一种中药组合物及其在制备治疗咳嗽变异性哮喘的药物中的用途的制作方法

1.本发明属于中药组合物领域，具体涉及一种中药组合物及其在制备治疗咳嗽变异性哮喘的药物中的用途。


背景技术：

2.咳嗽变异性哮喘(coughvariant asthma，cva)是指没有喘息、气促等症状，而以咳嗽为唯一或主要症状的一种特殊类型的哮喘。cva的主要临床表现为反复或持续发作的咳嗽，病程》4周，咳嗽多于夜间或清晨出现，干咳多见，运动后诱发或加重，无其他呼吸道感染表现，经规范抗菌药物治疗无效，支气管舒张剂可缓解咳嗽症状，同时往往存在个人或家族特应性疾病史。cva是引起慢性咳嗽的主要原因之一。
3.咳嗽变异性哮喘是慢性咳嗽的最常见病因之一，流行病学调查表明，慢性咳嗽在我国人群中的发病率约为3％，其中cva引起的慢性咳嗽为32.6％。在我国0-14岁儿童人群中，cva患病率为0.29％。在儿童慢性咳嗽中，cva所占比例更高，达到41.95％。据此估算，我国cva患者约为1300万人，其中儿童约为70万人。随着我国老龄化发展及环境变化，cva发病率可能进一步提升。
4.cva不仅在近期降低患者自身的健康及生活质量，给工作、学习、生活造成严重不良影响，给家庭造成了沉重的经济负担和精神压力，而且报道表明，有相当比例的患者(成人约30％，儿童约55％)可在远期发展成为典型哮喘，造成更大的健康和经济损失。因此，开发治疗cva的药具有十分重要的意义。
5.目前，治疗cva的西医临床治疗药物均为化学药物，主要包括：i.吸入糖皮质激素，如：布地奈德、氟替卡松等；ii.支气管舒张剂，如福莫特罗、沙美特罗等；iii.白三烯受体拮抗剂，如：孟鲁司特等。但是，西医治疗时间较长，至少8周以上，部分患者甚至需要长期治疗；而且西医治疗通常存在一些较为严重的不良反应，如：吸入糖皮质激素长期使用可引起局部不良反应，包括咽部不适、声音嘶哑、舌部及口腔念珠菌感染，大剂量应用或使用剂量不当可能导致全身反应，引起或加重骨质疏松症、高血压、糖尿病、肥胖等；支气管舒张剂可引起中枢神经系统、心血管系统、骨骼肌肉系统不良反应，包括心肌、心动过速、震颤、肌肉痉挛、头痛等；白三烯受体拮抗剂虽安全性和耐受性良好，但仍有恶心、呕吐、消化不良、头痛、心悸、影响儿童精深状态等症状报到。由于上述药物的不良反应，除造成一般性的直接反应外，还导致患者及家属对治疗方案的担忧与质疑，导致治疗依从性不佳，治疗效果达不到预期。
6.中医认为，cva属中医学痉咳、肺痹、哮喘等范畴，多由于患者素体痰湿内蕴、肺脾气虚又外感风燥之邪所引起的肺气不宣及气道闭阻而气郁化热，进而损害机体气阴。其发病机制多以风燥痰湿外袭为标，肺脾气阴两虚为致病之本。临床治疗一般根据cva病程分期，从辨证治疗。在已上市中成药中，仅有苏黄止咳胶囊(国药准字z20103075)涵盖“咳嗽变异性哮喘”适应症，且主要针对cva发作期的治疗。
7.尽管现有化学药物、中成药在cva发作期症状快速改善方面已基本可满足临床需求，然而，在加快缓解期恢复和减少稳定期复发上，尚有显著不足：化学药物服用时间较长，存在吸入使用不便、不良反应较多且长期影响较大、患者依从性较差等明显弊端，限制其广泛应用。中成药尚无针对缓解期和稳定期的品种。而且，目前尚无cva的根治性药物。
8.因此，围绕快速改善cva发作期症状、加快缓解期恢复和减少稳定期复发三大临床需求，开发出一种治疗周期短、不良反应少、复发频率少、治疗效果优异的药物对咳嗽变异性哮喘的临床治疗具有非常重要的意义。


技术实现要素：

9.本发明的目的在于提供一种中药组合物及其在制备治疗咳嗽变异性哮喘的药物中的用途。
10.本发明提供了一种中药组合物，它是由包括以下重量份数的原料药制备而成的制剂：白芍13～17份，灵芝11～13份，生地13～17份，人参4～6份，茯苓13～17份，炙甘草4～6份。
