针对基于铂的抗肿瘤剂的耳保护方法与流程

1.本发明提供了针对基于铂的抗肿瘤剂的耳保护方法。


背景技术：

2.基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂)是广泛用于治疗癌症和肿瘤的化疗剂。这些剂是有毒的，并且已知会诱发人类模型和动物模型两者的听力损失。因此，经历使用基于铂的抗肿瘤剂的化疗的患者可遭受听力损失。需要耳保护组合物和方法来预防或减轻与包括基于铂的抗肿瘤剂在内的化疗方案相关的听力损失。


技术实现要素：

3.总的来说，本发明提供了用于减轻有需要的受试者中的铂诱导的耳毒性的方法。方法涉及向受试者施用有效量的硫代硫酸盐。
4.在一些实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过7小时施用基于铂的肿瘤剂，或者经计划在4小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。在某些实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过7小时施用基于铂的肿瘤剂。在特定实施方案中，受试者经计划在4.5小时施用基于铂的抗肿瘤剂。在另外的实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过2.5小时施用基于铂的肿瘤剂。在另外的实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过1小时施用基于铂的肿瘤剂。
5.在一些实施方案中，向受试者施用有效量的硫代硫酸盐产生在施用基于铂的抗肿瘤剂时为30μm或更小的血浆硫代硫酸盐c
max
。在某些实施方案中，向受试者施用有效量的硫代硫酸盐产生的耳蜗硫代硫酸盐c
max
是基于铂的抗肿瘤剂的耳蜗c
max
的至少30倍大。耳蜗铂浓度和耳蜗c
max
通常通过在二室模型中进行静脉内输注的药代动力学模拟来建模。例如，药代动力学模拟可以使用winnonlin(phoenix64)pk模拟模型9(静脉内输注，2室)进行。
6.在另外的实施方案中，硫代硫酸盐是经耳施用的。在某些实施方案中，硫代硫酸盐是鼓室内、经鼓室或通过内耳注射施用的。在特定实施方案中，硫代硫酸盐是经鼓室或通过内耳注射施用的。
7.在一些实施方案中，方法还包括施用基于铂的抗肿瘤剂。
8.在某些实施方案中，硫代硫酸盐是碱性硫代硫酸盐、硫代硫酸铵盐、或它们的溶剂化物。在另外的实施方案中，有效量的硫代硫酸盐作为包含有效量的硫代硫酸盐的高渗药物组合物施用。在另外的实施方案中，将200-1,000μl(例如，200-900μl、200-800μl、200-700μl、200-600μl、200-500μl、200-400μl、200-300μl、300-900μl、300-800μl、300-700μl、300-600μl、300-500μl、300-400μl、400-900μl、400-800μl、400-700μl、400-600μl、或400-500μl)的高渗药物组合物施用至受试者的圆窗。
9.在另外的实施方案中，高渗药物组合物的计算摩尔渗透压浓度是500-5,000mosm/l(例如，600-5,000mosm/l、700-5,000mosm/l、800-5,000mosm/l、900-5,000mosm/l、1,000-5,000mosm/l、1,500-5,000mosm/l、2,000-5,000mosm/l、2,500-5,000mosm/l、3,000-5,
000mosm/l、500-4,000mosm/l、600-4,000mosm/l、700-4,000mosm/l、800-4,000mosm/l、900-4,000mosm/l、1,000-4,000mosm/l、1,500-4,000mosm/l、2,000-4,000mosm/l、2,500-4,000mosm/l、3,000-4,000mosm/l、500-3,000mosm/l、600-3,000mosm/l、700-3,000mosm/l、800-3,000mosm/l、900-3,000mosm/l、1,000-3,000mosm/l、1,500-3,000mosm/l、2,000-3,000mosm/l、2,500-3,000mosm/l、500-2,500mosm/l、600-2,500mosm/l、700-2,500mosm/l、800-2,500mosm/l、900-2,500mosm/l、1,000-2,500mosm/l、1,500-2,500mosm/l、2,000-2,500mosm/l、500-2,000mosm/l、600-2,000mosm/l、700-2,000mosm/l、800-2,000mosm/l、900-2,000mosm/l、1,000-2,000mosm/l、1,500-2,000mosm/l、500-1,500mosm/l、600-1,500mosm/l、700-1,500mosm/l、800-1,500mosm/l、900-1,500mosm/l、或1,000-1,500mosm/l)。
10.在一些实施方案中，高渗药物组合物中的硫代硫酸盐的浓度是0.5m-2.5m(例如，约0.05m至约1.5m、约0.05m至约0.5m、约0.05m至约0.2m、约0.05m至约0.1m、约0.1m至约1.5m、约0.1m至约0.5m、约0.1m至约0.2m、约0.2m至约1.5m、约0.2m至约0.5m、约0.5m至约1.5m、0.05m至约1.0m、约0.05m至约0.5m、约0.05m至约0.2m、约0.05m至约0.1m、约0.1m至约1.0m、约0.1m至约0.5m、约0.1m至约0.2m、约0.2m至约1.0m、约0.2m至约0.5m、约0.5m至约1.0m、或约1.0m至约1.5m)。
11.在某些实施方案中，有效量是在施用基于铂的抗肿瘤剂时产生为30μm或更低的血浆硫代硫酸盐浓度的量。在某些实施方案中，有效量是0.1-2.5mmol的硫代硫酸盐。在特定实施方案中，有效量是在施用后1h产生0.6-10mmol/l的最大硫代硫酸盐浓度的量。在另外的实施方案中，有效量是在受试者耳蜗中施用后7h产生0.1-2mmol/l的硫代硫酸盐浓度的量。
12.在一些实施方案中，受试者经计划在约1小时至约6小时内(例如，在施用硫代硫酸盐后约1小时至约5小时、约1小时至约4小时、约1小时至约3小时、约1小时至约2小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时、约2小时至约5小时、约2小时至约6小时、约3小时至约4小时、约3小时至约5小时、约3小时至约6小时、约4小时至约5小时、约4小时至约6小时、或约5小时至约6小时内)施用基于铂的抗肿瘤剂。
13.在一些实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐后约1小时至约6小时内(例如，在施用硫代硫酸盐后约1小时至约5小时、约1小时至约4小时、约1小时至约3小时、约1小时至约2小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时、约2小时至约5小时、约2小时至约6小时、约3小时至约4小时、约3小时至约5小时、约3小时至约6小时、约4小时至约5小时、约4小时至约6小时、或约5小时至约6小时内)施用基于铂的抗肿瘤剂。
14.在一些实施方案中，受试者在施用硫代硫酸盐之前约1小时至约6小时内(例如，在施用硫代硫酸盐之前约1小时至约5小时、约1小时至约4小时、约1小时至约3小时、约1小时至约2小时、约2小时至约3小时、约2小时至约4小时、约2小时至约5小时、约2小时至约6小时、约3小时至约4小时、约3小时至约5小时、约3小时至约6小时、约4小时至约5小时、约4小时至约6小时、或约5小时至约6小时内)施用基于铂的抗肿瘤剂。
15.在另外的实施方案中，本发明由以下列举的项目描述。
16.1.一种减轻有需要的受试者中的铂诱导的耳毒性的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的硫代硫酸盐，其中该受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过7小时施用基于铂
的肿瘤剂，或者经计划在4小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
17.2.根据项目1所述的方法，其中该有效量是在施用基于铂的抗肿瘤剂时产生为30μm或更低的血浆硫代硫酸盐浓度的量。
18.3.一种减轻有需要的受试者中的铂诱导的耳毒性的方法，该方法包括向该受试者施用有效量的硫代硫酸盐以产生(i)在施用基于铂的抗肿瘤剂时为30μm或更小的血浆硫代硫酸盐c
max
，和(ii)是基于铂的抗肿瘤剂的耳蜗c
max
的至少30倍大的耳蜗硫代硫酸盐c
max
，其中该耳蜗铂浓度和该耳蜗c
max
通过在二室模型中对静脉内输注进行药代动力学模拟来建模。
19.4.根据项目2所述的方法，其中该受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过7小时施用基于铂的肿瘤剂，或者经计划在4小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
20.5.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过7小时施用基于铂的肿瘤剂。
21.6.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过6小时施用基于铂的肿瘤剂。
