改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用的制作方法

1.本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用。


背景技术：

2.糖尿病足是指糖尿病患者因糖尿病所致的下肢远端神经病变和/或血管病变导致的皮肤及其深层组织破坏，常合并感染，严重者累及肌肉和骨组织。糖尿病足是糖尿病最严重的慢性并发症之一，具有高发病率、高致死率的特点。糖尿病足慢性创面治疗难度大、周期长、费用高，为患者、家庭和社会带来沉重负担。
3.目前糖尿病足局部创面处理多是清创后采用纱布或一些功能性敷料覆盖，治疗中存在治愈率低、治疗时间长、花费大的问题。对于糖尿病足慢性创面来说，愈合是一个缓慢的过程，因此需要一种作用持久的生物材料缓慢地发挥作用而促进创面的愈合。富白细胞-血小板纤维蛋白(leucocyte and platelet rich fibrin，l-prf)是第二代血小板凝胶制品，在一定程度上可以促进糖尿病足溃疡愈合，但治疗效果有待提高，因此，急需一种治疗效果好，且安全性高的药物。


技术实现要素：

4.为了解决上述问题，本发明提供了改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用。利用本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白制备的药物能够缩短糖尿病足溃疡的愈合时间、提高愈合率，具有良好的治疗效果，也具有较高的安全性。
5.为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
6.本发明提供了改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用。
7.本发明还提供了一种治疗糖尿病足溃疡的药物，所述药物包括改良型富血小板纤维蛋白和药学上可接受的辅料。
8.有益效果：
9.本发明提供了改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用。本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白具有疏松的网状纤维蛋白结构，可以富含更多血小板及白细胞，能够更加持续地释放多种生长因子及细胞因子，更有利于组织再生和创伤修复，利用本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白制备的药物能够缩短糖尿病足溃疡的愈合时间、提高愈合率，具有良好的治疗效果，也具有较高的安全性。
附图说明
10.图1为应用例1中病例一于2020年11月30日拍摄的患者创面图；
11.图2为应用例1中病例一于2020年12月15日拍摄的患者创面图；
12.图3为应用例1中病例一于2021年2月7日拍摄的患者创面图；
13.图4为应用例1中病例二于2020年9月1日拍摄的患者创面图；
14.图5为应用例1中病例二于2020年9月14日拍摄的患者创面图；
15.图6为应用例1中病例二于2020年10月13日拍摄的患者创面图；
16.图7为应用例1中病例三于2021年5月8日拍摄的患者创面图；
17.图8为应用例1中病例三于2021年5月25日拍摄的患者创面图；
18.图9为应用例1中病例三于2021年6月3日拍摄的患者创面图；
19.图10为应用例1中病例四于2021年9月13日拍摄的患者创面图；
20.图11为应用例1中病例四于2021年9月16日拍摄的患者创面图；
21.图12为应用例1中病例四于2021年9月26日拍摄的患者创面图；
22.图13为对比例1中病例五于2020年8月21日拍摄的患者创面图；
23.图14为对比例1中病例五于2020年9月2日拍摄的患者创面图；
24.图15为对比例1中病例五于2020年11月21日拍摄的患者创面图；
25.图16为对比例1中病例六于2020年9月28日拍摄的患者创面图；
26.图17为对比例1中病例六于2020年10月15日拍摄的患者创面图；
27.图18为对比例1中病例六于2020年12月23日拍摄的患者创面图；
28.图19为应用例1和对比例1共60位患者的kaplan-meier生存曲线。
具体实施方式
29.本发明提供了改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用。
30.本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白具有疏松的网状纤维蛋白结构，可以富含更多血小板及白细胞，能够更加持续地释放多种生长因子及细胞因子，更有利于组织再生和创伤修复，利用本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白制备的药物能够缩短糖尿病足溃疡的愈合时间、提高愈合率，具有良好的治疗效果，也具有较高的安全性。
31.本发明还提供了一种治疗糖尿病足溃疡的药物，所述药物包括改良型富血小板纤维蛋白和药学上可接受的辅料。在本发明中，所述改良型富血小板纤维蛋白优选包括由自体血液制备得到的改良型富血小板纤维蛋白。
32.本发明优选还提供了上述改良型富血小板纤维蛋白的制备方法，包括以下步骤：将血液以1500转/分的转速离心14分钟，分离得到中间凝胶层为所述改良型富血小板纤维蛋白。在本发明中，所述血液优选包括自体血液；所述血液更优选包括采集的1min内的自体血液。本发明利用自体血液制备改良型富血小板纤维蛋白，可以避免外源血液的免疫排斥反应，具有较高的安全性。
