2,3,5-三取代吡唑并[1,5-A]嘧啶化合物的制作方法

2,3,5-三取代吡唑并[1,5-a]嘧啶化合物
[0001]
相关申请的交叉引用
[0002]
本技术根据35u.s.c.
§
119(e)要求2019年6月4日提交的美国临时申请第62/857,148号的优先权，所述临时申请出于所有目的特此通过引用整体并入。
[0003]
关于在联邦资助的研究和开发下进行的发明的权利的声明
[0004]
不适用
[0005]
对以光盘形式提交的“序列表”、表格或计算机程序列表附录的引用
[0006]
不适用
[0007]
发明背景
[0008]
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase；pi3k)是使磷酸肌醇的肌醇环的3-oh磷酸化的脂质激酶家族。这些酶在包括细胞生长、增殖、分化、运动和细胞内运输的重要细胞过程中起关键作用。磷脂肌醇3-激酶(pi3k)途径的失调已与许多病变相关联，所述病变例如癌症、糖尿病、血栓形成、类风湿性关节炎和哮喘。迄今为止，八个已知家族成员基于其调节蛋白质和信号传导途径而细分成三类，即i类、ii类和iii类，其中i类进一步细分成ia(pi3kα、pi3kβ和pi3kδ)和ib(pi3kγ)[j.med.chem.2019,62,10,4815-4850]。i类pi3k在免疫调节中起重要作用，但四种同功型在功能和组织分布方面不同。pi3kα和pi3kβ同功型的表达是随处可见的，而pi3kδ和pi3kγ同功型的表达主要是在白细胞中[j.med.chem.2012,55,20,8559-8581]。pi3kα对血管生成和胰岛素信号传导是至关重要的，而对pi3kδ和pi3kγ的抑制已表明使得针对癌症的免疫反应加强。
[0009]
pi3kγ的表达谱现已扩展至包括例如心肌细胞、纤维母细胞和平滑肌细胞的结构性群体。心脏pi3kγ已显示调节肌质网中的磷酸二酯酶，这是针对儿茶酚胺诱导的室性心律失常的潜在保护机制。纤维母细胞和基底细胞中增加的pi3kγ表达已与特发性肺纤维化相关联。与在造血细胞中的pi3kγ活性不同，在非造血细胞中的pi3kγ活性似乎在肥胖症和胰岛素抵抗的形成方面起重要作用，如在基因敲除小鼠中所观察到的。
[0010]
鉴于pi3kγ与癌症、炎性和免疫调节性疾患之间的显著相关性，本领域中需要pi3kγ抑制剂。本发明解决这种需要并且还提供相关优势。


技术实现要素：

[0011]
本发明涉及抑制磷脂肌醇3-激酶(γ同功型)的活性的化合物。所述化合物由式(i)表示：
[0012][0013]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中x、r
1a
、r
1b
、r3、r
4a
和r
4b
如下文所定义。
[0014]
在一个相关方面，本文提供了用于治疗或预防受试者(例如，人类)的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种本文所描述的pi3kγ抑制剂。在一些实施方案中，本文提供了通过向受试者施用可有效逆转、减缓或阻止pi3kγ介导的调节异常的进展的量的本文所描述的化合物中的至少一者来治疗或预防所述受试者的癌症的方法。
[0015]
可使用本文所描述的化合物和组合物治疗的癌症的实例包括(但不限于)：前列腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、子宫内膜癌、脑癌、肝癌、膀胱癌、卵巢癌、睾丸癌、头部癌、颈部癌、皮肤癌(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮内膜癌、白细胞癌(包括淋巴瘤和白血病)、食道癌、乳腺癌、肌肉癌、结缔组织癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、肾上腺癌、甲状腺癌、肾癌或骨癌；神经胶母细胞瘤、间皮瘤、肾细胞癌、胃癌瘤、肉瘤、绒毛膜癌、皮肤基底细胞癌和睾丸精原细胞瘤。在本发明的一些实施方案中，癌症是黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、白血病、脑肿瘤、淋巴瘤、肉瘤、卵巢癌、头颈癌、宫颈癌或卡波西肉瘤(kaposi's sarcoma)。下文进一步论述作为用本发明的化合物和组合物治疗的候选者的癌症。
[0016]
在某些实施方案中，本文提供了用于治疗或预防受试者(例如，人类)的感染性病症(例如，病毒感染)的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种pi3kγ抑制剂(例如，本发明的新颖抑制剂)。在一些实施方案中，感染性病症是病毒感染(例如，慢性病毒感染)、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。在某些实施方案中，病毒感染是人类免疫缺乏病毒或巨细胞病毒。
[0017]
在其他实施方案中，本文提供了用于治疗或预防受试者(例如，人类)的免疫相关疾病、病症或疾患的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种本文所描述的pi3kγ抑制剂。下文描述免疫相关疾病、病症和疾患的实例。
[0018]
在其他实施方案中，本文提供了用于治疗或预防受试者(例如，人类)的炎症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种本文所描述的pi3kγ抑制剂。下文描述炎性疾病、病症和疾患的实例。
[0019]
可完全或部分通过调节pi3kγ活性而治疗或预防的其他疾病、病症和疾患是如本文所提供的pi3kγ抑制剂化合物的候选适应症。
[0020]
本文还提供了所描述pi3kγ抑制剂与一种或多种其他药剂的组合的用途。所述一种或多种其他药剂可具有一定pi3kγ调节活性；或者，其可经由不同作用机制起作用。在一些实施方案中，此类药剂包括放射(例如，局部放射疗法或全身放射疗法)和/或非药理学性质的其他治疗模态。当利用组合疗法时，本文所描述的一种或多种化合物和一种或多种其他药剂可呈单一组合物或多种组合物的形式，并且治疗模态可同时、依序或经由一些其他方案施用。举例来说，本发明涵盖其中放射阶段之后接着是化学治疗阶段的治疗方案。组合疗法可具有加和或协同效应。下文描述组合疗法的其他益处。
[0021]
在特定实施方案中，本文提供了其中本文所描述的pi3kγ抑制剂与免疫检查点抑制剂组合使用的方法。引起抗原特异性t细胞反应放大的免疫检查点的阻断已展示为人类癌症治疗法中的有前景的方法。作为阻断候选者的免疫检查点(配体和受体)的实例(其中一些在各种类型的肿瘤细胞中选择性上调)包括pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)；pd-l1(pd-1配体)；btla(b和t淋巴细胞衰减因子)；ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4)；tim-3(t细
胞膜蛋白3)；lag-3(淋巴细胞活化基因3)；tigit(具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体)；和杀手抑制受体。本文其他地方详细地论述免疫检查点抑制剂和与其的组合疗法。
[0022]
在其他实施方案中，本文提供了治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种pi3kγ抑制剂和至少一种化学治疗剂，此类药剂包括(但不限于)烷基化剂(例如氮芥，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺、异环磷酰胺、二氯甲二乙胺、美法仑(melphalan)和尿嘧啶氮芥；氮丙啶，例如噻替派(thiotepa)；甲磺酸酯，例如白消安(busulfan)；核苷类似物(例如，吉西他滨(gemcitabine))；亚硝基脲，例如卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)和链脲菌素；拓扑异构酶1抑制剂(例如，伊立替康(irinotecan))；铂络合物，例如顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)和奥沙利铂(oxaliplatin)；生物还原性烷基化剂，例如丝裂霉素(mitomycin)、丙卡巴肼(procarbazine)、达卡巴嗪(dacarbazine)和六甲蜜胺(altretamine))；基于蒽环霉素(anthracycline)的疗法(例如，多柔比星(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、表阿霉素(epirubicin)和埃达霉素(idarubicin))；dna链断裂剂(例如，博来霉素(bleomycin))；拓扑异构酶ii抑制剂(例如，安吖啶(amsacrine)、放线菌素(dactinomycin)、道诺霉素、埃达霉素、米托蒽醌(mitoxantrone)、多柔比星、依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide))；dna小沟结合剂(例如，普卡霉素(plicamydin))；抗代谢物(例如叶酸拮抗剂，例如氨甲蝶呤(methotrexate)和曲美沙特(trimetrexate)；嘧啶拮抗剂，例如氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟脱氧尿苷(fluorodeoxyuridine)、cb3717、阿扎胞苷(azacitidine)、阿糖胞苷(cytarabine)和氟尿苷(floxuridine)；嘌呤拮抗剂，例如巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、氟达拉滨(fludarabine)、喷司他丁(pentostatin)；天冬酰胺酸酶；和核糖核苷酸还原酶抑制剂，例如羟基脲)；微管蛋白相互作用剂(例如长春新碱(vincristine)、雌氮芥(estramustine)、长春碱(vinblastine)、多烯紫杉醇(docetaxol)、埃博霉素(epothilone)衍生物和太平洋紫杉醇(paclitaxel))；激素剂(例如雌激素(estrogen)；缀合的雌激素；乙炔基雌二醇；己烯雌酚；氯烯雌醚(chlortrianisen)；双烯雌酚(idenestrol)；孕激素，例如己酸羟孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮(megestrol)；和雄激素，例如睾固酮、丙酸睾固酮、氟羟甲基睾酮和甲基睾酮)；肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)、甲泼尼龙(methylprednisolone)和泼尼松龙(prednisolone))；黄体生成激素释放剂或促性腺激素释放激素拮抗剂(例如乙酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)和乙酸戈舍瑞林(goserelin acetate))；和抗激素抗原(例如他莫昔芬(tamoxifen)；抗雄激素剂，例如氟他胺(flutamide)；和抗肾上腺剂，例如米托坦(mitotane)和氨鲁米特(aminoglutethimide))。本发明还涵盖磷脂肌醇3-激酶(γ同功型)(pi3kγ)抑制剂与本领域中已知的其他药剂(例如，三氧化二砷)和将来开发的其他化学治疗剂的组合的用途。
[0023]
在一些实施方案中，本文提供了治疗癌症的方法，其中治疗有效量的本文所描述的pi3kγ抑制剂是与至少一种化学治疗剂组合施用，导致癌症存活率大于单独施用任一者时所观测到的癌症存活率。在涉及癌症治疗方法的其他实施方案中，组合施用治疗有效量的本文所描述的pi3kγ抑制剂和至少一种化学治疗剂引起肿瘤尺寸减小或肿瘤生长减缓，其程度大于单独施用一种药剂时观测到的肿瘤尺寸减小或肿瘤生长减缓。
[0024]
在其他实施方案中，本发明涵盖用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法
包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种本文所描述的pi3kγ抑制剂和至少一种信号转导抑制剂(sti)。在一个特定实施方案中，至少一种sti选自由bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(egf)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法呢基转移酶抑制剂(fti)组成的组。本文其他地方阐述其他候选sti剂。
[0025]
本发明还涵盖强化受试者中肿瘤细胞的排斥反应的方法，所述方法包括施用pi3kγ抑制剂连同至少一种化学治疗剂和/或放射疗法，其中肿瘤细胞的所得排斥反应大于单独施用pi3kγ抑制剂、化学治疗剂或放射疗法所获得的排斥反应。
[0026]
在其他实施方案中，本发明提供用于治疗受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种pi3kγ抑制剂和至少一种除pi3kγ抑制剂以外的免疫调节剂。在特定实施方案中，所述至少一种免疫调节剂选自由以下组成的组：cd40l、b7、b7rp1、抗cd40、抗cd38、抗icos、4-ibb配体、树突状细胞癌症疫苗、il2、il12、elc/ccl19、slc/ccl21、mcp-1、il-4、il-18、tnf、il-15、mdc、ifn-a/ifn-13、m-csf、il-3、gm-csf、il-13、抗il-10和吲哚胺2,3-双加氧酶1(ido1)。本文其他地方阐述其他候选免疫调节剂。
[0027]
本发明涵盖包含用于治疗或预防受试者(例如，人类)的感染性病症(例如，病毒感染)的方法的实施方案，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种本文所描述的pi3kγ抑制剂和治疗有效量的一种或多种抗感染剂。
[0028]
在本发明的一些实施方案中，额外治疗剂是细胞因子，包括例如粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)或flt3-配体。本发明还涵盖用于治疗或预防病毒感染(例如，慢性病毒感染)的方法，所述病毒感染包括(但不限于)丙型肝炎病毒(hcv)、人类乳头状瘤病毒(hpv)、巨细胞病毒(cmv)、爱泼斯坦-巴尔病毒(epstein-barr virus；ebv)、水痘带状疱疹病毒、科沙奇病毒(coxsackie virus)和人类免疫缺乏病毒(hiv)。下文进一步论述本文中所描述的化合物用以(单独或呈组合疗法的组分形式)治疗感染的用途。
[0029]
在其他实施方案中，治疗感染性病症是经由共同施用疫苗与治疗有效量的本发明的pi3kγ抑制剂的组合来实现。在一些实施方案中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗hiv疫苗。在其他实施方案中，疫苗有效针对结核病或疟疾。在其他实施方案中，疫苗是肿瘤疫苗(例如，有效针对黑色素瘤的疫苗)；肿瘤疫苗可包含遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系，包括已经转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(gm-c sf)的遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系。在特定实施方案中，疫苗包括一种或多种免疫原性肽和/或树突状细胞。
[0030]
在涉及通过施用pi3kγ抑制剂和至少一种额外治疗剂来治疗感染的某些实施方案中，在施用pi3kγ抑制剂和额外治疗剂两者之后观测到的感染症状与在单独施用任一者之后观测到的同一感染症状相比得到改善。在一些实施方案中，所观测到的感染症状可为病毒负荷减少、cd4