11.进一步地，它是由包括以下重量份数的原料药制备而成的制剂：白芍15份，灵芝12份，生地15份，人参5份，茯苓15份，炙甘草5份。
12.本发明还提供了上述中药组合物的制备方法，所述方法为：称取原料药，制备原料药的药粉、原料药的水或有机溶剂提取物，即得。
13.进一步地，所述原料药的水提取物的制备方法为：称取原料药，加水，浸泡，加热提取，过滤，取滤液，浓缩或干燥，即得。
14.进一步地，所述原料药与水的重量体积比为1：5～15g/ml，优选为1：8～10g/ml；所述浸泡时间为0.5～2小时，优选为1小时；所述加热温度为加热至沸腾；所述提取次数为1～2次，提取时间为每次0.5～2小时，优选为每次1小时。
15.本发明还提供了一种治疗咳嗽变异性哮喘的药物，所述药物是以上述中药组合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制得的制剂。
16.进一步地，所述制剂为口服制剂，所述口服制剂优选为汤剂、口服液、颗粒剂、胶囊剂、散剂、丸剂或片剂。
17.本发明还提供了上述中药组合物在制备预防和/或治疗咳嗽变异性哮喘的药物中的用途。
18.本发明还提供了上述中药组合物在制备预防和/或治疗咳嗽或典型哮喘的药物中的用途，所述咳嗽为慢性咳嗽，优选为小儿慢性咳嗽。
19.进一步地，所述药物能够降低咳嗽敏感性；
20.和/或，所述药物能够减少辣椒素诱导的咳嗽次数；
21.和/或，所述药物能够减少肺泡灌洗液中的细胞总数和嗜酸性粒细胞数；
22.和/或，所述药物能够降低肺泡灌洗液中的细胞因子ifn-γ和il-4含量。
23.关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中术语提供的初始定义适用于整篇说明书的术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
24.本发明中，炙甘草为中药材甘草的炮制加工品，制法与中国药典中记载的一致。
25.慢性咳嗽：咳嗽时间持续≥8周以上，x线胸片无明显肺疾病证据的咳嗽称为慢性咳嗽，咳嗽往往是患者惟一就诊症状。慢性咳嗽是呼吸系统常见的临床症状之一。
26.本发明的中药组合物中，白芍性味苦、酸，微寒，归肝、脾经，《本草经疏》称白芍为："手足太阴引经药，入肝、脾血分。”白芍具有养血和营，缓急养阴的作用，为君药，可益血补阴。灵芝性味甘，平，归肺、肝、肾经，具有肺肾元气，益气补虚，止咳平喘的功效。人参性味温，甘、苦，归肺、脾、心、肾经，大补元气，补脾益肺，益气生津。灵芝，人参共助白芍补肺脾肾元气，益气养阴，止咳平喘，标本兼顾。生地具有养肺肾之阴，补其津液。茯苓淡渗利湿，通调津液，生地、茯苓助白芍补其津液，滋养肺、脾之阴。以上四味药为臣药，补养肺、脾、肾气阴，益气养阴，气阴同补。炙甘草补脾益气，调和主要为使药，全方气阴双补，健脾养肺益肾，补虚之中寓有通滞之法，养阴益气为主，行津止咳为辅，养阴补虚与行津通滞双管齐下，在标本同治中强调治本，抓住了咳嗽变异性哮喘的根本病机。
27.本方以气阴双补为主，认为咳嗽变异性哮喘主要是因为肺、脾、肾气阴不足，导致干咳，少痰，咳嗽频繁。肺为水之上源，主敷布津液濡润全身，当肺阴受损，肺系失濡时，则会呛咳，少痰，咳嗽频繁，甚者阴不制阳，虚火上炎，导致虚火刑金，出现久咳不愈。肺阴虚久则肾阴耗损，肺为气之主，肾为气之根，故久则肾不纳气，可发展为典型哮喘，所以在治疗上，不同于目前中医认识，以补益肺脾肾气阴为主。
28.本方具有益气固本，补肺脾肾阴，养阴平喘的功效。用于咳嗽变异型哮喘缓解期、稳定期治疗。症见气阴两虚，肺气不足，肺失宣降所致咳嗽反复，喉痒干咳，咳声短促，无痰或痰少粘成丝，不易咳出，口干咽燥，声音嘶哑，可伴喘息、胸闷，舌红少津，脉细数。
