白细胞介素37与干扰素联用在治疗病毒感染中的应用的制作方法

1.本技术属于生物技术和医学领域。具体而言，本技术涉及白细胞介素37与干扰素的联合用药、及其相关产品和在治疗病毒感染中的应用。


背景技术：

2.病毒是只有一种核酸，且十分微小的具有感染性的致病实体，但其对人类社会产生的影响是十分深远且显著的。1918年的西班牙大流感，感染了全球近四分之一人口；1976年非洲爆发的埃博拉疫情，死亡率极高；2003年突然出现的sars，2013年出现的h7n9禽流感以及目前肆虐全球的2019年新型冠状病毒疾病，无疑给人们的生命和生活带来巨大影响。
3.由于病毒的种类奇多，按照基因结构划分，可分为dna病毒(其中包括腺病毒科，疱疹病毒科，小dna病毒科，痘病毒科以及嗜肝dna病毒科等)以及rna病毒(齐总包括冠状病毒科，纤维病毒科，正黏液病毒科，副黏液病毒科，反转录病毒科等)。按照传播途径可分为呼吸道传播，消化道传播，血液传播等。据国际病毒分类委员会统计，截止2018年，已分类的病毒共有4958种，并仍有大量新的病毒由于现有分类方法不完善而无法被分类。有研究提出，目前在人类中传播的263种已知病毒只占所有潜在病毒的0.1％，而那些未知的病毒都是有可能传染人类的。尤其是对于新发现的病毒，人类毫无治疗经验和特定有效的治疗药物。
4.临床上的广谱抗病毒治疗通常为抗病毒药物如利巴韦林、阿糖腺苷等，此类药物可以通过抑制病毒的代谢类似物而起选择性的抑制作用，但长期使用会对造血系统，消化系统带来严重副作用，并且有很大的肝脏毒性。近年来干扰素作为广谱抗病毒分子，开始应用于临床用于治疗病毒感染，其主要是通过与细胞表面受体的作用激活下游的干扰素刺激基因，从而抑制病毒在细胞中的复制，总体的抗病毒效果由于起效快，作用强等优势优于广谱抗病毒药物。
5.然而，干扰素也有一定的毒副作用，可介导肝、肾毒性，尤其是在清除病毒的过程中，很可能引起机体炎症的过度活化，产生大量炎症因子，甚至发生炎症因子风暴，极易导致感染性休克以及多器官衰竭，增加死亡率。
6.白介素37是il-1家族的第7号成员，也是il-1家族唯一一个抑炎细胞因子。由于其强大的抑炎能力使之在多种炎症性疾病中发挥重要作用。早期研究者发现il-37可以入核与tgf-β信号通路的关键转录调节因子smad3结合形成功能复合物，从而通过影响基因转录来实现抑炎功能。新近发现的il-37的另一个抑炎机制，il-37可以与il-18ra结合，从而招募孤儿受体il-1r8(sigirr或tir8)，利用il-1r8抑制下游促炎信号激酶mtor、mapk等以及促炎转录因子nf-kb，髓样分化因子myd88；激活抑炎信号分子mer、pten、stat3和p62(dok)，从而实现抑炎效果。然而，如何更好地发挥il-37的抗炎效果，以更有效地治疗呼吸道病毒感染尚需进一步研究开发。
7.综上，本领域中迫切需要开发出可有效治疗呼吸道病毒感染的产品。


技术实现要素：

8.本技术中正是提供了一种基于白介素37的呼吸道病毒感染治疗应用、产品以及方法。
9.在本技术的第一方面中，提供了一种用于治疗病毒感染性疾病或症状的产品，其包含：
10.(a)白介素37(il-37)活性物质；
11.(b)一种或多种干扰素(ifn)活性物质；以及
12.(c)可任选的，药学上可接受的载剂。
13.在一些实施方式中，所述产品为药物组合物、制剂组合或药盒。
14.在一些实施方式中，所述il-37活性物质选自：天然il-37蛋白、重组il-37蛋白、编码前述il-37蛋白的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体或细胞、包含所述il-37蛋白的细胞膜组分、合成的il-37蛋白。
15.在一些实施方式中，编码所述il-37蛋白的核酸分子选自：(i)具有gene id:27178或seq id no:6～10中任一项所示的核苷酸序列的核酸分子或其简并序列或其剪接体核酸分子；(ii)在(i)的核酸分子中包含一个或多个核苷酸取代、缺失和/或添加且与(i)中的核酸分子具有能够编码活性il-37的核酸分子；(iii)与(i)中核酸分子具有至少80％同源性(例如至少85％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同源性)且能够编码il-37蛋白的核酸分子。
16.在一些实施方式中，所述il-37蛋白选自：(a)具有seq id no:1～5中任一项所示的氨基酸序列的il-37蛋白、或其剪接体分子；(b)在(a)的il-37蛋白或其剪接体分子中包含一个或多个氨基酸取代和/或缺失和/或添加且具有抑制炎症功能的蛋白质；和/或(c)与前述多肽具有至少80％同源性(例如至少85％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同源性)且具有抑制炎症功能的il-37蛋白；(d)由(i)、(ii)或(iii)中所述核酸分子表达的il-37蛋白或多肽。