t细胞计数增加、机会性感染减少、存活时间增加、慢性感染根除或其组合。
附图说明
[0031]
不适用
具体实施方式
[0032]
在进一步描述本发明之前，应理解本发明不限于本文所阐述的特定实施方案，并且还应理解本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，而不旨在具有限制性。
[0033]
在提供值范围时，应理解本发明涵盖所述范围的上限与下限之间的每个中间值(除非上下文另外明确规定，否则精确到下限单位的十分之一)和该所陈述范围内的任何其他所陈述或中间值。这些较小范围的上限和下限可独立地包括于较小范围内并且也涵盖于本发明内，在所陈述范围内受到任何特定排他性限制。当所陈述范围包括限值中的一者或两者时，排除那些所包括的限值中的任一者或两者的范围也包括于本发明中。除非另外定义，否则本文所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的一般技术人员通常所理解相同的含义。
[0034]
除非上下文另外明确规定，否则如本文所使用，单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数个指示物。应进一步注意，权利要求可经制定以排除任何任选的要素。因此，这种陈述旨在与对所要求保护要素的叙述结合充当使用例如“仅仅(solely)”、“仅(only)”等术语的此类排他性术语或使用“否定性”限制的前提基础。
[0035]
本文所论述的出版物仅提供在本技术的申请日期之前的公开内容。另外，所提供的公开日期可能不同于可能需要独立确认的实际公开日期。
[0036]
综述
[0037]
本文提供了例如用于抑制磷脂肌醇3-激酶(γ同功型)(pi3kγ)的化合物和组合物以及包含所述化合物和组合物的药物组合物。本文还提供了例如治疗或预防由磷脂肌醇3-激酶(γ同功型)(pi3kγ)的抑制介导的疾病、病症或疾患或其症状的方法。
[0038]
定义
[0039]
除非另外指示，否则以下术语旨在具有下文阐述的含义。其他术语在整个说明书中其他地方加以定义。
[0040]
除非另外陈述，否则术语“烷基”本身或作为另一取代基的部分是指具有指定碳原子数目的直链或支链烃基(即，c
1-8
是指一至八个碳)。烷基可包括任何数目个碳，例如c
1-2
、c
1-3
、c
1-4
、c
1-5
、c
1-6
、c
1-7
、c
1-8
、c
1-9
、c
1-10
、c
2-3
、c
2-4
、c
2-5
、c
2-6
、c
3-4
、c
3-5
、c
3-6
、c
4-5
、c
4-6
和c
5-6
。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。
[0041]
术语“亚烷基”是指具有指定碳原子数目并且连接至少两个其他基团的直链或支链饱和脂族基，即二价烃基。当两个部分连接至亚烷基时，所述两个部分可连接至亚烷基的同一原子或不同原子。例如，直链亚烷基可为二价基团-(ch2)
n-，其中n是1、2、3、4、5或6。代表性亚烷基包括(但不限于)亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲丁基、亚戊基和亚己基。在本技术中常被称为x1或x2基团的亚烷基可被取代或未被取代。在包含x1或x2的基团任选地被取代时，应了解，任选的取代基可在所述基团的亚烷基部分上。类似地，除非另外说明，否则如本文所使用的术语亚烷基涵盖取代。
[0042]
术语“环烷基”是指具有指定数目个环原子(例如，c
3-6
环烷基)并且是完全饱和或环顶点之间具有不超过一个双键的烃环。“环烷基”还意在指双环和多环烃环，例如双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷等。在一些实施方案中，本公开的环烷基化合物是单环c
3-6
环烷基部分。
[0043]
术语“杂环烷基”是指具有指定数目个环顶点(或成员)并且具有代替一至五个碳顶点的一至五个选自n、o和s的杂原子的环烷基环，并且其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂环烷基可为单环、双环或多环环系统，并且可具有一个或两个连接环顶点的双键。杂环烷基的非限制性实例包括吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧杂环戊烷、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二噁烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-s-氧化物、硫代吗啉-s,s-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、硫代吡喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可经由环碳或杂原子连接至分子的其余部分。
[0044]
术语“卤烷基”是指被一至五个卤素原子(例如氟或氯)取代的具有指定数目个碳原子的烷基，包括被不同卤素取代的那些烷基，例如-ch2cl、-cf3、-chf2、-ch2cf3、-cf2cf3、-cf(ch3)2。
[0045]
术语“烷氧基”是指-or基团，其中r是如上文所定义的具有指定数目个碳原子的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基或2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基。
[0046]
术语“烷氧基烷基”是指具有指定数目个碳原子并且被一个如上文所定义的烷氧基取代的直链或支链单价烃基，例如2-甲氧基乙基、1-甲氧基丙基、2-甲氧基丙基或3-甲氧基丙基、2-乙氧基乙基等。
[0047]
术语“卤烷氧基”是指-or基团，其中r是如上文所定义的卤烷基，例如-ocf3、-ochf2等。
[0048]
术语“卤烷氧基烷基”是指被卤烷氧基取代的烷基，各自如上文所定义，例如三氟甲氧基乙基等。
[0049]
术语“羟烷基”是指被一至三个羟基取代的具有指定数目个碳原子的直链或支链单价烃基，条件是如果存在两个羟基，则其不都在同一碳原子上。代表性实例包括(但不限于)羟甲基、2-羟基-乙基、2-羟丙基、3-羟丙基、1-(羟甲基)-2-甲基丙基、2-羟丁基、3-羟丁基、4-羟丁基、2,3-二羟丙基、1-(羟甲基)-2-羟乙基、2,3-二羟丁基、3,4-二羟丁基和2-(羟甲基)-3-羟丙基，优选2-羟乙基、2,3-二羟丙基和1-(羟甲基)-2-羟乙基。
[0050]
术语“羟基烷氧基”是指-or基团，其中r是如上文所定义的羟烷基，例如羟乙基氧基、羟丙基氧基等。
[0051]
如本文所使用，在本文描绘的任何化学结构中与单键、双键或三键相交的波浪线表示单键、双键或三键与分子的其余部分的连接点。另外，延伸至环(例如苯环)的中心的键意在指示在可用环顶点中的任一者处的连接。本领域技术人员应理解展示为连接至环的多个取代基将占据提供稳定化合物并且另外空间相容的环顶点。对于二价组分，表示意在包括任一定向(正向或反向)。例如，基团
“‑
c(o)nh
‑”
意在包括在任一定向上的键：-c(o)nh-或-nhc(o)-，并且类似地
“‑
o-ch2ch2‑”
意在包括-o-ch2ch
2-和-ch2ch
2-o-两者。
[0052]
除非另外陈述，否则术语“卤基”或“卤素”本身或作为另一取代基的部分是指氟、氯、溴或碘原子。此外，例如“卤烷基”的术语意在包括单卤烷基和多卤烷基。例如，术语“c
1-4
卤烷基”意在包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
[0053]
除非另外陈述，否则术语“芳基”是指多元不饱和、典型地为芳族的烃基，其可为单环或稠合在一起或共价键联的多个环(高达三个环)。芳基的非限制性实例包括苯基、萘基和联苯。所述术语还意在包括稠合的环烷基苯基和杂环烷基苯基环系统，例如茚满、四氢
萘、色满和异色满环。作为取代基，稠环系统与分子的其余部分的连接点可经由芳族部分上的碳原子、环烷基部分上的碳原子或杂环烷基部分上的原子。
[0054]
术语“杂芳基”是指含有一至五个选自n、o和s的杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选地被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可经由杂原子连接至分子的其余部分。杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲哚嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。杂芳基环的取代基可选自下文描述的可接受取代基的组。
[0055]
在一些实施方案中，上述术语(例如，“烷基”、“芳基”和“杂芳基”)将任选地被取代。下文提供各类基团的所选取代基。
[0056]
烷基(包括常被称为亚烷基、烯基和炔基的那些基团)的任选的取代基可为选自以下的各种基团：卤素、-or'、-nr'r"、-sr'、-sir'r"r"'、-oc(o)r'、-c(o)r'、-co2r'、-conr'r"、-oc(o)nr'r"、-nr"c(o)r'、-nr'-c(o)nr"r"'、-nr"c(o)2r'、-nh-c(nh2)＝nh、-nr'c(nh2)＝nh、-nh-c(nh2)＝nr'、-s(o)r'、-s(o)2r'、-s(o)2nr'r"、-nr's(o)2r"、-cn(氰基)、-no2、芳基、芳基氧基、氧代基、环烷基和杂环烷基，其数目在零至(2m' 1)的范围内，其中m'是此类基团中碳原子的总数。r'、r"和r"'各自独立地指氢、未被取代的c
1-8
烷基、未被取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、c
1-8
烷氧基或c
1-8
硫代烷氧基，或未被取代的芳基-c
1-4
烷基。当r'和r”连接至同一氮原子时，其可与氮原子组合以形成3元、4元、5元、6元或7元环。例如，-nr'r"意在包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
[0057]
环烷基和杂环烷基的任选的取代基可为选自以下的各种基团：任选地被c(o)or'取代的烷基、卤素、-or'、-nr'r"、-sr'、-sir'r"r"'、-oc(o)r'、-c(o)r'、-co2r'、-conr'r"、-oc(o)nr'r"、-nr"c(o)r'、-nr'-c(o)nr"r"'、-nr"c(o)2r'、-nh-c(nh2)＝nh、-nr'c(nh2)＝nh、-nh-c(nh2)＝nr'、-s(o)r'、-s(o)2r'、-s(o)2nr'r"、-nr's(o)2r"、-cn(氰基)、-no2、芳基、芳基氧基和氧代基。r'、r"和r"'各自独立地指氢、未被取代的c
1-8
烷基、未被取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、c
1-8
烷氧基或c
1-8
硫代烷氧基，或未被取代的芳基-c
1-4
烷基。
[0058]
类似地，芳基和杂芳基的任选的取代基不同并且一般选自：-卤素、-or'、-oc(o)r'、-nr'r"、-sr'、-r'、-cn、-no2、-co2r'、-conr'r"、-c(o)r'、-oc(o)nr'r"、-nr"c(o)r'、-nr"c(o)2r'、-nr'-c(o)nr"r"'、-nh-c(nh2)＝nh、-nr'c(nh2)＝nh、-nh-c(nh2)＝nr'、-s(o)r'、-s(o)2r'、-s(o)2nr'r"、-nr's(o)2r"、-n3、全氟(c
1-c4)烷氧基和全氟(c
1-c4)烷基，其数目在零至芳族环系统上开放价数的总数范围内；并且其中r
′
、r
″
和r
″′
独立地选自氢、c
1-8
烷基、c
1-8
卤烷基、c
3-6
环烷基、c
2-8
烯基和c
2-8
炔基。其他适合的取代基包括通过1-6个碳原子的亚烷基系链连接至环原子的上述芳基取代基中的每一者。
[0059]
芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两者可任选地被式-t-c(o)-(ch2)
q-u-的取代基代替，其中t和u独立地是-nh-、-o-、-ch
2-或单键，并且q是0至2的整数。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两者可任选地被式-a-(crfrg)
r-b-的取代基代
替，其中a和b独立地是-ch
2-、-o-、-nh-、-s-、-s(o)-、-s(o)
2-、-s(o)2nr'-或单键，r是1至3的整数，并且rf和rg各自独立地是h或卤素。如此形成的新环的单键中的一者可任选地被双键代替。或者，芳基或杂芳基环的相邻原子上的取代基中的两者可任选地被式-(ch2)
s-x-(ch2)
t-的取代基代替，其中s和t独立地是0至3的整数，并且x是-o-、-nr'-、-s-、-s(o)-、-s(o)
2-或-s(o)2nr'-。-nr'-和-s(o)2nr'-中的取代基r'选自氢或未被取代的c
1-6
烷基。
[0060]
如本文所使用，术语“杂原子”意在包括氧(o)、氮(n)、硫(s)和硅(si)。
[0061]
术语“药学上可接受的盐”意在包括视在本文所描述的化合物上所存在的特定取代基而定，用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明化合物含有相对酸性官能团时，可通过使中性形式的此类化合物与足够量的所需碱在无溶剂下或在适合的惰性溶剂中接触来获得碱加成盐。从药学上可接受的无机碱衍生的盐的实例包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、锰盐、亚锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。从药学上可接受的有机碱衍生的盐包括伯胺、仲胺和叔胺的盐，包括被取代的胺、环状胺、天然存在的胺等，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、n,n'-二苯甲基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基吗啉、n-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海卓胺、异丙胺、赖氨酸、甲基还原葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因(procaine)、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、缓血酸胺等。在本发明的化合物含有相对碱性官能团时，可通过使中性形式的此类化合物与足够量的所需酸在无溶剂下或在适合的惰性溶剂中接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些酸加成盐，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等；以及衍生自相对无毒有机酸的盐，所述有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、丁二酸、辛二酸、反丁烯二酸、杏仁酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲磺酸等。还包括例如精氨酸等的氨基酸的盐，以及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等的有机酸的盐(参见例如berge,s.m.等人,“pharmaceutical salts”,journal of pharmaceutical science,1977,66,1-19)。本发明的某些特定化合物同时含有允许化合物转化成碱加成盐或酸加成盐的碱性和酸性官能团。
[0062]
化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并且以常规方式分离母体化合物而再生。化合物的母体形式与各种盐形式的不同之处在于某些物理特性(例如极性溶剂中的溶解性)，但出于本发明的目的，在其他方面盐等效于化合物的母体形式。
[0063]
除盐形式以外，本发明提供呈前药形式的化合物。本文中所描述的化合物的前药是容易在生理条件下经历化学变化以提供本发明化合物的那些化合物。另外，前药可通过化学方法或生物化学方法在离体环境中转化成本发明化合物。例如，前药当与适合的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储集层中时，可缓慢转化成本发明化合物。
[0064]
本发明的某些化合物可以非溶剂化形式以及溶剂化形式(包括水合形式)存在。一般而言，溶剂化形式等效于非溶剂化形式，并且旨在涵盖于本发明的范围内。本发明的某些化合物可以多种结晶形式或无定形形式存在。一般而言，所有物理形式都等同地用于本发明涵盖的用途并且旨在在本发明的范围内。
[0065]
本发明的某些化合物在特定条件下可以多晶型物形式存在。多晶型现象是指固体物质以多于一种晶体结构形式或晶相存在的能力，其中晶格中的分子具有不同排列或构象。如果这些类型的差异是由于堆积而存在，则其被称为“堆积多晶型”，并且如果这些类型
的差异是由于构象而存在，则其被称为“构象多晶型”。同一化合物的不同多晶型物通常呈现不同物理特性，包括堆积特性、光谱学特性、热力学特性、溶解性和熔点；动力学特性，例如溶解速率和稳定性；和机械特性，例如硬度和抗张强度。
[0066]
多晶型物可就不同温度和压力范围而言根据其稳定性分类为两种类型之一。在单变系统中，仅一种多晶型物(即单变物)是稳定的，并且其在低于熔点的所有温度和压力下展现低自由能含量和溶解度。在双变系统中，一种多晶型物在特定温度和压力下稳定，而另一种多晶型物在各个温度和压力下稳定。
[0067]
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋物、非对映异构体、几何异构体、区位异构体和个别异构体(例如，个别对映异构体)都旨在涵盖在本发明的范围内。
[0068]
本发明的化合物还可在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。非天然比例的同位素可定义为在于自然界中所发现的量至由100％所讨论的原子组成的量的范围内。例如，化合物可并有放射性同位素，例如氚(3h)、碘-125(
125
i)或碳-14(
14
c)；或非放射性同位素，例如氘(2h)或碳-13(
13
c)。此类同位素变体可为在本技术内其他地方描述的那些提供额外效用。例如，本发明化合物的同位素变体可发现额外效用，包括(但不限于)作为诊断和/或成像试剂或作为细胞毒性/放射毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可具有改变的药物动力学和药效学特征，其可有助于治疗期间增强的安全性、耐受性或功效。本发明化合物的所有同位素变体无论是否具放射性均旨在涵盖于本发明的范围内。
[0069]
术语“患者”或“受试者”可互换使用以指人类或非人类动物(例如哺乳动物)。
[0070]
术语“施用(administration/administer)”等在其应用于例如受试者、细胞、组织、器官或生物流体时是指使例如pi3kγ抑制剂、包含其的药物组合物或诊断剂与受试者、细胞、组织、器官或生物流体接触。在细胞的上下文中，施用包括使试剂与细胞接触(例如体外或离体)以及使试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。
[0071]
术语“治疗(treat/treating/treatment)”等是指在疾病、病症或疾患或其症状已经诊断、观测等之后起始以便暂时或永久地消除、减轻、遏制、缓和或改善折磨受试者的疾病、病症或疾患的根本病因中的至少一者或与折磨受试者的疾病、病症、疾患相关的症状中的至少一者的作用过程(例如，施用pi3kγ抑制剂或包含其的药物组合物)。因此，治疗包括抑制(例如阻止疾病、病症或疾患或与其相关的临床症状的发展或进一步发展)活动性疾病。
[0072]
如本文所使用的术语“需要治疗”是指由医师或其他照护者作出的受试者需要或将受益于治疗的判断。这种判断是基于在医师或照护者的专门知识范围内的多种因素作出。
[0073]
术语“预防(prevent/preventing/prevention)”等是指通常在受试者容易患上特定疾病、病症或疾患的情况下，以某种方式(例如，在疾病、病症、疾患或其症状发作之前)起始以便暂时或永久地预防、遏制、抑制或减轻受试者罹患疾病、病症、疾患或其类似者的风险(如通过例如不存在临床症状所确定)或延迟其发作的作用过程(例如，施用pi3kγ抑制剂或包含其的药物组合物)。在某些情况下，所述术语还指减缓疾病、病症或疾患的进展或抑制其进展成有害或其他不希望的状态。
[0074]
如本文所使用的术语“需要预防”是指由医师或其他照护者作出的受试者需要或将受益于预防性护理的判断。这种判断是基于在医师或照护者的专门知识范围内的多种因素作出。
[0075]
短语“治疗有效量”是指向受试者施用单独或作为药物组合物的部分并且呈单一剂量或作为一系列剂量的部分的药剂，所述药剂呈在向受试者施用时能够对疾病、病症或疾患的任何症状、方面或特征具有任何可检测、积极效果的量。治疗有效量可通过测量相关生理效果确定，并且其可结合给药方案和对受试者疾患的诊断分析等进行调整。举例来说，在施用后特定时间测量pi3kγ抑制剂(或例如其代谢物)的血清水平可指示是否已使用治疗有效量。
[0076]
短语“呈实现变化的足够量”是指在施用特定疗法之前(例如基线水平)和之后在测量的指示物水平之间存在可检测差异。指示物包括任何客观参数(例如血清浓度)或主观参数(例如受试者的健康感觉)。
[0077]
术语“小分子”是指具有小于约10kda、小于约2kda或小于约1kda的分子量的化合物。小分子包括(但不限于)无机分子、有机分子、含有无机组分的有机分子、包含放射性原子的分子和合成分子。治疗学上，与大分子相比，小分子可更易渗透过细胞，对降解较不敏感，并且不大可能引发免疫反应。
[0078]
术语“配体”是指例如可充当受体的激动剂或拮抗剂的肽、多肽、膜相关或膜结合分子或其复合物。配体涵盖天然和合成配体，例如细胞因子、细胞因子变体、类似物、突变蛋白质和衍生自抗体的结合组合物以及小分子。所述术语还涵盖既非激动剂亦非拮抗剂但可结合至受体而不会显著影响其生物特性(例如信号传导或粘附)的药剂。此外，所述术语包括已通过例如化学或重组方法改变为膜结合配体的可溶形式的膜结合配体。配体或受体可为完全细胞内的，即其可存在于胞溶质、细胞核或一些其他细胞内区室中。配体与受体的复合物被称为“配体-受体复合物”。
[0079]
术语“抑制剂”和“拮抗剂”或“活化剂”和“激动剂”分别是指例如用于活化例如配体、受体、辅因子、基因、细胞、组织或器官的抑制或活化分子。抑制剂是减少、阻断、预防、延迟活化、不活化、脱敏或下调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。活化剂是增加、活化、促进、增强活化、敏化或上调例如基因、蛋白质、配体、受体或细胞的分子。抑制剂还可定义为降低、阻断或不活化组成活性的分子。“激动剂”是与靶标相互作用以引起或促进靶标活化增加的分子。“拮抗剂”是对抗激动剂的作用的分子。拮抗剂防止、降低、抑制或中和激动剂的活性，并且拮抗剂还可防止、抑制或减轻靶标(例如靶标受体)的组成活性，甚至当不存在所鉴定的激动剂时也如此。
[0080]
术语“调节(modulate/modulation)”等是指分子(例如，活化剂或抑制剂)直接或间接增加或降低pi3kγ的功能或活性的能力。调节剂可单独起作用，或者其可使用辅因子，例如蛋白质、金属离子或小分子。调节剂的实例包括小分子化合物和其他生物有机分子。小分子化合物的许多文库(例如组合文库)可购得并且可充当鉴定调节剂的起点。本领域技术人员能够开发一种或多种测定法(例如生物化学测定法或基于细胞的测定法)，其中此类化合物文库可经筛选以便鉴定一种或多种具有所需特性的化合物；其后，熟练的医药化学家能够通过例如合成和评估其类似物和衍生物来优化此类一种或多种化合物。合成和/或分子建模研究还可用于鉴定活化剂。
[0081]
分子的“活性”可描述或指分子与配体或受体的结合；催化活性；刺激基因表达或细胞信号传导、分化或成熟的能力；抗原活性；其他分子活性的调节；等。术语“增殖活性”涵盖促进例如以下各项、为以下各项所必需或与以下各项特定相关的活性：正常细胞分裂，以及癌症、肿瘤、发育不良、细胞转化、癌转移和血管生成。
[0082]
如本文所使用，“相当的”、“相当的活性”、“与
……
相当的活性”、“相当的效果”、“与
……
相当的效果”等是可以定量和/或定性看待的相对术语。术语的含义经常取决于其使用的上下文。举例来说，均活化受体的两种药剂可从定性观点视为具有相当的效果，但如果如在本领域接受的测定法(例如剂量反应测定)或本领域接受的动物模型中所测定，一种药剂仅能够达到另一药剂的活性的20％，则两种药剂可从定量观点视为缺乏相当的效果。在比较一个结果与另一结果(例如一个结果与参考标准)时，“相当的”通常(但未必总是)是指一个结果偏离参考标准小于35％、小于30％、小于25％、小于20％、小于15％、小于10％、小于7％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％。在特定实施方案中，如果一个结果与参考标准偏差小于15％、小于10％或小于5％，则其与参考标准相当。举例来说(但不限制)，活性或效果可指功效、稳定性、溶解性或免疫原性。
[0083]“基本上纯”指示组分占组合物的总含量的大于约50％，并且通常占总多肽含量的大于约60％。更通常，“基本上纯”是指其中总组合物的至少75％、至少85％、至少90％或更多为目标组分的组合物。在一些情况下，多肽将占组合物的总含量的大于约90％或大于约95％。
[0084]
具选择性的化合物可尤其适用于治疗某些病症或可提供减小非所需副作用的可能性。在一个实施方案中，本公开化合物相比于其他pi3k同功型具选择性。在再一实施方案中，本公开化合物相比于pi3k/mtor/akt途径中的其他激酶和靶标具选择性。特定实例包括pi3kα、pi3kβ和pi3kδ以及mtor、ak5、pip5k和pdpk1。例如，可通过比较如本文所描述的化合物对pi3kγ的抑制与如本文所描述的化合物对另一靶标的抑制来确定选择性。在一个实施方案中，pi3kγ的选择性抑制比另一靶标或同功型的抑制大至少1000倍、500倍、或100倍、或20倍。
[0085]
例如细胞、组织、器官或生物体的术语“反应”涵盖生物化学或生理行为(例如浓度、密度、粘着性或生物代谢区内的迁移、基因表达率或分化状态)的变化，其中所述变化与活化、刺激或治疗或与内部机制(例如遗传规划)相关。在某些情况下，术语“活化”、“刺激”等是指如通过内部机制以及通过外部或环境因素调节的细胞活化；而术语“抑制”、“下调”等是指相反效果。
[0086]
本文中可互换使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”是指任何长度的氨基酸的聚合形式，其可包括遗传编码和非遗传编码的氨基酸、化学或生物化学修饰或衍生的氨基酸和具有经修饰的多肽主链的多肽。所述术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基酸序列的融合蛋白、具有异源和同源前导序列的融合蛋白，其有或无n末端甲硫氨酸残基；免疫标记蛋白；等。
[0087]
磷脂肌醇-3-激酶γ和其抑制
[0088]
如上文所阐述，尽管实践本发明不需要确切理解本发明化合物实现其活性的基本作用机制，但认为所述化合物(或其子集)经由抑制磷脂肌醇3-激酶(γ同功型)来发挥其作用。
[0089]
本发明的化合物
[0090]
在一个特定方面，本文提供了具有式(i)的化合物：
[0091][0092]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中
[0093]
x是c(r2)或n；
[0094]r1a
和r
1b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、c
1-6
烷基、c
3-6
烯基、c
3-6
炔基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、-y1、-x
1-c(o)2ra、-x
1-ora、-x
1-nrarb、-x
1-conrarb、-x
1-n(ra)so2ra、-x
1-so2ra、-x
1-so2nrarb、-x
1-so3ra、-x
1-cn、-x
1-y1和-x
1-y
1-y
1a
，其中每个x1是键或c
1-6
亚烷基并且任选地进一步被1至3个独立地选自由oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h组成的组的取代基取代，并且每个y1和y
1a
独立地选自由c
3-10
环烷基、4元至8元杂环烷基、5元至6元杂芳基和芳基组成的组，其中每个杂环烷基和杂芳基具有1至3个选自o、n和s的杂原子环顶点；并且每个y1和y
1a
任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、cn、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、nh2、nh(c
1-4
烷基)、n(c
1-4
烷基)2、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、co-c
1-8
烷基、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0095]
或r
1a
和r
1b
任选地组合以形成4元至8元环或螺环，其任选地被一至四个独立地选自由以下组成的组的成员取代：卤素、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0096]
r2是选自由以下组成的组的成员：卤素、cn、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、-y2、-x
2-c(o)2ra、-x
2-ora、-x
2-nrarb、-x
2-conrarb、-x
2-so2ra、-x
2-n(ra)so2ra、-x
2-so2nrarb、-x
2-so3ra、-o-x
2-y2和-x
2-y2，其中每个x2是键或c
1-6
亚烷基并且任选地进一步被1至3个独立地选自由oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h组成的组的取代基取代，并且每个y2选自由c
3-6
环烷基、4元至8元杂环烷基和5元至6元杂芳基组成的组，其中每个杂环烷基和杂芳基具有1至3个选自o、n和s的杂原子环顶点；并且每个y2任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0097]
r3是选自由以下组成的组的成员：c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷基c
1-3
烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
卤烷基和-x
3-y3，其中每个x3是键、c
1-6
亚烷基或c
1-6
卤亚烷基并且任选地进一步被oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基或co2h取代，并且每个y3选自由c
3-6
环烷基、4元至8元杂环烷基和5元至6元杂芳基组成的组，其中每个杂环烷基和杂芳基具有1至3个选自o、n和s的杂原子环顶点；并且每个y3任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0098]r4a
和r
4b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c2-6
炔基、c
1-6
卤烷基和c
1-6
羟烷基；
[0099]
每个ra独立地选自由以下组成的组：h、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
亚烷基-co2h、c
1-6
亚烷基-so3h、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷基c
1-3
烷基、c
1-3
烷基c
3-6
环烷基、苯基和具有一至三个选自o、n和s的杂原子环顶点的3元至7元杂环烷基；并且每个ra任选地进一步被一个或两个独立地选自以下的成员取代：卤素、oh、c
1-4
烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0100]
每个rb独立地选自由以下组成的组：h、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
亚烷基-co2h和c
1-6
亚烷基-so3h，其中每一者任选地进一步被一个或两个独立地选自以下的成员取代：oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0101]
并且ra和rb当连接至同一氮原子时任选地组合以形成4元至8元环或螺环，其任选地被一至四个独立地选自由以下组成的组的成员取代：卤素、oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h。
[0102]
在一些实施方案中，提供了一种式(i)化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物，其中：
[0103]
x是c(r2)或n；
[0104]r1a
和r
1b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、c
1-6
烷基、c
3-6
烯基、c
3-6
炔基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、-y1、-x
1-c(o)2ra、-x
1-ora、-x
1-nrarb、-x
1-conrarb、-x
1-n(ra)so2ra、-x
1-so2ra、-x
1-so2nrarb、-x
1-so3ra、-x
1-cn、-x
1-y1和-x
1-y
1-y
1a
，其中每个x1是键或c
1-6
亚烷基并且任选地进一步被oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基或co2h取代，并且每个y1和y
1a
独立地选自由c
3-10
环烷基、4元至8元杂环烷基、5元至6元杂芳基和芳基组成的组，其中每一者任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、cn、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、nh2、nh(c
1-4
烷基)、n(c
1-4
烷基)2、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、co-c
1-8
烷基、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0105]
或r
1a
和r
1b
任选地组合以形成4元至8元环或螺环，其任选地被一至四个独立地选自由以下组成的组的成员取代：卤素、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0106]
r2是选自由以下组成的组的成员：卤素、cn、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、-y2、-x
2-c(o)2ra、-x
2-ora、-x
2-nrarb、-x
2-conrarb、-x
2-so2ra、-x
2-n(ra)so2ra、-x
2-so2nrarb、-x
2-so3ra、-o-x
2-y2和-x
2-y2，其中每个x2是键或c
1-6
亚烷基并且任选地进一步被oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基或co2h取代，并且每个y2选自由c
3-6
环烷基、4元至8元杂环烷基和5元至6元杂芳基组成的组，其中每一者任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0107]
r3是选自由以下组成的组的成员：c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷基c
1-3
烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
卤烷基和-x
3-y3，其中每个x3是键、c
1-6
亚烷基或c
1-6
卤亚烷基并且任选地进一步被oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基或co2h取代，并且每个y3选自由c
3-6
环烷基、4元至8元杂环烷基和5元至6元杂芳基组成的组，其中每一者任选地进一步被一至四个独立
地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0108]r4a
和r
4b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、卤素、c
1-6
烷基、c
2-6
烯基、c
2-6
炔基、c
1-6
卤烷基和c
1-6
羟烷基；
[0109]
每个ra独立地选自由以下组成的组：h、c
1-6
烷基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
亚烷基-co2h、c
1-6
亚烷基-so3h、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷基c
1-3
烷基、苯基和3元至7元杂环烷基，其中每一者任选地进一步被一个或两个独立地选自以下的成员取代：oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0110]
每个rb独立地选自由以下组成的组：h、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、c
1-6
卤烷基、c
1-6
羟烷基、c
1-6
亚烷基-co2h和c
1-6
亚烷基-so3h，其中每一者任选地进一步被一个或两个独立地选自以下的成员取代：oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；
[0111]
并且ra和rb当连接至同一氮原子时任选地组合以形成4元至8元环或螺环，其任选地被一至四个独立地选自由以下组成的组的成员取代：卤素、oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h。
[0112]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物是其中x是c(r2)的化合物。
[0113]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物是其中x是n的化合物。
[0114]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ia)表示：
[0115][0116]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0117]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ib)表示：
[0118][0119]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0120]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ic)表示：
[0121][0122]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0123]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(id)表示：
[0124][0125]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0126]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ie)表示：
[0127][0128]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0129]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(if)表示：
[0130][0131]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0132]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ig)表示：
[0133][0134]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0135]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ih)表示：
[0136][0137]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0138]
在一些所选实施方案中，式(i)化合物由式(ii)表示：
[0139][0140]
或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物。
[0141]
在一些所选实施方案中，提供式(i)、式(ia)和式(ib)的化合物，其中-n(r
1a
)(r
1b
)选自由以下组成的组：
[0142][0143]
和其立体异构体。
[0144]
在一些所选实施方案中，本文所提供的化合物选自由以下组成的组：
[0145][0146]
[0147]
在一些所选实施方案中，提供了式(i)、式(ib)、式(ic)、式(id)、式(ie)、式(if)、式(ig)、式(ih)和式(ii)的化合物，其中r
1a
和r
1b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、c
1-3
烷基、c
1-3
卤烷基、c
1-3
羟烷基、-y1、-x
1-c(o)2ra、-x
1-ora、x
1-nrarb、-x
1-conrarb、-x
1-n(ra)so2ra、-x
1-so2ra、-x
1-so2nrarb、-x
1-so3ra、-x
1-cn、-x
1-y1和-x
1-y
1-y
1a
，其中每个x1是键或c
1-3
亚烷基并且任选地进一步被oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基或co2h取代，并且每个y1和y
1a
选自由c
3-6
环烷基、4元至6元杂环烷基、5元至6元杂芳基和芳基组成的组，并且每个y1和y
1a
任选地进一步被一至四个独立地选自由以下组成的组的取代基取代：卤素、氧代基、cn、oh、c
1-4
烷基、c
1-4
卤烷基、c
1-4
羟烷基、c
1-4
烷氧基、c
1-4
卤烷氧基、c
1-4
羟烷氧基、nh2、nh(c
1-4
烷基)、n(c
1-4
烷基)2、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、co-c
1-8
烷基、coo-c
1-8
烷基和co2h。
[0148]
在一些所选实施方案中，提供式(i)、式(ia)、式(ib)、式(ih)和式(ii)的化合物，其中r2是选自cl、ch3、ch2ch3、ch(ch3)2oh、och3和nhso2ch3的成员。在其他实施方案中，r2是选自ocf3或ocf2h的成员。
[0149]
在一些所选实施方案中，提供式(i)、式(ia)、式(ic)、式(id)和式(ie)的化合物，其中r3是选自由以下组成的组的成员：
[0150][0151]
在一些所选实施方案中，提供式(i)化合物，其中r
4a
和r
4b
各自是独立地选自由以下组成的组的成员：h、卤素、c
1-3
烷基、c
1-3
卤烷基和c
1-3
羟烷基。
[0152]
在其他实施方案中，包括上述所选实施方案中的任一者，每个ra独立地选自由以下组成的组：h、c
1-3
烷基、c
1-3
卤烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
亚烷基-co2h、c
1-3
亚烷基-so3h、c
3-6
环烷基、c
3-6
环烷基c
1-3
烷基、苯基和3元至7元杂环烷基，其中每一者任选地进一步被一个或两个独立地选自以下的成员取代：oh、so2nh2、conh2、c(o)nhoh、po3h2、coo-c
1-8
烷基和co2h；并且每个rb独立地选自由以下组成的组：h、c
1-3
烷基、c
3-6
环烷基、c
1-3
卤烷基、c
1-3
羟烷基、c
1-3
亚烷基-co2h和c
1-3
亚烷基-so3h。
[0153]
在一些所选实施方案中，提供表1至表7的任何一种化合物。
[0154]
鉴定具有所需特征的pi3kγ抑制剂
[0155]
本发明部分涉及用至少一种具有治疗相关性的特性或特征来鉴定pi3kγ抑制剂。候选抑制剂可通过使用例如本领域接受的测定法或模型来鉴定，其实例描述于本文中。
[0156]
在鉴定之后，可通过使用提供关于抑制剂特征的数据(例如药物动力学参数、测定溶解性或稳定性的方式)的技术进一步评估候选抑制剂。候选抑制剂与参考标准(其可为目前抑制剂的“同类最佳”)的比较是此类候选物的潜在活力的指示。
[0157]
合成方法
[0158]
制备权利要求的化合物的一般方法
[0159]
本领域技术人员应认识到，多种方法可用以制备权利要求中表示的分子。一般而言，用于构造权利要求中表示的化合物的适用方法由三个部分组成，所述部分可按任何次序进行：修饰片段a-c中存在的官能团，连接a片段与b片段，以及连接b片段与c片段。本发明化合物成为适用于构造所述化合物的片段a-c的还原合成性断开展示如下：
[0160][0161]
用于制备所要求保护化合物的若干方法是示例性的(反应式1-4)。反应式1展示一种合成经适当官能化的片段c的方法。在反应式1的情况下，容易获得的4-卤基-2-甲基苯甲酸甲酯经由在苯甲基自由基溴化(例如，使用nbs)之后与适当官能化的伯胺环化而转化成异吲哚啉酮。在反应式1的情况下，x可选自例如cl、br或i的适当基团。
[0162][0163]
或者，本领域中已知用于形成异吲哚啉酮的广泛多种方法(参见例如https://www.organic-chemistry.org/synthesis/heterocycles/benzo-fused/isoindolinones.shtm中的“异吲哚啉酮的合成(synthesis of isoindolinones)”)。
[0164]
反应式2展示经由铃木反应(suzuki reaction)在片段b与片段c之间形成键的一种方法。在反应式2的情况下，z可选自例如cl或br的适当基团，并且-b(or)2是硼酸或酯，并且偶联是由过渡金属催化剂(优选地具有适当配体的钯)介导。
[0165][0166]
偶联可通过使用有机或无机碱来辅助，并且本领域中已知用以促进铃木偶联的广泛多种条件。偶联配偶体的官能化也可如反应式3中所示例进行逆转。本领域技术人员将认识到，存在还将产生所需产物的其他可能组合。b片段与c片段之间的键可在a片段与b片段之间形成连接之前或之后形成，并且所述基团可在b片段与c片段连接之前或之后进一步被修饰。
[0167][0168]
反应式4展示在片段a与片段b之间形成键的一种方法。在反应式4的情况下，容易获得的伯胺与片段b的羧酸衍生物(或其经活化类似物)在合适的酰胺偶联试剂(例如edc、hobt、hatu或各种其他试剂)存在下偶联(参见https://www.organic-chemistry.org/synthesis/c1n/amides.shtm中的“酰胺的合成(synthesis of amides)”)。本领域技术人员将理解，存在可用于实现这种转化的广泛多种方法。
[0169]
[0170]
对于本发明的任何特定化合物的最有效制备，本领域技术人员将认识到，连接片段和修饰任何片段中所存在的官能团的时序和次序可在制备任何给定化合物时改变。上文所描述的各种方法已用于制备本发明化合物，其中一些示例于实施例中。
[0171]
药物递送和/或半衰期延长的前药和其他手段
[0172]
在本发明的一些方面，本文中所描述的化合物以前药形式施用。
[0173]
为了实现治疗活性的延长，药物分子可被工程化以利用载体进行递送。此类载体以非共价方式使用，其中药物部分以物理化学方式配制成溶剂-载体混合物，或以载体试剂与药物部分的官能团中的一者永久共价连接的方式使用(一般参见wo 2015/0202317)。
[0174]
若干种非共价方法是有利的。举例来说(但非限制)，在某些实施方案中，采用包含囊封至聚合物载体中的非共价药物的储槽式制剂(depot formulation)。在此类制剂中，药物分子与载体物质混合并且经处理使得药物分子分布在主体载体内部。实例包括微粒聚合物-药物聚集体(例如，微球(phosphorex,inc.))，其以可注射悬浮液形式施用；配制成凝胶形式的聚合物-药物分子聚集体(例如，lupron(abbvie inc.))，其以单一快速注射剂的形式施用；以及脂质体制剂(例如，(pacira pharmaceuticals))，其中载体可为能够使药物溶解的聚合或非聚合实体。在这些制剂中，药物分子的释放可在载体膨胀或以物理方式解体时发生。在其他情况下，化学降解允许药物扩散至生物学环境中；此类化学降解过程可为自水解的或酶催化的。除了其他限制，非共价药物囊封需要防止药物的不可控释放，并且生物降解后药物释放机制的依赖性可造成患者间可变性。
[0175]
在特定实施方案中，药物分子(包括小分子和大分子两者)经由永久性共价键与载体缀合。在水性液体中展现低溶解性的某些小分子治疗剂可通过与亲水性聚合物缀合而溶解，所述亲水性聚合物的实例描述于本文其他地方。关于大分子蛋白质，半衰期延长可通过例如用棕榈酰基部分进行永久共价修饰和通过用自身具有延长半衰期的另一蛋白质(例如)进行永久共价修饰来实现。一般而言，药物分子在载体与药物共价缀合时展现降低的生物活性。
[0176]
在某些情况下，与包含非共价聚合物混合物的药物分子或永久性共价连接相关的限制可通过针对药物与聚合物载体的化学缀合而使用前药方法来成功解决。在此上下文中，与药物部分自身相比没有活性或活性较小的治疗剂可预见地转化成活性分子实体。前药相比于所释放药物的生物活性降低在需要减缓或控制药物释放的情况下是有利的。在此类情况下，药物的释放随时间推移而发生，从而减少反复和频繁施用药物的必要性。当药物部分本身在胃肠道中不被吸收或达不到最佳吸收时，前药方法也可为有利的；在这些实例中，前药促进对药物部分的吸收并且随后在某一稍后时间(例如经由首过代谢)断开。生物活性药物分子通常通过载体部分与药物分子的羟基、氨基或羧基之间形成的临时键连接至聚合物载体部分。
[0177]
上文所描述的方法与若干限制有关。前药活化可通过载体与药物分子之间的临时键的酶促或非酶促切割或两者的依序组合(例如，酶促步骤之后进行非酶促修饰)来发生。在不含酶的体外环境(例如缓冲水溶液)中，例如酯或酰胺的临时键可经历水解，但对应的水解速率可能使得其超出治疗有用范围。相比之下，在体内环境中，通常存在酯酶或酰胺
酶，并且酯酶和酰胺酶可使得水解动力学显著催化加速两倍至高达若干数量级(参见例如greenwald等人,(1999)j med chem 42(18):3857-67)。
[0178]
如本文中所描述，前药可分类为i)生物前体和ii)载体连接的前药。生物前体不含有载体基团，并且通过官能团的代谢产生而活化。相比之下，在载体连接的前药中，活性物质经由生物活性实体的官能团处的临时键来与载体部分缀合。优选的官能团是羟基或氨基。连接化学反应和水解条件均取决于所采用的官能团的类型。载体可为生物性惰性的(例如peg)，或者可具有靶向特性(例如抗体)。载体连接的前药的载体部分的切割产生目标生物活性实体，并且生物活性实体的经脱保护官能团的性质通常有助于其生物活性。
[0179]
专利和科学文献描述临时键是不稳定酯键的许多大分子前药。在这些情况下，生物活性实体的官能团是羟基或羧酸(参见例如cheng等人(2003)bioconjugate chem 14:1007-17)。此外，对于生物大分子和某些小分子药物通常有利的是将载体连接至生物活性实体的氨基(例如，蛋白质的n末端氨基或赖氨酸氨基)。在制备前药期间，由于氨基相比于羟基或酚基的亲核性更高，因此可更化学选择性地定位氨基。这对于含有多种不同反应性官能团的蛋白质和肽来说尤其相关，其中非选择性缀合反应使得非所需产物混合物需要广泛表征或纯化，由此降低反应产率和活性部分的治疗功效。
[0180]
一般而言，相比于酯键，酰胺键对水解更稳定，并且酰胺键的断裂速率对于载体连接的前药的疗效来说可能太慢。因此，可能有利的是添加结构性化学组分以实现对前药酰胺键的可断裂性的控制。既不是由载体实体也不是由药物提供的这些额外断裂控制的化学组分通常被称为“接头”。前药接头可对临时键的水解速率具有主要作用，并且接头的化学性质变化常常产生特定特性。用于靶向释放的特异性酶对含有胺的生物活性部分的前药活化需要接头的结构呈现被相应内源性酶识别为底物的结构基序。在这些情况下，临时键的断裂在通过酶催化的单步过程中发生。例如，阿糖胞苷的酶促释放由在各种肿瘤块中浓度相对较高的蛋白酶纤维蛋白溶酶实现。
[0181]
患者间可变性是酶促主导型断裂的主要缺点。受试者之间的酶水平可显著不同，从而导致通过酶促断裂进行的前药活化的生物学差异。酶水平还可视施用位点而变化(例如，针对皮下注射，身体的某些区域相比于其他区域得到更可预测的治疗效果)。另外，难以确定酶依赖性载体连接的前药的药物动力学特性的体内-体外相关性。
[0182]
采用与药物部分中的氨基的临时键的其他载体前药是基于级联机制。通过由掩蔽基团(masking group)与活化基团的结构性组合构成的接头化合物实现级联断裂。掩蔽基团借助于例如酯或氨基甲酸酯的第一临时键连接至活化基团。活化基团经由第二临时键(例如氨基甲酸酯)连接至药物分子的氨基。第二临时键的水解稳定性或敏感性取决于掩蔽基团的存在或不存在。在掩蔽基团存在下，第二临时键高度稳定并且不大可能释放具有治疗有效动力学的药物分子，而在无掩蔽基团存在下，这种键变得高度不稳定，从而快速断裂并释放药物部分。
[0183]
第一临时键的断裂是级联机制中的速率限制步骤。第一步骤可诱导活化基团的分子重排(例如，如greenwald等人(1999)j med chem 42:3657-67中所描述的1,6-消除)，并且重排使得第二临时键更加不稳定，从而诱导其断裂。理想地，第一临时键的断裂速率与给定治疗情境中药物分子的所需释放速率一致。另外，需要第二临时键的断裂在其不稳定性由第一临时键的断裂诱导之后基本上是瞬时的。
[0184]
另一个实施方案包含基于三甲基锁内酯化的聚合含氨基前药(参见例如greenwald等人(2000)j med chem 43(3):457-87)。在这种前药系统中，被取代的邻羟苯基-二甲基丙酸通过作为第一临时键的酯基、碳酸酯基或氨基甲酸酯基连接至peg，并且借助于作为第二临时键的酰胺键连接至药物分子的氨基。药物释放中的速率决定步骤是第一键的酶促断裂，之后是通过内酯化进行的快速酰胺断裂，从而释放芳族内酯副产物。greenwald等人所描述的前药系统的主要缺点是在临时键断裂之后释放高度反应性并且潜在有毒的芳族小分子副产物，如醌甲基化物或芳族内酯。潜在有毒的实体与药物以1:1化学计量释放，并且可假定具有高体内浓度。
[0185]
在基于1,6-消除的包含芳族活化基团的级联前药的某些实施方案中，掩蔽基团在结构上与载体分离。这可通过采用聚合物载体与活化基团之间的稳定键而实现，其中所述稳定键不参与级联断裂机制。如果载体不充当掩蔽基团并且活化基团借助于稳定键与载体偶联，则可避免潜在有毒副产物(例如活化基团)的释放。活化基团与聚合物的稳定连接还抑止具有不确定药理学的药物-接头中间体的释放。
[0186]
前一段落中所描述的方法的第一实例包含基于杏仁酸活化基团的聚合物前药系统(参见例如shabat等人(2004)chem eur j10:2626-34)。在这种方法中，掩蔽基团由氨基甲酸酯键连接至活化基团。活化基团经由酰胺键持久性地缀合至聚丙烯酰胺聚合物。在通过催化抗体酶促活化掩蔽基团之后，掩蔽基团通过环化断裂并且释放药物；活化基团在药物释放之后仍连接至聚丙烯酰胺聚合物。类似前药系统是基于杏仁酸活化基团和酶促可断裂的酯连接的掩蔽基团(参见例如lee等人(2004)angew chem 116:1707-10)。
[0187]
在使用前述接头时，1,6-消除步骤仍产生高度反应性芳族中间体。即使芳族部分保持持久性地连接至聚合物载体，但可产生潜在有毒副产物的副反应或免疫原性效果。因此，有利地，产生使用非酶依赖性并且在断裂期间不会产生反应性芳族中间体的脂族前药接头来形成含胺活性剂的聚合物前药的接头技术。一个此类实例将peg5000-顺丁烯二酸酐用于组织型纤维蛋白溶酶原活化剂和尿激酶中的氨基的可逆修饰(参见例如(1987)garman等人,febs lett 223(2):361-65)。功能性酶在ph 7.4缓冲液下温育之后通过顺丁烯酰胺酸键断裂而从peg-upa缀合物的再生遵循半衰期大致为6小时的一级动力学。顺丁烯酰胺酸键的缺点是缀合物在较低ph值下缺乏稳定性。
[0188]
另一种方法包括基于n,n-双-(2-羟乙基)甘氨酰胺(二甘氨酸)接头的peg级联前药系统(参见例如(2004)j med chem 47:726-34)。在这种系统中，两个peg载体分子经由临时键连接至二甘氨酸分子，所述二甘氨酸分子与药物分子的氨基偶联。前药活化中的第一步骤涉及连接两个peg载体分子与二甘氨酸活化基团的羟基的第一临时键的酶促断裂。peg与二甘氨酸之间的不同键产生不同的前药活化动力学。前药活化中的第二步骤涉及将二甘氨酸活化基团连接至药物分子的氨基的第二临时键的断裂。这种系统的缺点是这种第二临时二甘氨酸酰胺键的水解速率较慢，从而导致释放经二甘氨酸改性的前药中间体，其相比于天然母体药物分子可能呈现不同的药物动力学、免疫原性、毒性和药力学特性。
[0189]
在特定实施方案中，将二肽用于靶向或经靶向转运的前药开发，因为它们是酶类或生物转运系统的底物。二肽前药形成的非酶促途径(即进行分子内环化以形成相应的二酮哌嗪(diketopiperazine；dkp)并且释放活性药物的能力)未充分限定。
[0190]
在一些实施方案中，二肽经由酯键连接至药物部分，如针对药物扑热息痛
(paracetamol)的二肽酯所描述(gomes等人(2005)bio&med chem lett)。在这种情况下，环化反应由酯碳原子上肽的n末端胺的亲核攻击组成，从而形成四面体中间体，之后一个质子从胺转移至离去基氧阴离子同时形成肽键，得到环状dkp产物和游离药物。这种方法在体外适用于含羟基药物，但已发现其在体内与酯键的酶促水解竞争，因为相应的二肽酯比在缓冲液中更快速地释放扑热息痛(gomes等人,molecules 12(2007)2484-2506)。基于二肽的前药对肽酶的敏感性可通过在二肽基序中并入至少一种非天然氨基酸来解决。然而，能够切割酯键的内源性酶不限于肽酶，并且这种前药切割的酶依赖性仍导致不可预测的体内性能。
[0191]
在一些实施方案中，旨在将酶依赖性工程化至dkp前药中，例如其中二肽酯前药在二肽的氨基末端处甲酰化，并且使用酶促脱甲酰基化来起始二酮哌嗪形成和酯-二肽键的后续断裂，接着释放药物分子(参见例如usp 7,163,923)。作为其他实例，八肽通过酯键连接至长春碱的4-羟基，并且在特异性酶促去除n末端六肽之后通过dkp形成而经历酯键断裂(参见brady等人(2002)j med chem 45:4706-15)。
[0192]
dkp形成反应的范围还已扩展至酰胺前药。举例来说，usp 5,952,294描述了针对阿糖胞苷的二肽基酰胺前药，使用二酮哌嗪形成进行前药活化。在这种情况下，临时键经形成于二肽的羰基与阿糖胞苷的芳族氨基之间。然而，由于不存在载体或其他半衰期延长部分或官能团，因此此类缀合物不大可能实现缓慢释放效果。
[0193]
还已描述能够经由二肽延伸的二酮哌嗪形成而释放肽的包含生物活性肽(例如glp-1)的二肽前药(参见例如wo 2009/099763)。生物活性肽部分可包括其氨基酸侧链残基中的一者上的其他peg链，以实现生物活性肽的延伸循环。然而，这种方法与若干显著缺点相关。首先，peg链必须连接至肽而不损害其生物活性，这对于许多基于肽的生物活性剂来说可能难以实现。其次，由于聚乙二醇化肽本身具有生物活性，因此二肽前部分对肽的生物活性具有影响并且可不利地影响其受体结合特性。
[0194]
可与本发明的化合物一起使用的特定示例性技术包括prolynx(san francisco,ca)和ascendis pharma(palo alto,ca)开发的那些技术。prolynx技术平台利用新颖接头的集合，所述接头被预程序化以不同速率切割，以允许小分子和肽从循环的半固体大分子缀合物的受控、可预测和持续释放。所述技术允许在数周至数月内维持治疗剂的所需稳态血清水平。
[0195]
ascendis技术平台组合了前药和持续释放技术的益处以增强小分子和肽的特性。处于循环中时，专用前药以由生理ph和温度条件调节的预定速率释放未经修饰的活性母体治疗剂。由于治疗剂是以其未经修饰形式释放，因此保留其原始作用机制。
[0196]
增强抑制剂特征的修饰
[0197]
通常有利并且有时必不可少的是改进本文所公开的治疗模态的一个或多个物理特性和/或其施用的方式。物理特性的改进包括例如增加水溶性、生物可用性、血清半衰期和/或治疗半衰期和/或调节生物活性的方法。
[0198]
本领域中已知的修饰包括聚乙二醇化、fc融合和白蛋白融合。尽管一般与大分子试剂(例如多肽)相关，但此类修饰最近用特定小分子评估。举例来说，chiang,m.等人(j.am.chem.soc.,2014,136(9):3370-73)描述了缀合至免疫球蛋白fc结构域的腺苷2a受体的小分子激动剂。小分子-fc缀合物保留有效fc受体和腺苷2a受体相互作用并且与未缀
合的小分子相比展示优异特性。还已描述了peg分子与小分子治疗剂的共价连接(li,w.等人,progress in polymer science,2013 38:421-44)。
[0199]
其他已知修饰包括氘化以改进药物动力学、药效学和毒性概况。由于氘的原子质量较大，因此碳-氘键的断裂需要比碳-氢键更多的能量。由于这些较强键更难以断裂，因此药物代谢的速率相比于非氘化形式更慢，从而允许给药频率降低并且可进一步减小毒性。(charles schmidt,nature biotechnology,2017,35(6):493-494；harbeson,s.和tung,r.,medchem news,2014(2):8-22)。
[0200]
治疗性和预防性用途
[0201]
