一种有机磷残留检测凝胶软片及其制备方法和检测方法与流程

1.本发明属于模拟酶、农产品安全检测领域，尤其涉及面向收获机作业现场的一种即用型的有机磷农药残留凝胶软片及其制备方法，还涉及采用该凝胶软片检测谷物中有机磷农药残留的方法。


背景技术：

2.农药作为一种重要的生产物资，在农作物增产增收、减少病虫害中起着重要的作用，而我国是农药生产与使用大国，因滥用误用导致的农药残留问题十分严重。其中，有机磷类农药因为其高效低毒的特点，占据了当前农药用量的70％，由农产品尤其是主粮谷物中残留的有机磷农药引起的多种疾病，如帕金森、肺水肿、癌症等，已经严重威胁到人们的生命健康，而目前在收获机作业现场实现谷物农残检测的方法还较少，因此，构建高灵敏度、高准确性的农药检测平台用于收获现场十分重要。
3.传统的农残检测通常是在实验室中利用高效液相色谱、质谱、电化学工作站等大型仪器进行的，存在操作复杂，设备昂贵、不便携带、不利于现场检测等缺陷，极大的限制了这些方法在现场检测中的应用。因此，为了满足现场检测有机磷农残的需求，中国专利cn111518113 a《用于检测草甘膦的荧光探针、检测试纸及其制备方法》公开了一种利用3-氨基苯酚、2-氯甲基吡啶和三乙胺回流制备荧光探针的方法，并将荧光探针滴加到试纸表面，经过烘干得到负载该荧光探针的检测试纸，用于草甘膦的荧光检测。中国专利cn 106501250 b《一种快速检测试纸条以及采用该试纸条检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的方法》公开了一种利用偶合反应原理制作用有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测试纸条的方法，该方法在支撑背板表面分别粘贴底物垫、酶片和样品垫，利用有机磷农药对于酶的抑制作用，通过比色法对有机磷与甲氨脂酸酯类的农药进行定量检测。中国专利cn 109164100 b《一种快速检测农药的试纸条》公开了一种原位生成具有仿过氧化物酶活性的四氧化三铁纳米粒子并修饰乙酰胆碱酯酶、胆碱氧化酶的试纸条制备方法，有机磷农药能够不可逆的抑制试纸条上的乙酰胆碱酯酶，从而导致乙酰胆碱的水解量减少，显色底物显色变浅。该检测试纸可以通过比色法对有机磷农药进行检测，并且能够排除干扰物的影响。
4.上述已公开的有机磷农药残留检测方法虽然具有一定的检测效率，能够满足现场检测的需求，但仍具有以下缺点和不足：1)这些检测试纸制备复杂，需要多步操作或者多个模块才能得到最终的检测试纸；2)有些检测方法对环境要求苛刻，成本相对较高，试剂保存条件要求高。


技术实现要素：

5.针对上述现有技术存在的问题和不足，本发明旨在提供一种面向现场的自吸式即用型有机磷农药残留检测凝胶软片及其制备方法，以及采用该凝胶软片检测谷物中有机磷农药残留的方法。
6.该方法以mno2同时作为匹克林高内向乳液的稳定粒子和类氧化酶模拟物，通过热引发聚合乳液，洗去油相后得到mno2负载的具有联通多孔的水凝胶，随后通过水凝胶的自吸性，利用溶胀将乙酰胆碱酯酶固定于凝胶的孔洞中，冷冻干燥后得到即用型的有机磷农药检测凝胶软片。当有机磷农药加入后，乙酰胆碱酯酶(ache)的活性会被抑制，水解产生的硫代胆碱的量会减少，而硫代胆碱会对中性条件下mno2氧化显色底物tmb的过程产生影响，凝胶软片将变蓝。因此，本发明可以通过观察一定时间内不同浓度的有机磷农药引起的自吸式即用型有机磷农药残留检测凝胶软片的颜色变化实现对有机磷农药的快速检测，并且本发明可以利用智能手机结合rgb分析软件，通过显色照片的r值与有机磷浓度间的线性关系进行运算处理，从而得到更稳定可靠的检测数据，据此可测定谷物中有机磷农药残留。
7.本发明是一种制备简便、操作简单、成本低廉的有机磷农残检测方法，纳米酶具有与天然酶相当的活性、成本低、稳定性高；多孔水凝胶制备简便，结构稳定，具有自吸性与高传质速率，是一种理想的载体，将纳米酶与多孔水凝胶结合，利用比色法对有机磷农残进行检测，无需复杂仪器，十分适用于复杂现场谷物中有机磷农残的定量分析。
8.本发明通过以下技术方案实现的：一种谷物有机磷农药残留检测凝胶软片的制备方法，包括以下步骤：
9.步骤s1、制备mno2纳米粒子；
10.步骤s2、制备mno2纳米粒子负载的凝胶软片；
11.步骤s3、制备乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片：利用mno2纳米粒子负载的凝胶软片的溶胀性能进行乙酰胆碱酯酶的固定，向每片mno2纳米粒子负载的凝胶软片滴加乙酰胆碱酯酶溶液，充分溶胀，冻干后得到自吸式即用型乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片。
12.上述方案中，所述步骤s2具体为：
13.将mno2纳米粒子分超声散于去离子水中随后加入丙烯酰胺作为单体，n,n-亚甲基双丙烯酰胺作为交联剂，过硫酸钾作为引发剂，溶解完全后得到水相；随后液体石蜡被加入作为油相，在高速搅拌后得到稳定的高内向乳液；将高内向乳液注入制膜模具中，聚合后打孔，经乙醇、去离子水洗净后，冷冻干燥，得到mno2纳米子负载的凝胶软片。
14.进一步的，所述步骤s2中的高速搅拌速度为11000～18000rpm，时间为1～5min；所述聚合温度为40～60℃，时间为10～14h。