17.在一些实施方式中，所述ifn活性物质选自：天然ifn蛋白或重组ifn蛋白(例如重组人ifn)、前述ifn蛋白的编码分子、包含所述编码分子的表达载体或细胞、包含所述ifn蛋白的细胞膜组分。
18.在一些实施方式中，所述ifn为选自下组中的一种或多种：ifn-α、ifn-β、ifn-γ、ifn-λ家族中的一种或多种，优选地，所述ifn为ifn-α1b、ifn-α2a、ifn-α2b、ifn-κ、ifn-ω、ifn-λ1、ifn-λ2中的一种或多种，更优选地，所述干扰素为ifn-α(如ifn-α2b)或ifn-κ。
19.在一些实施方式中，所述表达载体为选自下组中的一种或多种：腺病毒载体、腺相关病毒载体、痘病毒载体、逆转录病毒载体、疱疹病毒载体、rna病毒载体，eb病毒载体、杆状病毒载体、噬菌体载体、动物病毒载体、植物病毒载体、dna质粒载体、rna载体。
20.在一些实施方式中，所述il-37活性物质的量为0.01～10μg，0.05～5μg，0.1～4μg，0.5～3μg；和/或，所述ifn活性物质的量为1x104～1x108个活性单位，5x104～5x107个活性单位，1x105～1x107个活性单位，5x105～5x106个活性单位。
21.在一些实施方式中，所述产品的形式适于通过选自下组相同或不同途径给予il-37活性物质和ifn活性物质：雾化吸入、滴鼻、喷雾、静脉给药、靶组织内给药或口服给药。
22.在一些实施方式中，所述产品的形式适于同时、先后或间隔给予il-37活性物质和
ifn活性物质。
23.在一些实施方式中，所述产品还包括：一个或多个容纳il-37活性物质和ifn活性物质的容器，例如容纳单位剂量il-37活性物质和ifn活性物质的一个或多个容器；用于给药的器具；指导使用的说明书等。
24.在一些实施方式中，所述il-37活性物质和干扰素活性物质同时或分别以如下形式提供：活性蛋白形式(例如单独的活性蛋白和/或两种或多种活性蛋白的融合蛋白形式)、编码活性蛋白或其融合蛋白的核酸分子形式、包含所述核酸分子的表达载体(例如单独的表达载体或同时包含两种核酸分子的表达载体)或细胞形式、包含所述活性蛋白的细胞膜组分。
25.在一些实施方式中，所述il-37活性物质与所述干扰素活性物质：分别存在或表达，并联合使用；融合表达形成多功能分子；或所述il-37活性物质与一种干扰素融合后，再与另一种或多种干扰素联合使用。
26.在一些实施方式中，所述il-37活性物质与一种或多种ifn活性物质联合使用，或所述il-37活性物质与一种或多种ifn活性物质由相同或不同载体表达，或分别表达在不同细胞膜上后联合应用细胞膜的方式，或所述il-37活性物质与一种或多种ifn活性物质表达在同一细胞膜上后应用细胞膜的方式。
27.在一些实施方式中，所述il-37活性物质与一种或多种ifn活性物质融合表达，包含通过基因重组技术构建融合基因进行蛋白表达的方式，通过载体表达融合基因的方式，通过细胞质膜上表达融合重组蛋白并利用细胞膜的方式，通过化学方法连接的方式。优选地，il-37与ifn-α或ifn-κ融合表达的方式。
28.在一些实施方式中，所述产品还包含用于治疗病毒感染的其他药物，例如中药、化学药物、生物药物，所述药物包括但不限于抗病毒药物、抗病毒制剂、抗病毒血清、抑炎药物、激素、细胞因子、抗体等。
29.在一些实施方式中，所述病毒为dna病毒和rna病毒。
30.在一些实施方式中，所述的dna病毒选自：腺病毒、疱疹病毒、痘病毒、嗜肝dna病毒、hbv、hpv等。在一些实施方式中，所述的rna病毒选自：冠状病毒(如sars、sars-cov-2、mers)、纤维病毒(如埃博拉病毒)、黄病毒(如寨卡病毒、黄热病毒、登革病毒、西尼罗病毒、乙脑病毒、hcv)、正黏液病毒(流感病毒(如h1n1、h3n2、h7n9、h5n1)、禽流感病毒)、副黏液病毒(麻疹病毒、人类呼吸道融合病毒)、逆转录病毒(hiv)以及小核糖核酸病毒(如鼻病毒、肠道病毒)。
31.在一些实施方式中，所述病毒为新型冠状病毒，其病毒感染性疾病或症状包括：新型冠状病毒肺炎；选自下组的一种或多种与新型冠状病毒感染相关的病症：呼吸困难、低氧血症、急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、代谢性酸中毒、凝血功能障碍、多器官功能衰竭、肺纤维化、迁延形成的慢性炎症、发热、干咳、乏力、鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹泻。
