一种灵芝孢子粉的检测方法与流程

1.本发明涉及灵芝孢子粉技术领域，具体为一种灵芝孢子粉的检测方法。


背景技术：

2.灵芝孢子粉是灵芝生长发育成熟产生大量的生殖细胞，其化学成分主要是蛋白质和氨基酸、维生素类、胡萝卜素类、生物碱类、脂肪酸类以及丰富的多糖、寡糖及生活性物质等。灵芝孢子粉实际上的主要作用就是提高人体免疫力，在免疫力调节方面有比较好的作用。
3.但是目前市场上的灵芝孢子粉多种多样，因而对于其产品的质量良莠不齐，比较混乱，而目前仍无完整的有关灵芝孢子粉的质量控制体系。


技术实现要素：

4.针对现有技术的不足，本发明提供了一种灵芝孢子粉的检测方法，解决了目前市场上的灵芝孢子粉多种多样，因而对于其产品的质量良莠不齐，比较混乱，而目前仍无完整的有关灵芝孢子粉的质量控制体系的问题。
5.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种灵芝孢子粉的检测方法，包括其检测方法包括以下步骤：
6.s1、对照溶液制备：称取100～110℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1～0.3g，称取好后将其放入到量杯中，加入水进行溶解稀释，并且将其给摇匀，摇匀后即为对照溶液；
7.s2、硫酸蒽酮溶液制备：称取0.1～0.3g蒽酮，加入80～90ml的74～78％的硫酸溶液，对其进行溶解稀释，并且摇匀即可得出硫酸蒽酮溶液；
8.s3、供试品制备：称取灵芝孢子粉3～4g，称好后放入到量杯中，加入70～80ml的水进行稀释摇匀，然后对其进行加热5～6h，加热完毕后，对其进行过滤处理，过滤后称取8～10ml的滤液，并且向滤液中加入110～140ml的无水乙醇，对其进行稀释摇匀，接着向残渣中加入20～25ml的水进行稀释摇匀，摇匀后倒入到滤液中；
9.s4、曲线绘制：分别称取对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml放置于五个试管中，然后加水稀释至2～3ml，接着向各个试管中加入5～8ml的硫酸蒽酮溶液摇匀，摇匀后放入到沸水中加热15～20min，加热完毕后将其放入到2～4℃的水中进行冷却10min，接着采用紫外可见分光光度法测定各个试管中的溶液吸光度，以吸光度为横坐标，对照液容量作为纵坐标，绘制出标准曲线，测定其吸光度，经计算可知葡萄糖在20.77～124.45μg范围内；
10.s5、样品测定：取供试品溶液放置于五个试管中，每个试管中的溶液含量为0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，然后测出其吸光度，得出吸收平均值为0.435，rsd值为0.05％；
11.s6、重复测定：取供试品溶液和步骤s4中的溶液各2ml，放置于试管中，然后加入5％苯酚溶液混匀，混匀后各加7ml的硫酸混匀，然后将其进行水浴处理，水浴处理后再对其进行冷却处理，再次测定其吸光度，可得多糖平均含量为1.25％，rsd为1.61％。
12.优选的，所述步骤s1中，对无水葡萄糖进行稀释时，使其每1ml水中含有7～9mg的
无水葡萄糖。
13.优选的，所述步骤s3中，加热采用水浴方式加热，加热温度为100℃，每分钟以5～8℃的温度上升。
14.优选的，所述步骤s3中，过滤采用80～120目的筛网进行筛分过滤。
15.优选的，所述步骤s4中，取一个空白试管作为对照组。
16.优选的，所述步骤s4和步骤s5以及步骤s6中，均在波长为612nm处开设测定吸光度。
17.优选的，所述步骤s4中，标准曲线的回归方程为a＝0.0105c-0.0089，其中c为吸光度。
18.优选的，所述步骤s6中，水浴处理时，水浴温度为45℃，保温25～35min，冷却温度为2～4℃的冷水，冷却5～8min。
19.有益效果
20.本发明提供了一种灵芝孢子粉的检测方法，与现有技术相比具备以下有益效果：
21.1、该灵芝孢子粉的检测方法，通过采用薄层色谱-分光光度法对灵芝孢子粉内在质量进行研究检测，制定灵芝孢子粉的质量标准，为灵芝孢子粉提供了实验依据，进而很好的判断了灵芝孢子粉质量是否达标。
22.2、该灵芝孢子粉的检测方法，通过设置了对照液，提高灵芝孢子粉检测的精准性，进而对灵芝孢子粉的质量判断有了很好的判断。
附图说明
23.图1为本发明的检测流程框图。
具体实施方式
24.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