本发明涵盖本文所描述的pi3kγ抑制剂在治疗或预防广泛范围的疾病、病症和/或疾患和/或其症状中的用途。虽然下文详细描述特定用途，但应理解本发明不限于此。此外，尽管下文阐述一般类别的特定疾病、病症和疾患，但疾病、病症和疾患中的一些可为多于一个类别的成员，并且其他可能不是所公开类别中的任一者的成员。
[0202]
在一些实施方案中，本文所描述的疾病、病症和/或疾患至少部分地由pi3kγ介导。
[0203]
在一些实施方案中，本文所描述的pi3kγ抑制剂是以可有效逆转或阻止pi3kγ介导的调节异常的进展的量进行施用。
[0204]
肿瘤学相关病症。探究肿瘤中的免疫反应的研究已鉴定pi3kγ为信号传导级联内的中心节点。pi3kγ抑制剂可经由调节骨髓细胞，例如通过抑制抑止性骨髓细胞，阻抑免疫抑止的肿瘤浸润性巨噬细胞或通过刺激巨噬细胞和树突状细胞来刺激抗癌免疫反应，以使得有助于有效t细胞反应的细胞因子减少癌症发展和蔓延。
[0205]
不受任何特定理论束缚，pi3kγ抑制剂可用于治疗或预防增生性疾患或病症，包括癌症，例如子宫癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、睾丸癌、胃肠道癌(例如，食道癌、口咽癌、胃癌、小肠癌或大肠癌、结肠癌或直肠癌)、肾癌、肾脏细胞癌、膀胱癌、骨癌、骨髓癌、皮肤癌、头癌或颈癌、肝癌、胆囊癌、心癌、肺癌、胰腺癌、唾液腺癌、肾上腺癌、甲状腺癌、脑癌(例如，神经胶质瘤)、神经节癌、中枢神经系统(cns)癌和外周神经系统(pns)癌，以及造血系统癌和免疫系统癌(例如，脾癌或胸腺癌)。本发明还提供了治疗或预防其他癌症相关疾病、病症或疾患的方法，所述疾病、病症或疾患包括(例如)免疫原性肿瘤、非免疫原性肿瘤、休眠肿瘤、病毒诱发的癌症(例如，上皮细胞癌、内皮细胞癌、鳞状细胞癌和乳头状瘤病毒)、腺癌、淋巴瘤、癌瘤、黑色素瘤、白血病、骨髓瘤、肉瘤、畸胎癌、化学诱发的癌症、癌转移和血管生成。在特定实施方案中，肿瘤或癌症是结肠癌、卵巢癌、乳腺癌、黑色素瘤、肺癌、神经胶母细胞瘤或白血病。术语癌症相关疾病、病症和疾患的使用意在广泛指与癌症直接或间接相关的疾患，并且包括例如血管生成和癌变前疾患，例如发育不良。
[0206]
在某些实施方案中，癌症可为转移性的或具有变成转移性的风险，或者可出现在弥漫性组织中，包括血液或骨髓的癌症(例如白血病)。
[0207]
在一些实施方案中，本发明提供了用pi3kγ抑制剂和至少一种额外治疗或诊断剂来治疗增生性疾患、癌症、肿瘤或癌变前疾患的方法，其实例在本文中其他地方阐述。
[0208]
免疫和炎性相关病症。免疫反应无法消退可导致自身免疫疾病、炎性疾患和过敏疾患。自身免疫疾病起因于产生针对宿主细胞的免疫反应的耐受破坏，从而导致例如多发性硬化症、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、牛皮癣和自身免疫(i型)糖尿病的疾患。例如
慢性阻塞性肺病(copd)、动脉粥样硬化和炎性肠道疾病的慢性炎性疾患起因于持续的免疫反应无法消退。不可控的炎症也是产生癌症的风险因素，并且已展示促成肿瘤生长和癌转移。例如哮喘或全身性过敏反应的过敏疾患是由针对通常无害抗原的不当免疫反应所引起[curr opin pharmacol.2015年8月；23:82-91.]。因此，如本文所使用，例如“免疫疾病”、“免疫疾患”、“免疫病症”、“炎性疾病”、“炎性疾患”、“炎性病症”等的术语意在广泛地涵盖可通过本文所描述的pi3kγ抑制剂治疗从而获得治疗益处的任何免疫相关疾患。
[0209]
可用本发明的化合物和组合物治疗或预防的免疫和炎性相关疾病、病症和疾患的非限制性列表包括：关节炎(例如，类风湿性关节炎)、肾衰竭、狼疮、哮喘、牛皮癣、结肠炎、胰腺炎、过敏、纤维化、手术并发症(例如其中炎性细胞因子阻止愈合)、贫血和纤维肌痛。可能与慢性炎症相关的其他疾病和病症包括阿尔茨海默病(alzheimer's disease)、充血性心脏衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松、帕金森病(parkinson's disease)、感染、炎性肠道疾病(例如克罗恩病(crohn's disease)和溃疡性结肠炎)、过敏性接触性皮炎和其他湿疹、全身性硬化症、移植和多发性硬化症。
[0210]
在本发明的特定实施方案中，pi3kγ抑制剂用于通过提供佐剂活性而增加或增强对抗原的免疫反应。在一个特定实施方案中，向受试者施用至少一种抗原或疫苗与至少一种本发明的pi3kγ抑制剂的组合以延长对所述抗原或疫苗的免疫反应。还提供了治疗性组合物，其包括至少一种抗原性药剂或疫苗组分与至少一种本发明的pi3kγ抑制剂的组合，所述至少一种抗原性药剂或疫苗组分包括(但不限于)病毒、细菌和真菌或其部分、蛋白质、肽、肿瘤特异性抗原和核酸疫苗。
[0211]
在一些实施方案中，本文所描述的pi3kγ抑制剂可与免疫抑制剂组合以减少免疫效应细胞的数目。
[0212]
下文更详细地描述pi3kγ抑制剂可尤其有效(归因于例如目前疗法的限制)的前述疾病、病症和疾患中的一些。
[0213]
一般特征在于关节的膜内膜(滑膜)的慢性炎症的类风湿性关节炎(ra)影响大约1％的美国人口(约210万人)。对包括tnf-a和il-1的细胞因子在炎性过程中的作用的进一步理解使得能够开发和引入新类别的疾病改善型抗风湿药物(disease-modifying antirheumatic drug；dmard)。药剂(其中一些与ra的治疗模态重叠)包括(依那西普(etanercept))、(英夫利昔单抗(infliximab))、(阿达木单抗(adalimumab))和(阿那白滞素(anakinra))。尽管在特定患者群体中这些药剂中的一些减轻症状、抑制结构破坏的进展和改进物理功能，但仍需要具有改进的功效、互补作用机制和较少/较不严重不良反应的替代药剂。
[0214]
牛皮癣(常见免疫介导性慢性皮肤病的群集)影响超过450万美国人，其中150万被认为患有中度至重度形式的疾病。此外，超过10％患有牛皮癣的患者患有损害骨骼和关节周围的结缔组织的牛皮癣性关节炎。对牛皮癣的潜在生理学的改进理解使得引入例如靶向引起疾病的发炎性质的t淋巴细胞和细胞因子活性的药剂。此类药剂包括tnf-α抑制剂(也用于类风湿性关节炎(ra)的治疗)，包括(依那西普)、(英夫利昔单抗)和(阿达木单抗)；和t细胞抑制剂，例如(阿法赛特(alefacept))和(依法利珠单抗(efalizumab))。尽管这些药剂中的若干者
在一定程度上在某些患者群体中有效，但无一者展示有效治疗所有患者。
[0215]
其他病症。本发明的实施方案涵盖向受试者施用本文所描述的pi3kγ抑制剂以用于治疗或预防可得益于至少一定水平的pi3kγ抑制的任何其他病症。此类疾病、病症和疾患包括例如心脏血管病症(例如，心脏缺血)和代谢病症(例如，糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖症)。
[0216]
药物组合物
[0217]
本发明的pi3kγ抑制剂可呈适用于向受试者施用的组合物形式。一般而言，此类组合物是包含pi3kγ抑制剂和一种或多种药学上可接受或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂的“药物组合物”。在某些实施方案中，pi3kγ抑制剂以治疗学上可接受的量存在。药物组合物可用于本发明的方法中；因此，例如，药物组合物可离体或体内施用于受试者以便实践本文中所描述的治疗性和预防性方法和用途。
[0218]
本发明的药物组合物可经配制以与预期方法或施用途径相容；在本文中阐述示例性施用途径。此外，药物组合物可与其他治疗活性剂或如本文中所描述的化合物组合使用以便治疗或预防如由本发明涵盖的疾病、病症和疾患。
[0219]
含有活性成分(例如pi3kγ功能的抑制剂)的药物组合物可呈适用于口服使用的形式，例如呈片剂、胶囊、锭剂、糖锭、水性或油性悬浮液、分散性散剂或颗粒、乳液、硬或软胶囊、或糖浆、溶液、微珠或酏剂形式。旨在用于口服使用的药物组合物可根据本领域中已知用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且此类组合物可含有一种或多种例如甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂以便提供药学上精致且适口的制剂。片剂、胶囊等含有活性成分与适用于制造片剂的药学上可接受的无毒赋形剂的混杂物。这些赋形剂可为例如稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或褐藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。
[0220]
适用于口服施用的片剂、胶囊等可未包覆包衣或通过已知技术包覆包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收并因此提供持续作用。例如，可采用时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。其还可通过本领域中已知的技术包覆以形成用于控制释放的渗透治疗片剂。额外剂包括可生物降解或生物相容粒子或聚合物质，例如聚酯、聚胺酸、水凝胶、聚乙烯吡咯烷酮、聚酸酐、聚乙醇酸、乙烯-乙酸乙烯酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素、硫酸鱼精蛋白或丙交酯/乙交酯共聚物、聚乳酸交酯/乙交酯共聚物或乙烯乙酸乙烯酯共聚物，以便控制所施用组合物的递送。例如，口服剂可通过分别使用羟甲基纤维素或明胶微胶囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊来截留于由凝聚技术或由界面聚合制备的微胶囊中，或截留于胶体药物递送系统中。胶体分散系统包括大分子复合物、纳米胶囊、微球、微珠和包括水包油乳液、胶束、混合胶束和脂质体的基于脂质的系统。制备上文所提及的制剂的方法将是本领域技术人员显而易见的。
[0221]
用于口服使用的制剂还可以硬明胶胶囊形式呈现，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙、高岭土(kaolin)或微晶纤维素)混合；或以软明胶胶囊形式呈现，其中活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。
[0222]
水性悬浮液含有活性物质与适合于其制造的赋形剂的混杂物。此类赋形剂可为悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟基-丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯-吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；分散剂或润湿剂，例如天然产生的磷脂(例如卵磷脂)、或环氧烷与
脂肪酸的缩合产物(例如聚氧-乙烯硬脂酸酯)、或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物(例如十七亚乙基氧基十六醇)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂。
[0223]
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)中或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可添加甜味剂(例如上述那些甜味剂)和调味剂，以提供可口的口服制剂。
[0224]
适用于通过添加水来制备水性悬浮液的分散性散剂和颗粒提供活性成分与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂的混杂物。适合的分散剂或润湿剂和悬浮剂示例于本文中。
[0225]
本发明的药物组合物也可呈水包油乳液形式。油相可为植物油(例如橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)，或这些的混合物。适合的乳化剂可为天然存在的胶，例如阿拉伯胶或黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆、卵磷脂和衍生自脂肪酸的酯或偏酯；己糖醇酐，例如脱水山梨糖醇单油酸酯；以及偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。
[0226]
药物组合物通常包含治疗有效量的由本发明涵盖的pi3kγ抑制剂和一种或多种药学上和生理学上可接受的配制剂。适合的药学上可接受或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂包括(但不限于)抗氧化剂(例如抗坏血酸和硫酸氢钠)、防腐剂(例如苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、乳化剂、悬浮剂、分散剂、溶剂、填充剂、膨化剂、洗涤剂、缓冲剂、媒介物、稀释剂和/或佐剂。例如，适合的媒介物可为生理盐水溶液或柠檬酸盐缓冲盐水，其可能补充有用于肠胃外施用的药物组合物中常见的其他物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是另外的示例性媒介物。本领域技术人员将容易认识到多种可用于本文中涵盖的药物组合物和剂型中的缓冲液。典型缓冲液包括(但不限于)药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。例如，缓冲液组分可为水溶性物质，例如磷酸、酒石酸、乳酸、丁二酸、柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、谷氨酸和其盐。可接受的缓冲液包括例如tris缓冲液、n-(2-羟乙基)哌嗪-n'-(2-乙磺酸)(hepes)、2-(n-(n-吗啉基))乙磺酸(mes)、2-(n-(n-吗啉基))乙磺酸钠盐(mes)、3-(n-吗啉基))丙磺酸(mops)和n-三[羟甲基]甲基-3-氨基丙磺酸(taps)。
[0227]
在已配制药物组合物之后，可将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体或脱水或冻干粉末形式储存于无菌小瓶中。此类制剂可以即用形式、需要在使用之前重构的冻干形式、需要在使用之前稀释的液体形式或其他可接受的形式储存。在一些实施方案中，药物组合物提供于单次使用的容器(例如单次使用的小瓶、安瓿、针筒或自动注射器(类似于例如))中，而多次使用的容器(例如多次使用的小瓶)提供于其他实施方案中。
[0228]
制剂还可包括载体以使组合物免于快速降解或自身体排出，例如控制释放制剂，包括脂质体、水凝胶、前药和微囊封递送系统。例如，可采用单独或与蜡组合的时间延迟材料，例如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯。可使用任何药物递送设备来递送pi3kγ抑制剂，包括植入物(例如可植入泵)和导管系统、缓慢注射泵和装置，其都为本领域技术人员所熟知。
[0229]
通常皮下或肌肉内施用的储槽式注射液也可用于经限定时间段释放本文所公开
的pi3kγ抑制剂。储槽式注射液通常是基于固体或油并且通常包含本文中所阐述的制剂组分中的至少一者。本领域普通技术人员熟悉储槽式注射液的可能配制和用途。
[0230]
药物组合物可呈无菌可注射水性或油性悬浮液形式。这种悬浮液可根据已知技术使用本文中所提及的那些适合分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌可注射制剂也可为于无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如呈于1,3-丁二醇中的溶液形式。可采用的可接受稀释剂、溶剂和分散介质包括水、林格氏溶液(ringer's solution)、等张氯化钠溶液、cremophor el
tm
(basf,parsippany,nj)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)、乙醇、多元醇(例如，丙三醇、丙二醇和液体聚乙二醇)和其合适混合物。此外，无菌不挥发性油常规地用作溶剂或悬浮介质。出于这种目的，可采用任何温和不挥发性油，包括合成性单甘油酯或二甘油酯。此外，例如油酸的脂肪酸可用于制备可注射剂。特定可注射制剂的延长吸收可通过包括延迟吸收的剂(例如单硬脂酸铝或明胶)实现。
[0231]
本发明涵盖施用呈用于经直肠施用的栓剂形式的pi3kγ抑制剂。可通过将药物与适合的无刺激性赋形剂混合来制备栓剂，所述赋形剂在常温下为固体但在直肠温度下为液体并且因此将在直肠中熔融以释放药物。此类物质包括(但不限于)可可脂和聚乙二醇。
[0232]
本发明涵盖的pi3kγ抑制剂可呈目前已知或将来开发的任何其他适合的药物组合物(例如用于经鼻或吸入用途的喷雾剂)形式。
[0233]
施用途径
[0234]
本发明涵盖以任何适当方式施用pi3kγ抑制剂和其组合物。适合的施用途径包括口服、肠胃外(例如，肌肉内、静脉内、皮下(例如，注射或植入)、腹膜内、脑池内、关节内、脑内(脑实质内)和脑室内)、经鼻、经阴道、舌下、眼内、经直肠、表面(例如，透皮)、经颊和吸入。通常经皮下或肌肉内施用的储槽式注射液也可用于经限定时间段释放本文所公开的pi3kγ抑制剂。
[0235]
本发明的特定实施方案涵盖口服施用。
[0236]
组合疗法
[0237]
本发明涵盖pi3kγ抑制剂单独或与一种或多种活性治疗剂组合的用途。其他活性治疗剂可为小化学分子；大分子，例如蛋白质、抗体、肽体、肽、dna、rna或此类大分子的片段；或细胞或基因疗法。在这种组合疗法中，各种活性剂通常具有不同的互补作用机制。这种组合疗法可通过允许药剂中的一者或多者的剂量减少，从而减少或消除与药剂中的一者或多者相关的不良作用而尤其有利。此外，这种组合疗法可对潜在疾病、病症或疾患具有协同的治疗性或预防性效果。
[0238]
如本文中所使用，“组合”意在包括可分开施用的疗法，例如分开配制以进行单独施用(例如，当可在药盒中提供时)；和可以单一制剂(即“共制剂”)一起施用的疗法。
[0239]
在某些实施方案中，pi3kγ抑制剂依序施用或应用，例如其中一种药剂在一种或多种其他药剂之前施用。在其他实施方案中，pi3kγ抑制剂是同时施用，例如其中两种或更多种药剂在相同时间或大约在相同时间施用；所述两种或更多种药剂可存在于两种或更多种独立制剂中或组合成单一制剂(即共制剂)。不论所述两种或更多种药剂是依序还是同时施用，出于本发明的目的认为其应组合施用。
[0240]
本发明的pi3kγ抑制剂可与至少一种其他(活性)药剂以在所述情形下适当的任何方式组合使用。在一个实施方案中，在一段时间内维持用至少一种活性剂和至少一种本
发明的pi3kγ抑制剂的治疗。在另一个实施方案中，(例如在受试者稳定时)减少或停止至少一种活性剂的治疗，同时本发明的pi3kγ抑制剂的治疗维持恒定给药方案。在另一个实施方案中，(例如在受试者稳定时)减少或停止至少一种活性剂的治疗，同时减少本发明的pi3kγ抑制剂的治疗(例如，降低剂量、降低给药频率或缩短治疗方案)。在又一个实施方案中，(例如在受试者稳定时)减少或停止至少一种活性剂的治疗，并且增加本发明的pi3kγ抑制剂的治疗(例如，提高剂量、增加给药频率或延长治疗方案)。在又一个实施方案中，维持至少一种活性剂的治疗，并且减少或停止本发明的pi3kγ抑制剂的治疗(例如，降低剂量、降低给药频率或缩短治疗方案)。在又一个实施方案中，减少或停止至少一种活性剂的治疗和本发明的pi3kγ抑制剂的治疗(例如，降低剂量、降低给药频率或缩短治疗方案)。
[0241]
肿瘤学相关病症。本发明提供了用pi3kγ抑制剂和至少一种额外治疗或诊断剂来治疗和/或预防增生性疾患、癌症、肿瘤或癌变前疾病、病症或疾患的方法。在一些实施方案中，额外治疗或诊断剂是放射、免疫调节剂或化学治疗剂或诊断剂。可用于本发明中的适合的免疫调节剂包括cd40l、b7和b7rp1；刺激性受体的活化单克隆抗体(mab)，例如抗cd40、抗cd38、抗icos和4-ibb配体；树突状细胞抗原负载(体外或体内)；抗癌疫苗，例如树突状细胞癌症疫苗；细胞因子/趋化因子，例如il1、il2、il12、il18、elc/ccl19、slc/ccl21、mcp-1、il-4、il-18、tnf、il-15、mdc、ifna/b、m-csf、il-3、gm-csf、il-13和抗il-10；细菌性脂多醣(lps)；吲哚胺2,3-双加氧酶1(ido1)抑制剂；和免疫刺激寡核苷酸。
[0242]
在某些实施方案中，本发明提供了用于肿瘤生长的肿瘤抑制的方法，所述方法包括与信号转导抑制剂(sti)组合施用本文所描述的pi3kγ抑制剂以实现肿瘤生长的加和或协同抑止。如本文所用，术语“信号转导抑制剂”是指选择性抑制信号传导途径中的一个或多个步骤的药剂。本发明的信号转导抑制剂(sti)包括：(i)bcr/abl激酶抑制剂(例如)；(ii)表皮生长因子(egf)受体抑制剂，包括激酶抑制剂和抗体；(iii)her-2/neu受体抑制剂(例如)；(iv)akt家族激酶或akt途径的抑制剂(例如雷帕霉素(rapamycin))；(v)细胞周期激酶抑制剂(例如夫拉平度(flavopiridol))；和(vi)磷脂酰基肌醇激酶抑制剂。参与免疫调节的药剂也可与本文所描述的pi3kγ抑制剂组合使用以抑止癌症患者中的肿瘤生长。
[0243]
化学治疗剂的实例包括(但不限于)烷基化剂，例如噻替派和环磷酰胺；磺酸烷基酯，例如白消安、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，例如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa)；乙烯亚胺和甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基三聚氰胺；氮芥，例如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷酰胺、雌氮芥、异环磷酰胺、二氯甲二乙胺、二氯甲二乙胺氧化物盐酸盐、美法仑、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲(nitrosurea)，例如卡莫司汀、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，例如阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素c(cactinomycin)、卡奇霉素(calicheamicin)、卡拉比辛(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素d、道诺霉素、
地托比星(detorubicin)、6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸、多柔比星、表阿霉素、依索比星(esorubicin)、埃达霉素、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲菌素、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代谢物，例如氨甲蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-fu)；叶酸类似物，例如迪诺特宁(denopterin)、氨甲蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、曲美沙特；嘌呤类似物，例如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，例如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)、5-fu；雄激素，例如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺剂，例如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，例如亚叶酸(frolinic acid)；乙酰葡醛酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；安吖啶；贝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；艾福米辛(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；喷司他丁；苯来美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2
”‑
三氯三乙胺；尿烷(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯糖苷(ara-c)；环磷酰胺；噻替派；类紫杉醇，例如太平洋紫杉醇和多烯紫杉醇(docetaxel)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；氨甲蝶呤；铂和铂配位络合物，例如顺铂、卡铂和奥沙利铂；长春碱；依托泊苷(vp-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素c；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨(vinorelbine)；温诺平(navelbine)；诺安托(novantrone)；替尼泊苷；柔红霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；cpt11；拓扑异构酶抑制剂；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；视黄酸；埃斯波霉素(esperamicin)；卡培他滨(capecitabine)；蒽环霉素；精氨酸酶抑制剂(参见wo 2019/173188 a1和pct/us2019/061657)；以及以上物质中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0244]
化学治疗剂还包括用来调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，例如抗雌激素，包括例如他莫昔芬、那洛昔芬(raloxifene)、芳香酶抑制性4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)；和抗雄激素，例如阿比特龙(abiraterone)、恩杂鲁胺(enzalutamide)、氟他胺、尼鲁胺(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、亮丙瑞林和戈舍瑞林；和以上物质中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。在某些实施方案中，组合疗法包含包括一种或
多种化学治疗剂的化疗方案。在某些实施方案中，组合疗法包含施用激素或相关激素剂。
[0245]
可与pi3kγ抑制剂组合使用的其他治疗模态包括放射线疗法、针对肿瘤抗原的单克隆抗体、单克隆抗体与毒素的复合物、t细胞佐剂、骨髓移植或抗原呈递细胞(例如树突状细胞疗法)，包括用于刺激此类抗原呈递细胞的tlr激动剂。
[0246]
在某些实施方案中，本发明涵盖本文中所描述的化合物与调节腺苷水平的药剂组合的用途。此类治疗剂可对催化atp转化为腺苷的胞外核苷酸起作用，包括将atp水解为adp并且将adp水解为amp的胞外核苷三磷酸二磷酸水解酶1(entpd1，也称为cd39或分化簇(cluster of differentiation)39)和将amp转化为腺苷的胞外5'-核苷酸酶(nt5e或5nt，也称为cd73或分化簇73)。cd39和cd73的酶促活性在校准递送至各种细胞(例如，免疫细胞)的嘌呤能信号的持续时间、量值和化学性质方面发挥关键作用。在一个实施方案中，本发明涵盖与例如wo 2017/120508、wo 2018/094148、wo 2018/067424和wo 2020/046813中所描述那些的cd73抑制剂组合。
[0247]
或者，此类治疗剂可为腺苷2受体(a2r)拮抗剂。腺苷可结合至四种不同g蛋白偶联的受体并且活化所述g蛋白偶联的受体：a1r、a
2a
r、a
2b
r和a3r。将腺苷结合至在t细胞、自然杀手细胞和骨髓细胞(例如树突状细胞)上表达的a
2a
r受体导致胞内环状amp水平增加并削弱此类细胞的成熟和/或活化。这个过程显著削弱免疫系统抵抗癌细胞的活化。另外，a
2a
r涉及选择性地增强抗炎细胞因子，从而促进pd-1和ctla-4的上调，促进lag-3和foxp3 调节性t细胞的产生并介导对调节性t细胞的抑制。本文中进一步论述pd-1、ctla-4和其他免疫检查点。在一个实施方案中，腺苷受体激动剂可为双腺苷受体。示例性腺苷受体激动剂描述于wo/2018/136700、wo 2018/204661或wo 2020/023846中。
[0248]
在某些实施方案中，本发明涵盖本文中所描述的化合物与过继性细胞疗法(一种向癌症患者施用具有抗肿瘤活性的免疫细胞的新型且有前景的个性化免疫疗法形式)组合的用途。正使用经工程化以表达例如嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor；car)或t细胞受体(tcr)的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)和t细胞来探索过继性细胞疗法。过继性细胞疗法通常涉及从个体采集t细胞，对其进行遗传修饰以靶向特异性抗原或增强其抗肿瘤效果，使其扩增至充足数目，以及将遗传修饰的t细胞输注至癌症患者中。t细胞可采集自稍后将向其重新输注经扩增细胞的患者(例如自体)或可采集自供体患者(例如同种异体)。
[0249]
在某些实施方案中，本发明涵盖本文所描述的化合物与基于rna干扰的疗法组合以使基因表达沉默的用途。rnai开始将较长双链rna切割成小干扰rna(sirna)。sirna中的一条链并入到被称为rna诱导沉默复合物(risc)的核糖核蛋白复合物中，其随后用于识别与所并入sirna链至少部分互补的mrna分子。risc可结合至或切割mrna，其两者都抑制翻译。
[0250]
免疫检查点抑制剂。本发明涵盖本文所描述的pi3kγ功能抑制剂与免疫检查点抑制剂组合的用途。
[0251]
所有癌症所特有的极大数目的基因和表观遗传变异提供免疫系统可用于区分肿瘤细胞与其正常对应物的不同组的抗原。在t细胞的情况下，经由t细胞受体(tcr)的抗原识别起始的反应的最终幅度(例如细胞因子产生或增殖的水平)和质量(例如所产生免疫反应的类型，例如细胞因子产生模式)是通过共刺激信号与抑制信号(免疫检查点)之间的平衡调节。在正常生理条件下，免疫检查点对于自身免疫的预防(即，自身耐受性的维持)并且还
对于在免疫系统对病原性感染作出反应时使组织免受损伤来说是至关重要的。免疫检查点蛋白的表达可通过肿瘤失调作为重要的免疫抵抗机制。
[0252]
t细胞由于以下而为治疗学上操控内源性抗肿瘤免疫的主要工作焦点：i)其选择性识别所有细胞区室中衍生自蛋白质的肽的能力；ii)其直接识别和杀死抗原表达细胞(通过cd8 效应t细胞；也称为细胞毒性t淋巴细胞(ctl))的能力；以及iii)其通过整合适应性和先天性效应机制的cd4 辅助t细胞来协调不同免疫反应的能力。
[0253]
在临床配置中，引起抗原特异性t细胞反应放大的免疫检查点阻断已显示为人类癌症疗法中有前景的方法。
[0254]
t细胞介导的免疫包括多个依序步骤，其中的每一者通过均衡刺激和抑制信号来调节以便使反应优化。虽然免疫反应中几乎所有抑制信号最终调节细胞内信号传导途径，但许多经由膜受体起始，其配体是膜结合的或可溶的(细胞因子)。虽然调节t细胞活化的共刺激和抑制受体和配体相对于正常组织通常不在癌症中过度表达，但在组织中调节t细胞效应功能的抑制配体和受体通常在肿瘤细胞上或在与肿瘤微环境相关的未经转化细胞上过度表达。可溶和膜结合受体-配体免疫检查点的功能可使用激动性抗体(对于共刺激途径)或拮抗性抗体(对于抑制途径)调节。因此，与目前批准用于癌症疗法的大多数抗体相反，阻断免疫检查点的抗体不直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体以便增强内源抗肿瘤活性。[参见pardoll,(2012年4月)nature rev.cancer 12:252-64]。
[0255]
作为阻断的候选物的免疫检查点(配体和受体)的实例(其中一些在各种类型的肿瘤细胞中选择性上调)包括pd-1(程序性细胞死亡蛋白1)；pd-l1(pd1配体)；btla(b和t淋巴细胞衰减因子)；ctla-4(细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4)；tim-3(t细胞膜蛋白3)；lag-3(淋巴细胞活化基因3)；tigit(具有ig和itim结构域的t细胞免疫受体)；和杀手抑制受体，其可基于其结构特征分成两种类别：i)杀手细胞免疫球蛋白样受体(kir)和ii)c型凝集素受体(ii型跨膜受体家族的成员)。其他定义较不明确的免疫检查点已描述于文献中，包括受体(例如2b4(也称为cd244)受体)和配体(例如某些b7家族抑制配体，例如b7-h3(也称为cd276)和b7-h4(也称为b7-s1、b7x和vctn1))。[参见pardoll,(2012年4月)nature rev.cancer 12:252-64]。
[0256]
本发明涵盖本文所描述的pi3kγ功能抑制剂与前述免疫检查点受体和配体以及有待描述的免疫检查点受体和配体的抑制剂组合的用途。免疫检查点的某些调节剂目前经批准，而许多其他调节剂处于开发中。完全人源化ctla-4单克隆抗体伊匹单抗(ipilimumab)(bristol-myers squibb)在2011年经批准用于治疗黑色素瘤时成为在美国获得监管批准的第一种免疫检查点抑制剂。包含ctla-4和抗体(ctla-4-ig；阿巴西普(abatcept)(bristol-myers squibb))的融合蛋白已用于治疗类风湿性关节炎，并且其他融合蛋白已显示出在对爱泼斯坦-巴尔病毒敏感的肾移植患者中有效。获得监管批准的另一类免疫检查点抑制剂是针对pd-1和其配体pd-l1和pd-l2。经批准的抗pd1抗体包括用于各种癌症的纳武单抗(nivolumab)(opdivo；bristol-myers squibb)和派姆单抗(pembrolizumab)(merck)，所述癌症包括鳞状细胞癌、经典霍奇金淋巴瘤和尿路上皮癌。经批准的抗pd-l1抗体包括用于某些癌症的阿维鲁单抗(avelumab)(emd serono&pfizer)、阿特珠单抗(atezolizumab)(
roche/genentech)和德瓦鲁单抗(durvalumab)(astrazeneca)，所述癌症包括尿路上皮癌。虽然不存在靶向tigit或其配体cd155和cd112的经批准治疗剂，但处于开发中的那些治疗剂包括bms-986207(bristol-myers squibb)、mtig7192a/rg6058(roche/genentech)和omp-31m32(oncomed)。
[0257]
在本发明的一个方面，所要求保护的pi3kγ抑制剂与免疫肿瘤学药剂组合，所述药剂是t细胞上(i)刺激(包括共刺激)受体的激动剂或(ii)抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，其均引起抗原特异性t细胞反应放大。刺激和抑制分子中的某些是免疫球蛋白超家族(igsf)的成员。结合至共刺激或共抑制受体的膜结合配体的一个重要家族是b7家族，其包括b7-1、b7-2、b7-h1(pd-l1)、b7-dc(pd-l2)、b7-h2(icos-l)、b7-h3、b7-h4、b7-h5(vista)、b7-h6和b7-h7(hhla2)。结合至共刺激或共抑制受体的另一膜结合配体家族是结合至同源tnf受体家族成员的分子的tnf家族，其包括cd40和cd4ol、ox-40、ox-40l、cd70、cd27l、cd30、cd3ol、4-1bbl、cd137(4-1bb)、trail/apo2-l、trailr1/dr4、trailr2/dr5、trailr3、trailr4、opg、rank、rankl、tweakr/fn14、tweak、baffr、edar、xedar、taci、april、bcma、lt13r、light、dcr3、hvem、vegi/tl1a、tramp/dr3、edar、eda1、xedar、eda2、tnfr1、淋巴毒素a/tnf13、tnfr2、tnfa、lt13r、淋巴毒素a 1132、fas、fasl、relt、dr6、troy、ngfr。
[0258]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是抑制t细胞活化的细胞因子(例如il-6、il-10、tgf-b、vegf和其他免疫抑制细胞因子)或刺激t细胞活化以便刺激免疫反应的细胞因子。
[0259]
在一个方面，t细胞反应可通过所公开的pi3kγ抑制剂与以下中的一者或多者的组合刺激：(i)抑制t细胞活化的蛋白质的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，例如ctla-4、pd-1、pd-l1、pd-l2、lag-3、tim-3、半乳糖凝集素9、ceacam-1、btla、cd69、半乳糖凝集素-1、tigit、cd113、gpr56、vista、2b4、cd48、garp、pd1h、lair1、tim-1和tim-4；和/或(ii)刺激t细胞活化的蛋白质的激动剂，例如b7-1、b7-2、cd28、4-1bb(cd137)、4-1bbl、icos、icos-l、ox40、ox40l、gitr、gitrl、cd70、cd27、cd40、dr3和cd2。可与本发明的pi3kγ抑制剂组合用于治疗癌症的其他药剂包括nk细胞上的抑制受体的拮抗剂或nk细胞上的活化受体的激动剂。例如，本文中的化合物可与kir的拮抗剂(例如利瑞路单抗(lirilumab))组合。
[0260]
用于组合疗法的其他药剂包括抑制或耗尽巨噬细胞或单核细胞的药剂，包括(但不限于)csf-1r拮抗剂，例如csf-1r拮抗剂抗体，包括rg7155(wo11/70024、wo11/107553、wo/131407、wo13/87699、wo13/119716、wo13/132044)或fpa-008(wo11/140249；wo13169264；wo14/036357)。
[0261]
在另一方面，所公开的pi3kγ抑制剂可与以下中的一者或多者一起使用：连接阳性共刺激受体的激动剂；减弱经由抑制受体的信号传导的阻断剂；拮抗剂；和全身性增加抗肿瘤t细胞的频率的一种或多种药剂；克服肿瘤微环境内不同免疫抑止途径(例如阻断抑制受体接合(例如pd-ll/pd-1相互作用)、耗尽或抑制tregs(例如使用抗cd25单克隆抗体(例如达利珠单抗(daclizumab))或通过离体抗cd25珠耗尽)或逆转/防止t细胞失能或耗竭)的药剂；以及触发肿瘤位点处的先天性免疫活化和/或炎症的药剂。
[0262]
在一个方面，免疫肿瘤学药剂是ctla-4拮抗剂，例如拮抗性ctla-4抗体。适合的ctla-4抗体包括例如(伊匹单抗)或曲美木单抗(tremelimumab)。
[0263]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是pd-1拮抗剂，例如拮抗性pd-1抗体。适合的pd-1抗
体包括例如(纳武单抗)、(派姆单抗)或medi-0680(amp-514；wo2012/145493)或赛帕利单抗(zimberelimab)。免疫肿瘤学药剂还可包括皮立珠单抗(pidilizumab)(ct-011)。靶向pd-1受体的另一种方法是由pd-l2(b7-dc)的细胞外结构域与iggl的fc部分融合而构成的重组蛋白，其被称为amp-224。
[0264]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是pd-ll拮抗剂，例如拮抗性pd-ll抗体。适合的pd-ll抗体包括例如(阿特珠单抗；mpdl3280a；wo2010/077634)、德瓦鲁单抗(medi4736)、bms-936559(wo2007/005874)和msb0010718c(wo2013/79174)。
[0265]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是lag-3拮抗剂，例如拮抗性lag-3抗体。适合的lag3抗体包括例如bms-986016(wo10/19570、wo14/08218)或imp-731或imp-321(wo08/132601、wo09/44273)。
[0266]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是cd137(4-1bb)激动剂，例如激动性cd137抗体。适合的cd137抗体包括例如优瑞路单抗(urelumab)和pf-05082566(wo12/32433)。
[0267]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是gitr激动剂，例如激动性gitr抗体。适合的gitr抗体包括例如bms-986153、bms-986156、trx-518(wo06/105021、wo09/009116)和mk-4166(wo11/028683)。
[0268]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是ox40激动剂，例如激动性ox40抗体。适合的ox40抗体包括例如medi-6383或medi-6469。
[0269]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是ox40l拮抗剂，例如拮抗性ox40抗体。适合的ox40l拮抗剂包括例如rg-7888(wo06/029879)。
[0270]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是cd40激动剂，例如激动性cd40抗体。在又一实施方案中，免疫肿瘤学药剂是cd40拮抗剂，例如拮抗性cd40抗体。适合的cd40抗体包括例如鲁卡木单抗(lucatumumab)或达西珠单抗(dacetuzumab)。
[0271]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是cd27激动剂，例如激动性cd27抗体。适合的cd27抗体包括例如瓦里木单抗(varlilumab)。
[0272]
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是mga271(针对b7h3)(wo11/109400)。
[0273]
本发明涵盖以上物质中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0274]
代谢和心脏血管疾病。本发明提供了用pi3kγ抑制剂和至少一种额外治疗或诊断剂来治疗和/或预防某些心脏血管和/或代谢相关疾病、病症和疾患以及与其相关的病症的方法。
[0275]
可用于治疗高胆固醇血症(以及动脉粥样硬化)的组合疗法的治疗剂的实例包括他汀类药物(statin)(例如药物(statin)(例如和)，其抑制胆固醇的酶促合成；胆汁酸树脂(例如)，其抑制胆固醇的酶促合成；胆汁酸树脂(例如和)，其螯合胆固醇并防止其吸收；依泽替米贝(ezetimibe)其阻断胆固醇吸收；纤维酸(例如tricor)，其减少甘油三酯并且可适当地增加hdl；烟酸(例如)，其适当地降低ldl胆固醇和甘油三酯；和/或前述的组合(例如(依泽替米贝与辛伐他汀(simvastatin)))。可为用于与本文所描述的pi3kγ抑制剂组合使用的候选物的替代胆固醇治疗剂包括各种补充剂和草本植物(例如大蒜、普利醇(policosanol)和印度香胶树(guggul))。
[0276]
本发明涵盖以上物质中的任一者的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
[0277]
免疫和炎性相关病症。本发明提供了用pi3kγ抑制剂和至少一种额外治疗或诊断剂来治疗和/或预防免疫相关疾病、病症和疾患以及具有炎性成分的疾病、病症和疾患的方法。
[0278]
可用于组合疗法的治疗剂的实例包括(但不限于)以下：非类固醇抗炎药(nsaid)，例如阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)和其他丙酸衍生物(阿明洛芬(alminoprofen)、苯噁洛芬(benoxaprofen)、布氯酸(bucloxic acid)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟洛芬(fluprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚洛芬(indoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、咪洛芬(miroprofen)、萘普生(naproxen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、吡洛芬(pirprofen)、普拉洛芬(pranoprofen)、舒洛芬(suprofen)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)和硫噁洛芬(tioxaprofen))、乙酸衍生物(吲哚美辛(indomethacin)、阿西美辛(acemetacin)、阿氯芬酸(alclofenac)、环氯茚酸(clidanac)、双氯芬酸(diclofenac)、芬氯酸(fenclofenac)、芬克洛酸(fenclozic acid)、芬替酸(fentiazac)、弗洛芬克(fuirofenac)、异丁芬酸(ibufenac)、伊索克酸(isoxepac)、奥西平酸(oxpinac)、舒林酸(sulindac)、硫平酸(tiopinac)、托美汀(tolmetin)、齐多美辛(zidometacin)和佐美酸(zomepirac))、芬那酸(fenamic acid)衍生物(氟芬那酸(flufenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)、氟尼酸(niflumic acid)和托芬那酸(tolfenamic acid))、联苯羧酸衍生物(二氟尼柳(diflunisal)和氟苯柳(flufenisal))、昔康(oxicam)(伊索昔康(isoxicam)、吡罗昔康(piroxicam)、舒多昔康(sudoxicam)和替诺昔康(tenoxican))、水杨酸盐(乙酰基水杨酸、柳氮磺胺吡啶)和二氢吡唑酮(阿帕宗(apazone)、苯哌隆(bezpiperylon)、非普拉宗(feprazone)、莫非布宗(mofebutazone)、羟布宗(oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮)。其他组合包括环加氧酶-2(cox-2)抑制剂。
[0279]
用于组合的其他活性剂包括类固醇，例如泼尼松龙、泼尼松、甲泼尼龙、倍他米松(betamethasone)、地塞米松或氢皮质酮(hydrocortisone)。这种组合可尤其有利，因为可通过使需要的类固醇剂量逐渐减小来减少或甚至消除类固醇的一种或多种不良作用。
[0280]
可以组合形式用于治疗例如类风湿性关节炎的活性剂的其他实例包括细胞因子抑制性抗炎药(csaid)；针对其他人类细胞因子或生长因子的抗体或其他人类细胞因子或生长因子的拮抗剂，所述人类细胞因子或生长因子例如tnf、lt、il-10、il-2、il-6、il-7、il-8、il-15、il-16、il-18、emap-ii、gm-csf、fgf或pdgf。
[0281]
活性剂的特定组合可在自身免疫和后续炎性级联反应中的不同点处干扰，并且包括tnf拮抗剂，例如嵌合、人源化或人类tnf抗体、抗tnf抗体片段(例如，cdp870)和可溶性p55或p75 tnf受体、其衍生物、p75tnfrigg或p55tnfr1gg可溶性il-13受体(sil-13)以及tnfa转化酶(tace)抑制剂；类似地，il-1抑制剂(例如，白细胞介素-1转化酶抑制剂)可为有效的。其他组合包括白细胞介素11、抗p7s和p选择素糖蛋白配体(psgl)。可用于与本文所描述的pi3kγ抑制剂组合的药剂的其他实例包括干扰素-131a干扰素-13lb(betaseron)；克帕松(copaxone)；高压氧；静脉内免疫球蛋白；克拉屈滨(clabribine)；和针对其他人类细胞因子或生长因子
的抗体或其他人类细胞因子或生长因子的拮抗剂(例如针对cd40配体和cd80的抗体)。
[0282]
给药
[0283]
本发明的pi3kγ抑制剂可以取决于例如以下因素的量向受试者施用：施用目标(例如，所需消退程度)；向其施用制剂的受试者的年龄、体重、性别以及健康和身体状况；施用途径；以及疾病、病症、疾患或其症状的性质。给药方案还可考虑与施用的药剂相关的任何不良作用的存在、性质和程度。有效剂量和给药方案可容易地由例如安全性和剂量递增试验、体内研究(例如动物模型)和本领域技术人员已知的其他方法确定。
[0284]
一般而言，给药参数规定剂量小于可对受试者不可逆地有毒的量(最大耐受剂量(mtd))并且不小于产生对受试者的可测量效果需要的量。这些量由例如与adme相关的药物动力学和药效学参数，考虑施用途径和其他因素来确定。
[0285]
有效剂量(ed)是在服用药剂的一部分受试者中产生治疗反应或所需效果的药剂的剂量或量。药剂的“中值有效剂量”或ed50是在施用药剂的50％群体中产生治疗反应或所需效果的药剂的剂量或量。尽管ed50常用作药剂效果的合理预期的量度，其不必需是临床医师可考虑所有相关因素认为适当的剂量。因此，在一些情况下有效量大于计算的ed50，在其他情况下有效量小于计算的ed50，并且在另外其他情况下有效量与计算的ed50相同。
[0286]
另外，本发明的pi3kγ抑制剂的有效剂量可为当以一次或多次剂量向受试者施用时产生相对于健康受试者的所需结果的量。例如，对于经历特定病症的受试者，有效剂量可为将所述病症的诊断参数、量测值、标志物等改进至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或大于90％的剂量，其中100％定义为由正常受试者展现的诊断参数、量测值、标志物等。
[0287]
在某些实施方案中，本发明涵盖的pi3kγ抑制剂可以每天每公斤受试者体重约0.01mg至约50mg或约1mg至约25mg的剂量水平每天施用(例如，经口施用)一次或多次，以获得所需治疗效果。
[0288]
对于口服药剂的施用，组合物可以含有1.0至1000毫克活性成分，特别是1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克活性成分的片剂、胶囊等形式提供。
[0289]
在某些实施方案中，所需pi3kγ抑制剂的剂量含于“单位剂型”中。短语“单位剂型”是指物理离散单元，每个单元含有足以产生所需效果的单独或与一种或多种额外药剂组合的预定量的pi3kγ抑制剂。应了解，单位剂型的参数将取决于特定药剂和待实现的效果。
[0290]
药盒
[0291]
本发明还涵盖包含本文所描述的化合物和其药物组合物的药盒。药盒通常呈如下文所描述的容纳各种组分的实体结构形式，并且可用于例如实践上文所描述的方法。
[0292]
药盒可包括本文所公开的化合物中的一者或多者(例如提供于无菌容器中)，所述化合物可呈适合于向受试者施用的药物组合物形式。本文所描述的化合物可以随时可用的形式(例如片剂或胶囊)或以例如需要在施用之前重构或稀释的形式(例如散剂)提供。当本文所描述的化合物呈需要使用者重构或稀释的形式时，药盒还可包括与本文所描述的化合物一起或分开封装的稀释剂(例如无菌水)、缓冲液、药学上可接受的赋形剂等。在涵盖组合
疗法时，药盒可单独地含有若干药剂或者其可已经在药盒中组合。药盒的每个组分可密封于个别容器内，并且所有各种容器可在单一包装内。本发明的药盒可被设计用于必需适当地维持其中容纳的组分的情况(例如制冷或冻结)。
[0293]
药盒可含有标签或包装插页，其包括其中组分的鉴定信息和其使用说明(例如给药参数；活性成分的临床药理学，包括作用机制、药物动力学和药效学、不良作用、禁忌等)。标签或插页可包括制造商信息，例如批号和有效期。标签或包装插页可例如整合到容纳组分的实体结构中，单独地含于实体结构内，或粘附至药盒的组件(例如，安瓿、导管或小瓶)上。
[0294]
标签或插页可另外包括或被并入计算机可读介质，例如磁盘(例如硬盘、卡、存储磁盘)；光盘，例如cd-rom/ram或dvd-rom/ram、dvd、mp3、磁带；或电存储介质，例如ram和rom，或这些的混合，例如磁/光学存储介质、flash介质或记忆型卡。在一些实施方案中，药盒中并不存在实际说明，但提供了例如经由互联网从远程来源获得说明的方式。
[0295]
实验
[0296]
提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供如何进行和使用本发明的完整公开内容和描述，并且不旨在限制本发明人视为其发明的内容的范围，其也不旨在表示进行以下实验或者它们是全部可进行的实验。应理解，不一定执行以现在时书写的示例性描述，而是可执行描述以产生其中描述的性质的数据等。已尽力确保关于所用数字(例如量、温度等)的准确度，但应考虑一些实验误差和偏差。
[0297]
除非另外指示，否则份数是重量份，分子量是重量平均分子量，温度以摄氏度(℃)为单位，并且压力是大气压或近大气压。使用标准缩写，包括以下：wt＝野生型；bp＝碱基对；kb＝千碱基；nt＝核苷酸；aa＝氨基酸；s或sec＝秒；min＝分钟；h或hr＝小时；ng＝纳克；μg＝微克；mg＝毫克；g＝克；kg＝千克；dl或dl＝分升；μl或μl＝微升；ml或ml＝毫升；1或l＝升；μm＝微摩尔；mm＝毫摩尔；m＝摩尔；rt＝室温；kda＝千道尔顿；i.m.＝肌肉内；i.p.＝腹膜内；sc或sq＝皮下；qd＝每日一次；bid＝每日两次；qw＝每周一次；qm＝每月一次；hplc＝高效液相色谱法；bw＝体重；u＝单位；ns＝无统计显著性；pbs＝磷酸盐缓冲盐水；ihc＝免疫组织化学；dmem＝达尔伯克改良伊格尔培养基(dulbeco's modification of eagle's medium)；edta＝乙二胺四乙酸。
[0298]
材料和方法
[0299]
以下一般材料和方法在指示时使用或者可用于以下实施例中：
[0300]
分子生物学中的标准方法描述于科学文献中(参见例如sambrook和russell(2001)molecular cloning,第3版,cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.；和ausubel等人,(2001)current protocols in molecular biology,第1-4卷,john wiley and sons,inc.new york,n.y.，其描述细菌细胞和dna突变诱发中的克隆(第1卷)、哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、糖缀合物和蛋白质表达(第3卷)和生物信息(第4卷))。
[0301]
科学文献描述了用于蛋白质纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱法、电泳、离心和结晶，以及化学分析、化学修饰、翻译后修饰、产生融合蛋白和蛋白质的糖基化(参见例如coligan等人,(2000)current protocols in protein science,第1-2卷,john wiley and sons,inc.,ny)。
[0302]
用于测定例如抗原片段、前导序列、蛋白质折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的套装软件和数据库可获得(参见例如gcg wisconsin package(accelrys,inc.,san diego,ca)；和decyphertm(timelogic corp.,crystal bay,nv)。
[0303]
文献中充满了可用作本文中所描述的化合物的评估的基础的测定法和其他实验技术。
[0304]
实施例
[0305]
实施例1：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0306][0307]
步骤a：向氰基乙酸甲酯(44.1ml，500mmol)、koac(85.9g，875mmol)和i-proh(500ml)的混合物中添加三氯乙腈(50.1ml，500mmol)。将反应混合物在室温下搅拌14h。加入h2o(675ml)，并且通过过滤收集所形成固体，用h2o(500ml)洗涤，并真空干燥，得到呈白色固体状的所需产物(93.8g；77％)。
[0308]
步骤b：在0℃下向步骤a的产物(93.8g，385mmol)、koac(56.7g，578mmol)和dmf(385ml)的混合物中滴加单水合肼(28.0ml，578mmol)。将混合物在室温下搅拌1h，然后在110℃下搅拌15h。使混合物冷却，并通过过滤去除固体，用dmf(100ml)洗涤滤饼。将滤液浓缩至粘稠膜状物。残余物用h2o(720ml)重结晶，并用h2o(500ml)洗涤所收集固体。真空干燥
固体，得到呈淡棕色固体状的所需产物(37.6g，63％)。
[0309]
步骤c：在室温下向步骤b的产物(31.2g，200mmol)、1,3-二甲基尿嘧啶(28.0g，200mmol)和etoh(700ml)的混合物中加入naoet(299ml，800mmol，21重量％于etoh中)。将反应混合物在回流下搅拌14h，然后使其冷却。通过过滤收集固体，用etoh洗涤，并真空干燥，得到呈棕色固体状的所需产物的钠盐(44.8g；92％；乙酯与甲酯的约9:1混合物)。在室温下以60ml/min的速率向所需产物的钠盐(37.5g，154mmol)和h2o(375ml)的混合物中加入2m hcl
(水溶液)
(76.8ml，154ml)。将混合物在室温下搅拌15分钟(水相的ph应为约4)。通过过滤收集所沉淀的固体，用h2o洗涤，并真空干燥，得到呈棕色固体状的所需产物的中性形式(28.2g；83％)。
[0310]
步骤d：在室温下向步骤c的产物(26.0g，117mmol)、氯化苯甲基三乙基铵(26.6g，117mmol)和二噁烷(234ml)的混合物中加入pocl3(32.7ml，351mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌14h，然后使其冷却。在室温下在搅拌下将混合物倒入h2o(1.17l)中。谨慎添加固体nahco3(147g)，直至ph呈中性。加入etoac(1l)，并过滤混合物以去除任何悬浮固体。分离各相并用etoac(1l)萃取水相。合并的有机相经na2so4干燥并浓缩，得到呈淡棕色固体状的所需产物(2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯)(24.9g；89％)。
[0311]
步骤e：将4-溴-2,6-二甲基苯甲酸甲酯(24.7g，102mmol)、nbs(20.8g，117mmol)、bpo(3.28g，10.2mmol，75重量％于h2o中)和ccl4(406ml)的混合物在回流下搅拌20h。冷却后，加入h2o(100ml)和盐水(100ml)。有机相经na2so4干燥，浓缩，并以粗物质形式用于下一步骤中。
[0312]
步骤f：将步骤e的粗产物(102mmol)、(s)-1-环丙基乙胺(13.0g，153mmol)、b(oh)3(6.30g，102mmol)、k2co3(42.3g，306mmol)和ch3cn(406ml)的混合物在60℃下搅拌2h。使混合物冷却，通过过滤去除固体，并浓缩有机相。粗物质通过柱色谱法(sio2，0至20％etoac/己烷)纯化，得到呈灰白色固体状的所需产物(15.8g；53％)。
[0313]
步骤g：在n2下向步骤f的产物(15.8g，53.8mmol)、b2pin2(13.7g，53.8mmol)、pdcl2(dppf)(1.97g，2.69mmol)和koac(10.6g，108mmol)的混合物中加入经脱气的二噁烷(269ml)。将反应混合物在100℃下搅拌2h。冷却后，加入mtbe(250ml)，通过过滤去除固体，并浓缩有机相。粗物质通过柱色谱法(sio2，0至30％etoac/己烷)纯化，得到呈灰白色固体状的所需产物(15.8g；86％)。
[0314]
步骤h：在n2下向步骤g的产物(4.80g，20.0mmol)、步骤d的产物(6.83g，20.0mmol)、pdcl2(dppf)(732mg，1.00mmol)和k2co3(5.53g，40.0mmol)的混合物中加入经脱气的4:1二噁烷:h2o混合物(100ml)。将反应混合物在100℃下搅拌1h。冷却后，加入盐水(20ml)和19:1的ch2cl2:meoh(500ml)。有机相经na2so4干燥，浓缩，并通过柱色谱法((sio2，0至10％meoh/ch2cl2)和(0至50％丙酮/ch2cl2))纯化两次，得到呈黄色固体状的所需产物(4.02g；48％)。
[0315]
步骤i：在室温下向步骤h的产物(4.02g，9.58mmol)和etoh(48ml)的混合物中加入lioh(9.58ml，28.8mmol，3m于h2o中)。将反应混合物在80℃下搅拌1h。使混合物冷却并减压去除etoh。加入h2o(200ml)，并用2m hcl
(水溶液)
(约14ml)将混合物酸化至ph2-3。通过过滤收集固体，用h2o洗涤，并真空干燥，得到呈黄色固体状的所需产物(3.49g；93％)。
[0316]
步骤j：在室温下向步骤i的产物(78mg，0.20mmol)、反-3-氨基环丁醇盐酸盐
(27mg，0.22mmol)、水合hobt(34mg，0.22mmol)、et3n(138μl，1.00mmol)和dmf(1ml)的混合物中加入edci
·
hcl(58mg，0.30mmol)。将反应混合物在40℃下搅拌2h并加入h2o(20ml)。通过过滤收集所形成的固体并用h2o洗涤。粗物质通过柱色谱法(sio2，0至10％meoh/ch2cl2)纯化，得到呈黄色固体状的所需产物(70mg；76％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.20(s,1h),8.12(d,j＝6.9hz,1h),8.10(s,1h),7.64(d,j＝7.2hz,1h),6.54(s,2h),5.18(d,j＝5.4hz,1h),4.59(s,2h),4.50-4.39(m,2h),3.59(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),2.72(s,3h),2.37-2.23(m,4h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.11(m,1h),0.64-0.54(m,1h),0.48-0.34(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
25h29
n6o3的esi ms[m h]