32.在一些实施方式中，所述病毒感染的对象为哺乳动物，优选人。
33.本技术的一些方面中，提供了il-37活性物质和ifn活性物质在制备如本技术所述的用于治疗病毒感染的产品中的应用。
34.在本公开的另一个方面中，提供了一种治疗对象中病毒感染性疾病或症状的方法，所述方法包括给予有需要的对象治疗有效量的il-37活性物质和ifn活性物质的组合或
如本文所述的产品或通过本文所述方法制得的产品。该方面所涉及的特征可如前文中所述。
35.本领域的技术人员可对前述的技术方案和技术特征进行任意组合而不脱离本发明的发明构思和保护范围。本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
附图说明
36.下面结合附图对本发明作进一步说明，其中这些显示仅为了图示说明本发明的实施方案，而不是为了局限本发明的范围。
37.图1：h1n1-pr8攻毒小鼠流感病毒感染模型的建立
38.图1a：小鼠生存情况和体重变化监测流程示意图：三组小鼠，每组8只，分别滴鼻攻毒剂量为250、500和1000tcid50的h1n1-pr8流感病毒，连续称重14天，并监测小鼠生存情况和体重变化；
39.图1b：14天内小鼠体重随时间的变化率，其中纵坐标表示小鼠体重的下降率；
40.图1c：14天观测终点时各组小鼠的生存情况。
41.图2：h1n1-pr8小鼠模型测试il-37与ifnα2b组合物的保护作用
42.图2a：实验流程示意图：选择实施例1中500tcid50 h1n1-pr8攻毒剂量，攻毒后，每组分别雾化pbs、il-37、ifnα2b以及il-37与ifnα2b的组合，连续记录体重14天，并同时监测生存情况；
43.图2b：14天内小鼠的体重随时间的变化率，其中纵坐标表示的为小鼠体重的下降率；
44.图2c：14天观测终点时各组小鼠的生存情况如图2c所示。
45.图3：covid-19患者血浆il-37水平与体内炎症因子的关系
46.图3a：covid-19患者血浆il-37水平与炎症因子il-6水平的相关性；
47.图3b：covid-19患者血浆il-37水平与炎症因子il-8水平的相关性；
48.图3c：covid-19患者血浆il-37水平与炎症相关指标超敏c反应蛋白(hs-crp)水平的相关性。
49.图3d：血浆il-37高分泌水平的covid-19患者住院天数显著更短；
50.图3e：血浆il-37高分泌水平的covid-19患者肺ct改善天数显著更短；
51.图3f：血浆il-37高分泌水平的covid-19患者咳嗽消除天数显著更短。
52.通过血浆il-37水平的中位数将患者分为il-37低分泌和高分泌两组，其中il-37高分泌的患者相较于il-37低分泌的患者，其炎症因子il-6水平(图3a)、炎症因子il-8水平(图3b)和炎症相关指标超敏c反应蛋白(hs-crp)的水平(图3c)均显著更低。并且，还发现血浆il-37高分泌水平的covid-19患者住院天数显著更短(图3d)，肺ct改善天数显著更短(图3e)，咳嗽消除天数也显著更短(图3f)。
53.图4：il-37和ifnα均维持高水平的covid-19患者的临床预后
54.图4a：高il-37且高ifnα与低il-37且低ifnα的covid-19患者的住院天数比较；
55.图4b：高il-37且高ifnα与低il-37且低ifnα的covid-19患者的病毒核酸转阴天数比较；
56.图4c：高il-37且高ifnα与低il-37且低ifnα的covid-19患者的肺ct改善天数比较；
57.图4d：高il-37且高ifnα与低il-37且低ifnα的covid-19患者的咳嗽好转天数比较。
58.将covid-19患者分为高il-37且高ifnα以及低il-37且低ifnα两组，统计发现其中高il-37且高ifnα组的患者住院天数(图4a)、病毒核酸转阴天数(图4b)、肺ct改善天数(图4c)以及咳嗽好转天数(图4d)显著更短。
59.图5：白介素37治疗显著减轻sars-cov-2病毒感染的ace2转基因小鼠的肺部炎症
60.图5a：左图为pbs对照组整个肺叶组织切片染色，右图均为左图截取区域的放大显示；
61.图5b：左图为治疗组整个肺叶组织切片染色，右图为左图截取区域的放大显示；
62.图5c：病理分析软件进行的病理评分数据，显示白介素37治疗组病理评分显著更低；
63.图5d：病理分析软件计算的单位面积肺组织的炎症细胞浸润数量，显示白介素37治疗组炎症细胞浸润数量显著更少。