22.7.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过5小时施用基于铂的肿瘤剂。
23.8.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过4小时施用基于铂的肿瘤剂。
24.9.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过3小时施用基于铂的肿瘤剂。
25.10.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过2.5小时施用基于铂的肿瘤剂。
26.11.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过2小时施用基于铂的肿瘤剂。
27.12.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者在施用硫代硫酸盐之前不超过1小时施用基于铂的肿瘤剂。
28.13.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者经计划在4.5小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
29.14.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者经计划在4小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
30.15.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者经计划在3小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
31.16.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者经计划在2小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
32.17.根据项目1至3中任一项所述的方法，其中受试者经计划在1小时内施用基于铂的抗肿瘤剂。
33.18.根据项目1至16中任一项所述的方法，其中该硫代硫酸盐是经耳施用的。
34.19.根据项目17所述的方法，其中该硫代硫酸盐是鼓室内施用的。
35.20.根据项目17所述的方法，其中该硫代硫酸盐是经鼓室施用的。
36.21.根据项目17所述的方法，其中该硫代硫酸盐是通过内耳注射施用的。
37.22.根据项目1至20中任一项所述的方法，该方法还包括施用基于铂的抗肿瘤剂。
38.23.根据项目1至21中任一项所述的方法，其中该硫代硫酸盐是碱性硫代硫酸盐、硫代硫酸铵盐、或它们的溶剂化物。
39.24.根据项目1至22中任一项所述的方法，其中有效量的硫代硫酸盐作为包含有效量的硫代硫酸盐的高渗药物组合物施用。
40.25.根据项目23所述的方法，其中将200-1,000μl的高渗药物组合物施用至受试者的圆窗。
41.26.根据项目23或24所述的方法，其中该高渗药物组合物的计算摩尔渗透压浓度是500-5,000mosm/l。
42.27.根据项目23至25中任一项所述的方法，其中该高渗药物组合物中的硫代硫酸盐的浓度是0.5m-2.5m。
43.28.根据项目23至25中任一项所述的方法，其中该高渗药物组合物中的硫代硫酸盐的浓度是0.5m-1.5m。
44.29.根据项目23至25中任一项所述的方法，其中该高渗药物组合物中的硫代硫酸盐的浓度是0.5m-1.0m。
45.30.根据项目1至28中任一项所述的方法，其中该有效量是至少0.05mmol的硫代硫酸盐。
46.31.根据项目1至28中任一项所述的方法，其中该有效量是至少0.1mmol的硫代硫酸盐。
47.32.根据项目1至28中任一项所述的方法，其中该有效量是至少0.2mmol的硫代硫酸盐。
48.33.根据项目1至28中任一项所述的方法，其中该有效量是至少0.3mmol的硫代硫酸盐。
49.34.根据项目1至28中任一项所述的方法，其中该有效量是至少0.4mmol的硫代硫酸盐。
50.35.根据项目1至33中任一项所述的方法，其中该有效量是2.5mmol或更少的硫代硫酸盐。
51.36.根据项目1至33中任一项所述的方法，其中该有效量是2.0mmol或更少的硫代硫酸盐。
52.37.根据项目1至33中任一项所述的方法，其中该有效量是1.5mmol或更少的硫代硫酸盐。
53.38.根据项目1至33中任一项所述的方法，其中该有效量是1.0mmol或更少的硫代硫酸盐。
54.39.根据项目1至33中任一项所述的方法，其中该有效量是0.5mmol或更少的硫代硫酸盐。
55.40.根据项目1至38中任一项所述的方法，其中该有效量是在施用后1h产生0.6-10mmol/l的最大硫代硫酸盐浓度的量。
56.41.根据项目1至39中任一项所述的方法，其中该有效量是在受试者耳蜗中施用后
7h产生0.1-2mmol/l的硫代硫酸盐浓度的量。
57.定义
58.如本文所用的术语“约”表示在术语“约”之后的值的
±
10％范围内的值。
59.如本文所用的术语“碱性盐”代表化合物的钠盐或钾盐。碱性盐可以是一元的，或者如果酸性部分(例如，-cooh、-so3h或-p(o)(oh)n部分)的数量允许，则是二元或三元的。
60.如本文所用的术语“铵盐”代表化合物的nh
4
盐。铵盐可以是一元的，或者如果酸性部分(例如，-cooh、-so3h或-p(o)(oh)n部分)的数量允许，则是二元或三元的。
61.如本文所用的术语“胶凝剂”是指本领域中已知的药学上可接受的赋形剂，其用于在与溶剂(例如，水性溶剂)混合时产生凝胶。胶凝剂的非限制性示例包括透明质酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)、聚(乳酸-共聚-羟基乙酸)、聚乳酸、聚己内酯、藻酸或其盐、聚乙二醇、纤维素、纤维素醚、卡波姆(例如，)、琼脂、明胶、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖(例如，瓜尔胶、槐豆胶或塔拉胶)、黄原胶、壳聚糖、果胶、淀粉、黄蓍胶、角叉菜胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、石蜡、凡士林、硅酸盐、丝蛋白，以及它们的组合。
62.如本文所用的涉及药物组合物的术语“高渗”表示药物组合物的计算摩尔渗透压浓度为300mosm/l至7,000mosm/l(例如，300mosm/l至2,500mosm/l)，所述计算摩尔渗透压浓度对应于300mmol至7,000mmol(例如，300mosm/l至2,500mmol)的离子和/或中性分子，所述离子和/或中性分子是通过将铂失活剂和任何离子非聚合赋形剂溶解在1l溶剂中产生的，所述溶剂的计算摩尔渗透压浓度为0mosm/l。出于本公开的目的，计算摩尔渗透压浓度不包括由聚合赋形剂(例如，由胶凝剂)产生的离子和/或中性分子。出于本公开的目的，聚合物赋形剂(例如，胶凝剂)被认为对本文公开的组合物的计算摩尔渗透压浓度没有贡献。
63.如本文所用的涉及施用途径的术语“鼓室内”是指通过经由具有暂时移除或提升的鼓膜的耳道或者经由穿过听泡(auditory bulla)形成的端口注射或输注到受试者的中耳内而递送至圆窗。
64.如本文所用的术语“药物组合物”表示用药学上可接受的赋形剂配制，并且经政府监管机构批准制造或销售作为治疗哺乳动物疾病的治疗方案的一部分的组合物。
65.如本文所用的术语“药物剂型”代表那些旨在无需进一步改变(例如，无需用液体溶剂稀释、悬浮或溶解)就施用于受试者的药物组合物。
66.如本文所用的术语“药学上可接受的赋形剂”是指除本文所述的硫代硫酸盐和胶凝剂之外的任何成分(例如，能够悬浮或溶解活性化合物的媒介物)，并且所述成分具有对患者基本无毒并且基本无炎症的特性。赋形剂可以包括例如抗氧化剂、崩解剂、染料(着色剂)、软化剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、香料、芳香剂、防腐剂、印刷油墨、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂、液体溶剂和缓冲剂。
67.如本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示在合理医学判断范围内适用于与人和动物的组织接触地使用而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的利益/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐在本领域中是众所周知的。例如，药学上可接受的盐描述于：berge等人，j.pharmaceutical sciences 66:1-19,1977和pharmaceutical salts:properties,selection,and use,(p.h.stahl和c.g.wermuth编著),wiley-vch,2008中。所述盐可以在本文所述化合物的最终分离和纯化期间原位制备，或者通过使游离碱基团与合适的有机酸反应单独制备。代表性的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、