，计算值461.2，实验值461.1。
[0317]
实施例2：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0318][0319]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.18(s,1h),8.08(s,1h),7.92(d,j＝7.6hz,1h),7.63(d,j＝7.2hz,1h),6.55(s,2h),4.58(s,2h),4.20(s,1h),3.86-3.74(m,1h),3.59(dq,j＝8.6,6.8hz,1h),2.72(s,3h),1.86-1.69(m,4h),1.69-1.58(m,2h),1.51-1.40(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.11(m,4h),0.64-0.54(m,1h),0.48-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
28h35
n6o3的esi ms[m h]

，计算值503.3，实验值503.2。
[0320]
实施例3：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1s,3s)-3-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0321][0322]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.16(s,1h),8.06(s,1h),7.94(d,j＝7.4hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),6.55(s,2h),4.65(d,j＝3.8hz,1h),4.58(s,2h),4.46(h,j＝6.9hz,1h),4.37-4.30(m,1h),3.59(dq,j＝9.1,6.8hz,1h),2.71(s,3h),2.27-2.15(m,1h),2.07-1.95(m,2h),1.75(dt,j＝12.9,6.2hz,1h),1.64-1.48(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.12(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.1。
[0323]
实施例4：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-{[反-3-羟基环丁基]甲基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0324][0325]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.20(s,1h),8.07(s,1h),7.90(t,j＝5.7hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),6.57(s,2h),5.01(d,j＝6.3hz,1h),4.58(s,2h),4.30(h,j＝6.8hz,1h),3.59(dq,j＝9.4,6.8hz,1h),3.46(dd,j＝7.4,5.7hz,2h),2.72(s,3h),2.45-2.32(m,1h),2.19-2.09(m,2h),2.07-1.97(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.11(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.2。
[0326]
实施例5：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,3r)-3-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0327][0328]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.17(s,1h),8.06(s,1h),7.94(d,j＝7.4hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),6.55(s,2h),4.65(d,j＝3.8hz,1h),4.59(s,2h),4.46(h,j＝6.9hz,1h),4.33(tq,j＝6.9,3.5hz,1h),3.59(dq,j＝9.1,6.8hz,1h),2.72(s,3h),2.27-2.15(m,1h),2.07-1.95(m,2h),1.75(dt,j＝12.9,6.2hz,1h),1.64-1.49(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.12(m,1h),0.63-0.54(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.1。
[0329]
实施例6：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基-3-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0330][0331]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.20(s,1h),8.12(s,1h),8.11(s,1h),7.63(d,j＝7.2hz,1h),6.55(s,2h),5.01(s,1h),4.58(s,2h),4.54-4.43(m,1h),3.60(dq,j＝9.1,6.8hz,1h),2.73(s,3h),
2.50-2.45(m,2h),2.06-1.98(m,2h),1.39(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.11(m,1h),0.62-0.54(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.2。
[0332]
实施例7：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0333][0334]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.14(s,1h),8.02(s,1h),7.99(d,j＝7.5hz,1h),7.58(d,j＝7.1hz,1h),6.58(s,2h),4.57(s,2h),4.25(s,1h),4.08-3.98(m,1h),3.60(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),2.71(s,3h),2.03-1.89(m,2h),1.65-1.46(m,6h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.20-1.12(m,1h),1.10(s,3h),0.64-0.55(m,1h),0.48-0.35(m,2h),0.30-0.20(m,1h)。c
28h35
n6o3的esi ms[m h]

，计算值503.3，实验值503.2。
[0335]
实施例8：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,2r)-2-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0336][0337]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.54(d,j＝7.1hz,1h),8.18(d,j＝3.9hz,1h),7.88(s,2h),7.29(d,j＝7.1hz,1h),5.77(s,2h),4.64-4.41(m,2h),4.21-4.02(m,2h),3.83-3.72(m,1h),2.82(s,3h),2.42-2.27(m,1h),2.24-2.10(m,1h),2.04-1.62(m,4h),1.39(d,j＝6.8hz,3h),1.12-0.97(m,1h),0.73-0.60(m,1h),0.53-0.32(m,3h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

；计算值475.2，实验值475.2。
[0338]
实施例9：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1s,3r)-3-羟基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0339][0340]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.97(d,j
＝7.1hz,1h),8.21(s,1h),8.11-8.08(m,1h),8.03(d,j＝7.8hz,1h),7.60(d,j＝7.2hz,1h),4.56(s,2h),3.89(m,1h),3.64-3.52(m,2h),2.69(s,3h),2.14(d,j＝11.9hz,1h),1.90(d,j＝11.7hz,1h),1.82-1.72(s,2h),1.37-1.18(m,8h),1.14(m,1h),0.56(m,1h),0.44-0.33(m,2h),0.23(m,1h)。c
27h33
n6o3的esi ms[m h]

，计算值489.2，实验值489.2。
[0341]
实施例10：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r)-5-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0342][0343]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.24(d,j＝7.3hz,1h),8.16(m,1h),8.04(m,1h),7.77(s,1h),7.64(d,j＝7.2hz,1h),6.53(s,2h),4.66-4.57(m,3h),3.65(dd,j＝10.1,6.1hz,1h),3.56(m,1h),3.22(m,1h),2.74-2.65(m,4h),2.18(dd,j＝16.7,3.7hz,1h),1.28(d,j＝6.8hz,3h),1.11(m,1h),0.56(m,1h),0.44-0.34(m,2h),0.22(m,1h)。c
25h28
n7o3的esi ms[m h]

，计算值474.2，实验值474.2。
[0344]
实施例11：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,3r)-3-羟基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0345][0346]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.12(s,1h),8.01(m,1h),7.94(d,j＝8.1hz,1h),7.58(d,j＝7.2hz,1h),4.57(s,2h),4.31(s,1h),3.85(s,1h),3.56(m,2h),2.69(s,3h),1.83-1.60(m,5h),1.59-1.47(m,2h),1.35(m,1h),1.28(d,j＝6.8hz,3h),1.13(m,1h),0.56(m,1h),0.45-0.33(m,2h),0.23(m,1h)。c
27h33
n6o3的esi ms[m h]

，计算值489.2，实验值489.2。
[0347]
实施例12：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-(羟甲基)环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0348][0349]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.22(s,1h),8.15(d,j＝7.5hz,1h),8.12(s,1h),7.65(d,j＝7.1hz,1h),6.55(s,2h),4.66(t,j＝5.3hz,1h),4.60(s,2h),4.54-4.42(m,1h),3.64-3.54(m,1h),3.51(dd,j＝6.8,5.3hz,2h),2.73(s,3h),2.47-2.34(m,1h),2.30-2.18(m,2h),2.16-2.02(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.09(m,1h),0.66-0.53(m,1h),0.50-0.32(m,2h),0.30-0.19(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.2。
[0350]
实施例13：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基-1-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0351][0352]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1,0.7hz,1h),8.19(s,1h),8.09(s,1h),8.00(s,1h),7.64(d,j＝7.2,0.8hz,1h),6.56(s,2h),5.09(d,j＝5.9hz,1h),4.59(s,2h),4.29(q,j＝6.6hz,1h),3.65-3.53(m,1h),2.76-2.64(m,5h),2.05-1.94(m,2h),1.58(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.09(m,1h),0.65-0.52(m,1h),0.51-0.33(m,2h),0.31-0.18(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.2。
[0353]
实施例14：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-(2-羟基丙-2-基)环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0354][0355]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝7.2hz,1h),8.27-8.16(m,2h),8.12(s,1h),7.65(d,j＝7.2hz,1h),6.55(s,2h),4.59(s,2h),4.29(s,2h),3.71-3.51(m,1h),2.72(d,j＝0.7hz,3h),2.49-2.36(m,3h),2.00-1.84
(m,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.21-1.10(m,1h),1.07(s,6h),0.67-0.52(m,1h),0.49-0.32(m,2h),0.29-0.17(m,1h)。c
28h35
n6o3的esi ms[m h]

，计算值503.3，实验值503.2。
[0356]
实施例15：间[(5-{2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-5-异吲哚啉酰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-3-茚基)羰基氨基]苯甲酸
[0357][0358]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ13.07(s,1h),10.21(s,1h),9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.30(s,1h),8.17(dq,j＝1.3,10.2hz,2h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),7.66(dt,j＝1.3,7.7hz,1h),7.55-7.48(m,1h),6.69(s,2h),4.62(s,2h),3.58(dd,j＝6.8,9.2hz,1h),2.76(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.20-1.10(m,1h),0.63-0.53(m,1h),0.46-0.34(m,2h),0.29-0.21(m,1h)。c
28h26
n6o4的esi ms[m h]

，计算值511.2，实验值511.2。
[0359]
实施例16：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[1-(2-羟乙基)-1h-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0360][0361]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.68(s,1h),9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.28(s,1h),8.15(s,1h),8.10(d,j＝0.6hz,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),7.65(d,j＝0.7hz,1h),6.64(s,2h),4.94-4.90(m,1h),4.64(s,2h),4.15(t,j＝5.6hz,2h),3.75(q,j＝5.5hz,2h),3.60(dq,j＝9.2,6.8hz,1h),2.75(s,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.13(m,1h),0.64-0.55(m,1h),0.48-0.36(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
26h29
n8o3的esi ms[m h]

，计算值501.2，实验值501.1。
[0362]
实施例17：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[1-(2-羟基-2-甲基丙基)-1h-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0363]
[0364]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.71(s,1h),9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.28(s,1h),8.15(s,1h),8.11(d,j＝0.7hz,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),7.63(d,j＝0.7hz,1h),6.64(s,2h),4.72(s,1h),4.64(s,2h),4.02(s,2h),3.60(dq,j＝9.4,6.8hz,1h),2.75(s,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.12(m,1h),1.09(s,6h),0.64-0.55(m,1h),0.48-0.35(m,2h),0.31-0.21(m,1h)。c
28h33
n8o3的esi ms[m h]

，计算值529.3，实验值529.2。
[0365]
实施例18：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0366][0367]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.64(s,1h),9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.28(s,1h),8.15(s,1h),8.06(s,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),7.63(s,1h),6.65(s,2h),4.65(s,2h),3.85(s,3h),3.60(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),2.75(s,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.13(m,1h),0.64-0.55(m,1h),0.48-0.36(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
25h27
n8o2的esi ms[m h]

，计算值471.2，实验值471.2。
[0368]
实施例19：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0369][0370]
标题化合物是以与实施例1类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.32(s,1h),9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.23(s,1h),8.12(s,1h),7.80(s,1h),7.65(d,j＝7.1hz,1h),6.66(s,2h),4.58(s,2h),3.76(s,3h),3.64-3.51(m,1h),2.72(s,3h),2.36(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.21-1.11(m,1h),0.63-0.52(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.30-0.20(m,1h)。c
26h29
n8o2的esi ms[m h]

；计算值485.2，实验值485.2。
[0371]
实施例20：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0372][0373]
步骤a：将4-氯-2-(三氟甲氧基)苯胺(25.0g，118mmol)和nbs(21.0g，118mmol)于ch3cn(600ml)中的溶液在50℃下搅拌1.5h。然后将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩至50ml体积。将残余物质溶解于etoac(400ml)中，并依序用饱和na2s2o3水溶液(200ml)和盐水(200ml)洗涤。分离有机相并经na2so4干燥。在减压去除所有溶剂之后，残余物通过柱色谱法(sio2，己烷/etoac梯度)纯化，得到呈浅黄色液体状的2-溴-4-氯-6-(三氟甲氧基)苯胺(30.8g，94％产率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.36(d,j＝2.2hz,1h),7.13(dq,j＝2.9,1.5hz,1h),4.30(br.s,2h)。
[0374]
步骤b：在二噁烷(500ml)和h2o(50ml)中将2-溴-4-氯-6-(三氟甲氧基)苯胺(30.8g，106mmol)、三甲基硼氧杂环己烷(14.9ml，106mmol)和k2co3(44g，318mmol)混合在一起。将所得混合物真空脱气并用n2回填。然后加入pdcl2(dppf)(2.6g，3.2mmol)，并且将反应混合物在90℃下保持过夜。在通过tlc观测到起始物质完全转化之后，将混合物冷却至室温并浓缩至100ml体积。将残余物分配于etoac(500ml)与h2o(300ml)之间，分离有机相，并用etoac(2
×
150ml)萃取水溶液。合并的有机相用盐水洗涤，经na2so4干燥并浓缩至干。残余物
通过柱色谱法(sio2，己烷/etoac梯度)纯化，得到4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯胺与未知杂质的20.7g不可分离混合物(分别2:1比率)。此物质不经额外纯化即用于下一步骤。
[0375]
步骤c：在配备有机械搅拌器的圆底烧瓶中，在室温下向步骤b的产物(28.8g)和h2o(100ml)的混合物中加入hbf4溶液(水溶液)(40ml，48重量％)。将所得悬浮液冷却至0℃，并且在维持温度低于5℃的同时分小份加入固体nano2(9.7g，140mmol)。在添加完成后，将混合物在0℃下搅拌0.5h，然后通过过滤收集沉淀物[注意：应避免额外的h2o洗涤，因为产物可部分溶于h2o]。所沉淀的重氮盐用mtbe(5
×
100ml)洗涤，并真空干燥0.5h。将由此获得的固体溶解于ch3cn(500ml)中，然后依序加入tmscn(32.0ml，255mmol)和cu2o(4.4g，102mmol)。将反应混合物在60℃下进行搅拌直至n2形成完全停止，并通过1h nmr观测起始物质的完全消耗。过滤反应混合物，并将滤液浓缩至干。将所得粗产物溶解于etoac中，并且使溶液通过sio2塞。减压去除溶剂，得到呈红色油状物的4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲腈(15.1g，49％产率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.31-7.25(m,1h),7.26-7.19(m,1h),2.57(t,j＝0.7hz,3h)。
[0376]
步骤d：将4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲腈(3.25g，13.8mmol)和naoh(2.2g，55.2mmol)于1:1etoh/h2o(50ml)中的溶液回流4h。然后将溶液冷却至室温并用1m hcl水溶液中和至酸性ph。用etoac(3
×
70ml)萃取产物。合并的有机相用盐水(150ml)洗涤，经na2so4干燥，并减压浓缩至干。粗产物通过柱色谱法(sio2，己烷/etoac梯度)纯化，得到呈米色固体状的4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲酰胺(2.67g，76％产率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.31-7.25(m,1h),7.26-7.19(m,1h),2.57(t,j＝0.7hz,3h)。将由此获得的固体悬浮于1:1h2so4/h2o(80ml)中，并冷却至0℃。然后，经10min以多份加入nano2(2.7g，39.4mmol)于h2o(10ml)中的溶液。在添加完成后，将混合物在100℃下搅拌1.5h。一旦观测到起始物质完全消耗，就将混合物冷却至室温并用ch2cl2(70ml)稀释。分离有机相，并且另外用ch2cl2(2
×
70ml)萃取水溶液。合并的有机溶液用h2o洗涤，经干燥(na2so4)，并减压浓缩至干，得到粗制4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲酸。将此物质溶解于丙酮中。然后在室温下加入k2co3(11.0g，80mmol)和mei(3.5ml，56mmol)，并且将非均相混合物在55℃下搅拌2h。完成后(tlc监测)，将混合物冷却至室温并浓缩至干。将残余物分配于etoac(60ml)与h2o(60ml)之间，分离有机相，并且另外用etoac(2
×
50ml)萃取水溶液。合并的有机萃取物经干燥(na2so4)并浓缩至干。粗产物通过柱色谱法纯化，得到呈浅黄色油状物的4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(3.73g，88％产率)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.20-7.14(m,1h),7.18-7.12(m,1h),3.92(s,3h),2.35(t,j＝0.6hz,3h)。
[0377]
步骤e.将4-氯-2-甲基-6-(三氟甲氧基)苯甲酸甲酯(3.7g，13.8mmol)、nbs(2.8g，15.8mmol)和bpo(0.45g，0.14mmol，含有25重量％的h2o)的混合物在n2下于ccl4(55ml)中回流过夜。然后将混合物冷却至室温并浓缩至干。将残余物溶解于etoac(70ml)中并用h2o(2
×
50ml)洗涤。有机相经na2so4干燥并浓缩至干，得到比率分别为1:3:1的起始物质、所需产物和二溴化副产物的混合物(1h nmr分析)。此混合物不经额外纯化即用于下一步骤。
[0378]
步骤f.将步骤e的粗产物溶解于ch3cn(55ml)中，接着加入(s)-1-环丙基乙胺(1.4g，16.5mmol)、k2co3(5.7g，41.4mmol)和b(oh)3(0.85g，13.8mmol)。将混合物在55℃下搅拌2h。将混合物冷却至室温，并用etoac(150ml)和h2o(150ml)稀释。分离有机相并用etoac(2
×
70ml)萃取水溶液。合并的有机萃取物经na2so4干燥并浓缩至干。残余物通过柱色
谱法纯化，得到呈白色固体状的(s)-5-氯-2-(1-环丙基乙基)-7-(三氟甲氧基)异吲哚啉-1-酮(2.45g，56％产率)。
[0379]
步骤g.将步骤f的产物(1.0g，3.1mmol)、b2pin2(0.87g，3.4mmol)和koac(1.07g，10.9mmol)于二噁烷(16ml)中的混合物真空脱气并用n2回填。然后加入p(cy)3pd g2(185.0mg，0.31mmol)，并且将反应混合物加热至90℃并在所述温度下保持1h。一旦通过lcms分析观测到起始物质完全消耗，就将混合物冷却并减压浓缩。将残余物分配于etoac(50ml)与h2o(30ml)之间，分离有机相，并用etoac(2
×
35ml)萃取水相。合并的有机相经na2so4干燥并减压浓缩，得到所需硼酸频哪醇酯，其不经额外纯化即用于下一步骤中。c
14h14
f3no2的esi ms[m h]

