安五脂素或其药物组合在大肠癌治疗中的应用的制作方法

1.本发明涉及大肠癌治疗领域，尤其涉及一种安五脂素或其药物组合在大肠癌治疗中的应用。


背景技术：

2.大肠癌是最常见的胃肠道癌症之一，占全球所有癌症相关死亡的8.5%，相关死亡人数仅次于肺癌、肝癌和胃癌。目前，化疗是大肠癌治疗的主要手段之一。
3.顺铂是大肠癌化疗的一线用药，然而长期服用会导致患者获得耐药性，从而严重影响了癌症的治疗效果及患者的生活质量。肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤微环境的主要成分。巨噬细胞可以表现为抑炎促癌的m2型和促炎抑瘤的m1型。m2巨噬细胞通过促进增殖、迁移、侵袭和不良预后，负责促进肿瘤的发生和发展。巨噬细胞m2型极化是促进肿瘤细胞化疗耐药的重要因素。抑制巨噬细胞m2型极化是提高化疗敏感性的重要手段，现有药物对于抑制巨噬细胞m2型极化的效果并不理想。
4.安五脂素（macelignan，简称mace）是一种提取于肉豆蔻的木脂素，分子式c
20h24
o4，分子量328.4，具有抗炎、抗氧化和神经保护功能。目前，尚无安五脂素影响巨噬细胞极化的作用研究，以及，无相关的在预防和治疗人和动物大肠癌化疗中的药物。


