反应停止。使用hplc-ms归属所得的反应产物。通过cnp和pfp的hplc-uv峰面积随时间的比率变化计算每个cnp变体的半衰期。为补偿蛋白酶活性的变化，在每批测定中进行cnp-38或cnp-34消化作为参比。
[1814]
表1列出了基于体外nep裂解测定法的不同长度的、具有与不同侧链连接的各种peg分子的各种cnp变体的半衰期。
[1815]
化合物cnp-变体peg化标准化的半衰期[h]cnp-221cnp-22-0.32cnp-341cnp-34-4.1514e1cnp-345kda peg,n-末端4天后几乎无蛋白酶解17e1cnp 345kda peg,lys1654.2318e1cnp-345kda peg,lys2238.8716e1cnp-345kda peg,lys12无评估可能
ꢀꢀꢀꢀ
cnp-382cnp-38-12.1019e2cnp-385kda peg,lys2662.7615e2cnp-385kda peg,n-末端4天后几乎无蛋白酶解12g2cnp-384x10kda peg,-lys264天后几乎无蛋白酶解
[1816]
1)由于实验之间nep催化活性的变化，形成了所有cnp-34半衰期测量值的平均值(4.15h)，并且使用系数将cnp-34缀合物的半衰期测量值对该平均值标准化以计算调整的t
1/2
。
[1817]
2)由于实验之间nep催化活性的变化，形成了所有cnp-38半衰期测量值的平均值(12.10h)，并且使用系数将cnp-38缀合物的半衰期测量值对该平均值标准化以计算调整的t
1/2
。
[1818]
对nep的抗性的排列顺序如下：较长的cnp变体(cnp-38)比较短的cnp变体(cnp-34)更稳定，而较短的cnp变体(cnp-34)进而比更短的cnp-22更稳定。peg连接位点的顺序如下：n-末端》与环相邻》环。因此，对于所测试的缀合物，针对用nep进行的蛋白酶解消化，n-末端peg连接赋予了最高的稳定性。随着peg大小的增加，可增加在lys26处peg化的cnp-38
的稳定性。
[1819]
实施例22
[1820]
用cnp变体在nih-3t3细胞中进行功能性cgmp刺激
[1821]
在用nih-3t3细胞(鼠胚胎成纤维细胞系)进行的基于细胞的测定法中测定了cnp变体的功能活性。这些细胞在细胞表面上内源性地表达npr-b受体。用cnp刺激npr-b受体导致细胞内产生第二信使cgmp，其用市售cgmp测定法检测。在含有5％fbs和5mm谷氨酰胺的dmem f-12培养基中在37℃和5％co2下常规培养nih-3t3细胞。对于每次测定，将50000个细胞重新混悬于刺激缓冲液(具有ibmx的dulbecco pbs)中并与不同浓度的cnp变体一起孵育。cnp(在含有0.2％bsa的pbs中进行稀释)。在37℃和5％co2下孵育30min后，将细胞裂解并用市售cgmp tr-fret测定法(cisbio,cgmp试剂盒,目录号62gm2peb)测定cgmp水平。peg化的cnp变体在相同实验批次中始终与非peg化形式相比较被表征。如果可能，通过所得剂量-响应曲线的相对ec
50-参数(具有共同斜率的限制模型)进行残留活性的评估。
[1822]
表2：在基于细胞的测定法中相对于非-peg化的cnp变体所测定的peg化的cnp变体的残留npr-b活性
[1823]
化合物cnp变体peg化ec
50
化合物/ec
50 cnp-3815ecnp-385kda peg,n-末端》519ecnp-385kda peg,lys26》10012gcnp-384x10kda peg,lys26》》10011icnp-384x10kda peg,lys26》》10010fcnp-382x20kda peg,lys26》》100
[1824]
比较所测试的peg连接位点，在lys26处的连接(环-赖氨酸)显示出了最高的功能活性降低，而n-末端连接显示出了相对高的残留功能活性值。增加peg的大小导致cnp分子的更好的屏蔽和更低的残留功能活性。
[1825]
实施例23
[1826]
通过每日皮下快速推注或通过连续皮下输注用cnp-38治疗5周后fvb小鼠的生长研究
[1827]
进行本研究以便测试每日皮下快速推注与连续皮下输注cnp-38对动物生长的影响。对21-至22-日龄野生型fvb雄性小鼠(n＝9/组)通过每日皮下快速推注或在肩胛区持续皮下输注给予50nmol/kg/d cnp-38或媒介物(含有5％蔗糖和1％苄醇的30mm乙酸钠ph 4)，给予35天。连续输注在第1-2周通过alzet渗透泵1002型进行，然后在第3-5周用1004型进行。在研究第7天(1002型泵)或研究第25天(1004型泵)针对平均动物重量调节泵中的cnp-38浓度。根据总的身体长度测量和右股骨和胫骨的x-射线测量在第35天对生长进行测定。
[1828]
通过每日皮下快速推注治疗的动物的结果：在第35天，与媒介物治疗的动物相比，cnp-38治疗的动物的总身体长度为110.2％，右股骨长度为105.6％，右胫骨长度为104.0％。
[1829]
通过连续皮下输注治疗的动物的结果：在第35天，与媒介物治疗的动物相比，cnp-38治疗的动物的总身体长度为121.7％，右股骨长度为107.5％，右胫骨长度为112.2％。
[1830]
结论是：cnp-38的连续皮下输注或相关缓慢释放制剂(例如缓释cnp-38前药)在引起四肢和中轴骨骼的生长中至少与每日皮下快速推注一样有效。