天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐(glucoheptonate)、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属盐或碱土金属盐包含钠、锂、钾、钙、镁等，以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
68.如本文所用的术语“药学上可接受的溶剂化物”是指如本文所述的化合物，其中合适溶剂的分子结合到晶格中。合适的溶剂在所施用剂量下是生理上可耐受的。例如，溶剂化物可以通过从包含有机溶剂、水或其混合物的溶液中结晶、重结晶或沉淀来制备。合适的溶剂的示例是乙醇、水(例如，一水合物、二水合物、三水合物、四水合物和五水合物)、n-甲基吡咯烷酮(nmp)、二甲基亚砜(dmso)、n,n'-二甲基甲酰胺(dmf)、n,n'-二甲基乙酰胺(dmac)、1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(dmeu)、1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-(1h)-嘧啶酮(dmpu)、乙腈(acn)、丙二醇、乙酸乙酯、苯甲醇、2-吡咯烷酮、苯甲酸苄酯等。当溶剂化物是基于水的时，所述溶剂化物被称为水合物。
69.如本文所用的术语“基于铂的抗肿瘤剂“代表pt(ii)或pt(iv)的配位化合物。基于铂的抗肿瘤剂在本领域中被称为普拉丁斯(platins)。通常，基于铂的抗肿瘤剂包含在铂中心处的被一个或多个含氮旁观者配体占据的至少两个配位位点。含氮旁观者配体是单齿或双齿配体，其中供体原子是配体内sp
3-或sp
2-杂化的氮原子。含氮旁观者配体的非限制性示例是氨、1,2-环己烷二胺、甲基吡啶、菲或1,6-己二胺。基于铂的抗肿瘤剂的非限制性示例包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂酯、菲铂、吡铂和赛特铂。
70.如本文所用的术语“受试者”是指动物(例如，哺乳动物，例如，人)。根据本文所述的方法进行治疗的受试者可以是用包括基于铂的抗肿瘤剂的治疗方案(例如，用于治疗良性肿瘤、恶性肿瘤或癌症的治疗方案)进行治疗的受试者。通过本领域已知的任何方法或技术，受试者可能已经被诊断为患有良性肿瘤、恶性肿瘤或癌症。本领域技术人员将理解，要根据本发明治疗的受试者可能已经接受了标准测试，或者可能已经在未经检查的情况下被确定为由于接受了包括基于铂的抗肿瘤剂的治疗方案而处于高风险下的受试者。
71.本文所用的术语“基本上中性”是指在20℃下测量的ph水平为5.5至约8.5。
72.如本文所用的术语“张度剂”是指一类用于控制药物组合物的摩尔渗透压浓度的药学上可接受的赋形剂。张度剂的非限制性示例包括基本上中性的缓冲剂(例如，磷酸盐缓冲盐水、tris缓冲液或人工外淋巴液)、葡萄糖、甘露醇、甘油、氯化钾和氯化钠(例如，高渗盐水、等渗盐水或低渗盐水)。人工外淋巴液是含有nacl(120-130mm)、kcl(3.5mm)、cacl2(1.3-1.5mm)、mgcl2(1.2mm)、葡萄糖(5.0-11mm)和缓冲剂(例如，nahco3(25mm)和nah2po4(0.75mm)，或hepes(20mm)和naoh(调节至约7.5的ph))的水溶液。
73.如本文所用的涉及施用途径的术语“经鼓膜”是指通过跨鼓膜注射或输注而递送至圆窗。经鼓膜注射可直接经由鼓膜或经由嵌入在鼓膜中的管(例如，经由鼓膜造孔插管或鼓室通气管)执行。
74.如本文所用的术语“内耳注射”是指将药物直接注射到内耳空间中。
附图说明
75.图1是示出每个测试的人群组的平均血浆硫代硫酸盐浓度随时间推移的轮廓(0-24h)的图表。x轴显示时间(h)，并且y轴显示平均血浆硫代硫酸盐浓度(ng/ml)。
76.图2是示出每个测试的人群组的平均血浆硫代硫酸盐浓度随时间推移的轮廓(0-4h)的图表。显示的误差条线是标准偏差。x轴显示时间(h)，并且y轴显示平均血浆硫代硫酸盐浓度(ng/ml)。
77.图3是示出每个测试的人群组的平均血浆硫代硫酸盐浓度随时间推移的轮廓(0-672h)的图表。x轴显示时间(h)，并且y轴显示平均血浆硫代硫酸盐浓度(ng/ml)。
78.图4是示出硫代硫酸盐施用相对于顺铂的时序的示意图。
79.图5a是示出在对照豚鼠的听觉脑干反应(auditory brainstem response,abr)测试期间测量的4khz、24khz和32khz下的平均阈值声压级的图表。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。x轴显示以khz为单位的声频，并且y轴显示以声压级的分贝数(decibel of sound pressure level,db spl)为单位的响应阈值。
80.图5b是示出在将硫代硫酸钠施用至各一只耳朵之后进行顺铂攻击的豚鼠的听觉脑干反应(abr)测试期间测量的4khz、24khz和32khz下的平均阈值声压级的图表。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。x轴显示以khz为单位的声频，并且y轴显示以声压级的分贝数(db spl)为单位的响应阈值。所显示的数据是平均值
±
平均值的标准误差(standard error of the mean,sem)；双因素方差分析(two way analysis of variance,anova)；**p《0.01；***p《0.001。经处理的耳朵对比未处理的耳朵(与图5a对比)。
81.图6是示出用15μm的顺铂处理的人肿瘤细胞系中硫代硫酸盐(db-020)的浓度依赖性的图表。使用了以下肿瘤细胞系：sh-n-as(脑，成神经细胞瘤)、snu899(喉，鳞状细胞癌)、nci-h23(肺，非小细胞的)、hlf(肝，未分化肝细胞癌)和a2780(卵巢，恶性肿瘤)。
82.图7是示出施用透明质酸凝胶1(12％w/v，0.5m硫代硫酸钠)后血浆(人)和外淋巴液(豚鼠)中平均硫代硫酸盐浓度(mm)随时间推移的轮廓(0-8h)的图表。水平实线显示30μm的水平，血浆硫代硫酸盐水平应低于该水平。水平虚线显示660μm(0.66mm)的水平，外淋巴液硫代硫酸盐水平应高于该水平。
83.图8a是示出施用含有0.1m硫代硫酸钠和20％(w/v)泊洛沙姆407的凝胶的豚鼠的血浆、外淋巴液和脑脊液中硫代硫酸盐浓度随时间推移的变化的图表。
84.图8b是示出施用含有0.5m硫代硫酸钠和1％(w/v)透明质酸的凝胶的豚鼠的血浆、外淋巴液和脑脊液中硫代硫酸盐浓度随时间推移的变化的图表。
85.图9a是示出施用含有0.1m硫代硫酸钠和2％(w/v)透明质酸的凝胶的豚鼠的血浆、外淋巴液和脑脊液中硫代硫酸盐浓度随时间推移的变化的图表。
86.图9b是示出施用含有0.5m硫代硫酸钠和2％(w/v)透明质酸的凝胶的豚鼠的血浆、外淋巴液和脑脊液中硫代硫酸盐浓度随时间推移的变化的图表。
87.图10a是示出在听觉脑干反应测试期间在五个豚鼠群组(n＝27只动物)中测量的
4khz、24khz和32khz下的阈值声压级的图表。在听觉脑干反应测试之前7天，所有豚鼠腹膜内注射顺铂。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。
88.图10b是示出在听觉脑干反应测试期间在五个豚鼠群组(n＝18只动物)中测量的4khz、24khz和32khz下的阈值声压级的图表。在听觉脑干反应测试之前7天，所有豚鼠腹膜内注射顺铂。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。
89.图11a是示出在被认为有听力损失的豚鼠(n＝18只动物)的听觉脑干反应测试期间测量的4khz、24khz和32khz下的平均阈声压级的图表。在听觉脑干反应测试之前7天，所有豚鼠腹膜内注射顺铂。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。
90.图11b是示出在将赋形剂或硫代硫酸钠施用于各一只耳朵之后进行顺铂攻击的豚鼠的听觉脑干反应(abr)测试期间测量的4khz、24khz和32khz下的平均阈声压级的图表。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。
91.图12是示出在向豚鼠的一只耳朵施用媒介物或硫代硫酸钠后顺铂攻击测试的图。
92.图13是示出在将赋形剂或硫代硫酸钠(0.1m、0.5m或1m的硫代硫酸钠凝胶)施用于各一只耳朵之后进行顺铂攻击的豚鼠的听觉脑干反应(abr)测试期间测量的4khz、24khz和32khz下的平均阈声压级的图表。基线阈值来自对顺铂-未经实验处理的豚鼠(n＝100只耳朵)的历史性听觉脑干反应测试。基线阈值示出为阴影区域曲线。
具体实施方式
93.总的来说，本发明提供了通过向受试者施用有效量的硫代硫酸盐来减轻受试者中的铂诱导的耳毒性的方法。优选地，硫代硫酸盐是经耳(例如，鼓室内或经鼓室)施用的。
94.通常，向经计划在4小时内(例如，3小时内、2小时内、或1小时内)施用基于铂的抗肿瘤剂的受试者施用硫代硫酸盐。或者，在施用基于铂的肿瘤剂后7小时内(例如，6小时内、5小时内、4小时内、3小时内、2小时内、或1小时内)施用硫代硫酸盐。优选地，向经计划在3小时内施用基于铂的抗肿瘤剂的受试者施用硫代硫酸盐。或者，在施用基于铂的肿瘤剂后4小时内施用硫代硫酸盐。更优选地，向经计划在1小时内施用基于铂的抗肿瘤剂的受试者施用硫代硫酸盐。或者，在施用基于铂的肿瘤剂后1小时内施用硫代硫酸盐。
95.有效量的硫代硫酸盐通常在施用基于铂的抗肿瘤剂时产生为30μm或更低(例如，20μm或更低、10μm或更低，或接近内源性浓度)的血浆硫代硫酸盐浓度。另外地或可替代地，有效量的硫代硫酸盐通常产生为基于铂的抗肿瘤剂的耳蜗c