29.实验结果表明，本发明的中药组合物能够显著降低咳嗽变异性哮喘模型小鼠的咳嗽敏感性，显著减少辣椒素诱导的咳嗽次数，还能够显著减少咳嗽变异性哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数，显著降低咳嗽变异性哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中细胞因子ifn-γ和il-4的含量。本发明中药组合物对咳嗽变异性哮喘模型小鼠具有优异的治疗效果。
30.临床药效实验也表明，本发明药物组合物能有效治疗咳嗽变异性哮喘，对咳嗽变异性哮喘患者的总有效率高达86.7％，治疗效果优于阳性对照药物孟鲁司特钠片。
31.本发明中药组合物通过治疗咳嗽变异性哮喘，能够降低咳嗽敏感性，减少咳嗽变异性哮喘复发频率，减轻复发时咳嗽的严重程度，改善患者状态，同时预防咳嗽变异性哮喘演变为典型哮喘。因此，本发明的中药组合物在制备预防和/或治疗咳嗽变异性哮喘的药物中具有很好的应用前景。
32.本发明的中药组合物制备工艺简单、原料易得，适合工业化生产。
33.显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
34.以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
35.本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
36.实施例1：本发明中药组合物的制备
37.处方：白芍15g，灵芝12g，生地15g，人参5g，茯苓15g，炙甘草5g。
38.制备方法：按比例称取处方药物，加入10倍体积蒸馏水(即处方药物总重量：蒸馏水体积＝1:10g/ml)浸泡1h后，加热至沸腾，提取1h，过滤，收集滤液。药渣重新加入8倍体积蒸馏水，加热至沸腾，提取1h，过滤。合并两次滤液，减压浓缩至2.2g生药/ml的药液，即得。
[0039]“2.2g生药/ml”表示得到的药液中，每ml药液采用了2.2g生药。
[0040]
实施例2：本发明中药组合物的制备
[0041]
处方：白芍13g，灵芝13g，生地17g，人参4g，茯苓13g，炙甘草4g。
[0042]
制备方法：同实施例1。
[0043]
实施例3：本发明中药组合物的制备
[0044]
处方：白芍17g，灵芝11g，生地13g，人参6g，茯苓17g，炙甘草6g。
[0045]
制备方法：同实施例1。
[0046]
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
[0047]
实验例1：本发明中药组合物对咳嗽变异性哮喘患者的治疗效果
[0048]
1、受试对象
[0049]
本研究病例均为四川省成都市咳嗽变异性哮喘人群，纳入病例符合咳嗽变异性哮喘的诊断标准，所有患者均获得完整随访，共计60例，年龄平均(35.8
±
13.4)岁。
[0050]
2、诊断标准
[0051]
2.1纳入病例标准：
①
符合咳嗽变异性哮喘诊断：慢性咳嗽时间大于8周，常伴夜间刺激性咳嗽，支气管舒张试验阳性，支气管舒张剂治疗有效。
②
符合中医症候学诊断标准：咳嗽反复，喉痒干咳，咳声短促，无痰或痰少粘成丝，不易咳出，口干咽燥，声音嘶哑，可伴喘息、胸闷，舌红少津，脉细数，处于咳嗽变异性哮喘缓解期、稳定期。
③
患者年龄在18-65岁之间。
④
患者知情并同意参加。
[0052]
2.2排出病例标准：
①
合并肺部感染、肺结核等肺部疾病者。
②
合并有严重心、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病及精神病患者。
③
妊娠期妇女。
[0053]
3、治疗方法
[0054]
3.1试验药物
[0055]
试验组：本发明实施例1制得的中药组合物。
[0056]
