炎性状况和相关感染的治疗方法与流程

1.本公开内容总体上涉及用于治疗或预防炎症以及炎性状况和自身免疫性状况的方法，以及用于治疗与这样的炎症以及炎性状况和自身免疫性状况相关的感染的方法。通常，炎症以及炎性状况和自身免疫性状况是胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症以及炎性状况和自身免疫性状况，通常是与致病性感染(pathogenic infection)相关或由致病性感染引起的状况。本公开内容还涉及促进伤口愈合。本公开内容的方法包括施用包含一种或更多种微生物的组合物，或来源于在其中已经培养了一种或更多种微生物的培养基的培养基上清液或无细胞滤液。
2.背景
3.炎症是有助于保护身体免受感染和损伤的正常响应机制。然而，异常或不受控制的炎性应答可以导致急性或慢性炎性紊乱或状况和自身免疫性紊乱或状况的发展。特别地，由病毒、真菌和致病菌引起的感染可以在多种组织(诸如胃肠道、关节、皮肤和泌尿道)中触发过度且持续的炎性应答，导致有害的急性炎症和急性炎性状况。这些也是慢性炎性状况和自身免疫性状况发展的重要风险因素。慢性炎性状况和自身免疫性状况可以使患者虚弱，并引起患者巨大的不适和疼痛。此外，随着世界人口老龄化，这种情况越来越普遍。
4.炎性肠病是复杂的慢性特发特应性状况，其特征是对胃肠道的共生微生物群的免疫应答的改变和失调。炎性肠病有两种主要的亚型，克罗恩病和溃疡性结肠炎。克罗恩病可以发生在下胃肠道的任何部位，而溃疡性结肠炎大多局限于结肠，并且可以使个体易患结肠炎相关癌症，通常为结肠直肠癌。
5.炎性肠病的病因仍有些不清楚，尽管越来越多地涉及消化道微生物群中的生物失调(dysbiosis)，生物失调的特征在于致病菌株大量增加以及消化道中有益或共生的常驻微生物减少。在涉及的微生物中，大肠杆菌(e coli)菌株在从患有克罗恩病和溃疡性结肠炎的患者收集的活检样品中大量存在。这些菌株已被显示粘附和侵入消化道上皮，并且通常被称为粘附性和侵入性大肠杆菌(aiec)。aiec已被显示与粘膜密切缔合，并且在克罗恩病的发病机制中起关键作用。aiec需要粘附和定殖肠细胞表面的能力以引起和加剧易感个体中的慢性炎症。从活动性克罗恩病患者中分离的大肠杆菌菌株显示出粘附caco-2细胞的能力，caco-2细胞模拟肠上皮。aiec还侵入肠上皮细胞，在那里它们持续存在(persist)、复制并驱动促炎活动。它们的侵入能力也与回肠炎性疾病的严重程度增加相关。
6.甾体是数十年来一直依赖的主要治疗性抗炎剂。最近，非甾体抗炎药(nsaid)已经开始被普遍用于管理或治疗炎症。然而，此类剂的持续使用带来明显的缺点和副作用。例如，与持续的nsaid使用相关的是包括胃溃疡和出血的严重的副作用。另外，熟知的是，nsaid在胃肠道中产生病变，这取决于治疗的时间长短和药物的类型。这个问题在其中治疗必须被长时间延长的情况下特别重要，诸如在需要长期治疗来管理炎性状态和相关疼痛的慢性炎性紊乱的治疗中特别重要。
7.对于开发新的和改进的用于治疗炎症以及炎性和自身免疫性状况的治疗选择存在持续的需求。
8.伤口愈合是复杂且精确的生物过程，涉及许多生物因子，并且需要不同生理过程之间的精细调节的平衡。虽然炎症是伤口愈合过程的一部分，但这一过程的敏感性取决于多种分子和途径之间的平衡，并且容易被破坏。因此，伤口愈合和组织修复的机制通常是不充分且不完整的。例如，慢性伤口，诸如压疮和糖尿病足溃疡，不能适当愈合，并且正在成为世界范围内越来越严重的问题。老年人、化学疗法或放射治疗之后的癌症患者和罹患严重烧伤的个体中的伤口愈合也可能受到实质损害。由状况诸如克罗恩病或骨关节炎引起的病变也以愈合缓慢和不足为特征。
9.公开内容概述
10.本公开内容的第一方面提供了一种用于治疗或预防受试者中的炎症、或炎性状况或自身免疫性状况或者与炎症、或炎性状况或自身免疫性状况相关的一种或更多种症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用乳杆菌属(lactobacillus)物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属(lactobacillus)物种选自布氏乳杆菌(lactobacillus buchneri)、玉米乳杆菌(lactobacillus zeae)、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌(lactobacillus paracasei)、类谷糠乳杆菌(lactobacillus parafarraginis)和lactobacillus diolivorans。