64.以上统计学分析方法均采用非配对mann-whitney检验，显著性表示方法：“*”，p《0.05；“**”，p《0.01；“***”，p《0.001；“****”，p《0.0001。
具体实施方式
65.本发明人在研究中出乎意料地发现将白介素37与干扰素(例如干扰素α2b)的组合应用于小鼠感染h1n1流感模型中，发现该组合对小鼠有明显的保护作用，包括小鼠的体重减轻率降低，生存率显著提高。由于组合物中的白介素37能够拮抗炎症的过度活化，结合干扰素对病毒复制的抑制作用，二者联合将对病毒感染具有明显的治疗和保护作用，极具临床应用价值。
66.由此，本技术中提供了白介素37与干扰素的联合应用，其用于治疗病毒感染，尤其是呼吸道病毒感染。该组合提供一种更加安全且有效的病毒感染治疗药物和/或方案。
67.不希望受限于理论，干扰素能够广谱抑制病毒复制，而il-37可抑制病毒感染以及干扰素使用所引发的炎症致病作用。本技术中至少包含白介素37以及一种干扰素的组合，具有重要的抗病毒优势，可同时作用于病毒复制与炎症致病两个靶点、协同起效；在发挥迅速、广谱的抗病毒效果的同时，又能拮抗干扰素在抗病毒过程中可能引起的炎症因子过度应答，达到安全有效地治疗效果，对于病毒感染，尤其是新发的，难治的病毒感染具有重要的治疗价值和广阔的应用前景。
68.如本文所用，“单位剂量”和“单位剂量形式”表示单一药物给予实体。
69.如本文所用，在数值或范围上下文中的“约”表示所引用或要求保护的数值或范围的
±
10％。
70.应理解，当提供参数范围时，本发明同样提供了在该范围内的所有整数及其十分位小数。例如，“0.1-2.5毫克/天”包括0.1毫克/天、0.2毫克/天、0.3毫克/天等直至2.5毫克/天。比值范围亦然。
71.如本文所用，“含有”、“具有”或“包括”包括了“包含”、“主要由
……
构成”、“基本上
由
……
构成”、和“由
……
构成”；“主要由
……
构成”、“基本上由
……
构成”和“由
……
构成”属于“含有”、“具有”或“包括”的下位概念。
72.白介素37活性物质和干扰素活性物质
73.如本文所用，术语“白介素37活性物质”或“il-37活性物质”是指白介素37蛋白或可用于产生或补充白介素37蛋白的物质。所述il-37活性物质包括但不限于：天然il-37蛋白、重组il-37蛋白、编码前述il-37蛋白的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体或细胞、包含所述il-37蛋白的细胞膜组分、合成的il-37蛋白等。
74.如本文所用，术语“白介素37(il-37)蛋白或多肽”是指由il-37基因编码的蛋白质或多肽、它们的保守性变异多肽、或其同源蛋白或多肽、或其活性片段。白介素37蛋白在本领域中是已知白介素1家族成员，例如人白介素37的序列可如gene id:27178所示。
75.如本文所用，术语“干扰素活性物质”或“ifn活性物质”是指干扰素蛋白或可用于产生或补充干扰素的物质。所述ifn活性物质包括但不限于：天然ifn蛋白、重组ifn蛋白、编码前述ifn蛋白的核酸分子、包含所述核酸分子的表达载体或细胞、包含所述ifn蛋白的细胞膜组分、合成的ifn蛋白等。
76.如本文所用，术语“ifn蛋白或多肽”是指由ifn基因编码的蛋白质或多肽、它们的保守性变异多肽、或其同源蛋白或多肽、或其活性片段。可用的干扰素包括但不限于：ifn-α、ifn-β、ifn-γ、ifn-λ家族中的一种或多种；优选ifn-α1b、ifn-α2a、ifn-α2b、ifn-κ、ifn-ω、ifn-λ1、ifn-λ2中的一种或多种；更优选，ifn-α2b或ifn-κ。
77.进一步地，所述的干扰素ifn-α2b或ifn-κ为重组人干扰素，可以通过商业渠道获得。
78.可用于本技术中的白介素37活性物质和干扰素活性物质可如前文中所详细描述。
79.本公开活性物质的全长序列或其片段通常可以用pcr扩增法、重组法或人工合成的方法获得。例如，对于pcr扩增法，可例如根据本公开所公开的或其他数据库中的有关核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cdna库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cdna库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次pcr扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
80.根据重组生产方案所用的宿主，本公开的蛋白质或多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。