对照组：孟鲁司特钠片，规格10mg/片。
[0057]
3.2用药方法
[0058]
试验组：给予本发明实施例1制得的中药组合物药液，每次200ml，每日2次，早晚分服。4周为1疗程，共观察1个疗程。
[0059]
对照组：给予孟鲁司特钠片，10mg/片，1片/次
·
日，睡前服。4周为1疗程，共观察1个疗程。
[0060]
3.3合并用药情况
[0061]
在本试验期间，建议受试者不服用任何药物治疗。如患者有其他与本病症状无关的严重、无法忍受的疾病,可临时服用药物,但须向研究者提供所用药物的名称、规格、剂量及服用时间,服用后症状缓解情况等,研究者应做详细记录。
[0062]
3.4观察指标和方法
[0063]
本实验采用莱塞斯特咳嗽生命质量问卷(leicester cough questionnaire，lcq)得分作为主要指标，于治疗前、治疗后4周各观察一次。lcq咳嗽专业量表对于咳嗽的评价有较好的特异性和敏感性，具有可重复性高的特点，能够真实的反应患者的综合病情，lcq包含了咳嗽对生理、心理及社会影响三方面的19个项目，应答有7个依次变化的等级，总分值越高，代表患者健康状态越好。
[0064]
咳嗽症状分度标准：轻度( )：间断咳嗽，不影响正常生活工作。中度( )：介于轻度和重度咳嗽之间。重度( )：昼夜咳嗽频繁或阵咳，影响工作和睡眠。
[0065]
3.5疗效判断
[0066]
按照症状积分及疗效判定方法，对比两组患者的临床疗效，将cva分为临床控制、显效、有效、无效四个等级，分别按照患者临床症状改善程度进行评定。临床控制：i≥90％。显效：i为60％-89％。有效：i为30％-59％。无效：i《30％。总有效率＝临床控制率 显效率 有效率。其中中医证候疗效指数(i)＝[(治疗前积分-治疗后积分)/治疗前积分]
×
100％
[0067]
4、试验结果
[0068]
a)两组受试者莱塞斯特咳嗽生命质量问卷(lcq)得分情况
[0069]
表1：两组受试者治疗前(入组时)lcq积分比较(mean土sd)
[0070] 试验组对照组p值生理区域4.14
±
0.784.32
±
0.770.372心理区域3.77
±
0.563.68
±
0.610.554社会区域3.89
±
0.533.76
±
0.590.373总分11.80
±
1.7611.76
±
1.930.933
[0071]
由上表1可知：两组受试者治疗前(入组时)lcq得分比较,两组受试者治疗前生理、心理、社会区域积分比较，p值＞0.05，无显著性差异，具有可比性。两组受试者治疗前lcq总分比较，p值＞0.05，无显著性差异,具有可比性。
[0072]
表2：两组受试者治疗后(4周后)lcq积分比较(mean土sd)
[0073] 试验组对照组p值生理区域6.23
±
0.685.01
±
0.530.000心理区域6.45
±
0.755.94
±
0.510.003社会区域6.85
±
0.646.37
±
0.730.009总分19.53
±
2.0117.32
±
1.850.000
[0074]
由上表2可知：两组受试者治疗后(4周后)lcq得分比较,两组受试者治疗后生理、心理、社会区域积分比较，p值＜0.05，有显著性差异,差异具有统计学意义。两组受试者治疗后lcq总分比较，p值＜0.05，有显著性差异,差异具有统计学意义。
[0075]
进一步地，经4周的治疗后，对照组咳嗽变异性哮喘cva患者lcq总分由11.76
±
1.93上升到了17.32
±
1.85，试验组咳嗽变异性哮喘cva患者lcq总分由11.80
±
1.76上升到了19.53
±
2.01，治疗后试验组lcq总分高于对照组。说明与阳性对照药物孟鲁司特钠片相比，本发明中药组合物对咳嗽变异性哮喘患者具有更好的治疗效果。
[0076]