15.进一步的，，所述步骤s2中mno2用量为1～10mg；所述丙烯酰胺用量为0.5～2.0g，n,n-亚甲基双丙烯酰胺用量为0.1～0.5g，过硫酸钾用量为0.1～0.15g。
16.上述方案中，所述步骤s3中每片凝胶加入乙酰胆碱酯酶体积为15～25μl，浓度为0～200u/l。
17.一种谷物有机磷农药残留检测凝胶软片根据所述的谷物有机磷农药残留检测凝胶软片的制备方法制备得到的。
18.一种根据所述谷物有机磷农药残留检测凝胶软片的检测方法，包括以下步骤：
19.步骤s1)向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中滴加标准溶液反应，用于制备有机磷浓度-r值标准曲线；
20.步骤s2)再向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入硫代乙酰胆碱atch溶液反应；
21.步骤s3)最后向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入3,3’,5,5
’‑
四甲基联苯胺tmb溶液反应；
22.步骤s4)记录每片凝胶软片的颜色rgb值，并绘制以tmb为显色剂的机磷浓度-r值标准曲线，和/或提取每片显色的凝胶片图像，制备有机磷浓度标准比色卡；
23.步骤s5)将待测有机磷样品重复步骤s1)～步骤s4)，测定以tmb为底物时的乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片的r值，再与机磷浓度-r值标准曲线比对，获得待测有机磷样品中有机磷农残的浓度，和/或提取每片显色的凝胶片图像，与有机磷浓度标准比色卡对比，得到待测有机磷样品中有机磷农残的浓度。
24.上述方案中，所述步骤s1)中标准溶液体积为10～30μl,反应10～25min，标准曲线浓度取值分别为400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、40ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、4ng/ml。
25.上述方案中，所述步骤s2)中硫代乙酰胆碱atch溶液体积为5～15μl，浓度为15～25mm，反应时间为20～40min。
26.上述方案中，所述步骤s3)tmb溶液体积为10～30μl，浓度为3～8mm；反应时间为1～3min。
27.与现有技术相比，本发明的有益效果是：
28.本发明面向现场的自吸式即用型有机磷残留检测凝胶软片的制备及其用于ops快速检测的方法，利用乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片比色检测有机磷农残含量，所需试剂种类少，操作步骤简便条件温和，实现了收获机作业现场谷物ops的现场快速检测，成本低廉，操作简便；本发明乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片对ops的检测限低至0.63ng/ml，可检测范围宽至4～400ng/ml；利用乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片检测谷物中有机磷农残含量，对实际样品检测结果准确，响应灵敏，稳定性好，可实现对作物籽粒中有机磷农残的选择性检测。
附图说明
29.图1为tmb和mno2体系在不同环境氛围反应2min时的紫外-可见吸收光谱；
30.图2为乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片对倍硫磷响应的rgb图；
31.图3a为mno2加入量优化示意图，图3b为ache使用量优化示意图；
32.图4为用乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片检测倍硫磷的检测效果图，其中图4a为凝胶软片对倍硫磷浓度响应图；图4b为倍硫磷-r值拟合直线；
33.图5为乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片对倍硫磷检测的选择性图；
34.图6为乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片对倍硫磷检测的稳定性图。
具体实施方式
35.下面结合附图详细描述本发明的实施例，下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
36.本发明所述有机磷残留检测凝胶软片的制备方法，包括以下步骤：
37.步骤s1、制备mno2纳米粒子；
38.步骤s2、制备mno2纳米粒子负载的凝胶软片；
39.步骤s3、制备乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片：利用mno2纳米粒子负载的
凝胶软片的溶胀性能进行乙酰胆碱酯酶的固定，向每片mno2纳米粒子负载的凝胶软片滴加乙酰胆碱酯酶溶液，充分溶胀，冻干后得到自吸式即用型乙酰胆碱酯酶mno2纳米粒子负载的凝胶软片。
40.所述步骤s1制备mno2纳米粒子具体为：