11.炎症可以是胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症。胃肠道炎症可以是上胃肠道诸如口腔或咽喉的炎症，或者是下胃肠道诸如胃、小肠或大肠的炎症。炎性状况或自身免疫性状况可以是胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎性状况或自身免疫性状况。
12.在特定实施方案中，炎症由感染引起或者与感染相关。炎症可以是急性炎症或慢性炎症。在示例性实施方案中，引起感染的病原体是细菌。
13.本公开内容的第二方面提供了一种用于治疗或预防受试者中的胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的状况的方法，所述方法包括向所述受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans，其中所述状况与所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症相关和/或其中所述状况由所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的感染引起或者与所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的感染相关。
14.根据第一方面和第二方面，胃肠道炎症或胃肠道状况可以是胃炎、胃肠炎、炎性肠病或肠易激综合征，或者与胃炎、胃肠炎、炎性肠病或肠易激综合征相关。炎性肠病可以是例如结肠炎，诸如溃疡性结肠炎或克罗恩病。溃疡性结肠炎可以是慢性溃疡性结肠炎。可选地，胃肠炎症或胃肠道状况可以是口腔或咽喉状况或者可以与口腔或咽喉状况相关，所述口腔或咽喉状况包括例如牙龈炎、扁桃体炎和咽炎诸如链球菌性(streptococcal)咽炎。
15.该方法可以用于治疗或预防胃肠感染的一种或更多种症状，诸如食物中毒。胃肠感染可以是细菌感染、病毒感染和/或寄生虫感染。至少一种症状可以是腹痛、腹部痉挛、腹胀、腹泻、大便稠度差或存在便血(faecal blood presence)。
16.根据第一方面和第二方面，泌尿道状况可以是膀胱炎、尿道炎、肾盂肾炎、无症状性细菌尿或导管相关性泌尿道感染，或者可以与膀胱炎、尿道炎、肾盂肾炎、无症状性细菌
尿或导管相关性泌尿道感染相关。
17.根据第一方面和第二方面，皮肤或指甲/趾甲的状况可以是以下或者与以下相关：银屑病、皮炎、湿疹、酒渣鼻、痤疮、鱼鳞癣(ichtyosis)、癣或者以炎症、斑块、皮肤损伤和/或感染为特征的其他皮肤或指甲/趾甲状况，或与以炎症、斑块、皮肤损伤和/或感染为特征的其他皮肤或指甲/趾甲状况相关。感染可以由例如致病性细菌或真菌引起。
18.根据第一方面和第二方面，关节的状况可以是关节炎或可以与关节炎相关。关节炎可以是例如类风湿性关节炎或骨关节炎。
19.根据第一方面和第二方面，状况可以由感染引起或可以与感染相关。这样的状况包括，例如，胃炎、胃肠炎、乳腺炎、牙龈炎、咽炎诸如链球菌性咽炎(链球菌性咽喉炎(strep throat))以及皮肤和指甲/趾甲的状况。感染可以是细菌感染、病毒感染、真菌感染和/或寄生虫感染。
20.本公开内容的第三方面提供了一种用于治疗或预防胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的细菌感染的方法，所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
21.通常，根据第三个方面，细菌感染引起、诱导炎症或炎性状况或自身免疫性状况或者以其他方式与炎症或炎性状况或自身免疫性状况相关。
22.本公开内容的第四方面提供了一种用于治疗或预防胃肠道的炎性状况或自身免疫性状况的方法，任选地，其中所述状况由感染引起或与感染相关，所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
23.状况可以是急性状况或慢性状况。在示例性实施方案中，状况可以选自炎性肠病、胃炎、胃肠炎和牙龈炎。炎性肠病可以是结肠炎。结肠炎可以是例如溃疡性结肠炎或克罗恩病。溃疡性结肠炎可以是慢性溃疡性结肠炎。
24.在示例性实施方案中，受试者被施用类干酪乳杆菌(l.paracasei)、布氏乳杆菌(l.buchneri)和玉米乳杆菌(l.zeae)的组合。在另外的示例性实施方案中，受试者被施用l.diolivorans、类谷糠乳杆菌(l.parafarraginis)和布氏乳杆菌的组合。
25.本公开内容的第五方面提供了一种用于治疗或预防肠易激综合征或炎性肠病的方法，所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
26.炎性肠病可以是例如溃疡性结肠炎或克罗恩病。溃疡性结肠炎可以是慢性溃疡性结肠炎。
27.在示例性实施方案中，受试者被施用类干酪乳杆菌、布氏乳杆菌和玉米乳杆菌的组合。在另外的示例性实施方案中，受试者被施用l.diolivorans、类谷糠乳杆菌和布氏乳杆菌的组合。