技术实现要素：

5.鉴于上述的分析，本发明实施例旨在提供一种安五脂素或其药物组合在大肠癌治疗中的应用，用以解决现有药物无法有效抑制巨噬细胞m2型极化、化疗效果不理想的问题。
6.一方面，本发明实施例提供了一种安五脂素在制备大肠癌治疗药物中的应用。
7.进一步，所述安五脂素抑制巨噬细胞m2型极化，以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，并增强大肠癌细胞的化疗敏感性。
8.进一步，所述安五脂素单独使用，或者，与顺铂或5-氟尿嘧啶联用。
9.进一步，所述安五脂素的给药剂量为每天5~40 mg/kg，每周2~4次。
10.进一步，所述安五脂素的给药途径为口服。
11.上述技术方案的有益效果是：给出了一种安五脂素的新用途，其应用在抑制巨噬细胞m2型极化方面，可以有效抑制巨噬细胞m2型极化，因此单独使用能够增强大肠癌细胞的化疗敏感性，与抗癌药物（例如顺铂或5-氟尿嘧啶）结合使用，可以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，能够有效提高大肠癌细胞的治疗效果。
12.另一方面，本发明实施例还提供了一种包含安五脂素的药物组合在制备大肠癌治疗药物中的应用，该药物组合包括药物a、药物b；其中，所述药物a的成分包括安五脂素；所述药物b的成分包括顺铂；所述药物a在服用药物b之前的预设时间段内使用，以使安五脂素抑制巨噬细胞m2型极化，降低大肠癌细胞对顺铂的化疗敏感性。
13.进一步，所述药物a的剂量应达到安五脂素的给药剂量为每天5~40 mg/kg，每周2~4次。
14.进一步，所述药物a的给药途径为口服或静脉注射。
15.进一步，所述药物a或药物b还包括药学上可接受的辅料或者辅助性成分。
16.进一步，所述药物a 在给予药物b的24 h~1周前使用。
17.上述技术方案的有益效果是：给出了一种用于大肠癌治疗的药物组合，包括药物a、药物b，药物a包含安五脂素，药物b包含顺铂，药物a在服用药物b之前的预设时间段内使用，可以有效抑制巨噬细胞m2型极化，以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，并增强大肠癌细胞的化疗敏感性，提高大肠癌的治疗效果。
18.提供发明内容部分是为了以简化的形式来介绍对概念的选择，它们在下文的具体实施方式中将被进一步描述。发明内容部分无意标识本公开的重要特征或必要特征，也无意限制本公开的范围。
附图说明
19.通过结合附图对本公开示例性实施例进行更详细的描述，本公开的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显，其中，在本公开示例性实施例中，相同的参考标号通常代表相同部件。
20.图1示出了实施例1 western blot实验检测安五脂素对m2型巨噬细胞相关标志物的蛋白表达影响；图2示出了实施例1流式细胞术检测安五脂素对巨噬细胞cd206阳性细胞比例的影响；图3示出了实施例2 cck-8实验检测安五脂素对hct116和sw620细胞抗顺铂敏感性的影响；图4示出了实施例2平板克隆实验检测安五脂素单用或与顺铂联用对hct116和sw620细胞克隆数量的影响；图5示出了实施例2体内试验检测安五脂素与顺铂联用对sw620体内成瘤的抑制作用。
21.附图标记：control
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对照组；il-413
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发生m2型极化的试验组；mace
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注射安五脂素后的试验组；μm
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μmol/l；relative expression
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相对表达；raw264.7
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巨噬细胞raw264.7；ddp
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顺铂；inibitory rate
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抑制率；*、#
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统计学中代表结果的真实意义p，p《0.05为具有统计学意义，p值越小，意义越大，*表示p《0.05,**表示p《0.01，***表示p《0.001，#表示p《0.05，##表示p《0.01，###表示p《0.001。
具体实施方式
22.下面将参照附图更详细地描述本公开的实施例。虽然附图中显示了本公开的实施例，然而应该理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了使本公开更加透彻和完整，并且能够将本公开的范围完整地传达给本领域的技术人员。
23.在本文中使用的术语“包括”及其变形表示开放性包括，即“包括但不限于”。除非特别申明，术语“或”表示“和/或”。术语“基于”表示“至少部分地基于”。术语“一个示例实施例”和“一个实施例”表示“至少一个示例实施例”。术语“另一实施例”表示“至少一个另外的实施例”。术语“第一”、“第二”等等可以指代不同的或相同的对象。下文还可能包括其他明确的和隐含的定义。
24.实施例1本发明的一个实施例，公开了一种安五脂素在制备大肠癌治疗药物中的应用。该安五脂素可以单独使用，也可以与现有抗癌药物联合使用。
25.经大量研究发现，安五脂素具有抑制巨噬细胞m2型极化的作用，能够降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，并增强大肠癌细胞的化疗敏感性。