41.于500ml烧杯中将0.2～0.7g kmno4溶解于250ml h2o，优选0.5g，超声15min，随后在搅拌下，逐滴加入5ml油酸，在20～45℃下反应8～12h，优选38℃下反应10h。离心分离，用去离子水、乙醇分别淋洗干净后得到mno2前驱体，于60℃下干燥，随后将干燥完全的前驱体于空气氛围下，180～250℃热解0.5～3h得到mno2纳米粒子，优选200℃热解2h。
42.所述步骤s2制备mno2纳米粒子负载的凝胶软片具体为：
43.将1～10mg步骤s1中得到的mno2纳米粒子分超声散于4ml去离子水中，优选4mg，随后加入0.5～2.0g丙烯酰胺(am)作为单体，0.1～0.5g n,n-亚甲基双丙烯酰胺(bis)作为交联剂，0.1～0.15g过硫酸钾(aps)作为引发剂，优选am1.42 g，bis 0.35g,aps 0.12g，溶解完全后得到水相。16ml液体石蜡被加入作为油相，在11000～18000rpm高速搅拌1～5min后得到稳定的高内向乳液，优选14000rpm，2min。
44.取所述高内向乳液注入制膜模具中，在烘箱中40～60℃聚合10～14h后，优选50℃聚合12h，用8mm直径的打孔器打孔，经乙醇、去离子水洗净后，冷冻干燥，得到mno2纳米子负载的多孔水凝胶。
45.所述步骤s3制备乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片具体为：
46.利用mno2纳米粒子负载的凝胶软片固有的溶胀性能进行ache的固定，每片mno2纳米粒子负载的凝胶软片滴加15～25μl、0～200u/l的ache溶液，优选20μl、80u/l，冻干后得到自吸式即用型乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片。
47.一种根据所述有机磷残留检测凝胶软片的检测方法，具体包括以下步骤：
48.步骤s1)分别向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中滴加10～30μl不同浓度的对硫磷溶液，反应10～25min，优选20μl，15min；滴加的对硫磷浓度为400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、40ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、4ng/ml，制备有机磷浓度-r值标准曲线。
49.步骤s2)再向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入5～15μl 15～25mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应20～40min，优选10μl 20mm atch，反应30min。
50.步骤s3)最后向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入10～30μl 3～8mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应1～3min，优选20μl 5mm tmb，反应2min。
51.步骤s4)利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色rgb值，并绘制以tmb为显色剂的有机磷浓度-r值标准工作曲线；用智能手机对每片显色的凝胶片进行拍照，制备有机磷浓度标准比色卡用于肉眼观察；
52.步骤s5)将待测有机磷样品重复步骤s1)～步骤s4)，用智能手机分别测定以tmb为底物时的乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片的r值，通过计算再与标准工作曲线比对，即可获得样品中有机磷农残的浓度。
53.本发明较优公开例中，所述pbs缓冲液ph为7.4，浓度0.1m。
54.本发明较优公开例中，所述待测有机磷样品的可检测浓度范围为4～400ng/ml，检测限低至0.63ng/ml。
55.在本说明书中，术语“类氧化酶”是指具有氧化酶催化活性的材料。具体地，本发明的类氧化酶以氧气作为电子受体，通过催化氧化相应底物生成有色物质，用于比色检测。
56.在本说明书中，术语“tmb”是化合物“3,3’,5,5
’‑
四甲基联苯胺”的缩写名称，二者可互换使用。
57.在本说明书中，术语“tmbox”是化合物“3,3’,5,5
’‑
四甲基联苯胺”氧化产物的缩写名称，二者可互换使用。
58.在本说明书中，术语“ache”是指乙酰胆碱酯酶，二者可互换使用。
59.在本说明书中，术语“atch”是指乙酰硫代胆碱，二者可互换使用。
60.本发明所用反应物、试剂均为市售。
61.实施例1制备mno2纳米粒子
62.步骤1.于500ml烧杯中将0.5g kmno4溶解于250ml h2o，超声15min，随后在搅拌下，逐滴加入5ml油酸，在38℃下反应10h。
63.步骤2.将步骤1中产物离心分离，用去离子水、乙醇分别淋洗干净后得到mno2前驱体，于60℃下干燥。
64.步骤3.待步骤2前驱体完全干燥后，于空气氛围下，200℃热解2h得到mno2纳米粒子。mno2纳米粒子作为类氧化物酶催化tmb反应的应用试验，步骤如下：