81.抗病毒感染的应用
82.如本文所用，术语“治疗”包括：(1)在可能罹患或易患病况、病症或病状但尚未经历或呈现该病况、病症或病状的临床或亚临床症状的动物(尤其为哺乳动物且尤其为人类)中，预防或延迟所述病况、病症或病状的临床症状的出现；(2)抑制该病况、病症或病状(例如阻滞、减轻或延迟该疾病的发展或其复发(在维持治疗的情况下)或其至少一种临床或亚临床症状)；和/或(3)减轻病状(即导致病况、病症或病状或其临床或亚临床症状中的至少一者的消退)。对所治疗的患者的益处在统计上显著或至少可被患者或被医师察觉。
83.在一些实施方式中，包含白介素37活性物质和干扰素活性物质的组合能有效减轻病毒感染及其相关病症。所述病毒为dna病毒和rna病毒，例如：dna病毒选自：腺病毒、疱疹病毒、痘病毒、嗜肝dna病毒、hbv、hpv等；所述的rna病毒选自：冠状病毒(如sars、sars-cov-2、mers)、纤维病毒(如埃博拉病毒)、黄病毒(如寨卡病毒、黄热病毒、登革病毒、西尼罗病
毒、乙脑病毒、hcv)、正黏液病毒(流感病毒(如h1n1、h3n2、h7n9、h5n1)、禽流感病毒)、副黏液病毒(麻疹病毒、人类呼吸道融合病毒)、逆转录病毒(hiv)以及小核糖核酸病毒(如鼻病毒、肠道病毒)。
84.在一些实施方式中，所述病毒感染是呼吸道病毒感染，其症状包括但不限于：呼吸困难、低氧血症、急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、代谢性酸中毒、凝血功能障碍、多器官功能衰竭、发热、干咳、乏力、鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹泻等症状。
85.在一些实施方式中，可采用本公开的包含白介素37活性物质和干扰素活性物质的组合对各种严重程度的病毒感染进行治疗，例如用于轻型、普通型、重型、危重型病毒感染的治疗。
86.产品及其应用
87.本公开中还提供了一种组合，其中包括治疗有效量的白介素37活性物质和干扰素活性物质，以及可任选的药学上可接受的载剂。在本公开的一些实施方式中，所述组合用于毒感染及其相关病症的治疗。在本公开的一些实施方式中，所述组合可为药物组合物、制剂组合、药盒或使用上的组合。
88.如本文所用，术语“药物组合物”是指同时包含白介素37活性物质和干扰素活性物质的药物组合。如本文所用，术语“组合制剂”或“药盒”，意指白介素37活性物质和干扰素活性物质可独立给药，以分开的形式或通过使用有独立量活性成分的不同固定组合给药。在组合中，待给药的白介素37活性物质和干扰素活性物质的量的比值可以变化，例如以满足待治疗的对象亚群的需求或单独对象的需求，这些需求因对象年龄、性别、体重等而各不相同。药盒的各部分可同时或按时间顺序交错给予，例如对于药盒的任意部分，在不同的时间点以及以相同或不同的时间间隔给予。由此，本公开涉及供同时、分开或顺序使用的白介素37活性物质和干扰素活性物质的组合，例如组合的制剂或药物组合物。
89.该组合还可用作追加疗法。如本文所用，“追加”或“追加疗法”表示疗法中所用的试剂集合，接受该疗法的对象在开始一种或多种试剂的第一治疗方案之后开始该第一治疗方案以外的一种或多种不同试剂的第二治疗方案，因此该疗法中所用的所有试剂并非都在相同时间开始。例如，向已接受il-37疗法的患者追加ifn疗法，或反之。
90.在一些实施方式中，本公开的组合或产品中的活性物质包括白介素37活性物质和干扰素活性物质。在一些实施方式中，本公开的组合或产品中的活性物质基本上由白介素37活性物质和干扰素活性物质组成，或由白介素37活性物质和干扰素活性物质组成。
91.如本文所用，术语“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即有合理的效益/风险比的物质。如本文所用，术语“有效量”是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
92.本公开的组合或产品中的活性物质占药物或组合物总重量的0.01～100wt％，余量为药学上可接受的载剂以及其它添加剂等物质。例如，当所述药物或组合物为包含活性蛋白的溶液时，活性蛋白可占总重量的0.01～10wt％；当所述药物或组合物为粉末剂时，其可基本上或完全由活性蛋白组成。
93.在一些实施方式中，本公开的组合或产品中活性成分以产生优异治疗效果或协同治疗效果的量存在。所述优异治疗效果包括但不限于：相对于采用常规治疗而言，显著缩短病情缓解所需的时间，例如显著缩短患者住院时间。