max
的至少30倍大(例如，30倍至1000倍大、30倍至500倍大、或30倍至150倍大)的耳蜗硫代硫酸盐浓度，其中该耳蜗铂浓度和该耳蜗c
max
通过在二室模型中对静脉内输注进行药代动力学模拟来建模。
96.铂诱导的耳毒性可发生在接受了基于铂的抗肿瘤剂的受试者(例如，患有肿瘤或癌症的受试者)中。基于铂的抗肿瘤剂的非限制性示例包括顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂酯、菲铂、吡铂和赛特铂。
97.硫代硫酸盐可以减轻(例如，消除)接受了基于铂的抗肿瘤剂的受试者的听力损
失，如通过相对于接受了相同的基于铂的抗肿瘤剂方案但未接受硫代硫酸盐的参考受试者，在8khz或更高(例如，在8khz与20khz之间)的频率下受试者的声压级阈值评估中至少50％(例如，至少60％、至少70％、或至少80％)的降低所测量的。
98.硫代硫酸盐可以表现出针对基于铂的抗肿瘤剂的耳保护特性，并且可在用于减轻(例如，消除)有需要的受试者中的铂诱导的耳毒性的方法中使用。通常，将硫代硫酸盐施用至受试者的圆窗。受试者可能正在经历使用基于铂的抗肿瘤剂(例如，顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、四硝酸三铂酯、菲铂、吡铂或赛特铂)的疗法。
99.可以例如在向受试者施用基于铂的抗肿瘤剂之前或之后向受试者施用硫代硫酸盐。或者，可以例如在施用基于铂的抗肿瘤剂的同时施用硫代硫酸盐。可以向经计划在4小时内，例如在3小时内、2小时内、或1小时内(例如，在施用基于铂的抗肿瘤剂之前至少5分钟、至少15分钟、或至少30分钟)施用基于铂的抗肿瘤剂的受试者施用硫代硫酸盐。或者，可以在基于铂的抗肿瘤剂施用后(例如，施用后至少5分钟、至少15分钟、或至少30分钟)例如不超过7小时(例如，不超过6小时、不超过5小时、不超过4小时、不超过3小时、不超过2小时、或不超过1小时)施用硫代硫酸盐。基于铂的抗肿瘤剂的施用通常在水合组合物(例如，任选地包含例如甘露醇或呋塞米(furosemide)的生理盐水)的施用之前进行。此外，基于铂的抗肿瘤剂的施用通常持续至少1小时(例如，1至24小时，例如1至12小时、1至6小时、1至3小时、或1至2小时)的时间段。本领域技术人员将认识到硫代硫酸盐和基于铂的肿瘤剂的施用之间的时序是一者的施用完成与另一者的施用开始之间的时间。例如，在施用硫代硫酸盐的步骤后30分钟至4小时施用基于铂的肿瘤剂表明30分钟至4小时将硫代硫酸盐施用的结束和基于铂的肿瘤剂施用的开始(例如，顺铂的输注)分开。
100.通常，本发明的药物组合物可以通过不同于基于铂的抗肿瘤剂的途径施用。本发明的方法可利用局部施用途径，例如，本发明的药物组合物可以鼓室内或经鼓室施用。经鼓膜施用可包括通过鼓膜将有效量的本发明的药物组合物注射或输注到鼓室中，从而将抗铂化学保护剂提供至圆窗。
101.在本发明的方法中，通常使用针刺穿鼓膜以将药物滴注到中耳空间中，或者穿过耳鼓的现有pe管或穿孔以滴注药物。鼓膜中可以创建或可以不创建单独的通风孔，以允许空气逸出中耳空间。随后，滴注的药物可以靶向中耳结构、细胞，或被设计成通过圆形和椭圆形膜进入内耳以影响特定靶标。这可以例如通过经由圆窗膜、卵圆窗、耳蜗造口术(cochleostomy)或迷路切开术(labrinthotomy)滴注药物来实现。这些外科手术可以通过抬高鼓膜耳道皮瓣(提起鼓膜)并暴露圆窗、镫骨/卵圆窗和岬来完成。可以在镫骨底(footplate)中创建镫骨足板造孔术孔，并通过泵、注射或某种其它方法将药物滴注到前庭中。或者，(通常通过钻孔)去除圆窗(round window,rw)的骨唇以暴露出rw。然后可以用针刺穿rw并输注药物，或者可以将rw开窗并通过开窗术直接滴注药物。最后，可以通过在耳蜗中钻耳蜗造口术孔来打开完全独立的耳蜗入口孔，并滴注药物。
102.或者，可以执行乳突切开术并打开面隐窝以提供进入卵圆窗和圆窗以及岬和半规管的直接通路，而不是抬高鼓膜耳道皮瓣。通过这种方法，所有三个部位都可以像刚才描述的那样使用。此外，可以很像耳蜗造口术那样打开迷路，以供进行药物滴注。为了驱散内耳中的液体/压力积聚，可以创建通往rw或ow中的单独开口，以允许多余的外淋巴液漏出。
103.硫代硫酸盐可以在药物组合物中提供。药物组合物可以是例如高渗的。不希望受
理论束缚，本文所公开的药物组合物的较高张力被认为相对于具有较低张力(例如，低渗或等渗)的组合物，提高了受试者的圆窗处的硫代硫酸盐生物利用度。生物利用度通常是在向受试者施用硫代硫酸盐后，使用硫代硫酸盐暴露(auc)来计算的。药物组合物(例如，药物剂型)的计算摩尔渗透压浓度可以是例如至少400mosm/l(例如，至少500mosm/l、至少600mosm/l、至少700mosm/l、至少800mosm/l、至少900mosm/l、至少1,000mosm/l、至少1,500mosm/l、至少2,000mosm/l、至少2,500mosm/l、或至少3,000mosm/l)，和/或5,000mosm/l或更少(例如，4,000mosm/l或更少、3,000mosm/l或更少、2,000mosm/l或更少、1,900mosm/l或更少、1,800mosm/l或更少、1,700mosm/l或更少、1,600mosm/l或更少、或1,500mosm/l或更少)。药物组合物(例如，药物剂型)的计算摩尔渗透压浓度可以是例如1,500-4,500mosm/l。药物组合物(例如，药物剂型)的计算摩尔渗透压浓度可以是例如3,000-4,500mosm/l。药物组合物(例如，药物剂型)的测量的摩尔渗透压浓度可以是例如至少0.3osm/kg(例如，至少0.5osm/kg、至少0.6osm/kg、至少0.7osm/kg、至少0.8osm/kg、至少0.9osm/kg、至少1.0osm/kg、至少1.2osm/kg、至少1.4osm/kg、或至少1.8osm/kg)。药物组合物(例如，药物剂型)的测量的摩尔渗透压浓度可以是例如2.5osm/kg或更低(例如，2.1osm/kg或更低)。药物组合物(例如，药物剂型)的测量的摩尔渗透压浓度可以是例如0.3-2.5osm/kg(例如，0.5-2.5osm/kg、0.6-2.5osm/kg、0.7-2.5osm/kg、0.8-2.5osm/kg、0.9-2.5osm/kg、1.0-2.5osm/kg、1.2-2.5osm/kg、1.4-2.5osm/kg、1.8-2.5osm/kg、0.5-2.1osm/kg、0.6-2.1osm/kg、0.7-2.1osm/kg、0.8-2.1osm/kg、0.9-2.1osm/kg、1.0-2.1osm/kg、1.2-2.1osm/kg、1.4-2.1osm/kg，或1.8-2.1osm/kg)。“计算摩尔渗透压浓度”是指通过将一种或多种化合物溶解在1l去离子水或蒸馏水中产生的离子和/或中性分子的毫摩尔数；计算摩尔渗透压浓度不包括由聚合赋形剂(例如，由胶凝剂)产生的离子和/或中性分子。“测量的摩尔渗透压浓度”是指使用渗透压计(通常为膜渗透压计)测得的组合物的摩尔渗透压浓度。
104.本发明的优选药物剂型是凝胶。
105.在一些实施方案中，将至少50μl(优选地，至少100μl；更优选地，至少200μl)的药物组合物施用至受试者的圆窗。在特定实施方案中，将1ml或更少(例如，0.8ml或更少、或0.5ml或更少)的药物组合物施用至受试者的圆窗。在某些实施方案中，将100μl至1ml(e.g.,200μl至1ml、100μl至0.8ml、200μl至0.8ml、100μl至0.5ml、200μl至0.5ml、0.5ml至1.0ml、0.5ml至0.8ml、或0.8ml至1.0ml)的药物组合物施用至受试者的圆窗。
106.硫代硫酸盐可以是例如对药物组合物的摩尔渗透压浓度有贡献的唯一化合物。或者，例如通过使用张度剂，可以实现比所需浓度的硫代硫酸盐所提供的摩尔渗透压浓度更高的摩尔渗透压浓度。张度剂可以存在于高渗、等渗或低渗赋形剂(例如，低渗液体溶剂)中。张度剂的非限制性示例包括基本上中性的缓冲剂(例如，磷酸盐缓冲盐水、tris缓冲液或人工外淋巴液)、葡萄糖、甘露醇、甘油(glycerin)、甘油(glycerol)、氯化钾和氯化钠(例如，高渗盐水、等渗盐水或低渗盐水)。
107.硫代硫酸盐
108.不希望受理论束缚，硫代硫酸盐被认为通过竞争性地连接和基本上配位地饱和基于铂的抗肿瘤剂中存在的铂中心来降低或消除基于铂的抗肿瘤剂的毒性。药物组合物(例如，药物剂型)中的硫代硫酸盐的浓度可以是例如至少约0.05m(例如，至少约0.1m、至少约0.2m、至少约0.3m、至少约0.4m、至少约0.5m、或至少约1m)。药物组合物(例如，药物剂型)中
的硫代硫酸盐的浓度可以是例如约2.5m或更低(例如，2.0m或更低、1.5m或更低、1.0m或更低、0.5m或更低、约0.3m或更低、或约0.2m或更低)。药物组合物(例如，药物剂型)中硫代硫酸盐的浓度的非限制性示例可以是例如约0.05m至约1.5m、约0.05m至约0.5m、约0.05m至约0.2m、约0.05m至约0.1m、约0.1m至约1.5m、约0.1m至约0.5m、约0.1m至约0.2m、约0.2m至约1.5m、约0.2m至约0.5m、约0.5m至约1.5m、0.05m至约1.0m、约0.05m至约0.5m、约0.05m至约0.2m、约0.05m至约0.1m、约0.1m至约1.0m、约0.1m至约0.5m、约0.1m至约0.2m、约0.2m至约1.0m、约0.2m至约0.5m、约0.5m至约1.0m、或约1.0m至约1.5m。优选地，药物组合物(例如，药物剂型)中的硫代硫酸盐试剂的浓度是约0.5m至约1.5m。更优选地，药物组合物(例如，药物剂型)中的硫代硫酸盐试剂的浓度是约0.5m至约1.0m。