33.为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的改良型富血小板纤维蛋白在制备治疗糖尿病足溃疡的药物中的应用进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
34.实施例1
35.改良型富血小板纤维蛋白的制备，由以下步骤组成：
36.严格遵守无菌操作，将5ml静脉血置于无添加抗凝剂真空玻璃管，充分摇匀后，立
刻(采血后1分钟内)置于配平的离心机内，室温状态下以1500转/分的转速离心14分钟，静置后，血液样本分3层，弃上清，去除底层红细胞碎片，收集中间凝胶层，得到改良型富血小板纤维蛋白(a-prf)。
37.将制备得到的a-prf静置于干燥消毒换药弯盘内，放置在两个无菌纱布层之间挤压，即制成a-prf膜，将其均匀平铺或填塞于糖尿病足创面；表面覆盖浸有1％依沙吖啶的无菌纱布，外层以无菌纱布包扎。
38.应用例1
39.按实施例1的方法将30位糖尿病足溃疡患者的部分血液制备得到a-prf，并根据实施例1的方法将制备得到的a-prf膜用于30位糖尿病足溃疡患者的创面，2～3d查看一次创面，每10d更换一次a-prf膜。
40.典型案例如下：
41.病例一：
42.糖尿病足慢性创面(wagner 3级)，患者72岁女性，因发现血糖升高20年、双足破溃2年入院，创面先后使用密闭负压吸引治疗及上述a-prf治疗，分别拍摄于2020年11月30日(图1)、2020年12月15日(图2)和2021年2月7日(图3)。a-prf治疗起始时间为2020年12月15日，创面面积为17cm2，于2021年2月10日创面愈合，愈合时间为57天。
43.病例二：
44.糖尿病足慢性创面(wagner 2级)，患者93岁女性，因发现血糖升高18年、左侧胫前皮肤破溃1月入院。创面使用上述a-prf治疗，照片分别拍摄于2020年9月1日(图4)、2020年9月14日(图5)和2020年10月13日(图6)。2020年9月1日起始a-prf治疗，创面面积为7cm2，于2020年10月20日创面愈合，愈合时间为49天。
45.病例三：
46.糖尿病足慢性创面(wagner 3级)，患者65岁中老年男性，因发现血糖升高30年、双足破溃1年入院。左足创面使用a-prf治疗，照片分别拍摄于2021年5月8日(图7)、2021年5月25日(图8)和2021年6月3日(图9)。2021年5月8日起始a-prf治疗，创面面积3cm2，于2021年6月3日创面愈合，愈合时间为26天。
47.病例四：
48.糖尿病足慢性创面(wagner2级)，患者70岁老年男性，因发现血糖升高10余年、左足破溃1月入院。左足创面使用a-prf治疗，照片分别摄于2021年9月13日(图10)、2021年9月16日(图11)和2021年9月26日(图12)。2021年9月13日起始a-prf治疗，创面面积1cm2，于2021年9月26日创面愈合，愈合时间为13天。
49.对比例1
50.将30位与应用例1病情相近的糖尿病足溃疡患者的部分血液制备得到l-prf，并制备得到的l-prf静置于干燥消毒换药弯盘内，放置在两个无菌纱布层之间挤压，即制成l-prf膜，将其均匀平铺或填塞于30位糖尿病足创面；表面覆盖浸有1％依沙吖啶的无菌纱布，外层以无菌纱布包扎，2～3d查看一次创面，每7d更换一次l-prf膜；
51.所述l-prf的制备，由以下步骤组成：
52.严格遵守无菌操作，将5ml静脉血置于无添加抗凝剂真空玻璃管，充分摇匀后，立刻(采血后1分钟内)置于配平的离心机内，室温状态下以3000转/分的转速离心10分钟，静
置后，血液样本分3层，弃上清，去除底层红细胞碎片，收集中间凝胶层，得到所述的l-prf。
53.典型案例如下：
54.病例五：
55.糖尿病足慢性创面(wagner 3级)，患者76岁老年女性，因发现血糖升高20余年、左足破溃2月入院。左足创面使用a-prf治疗，照片分别拍摄于2020年8月21日(图13)、2020年9月2日(图14)和2020年11月21日(图15)。2020年8月21日起始a-prf治疗，创面面积1cm2，观察3个月创面未愈合。
56.病例六：
57.糖尿病足慢性创面(wagner 2级)，患者72岁老年男性，因发现血糖升高13余年、右侧外踝破溃2月入院。创面使用a-prf治疗，照片分别拍摄于2020年9月28日(图16)、2020年10月15日(图17)和2020年12月23日(图18)。2020年9月28日起始a-prf治疗，创面面积3cm2，于2020年12月23日创面愈合，愈合时间为86天。
58.观察和统计应用例1和对比例1共60位患者的治疗效果，结果见表1和图19。
59.表1不同患者的治疗效果
[0060][0061]
注：表1中的创面愈合率＝愈合患者数/30
×
100％；因愈合时间不符合正态分布，采用中位愈合时间(上、下四分位数)表示，中位愈合时间＝愈合时间的中位数。
[0062]
由表1和图19可知，本发明提供的换药方法和对比例1相比，创面愈合率及中位愈合时间具有统计学差异，糖尿病足溃疡3个月创面愈合率提高33.4％，中位愈合时间缩短53.8％；另外，本发明提供的换药方法和对比例1相比换药频率明显减低，能进一步减轻患者采血时的痛苦和节省治疗费用。另外，kaplan-meier生存曲线显示了两组愈合率随时间的累积情况，log-rank检验提示，l-prf组的愈合情况显著优于对照组(x2＝9.339，p＝0.0022)。
[0063]
综上所述，利用本发明所述的改良型富血小板纤维蛋白制备的药物能够缩短糖尿病足溃疡的愈合时间、提高愈合率，具有良好的治疗效果，也具有较高的安全性。
[0064]
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。