94.在一些实施方式中，il-37的量为0.01～10μg，0.05～5μg，0.1～4μg，0.5～3μg。在一些实施方案中，所述干扰素ifn-α2b或ifn-κ的量为1x104～1x108个活性单位，5x104～5x107个活性单位，1x105～1x107个活性单位，5x105～5x106个活性单位
95.在一些实施方式中，本公开的组合或产品中白介素37活性物质和干扰素活性物质的质量比为1:100～100:1，1:50～50:1，1:10～10:1，1:5～5:1，1:2～2.5:1，1:1～2:1。
96.如本文所用，术语“药学上可接受的载剂”指用于治疗剂给药的载剂，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载剂：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载剂是本领域普通技术人员所熟知的。在《雷明顿药物科学》(remington’s pharmaceutical sciences，mack pub.co.，n.j.1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。
97.在制剂组合、药物组合物或药盒中药学上可接受的载剂可含有液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、泡腾剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、ph缓冲物质等。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中ph通常约为5-8，较佳地，ph约为6-8。例如，可用于本技术组合的缓冲液包括但不限于：磷酸盐缓冲液、5％葡萄糖注射液、9％氯化钠注射液、醋酸盐缓冲液、碳酸氢钠缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等，优选地磷酸盐缓冲液。
98.如本文所用，术语“单位剂型”是指为了施用方便，将本公开的组合物制备成单次施用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如粉末剂)、液体剂、气雾剂、胶囊剂、缓释剂。
99.在本公开的另一优选实施方式中，所述组合物为单位剂型或多剂型，且其中il-37活性物质量的范围可为例如0.1～100mg/剂，0.5～50mg/剂，1～40mg/剂，5～30mg/剂；ifn活性物质的量可为例如0.01～100mg/剂，0.05～80mg/剂，0.1～70mg/剂，0.5～50mg/剂。或者，所述ifn活性物质的量为1x104～1x108个活性单位/剂，5x104～5x107个活性单位/剂，1x105～1x107个活性单位/剂，5x105～5x106个活性单位/剂。
100.在本公开的一些实施方式中，可根据需要给予对象本公开活性物质，例如每天、每2天、每3天、每周施用1～6剂，1～3剂或1剂本公开的产品。
101.应理解，所用活性物质的有效剂量可随待施用或治疗的对象的严重程度而变化。具体情况根据对象的个体情况(例如对象体重、年龄、身体状况、所需达到的效果)来决定，这在熟练医师可以判断的范围内。
102.本公开的药物或药物组合物或药盒的给药途径可包括但不限于如下一种或多种：雾化吸入、滴鼻、局部给药、靶组织定向给药、注射、口服等。可采用相同或不同的方式同时或分别给予所述活性物质或包含所述活性物质的制剂或组合物。
103.与仅使用单一活性物质的单一疗法相比，给予包含白介素37活性物质和干扰素活性物质的组合产生有益的例如协同的治疗效果，或者其他出人意料的有益效果，例如显著优于现有药物的疗效、更少和/或更轻的副作用。
104.与仅使用白介素37活性物质或干扰素活性物质的单一疗法相比，在联用时可使用更低剂量的白介素37活性物质和干扰素活性物质，或可产生协同效果。例如，所用剂量可不仅更小，使用频率还可更低。而且，副作用发生可降低，和/或对于基于白介素37活性物质和干扰素活性物质的疗法的响应率可提高。
105.实施例
106.下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本领域技术人员可对本发明做出适当的修改、变动，这些修改和变动都在本发明的范围之内。
107.下列实施例中未注明具体条件的实验方法，可采用本领域中的常规方法，例如参考《分子克隆实验室指南》或按照供应商所建议的条件。
108.除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