[1831]
实施例24
[1832]
持久的lys26 cnp-38 peg4x10kda缀合物12g在短尾猴中的药动学研究
[1833]
进行本研究以便显示12g作为缓慢释放cnp-38的前药的模型化合物在短尾猴中的适用性。雄性短尾猴(2-4岁龄,3.5-4.1kg)以0.146mg cnp-38eq/天的剂量接受12g的单次静脉内(n＝3只动物)或单次皮下(n＝2只动物)施用。在剂量后长达168h采集血样，并产生血浆。如材料和方法中所述的那样，通过对胰蛋白酶消化后的n-末端特征肽(序列：lqehpnar)和c-末端特征肽(序列：igsmsglgc)进行定量测定了血浆总的cnp-38浓度。
[1834]
结果：在施用期间和施用后，剂量施用耐受性良好，没有明显的不适迹象。整个研究过程中在任何时间都没有观察到剂量部位反应。在静脉内注射后，在15min(最早的分析时间点)观察到cnp-38t
max
，然后cnp-38含量缓慢衰减，半衰期为约24h。皮下注射后，cnp-38浓度在t
max 48h达到峰值。在168h时cnp-38浓度仍然高达c
max
的约50％。生物利用度为约50％。
[1835]
在直至剂量后168h对于n-末端和c-末端特征肽得到了类似的pk曲线，这表明缀合物中存在完整的cnp-38。
[1836]
历经数天的有利的长时间持续的pk和缀合物中cnp-38的稳定性表明持久的模型化合物lys26 cnp-38 peg 4x10kda缀合物12g作为皮下注射后缓慢释放cnp-38的前药的适用性。可以得出结论，具有短暂lys26连接的cnp-38(例如11i)的类似的缀合物是适合的cnp-38前药，其历经数天提供了长时间持续水平的释放的生物活性cnp-38。
[1837]
实施例25
[1838]
短尾猴中短暂缀合物10f和11i的药动学研究
[1839]
进行本研究以便显示10f和11i作为缓慢释放cnp-38的前药在短尾猴中的适用性。雄性短尾猴(2-4岁龄，3-5kg)以0.146mg cnp-38eq/kg的剂量接受化合物10f的单次皮下施用(n＝3只动物)或11i的单次皮下(n＝3只动物)施用。在剂量后长达168h采集血样，并产生血浆。如实施例24中所述的那样分析总的cnp-38含量的血浆水平。为了分析游离cnp-38的血浆含量，在抽取后通过加入20体积％的0.5m柠檬酸钠缓冲液ph 4而将血液样品酸化以停止cnp-38从缀合物中的进一步释放。血浆中的游离cnp-38水平可以例如如文献(美国专利8,377,884b2)中所述或通过lc-ms/ms使用结合cnp环区域的cnp抗体用elisa进行测定。
[1840]
结果：在施用期间和施用后，剂量施用耐受性良好，没有明显的不适迹象。整个研究过程中在任何时间都没有观察到剂量部位反应。在剂量施用后，在12h观察到化合物10f的总cnp-38t
max
，在24h观察到化合物11i的总cnp-38t
max
。对于化合物10f，120h后总的cnp-38血浆水平低于loq(100ng/ml,c-末端肽)，而对于11i，168h(c-末端肽)后血浆水平仍然高达c
max
的约30％。对于化合物11i，发现c-末端和n-末端肽具有类似的3-4d的末端半衰期，这表明缀合物中存在完整的cnp-38。
[1841]
结论：历经数天的有利的长时间持续的pk和缀合物11i中cnp-38的稳定性表明其作为cnp-38前药历经数天提供释放的生物活性cnp-38的长时间持续的水平的适用性。
[1842]
实施例27
[1843]
荧光素标记的cnp-38 27d的合成和npr-c亲和性测定
[1844]
根据以下方案合成了化合物27d：
[1845][1846]
使具有游离的n-末端的在tcp tentagel树脂上的侧链被保护的cnp-38 27a(0.50g,35.4μmol)在dmf中预溶胀30min。将5(6)-羧基荧光素-n-琥珀酰亚胺酯(41.9mg,88.5μmol)和diea(30.9μl,177μmol)在dmf(1.6ml)中的溶液抽取到树脂上，将该混合物在室温振摇30min。然后将树脂用dmf和ch2cl2各洗涤10次，真空干燥，得到27b。
[1847]
通过将树脂用7ml裂解混合物100/3/3/2/1(v/w/v/v/v)tfa/dtt/tes/水/茴香硫醚在室温处理1h实现肽从树脂上的裂解和保护基的除去。滤出树脂，用预冷却(-18℃)的乙醚沉淀粗27c，通过rp-hplc纯化，得到27c。将合并的hplc级分直接用于下一步。
[1848]
ms:m/z 1105.80＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1105.81)。
[1849]
向合并的27c的hplc产物级分(115ml)中加入30ml 0.5m柠檬酸缓冲液(ph＝5.00)和8ml 10mm 2,2
’‑
二硫代双(吡啶-n-氧化物)在1/1(v/v)乙腈/水中的溶液。将该混合物在室温搅拌60min，然后用350ml含有0.1％tfa(v/v)的水稀释。通过rp-hplc纯化27d。
[1850]
收率:16.1mg(2.90μmol,3步的收率为8.2％)标记的cnp-38*10tfa
[1851]
ms:m/z 1105.30＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1105.30).