109.优选地，硫代硫酸盐是碱性硫代硫酸盐或硫代硫酸铵盐。更优选地，硫代硫酸盐是硫代硫酸钠。
110.胶凝剂
111.本文所公开的药物组合物包含胶凝剂。胶凝剂可用于增加药物组合物的粘度，从而改善药物组合物在靶部位处的保留。相对于溶剂，药物组合物(例如，药物剂型)可含有例如约0.1％至约25％(w/v)(例如，约0.1％至约20％(w/v)、约0.1％至约10％(w/v)、约0.1％至约2％(w/v)、约0.5％至约25％(w/v)、约0.5％至约20％(w/v)、约0.5％至约10％(w/v)、约0.5％至约2％(w/v)、约1％至约20％(w/v)、约1％至约10％(w/v)、约1％至约2％(w/v)、约5％至约20％(w/v)、约5％至约10％(w/v)、或约7％至约10％(w/v))的胶凝剂。优选地，相对于溶剂，药物组合物(例如，药物剂型)可含有例如约0.5％至约25％(w/v)(例如，约0.5％至约20％(w/v)、约0.5％至约10％(w/v)、约0.5％至约2％(w/v)、约1％至约20％(w/v)、约1％至约10％(w/v)、约1％至约2％(w/v)、约5％至约20％(w/v)、约5％至约10％(w/v)、或约7％至约10％(w/v))的胶凝剂。
112.可在本文所公开的药物组合物中使用的胶凝剂是本领域中已知的。胶凝剂的非限制性示例包括透明质酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)、聚(乳酸-共聚-羟基乙酸)、聚乳酸、聚己内酯、藻酸或其盐、聚乙二醇、纤维素、纤维素醚、卡波姆(例如，)、琼脂、明胶、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖(例如，瓜尔胶、槐豆胶或塔拉胶)、黄原胶、壳聚糖、果胶、淀粉、黄蓍胶、角叉菜胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、石蜡、凡士林、硅酸盐、丝蛋白，以及它们的组合。本文所述的胶凝剂是本领域中已知的。优选地，所述胶凝剂是透明质酸。
113.相对于溶剂，药物组合物可含有例如约0.5％至约2％(w/v)(例如，约1％至约2％(w/v))的透明质酸。相对于溶剂，药物组合物可含有例如约5％至约10％(w/v)(例如，约6％至约8％(w/v))的甲基纤维素。药物组合物可含有例如透明质酸和甲基纤维素作为胶凝剂(例如，相对于溶剂，约0.5％至约2％(w/v)的透明质酸和约5％至约10％(w/v)的甲基纤维素)。药物组合物可含有例如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)作为胶凝剂。相对于溶剂，药物组合物可含有例如约1％至约20％(w/v)(例如，约1％至约15％(w/v)、约1％至约10％(w/v)、约5％至约20％(w/v)、约5％至约15％(w/v)、约5％至约10％(w/v)、约10％至约20％(w/v)、或约10％至约15％(w/v))的聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)。泊洛沙姆可为泊洛沙姆407、泊洛沙姆188，或它们的组合。相对于溶剂，药物组合物可含有例如约0.5％(w/v)至约20％(w/v)的丝蛋白作为胶凝剂。
114.透明质酸(hyaluronan)是透明质酸(hyaluronic acid)或其盐(例如，透明质酸钠)。透明质酸(hyaluronan)是本领域中已知的，并且通常是从各种细菌(例如，兽疫链球菌(streptococcus zooepidemicus)、马链球菌(streptococcus equi)或酿脓链球菌(streptococcus pyrogenes))或其它来源(例如，牛玻璃体液或鸡冠)中分离的。透明质酸的重均分子量(mw)通常为约50kda至约10mda。优选地，透明质酸(例如，透明质酸钠)的mw为约500kda至6mda(例如，约500kda至约750kda，约600kda至约1.1mda，约750kda至约1mda，约1mda至约1.25mda，约1.25至约1.5mda，约1.5mda至约1.75mda，约1.75mda至约2mda、约2mda至约2.2mda、约2mda至约2.4mda)。更优选地，透明质酸(例如，透明质酸钠)的mw为约620kda至约1.2mda或约1.2mda至约1.9mda。透明质酸的其它优选分子量范围包括例如约600kda至约1.2mda。
115.聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物是本领域中已知的。聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物的非限制性示例是泊洛沙姆，其中单个聚氧丙烯嵌段侧接有两个聚氧乙烯嵌段。泊洛沙姆是以多种商品名例如和商购。药物组合物可含有例如聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)，所述共聚物包含数均分子量(mn)为例如约1,100g/mol至约17,400g/mol(例如，约2,090g/mol至约2,360g/mol、约7,680g/mol至约9,510g/mol、6,830g/mol至约8,830g/mol、约9,840g/mol至约14,600g/mol、或约12,700g/mol至约17,400g/mol)的聚氧丙烯嵌段。聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)可包含数均分子量(mn)为约1,100g/mol至约4,000g/mol的聚氧丙烯嵌段和为约30％至约85％(w/w)的计算聚氧乙烯含量。优选地，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)可包含计算分子量为例如约1,800g/mol至约4,000g/mol的聚氧丙烯嵌段。优选地，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)的计算聚氧乙烯含量可为例如约70％至约80％(w/w)。优选地，聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物(例如，泊洛沙姆)的数均分子量可为例如约7,680g/mol至约14,600g/mol。泊洛沙姆的非限制性示例是泊洛沙姆407和泊洛沙姆188。
116.纤维素和纤维素醚是本领域中已知的。纤维素和纤维素醚是各种商品名例如methocel
tm
、和商购。纤维素醚的非限制性示例包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素。纤维素醚(例如，甲基纤维素)的数均分子量(mn)可为例如约5kda至约300kda。甲基取代的纤维素(例如，甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素或甲基羟乙基纤维素)可以具有例如19％至35％(例如，19％至30％)的甲基含量。
117.丝蛋白是存在于由许多昆虫产生的丝中的一种蛋白质。丝蛋白是本领域中已知的并且可从各种供应商处商购，所述各种供应商为例如jiangsu soho international group；simatech,suzhou,china；xi’an lyphar biotech,ltd.；xi’an rongsheng biotechnology；mulberry farms,treenway silks,sharda group,maniar enterprises和wild fibres。丝蛋白的分子量通常为约10kda至约500kda。wo 2017/139684中描述了丝蛋白，该专利的公开内容以引用方式并入本文。
118.交联的胶凝剂
119.药物组合物可含有非交联或交联的胶凝剂。胶凝剂可使用本领域中已知的交联剂
进行交联。优选地，交联的胶凝剂是共价交联的。包含交联的胶凝剂的药物组合物(例如，药物剂型)可用于控制抗铂化学保护剂的释放曲线。例如，抗铂化学保护剂从含有交联的胶凝剂的药物组合物(例如，药物剂型)中的释放可以相对于参考组合物延长释放，所述参考组合物与所述药物组合物的不同之处仅在于所述参考组合物中缺乏胶凝剂的交联。可以通过比较药物组合物和参考组合物的t
max
值来评定抗铂化学保护剂释放的延长。
120.某些胶凝剂，例如那些具有羧酸根部分的胶凝剂(例如，透明质酸、藻酸和羧甲基纤维素)，可以使用离子交联剂(例如，多价金属离子，例如mg
2
、ca
2
或al
3
)进行离子交联。胶凝剂的离子交联技术是本领域中已知的(参见例如美国专利号6,497,902和7,790,699，这些专利的公开内容以引用方式并入本文)。通常，胶凝剂可以在水溶液中使用多价金属离子(例如，mg
2
、ca
2
或al
3
)作为离子交联剂进行离子交联。不希望受理论束缚，据信金属离子与胶凝剂的不同分子(例如，与位于胶凝剂的不同分子上的羧酸侧基)配位，从而在胶凝剂的这些不同分子之间形成连接键。
121.某些具有反应性官能团(例如，-oh、-cooh或-nh2)的胶凝剂可以共价交联。胶凝剂共价交联技术是本领域中已知的(参见例如，khunmanee等人，j.tissue eng.,8:2041731417726464,2017，该专利的公开内容以引用方式并入本文)。共价交联剂的非限制性示例包括：1,4-丁二醇二缩水甘油醚(bdde)、二乙烯基砜、戊二醛、溴化氰、辛基琥珀酸酐、酰氯、二异氰酸酯、甲基丙烯酸酐、硼酸，以及高碘酸钠/己二酸二酰肼。