28.本公开内容的第六方面提供了一种用于治疗或预防胃肠道的细菌感染的方法，所
述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
29.感染可以与引起感染的细菌对胃肠上皮的粘附和/或侵入相关。感染可以引起、诱导胃肠道炎症或胃肠道的炎性状况或自身免疫性状况，或者以其他方式与胃肠道炎症或胃肠道的炎性状况或自身免疫性状况相关。
30.本公开内容的第七方面提供了一种用于抑制或预防细菌病原体对受试者的胃肠粘膜的粘附的方法，所述方法包括向所述受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
31.在示例性实施方案中，胃肠粘膜包括胃、十二指肠或下胃肠道的上皮衬里。通常，细菌病原体是定殖于胃肠道的病原体。
32.本公开内容的第八方面提供了一种用于抑制或预防细菌病原体侵入受试者的胃肠上皮细胞的方法，所述方法包括向所述受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
33.在示例性实施方案中，胃肠上皮细胞包括胃、十二指肠或下胃肠道的上皮细胞。通常，细菌病原体是定殖于胃肠道的病原体。
34.本公开内容的另外的方面提供了一种用于促进受试者中伤口愈合的方法，所述方法包括向所述受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
35.根据以上方面和实施方案，该方法可以包括施用所述乳杆菌属物种中的两种、三种、四种、五种或全部六种的组合，或者来源于其中已经培养了所述乳杆菌中的两种、三种、四种、五种或全部六种的培养基的培养基上清液或无细胞滤液。组合可以代表协同组合。
36.根据以上方面和实施方案，乳杆菌可以例如口服、舌下或局部(topically)施用。
37.在特定实施方案中，乳杆菌属物种、培养基上清液或无细胞滤液以药学上可接受的组合物或食品或饮料的形式施用。
38.根据以上方面和实施方案，该方法还可以包括施用一种或更多种另外的微生物或其他治疗剂。
39.根据以上方面和实施方案，该方法可以包括向受试者施用乳酸杆菌属物种的微生物生物治疗组合物。微生物生物治疗组合物可以以例如固体或液体单位剂型、食品或饮料的形式施用。
40.附图简述
41.在本文中参考附图仅通过非限制性实例的方式来描述本公开内容的示例性实施方案。
42.图1.单独的aiec对ht29-mtx细胞系的粘附百分比(a)以及在存在乳杆菌属菌株
svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下粘附至ht29-mtx细胞系的aiec细胞的数目(b)，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：左侧柱，单独的乳杆菌；中柱，乳杆菌和aiec共接种；右侧柱，乳杆菌预接种然后aiec。
43.图2.单独的aiec对caco-2细胞系的粘附百分比(a)以及在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下粘附至caco-2细胞系的aiec细胞的数目(b)，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：左侧柱，单独的乳杆菌；中柱，乳杆菌和aiec共接种；右侧柱，乳杆菌预接种然后aiec。
44.图3.侵入至ht29-mtx细胞系的单独的aiec细胞的数目，以及在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下侵入至ht29-mtx细胞系的aiec细胞的数目，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：左侧柱，乳杆菌和aiec共接种；右侧柱，乳杆菌预接种然后aiec。
45.图4.单独的hmln-1对ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的粘附百分比以及在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下hmln-1对ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的粘附百分比，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：第一柱，乳杆菌和hmln-1共接种(ht29)；第二柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染(ht29)；第三柱，乳杆菌和hmln-1共接种(caco-2)；第四柱，乳杆菌预接种然后hmln-1(caco-2)。