[1852]
为了进行npr-c亲和性测定，开发了表达npr-c的hek293细胞系。将npr-c序列(bc131540)的编码区克隆入用于组成型受体表达的cmv启动子下的慢病毒(lentiviral)载
体中。位于嘌罗霉素抗性载体上的双顺反子(bicistronic)元件被用作真核选择标记物。转导后，使稳定生长的细胞库进行qrt-pcr以与亲本hek293细胞相比确认受体mrna表达。将表达npr-c的细胞库扩增并冷冻，作为cnp样品测试的主细胞库。
[1853]
为了测定，从细胞烧瓶底部将生长的细胞胰蛋白酶消化，计数，接种于96-孔板(1.5
×
105/孔)中并离心。弃去上清液。将cnp标准品和样品在pbs0.2％bsa中连续稀释9步，一式两份地转移至微量培养板中并与细胞混合。在室温下孵育30min后，将荧光素标记的cnp 27d以恒定浓度加入到每个孔中，将细胞在室温下再孵育45min。随后，使用流式细胞术、使用读出的fitc通道的平均荧光强度对细胞进行分析(fl1,beckman coulter fc500mpl)。
[1854]
用分析软件(pla 2.0)使用用于效能和/或ic
50
计算的4pl拟合产生了标准曲线和样品曲线。
[1855]
表3：在基于细胞的测定法中与cnp-38相比peg化的cnp-38变体的残留npr-c亲和性
[1856][1857]
实施例29
[1858]
asn-连接基试剂29b的合成
[1859]
根据以下方案合成了asn-连接基试剂29b：
[1860][1861]
向1b(12.85g,16.14mmol)在异丙醇(238ml)中的溶液中加入h2o(77.5ml)和lioh(2.32g,96.87mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h。此后，用甲苯(300ml)稀释反应混合物。分离各相，用0.1m hcl(200ml)洗涤有机相三次。再次分离各相。用甲苯(100ml)萃取水相三次。在酸性水相中发现产物，通过添加4n naoh将该相的ph值调至ph 8.5。然后用ch2cl2(200ml)萃取水相三次。用盐水(50ml)洗涤有机相，用na2so4干燥，过滤。蒸发溶剂后分离得到29a，将其不经进一步纯化即用于下一反应。
[1862]
收率:6.46g(13.36mmol,83％)
[1863]
ms:m/z 484.06＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝483.26)。
[1864]
向6-马来酰亚氨基己酸(1.73g，8.19mmol)在thf(70ml)中的溶液中加入pybop(4.26g，8.19mmol)和diea(3.89ml，22.33mmol)。然后，将反应混合物在室温下搅拌2h。此后，将29a(3.60g,7.44mmol)溶于thf，加入反应混合物中。将反应在室温下搅拌过夜。然后，加入甲基叔丁基醚(300ml)。将有机相用0.1m hcl溶液(200ml)洗涤2次。将合并的水相用甲基叔丁基醚(200ml)萃取2次。将合并的有机相用盐水(150ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤。将溶剂真空蒸发。通过快速色谱法纯化29b。
[1865]
收率：3.34g(4.94mmol,66％)
[1866]
ms:m/z 677.34＝[m h]

,(计算的单同位素质量＝676.33)。
[1867]
实施例30
[1868]
4-臂-硫醇-peg 40kda 30c的合成
[1869]
根据以下方案合成了4-臂-硫醇peg30c：
[1870][1871]
向6-三苯甲基巯基-己酸(111.72mg,286.02μmol)、hobt(43.81mg,286.06μmol)和edc*hcl(54.84mg,286.06μmol)在ch2cl2(5ml)中的溶液中加入2,4,6-三甲基吡啶(251μl,1.91mmol)。然后向该溶液中加入4-臂氨基peg 40kda(nof,sunbright pte-400pa,1.30g,31.78μmol)在ch2cl2(10ml)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。此后，蒸发溶剂(水浴30℃)。通过rp-hplc纯化30b。
[1872]
收率：650.5mg(48％).