25.请参阅图1，本发明提供三种技术方案：
26.实施例一
27.一种灵芝孢子粉的检测方法，包括其检测方法包括以下步骤：
28.s1、对照溶液制备：称取100℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，称取好后将其放入到量杯中，加入水进行溶解稀释，并且将其给摇匀，摇匀后即为对照溶液；
29.s2、硫酸蒽酮溶液制备：称取0.1g蒽酮，加入80ml的74％的硫酸溶液，对其进行溶解稀释，并且摇匀即可得出硫酸蒽酮溶液；
30.s3、供试品制备：称取灵芝孢子粉3g，称好后放入到量杯中，加入70ml的水进行稀释摇匀，然后对其进行加热5h，加热完毕后，对其进行过滤处理，过滤后称取10ml的滤液，并且向滤液中加入110ml的无水乙醇，对其进行稀释摇匀，接着向残渣中加入20ml的水进行稀释摇匀，摇匀后倒入到滤液中；
31.s4、曲线绘制：分别称取对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml放置于五个试管中，然后
加水稀释至2ml，接着向各个试管中加入5ml的硫酸蒽酮溶液摇匀，摇匀后放入到沸水中加热15min，加热完毕后将其放入到2℃的水中进行冷却10min，接着采用紫外可见分光光度法测定各个试管中的溶液吸光度，以吸光度为横坐标，对照液容量作为纵坐标，绘制出标准曲线，测定其吸光度，经计算可知葡萄糖在20.77μg范围内；
32.s5、样品测定：取供试品溶液放置于五个试管中，每个试管中的溶液含量为0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，然后测出其吸光度，得出吸收平均值为0.435，rsd值为0.05％；
33.s6、重复测定：取供试品溶液和步骤s4中的溶液各2ml，放置于试管中，然后加入5％苯酚溶液混匀，混匀后各加7ml的硫酸混匀，然后将其进行水浴处理，水浴处理后再对其进行冷却处理，再次测定其吸光度，可得多糖平均含量为1.25％，rsd为1.61％。
34.本发明实施例中，步骤s1中，对无水葡萄糖进行稀释时，使其每1ml水中含有7mg的无水葡萄糖。
35.本发明实施例中，步骤s3中，加热采用水浴方式加热，加热温度为100℃，每分钟以5℃的温度上升。
36.本发明实施例中，步骤s3中，过滤采用80目的筛网进行筛分过滤。
37.本发明实施例中，步骤s4中，取一个空白试管作为对照组。
38.本发明实施例中，步骤s4和步骤s5以及步骤s6中，均在波长为612nm处开设测定吸光度。
39.本发明实施例中，步骤s4中，标准曲线的回归方程为a＝0.0105c-0.0089，其中c为吸光度。
40.本发明实施例中，步骤s6中，水浴处理时，水浴温度为45℃，保温25min，冷却温度为2℃的冷水，冷却5min。
41.实施例二
42.一种灵芝孢子粉的检测方法，包括其检测方法包括以下步骤：
43.s1、对照溶液制备：称取110℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.3g，称取好后将其放入到量杯中，加入水进行溶解稀释，并且将其给摇匀，摇匀后即为对照溶液；
44.s2、硫酸蒽酮溶液制备：称取0.3g蒽酮，加入90ml的78％的硫酸溶液，对其进行溶解稀释，并且摇匀即可得出硫酸蒽酮溶液；
45.s3、供试品制备：称取灵芝孢子粉4g，称好后放入到量杯中，加入80ml的水进行稀释摇匀，然后对其进行加热6h，加热完毕后，对其进行过滤处理，过滤后称取10ml的滤液，并且向滤液中加入140ml的无水乙醇，对其进行稀释摇匀，接着向残渣中加入25ml的水进行稀释摇匀，摇匀后倒入到滤液中；
46.s4、曲线绘制：分别称取对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml放置于五个试管中，然后加水稀释至3ml，接着向各个试管中加入8ml的硫酸蒽酮溶液摇匀，摇匀后放入到沸水中加热20min，加热完毕后将其放入到4℃的水中进行冷却10min，接着采用紫外可见分光光度法测定各个试管中的溶液吸光度，以吸光度为横坐标，对照液容量作为纵坐标，绘制出标准曲线，测定其吸光度，经计算可知葡萄糖在124.45μg范围内；
47.s5、样品测定：取供试品溶液放置于五个试管中，每个试管中的溶液含量为0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，然后测出其吸光度，得出吸收平均值为0.435，rsd值为0.05％；