122.其它赋形剂
123.药物组合物可含有除胶凝剂之外的药用赋形剂。例如，药物组合物可含有例如液体溶剂、张度剂、缓冲剂和/或着色剂。某些赋形剂可以发挥多种作用。例如，液体溶剂除了其作为载体的功能之外，还可以用作张度剂和/或缓冲剂。此类溶剂是本领域中已知的，例如盐水(例如，高渗盐水、低渗盐水、等渗盐水或磷酸盐缓冲盐水)和人工外淋巴液。
124.液体溶剂可在药物组合物(例如，药物剂型)中用作媒介物。液体溶剂是本领域中已知的。液体溶剂的非限制性示例包括水、盐水(例如，高渗盐水、低渗盐水、等渗盐水或磷酸盐缓冲盐水)、人工外淋巴液和tris缓冲液。人工外淋巴液是含有nacl(120-130mm)、kcl(3.5mm)、cacl2(1.3-1.5mm)、mgcl2(1.2mm)、葡萄糖(5.0-11mm)和缓冲剂(例如，nahco3(25mm)和nah2po4(0.75mm)，或hepes(20mm)和naoh(调节至约7.5的ph))的水溶液。
125.药物组合物(例如，药物剂型)中可包含张度剂以相对于抗铂化学保护剂提供的摩尔渗透压浓度增大摩尔渗透压浓度。张度剂是本领域中已知的。张度剂的非限制性示例包括基本上中性的缓冲剂(例如，磷酸盐缓冲盐水、tris缓冲液或人工外淋巴液)、葡萄糖、甘露醇、甘油、氯化钾和氯化钠(例如，高渗盐水、等渗盐水或低渗盐水)。药物组合物(例如，药物剂型)包含足量的张度剂以提供用于施用于受试者的高渗药物剂型(例如，计算摩尔渗透压浓度为至少400mosm/l(例如，至少500mosm/l、至少600mosm/l，或至少700mosm/l)，和/或2,500mosm/l或更低(例如，2,000mosm/l、1,900mosm/l或更低、1,800mosm/l或更低、1,700mosm/l或更低、1,600mosm/l或更低、或1,500mosm/l或更低)的药物剂型)。例如，药物组合物(例如，药物剂型)中的张度剂的靶浓度可以例如通过以下方式确定：(i)从总的靶计算摩尔渗透压浓度中减去抗铂化学保护剂和其它非聚合赋形剂的计算摩尔渗透压浓度贡献，以获得来自张度剂的靶计算摩尔渗透压浓度贡献，以及(ii)通过将来自张度剂的靶计算摩尔渗透压浓度贡献除以当张度剂溶解在液体溶剂中时产生的离子和/或分子的数量来确定
所述张度剂的浓度。因此，药物组合物(例如，药物剂型)中可包含适量的张度剂。
126.缓冲剂可用于将药物组合物(例如，药物剂型)的ph调节至基本上中性的ph水平。缓冲剂是本领域中已知的。缓冲剂的非限制性示例包括例如磷酸盐缓冲剂和古德缓冲剂(例如，tris、mes、mops、tes、hepes、hepps、三(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine)和n,n-二(羟乙基)甘氨酸(bicine))。除了ph控制之外，缓冲剂还可用于控制药物组合物(例如，药物剂型)的摩尔渗透压浓度。
127.制备方法
128.本发明的药物组合物(例如，药物剂型)可以由抗铂化学保护剂、胶凝剂和液体溶剂制备。本发明提供了一种通过以下方式制备本发明的药物组合物(例如，药物剂型)的方法：(i)提供抗铂化学保护剂和胶凝剂，以及(ii)将所述抗铂化学保护剂和所述胶凝剂与液体溶剂混合以产生高渗药物组合物。
129.抗铂化学保护剂和胶凝剂可以例如作为混合物或作为单独成分提供。当抗铂化学保护剂和胶凝剂单独提供时，步骤(ii)可以包括例如：
130.(a)首先将液体溶剂与胶凝剂混合以产生中间混合物，然后将所述中间混合物与抗铂化学保护剂混合；
131.(b)首先将液体溶剂与抗铂化学保护剂混合以产生中间混合物，然后将所述中间混合物与胶凝剂混合；或者
132.(c)将一部分液体溶剂与抗铂化学保护剂混合以产生第一混合物，将另一部分液体溶剂与胶凝剂混合以产生第二混合物，并将所述第一混合物和所述第二混合物合并。
133.以下实施例旨在说明本发明。它们并不意味着以任何方式限制本发明。
134.实施例
135.实施例1.硫代硫酸盐制剂的制备
136.透明质酸凝胶1(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸)
137.将五水合硫代硫酸钠(619.75mg)在无菌小瓶中溶于无菌蒸馏水(5ml)中以产生澄清溶液。将透明质酸(50.30mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到溶液中，并将所得混合物在4℃下搅拌8-10分钟。将所得溶液通过0.22μm的millex-gv无菌过滤器过滤。
138.透明质酸凝胶2(0.1m sts，2％(w/v)的透明质酸)
139.将五水合硫代硫酸钠(124.87mg)溶于无菌蒸馏水(3.031ml)中。将甲基纤维素(351.01mg；a15 premium lv，dow chemical company)溶于无菌蒸馏水(2.0ml)中，并将所得溶液与硫代硫酸钠溶液混合。将透明质酸(100.10mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到所得混合物中，并在4℃下混合10-15分钟。
140.透明质酸凝胶3(0.5m sts，2％(w/v)的透明质酸)
141.将五水合硫代硫酸钠(620.35mg)溶于无菌蒸馏水(3ml)中。将甲基纤维素(350.23mg；a15 premium lv，dow chemical company)溶于无菌蒸馏水(2.0ml)中，并将所得溶液与硫代硫酸钠溶液混合。将透明质酸(100.65mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到所得混合物中，并在4℃下混合10-15分钟。
142.透明质酸凝胶4(0.1m sts、1％(w/v)的透明质酸、甘露醇)
143.将透明质酸(50.09mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到水(5ml)中。添加五水合硫代硫酸钠(124.9mg)。通过添加氢氧化钠(1n,约0.5μl)将所得混合物的ph调节至ph7.12。向小瓶中添加适量甘露醇，以将摩尔渗透压浓度调节至1.046osm/kg。将粘稠溶液通过0.22μm的millex-gv过滤器过滤。
144.透明质酸凝胶5(0.1m sts，1％(w/v)的透明质酸)
145.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶5，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供0.1m浓度的硫代硫酸钠。
146.透明质酸凝胶6(0.2m sts，1％(w/v)的透明质酸)
147.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶6，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供0.2m浓度的硫代硫酸钠。
148.透明质酸凝胶7(0.3m sts，1％(w/v)的透明质酸)
149.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶7，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供0.3m浓度的硫代硫酸钠。
150.透明质酸凝胶8(0.4m sts，1％(w/v)的透明质酸)
151.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶8，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供0.4m浓度的硫代硫酸钠。
152.透明质酸凝胶9(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸，tris(5x))
153.将透明质酸(79.99mg；制药级80，kikkoman biochemifa comp any；0.6-1.2mda)添加到tris缓冲剂(8ml，amresco-0497-500g)中。通过添加hcl(5n)将所得混合物的ph调节至ph7.13。将五水合硫代硫酸钠(992.60mg)添加到上述溶液中。将粘稠溶液通过0.22μm的millex-gv过滤器过滤。
154.透明质酸凝胶10(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸，磷酸盐缓冲盐水(5x))
155.将透明质酸(70.38mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到pbs缓冲剂(7ml，5
×
)中。添加五水合硫代硫酸钠(868.46mg)。通过添加naoh(1n)将所得混合物的ph调节至ph6.99。将粘稠溶液通过0.22μm的millex-gv过滤器过滤。
156.透明质酸凝胶11(0.8m sts，1％(w/v)的透明质酸)
157.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶11，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供0.8m浓度的硫代硫酸钠。
158.透明质酸凝胶12(1m sts，0.8％(w/v)的透明质酸)
159.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶12，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供1m浓度的硫代硫酸钠，并且透明质酸的量经调节以提供0.8％(w/v)浓度的透明质酸。