[1873]
通过添加裂解混合物(dtt 500mg/tfa 500μl/水500μl,tes 2.5ml/hfip 5.0ml/ch2cl
2 25.0ml)至30b(500mg,11.79μmol)中并且在室温孵育30min实现trt保护基的裂解。在用预冷却(-18℃)的乙醚沉淀后得到30c。
[1874]
收率：401.3mg(82％；93.3％纯度)。
[1875]
实施例31
[1876]
缀合物31d的合成
[1877]
根据以下方案合成了缀合物31d：
[1878]
[1879][1880]
将连接基试剂29b(3.82g,5.64mmol)、oxymapure(802mg,5.64mmol)和dic(868μl,5.64mmol)在dmf(42.5ml)中的溶液中加入到树脂10a(18g,1.85mmol)中。将该混悬液在室
温振摇100min，得到树脂31a。将树脂用dmf(10ml)洗涤10次，用dcm(10ml)洗涤10次，真空干燥15min。通过将树脂用135ml裂解混合物100/3/2/1(v/v/v/v)tfa/tes/水/茴香硫醚处理实现肽从树脂上的裂解和保护基的除去。将混合物在室温搅拌60min。在预冷却(-18℃)的乙醚中沉淀出粗31b。
[1881]
将沉淀物溶于tfa(423ml)。向该溶液中加入二苯基亚砜(1.87g,9.25mmol)和茴香醚(5.05ml,46.25mmol)在tfa(40ml)中的溶液。此后，加入三氯甲基硅烷(13.3ml,114.7mmol)，将反应混合物在室温搅拌15min。然后加入氟化铵(10.96g,296mmol)，将该溶液在室温在水浴中搅拌2min。在预冷却的乙醚(-18℃)中沉淀出粗31c，通过rp-hplc纯化。
[1882]
收率：187mg(34.2μmol,16％)cnp-38-连接基*9tfa
[1883]
ms:m/z 1110.33＝[m 4h]
4
,(计算的单同位素质量[m 4h]
4
＝1110.33)。
[1884]
向31c(88.0mg,16.1μmol)在4.40ml含有0.1％tfa(v/v)的mecn/h2o(1:1)中的溶液中加入4-臂-硫醇-peg 40kda 30c(107.35mg,2.59μmol)在1.45ml含有0.1％tfa和1mm edta的水中的溶液中，然后加入0.5m含有3mm edta的磷酸盐缓冲液(1.46ml,ph 6.0)中。将该混合物在室温孵育2h。通过rp-hplc纯化缀合物31d。
[1885]
收率：129mg(2.09μmol,80％)缀合物16d*36tfa
[1886]
实施例32
[1887]
dmb保护的6-巯基己酸7的供替代选择的合成
[1888]
根据以下方案合成了dmb-保护的巯基己酸7：
[1889][1890][1891]
在20℃向6-溴己酸(100g，0.513mol)在etoh(1.0l)中的溶液中一次性加入硫脲(47g，0.615mol)。然后，将混悬液加热至78℃(形成澄清的溶液)，搅拌12小时。用恒压漏斗滴加naoh(62g,1.54mol)在h2o(1.0l)中的溶液。此后，继续再回流2h。将反应混合物倾入h2o(1l)中，用etoac(1l)萃取。将水相用浓盐酸酸化至ph＝2，然后用etoac(500ml)萃取3次。将合并的有机相用盐水(400ml)洗涤。此后，将合并的有机相用na2so4干燥，过滤，在45℃减压蒸发溶剂。将6-巯基己酸不经进一步纯化即用于下一反应。
[1892]
收率：62g(粗品)
[1893]1h-nmr(400mhz,cdcl3):
[1894]
δ＝2.50
–
2.55(q,j＝7.2hz,2h),2.36(t,j＝7.6hz,2h),1.66
–
1.61(m,4h),1.41
–
1.49(m,2h),1.34(t,j＝7.6hz,1h)ppm.
[1895]
将6-巯基己酸(27.0g，0.182mol)装入具有无水thf(540ml)的1l三颈底烧瓶中。将溶液通过冷冻-泵-解冻技术脱气，然后用外部冰浴冷却至0℃。在0℃下历经30分钟用匙角(spoon horn)加入nah(18.2,455.4mmol，4.16ml,60％纯度)。然后，一次性加入2,6-二甲基苄基氯(28.2g，0.182mol)。将反应混合物温热至20℃，搅拌12h。将反应混合物倾入h2o(540ml)中，用mtbe(540ml)萃取2次。此后，将水相用浓盐酸酸化至ph＝2，然后用mtbe(500ml)萃取3次。将合并的有机相用盐水(500ml)洗涤，用na2so4干燥，过滤。通过在45℃减压蒸发溶剂分离得到7，为黄色油状物。
[1896]
收率：41.5g(0.16mol,85％)
[1897]1h-nmr(400mhz,dmso-d6):
[1898]
δ＝11.99(s,1h),7.05
–
7.07(d,j＝6.8hz,1h),6.97(s,1h),6.91
–
6.92(d,j＝6.8hz,1h),3.66(s,2h),2.38
–
2.39(m,2h),2.29(s,3h),2.23(s,3h),2.16
–
2.19(m,2h),1.40
–
1.55(m,4h),1.22
–
1.38(m,2h)ppm
[1899]
ms(负模式):m/z 265.0＝[m-h]-,(计算的单同位素质量＝265.13).