，计算值285.1，实验值285.2。
[0380]
步骤h.将步骤g的产物溶解于二噁烷(31ml)中。向此溶液中加入2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(0.75g，3.1mmol)，接着加入12.4ml的1m na2co3水溶液和pdcl2(dppf)(227mg，0.31mmol)。将所得混合物回流1h，然后冷却至室温，并用etoac(150ml)和h2o(100ml)稀释。分离有机相并用etoac(3
×
50ml)萃取水相。合并的有机相经na2so4干燥，并减压去除溶剂。粗物质通过柱色谱法(sio2，etoac)纯化，产生呈深棕色固体状的所需产物(1.2g，82％产率)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.97(d,j＝7.1hz,1h),8.43(s,1h),8.31(s,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.53(s,2h),4.65(s,2h),4.25(q,j＝7.1hz,2h),3.66-3.49(m,1h),1.35(t,j＝7.1hz,3h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.21-1.07(m,1h),0.60-0.50(m,1h),0.47-0.31(m,2h),0.31-0.20(m,1h)。
[0381]
步骤i.在n2下将前一步骤的产物(1.0g，2.0mmol)和tmsi(2.3ml，16.0mmol)于dce(10ml)中的混合物放入密封小瓶中，并在80℃下在暗处搅拌过夜。然后将混合物冷却至室温，用dce稀释，并倒入100ml的5％nahso3水溶液中。分离有机相，并另外用含10％i-proh的ch2cl2(4
×
70ml)萃取水相。合并的有机相经na2so4干燥，并减压去除溶剂。粗物质通过柱色谱法(sio2，ch2cl2/meoh梯度)纯化，产生呈黄色固体状的所需羧酸(0.94g，67％产率)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.15(br.s,1h),8.98(d,j＝7.1hz,1h),8.47(s,1h),8.25(s,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),6.53(br.s,2h),4.68(s,2h),3.74-3.27(m,1h),1.28(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.10(m,1h),0.64-0.50(m,1h),0.46-0.31(m,2h),0.30-0.18(m,1h)。
[0382]
步骤j.以类似于实施例1的方式进行。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.43(d,j＝1.3hz,1h),8.20-8.17(m,1h),7.77(d,j＝3.8hz,1h),7.69(d,j＝7.1hz,1h),6.64(s,2h),4.70(s,2h),3.59(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),2.87(tt,j＝7.5,3.8hz,1h),1.32(d,j＝6.9hz,3h),1.24-1.13(m,1h),0.83-0.77(m,2h),0.65-0.54(m,3h),0.49-0.36(m,2h),0.31-0.23(m,1h)。c
24h24
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值501.2，实验值501.1。
[0383]
实施例21：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0384]
[0385]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.51(d,j＝1.2hz,1h),8.32(t,j＝1.4hz,1h),8.24(d,j＝6.6hz,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),6.63(s,2h),5.07(dt,j＝7.1,6.3hz,1h),4.86(dd,j＝7.4,6.7hz,2h),4.71(s,2h),4.59(t,j＝6.6hz,2h),3.59(dq,j＝9.3,6.9hz,1h),1.33(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.14(m,1h),0.64-0.56(m,1h),0.48-0.36(m,2h),0.31-0.24(m,1h)。c
24h24
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值517.2，实验值517.1。
[0386]
实施例22：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0387][0388]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.58(s,1h),8.23(s,1h),8.08(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),4.66(s,2h),4.06(m,1h),3.60-3.47(m,4h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.20(d,j＝6.7hz,3h),1.14(m,1h),0.57(m,1h),0.45-0.33(m,2h),0.24(m,1h)。c
24h26
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值519.2，实验值519.2。
[0389]
实施例23：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-3-羟基-3-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0390][0391]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.45(m,1h),8.20(s,1h),7.84(d,j＝7.2hz,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),4.68(s,2h),4.07-3.97(m,2h),3.57(dd,j＝9.3,6.8hz,1h),2.46-2.38(m,2h),2.00(t,j＝9.9hz,2h),1.33-1.24(m,6h),1.15(m,1h),0.57(m,1h),0.45-0.34(m,2h),0.25(m,1h)。c
26h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值545.2，实验值545.2。
[0392]
实施例24：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0393][0394]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.44(d,j＝1.2hz,1h),8.16(t,j＝1.4hz,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),7.65(d,j＝7.4hz,1h),6.64(s,2h),4.69(s,2h),4.10(s,1h),3.82-3.70(m,1h),3.59(dq,j＝9.1,6.7hz,1h),1.82-1.72(m,2h),1.72-1.66(m,2h),1.66-1.56(m,2h),1.43(td,j＝12.8,4.2hz,2h),1.32(d,j＝6.9hz,3h),1.23-1.16(m,1h),1.15(s,3h),0.64-0.55(m,1h),0.49-0.35(m,2h),0.31-0.23(m,1h)。c
28h32
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值573.2，实验值573.1。
[0395]
实施例25：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基-3-甲基丁-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0396][0397]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.52(d,j＝1.3hz,1h),8.23-8.15(m,1h),7.97(d,j＝9.3hz,1h),7.69(d,j＝7.1hz,1h),6.61(s,2h),4.60(s,2h),3.86(dq,j＝10.2,4.9hz,1h),3.63(d,j＝6.6hz,1h),3.58-3.54(m,1h),3.48(dd,j＝10.9,5.0hz,1h),2.00(h,j＝6.8hz,1h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.19-1.06(m,1h),0.94(dd,j＝6.8,0.9hz,6h),0.62-0.50(m,1h),0.47-0.33(m,2h),0.30-0.16(m,1h)。c
26h30
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值547.2，实验值547.2。
[0398]
实施例26：2-氨基-n-[(1r)-1-环丙基-2-羟乙基]-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0399][0400]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.61(d,j＝1.3hz,1h),8.26-8.21(m,2h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.59(s,2h),4.66(s,2h),3.68(dd,j＝10.5,3.5hz,1h),3.62-3.52(m,2h),3.52-3.44(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.19-1.09(m,2h),0.60-0.53(m,1h),0.46-0.34(m,5h),0.30-0.21(m,2h)。c
26h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值545.2，实验值545.2。
[0401]
实施例27：2-氨基-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]-5-[1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0402][0403]
步骤a和b：步骤a以与实施例1步骤e类似的方式进行。将步骤a的产物(500mg，1.44mmol，1.0当量)溶解于ch3cn(5.8ml)中，并依序加入(s)-三氟-2-丙胺(179mg，1.58mmol，1.1当量)、k2co3(597mg，4.32mmol，3.0当量)。将反应混合物在80℃下搅拌16h，然后分配于h2o与etoac之间。分离有机层，并用饱和nahco3水溶液洗涤，经na2so4干燥并浓缩。然后将纯残余物在120℃下加热4h。通过柱色谱法(梯度12％etoac/己烷)进行纯化，得到呈黄色固体状的所需化合物(152mg，30％)。
[0404]
步骤c、d、e和f.以与实施例20类似的方式进行，得到标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.61(d,j＝1.3hz,1h),8.28(s,1h),8.10(d,j＝8.0hz,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),5.04(p,j＝7.6hz,1h),4.76(d,j＝17.8hz,1h),4.55(d,j＝17.7hz,1h),4.10-4.01(m,1h),3.54-3.50(m,2h),1.51(d,j＝7.1hz,3h),1.20(d,j＝6.6hz,3h)。c
22h21
f6n6o4的esi ms[m h]

，计算值547.2，实验值547.2。
[0405]
实施例28：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r)-5-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0406][0407]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.39(m,1h),8.20(m,1h),8.06(d,j＝7.4hz,1h),7.76(s,1h),7.70(d,j＝7.2hz,1h),4.70(d,j＝2.0hz,2h),4.63(m,1h),3.69-3.50(m,2h),3.19(dd,j＝9.8,4.4hz,1h),2.63(dd,j＝16.6,7.9hz,1h),2.21(dd,j＝16.5,5.3hz,1h),1.30(d,j＝
6.8hz,3h),1.13(m,1h),0.58(m,1h),0.45-0.33(m,2h),0.25(m,1h)。c
25h25
f3n7o4的esi ms[m h]

，计算值544.2，实验值544.2。
[0408]
实施例29：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1s,3r)-3-羟基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0409][0410]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.47(d,j＝1.3hz,1h),8.19(t,j＝1.5hz,1h),7.82(d,j＝8.1hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),4.66(s,2h),3.98-3.84(m,1h),3.62-3.52(m,2h),2.14-2.06(m,1h),1.87-1.70(m,3h),1.35-1.27(m,1h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.09(m,4h),0.60-0.51(m,1h),0.45-0.33(m,2h),0.28-0.21(m,1h)。c
27h30
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值559.2，实验值559.2。
[0411]
实施例30：2-氨基-5-(2-((s)-1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲氧基)异吲哚啉-5-基)-n-(反-4-(1-羟基环丙基)环己基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0412][0413]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.51(d,j＝7.1hz,1h),8.04(s,1h),7.92(s,1h),7.62(d,j＝7.9hz,1h),7.19(d,j＝7.1hz,1h),5.77(br.s,2h),4.64(d,j＝17.5hz,1h),4.53(d,j＝17.5hz,1h),4.07-3.87(m,1h),3.84-3.64(m,1h),2.32-2.17(m,2h),1.96-1.82(m,2h),1.61-1.43(m,2h),1.38(d,j＝6.8hz,3h),1.37-1.22(m,2h),1.12-0.97(m,2h),0.78-0.71(m,2h),0.70-0.61(m,1h),0.52-0.38(m,5h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-57.34。c
30h34
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值599.3，实验值599.1。
[0414]
实施例31：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-4-氨基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0415][0416]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.41(s,1h),8.15(m,1h),7.83(d,j＝4.7hz,2h),7.67(d,j＝7.2hz,1h),7.62(d,j＝7.5hz,1h),6.61(s,2h),4.65(s,2h),3.73(m,1h),3.55(m,1h),2.99(m,1h),2.10(d,j＝11.4hz,2h),1.98(d,j＝11.7hz,2h),1.52-1.32(m,4h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.14(m,1h),0.57(m,1h),0.44-0.35(m,2h),0.24(m,1h)。c
27h31
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值558.2，实验值558.2。
[0417]
实施例32：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3s)-2-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0418][0419]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.63(s,1h),8.29(s,1h),8.26(d,j＝5.2hz,1h),8.05(m,1h),7.73(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),4.65(s,2h),4.37(ddd,j＝10.9,8.1,5.2hz,1h),3.57(m,1h),3.29-3.22(m,2h),2.63(m,1h),1.90(m,1h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.13(m,1h),0.57(m,1h),0.45-0.34(m,2h),0.24(m,1h)。c
25h25
f3n7o4的esi ms[m h]

，计算值544.2，实验值544.2。
[0420]
实施例33：2-氨基-n-[(1r,3s)-3-氨基环己基]-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0421][0422]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.39(m,1h),8.20-8.14(m,3h),7.68(dd,j＝7.4,5.3hz,2h),4.73(s,2h),3.85(m,1h),3.55(m,1h),3.14(s,1h),2.39(d,j＝11.6hz,1h),2.02-1.91(m,2h),1.80(d,j＝12.9hz,1h),1.51-1.10(m,8h),0.56(m,1h),0.44-0.34(m,2h),0.23(m,1h)。c27h31
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值558.2，实验值558.2。
[0423]
实施例34：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,3s)-3-(二甲氨基)环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0424][0425]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.74(s,1h),9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.43(s,1h),8.18(s,1h),7.76-7.67(m,2h),4.71(s,1h),3.90(m,1h),3.55(m,1h),3.33(t,j＝11.5hz,1h),2.69(d,j＝5.0hz,6h),2.06(m,1h),1.99(d,j＝12.4hz,1h),1.87(m,1h),1.55-1.32(m,4h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.10(m,2h),0.56(m,1h),0.45-0.34(m,2h),0.24(m,1h)。c
29h35
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值586.3，实验值586.2。
[0426]
实施例35：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,2r)-2-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0427][0428]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.43(d,j＝1.3hz,1h),8.17-8.12(m,1h),7.74-7.68(m,2h),6.64(s,2h),4.69(s,2h),4.11-4.02(m,1h),4.00-3.95(m,1h),3.63-3.53(m,1h),2.20-2.10(m,1h),1.94-1.83(m,1h),1.84-1.65(m,2h),1.62-1.45(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.13(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.47-0.36(m,2h),0.31-0.23(m,1h)。c
26h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值545.2，实验值545.2。
[0429]
实施例36：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1s,3s)-3-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0430][0431]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j
＝7.1hz,1h),8.43(d,j＝1.3hz,1h),8.18-8.14(m,1h),7.72(d,j＝7.5hz,1h),7.68(d,j＝7.2hz,1h),6.63(s,2h),4.69(s,2h),4.48(h,j＝7.4hz,1h),4.29-4.24(m,1h),3.62-3.55(m,1h),2.24-2.11(m,1h),2.02-1.90(m,2h),1.66(ddd,j＝13.4,7.6,5.8hz,1h),1.60-1.41(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.09(m,1h),0.63-0.54(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.30-0.23(m,1h)。c
26h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值545.2，实验值545.2。
[0432]
实施例37：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,3r)-3-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0433][0434]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.43(d,j＝1.2hz,1h),8.16(t,j＝1.4hz,1h),7.72(d,j＝7.5hz,1h),7.68(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.69(s,2h),4.48(h,j＝7.4hz,1h),4.28-4.23(m,1h),3.63-3.53(m,1h),2.27-2.13(m,1h),2.04-1.90(m,2h),1.66(ddd,j＝13.3,7.7,5.9hz,1h),1.61-1.41(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.13(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.48-0.36(m,2h),0.30-0.23(m,1h)。c
26h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值545.2，实验值545.2。
[0435]
实施例38：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r,4s)-4-羟基氧杂环戊烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0436][0437]
标题化合物是以与实施例20类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.46(d,j＝1.3hz,1h),8.20-8.16(m,1h),7.94(d,j＝7.6hz,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.63(s,2h),4.68(s,2h),4.33-4.27(m,1h),4.23-4.19(m,1h),4.01(td,j＝9.2,4.6hz,2h),3.71(dd,j＝9.0,1.9hz,1h),3.63-3.56(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.13(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
25h26
f3n6o5的esi ms[m h]

，计算值547.2，实验值547.2。
[0438]
实施例39：5-{2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-三氟甲氧基-5-异吲哚啉酰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-3-茚甲酰胺
nmr(376mhz,dmso-d6)δ-56.75。c
26h23
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值538.2，实验值538.2。
[0447]
实施例42：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(5-氟吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0448][0449]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(s,1h),9.12(d,j＝7.1hz,1h),8.66(t,j＝1.8hz,1h),8.50(d,j＝1.3hz,1h),8.37(s,1h),8.28(dd,j＝2.6,0.5hz,1h),8.18(ddd,j＝11.4,2.7,2.1hz,1h),7.77(d,j＝7.2hz,1h),6.75(s,2h),4.69(s,2h),3.71-3.47(m,1h),1.30(d,j＝6.9hz,3h),1.22-1.09(m,1h),0.62-0.53(m,1h),0.44-0.36(m,2h),0.29-0.22(m,1h)。c
26h21
f4n7o3的esi ms[m h]

，计算值556.2，实验值556.1。
[0450]
实施例43：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(5-甲氧基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0451][0452]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.85(s,1h),9.11(d,j＝7.1hz,1h),8.51(d,j＝1.3hz,1h),8.42(d,j＝2.0hz,1h),8.33(t,j＝1.4hz,1h),8.01(d,j＝2.6hz,1h),7.90(dd,j＝2.6,2.1hz,1h),7.76(d,j＝7.2hz,1h),6.75(s,2h),4.68(s,2h),3.85(s,3h),3.64-3.52(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.08(m,1h),0.62-0.52(m,1h),0.46-0.34(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
27h24
f3n7o4的esi ms[m-h]-，计算值568.2，实验值568.1。
[0453]
实施例44：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(2-甲基-3-吡啶基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-三氟甲氧基-1-异吲哚啉酮
[0454][0455]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.68(s,1h),9.16(d,j＝7.1hz,1h),8.89(d,j＝8.3hz,1h),8.49(d,j＝1.3hz,1h),8.39(dd,j＝1.4,5.3hz,1h),8.21(t,j＝1.3hz,1h),7.72(d,j＝7.1hz,1h),7.68-7.60(m,1h),6.81
(br.,2h),4.66(s,2h),3.64-3.51(m,1h),2.69(s,3h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.14(ddt,j＝4.5,8.2,13.0hz,1h),0.64-0.52(m,1h),0.47-0.33(m,2h),0.30-0.18(m,1h)。c
27h24
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值552.2，实验值552.2。
[0456]
实施例45：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(6-甲基-3-吡啶基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-三氟甲氧基-1-异吲哚啉酮
[0457][0458]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.99(s,1h),9.14(d,j＝7.1hz,1h),9.02(s,1h),8.53(d,j＝1.3hz,1h),8.39(s,1h),8.30(d,j＝8.8hz,1h),7.79(d,j＝7.1hz,1h),7.62(d,j＝8.3hz,1h),6.77(br,2h),4.70(s,2h),3.32-3.23(m,1h),2.57(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.10(m,1h),0.57(dq,j＝3.4,3.8,8.6hz,1h),0.40(ddq,j＝5.2,9.3,14.3hz,2h),0.30-0.20(m,1h)。c
27h24
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值552.2，实验值552.2。
[0459]
实施例46：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(6-氨基-3-吡啶基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-三氟甲氧基-1-异吲哚啉酮
[0460][0461]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.68(s,1h),9.13(d,j＝7.1hz,1h),8.51(dd,j＝1.8,10.7hz,2h),8.36(s,1h),7.99(dd,j＝2.5,9.4hz,1h),7.77(d,j＝7.2hz,1h),6.96(d,j＝9.5hz,1h),6.71(br.,2h),4.69(s,2h),3.64-3.51(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.14(ddt,j＝4.4,8.5,13.0hz,1h),0.62-0.52(m,1h),0.47-0.33(m,2h),0.30-0.20(m,1h)。c
26h23
f3n8o3的esi ms[m h]

，计算值553.2，实验值553.2。
[0462]
实施例47：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲氧基)异吲哚啉-5-基)-n-(4-甲基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0463][0464]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.35(s,1h),9.26(s,1h),8.59(d,j＝7.0hz,1h),8.30(d,j＝4.9hz,1h),8.00(s,1h),7.88(s,1h),7.23(d,j＝7.0hz,1h),7.17(d,j＝4.9hz,1h),5.86(br.s,2h),4.62(d,j＝17.6hz,1h),4.51(d,j＝17.7hz,1h),3.85-3.65(m,1h),2.38(s,3h),1.37(d,j＝6.8hz,3h),1.08-0.93(m,1h),0.76-0.57(m,1h),0.52-0.30(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-57.51。c
27h25
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值552.2，实验值552.2。
[0465]
实施例48：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲氧基)异吲哚啉-5-基)-n-(4-甲氧基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0466][0467]
标题化合物是以与实施例40类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.85(s,1h),9.65(s,1h),8.55(d,j＝7.1hz,1h),8.29(d,j＝5.5hz,1h),8.15(s,1h),8.06(s,1h),7.26(d,j＝7.1hz,1h),6.88(d,j＝5.5hz,1h),5.86(s,2h),4.65(d,j＝17.5hz,1h),4.54(d,j＝17.5hz,1h),3.90(s,3h),3.85-3.65(m,1h),1.38(d,j＝6.8hz,3h),1.09-0.97(m,1h),0.72-0.62(m,1h),0.55-0.36(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-57.66。c
27h25
f3n7o4的esi ms[m h]

，计算值568.2，实验值568.2。
[0468]
实施例49：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3s)-2-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0469][0470]
步骤a：将4-氯-2-(三氟甲基)苯甲酸(20.0g，89mmol)、(s)-1-环丙基乙-1-胺(9.32g，107mmol，1.2当量)、hatu(40.7g，107mmol，1.2当量)和dipea(48ml，267mmol，3当量)于无水dmf(297ml)中的混合物在23℃下搅拌2h。将反应混合物用饱和nh4cl淬灭，用etoac萃取，蒸发，并且粗产物通过柱色谱法(0至40％梯度的etoac/己烷)纯化，得到产率98％的呈白色固体状的产物(25.5g)。
[0471]
步骤b：将步骤a的产物(8.20g，28mmol)溶解于thf(140ml)中并冷却至-78℃，然后滴加仲丁基锂(1.4m于环己烷中，50ml，70mmol，2.5当量)。在-78℃下20min后，滴加dmf(10.8ml，140mmol，5.0当量)。将反应混合物在-78℃下搅拌1h，然后谨慎地用饱和nh4cl淬灭并用etoac萃取。然后在0℃下将粗产物溶解于ch2cl2(90ml)、et3sih(4.5ml)和tfa(45ml)中，并且将反应混合物在23℃下搅拌20min。将反应混合物蒸发，用饱和nahco3淬灭并用ch2cl2萃取。粗混合物通过柱色谱法(0至30％梯度的etoac/己烷)纯化，得到产率84％的呈白色固体状的产物(7.15g)。
[0472]
步骤c：将步骤b的产物(6.64g，21.9mmol)、b2pin2(6.11g，24.0mmol，1.1当量)、koac(7.52g，76.7mmol，3.5当量)和pcy
3 pd g2(1.29g，2.19mmol，0.1当量)于无水二噁烷(109ml)中的混合物在100℃下搅拌1h。将反应混合物过滤，蒸发，并且粗产物通过柱色谱法(0至30％梯度的etoac/己烷)纯化，得到产率94％的呈棕色固体状的产物(8.80g)。
[0473]
步骤d：将步骤c的产物(7.10g，18mmol)、2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(4.31g，18mmol，1当量)、1m na2co3(72ml，72mmol，4当量)和pdcl2(dppf)(658mg，0.90mmol，0.05当量)于无水二噁烷(90ml)中的混合物在100℃下搅拌1h。将反应混合物用饱和nacl淬灭，用etoac萃取，蒸发，并且粗产物通过柱色谱法(30至100％梯度的etoac/己烷)纯化，得到产率68％的呈棕色固体状的产物(5.77g)。
[0474]
步骤e：将步骤d的产物(5.77g，12.2mmol)和tmsi(12.2ml，85.4mmol，7当量)于无水ch3cn(61ml)中的混合物在80℃下搅拌15h。反应混合物用饱和亚硫酸氢钠淬灭，用
ch2cl2:meoh(9:1)萃取并蒸发。将粗产物在mtbe中湿磨并过滤，得到产率59％的呈黄色固体状的产物(3.23g)。
[0475]
步骤f：将步骤e的产物(60mg，0.13mmol)、胺(0.20mmol，1.5当量)、edci
·
hcl(38mg，0.20mmol，1.5当量)、hobt(31mg，0.20mmol，1.5当量)和dipea(70μl，0.39mmol，3当量)于无水dmf(1.3ml)中的混合物在23℃下搅拌2h。反应混合物用饱和nacl水溶液淬灭，用etoac萃取，蒸发，并且粗产物通过反相hplc(c18柱，10％至90％梯度的ch3cn和h2o 0.1％tfa)纯化，得到呈黄色固体状的产物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.90(s,1h),8.58(s,1h),8.27(d,j＝5.3hz,1h),8.06(s,1h),7.81(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),4.69(s,2h),4.37(ddd,j＝10.8,8.1,5.3hz,1h),3.58(m,1h),3.29-3.23(m,2h),2.71-2.60(m,1h),1.92(m,1h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.15(m,1h),0.58(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.26(m,1h)。c
25h25
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值528.2，实验值528.2。
[0476]
实施例50：5-(3-{[(r)-2-羟基-1-甲基乙氨基]羰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-5-茚基)-2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0477][0478]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.83(s,1h),8.59(s,1h),8.10(d,j＝8.0hz,1h),7.80(d,j＝7.1hz,1h),6.61(s,2h),5.02(t,j＝5.2hz,1h),4.70(s,2h),4.12-4.00(m,1h),3.65-3.45(m,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22(d,j＝6.6hz,3h),1.20-1.13(m,1h),0.63-0.53(m,1h),0.48-0.36(m,2h),0.32-0.18(m,1h)。c
24h25
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值503.2，实验值503.1。
[0479]
实施例51：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(2-羟基乙氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0480][0481]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.86(s,1h),8.57(s,1h),8.22(t,j＝5.3hz,1h),7.80(d,j＝7.1hz,1h),6.61(s,2h),5.01(br s,1h),4.69(s,2h),3.66-3.55(m,3h),3.46(dd,j＝5.4,5.4hz,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.20-1.10(m,1h),0.62-0.53(m,1h),0.46-0.34(m,2h),0.28-0.20(m,1h)。c
23h23
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值489.2，实验值489.2。
[0482]
实施例52：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(3-羟基丙氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0483][0484]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.76(s,1h),8.56(s,1h),7.87(t,j＝5.6hz,1h),7.75(d,j＝7.1hz,1h),6.62(s,2h),4.70(s,2h),4.60(t,j＝5.1hz,1h),3.65-3.51(m,3h),3.45(dt,j＝6.4,6.4hz,2h),1.73(tt,j＝1.73hz,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.09(m,1h),0.62-0.52(m,1h),0.46-0.33(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
24h25
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值503.2，实验值503.1。
[0485]
实施例53：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(3-氧杂环丁烷基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0486][0487]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.2hz,1h),8.77(s,1h),8.71(s,1h),8.31(d,j＝6.6hz,1h),7.80(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),5.08-5.01(m,1h),4.85(dd,j＝6.9,6.9hz,2h),4.73(s,2h),4.58(dd,j＝6.4hz,2h),3.60(dt,j＝9.2,6.8hz,1h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.09(m,1h),0.62-0.55(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.29-0.27(m,1h)。c
24h23
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值501.2，实验值501.1。
[0488]
实施例54：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(顺-4-羟基-4-甲基环己基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0489][0490]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.69(s,1h),8.59(s,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),7.69(d,j＝7.3hz,1h),6.61(s,2h),4.70(s,2h),4.09(s,2h),3.77-3.66(m,1h),3.59(dq,j＝9.2,6.6hz,1h),1.82-1.52(m,6h),1.46-1.36(m,2h),1.31(d,j＝6.6hz,3h),1.20-1.12(m,4h),0.60-0.54(m,1h),0.48-0.34(m,2h),0.30-0.23(m,1h)。c
28h23
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值557.2，实
验值557.1。
[0491]
实施例55：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-(2-氨基-3-{[顺-4-羟基-4-(三氟甲基)环己基氨基]羰基}-1,4,7a-三氮杂-5-茚基)-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0492][0493]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.69(s,1h),8.61(s,1h),7.74(d,j＝7.1hz,1h),7.68(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),4.70(s,2h),3.78(br s,1h),3.64-3.54(m,1h),1.99-1.91(m,2h),1.82-1.74(m,2h),1.69-1.59(m,4h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.08(m,1h),0.61-0.52(m,1h),0.48-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
28h28
f6n6o3的esi ms[m h]

，计算值611.2，实验值611.1。
[0494]
实施例56：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(3-甲基-3-氧杂环丁烷基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0495][0496]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.73(s,1h)8.64(s,1h),8.14(s,1h),7.77(d,j＝7.1hz,1h),6.61(s,2h),4.81(d,j＝6.1hz,2h),4.70(s,2h),4.44(d,j＝6.1hz,2h),3.64-3.54(m,1h),1.69(s,3h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.14(m,1h),0.61-0.53(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.29-0.20(m,1h)。c
25h25
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值515.2，实验值515.1。
[0497]
实施例57：5-(3-{[(r)-3-羟基-1-甲基丙氨基]羰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-5-茚基)-2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0498][0499]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.71(s,1h),8.60(s,1h),7.78-7.73(m,2h),6.61(s,2h),4.71(s,2h),4.51(t,j＝5.0hz,1h),4.19-4.12(m,1h),3.67-3.42(m,3h),1.71(dd,j＝6.5,6.5hz,2h),1.30
(d,j＝6.8hz,3h),1.24(d,j＝6.6hz,3h),1.22-1.12(m,1h),0.62-0.53(m,1h),0.45-0.36(m,2h),0.28-0.22(m,1h)。c
25h27
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值517.2，实验值517.1。
[0500]
实施例58：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(4-羟基丁基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0501][0502]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.71(s,1h),8.55(s,1h),7.81-7.71(m,2h),6.61(s,2h),4.72(s,2h),4.43(t,j＝5.1hz,1h),3.66-3.53(m,1h),3.46-3.35(m,5h),1.67-1.50(m,4h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.12(m,1h),0.63-0.52(m,1h),0.48-0.34(m,2h),0.28-0.24(m,1h)。c
25h27
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值517.2，实验值517.1。
[0503]
实施例59：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-{2-氨基-3-[(3-羟基-3-甲基丁基氨基)羰基]-1,4,7a-三氮杂-5-茚基}-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0504][0505]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.85(s,1h),8.57(s,1h),7.98(t,j＝5.1hz,1h),7.75(d,j＝7.1hz,1h),6.62(s,2h),4.71(s,2h),4.45(s,1h),3.69-3.51(m,1h),3.49-3.45(m,2h),1.71(dd,j＝7.1,7.1hz,2h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.04(m,7h),0.61-0.51(m,1h),0.50-0.29(m,2h),0.32-0.19(m,1h)。c
26h29
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值531.2，实验值531.1。
[0506]
实施例60：2-氨基-5-(2-((s)-1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)-n-(反-4-(羟甲基)环己基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0507][0508]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.61-8.46
(m,2h),8.26-8.15(m,1h),7.77(d,j＝7.8hz,1h),7.28(d,j＝7.0hz,1h),5.28(br.s,2h),4.69(d,j＝17.7hz,1h),4.57(d,j＝17.6hz,1h),3.99-3.87(m,1h),3.86-3.75(m,1h),3.53(d,j＝6.4hz,2h),2.30-2.18(m,2h),1.97-1.88(m,2h),1.64-1.50(m,1h),1.39(d,j＝6.9,3h),1.37-1.22(m,4h),1.10-1.01(m,1h),0.71-0.63(m,1h),0.53-0.38(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-59.95。c
28h32
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值557.3，实验值557.2。
[0509]
实施例61：2-氨基-5-(2-((s)-1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)-n-(反-4-(2-羟基丙-2-基)环己基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0510][0511]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.69(s,1h),8.61(s,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),7.66(d,j＝7.6hz,1h),6.60(s,2h),4.71(s,2h),4.10(s,1h),3.79-3.52(m,2h),2.14-2.05(m,2h),1.88-1.79(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.08(m,6h),1.04(s,6h),0.68-0.51(m,1h),0.51-0.34(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-58.46。c
30h36
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值585.3，实验值585.1。
[0512]
实施例62：2-氨基-5-(2-((s)-1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)-n-(反-4-(1-羟基环丙基)环己基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0513][0514]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ8.57(s,1h),8.53(d,j＝7.1hz,1h),8.19(s,1h),7.68(d,j＝7.1hz,1h),5.77(br.s,2h),4.68(d,j＝17.3hz,1h),4.56(d,j＝17.3hz,1h),4.01-3.88(m,1h),3.87-3.76(m,1h),2.34-2.20(m,2h),1.96-1.86(m,2h),1.59-1.44(m,2h),1.42-1.26(m,5h),1.12-0.99(m,2h),0.77-0.71(m,2h),0.70-0.63(m,1h),0.54-0.47(m,3h),0.46-0.37(m,2h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-59.98。c
30h34
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值583.3，实验值583.1。
[0515]
实施例63：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1s,3r)-3-羟基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0516][0517]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.74(m,1h),8.60(m,1h),7.89(d,j＝8.1hz,1h),7.74(d,j＝7.2hz,1h),4.68(s,2h),3.88(m,1h),3.65-3.52(m,2h),2.13(m,1h),1.86(m,1h),1.82-1.71(m,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.10(m,5h),0.57(m,1h),0.46-0.35(m,2h),0.26(m,1h)。c
27h30
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值543.2，实验值543.2。
[0518]
实施例64：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r)-5-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0519][0520]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.65(s,1h),8.57(s,1h),8.10(d,j＝7.1hz,1h),7.78(d,j＝7.2hz,1h),7.75(s,1h),6.59(s,2h),4.74(d,j＝2.5hz,2h),4.63(m,1h),3.68-3.56(m,2h),3.21(dd,j＝9.9,4.5hz,1h),2.64(dd,j＝16.5,7.9hz,1h),2.22(dd,j＝16.5,5.3hz,1h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.15(m,1h),0.58(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.26(m,1h)。c
25h25
f3n7o3的esi ms[m h]

，计算值528.2，实验值528.2。
[0521]
实施例65：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(三氟甲基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0522][0523]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.73(s,1h),8.67(s,1h),7.99(d,j＝6.8hz,1h),7.77(d,j＝7.1hz,1h),6.62(s,2h),5.13(d,j＝5.4hz,1h),4.74(s,2h),4.48(h,j＝6.7hz,1h),4.44-4.32(m,1h),3.62(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),2.34-2.22(m,4h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.15(m,1h),0.64-0.57(m,1h),0.49-0.37(m,2h),0.33-0.24(m,1h)。c
25h26
f3n6o3的esi ms[m h]

，
计算值515.2，实验值515.1。
[0524]
实施例66：5-{2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-(三氟甲基)-5-异吲哚啉酰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-3-茚甲酰胺
[0525][0526]
标题化合物是以与实施例39和49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.77(s,1h),8.50(s,1h),7.75(d,j＝7.1hz,1h),7.42(s,1h),7.32(s,1h),6.63(s,2h),4.72(s,2h),3.64-3.54(m,1h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.20-1.10(m,1h),0.61-0.54(m,1h),0.46-0.35(m,2h),0.29-0.22(m,1h)。c
21h19
f3n6o2的esi ms[m h]

，计算值445.2，实验值445.0。
[0527]
实施例67：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-[2-氨基-3-(甲基氨基)羰基-1,4,7a-三氮杂-5-茚基]-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0528][0529]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.81(s,1h),8.54(s,1h),7.75(d,j＝7.1hz,1h),7.68(q,j＝4.7hz,1h),6.63(s,2h),4.72(s,2h),3.66-3.54(m,1h),2.91(d,j＝4.7hz,3h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.09(m,1h),0.63-0.53(m,1h),0.48-0.34(m,2h),0.29-0.21(m,1h)。c
22h21
f3n6o2的esi ms[m h]

，计算值459.2，实验值459.1。
[0530]
实施例68：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-[2-氨基-3-(乙基氨基)羰基-1,4,7a-三氮杂-5-茚基]-7-(三氟甲基)-1-异吲哚啉酮
[0531][0532]
标题化合物是以与实施例49类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.73(s,1h),8.60(s,1h),7.77-7.69(m,2h),6.61(s,2h),4.72(s,2h),3.65-3.54(m,1h),3.44-3.34(m,2h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.10(m,4h),0.62-0.55(m,1h),0.45-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
23h23
f3n6o2的esi ms[m h]