65.步骤1)向两个试管中分别加入2.8ml 0.1m的磷酸盐缓冲液(ph为7.4)，其中一管持续通入氮气30min，随后依次向其中加入0.1ml 5mm的tmb和0.1ml 1mg/ml的mno2分散溶液，然后将上述溶液混合均匀；
66.步骤2)将上述体系在室温下反应3min，液体颜色随时间由无色变化为蓝色；
67.步骤3)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外-可见吸收光谱。图1记录了制备的mno2在不同体系中催化氧化tmb反应的uv-vis图。据图1可以发现，当tmb和mno2共同存在时，才会有颜色反应发生，并且在缺乏氧气的情况下，反应较弱；当tmb和mno2只存在其中之一时，不会发生颜色反应。此反应是由tmb在mno2的催化下发生氧化还原导致的，证明制备的mno2具有良好的氧化物酶活性。
68.实施例2凝胶软片制备：
69.步骤1.将4mg mno2纳米粒子分超声散于4ml去离子水中，随后加入1.42g丙烯酰胺(am)作为单体，0.35g n,n-亚甲基双丙烯酰胺(bis)作为交联剂，0.12g过硫酸钾(aps)作为引发剂，溶解完全后得到水相。随后，16ml液体石蜡被加入作为油相，在14000rpm高速搅拌2min后得到稳定的高内向乳液。
70.步骤2.取步骤1中高内向乳液注入制膜模具中，在烘箱中50℃聚合12h后，优用8mm直径的打孔器打孔，经乙醇、去离子水洗净后，冷冻干燥，得到mno2纳米子负载的多孔水凝胶。
71.步骤3.利用mno2纳米粒子负载的凝胶软片固有的溶胀性能进行乙酰胆碱酯酶(ache)的固定，每片mno2纳米粒子负载的凝胶软片滴加20μl 80u/lache溶液，冻干后得到自吸式即用型乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片。
72.乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片作为平台检测倍硫磷的可行性试验，步骤如下：
73.步骤1)取两片最终的乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片，分别滴入20μl含
有倍硫磷的40ng/ml和0ng/ml的混合溶液(0.1m pbs含有体积分数5％的甲醇，ph7.4)，室温反应15min；
74.步骤2)向步骤1)中的凝胶软片分别滴入10μl 20mm的atch溶液，并在室温下反应30min；
75.步骤3)最后向凝胶片中滴入20μl 5mm tmb溶液反应2min后用智能手机集合imagej取色软件对凝胶软片进行颜色分析。结果如图2所示，只有当倍硫磷存在时，凝胶软片才会呈现蓝色，并且r值下降明显，因此制备的乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片能够对有机磷农药灵敏响应，并用于农残的检测。
76.图3a显示了mno2使用量从1～10mg变化对凝胶软片表观颜色与催化性能的影响，为了获得最佳的检测效果mno2优化使用量为4mg；图3b显示的了ache溶液浓度从0～200u/l对凝胶软片催化性能的影响，为了获得最佳的检测效果ache优化使用量为80u/l。
77.实施例3利用乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片比色检测倍硫磷
78.步骤1)分别向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中滴加20μl不同浓度的对硫磷溶液，室温反应15min，所述滴加倍硫磷浓度为400ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、40ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、4ng/ml；
79.步骤2)再向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入10μl 20mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应30min；
80.步骤3)最后向乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片加入20μl 5mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，混匀体系后反应2min；
81.步骤4)利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色rgb值，并绘制以tmb为显色剂的有机磷浓度-r值标准工作曲线；用智能手机对每片显色的凝胶片进行拍照，制备有机磷浓度标准比色卡用于肉眼观察；
82.利用本发明的凝胶软片结合智能手机比色方对于倍硫磷含量检测的结果如图4所示。其中，图4a说明随着倍硫磷含量的增加，凝胶软片的颜色逐渐加深。图4b是r值-倍硫磷浓度拟合直线，说明在该方法对于倍硫磷含量的可检测范围为4～400ng/ml，有优良的检测效果。
83.实施例4利用乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片检测倍硫磷的选择性