[1900]
实施例33
[1901]
连接基试剂33c的合成
[1902]
根据以下方案合成了连接基试剂33c：
[1903][1904]
平行进行4个反应。向化合物1b(60g,75mmol)在ch2cl2(300ml)中的溶液中加入哌啶(58g,0.68mol,67ml)。将反应混合物在室温搅拌4h。合并平行进行的4个反应以进行后处理。用h2o(500ml)稀释反应混合物，用0.5n hcl溶液调至ph＝3～4。分离有机相，用ch2cl2(800ml)萃取水相。用盐水(400ml)和5％饱和nahco3溶液(400ml)依次洗涤合并的有机相。然后，将合并的有机相用na2so4干燥，过滤，真空蒸发溶剂。通过硅胶(100-200目)色谱法使用dcm/meoh(20/1-4/1)纯化33a。
[1905]
收率：150g(87％)
[1906]1h-nmr(400mhz，dmso-d6)：
[1907]
δ＝7.34-7.38(m，4h)，6.25-7.29(m，2h)，5.08-5.19(m，2h)，4.60-4.68(m，1h)，4.32-4.40(m，2h)，3.73-3.79(m，9h)，3.10-3.27(m，3h)，2.65-3.05(m，8h)，1.36(s，9h)ppm.
[1908]
平行进行两个反应。历时30min的时间向fmoc-l-lys(fmoc)-oh(79g，0.13mol)、33a(70g，0.12mol)、4-乙基-吗啉(70g，0.61mol，77ml)在mecn(850ml)中的溶液中滴加t3p(50％的etoac溶液；140g，0.22m0l)。添加后，将反应混合物在室温搅拌18h。合并平行进行的两个反应以进行后处理。用h2o/ch2cl2(1∶1，2l)稀释反应混合物，然后用0.5n hcl溶液调至ph＝3～4。分离有机相，用ch2cl2(1l)萃取水相。用盐水(800ml)和5％nahco3溶液(800ml)依次洗涤合并的有机相。然后，将合并的有机相用na2so4干燥，过滤，真空蒸发溶剂。通过硅胶(100-200目)色谱法用石油醚/乙酸乙酯(5/1-1/1)纯化33b。
[1909]
收率：160g(57％)
[1910]1h-nmr(400mhz，dmso-d6)：
[1911]
δ＝7.80-7.90(m，4h)，7.61-7.68(m，5h)，7.20-7.40(m，14h)，6.14-6.28(m，3h)，5.01-5.07(m，2h)，4.15-4.36(m，8h)，3.71-3.77(m，9h)，2.80-3.53(m，9h)，2.66-2.75(m，4h)，2.36-2.39(m，1h)，1.52-1.55(m，2h)，0.88-1.19(m，13h)ppm.
[1912]
平行进行两个反应。在2l的氢化瓶中向33b(60g，52mmol)在meoh(1.2l)中的溶液中加入10％pd/c(18g)。将反应混合物脱气，用h2吹扫三次，然后在25℃、h
2-气氛(45psi)下搅拌2.5h。合并平行进行的两个反应以进行后处理。用硅藻土过滤反应混合物，真空浓缩滤液，得到粗品33c。通过硅胶色谱法(100-200目)用dcm/meoh(200/1-100/3)纯化33c。
[1913]
收率：70g(63％)
[1914]1h-nmr(400mhz.dmso-d6)：
[1915]
δ＝12.15(s，1h)，7.87-7.89(m，4h)，7.50-7.70(m，5h)，7.31-7.40(m，9h)，6.20-6.23(m，2h)，4.13-4.36(m，10h)，3.70-3.77(m，9h)，2.62-3.10(m，12h)，2.30-2.34(m，1h)，2.14-2.18(m，1h)，1.50-1.58(m，2h)，1.25-1.34(m，13h)ppm
[1916]
ms：m/z 1056.4＝[m h]

，(计算的单同位素质量＝1056.50)。
[1917]
实施例34
[1918]
11c的供替代选择的合成
[1919]
根据以下方案合成了化合物11c：
[1920][1921]
将连接基试剂33c(3.21g，3.04mmol)、pybop(1.58g，3.04mmol)和dipea(848ml，4.86mmol)在dmf(24.0ml)中的溶液在室温孵育5min，然后加入到树脂10a(12g，1.21mmol)中。将混悬液在室温振摇2.5h。将树脂用dmf(10ml)洗涤10次，用dcm(10ml)洗涤10次，真空干燥60min。
[1922]
实施例35
[1923]
cnp-38和缀合物11i：在清醒小鼠中的心血管作用的评价(皮下施用)
[1924]
本研究的目的是评估与引起遥测小鼠的血液动力学副作用(血压降低)的cnp-38
的剂量水平等价的剂量水平的11i的血液动力学副作用。
[1925]