160.透明质酸凝胶13(0.5m sts，0.82％(w/v)的透明质酸(hyalgan))
161.透明质酸凝胶13是通过以下方式制备的：将五水合硫代硫酸钠与透明质酸(hyalgan,fidia pharma usa,florham park,nj)混合以提供透明质酸浓度为0.82％(w/v)的最终制备物。
162.透明质酸凝胶14(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸(singclean))
163.透明质酸凝胶14是根据针对透明质酸凝胶13所述的工序制备的，不同之处在于将
透明质酸(singclean，hangzhouh singclean medical products co.,ltd.,hangzhou,china)用于该凝胶的制备中。
164.透明质酸凝胶15(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸(euflexxa))
165.透明质酸凝胶15是根据针对透明质酸凝胶13所述的工序制备的，不同之处在于将透明质酸(euflexxa，ferring pharmaceuticals inc.,parsippany,nj)用于该凝胶的制备中。
166.透明质酸凝胶16(0.5m sts，1％(w/v)的透明质酸(healon))
167.透明质酸凝胶16是根据针对透明质酸凝胶13所述的工序制备的，不同之处在于将透明质酸(healon,johnson&johnson,new brunswick,nj)用于该凝胶的制备中。
168.透明质酸凝胶17(1m sts，1％(w/v)的透明质酸)
169.根据针对透明质酸凝胶1所述的工序制备透明质酸凝胶17，不同之处在于五水合硫代硫酸钠的量经调节以提供1m浓度的硫代硫酸钠。
170.透明质酸凝胶18(10％(w/v)的n-乙酰基-l-半胱氨酸，1％(w/v)的透明质酸)
171.将透明质酸(39.38mg；制药级80，kikkoman biochemifa company；0.6-1.2mda)添加到水(4ml)中。添加n-乙酰基-l-半胱氨酸(399.14mg)。通过添加naoh(10n，240μl)将所得混合物的ph调节至ph 7.21。将粘稠溶液通过0.22μm的millex-gv过滤器过滤。渗透压经测量为1.107osm/kg。
172.其它透明质酸凝胶可以使用本文所述的工序制备。例如，1m和1.5m透明质酸凝胶可根据与针对例如透明质酸凝胶1和透明质酸凝胶12所述的工序相同的工序制备。此外，凝胶的ph水平可以用布忍司特酸(例如，盐酸)和碱(例如，氢氧化钠)调节至ph 6.5至8.5。
173.实施例2.外淋巴液浓度的药代动力学建模
174.通过使用人中的顺铂分布的药代动力学(pharmacokinetic,pk)模拟，对在高剂量顺铂治疗(100mg/m2)后人中的最大耳蜗铂水平进行建模。用于模拟的动力学参数是从关于顺铂群体pk(urien等人，br.j.clin.pharmacol.,57:756-63,2004)和高剂量顺铂治疗后的pk(andersson等人，j.pharm.sci.,85:824-27,1996)的文献报道中获得的。使用winnonlin(phoenix 64)pk模拟模型9(静脉内输注，2室)进行pk模拟。基于先前的动物研究结果，假设血浆与耳蜗的浓度比为1:1，并且这一假设得到了显示顺铂的组织分布特征的文献报告(johnsson等人，cancer chemother.pharmacol.,37:23-31,1995)的进一步支持。
175.所预测的顺铂治疗后的最大血浆铂浓度经确定为约22μm。应用30倍摩尔化学计量比导致浓度为660μm(0.66mm)，当使用硫代硫酸盐的分子量时，该浓度导致硫代硫酸盐浓度为74μg/ml。在人耳蜗中达到这一硫代硫酸盐水平预期提供对在高剂量(例如，100mg/m2)顺铂治疗后的顺铂诱导的耳毒性的完全(最大)保护。
176.实施例3.体内药代动力学研究
177.将透明质酸凝胶编号1以12％w/v(0.5m,6.2mg)的剂量施用于雄性hartley豚鼠。剂量体积是固定的(10μl)。在每个时间点(n＝5只动物/时间点)对外淋巴液进行取样，并使用液相色谱-串联质谱法(lc-ms/ms)对硫代硫酸盐的浓度进行定量。
178.透明质酸凝胶1在第一取样时间点(1h)处达到868.5μg/ml(约7.8mm)的最大外淋巴液浓度。此最大外淋巴液浓度是预计提供对顺铂诱导的耳毒性的100％保护的透明质酸凝胶1浓度(最小有效浓度；74μg/ml，0.66mm)的约10倍高。外淋巴液t
1/2
在2.7小时至6.4小
时的范围内。高外淋巴液透明质酸凝胶1浓度与相对较长的半衰期的组合提供了顺铂治疗前3小时至顺铂治疗治疗后4小时的治疗窗口。在另一项药代动力学研究中，健康受试者被分为4个剂量群组：群组1、群组2、群组3和群组4。每个剂量群组包含8名随机化接受db-020或安慰剂的人类受试者(6/2随机化；6名受试者接受db-020，2名受试者接受安慰剂)。向群组1单侧鼓室内施用19mg硫代硫酸钠，该硫代硫酸钠为如针对透明质酸凝胶1所述制备的0.15m硫代硫酸钠/透明质酸凝胶。向群组2单侧鼓室内施用62mg作为透明质酸凝胶1的硫代硫酸钠。向群组3单侧鼓室内施用124mg作为透明质酸凝胶17的硫代硫酸钠。向群组4单侧鼓室内施用186mg硫代硫酸钠，该硫代硫酸钠为如针对透明质酸凝胶1所述制备的1.5m硫代硫酸钠/透明质酸凝胶。向安慰剂受试者施用1％w/v的透明质酸水溶液。
179.研究结果显示在表1和表2以及图1至图3中。
180.表1
[0181][0182]
表2
[0183][0184]a增加至内源性＝(平均硫代硫酸盐c
max
)-(平均硫代硫酸盐安慰剂水平)
[0185]b硫代硫酸盐的mw＝112g/mol
[0186]
实施例4.体内药效动力学研究
[0187]
为了评定硫代硫酸钠凝胶与顺铂施用相关的治疗窗口，在顺铂施用前24小时、6小时、3小时或1小时，或在顺铂施用后1小时、4小时或24小时，将单剂量的1.24mg透明质酸凝胶1鼓室内(it)施用至豚鼠的左耳(单次10mg/kg静脉内推注；图4)。与未经实验处理的动物相比，所有未用透明质酸凝胶1治疗的对照右耳都表现出显著的阈值偏移(即，听力损失)(图5a)。相对于未用透明质酸凝胶1治疗的对照耳，在顺铂施用前3小时至顺铂施用后4小时给药的透明质酸凝胶1提供了对顺铂诱发的听力损失的保护(图5b)。当在顺铂治疗的更远侧施用(例如，》顺铂给药前6h或顺铂给药后24h)时，透明质酸凝胶1在保护免受顺铂诱发的听力损失方面的效果稍差。当在顺铂施用前1h给药透明质酸凝胶1时观察到了最大的保护，表明当透明质酸凝胶1在顺铂治疗前并且优选地在顺铂治疗的近侧施用时，可以实现最高
水平的保护。
[0188]
实施例5.示例性水凝胶的药代动力学性能
[0189]
豚鼠，研究1
[0190]
使用体重为250-350g的白化豚鼠(hartley)进行研究。为了进行给药，将动物放置成靠在其肩膀上，手术耳朝上，并且首先使用耳后区进路使听泡暴露出。在听泡上钻直径为2-3mm的洞，以提供对圆窗微环境的直接观察。然后，使用10μl的hamilton注射器和26号针头将10μl的0.5m硫代硫酸钠/2％(w/v)透明质酸(sts组合物)的含水组合物施加到rwm上。在施加后，使豚鼠在该位置保持30分钟，以使化合物扩散到耳蜗中。用肌移植物封闭听泡开口，并用缝线闭合切口。
[0191]
简单来说，取样工序如下。所有取样工序都是终点的。用co2对动物实施安乐死。通过心脏穿刺收集0.5ml的血液样本。通过在4℃下以5,000rpm离心10分钟来分离血浆，并收集在单独的试管中。通过小脑延髓池收集50μl的脑脊液。离体收集外淋巴液，以避免来自经由耳蜗导水管的脑脊液流入物的污染。将颞骨迅速分离出，然后去除听泡以暴露耳蜗。在外淋巴液取样前，在手术显微镜下用吸潮尖(absorbent point)小心地去除任何可见的剩余剂量组合物。在顶端处打小孔，然后使用拉拔的玻璃移液管取样5-7μl的外淋巴液。将所有样本立即在干冰上冷冻，并储存在-80℃直至进行分析。使用在togawa等人，chem.pharm.bull.,40:3000-3004,1992中公开的方法测量样本中硫代硫酸盐的浓度，该文献的公开内容以引用方式并入本文。这项研究的结果示出在图8a、图8b、图9a、图9b以及表3中。
[0192]
食蟹猴
[0193]
向食蟹猴皮下施用妥伏定(4mg/kg)。在30分钟之后，通过静脉内推注异丙酚(5.5mg/kg)将动物麻醉。然后使用2-3％异氟醚吸入将动物维持在麻醉状态。然后，将动物固定并以反特伦德伦伯卧位横向放置，以确保可及圆窗。在手术过程期间，将动物保持在温暖的毯子上。
[0194]
当动物达到麻醉状态时，在右耳中进行鼓室内注射。将1.1ml的盐酸肾上腺素-盐水(0.1mg溶于10ml的盐水中)和0.5ml的盐酸利多卡因(20mg/ml)分别作为局部麻醉剂皮下注射到每只耳朵的耳道后壁的皮肤中。然后在耳廓后皮肤中做切口，钻掉一部分颞骨以露出中耳。使用25g针将50μl的sts组合物注射到圆窗膜中。在给药后，将动物放置成直线，头朝上，以让给药溶液在鼓室中停留30分钟。然后对另一只耳朵重复同样的工序。
[0195]
在对第1只耳朵(右)给药后约2小时收集血浆和csf。在右耳给药后约3小时进行右耳耳蜗外淋巴液取样。通过静脉内注射11mg/kg的异丙酚对动物实施安乐死，然后经由股动脉放血。然后将动物以侧卧位放置。进行耳廓后皮肤切开，并取出外耳道以暴露中耳。然后钻掉颞骨的一部分以露出耳蜗的底转(basal turn)。用棉签清洁中耳中的剩余剂量(如果可见的话)。将一滴组织胶涂在耳蜗底部处，以最小化来自所给药的组合物的污染。
