一种适应猪流行性腹泻病毒的ST悬浮细胞株ST-J及其应用的制作方法

技术特征：
1.一种st悬浮细胞株，命名为st-j悬浮株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c202150，保藏日期为2021年1月29日。2.根据权利要求1所述的st-j悬浮株cctcc no：c202150，在用其培养猪流行性腹泻病毒收获的病毒培养液中，病毒的滴度为6.00tcid
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/0.1ml以上，可选为6.50tcid
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/0.1ml以上，且st-j细胞的活率为28％以上，可选为28.12％-71.70％。3.利用权利要求1或2所述的st-j悬浮株cctcc no：c202150培养猪流行性腹泻病毒的方法，其包括以下步骤：s1：将st-j悬浮株在营养液中扩大培养，获得细胞悬液；s2：向步骤s1的细胞悬液中加入等体积的病毒维持液，随后加入edta-胰酶，并接种猪流行性腹泻病毒种毒，培养；s3：收获病毒培养液。4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤s1中使用摇瓶进行扩所述大培养，扩大培养的条件为：35.0℃-37.0℃，5.0％co2，100rpm/min-130rpm/min摇床培养48-72h；和/或步骤s2中使用摇瓶进行所述培养，培养的条件为：35.0℃-37.0℃，5.0％co2，100rpm/min-130rpm/min摇床培养48-96h。5.根据权利要求3所述的方法，其中步骤s1中使用生物反应器进行所述扩大培养，扩大培养的条件为：35.0℃-37.0℃，溶氧浓度40％-60％，搅拌转速为：45rpm/min-65rpm/min，ph 7.0-7.4条件下培养48-72h；和/或步骤s2中使用生物反应器进行所述培养，培养的条件为：35.0℃-37.0℃，溶氧浓度40％-60％，搅拌转速为：45rpm/min-65rpm/min，ph 7.0-7.4条件下培养24-96h。6.根据权利要求3-5中任一项所述的方法，其中步骤s3中在收获的病毒培养液中，st-j细胞的活率为28％以上，可选为28.12％-71.70％，且病毒的滴度为6.00tcid
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/0.1ml以上，可选为6.50tcid
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/0.1ml以上。7.根据权利要求3-6中任一项所述的方法，其中步骤s3中收获的病毒培养液为用于生产猪流行性腹泻病毒灭活疫苗，所述收获病毒培养液的操作包括：s31：收获步骤s2中培养后的病毒培养上清液，得到第一病毒培养液，并向剩余的病毒培养液中补加新的病毒维持液至培养体积，继续培养；s32：重复n次步骤s31，将n次获得的病毒培养液与第一病毒培养液合并，其中n≥1；可选地，步骤s31中所述新的病毒维持液为体积比为1:(1-5)的病毒维持液dmem和cd st 239的混合液。8.根据权利要求3-7中任一项所述的方法，其中步骤s2中所述猪流行性腹泻病毒种毒为猪流行性腹泻病毒的弱毒株或强毒株。9.一种猪流行性腹泻病毒灭活疫苗，其利用权利要求3-8中任一项所述的方法获得的病毒培养液制备而成，其中在所述病毒培养液中，svero-e6细胞的活率为28％以上，可选为28.12％-71.70％，且病毒的滴度为6.00tcid
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/0.1ml以上，可选为6.50tcid
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/0.1ml以上。10.权利要求9所述的灭活疫苗的制备方法，其在权利要求3-8中任一项提及的方法的s3步骤后还包括：s4：浓缩纯化所述病毒培养液，得到浓缩毒液；s5：对步骤s4的浓缩毒液进行灭活处理，得到灭活毒液；
s6：将步骤s5的灭活毒液与疫苗佐剂混合，制备得到灭活疫苗；可选地，其中步骤s4中使用500kd浓缩柱(peg 8000，8％-10％添加量)进行纯化浓缩；可选地，步骤s5中灭活处理的具体方法为：将步骤s4中的浓缩毒液用β-丙内酯(终浓度0.02％)4℃灭活22-24h，然后置于37℃水解1.5-2.5h；可选地，步骤s6中所述疫苗佐剂为201佐剂，所述灭活毒液与疫苗佐剂的配比为1:(0.8-1.2)。

技术总结
本发明公开了一种适应猪流行性腹泻病毒的ST悬浮细胞株ST-J及其应用，属于生物技术领域。本发明提供的ST-J悬浮株能够稳定传代生长，利用其进行PEDV的悬浮培养时，培养的PEDV能够稳定增殖，并且可以用于连续增殖培养PEDV并多次收获病毒培养液，可以节约大量的生产成本和培养时间，提升产能。利用获得的病毒培养液制备得到的灭活疫苗免疫原性好，且稳定安全，能够有效用于预防猪流行性腹泻疾病。能够有效用于预防猪流行性腹泻疾病。能够有效用于预防猪流行性腹泻疾病。


技术研发人员：李静 刘建奇 俎红利 宋庆庆
受保护的技术使用者：金宇保灵生物药品有限公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/4/5