给雄性crl：cd1(icr)小鼠(开始给药时，年龄范围8-13周，体重范围27.3-35.6g)在颈动脉中手术植入ta11pa-c10遥测发射器(data sciences international(dsi))。将发射器的主体皮下放置在小鼠的侧腹。在给药时机之间以至少72小时拉丁方形交叉设计对小鼠皮下给药：1)媒介物(10mm琥珀酸酯，46.0g/l甘露醇，ph 4.00)，2)cnp-38(800μg cnp-38/kg，10mm琥珀酸盐，46.0g/l甘露醇，ph 4.00)，或3)11i(800μg cnp-38eq/kg，10mm琥珀酸盐，46.0g/l甘露醇，ph 4.00)。在每个剂量水平包括至少4只小鼠。使用与dsitm ponemah数据采集和分析系统连接的数字数据俘获系统记录血压(收缩压(sap),舒张压(dap)和平均值(map)以及心率(hr,源自血压)。俘获系统使得能记录心血管参数，同时使小鼠处于各自的笼中。在各测试期的当天，将动物称重，并且在给药之前至少60min进行剂量前记录。使每只小鼠返回到居住笼中，记录剂量后约48小时的心血管参数。在以下时间点报告血压和hr：在剂量后-30、-20、-10、5、15和30min以及剂量后1、2、6、12、18、24、30、36、42和48小时。每个时间点表示为该时间点之前5分钟记录的平均值。选择监测期以涵盖t
max
前和t
max
后对测试品的暴露。
[1926]
结果：与剂量前的值相比，媒介物给药的动物在剂量后5、15和30分钟的采样时间点具有增加的map。这被认为是处理和给药所造成的正常生理反应。对于剂量后5、15和30min的采样时间点用11i给药的动物也观察到map的相同生理学增加。在用cnp-38给药的4只动物的3只中，map的生理学增加不明显。相反，4只用cnp-38给药的动物中有3只在剂量后5、15和30min的采样时间点显示出了map显著降低。在其余的10个时间点，在用媒介物、cnp-38和11i给药的动物之间map没有差异。
[1927]
map(mmhg)剂量前至剂量后30min(平均值
±
sd)
[1928][1929][1930]
对于所有剂量水平，sap和dap观察到类似的趋势。hr不受cnp-38或11i治疗影响。
[1931]
结论是，如用等价剂量的cnp-38所观察到的那样，皮下施用11i不降低血压。
[1932]
实施例36
[1933]
皮下单剂量施用于短尾猴后cnp-38的药动学特性
[1934]
进行该研究以便测试在短尾猴中皮下(s.c.)施用后cnp-38的药动学。三只雄性猴(2-4岁龄，3-5kg)以40μg/kg cnp-38的剂量接受单次s.c.注射。在剂量后5、10、15、30、45分钟和1、2、4、8小时采集血样。
[1935]
方法：使用市售竞争性放射免疫测定法(rk-012-03,phoenix pharmaceuticals,ca)分析cnp的血浆水平。该测定法基本上如制造商所述的那样被应用。该测定法基于125i-标记的cnp(试剂盒中提供的)和未标记的cnp(来自研究样品或校正物)之间与抗-cnp抗体
的竞争性结合。当样品中cnp的浓度增加时，能结合抗体的125i-标记的cnp的量减少。通过测定作为肽浓度函数的结合的125i-标记的cnp的量，可以构建校正曲线，从中能确定样品中肽的浓度。
[1936]
对所提供的测定法方案进行几点改变。这些改变包括使用内部cnp校正物和qc样品以确保测定运行之间的一致性。为了缩短测定法的持续时间，使样品与抗体的初始孵育在室温下进行5小时(而不是在4℃下进行16-24小时)。由于猴血浆中的基质作用，将最小的所需稀释度设定为1:10，从而产生150-1080pg/ml cnp的测定范围。
[1937]
结果：给短尾猴施用cnp-38耐受性良好。在s.c.注射后，在10min时观察到cnp-38的中值t
max
，平均半衰期是约7min。
[1938]
pk参数结果t
max
(中位值)10minc
max
(平均值)7.9ng/mlauc
tlast
(平均值)2.5h*ng/ml半衰期(平均值)6.6min
[1939]
实施例37
[1940]
皮下单剂量施用于短尾猴后缀合物11i的药动学特性
[1941]
进行本研究以便研究在短尾猴中s.c.施用后11i的药动学。四只雄性动物(2-4岁龄,3-5kg)以40μg cnp-38eq/kg的剂量接受单次s.c.注射的11i。在剂量后长达168h采集血样并产生血浆(liheparin)。通过lc-ms/ms测定总cnp-38浓度。
[1942]
方法：术语“总cnp-38”是指游离的cnp-38和在cnp-38缀合物中结合的cnp-38的组合。在胰蛋白酶消化和二硫键还原后，通过对c-末端特征肽(序列：igsmsglgc)进行定量测定了血浆总cnp-38浓度。
[1943]
通过使用经esi探针与agilent 6460triple quad质谱仪偶联的agilent 1290uplc进行了lc-ms分析。在带有预滤器的waters acquity beh c18分析柱(50
×
1.0mm i.d.,1.7μm粒径,)上以0.5ml/min的流速(t＝45℃)进行色谱法。使用含有0.1％甲酸(v/v)的水(超纯≤500ppt钠级)作为流动相a，使用含有0.1％甲酸的乙腈(ulc/ms级)作为流动相b。梯度系统包括：短等度步骤，初始参数是0.1％b，0.5min，然后在1.5min中从0.1％b线性增加至30％b。在多反应监测(mrm)模式下进行质量分析，监测离子化反应m/z 824.5[m h]