48.s6、重复测定：取供试品溶液和步骤s4中的溶液各2ml，放置于试管中，然后加入
5％苯酚溶液混匀，混匀后各加7ml的硫酸混匀，然后将其进行水浴处理，水浴处理后再对其进行冷却处理，再次测定其吸光度，可得多糖平均含量为1.25％，rsd为1.61％。
49.本发明实施例中，步骤s1中，对无水葡萄糖进行稀释时，使其每1ml水中含有9mg的无水葡萄糖。
50.本发明实施例中，步骤s3中，加热采用水浴方式加热，加热温度为100℃，每分钟以8℃的温度上升。
51.本发明实施例中，步骤s3中，过滤采用120目的筛网进行筛分过滤。
52.本发明实施例中，步骤s4中，取一个空白试管作为对照组。
53.本发明实施例中，步骤s4和步骤s5以及步骤s6中，均在波长为612nm处开设测定吸光度。
54.本发明实施例中，步骤s4中，标准曲线的回归方程为a＝0.0105c-0.0089，其中c为吸光度。
55.本发明实施例中，步骤s6中，水浴处理时，水浴温度为45℃，保温35min，冷却温度为4℃的冷水，冷却8min。
56.实施例三
57.一种灵芝孢子粉的检测方法，包括其检测方法包括以下步骤：
58.s1、对照溶液制备：称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.2g，称取好后将其放入到量杯中，加入水进行溶解稀释，并且将其给摇匀，摇匀后即为对照溶液；
59.s2、硫酸蒽酮溶液制备：称取0.2g蒽酮，加入85ml的76％的硫酸溶液，对其进行溶解稀释，并且摇匀即可得出硫酸蒽酮溶液；
60.s3、供试品制备：称取灵芝孢子粉3.5g，称好后放入到量杯中，加入75ml的水进行稀释摇匀，然后对其进行加热5.5h，加热完毕后，对其进行过滤处理，过滤后称取9ml的滤液，并且向滤液中加入120ml的无水乙醇，对其进行稀释摇匀，接着向残渣中加入23ml的水进行稀释摇匀，摇匀后倒入到滤液中；
61.s4、曲线绘制：分别称取对照溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1ml放置于五个试管中，然后加水稀释至2.5ml，接着向各个试管中加入6ml的硫酸蒽酮溶液摇匀，摇匀后放入到沸水中加热17min，加热完毕后将其放入到3℃的水中进行冷却10min，接着采用紫外可见分光光度法测定各个试管中的溶液吸光度，以吸光度为横坐标，对照液容量作为纵坐标，绘制出标准曲线，测定其吸光度，经计算可知葡萄糖在66.45μg范围内；
62.s5、样品测定：取供试品溶液放置于五个试管中，每个试管中的溶液含量为0.2、0.4、0.6、0.8、1ml，然后测出其吸光度，得出吸收平均值为0.435，rsd值为0.05％；
63.s6、重复测定：取供试品溶液和步骤s4中的溶液各2ml，放置于试管中，然后加入5％苯酚溶液混匀，混匀后各加7ml的硫酸混匀，然后将其进行水浴处理，水浴处理后再对其进行冷却处理，再次测定其吸光度，可得多糖平均含量为1.25％，rsd为1.61％。
64.本发明实施例中，步骤s1中，对无水葡萄糖进行稀释时，使其每1ml水中含有8mg的无水葡萄糖。
65.本发明实施例中，步骤s3中，加热采用水浴方式加热，加热温度为100℃，每分钟以7℃的温度上升。
66.本发明实施例中，步骤s3中，过滤采用100目的筛网进行筛分过滤。
67.本发明实施例中，步骤s4中，取一个空白试管作为对照组。
68.本发明实施例中，步骤s4和步骤s5以及步骤s6中，均在波长为612nm处开设测定吸光度。
69.本发明实施例中，步骤s4中，标准曲线的回归方程为a＝0.0105c-0.0089，其中c为吸光度。
70.本发明实施例中，步骤s6中，水浴处理时，水浴温度为45℃，保温29min，冷却温度为3℃的冷水，冷却6min。
71.综上所述：本发明的检测通过采用薄层色谱-分光光度法对灵芝孢子粉内在质量进行研究检测，制定灵芝孢子粉的质量标准，为灵芝孢子粉提供了实验依据，进而很好的判断了灵芝孢子粉质量是否达标，通过设置了对照液，提高灵芝孢子粉检测的精准性，进而对灵芝孢子粉的质量判断有了很好的判断，为科学实验提供了标准的依据，试验精确性高。
72.同时本说明书中未作详细描述的内容均属于本领域技术人员公知的现有技术。
73.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。