26.优选地，安五脂素的给药剂量为每天5~40 mg/kg，每周2~4次，给药途径为口服，抑制巨噬细胞m2型极化的作用较为明显。
27.示例性地，安五脂素的给药剂量为10 mg/kg，每周3次，在给予抗癌药物24 h前使用。
28.为了更好地说明单独使用安五脂素在大肠癌治疗中对巨噬细胞的效果，下面给出了两组实验。
29.试验一：对il-4/13诱导巨噬细胞thp-1（人源）和raw2643.7（鼠源）进行m2型极化体外实验，试验组给予不同浓度安五脂素（5~20 μmol/l，24 h），对照组给予相同剂量的生理盐水。即试验组依次使用il-4/13（24 h）和不同浓度安五脂素（5~20 μmol/l，24 h）处理thp-1细胞和raw264.7细胞后，通过western blot实验检测处理前后巨噬细胞中m2型表面标志物cd206、arg1和cd163蛋白表达情况。
30.图1的结果显示，试验组20 ng/ml il-4/13处理24 h后，cd206、arg1和cd163蛋白表达水平明显高于对照组(p 《 0.001，具有统计学意义)，表明20 ng/ml il-4/13处理24 h可以将巨噬细胞诱导为m2型巨噬细胞。10 μmol/l和20 μmol/l浓度的安五脂素能够明显降低m2型巨噬细胞中cd206、arg1和cd163蛋白表达。而5 μmol/l浓度的安五脂素处理后，m2型巨噬细胞中cd206、arg1和cd163蛋白与对照组细胞相比没有明显变化。
31.试验二：通过流式细胞术分析给药前后thp-1细胞和raw264.7细胞中cd206表达情况。图2的结果显示，10 μmol/l浓度的安五脂素能够抑制cd206阳性细胞比例，即表明安五脂素能够抑制巨噬细胞m2极化。
32.综上所述，10 μmol/l和20 μmol/l安五脂素处理24 h能够显著降低m2型巨噬细胞表面标志物表达，抑制巨噬细胞m2型极化，因此，可以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，并增强大肠癌细胞的化疗敏感性。单独使用，可以使得化疗的治疗效果增强。
33.可选地，安五脂素与也可与现有抗癌药物联合使用，例如，与顺铂或5-氟尿嘧啶联用。由于巨噬细胞m2型极化是促进肿瘤细胞化疗耐药的重要因素，因此能够增强现有抗癌药物的治疗效果，本领域技术人员能够理解。
34.与现有技术相比，本实施例给出了一种安五脂素的新用途，其应用在抑制巨噬细胞m2型极化方面，可以有效抑制巨噬细胞m2型极化，因此单独使用能够增强大肠癌细胞的化疗敏感性，与抗癌药物（例如顺铂或5-氟尿嘧啶）结合使用，可以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，能够有效提高大肠癌细胞的治疗效果。
35.实施例2本发明的另一个实施例，公开了一种用于大肠癌治疗的药物组合，包括药物a、药物b。其中，药物a的成分包括安五脂素；药物b的成分包括顺铂。
36.优选地，药物a在服用药物b之前的预设时间段内使用，以降低大肠癌细胞对顺铂的化疗敏感性。
37.经研究发现，上述安五脂素与顺铂联用的使用方式对大肠癌的治疗效果可以显著增强。
38.优选地，上述预设时间段可根据实际需求与试验给予不同人和不同动物设置不同的时间段，例如一天（24 h）~一周。
39.优选地，药物a的剂量应达到安五脂素的给药剂量为每天5~40 mg/kg，每周2~4次。给药途径为口服或静脉注射。
40.为了进一步说明该药物组合在大肠癌治疗中对大肠癌细胞的治疗效果，下面再进行一组实验。
41.试验三：试验组采用hct116和sw620两种大肠癌细胞株与m2型巨噬细胞或经安五脂素处理后的m2型巨噬细胞共培养后，采用0~80 μmol/l顺铂（药物b）处理24 h；对照组只用0~80 μmol/l顺铂（药物b）处理24 h。图3的结果显示，与m2型巨噬细胞共培养的大肠癌细胞活性明显高于对照组，而安五脂素（药物a）能够显著抑制共培养组的大肠癌细胞活性。
42.优选地，药物a或药物b还可包括药学上可接受的辅料或者辅助性成分。所述辅料或者辅助性成分应不会减弱药物a或药物b的治疗效果，例如维生素等。
43.示例性地，体外试验中，药物a的剂量应达到安五脂素的给药剂量为10μmol/l，给药时间24 h，采用口服形式。
44.为了进一步说明添加辅料后的药物组合在大肠癌治疗中对大肠癌细胞的治疗效果，下面再进行两组实验。
45.试验四：hct116和sw620细胞与m2型巨噬细胞或经药物a处理后的m2型巨噬细胞共培养后，20 μmol/l药物b处理24 h。图4的平板克隆试验的结果进一步表明药物a与药物b联合能够明显抑制与m2型巨噬细胞共培养的大肠癌细胞克隆数量。
46.试验五：体内试验采用sw620细胞或与raw264.7细胞混合（1：1）注射于裸鼠背侧，建立裸鼠荷瘤模型。注射一周后，按照分组，经尾静脉注射顺铂（4mg/kg，一周一次）的药物a 和（或）灌胃给予200ul安五脂素（10mg/kg，一周三次）的药物b，对照组给予等量生理盐水（每日1次）。28天后，处死裸鼠并收集肿瘤组织。图5的结果表明，药物a与药物b联用能够明显降低肿瘤大小和重量。
47.以上试验结果表明，该药物组合能够降低结大肠癌细胞对顺铂的敏感性，安五脂素能够通过抑制巨噬细胞m2极化提高顺铂敏感性，解决了m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药问题，具有良好的临床用药开发前景。
48.与现有技术相比，本实施例给出了一种用于大肠癌治疗的药物组合，包括药物a、药物b，药物a包含安五脂素，药物b包含顺铂，药物a在服用药物b之前的预设时间段内使用，可以有效抑制巨噬细胞m2型极化，以降低m2型巨噬细胞诱导的大肠癌耐药性，并增强大肠癌细胞的化疗敏感性，提高大肠癌的治疗效果。
49.以上已经描述了本公开的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也
不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。本文中所用术语的选择，旨在最好地解释各实施例的原理、实际应用或对现有技术的改进，或者使本技术领域的其它普通技术人员能理解本文披露的各实施例。