[0196]
使用0.5-1mm的圆头毛边钩针(burr crochet)或锋利钩针(sharped crochet)，在耳蜗的底转处打孔。然后使用插入到耳蜗鼓阶内的毛细管收集外淋巴液(约10μl)。在左耳给药后约2小时，针对左耳耳蜗外淋巴液取样重复相同的工序。该项研究的结果示于表3中。
[0197]
表3
[0198][0199]
在上表中，it是鼓室内施用，并且tt是经鼓室施用。
[0200]
*从测试动物血浆样本中测得的硫代硫酸盐浓度。
[0201]
豚鼠，研究2
[0202]
将体重为200-300g的约5-7周龄的雄性豚鼠用作受试者(n＝每组5只)。在任何工序之前，在手术前10分钟通过肌内途径使用盐酸唑拉西泮(舒泰50；20mg/kg)对动物实行麻醉。如果需要的话，则将为原始剂量的十分之一的术中加强剂腹膜内施用。
[0203]
鼓室内注射：
[0204]
1.在显微镜放大下，用锋利的剪刀在耳-头褶的约6-8mm尾侧处开0.5-1.5cm的耳廓后皮肤切口。小心避免切得太深以保护下面的血管结构。
[0205]
2.用镊子小心地穿过皮下脂肪层、肌肉和组织执行钝器解剖。轻轻地将乳突肌体缩回，直到看到鼓泡骨膜的光滑圆顶。在听泡的尾部处，可以看到更深的颈肌，即胸乳突肌的附着处。在手术期间保留了在听泡圆顶的背部处和吻部处变得可见的面神经。
[0206]
3.在听泡后部部分中，在使用钻削开小孔(直径0.5mm)之前，放置自留牵开器。用一对珠宝尖钳在背部和尾部方向上切开听泡骨。在高放大倍数下，将骨头逐个取出。小心不要刺穿镫骨动脉，因为从该动脉出血可能危及手术工序，所述镫骨动脉直接位于听泡盖(bulla cap)下。将去除的骨量保持最小以防止过多的流体进入中耳，同时仍然允许良好的视觉效果和接近圆窗微环境。
[0207]
4.使用具有25-26g钝针的无菌玻璃hamilton注射器将10或90μl的凝胶制剂递送到圆窗微环境中。
[0208]
5.使被递送的剂在圆窗微环境内停留长达30分钟。这个小孔被肌肉组织和组织胶覆盖。
[0209]
6.将切口用缝线(4-0不可吸收的单丝或5-0不可吸收的尼龙)和组织胶或创伤夹
闭合。整个工序耗费约3-5分钟，具体取决于剂规格。
[0210]
7.在手术期间和直至康复，将动物放在温度受控(38℃)的加热垫上，直到恢复意识，在此时将所述动物放回饲养笼(home-cage)中。
[0211]
或者，经鼓室向动物施用凝胶制剂。
[0212]
样本收集：
[0213]
血液采集：
[0214]
1.在安乐死箱中不进行预充气的情况下，将豚鼠放在安乐死箱中，并将100％的二氧化碳引入以使动物失去知觉并减少动物的痛苦。在呼吸停止后，将二氧化碳流量保持最少1分钟。在确认死亡后，将豚鼠从安乐死箱中取出。
[0215]
2.在安乐死后立即采集血液。
[0216]
3.在操作者将动物以背位固定后，将针以4-6或稍向前插入胸骨脊的前部处。
[0217]
4.将针回拉，则血液返回。
[0218]
5.体积：对于每次血液采集，采集约1ml的血液。
[0219]
csf收集：
[0220]
在安乐死后收集csf。将0.5*20的静脉内输注针从相对于枕骨大孔呈90
°
慢慢降低。使针头到达皮肤下4.5-5mm的距离，并取出50-200μl的澄清组织液。
[0221]
外淋巴液收集：
[0222]
在安乐死后，将动物剥去多余的皮肤和肌肉组织，以获得完整的听泡，并将听泡壁用小镊子切开以露出耳蜗。用小棉球清洁听泡的底转。用生物胶涂布耳蜗底圈和圆窗。在干燥后，手动在耳蜗的顶圈处钻唯一的微孔。然后用插入耳蜗顶圈的微毛细管收集2μl的外淋巴液。将外淋巴液样品添加到装有18μl牛血清白蛋白(bsa，1m)的小瓶中，在-80℃下储存直至进行分析。
[0223]
豚鼠研究2的结果提供于表4和表5中。
[0224]
表4
[0225]
[0226][0227]
在该表中，tt是经鼓膜施用，
[0228]
*该测试是前一次测试的重复。
[0229]
表5
[0230][0231]
在该表中，it是鼓室内施用，并且tt是经鼓室施用。
[0232]
实施例6.例示性水凝胶的药效动力学性能
[0233]
将顺铂用0.9％(w/v)盐水稀释至5mg/ml的最终浓度。将体重为250-350g的白化豚鼠(hartley)用于研究。经过至少3天的驯化，28只动物被纳入研究。在无菌条件下，将顺铂使用推注注射腹膜内施用。将五个群组用不同的开始日期交错以供进行研究。
[0234]
在顺铂施用后7天，使用tdt rz6多输入多输出处理器记录动物的听觉脑干反应(abr)。使用历史abr数据来限定基线。用盐酸替来他明和盐酸唑拉西泮(舒泰)对动物实施麻醉。经由耳机递送声音刺激。将针电极放置在耳道附近的尾腹侧位置、头骨的顶点、和小
腿的底部(ground)。刺激水平为以5db的阶跃从10db到90db，并且短音频率为4khz、24khz和32khz。声压级上限为90db。通过目视检查堆叠的波形作为最低声压级来观察abr阈值，在所述堆叠的波形处波形高于本底噪声。
[0235]
在顺铂研究之前，记录来自50只动物的每只动物双耳的abr数据(未经实验处理的n＝100)。未经实验处理的动物在32khz下的阈值为39.8db。正常听力范围被限定为平均
±
2sd，27.9至51.6db。顺铂主要诱发高频下的听力损失。顺铂后听力损失的清晰模式被限定为在32khz下60db及更高的阈值。
[0236]
在这项研究中，28只动物中有1只在测量第7天之前死亡。在剩余的27只动物中，18只动物在32khz下使用阈值》60db时具有听力损失(图10a)。在32khz下的听力损失的范围是从65db到90db的阈值(图10b)。90db是测量上限。应注意的是，当没有波形或仅在90db处看到波形时，阈值被限定为90db。32khz下的平均阈值为82db，这对应于从39.8db的初始阈值偏移平均42.2db(图11a)。
[0237]
局部鼓室内给药和耳蜗取样
[0238]
如实施例5中所述进行局部鼓室内给药和耳蜗取样。
[0239]
局部递送的抗铂化学保护剂提供免受基于铂的抗肿瘤剂的听力保护。
[0240]
如下进行对局部递送的抗铂化学保护剂对抗基于铂的抗肿瘤剂的听力保护效应的评估。
[0241]
如上所述将0.5m硫代硫酸钠/2％(w/v)的透明质酸(sts组合物)或媒介物的含水组合物鼓室内施用到左耳(le)中的圆窗上，并且将豚鼠的右耳(re)保持不处理(图12)。在sts组合物或媒介物给药后60分钟，向动物腹膜内注射10mg/kg的顺铂。在顺铂施用后7天，测量双耳在4khz、24khz和32khz下的abr。
[0242]
由于顺铂攻击后听力损失的异质性，使用未处理的右耳来选择具有听力损失的动物。有21只动物在32khz下具有右耳阈值》60db。在这21只动物中，排除了3只患有中耳炎的动物，剩下18只动物进行最终分析。向10只动物给药媒介物，并向8只动物给药sts组合物(图11b)。在未处理的右耳中，sts组合物组和媒介物组两者的abr阈值没有差异，其中在4khz下的平均阈值为73db，在24khz下的平均阈值为71db，并且在32khz下的平均阈值为80db。经媒介物处理的左耳与未处理的右耳相比没有显著差异，显示为在4khz下的阈值为74db，在24khz下的阈值为70db，并且在32khz下的阈值为74db。
[0243]
与经媒介物处理的耳朵和未处理的右耳相比，经sts组合物处理的耳朵在32khz和24khz下均具有显著较低的阈值(***p《0.001，双因素方差分析)。在4khz下，经sts组合物处理的耳朵中的平均阈值为61db，并且未处理的对侧右耳中的平均阈值为75db；保护无统计学意义(p＝0.089)。经sts组合物处理的耳朵中在24khz和32khz下的平均阈值分别为40db和48db，相比之下对侧未经处理的右耳中的平均阈值分别为69db和80db。在24khz和32khz下，未经实验处理的动物中的正常听力阈值分别为35db和40db。对于未经实验处理的动物的耳朵，顺铂后未处理的耳朵在24khz和32khz下分别具有平均34db和40db的阈值升高，但是经sts组合物处理的耳朵仅具有5db和8db的偏移。因此，硫代硫酸钠在24khz和32khz下均提供平均80％的保护。
[0244]
在如上文所述的类似设计的研究中，在对豚鼠的abr测试期间测量4khz、24khz和32khz下的声压级，所述豚鼠的每只耳朵施用了媒介物或硫代硫酸钠(0.1m、0.5m或1m的硫
代硫酸钠凝胶)，之后进行顺铂攻击(10mpk的顺铂，静脉内注射)。在顺铂施用前1小时，将不同剂量的透明质酸凝胶作为10μl it注射液施用到左耳内。动物的对侧耳朵(右耳)未处理。测试透明质酸凝胶5(0.1m)、透明质酸凝胶1(0.5m)和透明质酸凝胶17(1m)。与未经实验处理的动物(灰色阴影区域)相比，未经处理的耳朵表现出明显的阈值偏移。在所有测试频率下，与未处理的对侧对照耳相比，用透明质酸凝胶1(0.5m)和透明质酸凝胶17(1m)处理的组显示出听力保护。在经媒介物处理过的耳朵中没有看到保护。结果汇总在图13中。
[0245]
其它实施方案
[0246]
在不偏离本发明的范围和精神的情况下，所述发明的各种修改和更改对于本领域技术人员而言将是明显的。尽管已结合具体实施方案对本发明进行了描述，但是应当理解所要求保护的本发明不应当不适当地限定于此类具体实施方案。实际上，用于进行本发明的所述方式的各种修改对于本领域技术人员而言是明显的，并且旨在包含在本发明的范围内。
[0247]
其它实施方案在以下权利要求范围内。