，计算值473.2，实验值473.1。
[0533]
实施例69：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)-n-(吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0534][0535]
标题化合物是以与实施例49和99(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.94(s,1h),8.63-8.59(m,2h),8.55(d,j＝6.0hz,2h),8.28(s,1h),7.64(d,j＝6.0hz,2h),7.37(d,j＝7.1hz,1h),5.83(s,2h),4.72(d,j＝17.6hz,1h),4.60(d,j＝17.6hz,1h),3.92-3.78(m,1h),1.41(d,j＝6.8hz,3h),1.12-1.03(m,1h),0.80-0.63(m,1h),0.58-0.38(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-59.81。c
26h23
f3n7o2的esi ms[m h]

，计算值522.2，实验值522.1。
[0536]
实施例70：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-1-氧代-7-(三氟甲基)异吲哚啉-5-基)-n-(吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0537][0538]
标题化合物是以与实施例49和99(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.92(s,1h),9.15(d,j＝7.1hz,1h),8.87(dd,j＝2.6,0.7hz,1h),8.79(d,j＝9.0hz,2h),8.30(dd,j＝4.7,1.5hz,1h),8.23(ddd,j＝8.3,2.6,1.5hz,1h),7.86(d,j＝7.2hz,1h),7.41(ddd,j＝8.3,4.7,0.7hz,1h),6.76(br.s,2h),4.75(s,2h),3.69-3.56(m,1h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.13(m,1h),0.66-0.55(m,1h),0.50-0.36(m,2h),0.33-0.24(m,1h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-58.23。c
26h23
f3n7o2的esi ms[m h]

，计算值522.2，实验值522.2。
[0539]
实施例71：6-[(s)-1-环丙基乙基]-19-氨基-10.13-二氧杂-6.16.20.21.24-五氮杂五环[16.5.2.12,9.04,8.021,25]二十六碳-1(24),2,4(8),9(26),18(25),19,22-庚烯-7,17-二酮
[0540][0541]
步骤a：向4-溴-2-氟-6-甲基苯甲酸甲酯(45.0g，182mmol，1.0当量)于ccl4(1.14l)中的溶液中加入nbs(35.7g，200mmol，1.1当量)和bpo(80重量％，5.51g，18.2mmol，0.1当量)。将所得混合物在回流下搅拌3h。完成后，将反应混合物冷却至室温，并过滤以去除沉淀物。真空浓缩滤液，得到粗制苯甲基溴，其直接用于步骤b中。
[0542]
步骤b：在配备有回流冷凝器和n2气球的圆底烧瓶中，将步骤a的产物(45.0g，138mmol，1.0当量)与含(αs)-α-甲基-环丙烷甲胺盐酸盐(33.6g，276mmol，2.0当量)、k2co3(57.2g，414mmol，3.0当量)和b(oh)3(1.71g，27.6mmol，0.2当量)的ch3cn(552ml)组合。将所得混合物在50℃下搅拌72h。完成后，将反应混合物冷却至室温，并且真空去除约75％溶剂。将混合物分配于etoac(300ml)与h2o(200ml)之间。分离有机相，并用etoac再次萃取水相。合并的有机萃取物用h2o和盐水洗涤，然后干燥(na2so4)，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(sio2，0-30％etoac/己烷)进行纯化，得到呈灰白色固体状的产物(35.0g，经2个步骤的产率为58％)。
[0543]
步骤c：在0℃下向2-(2-叔丁氧基羰基氨基乙氧基)乙醇(1.03g，5.0mmol，1.0当量)于dmf(25ml)中的溶液中逐份加入氢化钠(60％于矿物油中，600mg，15mmol，3.0当量)。搅拌15分钟后，将2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-溴-7-氟-1-异吲哚啉酮(1.5g，5.0mmol，1.0当量)溶解于dmf(5.0ml)中并加入到溶液中。将反应物在0℃下搅拌10分钟，之后用饱和nh4cl淬灭并用etoac萃取。所收集的有机物通过快速色谱法(sio2，etoac/己烷梯度10％至50％)纯化，得到芳基醚产物(1.18g，49％)。
[0544]
步骤d：将步骤c的产物(1.18g，2.44mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(175mg，
0.24mmol，0.1当量)、b2pin2(813mg，3.2mmol，1.3当量)和koac(530mg，5.2mmol，2.2当量)的二噁烷(24.4ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持2h，冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0545]
步骤e：将步骤d的产物(2.44mmol，1.0当量)与含2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(587mg，2.44mmol，1.0当量)、pcy
3 pd g2(142mg，0.24mmol，0.1当量)和na2co3(2m水溶液，7.32mmol，3.66ml)的二噁烷(25ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持1h，浓缩，并通过快速色谱法(sio2，80％etoac/己烷，接着10％meoh/ch2cl2)纯化，得到交叉偶联的乙酯(0.92g，62％，2个步骤)。
[0546]
步骤f：将步骤e的乙酯产物(225mg，0.41mmol，1.0当量)溶解于etoh(2.0ml)中。加入h2o(1.39ml)和2n lioh水溶液(615μl，1.23mmol，3当量)，接着加入二噁烷(2.0ml)以改进溶解性。将所得溶液加热至60℃保持过夜，然后用2n hcl酸化至ph 3。溶液用etoac萃取，干燥(na2so4)并浓缩(238mg，100％)。将一些所得物质(90mg，0.15mmol)溶解于ch2cl2(2.0ml)中。加入tfa(0.2ml)，并且将溶液在室温下搅拌20分钟。完成后，将反应混合物用甲苯(2.0ml)稀释并浓缩至tfa盐。此物质不经纯化即继续进行。
[0547]
步骤g：将步骤f的tfa盐(0.15mmol)溶解于dmf(7.5ml，0.02m)中。依序加入hobt(25.2mg，0.165mmol，1.1当量)、et3n(105μl，0.75mmol，5.0当量)和edc
·
hcl(43.1mg，0.225mmol，1.5当量)，并且将溶液加热至40℃。2h后，将反应溶液用h2o(60ml)稀释并用etoac萃取(
×
2)，接着用2:1ch2cl2:iproh萃取(
×
1)。合并的有机物经浓缩并通过快速色谱法(sio2，meoh/ch2cl2梯度0％至5％)纯化，得到标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.79(t,j＝4.2hz,1h),8.43(s,1h),7.97(s,1h),7.65(d,j＝7.3hz,1h),6.47(s,2h),4.53(s,2h),4.49(t,j＝4.4hz,2h),3.89(br s,2h),3.68(t,j＝5.0hz,2h),3.55-3.44(m,3h),1.25(d,j＝6.8hz,3h),1.16-1.05(m,1h),0.60-0.49(m,1h),0.43-0.31(m,2h),0.24-0.15(m,1h)。c
24h26
n6o4的esi ms[m h]

，计算值463.2，实验值463.2。
[0548]
实施例72：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,2r)-2-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0549][0550]
步骤a：将c7-f-异吲哚啉酮(3.00g，10.0mmol，1.0当量)与纯pmbnh2(4ml)组合并加热至100℃保持14h。使反应混合物冷却，并且将其分配于10％柠檬酸水溶液与etoac之间。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，并用另外的10％柠檬酸水溶液、盐水洗涤，并经mgso4干燥。减压浓缩，得到pmb胺加合物，其以粗制形式用于下一步骤中。
[0551]
步骤b：将步骤a的产物与tfa(15ml)组合，并在40℃下搅拌3h。将反应混合物减压浓缩，并且用饱和nahco3水溶液淬灭并用etoac稀释。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，己烷至50％etoac梯度)进行纯化，得到呈白色固体状的苯胺产物(2.89g，约98％，继续用于下一步骤的共洗脱的微量杂质)。
[0552]
步骤c：将步骤b的产物(1.00g，3.38mmol，1.0当量)溶解于ch2cl2(10ml)中，并且将混合物冷却至0℃。向此溶液中加入dmap(40mg，0.34mmol，10mol％)、dipea(1.6ml，10.1mmol，3.0当量)和mscl(0.7ml，8.5mmol，2.5当量)。将反应混合物升温至室温并搅拌1h。将反应物用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩，得到双磺酰化产物，其以粗制形式用于下一步骤中。
[0553]
步骤d：将步骤c的产物溶解于thf(5ml)中，并加入tbaf(1m于thf中，5.4ml，5.4mmol，1.6当量)。15min后加入另外一部分tbaf(1m于thf中，3.0ml，0.9当量)，接着在2h后加入最后一部分tbaf(1m于thf中，3.0ml，0.9当量)。将反应混合物再搅拌1h，然后用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过快速柱色谱法(sio2，己烷至50％etoac梯度)进行纯化，得到呈黄色固体状的反相磺酰胺(0.766g，2.1mmol，经2个步骤的产率60％)。
[0554]
步骤e：将步骤d的产物(2.00g，5.36mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(390mg，0.54mmol，0.1当量)、b2pin2(1.80g，7.10mmol，1.3当量)和koac(1.15g，11.8mmol，2.20当量)的二噁烷(30ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌1h。此后，加入第二部分的pd(dppf)cl2(100mg，0.137mmol，0.03当量)。将反应混合物再搅拌1h，然后冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并减压浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0555]
步骤f：将粗制频哪醇硼酸酯与pd(dppf)cl2(390mg，0.54mmol，0.1当量)、1m na2co3水溶液(16mmol，16ml，3.0当量)、2-氨基-5-氯-1,4,7a-三氮杂-3-茚甲酸乙酯(1.29g，5.36mmol，1.0当量)和二噁烷(20ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌40min。将反应混合物冷却至室温，并用ch2cl2和h2o稀释。分离水相，并用另外的ch2cl2反萃取，然后用etoac反萃取一次。合并有机层并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，ch2cl2至5％meoh梯度)进行纯化，得到呈金棕色固体状的交叉偶联的酯产物(2.48g，经2个步骤的产率92％)。
[0556]
步骤g：将步骤f的乙酯产物(500mg，1.00mmol，1.0当量)溶解于etoh(2ml)、thf(4ml)和h2o(2ml)中。加入lioh
·
h2o(250mg，6.00mmol，6.0当量)，并且将反应混合物加热至70℃保持15h。将所得混合物冷却至室温，并真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释并用2n hcl酸化至ph 3。通过真空过滤收集所得沉淀物，并且在40℃下真空干燥2h，得到羧酸产物(369mg，78％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0557]
步骤h：将步骤g的产物(50mg，0.106mmol)溶解于dmf(1.0ml)中，并依序加入hobt(20mg，0.127mmol，1.2当量，20重量％h2o)、et3n(50μl，0.32mmol，3.0当量)、(1r,2r)-2-氨基环戊醇盐酸盐(22mg，0.159mmol，1.5当量)和edc
·
hcl(31mg，0.159mmol，1.5当量)，并且将溶液加热至40℃。0.5h后，反应混合物通过反相hplc(20％至80％梯度的ch3cn和h2o 0.1％tfa)直接纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.64(s,1h),9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.21-8.11(m,1h),8.05-7.93(m,1h),7.67(d,j＝7.4hz,1h),7.53(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),4.66(s,2h),4.09-3.93(m,2h),3.60-3.48(m,1h),3.26(s,3h),2.12-1.97(m,1h),1.95-1.82(m,1h),1.77-1.62(m,2h),1.60-1.40(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.10(m,1h),0.63-0.51(m,1h),0.49-0.33(m,2h),0.29-0.20(m,1h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值554.2，实验值554.2。
[0558]
实施例73：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0559][0560]
标题化合物是以与实施例72类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.55(s,1h),8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.34(d,j＝1.2hz,1h),8.13(d,j＝1.2hz,1h),7.74(q,j＝4.8hz,1h),7.58(d,j＝7.2hz,1h),4.67(s,2h),3.61-3.45(m,1h),3.32(s,3h),2.90(d,j＝4.8hz,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.09(m,1h),0.57(m,1h),0.41(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
22h25
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值484.2，实验值484.1。
[0561]
实施例74：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-乙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0562][0563]
标题化合物是以与实施例72类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.59(s,1h),9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.32(d,j＝1.2hz,1h),8.08(d,j＝1.2hz,1h),7.80(t,j＝5.9hz,1h),7.58(d,j＝7.2hz,1h),4.67(s,2h),3.58-3.48(m,1h),3.46-3.34(m,2h),3.29(s,3h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.19(m,4h),0.62-0.53(m,1h),0.46-0.35(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
23h27
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值498.2，实验值498.1。
[0564]
实施例75：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(丙-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0565][0566]
标题化合物是以与实施例72类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.23(d,j＝1.2hz,1h),8.03(d,j＝1.2hz,1h),7.55(dd,j＝7.6,3.6hz,2h),4.67(s,2h),4.24-4.04(m,1h),3.62-3.45(m,1h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.24(d,j＝6.6hz,6h),1.20-1.09(m,1h),0.63-0.51(m,1h),0.47-0.33(m,2h),0.30-0.19(m,1h)。c
24h29
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值512.2，实验值512.1。
[0567]
实施例76：5-{2-[(s)-1-环丙基乙基]-7-(甲基磺酰基氨基)-5-异吲哚啉酰基}-2-氨基-1,4,7a-三氮杂-3-茚甲酰胺
[0568][0569]
标题化合物是以与实施例39和72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.57(s,1h),8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.4(s,1h),8.10(s,1h),7.53(d,j＝7.1hz,1h),7.44(s,1h),7.31(s,1h),6.59(s,2h),4.67(s,2h),3.58-3.49(m,1h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.10(m,1h),0.61-0.52(m,1h),0.45-0.34(m,2h),0.28-0.21(m,1h)。c
21h23
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值470.2，实验值470.0。
[0570]
实施例77：2-[(s)-1-环丙基乙基]-5-(2-氨基-3-{(1-螺[2.2]戊基氨基)羰基}-1,4,7a-三氮杂-5-茚基)-7-(甲基磺酰基氨基)-1-异吲哚啉酮
[0571][0572]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.62(s,1h),8.99(d,j＝7.1hz,1h),8.11(d,j＝1.2hz,1h),8.02(dd,j＝0.7,1.3hz,1h),7.80(d,j＝4.4hz,1h),7.51(d,j＝7.2hz,1h),6.59(br,2h),4.67(s,2h),3.60-3.48(m,1h),3.26(s,3h),3.19(dt,j＝3.8,7.2hz,1h),1.30(m,4h),1.17(ddt,j＝4.5,8.1,13.1hz,1h),1.07-0.94(m,2h),0.92-0.80(m,3h),0.63-0.52(m,1h),0.41(m,2h),0.30-0.22(m,1h)。c
26h29
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值536.2，实验值536.1。
[0573]
实施例78：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0574][0575]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.66(s,1h),9.02(d,j＝7.1,0.6hz,1h),8.27(s,1h),8.16-8.05(m,2h),7.60(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),5.10(q,j＝7.2hz,1h),4.79(t,j＝7.1hz,2h),4.70-4.62(m,4h),3.62-3.46(m,1h),3.31(s,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.14(m,1h),0.66-0.51(m,1h),0.48-0.33(m,2h),0.31-0.19(m,1h)。c
24h28
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值526.2，实验值526.2。
[0576]
实施例79：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0577][0578]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.27(s,1h),8.10(s,1h),8.05(s,1h),7.61(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.80(d,j＝6.3hz,2h),4.69(s,2h),4.45(d,j＝6.4hz,2h),3.65-3.46(m,1h),3.31(s,3h),1.69(s,3h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.29-1.12(m,1h),0.69-0.52(m,1h),0.51-0.34(m,2h),0.33-0.19(m,1h)。c
25h30
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值540.2，实验值540.2。
[0579]
实施例80：2-氨基-n-(3-氰基氧杂环丁烷-3-基)-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0580][0581]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.66(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.65(s,1h),8.27(s,1h),8.19(s,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),6.65(s,2h),4.97(d,j＝7.5hz,2h),4.84(d,2h),4.67(s,2h),3.59-3.47(m,1h),3.36(s,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.09(m,1h),0.66-0.51(m,1h),0.50-0.32(m,2h),0.32-0.14(m,1h)。c
25h27
n8o5s的esi ms[m h]

，计算值551.2，实验值551.2。
[0582]
实施例81：2-氨基-n-(1-氰基环丁基)-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0583][0584]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.68(s,1h),9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.23(s,1h),8.20(s,1h),8.13(s,1h),7.63(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.69(s,2h),3.61-3.48(m,1h),3.32(s,3h),2.82-2.71(m,2h),2.60-2.48(m,2h),2.17-2.03(m,2h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.13(m,1h),0.64-0.54(m,1h),0.51-0.36(m,2h),0.34-0.21(m,1h)。c
26h29
n8o4s的esi ms[m h]

，计算值549.2，实验值549.2。
[0585]
实施例82：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基-3-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0586][0587]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.69(s,1h),9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.19(s,1h),8.07(s,1h),7.78(d,j＝7.6hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),6.63(s,2h),4.95(s,1h),4.70(s,2h),4.09(q,j＝7.9hz,1h),3.56(dd,j＝9.2,6.7hz,1h),3.37(s,3h),2.45-2.36(m,2h),2.14-2.04(m,2h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.29(s,3h),1.25-1.12(m,1h),0.64-0.55(m,1h),0.49-0.38(m,2h),0.32-0.23(m,1h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

；计算值554.2，实验值554.1。
[0588]
实施例83：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基-1-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
0.23(m,1h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

；计算值554.2，实验值554.1。
[0597]
实施例86：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r,3r)-3-羟基环戊基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0598][0599]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.67(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.21(d,j＝1.2hz,1h),8.04(d,j＝1.2hz,1h),7.66(d,j＝8.0hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.69(s,2h),4.53(h,j＝7.6hz,1h),4.28-4.23(m,1h),3.61-3.51(m,1h),3.27(s,3h),2.18-1.89(m,3h),1.72(ddd,j＝13.0,8.6,5.9hz,1h),1.57-1.46(m,2h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.13(m,1h),0.65-0.53(m,1h),0.48-0.35(m,2h),0.31-0.24(m,1h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值554.2，实验值554.2。
[0600]
实施例87：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0601][0602]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.67(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.22-8.18(m,1h),8.07-8.01(m,1h),7.71(d,j＝3.6hz,1h),7.57(d,j＝7.2hz,1h),6.64(s,2h),4.70(s,2h),3.56(dt,j＝9.3,6.8hz,1h),3.33(s,3h),2.90-2.76(m,1h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.13(m,1h),0.80-0.72(m,2h),0.70-0.64(m,2h),0.63-0.53(m,1h),0.50-0.36(m,2h),0.33-0.21(m,1h)。c
24h28
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值510.2，实验值510.2。
[0603]
实施例88：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r,4s)-4-羟基氧杂环戊烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0604]
[0605]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.68(s,1h),9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.07(dd,j＝19.5,1.2hz,2h),7.86(d,j＝7.4hz,1h),7.54(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.67(s,2h),4.32-4.24(m,2h),3.99(ddd,j＝13.1,9.3,4.8hz,2h),3.73-3.70(m,1h),3.60-3.55(m,2h),3.31(s,3h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.14(m,1h),0.64-0.54(m,1h),0.49-0.37(m,2h),0.31-0.23(m,1h)。c
25h30
n7o6s的esi ms[m h]

，计算值556.2，实验值556.2。
[0606]
实施例89：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0607][0608]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.64(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.20-8.13(m,1h),8.07-7.99(m,1h),7.72(d,j＝7.8hz,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),6.63(s,2h),4.67(s,2h),3.94(s,1h),3.66-3.52(m,1h),3.27(s,3h),1.95-1.81(m,2h),1.67-1.42(m,6h),1.33(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.16(m,1h),1.14(s,3h),0.65-0.55(m,1h),0.53-0.37(m,2h),0.34-0.23(m,1h)。c
28h36
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值582.2，实验值582.2。
[0609]
实施例90：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-(三氟甲基)环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0610][0611]
标题化合物是以与72类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.66(s,1h),9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.15(d,j＝1.2hz,1h),7.98(d,j＝1.2hz,1h),7.52(dd,j＝7.5,3.4hz,2h),4.66(s,2h),3.92-3.76(m,1h),3.64-3.48(m,1h),3.32(s,3h),1.87(d,j＝10.9hz,2h),1.79(d,j＝10.5hz,2h),1.73-1.57(m,4h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.21-1.11(m,1h),0.57(m,1h),0.41(m,2h),0.31-0.18(m,1h)。c
28h32
f3n7o5s的esi ms[m-h]-，计算值636.2，实验值636.1。
[0612]
实施例91：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-4-(2-羟基丙-2-基)环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
0.35(m,2h),0.33-0.22(m,1h)。c
24h30
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值528.2，实验值528.2。
[0621]
实施例94：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0622][0623]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.25(s,1h),8.03(s,1h),8.01(s,1h),7.50(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),4.68(s,2h),3.61-3.49(m,3h),3.31(s,3h),1.41(s,6h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.12(m,1h),0.67-0.55(m,1h),0.51-0.36(m,2h),0.34-0.24(m,1h)。c
25h32
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值542.2，实验值542.2。
[0624]
实施例95：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(3-羟基-3-甲基丁基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0625][0626]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.64(s,1h),8.49(d,j＝7.1hz,1h),8.41(s,1h),8.13-8.04(m,1h),7.80(s,1h),7.20(d,j＝7.1hz,1h),5.77(s,2h),4.74-4.42(m,2h),3.78-3.58(m,3h),3.13(s,3h),2.42(s,1h),1.90(t,j＝6.8hz,2h),1.40(d,j＝6.8hz,3h),1.32(s,6h),1.11-0.98(m,1h),0.74-0.64(m,1h),0.55-0.33(m,3h)。c
26h34
n7o5s的esi ms[m h]

；计算值556.2，实验值556.2。
[0627]
实施例96：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基-3-甲基丁-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0628][0629]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.16(s,1h),8.06(s,1h),7.97(d,j＝9.4hz,1h),7.53(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.83(t,j＝5.1hz,1h),4.66(s,2h),3.95-3.83(m,1h),3.72-3.61(m,1h),3.60-3.47(m,2h),3.30(s,3h),2.12-1.94(m,1h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.09(m,1h),0.95(dd,j＝6.8,2.5hz,6h),0.70-0.52(m,1h),0.49-0.36(m,2h),0.32-0.22
(m,1h)。c
26h34
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值556.2，实验值556.2。
[0630]
实施例97：2-氨基-n-((r)-1-环丙基-2-羟乙基)-5-(2-((s)-1-环丙基乙基)-7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0631][0632]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.64(s,1h),8.46(d,j＝7.1hz,1h),8.27(d,j＝1.2hz,1h),8.18(d,j＝7.4hz,1h),7.80(d,j＝1.2hz,1h),7.21(d,j＝7.1hz,1h),5.70(s,2h),4.60(d,j＝17.5hz,1h),4.51(d,j＝17.5hz,1h),3.94-3.88(m,2h),3.74-3.62(m,2h),3.59-3.48(m,1h),3.09(s,3h),1.39(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.17(m,1h),1.12-0.98(m,1h),0.71-0.44(m,4h),0.45-0.33(m,3h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值554.2，实验值554.2。
[0633]
实施例98：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r)-1-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)乙基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0634][0635]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.65(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.10(s,1h),7.94(s,1h),7.91(d,j＝8.0hz,1h),7.68(s,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),7.49(s,1h),6.63(s,2h),5.23-5.11(m,1h),4.69(s,2h),3.78(s,3h),3.63-3.50(m,1h),3.21(s,3h),1.56(d,j＝6.8hz,3h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.25-1.11(m,1h),0.70-0.54(m,1h),0.53-0.38(m,2h),0.35-0.24(m,1h)。c
27h32
n9o4s的esi ms[m h]

，计算值578.2，实验值578.2。
[0636]
实施例99：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-n-(吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
0.34(m,2h),0.34-0.21(m,1h)。c
26h27
n8o4s的esi ms[m h]

，计算值547.2，实验值547.1。
[0643]
实施例101：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-n-(2-甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0644][0645]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.88(s,1h),9.72(s,1h),9.11(d,j＝7.1hz,1h),8.33(d,j＝5.6hz,1h),8.26(d,j＝1.2hz,1h),8.13(d,j＝1.2hz,1h),7.71-7.61(m,2h),7.53(d,j＝2.2hz,1h),6.78(s,2h),4.72(s,2h),3.66-3.49(m,1h),3.31(s,3h),2.46(s,3h),1.35(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.08(m,1h),0.67-0.53(m,1h),0.51-0.35(m,2h),0.37-0.22(m,1h)。c
27h29
n8o4s的esi ms[m h]

，计算值561.2，实验值561.2。
[0646]
实施例102：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-n-(2,6-二甲基吡啶-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
[0647][0648]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.43(s,1h),9.72(s,1h),9.14(d,j＝7.1hz,1h),8.31(d,j＝1.2hz,1h),8.12(d,j＝1.2hz,1h),7.89(s,2h),7.74(d,j＝7.1hz,1h),6.84(br.s,2h),4.69(s,2h),3.75-3.42(m,1h),3.28(s,3h),2.61(s,6h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.06(m,1h),0.65-0.53(m,1h),0.50-0.35(m,2h),0.33-0.21(m,1h)。c
28h31
n8o4s的esi ms[m h]

，计算值575.2，实验值575.2。
[0649]
实施例103：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[6-(2-羟基丙-2-基)吡啶-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0650][0651]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.02(s,1h),9.74(s,1h),9.45(s,1h),8.75(d,j＝8.7hz,1h),8.58(s,1h),8.40(s,1h),7.79(s,
1h),7.73(d,j＝8.7hz,1h),7.42-7.31(m,1h),4.78-4.55(m,2h),3.69(q,j＝7.4,6.9hz,2h),3.15(s,3h),1.74(s,6h),1.42(d,j＝6.8hz,3h),1.16-0.97(m,1h),0.77-0.62(m,1h),0.59-0.28(m,3h)。c
29h33
n8o5s的esi ms[m h]

；计算值605.2，实验值605.2。
[0652]
实施例104：(s)-2-氨基-5-(2-(1-环丙基乙基)-7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代异吲哚啉-5-基)-n-苯基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0653][0654]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.68(s,1h),9.62(s,1h),8.52(d,j＝7.0hz,1h),8.25(s,1h),7.80(s,1h),7.72(d,j＝7.9hz,2h),7.37(t,j＝7.7hz,2h),7.27-7.22(m,1h),7.12(t,j＝7.4hz,1h),4.63(d,j＝17.6hz,1h),4.53(d,j＝17.6hz,1h),3.77-3.61(m,1h),3.10(s,3h),1.40(d,j＝6.8hz,3h),1.13-0.98(m,1h),0.73-0.66(m,1h),0.58-0.30(m,3h)。c
27h28
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值546.2，实验值546.1。
[0655]
实施例105：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[4-(羟甲基)苯基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0656][0657]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备(酰胺偶联的步骤b在150℃下进行1h)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.71(s,1h),9.70(s,1h),8.54(d,j＝7.1hz,1h),8.31(s,1h),7.85(s,1h),7.75(d,j＝8.4hz,2h),7.38(d,j＝8.4hz,2h),7.29-7.26(m,1h),4.72-4.50(m,4h),3.76-3.66(m,1h),3.12(s,3h),1.41(d,j＝6.8hz,3h),1.15-0.97(m,1h),0.76-0.61(m,1h),0.58-0.33(m,3h)。c
28h30
n7o5s的esi ms[m h]

；计算值576.2，实验值576.3。
[0658]
实施例106：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[1-(2,2,2-三氟乙基)-1h-吡唑-4-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0659]
[0660]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.68(s,1h),9.41(s,1h),8.49(d,j＝7.1hz,1h),8.32(d,j＝1.2hz,1h),8.25(s,1h),7.94(s,1h),7.76(s,1h),7.24(d,j＝7.1hz,1h),4.78-4.49(m,4h),3.78-3.62(m,1h),3.11(s,3h),1.42(d,j＝6.9hz,3h),1.07(ddt,j＝13.2,9.1,4.4hz,1h),0.77-0.64(m,1h),0.61-0.30(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,cdcl3)δ-71.65(t)。c
26h27
f3n9o4s的esi ms[m h]

；计算值618.2，实验值618.1。
[0661]
实施例107：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1,3-二甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0662][0663]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.66(s,1h),9.46(s,1h),8.59(d,j＝7.1hz,1h),8.20(d,j＝1.2hz,1h),8.09(s,1h),7.93(d,j＝1.1hz,1h),7.32(d,j＝7.1hz,1h),4.67-4.45(m,2h),3.96(s,3h),3.75-3.64(m,1h),3.11(s,3h),2.44(s,3h),1.41(d,j＝6.8hz,3h),1.13-1.01(m,1h),0.76-0.65(m,1h),0.58-0.31(m,3h)。c
26h30
n9o4s的esi ms[m h]

；计算值564.2，实验值564.3。
[0664]
实施例108：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0665][0666]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.60(s,1h),9.22(s,1h),8.61(d,j＝7.0hz,1h),8.32(d,j＝1.1hz,1h),7.95(s,1h),7.77(d,j＝1.2hz,1h),7.31(d,j＝7.0hz,1h),4.70-4.48(m,2h),3.94(s,3h),3.75-3.63(m,1h),3.08(s,3h),2.36(s,3h),1.39(d,j＝6.8hz,3h),1.11-0.98(m,1h),0.76-0.63(m,1h),0.57-0.30(m,3h)。c
26h30
n9o4s的esi ms[m h]

；计算值564.2，实验值564.2。
[0667]
实施例109：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1-甲基-1h-1,2,4-三唑-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0668][0669]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ10.21(s,1h),9.65(s,1h),8.53(d,j＝7.0hz,1h),8.33(s,1h),8.13(s,1h),7.91(s,1h),7.31(d,j＝7.1hz,1h),4.71-4.48(m,2h),3.98(s,3h),3.76-3.62(m,1h),3.16(s,3h),1.39(d,j＝6.8hz,3h),1.11-0.99(m,1h),0.75-0.61(m,1h),0.57-0.30(m,3h)。c
24h27n10
o4s的esi ms[m h]

；计算值551.2，实验值551.2。
[0670]
实施例110：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-乙磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0671][0672]
此分子是以与实施例113(见下文)类似的方式制备，其中在步骤a中用乙磺酰氯代替2-甲氧基-乙磺酰氯，并且使用环丙胺用于最终酰胺偶联而经由相同化学步骤获得最终化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.66(s,1h),9.00(d,j＝7.2hz,1h),8.21(s,1h),8.04(s,1h),7.67(d,j＝3.7hz,1h),7.54(d,j＝7.2hz,1h),4.68(s,2h),3.61-3.51(m,1h),3.39(q,j＝7.3hz,2h),2.92-2.75(m,1h),1.32(d,j＝6.9hz,3h),1.23(t,j＝7.3hz,3h),1.20-1.10(m,1h),0.79-0.71(m,2h),0.67-0.62(m,2h),0.62-0.51(m,1h),0.47-0.34(m,2h),0.30-0.21(m,1h)。c
25h30
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值524.1，实验值524.1。
[0673]
实施例111：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-乙磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基-3-甲基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0674][0675]
标题化合物是以与实施例72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.67(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.28(s,1h),8.07(s,1h),7.80(d,j＝7.6hz,1h),7.55(d,j＝7.2hz,1h),6.63(s,2h),4.88(s,1h),4.69(s,2h),4.58(q,j＝7.8hz,1h),3.57(dd,j＝9.2,6.7hz,1h),3.40-3.32(m,2h),2.39-2.30(m,2h),2.14-2.02(m,2h),1.37-1.28(m,6h),1.27-1.12(m,4h),0.64-0.52(m,1h),0.51-0.34(m,2h),0.32-0.19(m,1h)。c
27h34
n7o5s的esi ms[m h]

；计算值568.2，实验值568.2。
[0676]
实施例112：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-乙磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0677][0678]
标题化合物是以与实施例99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.77(s,1h),9.72(s,1h),9.11(d,j＝7.1hz,1h),8.94(dd,j＝2.6,0.7hz,1h),8.32-8.29(m,2h),8.21(ddd,j＝8.3,2.6,1.5hz,1h),8.15(d,j＝1.2hz,1h),7.65(d,j＝7.1hz,1h),7.40(ddd,j＝8.3,4.7,0.7hz,1h),6.76(s,2h),4.72(s,2h),3.63-3.52(m,1h),3.43(q,j＝7.3hz,2h),1.35(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.15(m,4h),0.63-0.54(m,1h),0.49-0.37(m,2h),0.32-0.25(m,1h)。c
27h29
n8o4s的esi ms[m h]