109.实施例1、h1n1-pr8攻毒小鼠流感病毒感染模型的构建
110.采用上海西格玛-必凯生物公司购入8～10周龄，平均体重20g的雌性c57小鼠，第0天分别采用250、500、1000tcid
50
剂量的pr8滴鼻攻毒小鼠，攻毒后统一饲养于生物安全二级实验室，每个独立分组共8只小鼠，每天观测记录小鼠体重变化以及生存情况，直至第14天观测终点。模型构建的示意图如图1a所示。
111.每天固定时间点对每组小鼠的体重进行测量和记录，直至第14天观测终点。观测到不同tcid
50 pr8攻毒剂量的组体重变化率不同，如图1b所示。结果显示：tcid
50
为250时，小鼠体重下降率最低，且第10天后有所回升，说明此攻毒剂量下，在未经治疗干预的情况下，小鼠可以自行清除部分病毒，并逐渐康复。而在tcid
50
为500时，小鼠的体重下降率明显，14天观察终点结束之前体重仅有轻微回升现象。当tcid
50
达到1000时，小鼠的体重下降率最快，且无体重回升现象，说明此攻毒剂量较高。
112.每天固定时间点观察小鼠的生存状况并记录，直至第14天观测终点。如图1c所示，可见tcid
50
为250时，小鼠生存率最高，直至14天观测终点，仍有70％的小鼠存活，说明此攻毒剂量较低。而在tcid
50
为500时，小鼠生存率下降明显，至14天观测终点时有10％的小鼠存活。当tcid
50
达到1000时，小鼠的生存率最低，且无法观测到14天终点，第十天时小鼠则全部死亡，说明此攻毒剂量过高。
113.综上，h1n1-pr8小鼠流感病毒感染模型的攻毒最适剂量为500tcid
50
。
114.实施例2、il-37与ifnα2b蛋白联用对小鼠感染流感病毒具有协同保护作用
115.il-37与ifnα2b蛋白购自上海近岸科技有限公司，通过实施例1中的模型构建条件摸索，第0天采用500tcid
50
进行h1n1-pr8攻毒，设置pbs对照组、白介素37单独雾化组、干扰素单独雾化组以及il-37与ifnα2b蛋白的组合物进行雾化吸入治疗，其中干扰素α2b的施用浓度为5
×
104iu/只，白介素37的施用浓度为12.5μg/kg，雾化吸入的仪器设备为英国emms雾化支持系统，每天对各组小鼠进行体重记录，生存情况观测，直至第14天观测终点。模型设计示意图如图2a所示。
116.观测结果显示，如图2b所示，各组小鼠的体重变化率差异明显，其中pbs对照组(未经任何治疗干预组)的体重下降率最高，其次是ifnα2b单独使用组，说明单独使用干扰素进行治疗对小鼠有一定的保护作用，但效果并不明显。白介素37组单独使用组的效果优于干扰素ifnα2b单独使用组，体重下降率较干扰素ifnα2b单独使用组低，说明白介素37单独使用对小鼠感染h1n1流感病毒有一定的治疗效果。而il-37与ifnα2b联用组小鼠的体重下降率最低，且从第9天开始，即观测到了体重回升的现象，且达到第14天观测终点时体重回升
非常明显。证明了该联合用药对h1n1流感病毒感染具有较佳的治疗效果。
117.不同组小鼠的生存状况如图2c所示，可见不同组小鼠的生存率差异明显，其中干扰素单独使用组小鼠的生存率最低，第11天则全部死亡，说明虽然ifnα2b对小鼠感染h1n1流感病毒感染后有一定的保护作用(体重下降率较pbs对照组低)，但也有较大的毒副作用(生存率较pbs对照组低)；其次为pbs对照组(未经任何治疗干预组)，第11天时仅有10％小鼠存活。而白介素37单独治疗组的小鼠生存率较高，第11天时还有50％小鼠存活，说明单独il-37治疗组对小鼠感染h1n1流感病毒后有较为明显的保护作用。而il-37与ifnα2b的联合治疗组小鼠的生存率最高，第11天时有70％的小鼠存活，且至第14天观测终点时仍有50％的小鼠存活。说明该组合对小鼠感染h1n1流感病毒后有十分明显的治疗和保护作用。
118.上述试验结果证明了，单独给予白介素37对于h1n1流感病毒感染具有一定的保护和治疗作用；单独给予ifnα2b效果不佳，甚至于会降低存活率，具有一定毒性；出乎意料的是，ifnα2b与il-37效果好极佳，使小鼠感染h1n1流感病毒后能迅速恢复，大大降低了死亡率。此模型的结果很好地证明了白介素37单独或与干扰素联合用于病毒干扰的显著保护作用和治疗效果。
119.不限于理论，联合治疗后，干扰素的抗病毒作用于白介素37的抗炎作用协同起效，既有效抑制了病毒复制，又避免了体内发生炎症的过度活化，使小鼠感染h1n1流感病毒后能迅速恢复，大大降低了死亡率。
120.与pbs对照组相比，白介素37单独作用组的小鼠体重变化率显著降低，p《0.01，而生存率显著高于对照组p《0.05。白介素37与ifnα2b联合治疗组的小鼠体重变化率显著降低，p《0.001，生存率显著高于对照组p《0.05。