1
到515.2。使用内标氘代cnp-38缀合物。
[1944]
如下在空白血浆中制备了cnp-38缀合物的校正标准品：首先将解冻的li-肝素短尾猴血浆匀浆，然后离心5分钟。将cnp-38缀合物制剂在50％甲醇/50％水/0.1％甲酸(v/v/v)中稀释成含有0.103-51.28μg/ml(cnp-38eq.)的8个不同的校正工作溶液。将所述工作溶液以10.3ng/ml(cnp-38eq.)至5128ng/ml(cnp-38eq.)的浓度掺入空白血浆中。用这些标准品生成校正曲线。使用加权(1/x2)线性回归基于分析物与内标峰面积比产生校正曲线，通过对校准曲线的反向计算来确定样品浓度。
[1945]
对于样品制备，通过将200μl预冷却(0℃)的乙腈加入到50μl血浆样品和10μl内标溶液(在50％甲醇/50％水/0.1％甲酸(v/v/v)中的2.8μg/ml cnp-38eq.)中进行蛋白质沉淀。将200μl上清液转移到新的孔-板中并蒸发至干(在35℃温和的氮气流下)。对于重构溶剂，将100μg胰蛋白酶(订单号v5111,promega gmbh,mannheim,德国)溶于100μl 10mm乙酸
中。加入2.5ml tris缓冲液和500μl甲醇。将50μl得到的重构溶剂加入到孔-板的每个腔室中。在37℃孵育(带有thermotop的eppendorf thermomixer)3小时后，将5μl 0.5m tcep溶液添加至各腔室并在37℃下再孵育30min。将样品冷却至室温后，加入2μl 60％甲酸水溶液。将10μl进样到uhplc-ms系统中。结果：对短尾猴施用11i耐受性良好。
[1946]
在s.c.注射后11i中值t
max
是36h，平均半衰期是107h。
[1947]
pk参数结果t
max
(中位值)36小时c
max
(平均值)316ng/mlauc
tlast
(平均值)38,051h*ng/ml半衰期(平均值)107小时
[1948]
实施例38
[1949]
使用释放的cnp进行的在nih-3t3细胞中的功能性cgmp刺激
[1950]
如实施例20中所述的那样，将11i在生理条件下孵育(1mg cnp-38eq/ml)。7天后，通过rp-hplc分离释放的cnp-38并且如实施例22中所述的那样分析生物活性。
[1951]
化合物cnp变体peg化ec
50
化合物/ec
50 cnp-38释放的cnp-38cnp-38-1
[1952]
实施例39
[1953]
11h的供替代选择的合成
[1954][1955]
化合物11h的供替代选择的合成:通过材料和方法中所述的固相合成来合成39a。环赖氨酸侧链的保护基pg1和半胱氨酸侧链的保护基pg2是mmt。温和的树脂裂解和通过碘处理进行的二硫化物形成产生了化合物39c。连接基分子39d偶联和全面脱保护后，通过rp-hplc纯化11h。
[1956]
缩写:
[1957]
ach
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
软骨发育不全
[1958]
acn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙腈
[1959]
acoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸
[1960]
auc
tlast
ꢀꢀꢀ
至最后可定量时间点的曲线下面积
[1961]
bn
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
苄基
[1962]
boc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
叔丁基氧基羰基
[1963]
bsa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
牛血清白蛋白
[1964]
cgmp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
环鸟苷酸
[1965]cmax
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
最大浓度
[1966]
cmv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
巨细胞病毒
[1967]
cnp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
c-型利尿钠肽
[1968]
comu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
六氟磷酸(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓
[1969]
conc.