b)两组受试者疗效判定
[0077]
表3：治疗前与治疗后疗效比较
[0078][0079]
实验结果显示，经4周的治疗后，本发明药物组合物能有效治疗咳嗽变异性哮喘，总有效率高达86.7％，高于阳性对照药物孟鲁司特钠片的总有效率。
[0080]
实验例2：本发明中药组合物对咳嗽变异性哮喘模型动物的治疗效果
[0081]
1实验材料
[0082]
1.1实验药物
[0083]
本发明实施例1制得的中药组合物药液。
[0084]
1.2实验动物
[0085]
昆明小鼠，50只，雌雄各半，18-22g，购自四川省中医药科学院实验动物中心。
[0086]
2实验方法
[0087]
2.1咳嗽变异性哮喘动物模型制备
[0088]
km小鼠，60只，雌雄各半，体重18-22g，按体重随机分成6组，每组10只。设正常组、模型组和本发明中药组合物3个剂量组(5.5、11、22g生药/kg)。在试验第0、7、14d天，除正常组外，每只小鼠腹腔注射40μg卵蛋白(ova)、2mg氢氧化铝致敏，正常组给予等量生理盐水。自试验第21d开始，除正常组外，小鼠每日置于定制雾化箱中，采用1％ova雾化吸入30min，正常组雾化吸入生理盐水30min。连续雾化28d。
[0089]
2.2动物给药
[0090]
各组动物当日雾化后，本发明中药组合物3个剂量组采用等体积不等浓度药液灌胃给药，3个浓度分别为0.55、1.1、2.2g生药/ml，灌胃体积为0.1ml/10g体重，正常组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。
[0091]
2.3对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0092]
末次给药后，将小鼠逐一置于玻璃罩内，采用1
×
10-4
m辣椒素溶液，雾化2分钟后继续在雾化罩中停留2min，观察记录4min内小鼠的咳嗽次数。
[0093]
2.4对肺泡灌洗液中细胞数量和细胞因子的影响
[0094]
小鼠脱颈处死，采用静脉留置针从气管插入，以1mlpbs反复洗涤双肺，收集肺泡灌洗液，3000rpm离心5min。细胞沉淀以pbs重悬，制备细胞涂片，瑞氏染色，显微计数细胞总数和嗜酸性粒细胞数。分离上清液，采用elisa法，按照试剂盒操作说明书测定细胞因子ifn-γ和il-4的含量。
[0095]
3实验结果
[0096]
3.1对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0097]
表4：本发明中药组合物对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0098]
组别剂量动物数(只)咳嗽次数(次)正常组/103.70
±
1.89模型组/1012.80
±
3.83
△△
小剂量组5.5g生药/kg1010.50
±
4.91
中剂量组11g生药/kg108.40
±
5.43*大剂量组22g生药/kg105.30
±
3.22**
[0099]
注：与正常组比较，
△
表示p《0.05，
△△
表示p《0.01；与模型组比较，*表示p《0.05，**表示p《0.01。
[0100]
试验结果表明，采用ova造模后，模型组小鼠对辣椒素吸入更为敏感，诱导的咳嗽次数显著多于正常组(p《0.01)。给予不同剂量本发明中药组合物后，小鼠咳嗽次数呈剂量依赖性减少，其中中剂量组咳嗽次数与模型组相比有显著差异(p《0.05)，大剂量组咳嗽次数与模型组相比有极显著差异(p《0.01)。说明本发明中药组合物能够降低咳嗽变异性哮喘动物对辣椒素吸入的咳嗽敏感性，显著减少辣椒素诱导的咳嗽次数。
[0101]
3.2对肺泡灌洗液中细胞数量和细胞因子的影响
[0102]
表5：本发明中药组合物对肺泡灌洗液中细胞数量的影响