84.步骤1)分别取20μl含有k

、ca
2
、mg
2
、cd
2
、br-、cl-、co
32-、so
42-、葡萄糖、葡萄糖氧化酶(gox)、牛血清白蛋白(bsa)、谷氨酸、马拉硫磷和西维因的溶液滴加到乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中，室温反应15min，随后加入10μl 20mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应30min；最后加入20μl 5mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，混匀体系后反应2min；利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色r值；
85.步骤2)分别取20μl倍硫磷混合k

、ca
2
、mg
2
、cd
2
、br-、cl-、co
32-、so
42-、葡萄糖、葡萄糖氧化酶(gox)、牛血清白蛋白(bsa)、谷氨酸、马拉硫磷和西维因的溶液滴加到乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中，室温反应15min，随后加入10μl 20mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应30min；最后加入20μl 5mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，混匀体系后反应2min；利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色r值；
86.结果如图4所示。图5是用乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片检测倍硫磷的选择性的柱状图，分别为单一干扰物模式和目标物-干扰物混合模式，柱状图从左到右依次为空白、k

、ca
2
、mg
2
、cd
2
、br-、cl-、co
32-、so
42-、葡萄糖、葡萄糖氧化酶(gox)、牛血清白蛋白(bsa)、谷氨酸、马拉硫磷和西维因，从图中可以看出只有倍硫磷、马拉硫磷、西维因可以显著促进tmb的显色反应，而其他干扰物共存时不会对凝胶软片的检测产生影响，说明该传感器可以高选择性、稳定地完成农残的检测。
87.实施例5乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片检测倍硫磷的稳定性
88.取60片乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片至于室温下存储，分别于第0、2、4、6、8、10、20、30天取凝胶软片，分别滴加20μl空白溶液和20ng/ml倍硫磷溶液，室温反应15min，随后加入10μl、20mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应30min；最后加入20μl、5mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，混匀体系后反应2min；利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色r值结果如图6所示，在30天室温存储下，乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片对倍硫磷的检测效果没有明显变化，表明乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片具有极佳的室温稳定性。
89.实施例6乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片检测小麦和水稻中的倍硫磷
90.步骤1)将小麦和水稻样品分别磨碎，用甲醇萃取并冻干；
91.步骤2)用20μl含有不同浓度倍硫磷的缓冲液复溶小麦和水稻冻干萃取液；
92.步骤3)取步骤2)中复溶溶液滴加到乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片中，室温反应15min，随后加入10μl、20mm硫代乙酰胆碱atch溶液(溶解于0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，反应30min；最后加入20μl、5mm tmb(0.1m pbs缓冲液,ph 7.4)，混匀体系后反应2min；
93.步骤4)利用智能手机结合iamgej取色软件，记录每片凝胶软片的颜色r值；入r值-倍硫磷浓度拟合直线换算为倍硫磷含量；
94.其测定结果如下表1所示：
95.表1本方法及国标法的结果对比
[0096][0097]
由上表可知，乙酰胆碱酯酶mno2纳米子负载的凝胶软片对实际样品中倍硫磷含量的变化响应灵敏，与国标法实际测定值相比，结果相近。
[0098]
上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。