ꢀꢀꢀꢀꢀ
浓
[1970]dꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
天
[1971]
ctc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氯三苯甲基氯聚苯乙烯
[1972]
dap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
舒张期动脉压
[1973]
dbu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1,3-二氮杂双环[5.4.0]十一烯
[1974]
dcc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n
’‑
二环己基碳二亚胺
[1975]
dcm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二氯甲烷
[1976]
dic
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n
’‑
二异丙基碳二亚胺
[1977]
diea
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n-二异丙基乙胺
[1978]
dipea
ꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n-二异丙基乙胺
[1979]
dmap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲基氨基-吡啶
[1980]
dmem
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(dulbecco’s modified eagle’s medium)
[1981]
dmb
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2,4-二甲基苄基
[1982]
dmem
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基
[1983]
dmf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n-二甲基甲酰胺
[1984]
dmso
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二甲亚砜
[1985]
dtt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
二硫苏糖醇
[1986]
ec50
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
半数最大有效浓度
[1987]
edc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺
[1988]
edta
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙二胺四乙酸
[1989]
elisa
ꢀꢀꢀꢀꢀ
酶联免疫吸附测定法
[1990]
eq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
化学计量当量
[1991]
esi-ms
ꢀꢀꢀꢀ
电喷雾电离质谱
[1992]
et
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙基
[1993]
etoac
ꢀꢀꢀꢀꢀ
乙酸乙酯
[1994]
etoh
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
乙醇
[1995]
fbs
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
胎牛血清
[1996]
fgfr3
ꢀꢀꢀꢀꢀ
成纤维细胞生长因子受体3
[1997]
fitc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate)
[1998]
fmoc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
9-芴基甲基氧羰基
[1999]hꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
小时
[2000]
hatu
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
六氟磷酸o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n
′
,n
′‑
四甲基脲鎓
[2001]
hch
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
软骨发育不良
[2002]
hfip
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
六氟异丙醇
[2003]
hplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
高效液相色谱法
[2004]
hobt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
n-羟基苯并三唑
[2005]
hr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
心率
[2006]
ibmx
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
3-异丁基-1-甲基黄嘌呤
[2007]
iproh
ꢀꢀꢀꢀꢀ
2-丙醇
[2008]
iv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
静脉内
[2009]
ivdde
ꢀꢀꢀꢀꢀ
4,4-二甲基-2,6-二氧代环己-1-亚基)-3-甲基丁基
[2010]
lc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
液相色谱法
[2011]
ltq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
线性俘获四极(linear trap quadrupole)
[2012]
mal
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
3-马来酰亚氨基丙基
[2013]
map
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
平均动脉压
[2014]
me甲基
[2015]
meoh甲醇
[2016]
min分钟
[2017]
mmt单甲氧基三苯甲基
[2018]
ms质谱/质谱法
[2019]
msa甲磺酸
[2020]
mtbe甲基叔丁基醚
[2021]
mtt甲基三苯甲基
[2022]
mw分子量
[2023]
m/z质荷比
[2024]
nep中性内肽酶
[2025]
nhsn-羟基琥珀酰亚胺
[2026]
npr利尿钠肽受体
[2027]
otbu叔丁氧基
[2028]
pbs磷酸盐缓冲盐水
[2029]
peg聚(乙二醇)
[2030]
pfp五氟苯酚
[2031]
ph
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
氢离子浓度指数(potentia hydrogenii)
[2032]
pr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
丙基
[2033]
pybop
ꢀꢀꢀꢀ
六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷鏻
[2034]
q-tof
ꢀꢀꢀꢀ
四极飞行时间
[2035]
qrt-pcr
ꢀꢀ
定量实时聚合酶链反应
[2036]
rp-hplc
ꢀꢀ
反相高效液相色谱法
[2037]
rpm
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
每分钟转数
[2038]
rt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
室温
[2039]
sim
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
单离子监测
[2040]
sap
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
收缩期动脉压
[2041]
sec
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
尺寸排阻色谱法
[2042]
sc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
皮下
[2043]
su
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
琥珀酰亚胺基(succinimidyl)
[2044]
t3p
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三磷杂环己烷-2,4,6-三氧化物
[2045]
tcep
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三(2-羧基乙基)膦
[2046]
tcp
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三苯甲基氯聚苯乙烯(tritylchloride polystyro)
[2047]
td
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
致死性发育不良
[2048]
tes
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三乙基硅烷
[2049]
tfa
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三氟乙酸
[2050]
thf
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
四氢呋喃
[2051]
tips
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三异丙基硅烷
[2052]
t
max
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
最大浓度的时间
[2053]
tmeda
ꢀꢀꢀꢀꢀ
n,n,n
′n′‑
四甲基乙二胺
[2054]
tmob
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
2,4,6-三甲氧基苄基
[2055]
tr-fret
ꢀꢀꢀ
时间分辨荧光能量转移
[2056]
trt
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
三苯基甲基，三苯甲基
[2057]
uplc
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography)
[2058]
uv
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
紫外
[2059]
vs.
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
与...比较
[2060]
zq
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
单一四极