；计算值561.2，实验值561.2。
[0679]
实施例113：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(2-甲氧基乙磺酰胺基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0680][0681]
步骤a：将实施例72步骤b的苯胺产物(500mg，1.69mmol，1.0当量)溶解于ch2cl2(6ml)中，并且将混合物冷却至0℃。向此溶液中加入dmap(21mg，0.169mmol，10mol％)、dipea(0.90ml，5.07mmol，3.0当量)和2-甲氧基-乙磺酰氯(670mg，4.23mmol，2.5当量)。将
反应混合物升温至室温并搅拌2h。将反应物用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩，得到双磺酰化产物，其以粗制形式继续用于下一步骤。
[0682]
步骤b：将步骤a的产物溶解于thf(5ml)中，并加入tbaf(1.0m于thf中，2.70ml，2.70mmol，1.6当量)。将反应混合物搅拌1h，然后用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过快速柱色谱法(sio2，己烷至50％etoac梯度)进行纯化，得到呈白色固体状的反相磺酰胺(318mg，0.763mmol，经2个步骤的产率45％)。
[0683]
步骤c：将步骤b的产物(215mg，0.515mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(38mg，0.052mmol，0.1当量)、b2pin2(170mg，0.670mmol，1.3当量)和koac(111mg，1.13mmol，2.2当量)的二噁烷(3ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌1h。将混合物冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并减压浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0684]
步骤d：将获自步骤c的粗制频哪醇硼酸酯与pd(dppf)cl2(38mg，0.052mmol，0.1当量)、1m na2co3水溶液(1.5mmol，1.5ml，3.0当量)、2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(124mg，0.515mmol，1.0当量)和二噁烷(2ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌1h。将反应混合物冷却至室温，并用ch2cl2和h2o稀释。分离水相，并用另外的ch2cl2反萃取，然后用etoac反萃取一次。合并有机层并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，100％ch2cl2至100％etoac梯度)进行纯化，得到交叉偶联的酯产物(95mg，经2个步骤的产率34％)。
[0685]
步骤e：将步骤d的乙酯产物(95mg，0.175mmol，1.0当量)溶解于etoh(0.2ml)、thf(1ml)和h2o(0.2ml)中。加入lioh.h2o(88mg，2.1mmol，12.0当量)，并且将反应混合物加热至80℃保持4h。将所得混合物冷却至室温，并真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释并用2n hcl酸化至ph 3。通过真空过滤收集所得沉淀物，并在40℃下真空干燥2h，得到羧酸产物(65mg，72％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0686]
步骤f：将步骤e的产物(65mg，0.126mmol)溶解于dmf(1.0ml)中，并依序加入环丙胺(20μl，0.35mmol，2.0当量)、et3n(50μl，0.38mmol，3.0当量)和hatu(96mg，0.252mmol，2.0当量)，并且将溶液在室温下进行搅拌。0.5h后，将反应混合物用2m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过快速柱色谱法(sio2，100％dcm至100％etoac至100％ch2cl2至10％meoh系列梯度)进行纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物(26.8mg，38％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ9.74(s,1h),8.48(d,j＝7.1hz,1h),8.33(s,1h),7.82(s,1h),7.73(s,1h),7.20(d,j＝7.1hz,1h),5.80(s,2h),4.67-4.49(m,2h),3.82(t,j＝5.9hz,2h),3.77-3.63(m,1h),3.45(t,j＝5.9hz,2h),3.27(s,3h),3.05-2.86(m,1h),1.40(d,j＝6.8hz,3h),1.15-1.00(m,1h),0.93-0.83(m,2h),0.79-0.61(m,3h),0.55-0.32(m,3h)。c
26h32
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值554.2，实验值554.2。
[0687]
实施例114：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(n-甲基甲磺酰胺基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0688][0689]
步骤a：向芳基溴(800mg，2.14mmol，1.0当量)于dmf(7ml)中的溶液中加入k2co3(590mg，4.28mmol，2.0当量)和mei(0.45ml，4.28mmol，2.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌3h。将反应物用2m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用h2o、盐水洗涤，并且经mgso4干燥。减压浓缩，得到粗制甲基化的反相磺酰胺，其直接用于下一步骤中。
[0690]
步骤b：将步骤a的产物(约2.14mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(150mg，0.21mmol，0.1当量)、b2pin2(700mg，2.78mmol，1.3当量)和koac(460mg，4.70mmol，2.2当量)的二噁烷(10ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌2h。将混合物冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并减压浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0691]
步骤c：将获自步骤b的粗制频哪醇硼酸酯与pd(dppf)cl2(150mg，0.21mmol，0.1当量)、1m na2co3水溶液(6.5mmol，6.5ml，3.0当量)、2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(513mg，0.515mmol，1.0当量)和二噁烷(6.5ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌1.5h。将反应混合物冷却至室温，并用ch2cl2和h2o稀释。分离水相，并且用另外的ch2cl2反萃取，然后用etoac反萃取一次。合并有机层并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，100％dcm至100％etoac梯度)进行纯化，得到交叉偶联的酯产物(550mg，经3个步骤的产率50％)。
[0692]
步骤d：将步骤c的乙酯产物(300mg，0.586mmol，1.0当量)溶解于etoh(1ml)、thf(2ml)和h2o(1ml)中。加入lioh
·
h2o(147mg，3.52mmol，6.0当量)，并且将反应混合物加热至70℃保持15h。将所得混合物冷却至室温，并真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释并用2n hcl酸化至ph 3。通过真空过滤收集所得沉淀物，并且在40℃下真空干燥2h，得到羧酸产物(130mg，46％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0693]
步骤e：将步骤d的产物(50mg，0.103mmol)溶解于dmf(1.0ml)中，并依序加入hobt(24mg，0.134mmol，1.3当量，20重量％h2o)、et3n(50μl，0.31mmol，3.0当量)、环丙胺(10mg，0.165mmol，1.6当量)和edc
·
hcl(31mg，0.162mmol，1.6当量)，并且将溶液加热至40℃。2天后，反应混合物通过反相hplc(20％至80％梯度的ch3cn和h2o 0.1％tfa)直接纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.35(s,1h),8.14(s,1h),7.82(d,j＝4.0hz,1h),7.65(d,j＝7.2hz,1h),6.62(s,2h),4.67(s,2h),3.69-3.57(m,1h),3.38(s,3h),3.12(s,3h),2.92-2.83(m,1h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.11(m,1h),0.84-0.73(m,2h),0.68-0.53(m,3h),0.50-0.34(m,2h),0.34-0.23(m,
1h)。c
25h30
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值524.2，实验值524.2。
[0694]
实施例115：2-氨基-n-环丙基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0695][0696]
标题化合物是以与实施例27和72类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.43(s,1h),9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.21(s,1h),8.04(s,1h),7.67(d,j＝3.6hz,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),6.63(s,2h),5.03(p,j＝7.6hz,1h),4.77(d,j＝17.7hz,1h),4.54(d,j＝17.7hz,1h),3.31(s,3h),2.81(tq,j＝7.4,3.8hz,1h),1.51(d,j＝7.1hz,3h),0.85-0.70(m,2h),0.70-0.55(m,2h)。c
22h22
f3n7o4s的esi ms[m h]

；计算值538.1，实验值538.0。
[0697]
实施例116：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0698][0699]
标题化合物是以与实施例123(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.44(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.30(s,1h),8.14-8.02(m,2h),7.58(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),5.18-4.94(m,2h),4.84-4.73(m,3h),4.66(t,j＝6.6hz,2h),4.55(d,j＝17.6hz,1h),3.31(s,3h),1.51(d,j＝7.1hz,3h)。c
22h22
f3n7o5s的esi ms[m h]

；计算值554.1，实验值554.1。
[0700]
实施例117：(s)-2-氨基-n-(3-氰基氧杂环丁烷-3-基)-5-(7-(甲基磺酰胺基)-1-氧代-2-(1,1,1-三氟丙-2-基)异吲哚啉-5-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0701][0702]
标题化合物是以与实施例123(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.44(s,1h),9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.65(s,1h),8.30(d,j＝1.2hz,1h),8.20(d,j＝1.2hz,1h),7.65(d,j＝7.1hz,1h),6.67(br.s,2h),5.10-4.99(m,1h),4.97(d,j＝7.4hz,2h),4.84(dd,j＝7.6,1.9hz,2h),4.77(d,j＝17.7hz,1h),4.54(d,j＝17.7hz,1h),3.39(s,3h),1.51(d,j＝7.1hz,3h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-73.53(d,j＝8.2hz)。
3.42(m,1h),3.31(s,3h),1.51(d,j＝7.1hz,3h),1.23-1.06(m,1h),0.55-0.33(m,3h),0.31-0.21(m,1h)。c
24h27
f3n7o5s的esi ms[m h]

，计算值582.2，实验值582.2。
[0712]
实施例121：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0713][0714]
标题化合物是以与实施例123(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.25(s,1h),8.06(s,1h),7.80(d,j＝7.4hz,1h),7.54(d,j＝7.1hz,1h),6.61(s,2h),5.14-4.92(m,1h),4.83-4.69(m,1h),4.62-4.48(m,2h),4.32-4.25(m,1h),3.30(s,3h),2.37-2.27(m,2h),2.24-2.13(m,2h),1.51(d,j＝7.0hz,4h)。c
23h24
f3n7o5s的esi ms[m h]

；计算值568.2，实验值568.1。
[0715]
实施例122：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0716][0717]
标题化合物是以与实施例123(见下文)类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.44(s,1h),9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.15(s,1h),8.00(s,1h),7.57-7.46(m,2h),6.70-6.56(m,2h),5.03(p,j＝7.6hz,1h),4.75(d,j＝17.8hz,1h),4.53(d,j＝17.7hz,1h),3.81(q,j＝7.3hz,1h),3.36(s,3h),1.74-1.62(m,4h),1.64-1.54(m,2h),1.51(d,j＝7.1hz,3h),1.46-1.33(m,2h),1.12(s,3h)。c
26h30
f3n7o5s的esi ms[m h]

；计算值610.2，实验值610.1。
[0718]
实施例123：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0719][0720]
步骤a：将粗制苯甲基溴起始物质(6.40g，19.6mmol，1.0当量)与ch3cn(150ml)、(2s)-1,1,1-三氟-2-丁胺(2.5ml，19.6mmol，1.0当量)和k2co3(8.11g，58.8mmol，3.0当量)组合。将所得混合物在80℃下搅拌14h，然后冷却至室温。过滤混合物并浓缩在硅藻土上。通过柱色谱法(sio2，己烷至20％etoac梯度)进行纯化，得到呈浅黄色油状物的取代产物(4.62g，63％)，其直接用于下一步骤。
[0721]
步骤b：将步骤a的纯胺产物(4.62g)在120℃下加热4h。通过柱色谱法(sio2，己烷至20％etoac梯度)进行纯化，得到呈白色固体状的异吲哚啉酮产物(1.4g，33％)。
[0722]
步骤c：将步骤b的产物(1.1g，3.24mmol，1.0当量)与纯pmbnh2(3.5ml)组合，并加热至100℃保持14h。将反应混合物冷却并分配于10％柠檬酸水溶液与etoac之间。分离水层并用另外的etoac反萃取。合并有机层，并用另外的10％柠檬酸水溶液、盐水洗涤，并经mgso4干燥。减压浓缩，得到pmb胺加合物，其以粗制形式用于下一步骤中。
[0723]
步骤d：将步骤c的产物与tfa(6ml)组合，并在50℃下搅拌4h。将反应混合物减压浓缩，并且用饱和nahco3水溶液淬灭并用etoac稀释。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，己烷至20％etoac梯度)进行纯化，得到呈白色固体状的苯
胺产物(630mg，经2个步骤的产率58％)。
[0724]
步骤e：将步骤d的产物(630mg，1.87mmol，1.0当量)溶解于ch2cl2(10ml)中，并且将混合物冷却至0℃。向此溶液中加入dmap(22mg，0.19mmol，10mol％)、dipea(1.0ml，5.60mmol，3.0当量)和mscl(0.40ml，4.70mmol，2.5当量)。将反应混合物升温至室温并搅拌1h。将反应物用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩，得到双磺酰化产物，其以粗制形式继续用于下一步骤。
[0725]
步骤f：将步骤e的产物与thf(4ml)、h2o(2ml)和naoh(150mg，3.75mmol，2.0当量)组合。将混合物在室温下搅拌3h。将反应物用1m hcl水溶液淬灭并用etoac稀释。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用盐水洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩，得到粗制反相磺酰胺物质(810mg)，其直接继续用于下一步骤。
[0726]
步骤g：将步骤f的产物(810mg，1.95mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(142mg，0.19mmol，0.1当量)、b2pin2(642mg，2.54mmol，1.3当量)和koac(420mg，4.30mmol，2.2当量)的二噁烷(13ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌3h。将反应物冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并减压浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0727]
步骤h：将获自步骤g的粗制频哪醇硼酸酯与pd(dppf)cl2(142mg，0.19mmol，0.1当量)、1m na2co3水溶液(6.0mmol，6.0ml，3.0当量)、2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(470mg，1.95mmol，1.0当量)和二噁烷(6ml)组合。将所得混合物加热至100℃并搅拌1h。将反应混合物冷却至室温，并用ch2cl2和h2o稀释。分离水相，并用另外的ch2cl2反萃取，然后用etoac反萃取一次。合并有机层并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，ch2cl2至5％meoh梯度)进行纯化，得到交叉偶联的酯产物(970mg，经2个步骤的产率92％)。
[0728]
步骤i：将步骤h的乙酯产物(970mg，1.80mmol，1.0当量)溶解于etoh(5ml)、thf(10ml)和h2o(5ml)中。加入lioh
·
h2o(460mg，10.8mmol，6.0当量)，并且将反应混合物加热至80℃保持15h。将所得混合物冷却至室温，并且真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释，并且用2n hcl酸化至ph 3。通过真空过滤收集所得沉淀物，并且在40℃下真空干燥2h，得到羧酸产物(479mg，52％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0729]
步骤j：将步骤i的产物(55mg，0.107mmol)溶解于dmf(1.0ml)中，并依序加入hobt(21mg，0.139mmol，1.3当量，20重量％h2o)、et3n(50μl，0.32mmol，3.0当量)、3-氧杂环丁胺(13mg，0.171mmol，1.6当量)和edc
·
hcl(33mg，0.171mmol，1.6当量)，并且将溶液加热至40℃。2h后，用h2o和etoac稀释反应混合物。分离水层，并用另外的etoac反萃取。合并有机层，用h2o洗涤并经mgso4干燥。减压浓缩并通过柱色谱法(sio2，dcm至5％meoh梯度)进行纯化，得到呈黄色固体状的标题化合物(23mg，38％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.46(s,1h),9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.32(s,1h),8.18-8.06(m,2h),7.61(d,j＝7.2hz,1h),6.64(s,2h),5.23-5.05(m,1h),4.95-4.72(m,4h),4.68(t,j＝6.7hz,2h),4.57(d,j＝17.9hz,1h),3.38(s,3h),2.05-1.91(m,2h),0.89(t,j＝7.3hz,3h)。c
23h25
f3n7o5s的esi ms[m h]

，计算值568.2，实验值568.2。
[0730]
实施例124：2-氨基-n-环丙基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0731][0732]
标题化合物是以与实施例123类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.45(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.23(s,1h),8.05(s,1h),7.70(d,j＝3.6hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.94-4.80(m,1h),4.75(d,j＝17.9hz,1h),4.56(d,j＝17.8hz,1h),3.35(s,3h),2.84(td,j＝7.1,3.6hz,1h),1.97(dq,j＝14.9,7.2hz,2h),0.89(t,j＝7.3hz,3h),0.81-0.73(m,2h),0.69-0.62(m,2h)。c
23h25
f3n7o4s的esi ms[m h]

，计算值552.2，实验值552.2。
[0733]
实施例125：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(3-甲基氧杂环丁烷-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0734][0735]
标题化合物是以与实施例123类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.40(s,1h),9.03(d,j＝7.1hz,1h),8.36-8.21(m,1h),8.11-8.05(m,1h),8.02(s,1h),7.57(d,j＝7.2hz,1h),6.61(s,2h),4.90-4.79(m,1h),4.77(d,j＝6.4hz,2h),4.72(d,j＝18.0hz,1h),4.53(d,j＝17.8hz,1h),4.42(d,j＝6.4hz,2h),3.32(s,3h),2.01-1.84(m,2h),1.66(s,3h),0.86(t,j＝7.3hz,3h)。c
24h27
f3n7o5s的esi ms[m h]

，计算值582.2，实验值582.2。
[0736]
实施例126：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-(2-羟基丙-2-基)环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0737][0738]
标题化合物是以与实施例123类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.46(s,1h),9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.31(d,j＝1.3hz,1h),8.09(d,j＝1.2hz,1h),7.88(d,j＝7.9hz,1h),7.56(d,j＝7.2hz,1h),6.64(s,2h),4.86(p,j＝7.9hz,1h),4.75(d,j＝17.9hz,1h),4.55(d,j＝17.8hz,1h),4.49-4.39(m,1h),4.25(s,1h),3.33(s,3h),2.40-2.24(m,3h),2.11-1.91(m,4h),1.07(s,6h),0.89(t,j＝7.3hz,3h)。c
27h33
f3n7o5s的esi ms
[m h]

，计算值624.2，实验值624.2。
[0739]
实施例127：2-氨基-5-{7-甲磺酰胺基-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0740][0741]
标题化合物是以与实施例123类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.43(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.18(s,1h),8.03(d,j＝1.2hz,1h),7.72(d,j＝7.9hz,1h),7.52(d,j＝7.1hz,1h),6.64(br.s,2h),4.87(q,j＝8.0hz,1h),4.72(d,j＝18.0hz,1h),4.53(d,j＝17.7hz,1h),3.95-3.90(m,1h),3.31(s,3h),1.96(p,j＝7.4hz,2h),1.92-1.83(m,2h),1.60-1.45(m,6h),1.12(s,3h),0.88(t,j＝7.3hz,3h)。c
27h33
f3n7o5s的esi ms[m h]

，计算值624.2，实验值624.2。
[0742]
实施例128：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基-2,2,2-三氟乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0743][0744]
此分子是以与实施例123类似的方式制备，其中在步骤a中用(αs)-α-(三氟甲基)环丙烷甲胺代替(2s)-1,1,1-三氟-2-丁胺，并且在最终酰胺偶联中使用环丙胺。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.43(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.24(s,1h),8.08(s,1h),7.70(d,j＝3.6hz,1h),7.57(d,j＝7.2hz,1h),6.65(s,2h),4.92(d,j＝17.9hz,1h),4.70(d,j＝17.9hz,1h),4.26-4.11(m,1h),3.35(s,3h),2.88-2.79(m,1h),1.57-1.43(m,1h),0.91-0.57(m,7h),0.33-0.18(m,1h)。c
24h25
f3n7o4s的esi ms[m h]

，计算值564.2，实验值564.2。
[0745]
实施例129：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1r)-1-环丙基-2,2,2-三氟乙基]-7-甲磺酰胺基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0746][0747]
此分子是以与实施例123类似的方式制备，其中在步骤a中用(αr)-α-(三氟甲基)环丙烷甲胺代替(2s)-1,1,1-三氟-2-丁胺，并且在最终酰胺偶联中使用环丙胺。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.43(s,1h),9.04(d,j＝7.1hz,1h),8.24(s,1h),8.08(s,1h),7.70(d,
j＝3.6hz,1h),7.57(d,j＝7.2hz,1h),6.65(s,2h),4.92(d,j＝17.9hz,1h),4.70(d,j＝17.9hz,1h),4.26-4.11(m,1h),3.35(s,3h),2.88-2.79(m,1h),1.57-1.43(m,1h),0.91-0.57(m,7h),0.33-0.18(m,1h)。c
24h25
f3n7o4s的esi ms[m h]

，计算值564.2，实验值564.2。
[0748]
实施例130：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0749][0750]
步骤a：以与实施例1步骤h类似的方式进行。
[0751]
步骤b：在室温下向步骤a的产物(1.00g，2.35mmol)和nmp(7.8ml)的混合物中以整份加入甲硫醇钠(165mg，2.35mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h。加入etoac(100ml)，并用1:1的h2o:盐水(4
×
100ml)洗涤有机相。有机相经na2so4干燥并浓缩。粗物质通过柱色谱法(sio2，0至10％meoh/ch2cl2)纯化，得到呈橙色固体状的所需产物(968mg；91％)。
[0752]
步骤c：反应以与实施例1步骤i类似的方式进行，得到呈黄色固体状的所需产物(906mg，85％)。
[0753]
步骤d：反应以与实施例1步骤j类似的方式进行，得到呈黄色固体状的所需产物(91mg，60％)。
[0754]
步骤e：向步骤c的产物(91mg，0.182mmol)于9:1ch2cl2:meoh(3.6ml)中的混合物中以整份加入m-cpba(125mg，0.543mmol，75重量％于h2o中)。将反应混合物在室温下搅拌3h并减压浓缩。粗物质通过柱色谱法(sio2，0至15％meoh/ch2cl2)纯化，随后通过反相hplc(5％至95％ch3cn/h2o 0.1％tfa)纯化，得到呈黄色固体状的所需产物(10mg；10％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.63(s,1h),9.14(d,j＝7.1hz,1h),9.05(d,j＝1.5hz,1h),8.85(d,j＝1.5hz,1h),8.12(s,1h),7.81(d,j＝7.2hz,1h),7.79(s,1h),6.72(s,2h),4.80(s,2h),3.85(s,3h),3.72(s,3h),3.70-3.62(m,1h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.17(m,1h),0.67-0.57(m,1h),0.51-0.39(m,2h),0.36-0.27(m,1h)。c
25h27
n8o4s的esi ms[m h]

，计算
值535.2，实验值535.1。
[0755]
实施例131：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0756][0757]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.79(d,j＝1.5hz,1h),8.71(d,j＝1.5hz,1h),7.71(d,j＝7.3hz,1h),7.68(d,j＝7.2hz,1h),6.65(s,2h),4.77(s,2h),4.06(s,1h),3.83-3.70(m,1h),3.70-3.60(m,4h),1.85-1.67(m,4h),1.65-1.56(m,2h),1.49-1.38(m,2h),1.35(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.17(m,1h),1.14(s,3h),0.66-0.57(m,1h),0.51-0.39(m,2h),0.34-0.27(m,1h)。c
28h35
n6o5s的esi ms[m h]

，计算值567.2，实验值567.1。
[0758]
实施例132：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-甲磺酰基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0759][0760]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.87(d,j＝1.5hz,1h),8.76(d,j＝1.5hz,1h),7.75(d,j＝4.2hz,1h),7.73(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.77(s,2h),3.69(s,4h),3.68-3.60(m,1h),2.96-2.87(m,1h),1.35(d,j＝6.8hz,3h),1.27-1.15(m,1h),0.83-0.75(m,2h),0.76-0.69(m,2h),0.65-0.57(m,1h),0.50-0.40(m,2h),0.34-0.27(m,1h)。c
24h27
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值495.2，实验值495.0。
[0761]
实施例133：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(乙磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0762][0763]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.85(d,j＝1.6hz,1h),8.76(d,j＝1.6hz,1h),7.78(d,j＝4.2hz,1h),7.72
(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.77(s,2h),3.98-3.87(m,2h),3.64(dq,j＝8.9,6.8hz,1h),2.96-2.88(m,1h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.13(m,4h),0.83-0.75(m,2h),0.73-0.67(m,2h),0.66-0.58(m,1h),0.50-0.38(m,2h),0.33-0.25(m,1h)。c
25h29
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值509.2，实验值509.1。
[0764]
实施例134：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(丙-2-磺酰基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0765][0766]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.82(d,j＝1.6hz,1h),8.74(d,j＝1.5hz,1h),7.79(d,j＝4.3hz,1h),7.71(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.77(s,2h),4.58(h,j＝6.8hz,1h),3.63(dq,j＝9.0,6.8hz,1h),2.97-2.87(m,1h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.16(m,7h),0.83-0.75(m,2h),0.72-0.66(m,2h),0.65-0.58(m,1h),0.50-0.37(m,2h),0.33-0.26(m,1h)。c
26h31
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值523.2，实验值523.1。
[0767]
实施例135：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-环丙基甲磺酰基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0768][0769]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.86(d,j＝1.6hz,1h),8.72(d,j＝1.5hz,1h),7.75(d,j＝4.3hz,1h),7.69(d,j＝7.3hz,1h),4.76(s,2h),3.88(d,j＝7.2hz,2h),3.66-3.56(m,1h),2.94-2.87(m,1h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.17(m,1h),0.88(m,1h),0.79-0.73(m,2h),0.73-0.66(m,2h),0.61-0.55(m,1h),0.47-0.36(m,4h),0.28-0.16(m,3h)。c
27h31
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值535.2，实验值535.2。
[0770]
实施例136：2-氨基-5-[7-(环丁磺酰基)-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]-n-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0771][0772]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.06(d,j＝7.1hz,1h),8.83(d,j＝1.6hz,1h),8.70(d,j＝1.6hz,1h),7.79(d,j＝4.2hz,1h),7.68(d,j＝7.3hz,1h),5.15(p,j＝8.1hz,1h),4.75(s,2h),3.61(m,1h),2.91(td,j＝7.2,3.8hz,1h),2.39-2.26(m,2h),2.22-2.10(m,2h),2.03-1.93(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.17(m,1h),0.81-0.76(m,2h),0.71-0.66(m,2h),0.57(m,1h),0.47-0.35(m,2h),0.27(m,1h)。c
27h31
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值535.2，实验值535.2。
[0773]
实施例137：2-氨基-5-[7-(环戊磺酰基)-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]-n-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0774][0775]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.84(d,j＝1.5hz,1h),8.73(d,j＝1.5hz,1h),7.79(d,j＝4.3hz,1h),7.71(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.93(tt,j＝9.1,6.0hz,1h),4.77(s,2h),3.64(dq,j＝8.9,6.8hz,1h),2.98-2.88(m,1h),1.99-1.80(m,4h),1.79-1.67(m,2h),1.67-1.54(m,2h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.15(m,1h),0.82-0.74(m,2h),0.71-0.64(m,2h),0.64-0.57(m,1h),0.50-0.37(m,2h),0.34-0.25(m,1h)。c
28h33
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值549.2，实验值549.1。
[0776]
实施例138：2-氨基-5-[7-(环己磺酰基)-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]-n-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0777][0778]
标题化合物是以与实施例130类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.80(d,j＝1.6hz,1h),8.74(d,j＝1.5hz,1h),7.79(d,j＝4.2hz,1h),7.71(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.77(s,2h),4.37(tt,j＝12.0,3.4hz,1h),3.66(dq,j＝
9.0,6.9hz,1h),2.96-2.88(m,1h),1.93-1.76(m,5h),1.70-1.58(m,1h),1.55-1.40(m,2h),1.34(d,j＝6.8hz,3h),1.26-1.14(m,5h),0.83-0.76(m,2h),0.72-0.66(m,2h),0.65-0.57(m,1h),0.49-0.39(m,2h),0.34-0.27(m,1h)。c
29h35
n6o4s的esi ms[m h]

，计算值563.2，实验值563.1。
[0779]
实施例139：2-氨基-n-环丙基-5-[7-(甲基胺磺酰基)-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丙-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0780][0781]
步骤a：向4-溴-2-(溴甲基)-6-氟苯甲酸甲酯(23.4g，71.8mmol，1.0当量)和(2s)-1,1,1-三氟-2-丙胺(7.41ml，75.4mmol，1.05当量)于ch3cn(360ml，0.2m)中的溶液中加入k2co3(29.8g，215.4mmol，3.0当量)。将混合物加热至60℃保持过夜。过滤混合物，浓缩至干，并通过快速色谱法(sio2，0
→
20％etoac/己烷)纯化，得到呈无色油状物的所需产物(15.9g，62％)。c
12h12
brf4no2的esi ms[m h]

；计算值358.0，实验值358.0。
[0782]
步骤b：在n2下将装有步骤a的产物(5.0g，15.3mmol)的烧瓶加热至130℃保持过夜。所需产物不经进一步纯化即使用。c
11
h8brf4no3的esi ms[m h]

；计算值326.0，实验值326.0。
[0783]
步骤c：将步骤b的产物(661mg，0.2.03mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(146mg，0.20mmol，0.1当量)、b2pin2(618mg，2.43mmol，1.2当量)和koac(497mg，5.08mmol，2.5当量)的二噁烷(6.8ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持2h，冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0784]
步骤d：将步骤c的产物残余物(511mg，1.37mmol，1.0当量)与含2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(330mg，1.37mmol，1.0当量)、pd(dppf)cl2(102mg，0.14mmol，0.1当量)和na2co3(1m水溶液，5.5ml)的二噁烷(13.7ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持1h，浓缩，并通过快速色谱法(sio2，0
→
10％meoh/ch2cl2)纯化，得到交叉偶联的乙酯
(340mg，37％，2个步骤)。c
20h17
f4n5o3的esi ms[m h]

；计算值452.1，实验值452.1。
[0785]
步骤e：向步骤d的产物(500mg，1.11mmol，1.0当量)和苯甲基硫醇(143μl、1.22mmol，1.1当量)于dmf(3.7ml，0.3m)中的溶液中加入k2co3(460mg，3.33mmol，3.0当量)。将混合物加热至55℃保持4h。在冷却至室温后，将混合物分配于etoac与h2o之间。有机层用h2o(2
×
)和盐水洗涤，经mgso4干燥并浓缩至干。快速色谱法(sio2，0
→
10％meoh/ch2cl2)，得到所需产物(494mg，84％)。c
27h24
f3n5o3s的esi ms[m h]

；计算值556.2，实验值556.1。
[0786]
步骤f：向步骤e的产物(494mg，0.936mmol，1.0当量)于etoh(4.7ml，0.2m)中的悬浮液中加入lioh(3m水溶液，0.94ml，2.81mmol)。将混合物加热至80℃保持1h。在冷却至室温后，减压去除etoh。通过加入2m hcl而沉淀出产物并过滤。所需产物不经进一步纯化即使用。c
25h20
f3n5o3s的esi ms[m h]

；计算值528.1，实验值528.1。
[0787]
步骤g：在室温下向步骤f的产物、环丙胺(70μl，1.03mmol，1.1当量)、hobt(158mg，1.03mmol，1.1当量)和et3n(652μl，4.68mmol，5当量)于dmf(9.4ml，0.1m)中的溶液中加入edc(269mg，1.40mmol，1.5当量)。将反应混合物加热至40℃保持4h。将混合物用etoac稀释，并依序用10％柠檬酸、h2o和盐水洗涤。有机物经mgso4干燥，过滤并减压浓缩。快速色谱法(sio2，0
→
10％meoh/ch2cl2)，得到所需产物(230mg，44％，2个步骤)。c
28h25
f3n6o2s的esi ms[m h]

；计算值567.2，实验值567.1。
[0788]
步骤h：向步骤g的产物(230mg，0.41mmol，1.0当量)于acoh(2.41ml)和h2o(266μl)中的溶液中加入ncs(163mg，1.22mol)。将反应物在室温下搅拌3h，然后分配于etoac与h2o之间。有机层用h2o和盐水洗涤，经mgso4干燥并浓缩至干。将粗制磺酰氯在ch2cl2(3.3ml，0.13m)中重构并在冰浴中冷却至0℃。同时加入吡啶(547μl、0.75m)和甲胺(40重量％水溶液，177μl，2.05mmol，5当量)。1h后，将反应混合物分配于etoac与1m hcl之间。有机层用h2o和盐水洗涤，经mgso4干燥并浓缩。将粗产物在dmso中重构并通过反相hplc(c18，ch3cn/h2ow/0.1％tfa)纯化，得到在冻干后呈白色固体状的所需产物(32mg，15％产率)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.07(d,j＝7.1hz,1h),8.71(d,j＝11.4hz,2h),7.77(d,j＝4.2hz,1h),7.68(d,j＝7.1hz,1h),7.11(q,j＝5.1hz,1h),5.12(p,j＝7.6hz,1h),4.87(d,j＝18.1hz,1h),4.66(d,j＝18.0hz,1h),2.89(tq,j＝7.7,4.0hz,1h),2.53(d,j＝5.2hz,3h),1.54(d,j＝7.1hz,3h),0.89-0.72(m,2h),0.71-0.60(m,2h)。c
22h22
f3n7o4s的esi ms[m h]

；计算值538.1，实验值538.0。
[0789]
实施例140：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(甲基胺磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(1-甲基-1h-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0790][0791]
标题化合物是以与实施例99和139类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.69(s,1h),9.14(d,j＝7.1hz,1h),8.90(d,j＝1.5hz,1h),8.81(d,j＝1.5hz,1h),8.11(s,1h),7.82(d,j＝7.2hz,1h),7.74(s,1h),7.57(q,j＝5.1hz,1h),4.85(s,2h),3.85(s,
3h),3.68(dq,j＝9.6,6.9hz,1h),2.56(d,j＝5.1hz,3h),1.37(d,j＝6.8hz,3h),1.29-1.18(m,1h),0.69-0.57(m,1h),0.53-0.40(m,2h),0.37-0.28(m,1h)。c
25h28
n9o4s的esi ms[m h]

，计算值550.2，实验值550.1。
[0792]
实施例141：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(甲基胺磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[反-3-羟基环丁基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0793][0794]
标题化合物是以与实施例139类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.09(d,j＝7.1hz,1h),8.80(d,j＝1.5hz,1h),8.72(d,j＝1.5hz,1h),7.99(d,j＝7.1hz,1h),7.74(d,j＝7.3hz,1h),7.50(q,j＝5.1hz,1h),6.63(s,2h),5.07(d,j＝5.2hz,1h),4.82(s,2h),4.60-4.49(m,1h),4.41-4.31(m,1h),3.73-3.62(m,1h),2.53(d,j＝5.2hz,3h),2.39-2.23(m,4h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.18(m,1h),0.67-0.58(m,1h),0.52-0.40(m,2h),0.35-0.28(m,1h)。c
25h30
n7o5s的esi ms[m h]

，计算值503.3，实验值503.2。
[0795]
实施例142：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(甲基胺磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0796][0797]
标题化合物是以与实施例139类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.72(s,1h),8.71(s,1h),7.81(d,j＝4.2hz,1h),7.73(d,j＝7.1hz,1h),7.53(q,j＝5.1hz,1h),6.66(s,2h),4.82(s,2h),3.67(dq,j＝8.5,6.8hz,1h),2.91(tt,j＝7.7,3.8hz,1h),2.54(d,j＝5.2hz,3h),1.36(d,j＝6.8hz,3h),1.28-1.17(m,1h),0.83-0.77(m,2h),0.71-0.65(m,2h),0.65-0.58(m,1h),0.51-0.39(m,2h),0.35-0.27(m,1h)。c
24h28
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值510.2，实验值510.1。
[0798]
实施例143：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(乙基胺磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0799]
[0800]
标题化合物是以与实施例139类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.74-8.69(m,2h),7.80(d,j＝4.2hz,1h),7.73(d,j＝7.2hz,1h),7.70(t,j＝5.8hz,1h),6.66(s,2h),4.82(s,2h),3.67(dq,j＝8.9,6.8hz,1h),2.97-2.87(m,3h),1.37(d,j＝6.8hz,3h),1.29-1.18(m,1h),0.97(t,j＝7.2hz,3h),0.84-0.76(m,2h),0.71-0.65(m,2h),0.65-0.59(m,1h),0.50-0.40(m,2h),0.35-0.27(m,1h)。c
25h30
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值524.2，实验值524.1。
[0801]
实施例144：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(二甲基胺磺酰基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0802][0803]
标题化合物是以与实施例139类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.08(d,j＝7.1hz,1h),8.75(d,j＝1.6hz,1h),8.68(d,j＝1.6hz,1h),7.78(d,j＝4.0hz,1h),7.71(d,j＝7.2hz,1h),6.66(s,2h),4.70(s,2h),3.63(dq,j＝9.6,6.8hz,1h),2.94-2.87(m,1h),2.85(s,6h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.13(m,1h),0.83-0.75(m,2h),0.70-0.64(m,2h),0.64-0.56(m,1h),0.48-0.37(m,2h),0.31-0.24(m,1h)。c
25h30
n7o4s的esi ms[m h]

，计算值524.2，实验值524.1。
[0804]
实施例145：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-[(3r)-氧杂环戊烷-3-基氧基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(3r)-5-氧代吡咯烷-3-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0805][0806]
步骤a：将含60％氢化钠的油(120mg，3.0mmol)悬浮于3ml无水thf中，并冷却至0℃。向此冰冷溶液中滴加(r)-3-羟基-四氢呋喃(176.2mg，2.0mmol)，并在相同温度下搅拌
0.5h。然后在0℃下将5-溴-7-氟-异吲哚啉酮(594mg，2.0mmol)的2ml thf溶液滴加至上文形成的醇盐中。添加后，去除冰浴并在室温下搅拌1h。反应物用2ml饱和nh4cl淬灭。水层用etoac(2
×
10ml)萃取，经na2so4干燥，并且不经进一步纯化即用于下一步骤。c
17h20
brno3的esi ms[m h]

，计算值366.1，实验值366.1。
[0807]
步骤b：将步骤a的粗产物溶解于10ml干燥脱气的二噁烷中。向此溶液中加入b2pin2(507.9mg，2.0mmol)、koac(392.6mg，2.0mmol)和pd(dppf)cl2(73.2mg，0.1mmol)。然后将混合物在密封小瓶中在100℃下加热1h。在将反应混合物冷却至室温后，加入10ml etoac，滤出固体。浓缩滤液，并且不经进一步纯化即用于铃木偶联。将由此获得的粗产物硼酸酯再溶解于10ml脱气的二噁烷/h2o(5:1)中。向此溶液中加入2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(480mg，2.0mmol)、na2co3(212mg，4mmol)和pd(dppf)cl2(73.2mg，0.1mmol)。然后将混合物在密封小瓶中在100℃下加热1h。在将反应混合物冷却至室温后，加入5ml饱和nh4cl，并用etoac(2
×
20ml)萃取水相。所合并的有机层经na2so4干燥，浓缩，并通过ch2cl2/丙酮纯化，得到所需产物(698mg，经2个步骤的产率71％)。c
27h32
n4o5的esi ms[m h]

