基于表面增强拉曼光谱技术快速鉴定土壤中木霉菌的方法与流程

技术特征：
1.一种基于表面增强拉曼光谱技术快速鉴定土壤中木霉菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备纳米金溶胶：将0.01％的氯金酸溶液置于容器中，以700-900r/min加热搅拌，待溶液沸腾后，立即加入1％柠檬酸三钠溶液，加热反应20-40min，冷却至室温，即为粒径为50-100nm的纳米金溶胶；(2)木霉菌标准图谱的测定：将不同的木霉菌孢子悬液接种到灭菌好的培养基上，置于恒温培养箱中进行培养1-3h，并使湿度维持饱和状态；培养结束后，取菌块置于无菌管中进行漩涡震荡，震荡速度为2500-4000r/min，震荡时长2-4分钟，制备成标准木霉菌的悬液；取该悬液20ul与400ul的步骤(1)的纳米金溶胶混合，立即用便携式拉曼光谱仪进行测定；便携式拉曼光谱仪的激发波长和激光功率分别为785nm和200-300mw，采集过程中积分时间设为10-30s，分辨率为4cm-1
，扫描光谱范围为500-1800cm-1
；对采集到的拉曼光谱进行图谱处理；(3)土壤中样品中木霉菌图谱的测定：取1.0g土壤样品，加入10ml无菌纯水，置于无菌管中进行漩涡震荡，震荡速度为2500-4000r/min，震荡时长2-4分钟，制备成土壤样品的木霉菌悬液；取该悬液20ul与400ul的步骤(1)的纳米金溶胶混合，立即用便携式拉曼光谱仪进行测定；便携式拉曼光谱仪的激发波长和激光功率分别为785nm和200-300mw，采集过程中积分时间设为10-30s，分辨率为4cm-1
，扫描光谱范围为500-1800cm-1
；对采集到的拉曼光谱进行图谱处理；(4)木霉菌的鉴别和分类：将步骤(3)得到的土壤中样品中木霉菌图谱与步骤(2)得到的木霉菌标准图谱进行比对，从而确定木霉菌的种类。2.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术快速鉴定土壤中木霉菌的方法，其特征在于，步骤(1)中，制备纳米金溶胶：将规格为1g的氯金酸粉末倒入100ml容量瓶中，超纯水定容，配制成质量分数为1％的氯金酸溶液作为储备液，每次使用时再稀释，本方法所用的氯金酸浓度为0.01％，低温避光保存；将规格为1g的柠檬酸三钠粉末倒入100ml容量瓶中，超纯水定容，配制成质量分数为1％的柠檬酸三钠溶液，现配现用；将50.00ml、0.01％的氯金酸溶液置于圆底烧瓶中，以700-900r/min加热搅拌，待溶液沸腾后，立即加入1％柠檬酸三钠溶液0.2-0.5ml，加热反应20-40min，冷却至室温，即为粒径为50-100nm的纳米金溶胶。3.根据权利要求1所述的一种基于表面增强拉曼光谱技术快速鉴定土壤中木霉菌的方法，其特征在于，步骤(4)中，比对的方法为：采用拉曼谱图的相邻峰位置的峰强比进行处理对比，在i
690
、i
732
、i
1010
、i
1054
、i
1273
、i
1310
、i
1551
、i
1617
处存在的拉曼峰的相邻峰位置的峰强比，得到不同的峰强比值，通过图谱处理软件得到不同木霉菌的相邻特征峰峰强比的比对图，可以实现对不同的木霉真菌进行区分识别，进而可以判断土壤中是否已经有木霉菌和哪一种类型的木霉菌。

技术总结
本发明公开了一种基于表面增强拉曼光谱技术快速鉴定土壤中木霉菌的方法，包括以下步骤：(1)制备纳米金溶胶，(2)木霉菌标准图谱的测定，(3)土壤中样品中木霉菌图谱的测定，(4)木霉菌的鉴别和分类：将步骤(3)得到的土壤中样品中木霉菌图谱与步骤(2)得到的木霉菌标准图谱进行比对，从而确定木霉菌的种类。本发明的方法是基于表面增强拉曼散射技术(SERS)结合便携拉曼光谱仪进行检测。所用方法中的仪器设备便于携带，方法检测时间短，方便快捷，不需要进行生物培养，也可以避免使用大型的仪器设备，检测成本低廉，准确率高。准确率高。准确率高。


技术研发人员：王惠琴 刘梦佳 张雨苗 林太凤 郑大威 张萍
受保护的技术使用者：北京工业大学
技术研发日：2022.01.10
技术公布日：2022/3/22