[0103][0104]
注：与正常组比较，
△
表示p《0.05，
△△
表示p《0.01；与模型组比较，*表示p《0.05，**表示p《0.01。
[0105]
表6：本发明中药组合物对肺泡灌洗液中细胞因子ifn-γ和il-4含量的影响
[0106]
组别剂量动物数(只)ifn-γ(pg/ml)il-4(pg/ml)正常组/10285.51
±
84.23112.25
±
38.12模型组/10168.11
±
52.82
△△
235.48
±
45.88
△△
小剂量组5.5g生药/kg10181.21
±
64.19205.59
±
235.48中剂量组11g生药/kg10222.18
±
53.33*188.62
±
40.56*大剂量组22g生药/kg10251.65
±
60.12**158.48
±
39.80**
[0107]
注：与正常组比较，
δ
表示p《0.05，
δδ
表示p《0.01；与模型组比较，*表示p《0.05，**表示p《0.01。
[0108]
试验结果表明，模型组肺泡灌洗液中细胞数量明显增加，且以嗜酸性粒细胞增加为主，与正常组相比具有显著性差异(p《0.01)。给予不同剂量本发明中药组合物后，模型小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数均呈剂量依赖性减少，其中中剂量组与模型组相比有显著性差异(p《0.05)，大剂量组与模型组相比有极显著差异(p《0.01)。
[0109]
此外，细胞因子测定结果表明，ova诱导的咳嗽变异性哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中ifn-γ含量显著降低，il-4含量显著升高(p《0.01)。而给予本发明中药组合物后，模型动物ifn-γ和il-4含量改变呈剂量依赖性减轻，其中中剂量组与模型组相比有显著性差异(p《0.05)，大剂量组与模型组相比有极显著差异(p《0.01)。
[0110]
实验结果表明，本发明中药组合物能够显著降低咳嗽变异性哮喘模型小鼠的咳嗽敏感性，显著减少辣椒素诱导的咳嗽次数，还能够显著减少咳嗽变异性哮喘模型小鼠肺泡
灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数，显著降低咳嗽变异性哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中细胞因子ifn-γ和il-4的含量。本发明中药组合物对咳嗽变异性哮喘模型小鼠具有优异的治疗效果。
[0111]
实验例3：本发明中药组合物与对照药物对咳嗽变异性哮喘模型动物的治疗效果的比较
[0112]
1实验材料
[0113]
1.1实验药物
[0114]
中药组合物1：本发明实施例1制得的中药组合物药液。
[0115]
中药组合物2：本发明实施例2制得的中药组合物药液。
[0116]
中药组合物3：本发明实施例3制得的中药组合物药液。
[0117]
白芍：按照中药组合物制备方法，制备0.5g生药/ml浓度的药液
[0118]
灵芝：按照中药组合物制备方法，制备0.4g生药/ml浓度的药液
[0119]
生地：按照中药组合物制备方法，制备0.5g生药/ml浓度的药液
[0120]
人参：按照中药组合物制备方法，制备0.17g生药/ml浓度的药液
[0121]
茯苓：按照中药组合物制备方法，制备0.5g生药/ml浓度的药液
[0122]
炙甘草：按照中药组合物制备方法，制备0.17g生药/ml浓度的药液
[0123]
1.2实验动物
[0124]
昆明小鼠，110只，雌雄各半，18-22g，购自四川省中医药科学院实验动物中心。
[0125]
2实验方法
[0126]
2.1咳嗽变异性哮喘动物模型制备