，计算值492.2，实验值492.2。
[0808]
步骤c：将步骤c的产物(698mg，1.42mmol)悬浮于7ml etoh中。向此悬浮液中加入3.0m lioh水溶液(1.42ml，4.26mmol)。然后将混合物在80℃下加热3h。在冷却至室温后，加入1.0m hcl溶液(4.26ml，4.26mmol)。过滤由此获得的沉淀物，用h2o洗涤并干燥，得到所需酸，其不经进一步纯化即使用。c
24h27
n5o5的esi ms[m h]

，计算值464.2，实验值464.1。
[0809]
步骤d：向4打兰玻璃小瓶中装入获自步骤c的酸(50mg，0.11mmol)、edc-hcl(32.6mg，0.17mmol)、水合hobt(18.53mg，0.12mmol)和et3n(77μl，0.55mmol)。向此小瓶中加入1ml dmf和(r)-4-氨基吡咯烷-2-酮(16.5mg，0.12mmol)。然后将反应混合物在40℃下搅拌8h。在冷却至室温后，物质通过反相hplc(c18柱，10％至90％梯度的ch3cn和h2o 0.1％tfa)纯化，得到呈白色固体状的产物(31mg，52％产率)：1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.14(d,j＝7.4hz,1h),7.91(d,j＝1.2hz,1h),7.76(s,1h),7.73-7.64(m,2h),5.37(td,j＝4.5,2.1hz,1h),4.71-4.61(m,1h),4.57(d,j＝2.0hz,2h),3.98-3.85(m,3h),3.77(td,j＝8.2,4.5hz,1h),3.64(ddd,j＝10.0,6.4,0.7hz,1h),3.51(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),3.26-3.16(m,1h),2.66(dd,j＝16.6,7.8hz,1h),2.28-2.14(m,2h),2.04(dddd,j＝12.9,6.6,3.4,1.3hz,1h),1.26(d,j＝6.8hz,3h),1.16-1.02(m,1h),0.62-0.49(m,1h),0.45-0.30(m,2h),0.28-0.15(m,1h)。c
28h31
n7o5的esi ms[m h]

，计算值546.2，实验值546.2。
[0810]
实施例146：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-[(3s)-氧杂环戊烷-3-基氧基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0811][0812]
标题化合物是以与实施例145类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(d,
j＝7.1hz,1h),7.90(d,j＝1.2hz,1h),7.82(d,j＝3.4hz,1h),7.70(d,j＝1.2hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),6.58(s,2h),5.36(tt,j＝4.7,2.2hz,1h),4.55(s,2h),3.96(dd,j＝10.2,4.6hz,1h),3.93-3.86(m,3h),3.78(td,j＝8.2,4.6hz,1h),3.56-3.45(m,1h),2.81(tq,j＝7.3,3.8hz,1h),2.27(dtd,j＝13.4,8.2,6.3hz,1h),2.06(dt,j＝12.6,5.9hz,1h),1.26(d,j＝6.8hz,4h),1.12(dtd,j＝13.2,8.9,8.3,4.9hz,1h),0.79-0.72(m,2h),0.60-0.56(m,2h),0.43-0.30(m,2h),0.25-0.17(m,1h)。c
27h30
n6o4的esi ms[m h]

，计算值503.2，实验值503.1。
[0813]
实施例147：2-氨基-n-[(1r)-1-环丙基-2-羟乙基]-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-[(3r)-氧杂环戊烷-3-基氧基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0814][0815]
标题化合物是以与实施例145类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.29(d,j＝8.8hz,1h),8.15(d,j＝1.2hz,1h),7.72(d,j＝1.3hz,1h),7.69(d,j＝7.2hz,1h),5.40(ddt,j＝6.4,4.4,1.8hz,1h),4.52(s,2h),3.96-3.90(m,1h),3.90-3.82(m,2h),3.76(td,j＝8.2,4.4hz,1h),3.69(dd,j＝10.4,3.1hz,1h),3.58(dd,j＝10.5,3.7hz,1h),3.53-3.45(m,2h),2.22(dtd,j＝13.3,8.2,6.1hz,1h),2.08-1.96(m,1h),1.26(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.04(m,2h),0.62-0.51(m,1h),0.46-0.30(m,5h),0.30-0.17(m,2h)。c
29h34
n6o5的esi ms[m h]

，计算值547.2，实验值547.2。
[0816]
实施例148：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-[(3r)-氧杂环戊烷-3-基氧基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0817][0818]
标题化合物是以与实施例145类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.99(d,j＝7.1hz,1h),7.90(d,j＝1.2hz,1h),7.82(d,j＝3.4hz,1h),7.70(d,j＝1.3hz,1h),7.62(d,j＝7.2hz,1h),5.36(ddt,j＝6.5,4.4,1.9hz,1h),4.55(s,2h),3.99-3.88(m,3h),3.79(td,j＝8.2,4.6hz,1h),3.56-3.47(m,1h),2.81(tq,j＝7.3,3.8hz,1h),2.31-2.21(m,1h),2.12-2.03(m,1h),1.26(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.07(m,1h),0.81-0.72(m,2h),0.61-0.55(m,2h),0.43-0.31(m,2h),0.26-0.19(m,1h)。c
27h30
n6o4的esi ms[m h]

，计算值503.2，实验值503.1。
[0819]
实施例149：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-{[(1r,4r)-4-羟基环己基]氧基}-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0820][0821]
标题化合物是以与实施例145类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.98(d,j＝7.1hz,1h),7.85(d,j＝1.2hz,1h),7.82(d,j＝3.6hz,1h),7.74(d,j＝1.3hz,1h),7.60(d,j＝7.2hz,1h),4.69(dq,j＝8.6,4.7,4.1hz,1h),4.53(s,2h),3.59(tt,j＝8.1,3.7hz,1h),3.52(dq,j＝9.2,6.8hz,1h),2.83(tq,j＝7.3,3.8hz,1h),2.02(d,j＝11.9hz,2h),1.94-1.80(m,2h),1.53(q,j＝10.8hz,2h),1.41-1.29(m,2h),1.26(d,j＝6.8hz,3h),1.17-1.03(m,1h),0.84-0.73(m,2h),0.56(dddd,j＝9.5,8.4,5.2,4.2hz,3h),0.46-0.30(m,2h),0.26-0.15(m,1h)。c
29h34
n6o4的esi ms[m h]

，计算值531.3，实验值531.2。
[0822]
实施例150：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-[(3r)-3-羟基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0823][0824]
步骤a：向具有压力释放盖的玻璃小瓶中装入5-溴-7-氟-异吲哚啉酮(594mg，2.0mmol)、(s)-3-羟基吡咯烷(216mg，3.0mmol)、k2co3(555mg，4.0mmol)和4ml nmp。将混合物在80℃下加热2h。在冷却至室温后，加入5ml h2o。将水层用etoac(2
×
10ml)萃取，经na2so4干燥并浓缩。由此获得的粗物质进行类似于实施例145中的步骤b、c、d的后续步骤，获得标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.94(d,j＝7.1hz,1h),7.88(d,j＝3.5hz,1h),7.60-7.53(m,2h),7.49-7.45(m,1h),6.54(s,2h),4.86(s,1h),4.50(s,2h),4.34(s,1h),4.00(dd,j＝11.4,4.7hz,1h),3.74(td,j＝9.5,6.7hz,1h),3.61-3.44(m,2h),3.23(d,j＝11.5hz,1h),2.83(tq,j＝7.3,3.8hz,1h),2.00(m,1h),1.92-1.81(m,1h),1.26(d,j＝6.9hz,3h),1.15-1.04(m,1h),0.81-0.74(m,2h),0.59-0.49(m,3h),0.40-0.30(m,2h),0.25-0.17(m,1h)。c
27h31
n7o3的esi ms[m h]

，计算值502.2，实验值502.2。
[0825]
实施例151：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-[(3r)-3-羟基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0826][0827]
标题化合物是以与实施例150类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.94(d,j＝7.1hz,1h),7.72(d,j＝7.9hz,1h),7.58-7.52(m,2h),7.46-7.41(m,1h),4.48(s,2h),4.34(s,1h),3.96(dd,j＝11.3,4.8hz,1h),3.83-3.66(m,2h),3.60-3.44(m,2h),3.31-3.20(m,1h),2.05-1.93(m,1h),1.88(dd,j＝10.3,6.0hz,1h),1.78-1.68(m,1h),1.65-1.53(m,2h),1.41(td,j＝12.9,4.3hz,2h),1.26(d,j＝6.9hz,3h),1.12(s,3h),0.59-0.49(m,1h),0.41-0.29(m,2h),0.25-0.18(m,1h)。c
31h39
n7o4的esi ms[m-h]-，计算值574.3，实验值574.2。
[0828]
实施例152：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-[(3s)-3-羟基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0829][0830]
标题化合物是以与实施例150类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.94(d,j＝7.1hz,1h),7.88(d,j＝3.5hz,1h),7.59-7.54(m,2h),7.47(s,1h),4.50(d,j＝3.4hz,2h),4.34(s,1h),3.97(dd,j＝11.4,4.8hz,1h),3.75-3.65(m,1h),3.60-3.42(m,2h),3.27(d,j＝11.3hz,1h),2.82(tt,j＝7.3,3.7hz,1h),2.06-1.95(m,1h),1.86(s,1h),1.23(d,j＝6.8hz,3h),1.10(ddt,j＝12.9,8.5,4.3hz,1h),0.78(td,j＝6.9,4.7hz,2h),0.57-0.54(m,2h),0.37(ddt,j＝21.2,9.5,4.2hz,2h),0.28-0.16(m,1h)。c
27h31
n7o3的esi ms[m h]

，计算值502.2，实验值502.1。
[0831]
实施例153：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-[(3r)-3-羟基吡咯烷-1-基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-(三氟甲基)环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0832]
[0833]
标题化合物是以与实施例150类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.95(d,j＝7.1hz,1h),7.72(d,j＝7.8hz,1h),7.55(d,j＝7.3hz,2h),7.46-7.40(m,1h),4.49(s,2h),4.34(s,1h),3.97(dd,j＝11.3,4.8hz,1h),3.89-3.76(m,1h),3.71(q,j＝8.9hz,1h),3.60-3.44(m,2h),3.30-3.21(m,1h),2.06-1.95(m,1h),1.91(d,j＝10.0hz,3h),1.79(d,j＝10.0hz,2h),1.70-1.53(m,5h),1.26(d,j＝6.9hz,3h),1.13-1.03(m,1h),0.58-0.48(m,1h),0.42-0.29(m,2h),0.22(m,1h)。c
31h36
f3n7o4的esi ms[m-h]-，计算值628.3，实验值628.2
[0834]
实施例154：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(吗啉-4-基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0835][0836]
标题化合物是以与实施例150类似的方式合成。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.97(d,j＝7.1hz,1h),7.85(d,j＝1.3hz,1h),7.69-7.63(m,2h),7.58(d,j＝7.2hz,1h),4.52(s,2h),3.84-3.26(m,10h),1.73-1.55(m,6h),1.45-1.37(m,2h),1.26(d,j＝6.8hz,3h),1.12(s,3h),0.61-0.49(m,1h),0.44-0.29(m,2h),0.21(m,1h)。c
31h39
n7o4的esi ms[m-h]-，计算值574.3，实验值574.2。
[0837]
实施例155：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(2,2,2-三氟乙氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0838][0839]
标题化合物是以与实施例145类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝7.1hz,1h),8.04(d,j＝1.2hz,1h),7.90(d,j＝1.2hz,1h),7.82(d,j＝3.7hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),6.59(s,2h),5.06(q,j＝8.9hz,2h),4.59(s,2h),3.58-3.48(m,1h),2.83(tt,j＝7.5,3.7hz,1h),1.28(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.08(m,1h),0.80-0.70(m,2h),0.64-0.57(m,2h),0.57-0.51(m,1h),0.44-0.30(m,2h),0.26-0.18(m,1h)。c
25h26
f3n6o3的esi ms[m h]

，计算值515.2，实验值515.2。
[0840]
实施例156：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(2,2,2-三氟乙氧基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0841][0842]
标题化合物是以与实施例145类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.25(d,j＝1.2hz,1h),8.21(d,j＝7.9hz,1h),7.91(d,j＝1.2hz,1h),7.74(d,j＝7.2hz,1h),6.60(s,2h),5.10-5.01(m,2h),4.59(s,2h),4.14-4.04(m,1h),3.60-3.50(m,3h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.23(d,j＝6.6hz,3h),1.19-1.09(m,1h),0.63-0.55(m,1h),0.46-0.36(m,2h),0.29-0.21(m,1h)。c
25h28
f3n6o4的esi ms[m h]

，计算值533.2，实验值533.2。
[0843]
实施例157：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(3,3-二氟环丁氧基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0844][0845]
标题化合物是以与实施例145类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.02(d,j＝7.1hz,1h),7.95(d,j＝1.2hz,1h),7.83(d,j＝3.3hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),7.60(d,j＝1.2hz,1h),6.58(s,2h),5.17-5.05(m,1h),4.59(s,2h),3.58-3.49(m,1h),3.37-3.25(m,2h),2.89-2.75(m,3h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.10(m,1h),0.81-0.75(m,2h),0.64-0.60(m,2h),0.60-0.53(m,1h),0.46-0.34(m,2h),0.28-0.18(m,1h)。c
27h29
f2n6o3的esi ms[m h]

，计算值523.2，实验值523.2。
[0846]
实施例158：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(二氟甲氧基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0847][0848]
步骤a：在室温下向异吲哚啉酮(1.50g，5.03mmol)于dme(0.3m，15ml)中的溶液中加入三甲基硅醇化钾(2.26g，17.61mmol，3.5当量)。将反应混合物在84℃下搅拌1.5h。将反应混合物用hcl[1n]酸化并用etoac萃取。合并的有机层用h2o洗涤，经mgso4干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物通过色谱法(sio2，0至15％梯度etoac/己烷)纯化，获得呈橙色固体状的产物(1.13g，76％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.10(s,1h),7.22-7.16(m,1h),6.98-6.96(m,1h),4.41(s,2h),3.45(dq,j＝9.3,6.8hz,1h),1.20(d,j＝6.8hz,3h),1.08-0.98(m,1h),0.57-0.46(m,1h),0.41-0.26(m,2h),0.21-0.12(m,1h)。
[0849]
步骤b：在室温下将步骤a的产物(1.13g，3.82mmol)溶解于ch3cn(75ml)中，并加入氯二氟乙酸钠(0.93g，6.11mmol，1.6当量)，接着添加k2co3(1.16g，8.40mmol，2.2当量)。将反应物在80℃下搅拌4h。然后将反应物冷却并用ch2cl2稀释，用nahco3洗涤，用mgso4干燥，过滤并真空蒸发。所得残余物通过色谱法(sio2，0至15％梯度etoac/己烷)纯化，获得呈白色固体状的产物(0.96g，72％)。1h nmr(400mhz,cdcl3)δ7.48-7.46(m,1h),7.38-7.36(m,1h),7.08(t,j
h-f
＝75.2hz,1h)4.54-4.35(m,2h),3.68(dq,j＝9.5,6.8hz,1h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.04-0.90(m,1h),0.69-0.58(m,1h),0.48-0.29(m,3h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-83.6(dd,j＝74.9,2.7hz,2f)。
[0850]
步骤c：将步骤b的产物(500mg，1.44mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(114mg，0.14mmol，0.1当量)、b2pin2(366mg，1.44mmol，1.1当量)和koac(423mg，4.32mmol，3.0当量)的二噁烷(7.0ml，0.2m)组合。将所得溶液加热至90℃保持2h，冷却至室温，经由硅藻土过滤，用etoac洗涤并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0851]
步骤d：将步骤c的产物残余物与含乙基2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(346mg，1.44mmol，1.0当量)、pd(dppf)cl2(118mg，0.144mmol，0.1当量)和na2co3(382mg，3.60mmol，2.5当量)的二噁烷(4.8ml)和h2o(2.4ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持1h，经由硅藻土过滤，浓缩，并通过快速色谱法(sio2，etoac/己烷梯度)纯化，得到交叉
偶联的乙酯(420mg，经2个步骤的产率62％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.98(d,j＝7.1hz,1h),8.33(d,j＝1.2hz,1h),8.14(d,j＝1.2hz,1h),7.74(d,j＝7.2hz,1h),7.43(t,j
h-f
＝74.5hz,1h),6.51(s,2h),4.64(s,2h),4.27(q,j＝7.1hz,2h),3.60-3.48(m,1h),1.36(t,j＝7.1hz,3h),1.28(d,j＝6.8hz,3h),1.18-1.09(m,1h),0.59-0.51(m,1h),0.43-0.33(m,2h),0.27-0.18(m,1h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-82.6(dd,j＝74.5,3.1hz,2f)。
[0852]
步骤e：将步骤d的产物(370mg，0.786mmol)溶解于dce(4.0ml，0.2m)中，并滴加tmsi(0.7ml，4.71mmol，6.0当量)。将反应物在80℃下搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并加入nahso3(饱和水溶液)。将ph调整为ph＝3，并且产物用ch2cl2(3
×
)萃取，用mgso4干燥，过滤并真空蒸发，并且残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中(346mg，99％)。
[0853]
步骤f：将步骤e的产物(50mg，0.11mmol)溶解于dmf(1.0ml，0.1m)中。依序加入hatu(64mg，0.17mmol，1.5当量)、et3n(80μl，0.56mmol，5.0当量)和环丙胺(12μl，0.17mmol，1.5当量)，并且将溶液加热至40℃。2h后，用dmso(2ml)稀释反应溶液，并且产物通过反相hplc(20％至80％梯度的ch3cn和h2o 0.1％tfa)纯化，得到呈浅黄色固体状的标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.26(d,j＝1.2hz,1h),8.02-7.99(m,1h),7.79(d,j＝3.8hz,1h),7.67(d,j＝7.1hz,1h),7.51(t,j＝74.3hz,1h),6.62(s,2h),4.67(s,2h),3.62-3.53(m,1h),2.91-2.84(m,1h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.12(m,1h),0.82-0.76(m,2h),0.63-0.55(m,3h),0.47-0.36(m,2h),0.30-0.24(m,1h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-82.8(dd,j＝74.3,1.9hz,2f)。c
24h25
f2n6o3的esi ms[m h]

，计算值483.2，实验值483.2。
[0854]
实施例159：2-氨基-n-[(1r)-1-环丙基-2-羟乙基]-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(二氟甲氧基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0855][0856]
标题化合物是以与实施例158类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.52-8.48(m,1h),8.30(d,j＝8.7hz,1h),8.06(d,j＝1.1hz,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),7.49(t,j＝74.7hz,1h),6.60(s,2h),4.65(s,2h),3.72(dd,j＝10.6,3.4hz,1h),3.65-3.54(m,3h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.22-1.11(m,2h),0.64-0.53(m,1h),0.49-0.35(m,5h),0.33-0.22(m,2h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-83.0(dd,j＝74.4,37.6hz,2f)。c
26h29
f2n6o4的esi ms[m h]

，计算值527.2，实验值527.2。
[0857]
实施例160：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(二氟甲氧基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[顺-4-羟基-4-甲基环己基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0858][0859]
标题化合物是以与实施例158类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.05(d,j＝7.1hz,1h),8.26(d,j＝1.2hz,1h),7.99-7.95(m,1h),7.71(d,j＝7.4hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),7.45(t,j＝74.4hz,1h),6.62(s,2h),4.66(s,2h),3.82-3.71(m,1h),3.61-3.53(m,1h),1.84-1.53(m,6h),1.49-1.37(m,2h),1.31(d,j＝6.8hz,3h),1.21-1.14(m,1h),1.14(s,3h),0.63-0.53(m,1h),0.48-0.32(m,2h),0.29-0.22(m,1h)。
19
f nmr(376mhz,dmso-d6)δ-82.7(dd,j＝74.4,4.5hz,2f)。c
28h33
f2n6o4的esi ms[m h]

，计算值555.2，实验值555.2。
[0860]
实施例161：2-氨基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(二氟甲氧基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-(吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0861][0862]
标题化合物是以与实施例158和99类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ10.06(s,1h),9.15(d,j＝7.1hz,1h),9.10(d,j＝2.5hz,1h),8.44(dd,j＝5.1,1.4hz,1h),8.41-8.34(m,2h),8.21-8.17(m,1h),7.79(d,j＝7.2hz,1h),7.66(dd,j＝8.5,5.0hz,1h),7.53(t,j＝74.5hz,1h),6.78(s,2h),4.70(s,2h),3.63-3.54(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.23-1.12(m,1h),0.65-0.55(m,1h),0.48-0.37(m,2h),0.31-0.23(m,1h)。c
26h24
f2n7o3的esi ms[m h]

，计算值520.2，实验值520.2。
[0863]
实施例162：2-氨基-5-{7-氯-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-环丙基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0864][0865]
步骤a-d：以与实施例1步骤e至步骤h类似的方式进行。
[0866]
步骤e和f：以与实施例27类似的方式进行，得到标题化合物。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.31(d,j＝1.4hz,1h),8.23(d,j＝1.3hz,1h),7.80(d,j＝3.9hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),6.59(s,2h),4.63(s,2h),3.60-3.52(m,1h),2.89-2.82(m,1h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.20-1.09(m,1h),0.83-0.76(m,2h),0.62-0.52(m,3h),0.45-0.34(m,2h),0.27-0.20(m,1h)。c
23h24
cln6o2的esi ms[m h]

，计算值451.2，实验值451.2。
[0867]
实施例163：2-氨基-5-{7-氯-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0868][0869]
标题化合物是以与实施例162类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.01(d,j＝7.1hz,1h),8.54-8.51(m,1h),8.36(d,j＝1.4hz,1h),8.24(d,j＝7.9hz,1h),7.72(d,j＝7.2hz,1h),6.58(s,2h),4.60(s,2h),4.11-3.99(m,1h),3.60-3.51(m,3h),1.30(d,j＝6.8hz,3h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),1.18-1.09(m,1h),0.60-0.52(m,1h),0.44-0.34(m,2h),0.27-0.19(m,1h)。c
23h26
cln6o3的esi ms[m h]

，计算值469.2，实验值469.2。
[0870]
实施例164：2-氨基-5-{7-氯-1-氧代-2-[(2s)-1,1,1-三氟丁-2-基]-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
1h-异吲哚-5-基}-n-[(2r)-1-羟基丙-2-基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0879][0880]
标题化合物是以与实施例165类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.95(d,j＝7.1hz,1h),8.24(d,j＝1.4hz,1h),8.07(d,j＝8.1hz,1h),7.66(d,j＝7.2hz,1h),7.57(d,j＝1.5hz,1h),6.54(s,2h),4.54(s,2h),4.13-4.03(m,1h),3.62-3.56(m,1h),3.55-3.49(m,2h),3.49-3.43(m,1h),1.29(d,j＝6.8hz,3h),1.22(d,j＝6.7hz,3h),1.18-1.10(m,1h),1.10-1.05(m,2h),1.0-0.92(m,2h),0.61-0.53(m,1h),0.45-0.34(m,2h),0.26-0.21(m,1h)。c
26h31
n6o3的esi ms[m h]

，计算值475.2，实验值475.2。
[0881]
实施例167：2-氨基-5-{7-环丙基-2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}-n-[(1r)-1-环丙基-2-羟乙基]吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0882][0883]
标题化合物是以与实施例165类似的方式制备。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.98(d,j＝7.1hz,1h),8.30(d,j＝1.4hz,1h),8.24(d,j＝8.8hz,1h),7.70(d,j＝7.2hz,1h),7.60(d,j＝1.4hz,1h),6.52(s,2h),4.56(s,2h),3.70(dd,j＝10.5,3.6hz,1h),3.66-3.57(m,2h),3.58-3.44(m,2h),1.32(d,j＝6.8hz,3h),1.24-1.12(m,2h),1.12-1.05(m,2h),1.02-0.93(m,2h),0.64-0.54(m,1h),0.50-0.36(m,5h),0.32-0.22(m,2h)。c
28h33
n6o3的esi ms[m h]

，计算值501.2，实验值501.2。
[0884]
实施例168：2-氨基-n-[(1r)-1-环丙基-2-羟乙基]-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-乙基-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0885][0886]
步骤a：将芳基氯(162mg，0.368mmol，1.0当量)与含sphos pd g3(29mg，0.037mmol，0.1当量)和k3po4(156mg，0.735mmol，2.0当量)的二噁烷(1.84ml)和h2o(1.84ml)组合。通过将n2鼓泡通过溶液约3分钟而使所得混合物脱气，然后将其加热至100℃保持1h。将混合物冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0887]
步骤b：将步骤a的产物与含10％pd/c(160mg)的meoh(5ml)组合。将h2气球鼓泡通过溶液约2分钟，并且将所得混合物在h2气球下搅拌14h。混合物用etoac稀释，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0888]
步骤c-d：以与实施例1类似的方式将步骤b的产物转化成标题化合物。1h nmr(400mhz,氯仿-d)δ8.57-8.46(m,1h),8.40-8.28(m,1h),7.98(s,1h),7.95(s,1h),7.28(d,j＝6.7hz,1h),5.56(brs,2h),4.66-4.36(m,2h),4.05-3.97(m,1h),3.93-3.84(m,1h),3.84-3.71(m,1h),3.54-3.38(m,1h),3.26(q,j＝7.4hz,2h),1.37(d,j＝6.8hz,3h),1.33(t,j＝7.5hz,3h),1.18-0.97(m,2h),0.74-0.57(m,3h),0.57-0.34(m,5h)。c
27h33
n6o3的esi ms[m h]

；计算值489.2，实验值489.2。
[0889]
实施例169：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-1-氧代-7-(丙-2-基)-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0890][0891]
步骤a：在n2下向芳基氯(1.0g，2.27mmol)、异丙烯基硼酸频哪醇酯(1.28ml，6.82mmol，3.0当量)和k3po4(1.45g，6.82mmol，3.0当量)于甲苯(10.0ml，0.2m)和h2o(1.0ml)中的溶液中加入pcy3pdg2(0.13g，0.23mmol，0.1当量)。将混合物加热至100℃保持2h，然后冷却至室温。反应溶液经由硅藻土垫和na2so4过滤，并真空浓缩。通过柱色谱法(梯度100％etoac/己烷)进行纯化，得到呈黄色固体状的所需化合物(800mg，80％)。
[0892]
步骤b：将步骤a的产物(290mg，0.650mmol)溶解于meoh(4.0ml，0.15m)中，并加入含催化量的acoh的pto2(32mg)。将混合物在h2气氛下在室温下搅拌24h。然后经由硅藻土垫和na2so4过滤反应混合物，并浓缩滤液。通过柱色谱法(梯度100％etoac/己烷)进行纯化，得到呈黄色固体状的所需化合物(52mg，18％)。
[0893]
步骤c：将步骤b的乙酯产物(35mg，0.078mmol，1.0当量)溶解于二噁烷(0.5ml)中，并加入etoh(0.5ml)、h2o(0.5ml)和lioh
·
h2o(12mg，0.23mmol，3.0当量)。将所得溶液加热至70℃保持3h。将所得混合物冷却至室温，并真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释，并用hcl[1n]酸化至ph＝3。使用ch2cl2(3
×
)萃取产物，合并的有机层经na2so4干燥，过滤并真空浓缩，得到羧酸(28mg，85％)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0894]
步骤d：以与实施例1类似的方式进行。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.00(d,j＝7.1hz,1h),8.21-8.14(m,2h),7.89(d,j＝3.8hz,1h),7.64(d,j＝7.2hz,1h),6.56(s,2h),4.58(s,2h),4.44-4.33(m,1h),3.65-3.57(m,1h),2.93-2.85(m,1h),1.33-1.27(m,10h),1.22-1.12(m,1h),0.84-0.76(m,2h),0.62-0.53(m,3h),0.46-0.34(m,2h),0.29-0.22(m,1h)。c
26h31
n6o2的esi ms[m h]

，计算值459.2，实验值459.2。
[0895]
实施例170：2-氨基-n-环丙基-5-{2-[(1s)-1-环丙基乙基]-7-(2-羟基丙-2-基)-1-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-5-基}吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺
[0896][0897]
步骤a：将羧酸起始物质(1.03g，3.18mmol，1.0当量，根据2017年9月14日的pct国际申请2017153527制备)和浓h2so4(1.6ml)于meoh(60ml)中的混合物在回流下加热6h。然后将反应混合物冷却至室温，并真空去除meoh。混合物然后用etoac(60ml)稀释，并用饱和nahco3水溶液(2
×
40ml)和盐水(40ml)洗涤。有机相经干燥(na2so4)，过滤并真空浓缩，得到甲酯产物(800mg)，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0898]
步骤b：在0℃下，经15min向memgbr于et2o(6.31ml，3m)中的溶液中滴加步骤a的产物(800mg，2.36mmol，1.0当量)于thf(12ml)中的溶液。使所得溶液升温至室温，并再搅拌3h。然后将反应混合物冷却至0℃，并通过滴加饱和nh4cl水溶液(10ml)而淬灭。用etoac(20ml)萃取所得混合物。有机相依次用h2o(2
×
20ml)和盐水(20ml)洗涤，经干燥(na2so4)，过滤并真空浓缩。通过柱色谱法(sio2，己烷/etoac梯度)进行纯化，得到醇产物(263mg，经2个步骤的产率为24％)。
[0899]
步骤c：将步骤b的产物(263mg，0.777mmol，1.0当量)与含pd(dppf)cl2(58.5mg，0.080mmol，0.1当量)、b2pin2(217mg，0.855mmol，1.1当量)和koac(152mg，1.55mmol，2.0当量)的二噁烷(3.90ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持2h，冷却至室温，经由硅藻土过滤(用etoac洗涤)并浓缩。所得残余物不经纯化即直接用于下一步骤中。
[0900]
步骤d：将步骤c的产物残余物与含2-氨基-5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸乙酯(185mg，0.777mmol，1.0当量)、pd(dppf)cl2(56mg，0.077mmol，0.1当量)和k2co3(2m水溶液，1.54mmol，0.77ml)的二噁烷(7.7ml)组合。将所得溶液加热至100℃保持1h，浓缩，并通过快速色谱法(sio2，0
→
8％meoh/ch2cl2)纯化，得到交叉偶联的乙酯(214mg，60％，2个步骤)。
[0901]
步骤e：将步骤d的乙酯产物(214mg，0.462mmol，1.0当量)溶解于etoh(4.6ml)中，并加入3m lioh水溶液(0.46ml)。将所得溶液加热至80℃保持4h。将所得混合物冷却至室温，并真空去除溶剂。将混合物用h2o稀释，并用2n hcl酸化至ph 3。通过真空过滤收集所得沉淀物，并真空干燥24h，得到羧酸产物，其不经纯化即用于下一步骤中。
[0902]
步骤f：将步骤e的产物(0.10mmol)溶解于nmp(0.5ml，0.2m)中。依序加入hobt(84mg，0.44mmol，4.4当量，20重量％h2o)、et3n(70μl，0.5mmol，5.0当量)和edc
·
hcl(29mg，
和0.05％bsa中制备用于pi3k亚基中的每一者的酶。以2nm(2x)制备p110α/p85α，以7nm(2x)制备p110β/p85α，以8nm(2x)制备p120γ，并且以2nm(2x)制备p110δ/p85α。将五微升的每个pi3k亚基的2x酶稀释液加入到预施配有化合物的384孔白色opti板中，并使其在室温下温育1h。在25mm hepes和0.5mm egta中制备含有0.1mg/ml(2x)pip2和50μm(2x)atp(promega，目录号v915)的基质混合物。通过将5μl 2x基质混合物加入到板的含有各种pi3k同功型的每个孔中来起始反应，并使其在室温下进行60min。将10微升adp glo试剂1加入到每个板的孔中，并根据制造商的指导使其在室温下温育45min。温育后，将20μl adp glo试剂2加入到每个板中，并使其再温育45min。通过在perkin elmer envision多模式读取器上进行读数来量化由adp glo产生的荧光信号。使用标准4参数拟合非线性回归拟合来确定化合物效能(ic
50
)。
[0915]
thp-1细胞中的pi3kγ细胞测定
[0916]
在测定前一天，在t175烧瓶(thermo fisher，目录号11965092、目录号12-562-000)中将thp-1细胞(atcc，目录号tib-202)以每毫升1
×
106个细胞的密度接种在不含血清的dmem中，并在5％co2和37℃下温育过夜。
[0917]
在实验当天，将测试化合物的14点1:2滴定预施配至384孔opti板(perkin elmer，目录号6007290)中。将20微升于不含血清的dmem中的血清饥饿thp-1细胞以每毫升9
×
106个细胞的密度加入到化合物板中。最终测定条件包含每孔1.8
×
105个thp-1细胞以及浓度范围跨4nm至30μm的含测试化合物的2％dmso。在37℃和5％co2下与测试化合物一起温育60min后，在37℃下用25nm rhmcp-1(r&d systems，目录号279-mc-010)刺激thp-1细胞2min。使用alphalisa surefire ultra akt 1/2/3(ps473)测定试剂盒(perkin elmer，目录号alsu-pakt-b50k)，根据制造商的推荐方案来测量thp-1细胞中pi3kγ刺激的内源性akt丝氨酸残基473的磷酸化。简言之，在刺激后将10μl 4
×
溶解缓冲液加入到细胞中。在室温下温育60min后，将10μl细胞溶解物转移到已添加有5μl alphalisa受体珠粒和5μl alphalisa供体珠粒的新的384孔opti板中。在暗处在室温下另外温育120min后，使用envision 2102多标记读取器来评价alphalisa信号。pi3kγ活性被评估为内源性akt磷酸化水平的相关因素。基于dmso(100％活性)和阳性对照处理细胞孔(0％活性)计算每个测试孔中的最大活性百分比。使用标准4参数拟合非线性回归拟合来确定测试化合物的效能(ic
50
)。
[0918]
表1：具体实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0919]
[0920]
[0921]
[0922]
[0923][0924]
表2：其他具体实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0925]
[0926]
[0927]
[0928]
[0929]
[0930]
[0931]
[0932]
[0933]
[0934]
[0935]
[0936]
[0937]
[0938][0939]
表3：其他具体实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0940]
[0941]
[0942][0943]
[0944]
表4：其他实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0945]
[0946]
[0947]
[0948][0949]
表5：其他实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0950]
[0951][0952]
表6：其他具体实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0953]
[0954]
[0955]
[0956]
[0957][0958]
表7：其他具体实施例的生化效能和细胞效能(pi3kγic
50
： 是指》1μm， 是指100nm至1μm， 是指《100nm)
[0959][0960]
本发明的特定实施方案描述于本文中，包括本发明人已知的实施本发明的最佳模式。在阅读前述描述后，所公开实施方案的变化对于本领域中工作的个体可变得显而易见，并且预期那些熟练的技术人员可在适当时使用此类变化。因此，本发明旨在以不同于本文具体描述的方式实施，并且本发明包括适用法律允许的所附权利要求中叙述的主题的所有修改和等效物。此外，除非本文另有说明或与上下文明显矛盾，否则本发明涵盖上述要素的所有可能变化形式的任何组合。
[0961]
本说明书中引用的所有出版物、专利申请、登录号和其他参考文献均通过引用并入本文，就好像每个单独的出版物或专利申请都被具体地和单独地指示为通过引用并入一样。