121.在以上小鼠h1n1病毒感染模型中，分别使用白介素37、干扰素α2b以及白介素37联合干扰素α2b进行治疗的协同作用验证如下：以第8天和第11天以上三组小鼠的生存率进行统计分析计算，其中单独使用白介素37进行治疗的小鼠平均生存率为x，单独使用干扰素α2b进行治疗的小鼠平均生存率为y，白介素37联合干扰素α2b的治疗组的生存率为r。
122.根据colby法协同作用计算公式：z＝x y-x*y/100，z值为理论预期生存率，当联合治疗组的实际生存率r》理论预期生存率z时，即白介素37与干扰素α2b存在协同治疗作用，当联合治疗组的实际生存率r≤理论预期生存率z时，即白介素37与干扰素α2b不存在协同作用。计算结果如下表所示：
[0123][0124]
根据表中的计算结果，可得出结论，白介素37与干扰素α2b存在协同治疗作用。
[0125]
实施例3、covid-19患者血浆中高的il-37水平伴随低的炎症因子水平
[0126]
我们收集了上海市公共卫生临床中心2020年2月～2020年5月通过病毒核酸检测阳性确诊为covid-19的254例患者血浆样本。患者年龄为42.76
±
0.95，其中女性114例，男
性140例。此研究获伦理委员会的批准，所有入组的患者均签署了知情同意书。
[0127]
通过白介素37酶联免疫吸附测定试剂盒(购自北京四正柏生物科技有限公司)，对254例患者的血浆白介素37水平进行了定量测定，操作步骤按照白介素37酶连免疫吸附测定试剂盒操作规程。我们进一步按照血浆il-37分泌量的中位数将254位患者分为il-37高分泌组和il-37低分泌组两组，观测两组患者血浆中炎症相关因子的分泌差异。
[0128]
结果显示il-37高分泌组的血浆il-6水平(图3a)、血浆il-8水平(图3b)和血浆hs-crp水平(图3c)显著偏低，进一步证实了患者体内分泌的il-37可有效地拮抗炎症的过度活化，同时白介素37高分泌的患者相较于低分泌的患者其住院时间(图3d)、肺ct改善时间(图3e)以及咳嗽消除时间(图3f)均显著缩短，提示il-37在covid-19感染过程中具有强大的抑炎能力。
[0129]
实施例4、il-37和ifnα维持高水平的covid-19患者有更好临床预后
[0130]
患者血浆样本ifnα数据来源于患者的临床免疫报告。根据covid-19患者血浆样本中il-37与ifnα分泌量的中位数水平，我们将患者分为两组，分别为il-37和ifnα共同高水平组与共同低水平组，分别比较两组患者临床预后之间的差异性。
[0131]
结果显示共同高水平组的患者住院天数(图4a)、核酸转阴的天数(图4b)、肺ct改善的天数(图4c)以及咳嗽消除天数(图4d)均显著低于共同低水平组。
[0132]
以上的数据更直观地揭示出体内il-37与ifnα共同维持高水平有利于sars-cov-2病毒感染后的良性临床预后，为il-37与ifnα在sars-cov-2病毒感染中的治疗价值提供了进一步的临床数据支持。
[0133]
实施例5、白介素37单独治疗显著减轻sars-cov-2病毒感染的血管紧张素转化酶转基因小鼠的肺部炎症
[0134]
从北京华富康公司购入6只5～6周龄icr背景雌性血管紧张素转化酶转基因小鼠，并分为对照组和白介素37治疗组，每组3只。每只小鼠滴鼻攻毒105tcid
50
的sars-cov-2病毒(来源于中国科学院武汉病毒所)，攻毒后12h和48h，白介素37治疗组尾静脉注射以pbs为溶剂的12.5μg/kg重组人白介素37(购自r&d公司)，对照组尾静脉注射等量的pbs，攻毒后小鼠均饲养于生物安全三级实验室。攻毒后第5天，对小鼠进行安乐死，取肺组织切片进行苏木素-伊红染色，并使用tissue faxs confocal plus 200软件进行病理评分计算以及炎症细胞定量。
[0135]
如图5所示，其中图5a左图为对照组整个肺叶组织切片染色，图5b为治疗组整个肺叶组织切片染色，其中的两幅右图均为左图的放大显示。可见治疗组相较于对照组，其炎性细胞浸润，肺泡壁增厚、充血程度均明显更轻。图5c为经过病理分析软件进行评分的结果，显示白介素37治疗组病理评分显著更低；图5d为经过病理分析软件计算后的单位面积肺组织的炎症细胞浸润数量，显示白介素37治疗组炎症细胞浸润数量显著更少。
[0136]
本实施例说明白介素37单独治疗sars-cov-2病毒感染的血管紧张素转化酶转基因小鼠，可以看到显著的抑制炎症的效果，提示可能对疾病的转归具有重要的治疗价值。
[0137]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。