[0127]
km小鼠，110只，雌雄各半，体重18-22g，按体重随机分成11组，每组10只。设正常组、模型组和本发明中药组合物及白芍、灵芝、生地、人参、茯苓、炙甘草6个对照药物组。在试验第0、7、14d天，除正常组外，每只小鼠腹腔注射40μg卵蛋白(ova)、2mg氢氧化铝致敏，正常组给予等量生理盐水。自试验第21d开始，除正常组外，小鼠每日置于定制雾化箱中，采用1％ova雾化吸入30min，正常组雾化吸入生理盐水30min。连续雾化28d。
[0128]
2.2动物给药
[0129]
各组动物当日雾化后，本发明中药组合物及6个对照药物药液灌胃给药，灌胃体积为0.1ml/10g体重，正常组和模型组灌胃给予等量蒸馏水。
[0130]
2.3对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0131]
末次给药后，将小鼠逐一置于玻璃罩内，采用1
×
10-4
m辣椒素溶液，雾化2分钟后继续在雾化罩中停留2min，观察记录4min内小鼠的咳嗽次数。
[0132]
3实验结果
[0133]
3.1对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0134]
表7：本发明中药组合物与对照药物对辣椒素诱导的咳嗽次数的影响
[0135]
组别剂量动物数(只)咳嗽次数(次)正常组/102.80
±
1.68模型组/1013.00
±
3.63
△△
中药组合物组122g生药/kg105.10
±
2.22**中药组合物组222g生药/kg108.10
±
2.45**
中药组合物组322g生药/kg107.68
±
2.31**白芍5g生药/kg109.50
±
3.18*灵芝4g生药/kg109.40
±
2.91*生地5g生药/kg1012.30
±
3.51人参1.7g生药/kg1012.60
±
3.81茯苓5g生药/kg1011.60
±
3.69炙甘草1.7g生药/kg1010.30
±
2.88
[0136]
注：与正常组比较，
△
表示p《0.05，
△△
表示p《0.01；与模型组比较，*表示p《0.05，**表示p《0.01。
[0137]
试验结果表明，采用ova造模后，咳嗽变异性哮喘模型组小鼠对辣椒素吸入更为敏感，诱导的咳嗽次数显著多于正常组(p《0.01)。与模型组相比，给予本发明中药组合物1～3后，小鼠咳嗽次数显著减少(p《0.01)；单独给与中药组合物中相当剂量的各味药物，仅有白芍、灵芝两组与模型组相比有显著性差异(p《0.05)，其余各组与模型组相比均无显著差异。同时，与白芍、灵芝两组相比，本发明中药组合物组咳嗽次数也显著减少(p《0.01)。说明本发明各味药物经特定配伍得到的中药组合物能够明显减少咳嗽变异性哮喘模型小鼠咳嗽次数。
[0138]
另外，对比中药组合物1、2、3的效果看出：尽管三者与模型组比较均具有显著性差异，但中药组合物1减少咳嗽次数的效果明显优于中药组合物2、3，且具有显著性差异(p《0.05)，表明本发明各原料药在特定配比下所得的中药组合物1对咳嗽变异性哮喘的治疗效果最佳，具有明显优势。
[0139]
综上，本发明提供了一种中药组合物，该中药组合物能够显著降低咳嗽变异性哮喘模型小鼠的咳嗽敏感性，显著减少辣椒素诱导的咳嗽次数，显著减少模型小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞数，以及细胞因子ifn-γ和il-4的含量。该中药组合物对咳嗽变异性哮喘患者具有优异的治疗效果，能够降低患者咳嗽敏感性，减少咳嗽变异性哮喘复发频率，减轻复发时咳嗽的严重程度，改善患者状态，预防咳嗽变异性哮喘演变为典型哮喘。因此，本发明的中药组合物在制备预防和/或治疗咳嗽变异性哮喘的药物中具有很好的应用前景。