46.图5.在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下侵入到ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的hmln-1细胞的数目，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：第一柱，乳杆菌和hmln-1共接种(ht29)；第二柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染(ht29)；第三柱，乳杆菌和hmln-1共接种(caco-2)；第四柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染(caco-2)。
47.图6.在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下跨越ht29-mtx细胞系(a)和caco-2细胞系(b)易位的hmln-1细胞的数目，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：左侧柱，乳杆菌和hmln-1共接种；右侧柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染。
48.图7.在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下hmln-1和aiec粘附至ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的优化的共培养物的粘附百分比(a)以及粘附的hmln-1细胞和aiec细胞的数目(b)，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：第一柱，乳杆菌和hmln-1共接种；第二柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染；第三柱，乳杆菌和aiec共接种；第四柱，乳杆菌预接种然后aiec感染。
49.图8.在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下侵入到ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的优化的共培养物的hmln-1细胞和aiec细胞的数目，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：第一柱，乳杆菌和hmln-1共接种；第二柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染；第三柱，乳杆菌和aiec共接种；第四柱，乳杆菌预接种然后aiec感染。
50.图9.在存在乳杆菌属菌株svt01d1(l.diolivorans)、svt04p1(类干酪乳杆菌)、svt05p2(类谷糠乳杆菌)、svt06b1(布氏乳杆菌)、svt07r1(l.rapi)、svt08z1(玉米乳杆菌)的情况下，跨越ht29-mtx细胞系和caco-2细胞系的优化的共培养物易位的hmln-1细胞和aiec细胞的数目，平均值 /-sem。
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p≤0.001；*p《0.0001。对于svt01d1、svt04p1、svt05p2、svt06b1、svt07r1和svt08z1：第一柱，乳杆菌和hmln-1共接种；第二柱，乳杆菌预接种然后hmln-1感染；第三柱，乳杆菌和aiec共接种；第四柱，乳杆菌预接种然后aiec感染。
51.图10.如实施例4中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的大便稠度评分。从左至右：如实施例4中述描的，分别为第1组至第6组。*，p《0.05，与第2组相比的dunnett检验。***，p《0.001，与第2组相比的dunnett检验。
52.图11.如实施例4中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的便血发生评分。从左至右：如实施例4中述描的，分别为第1组至第6组。*，p《0.05，与第2组相比的dunnett检验。
53.图12.如实施例4中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的疾病活动指数评分。从左至右：如实施例4中述描的，分别为第1组至第6组。*，p《0.05，与第2组相比的dunnett检验。
54.图13.通过29天的疾病活动指数(dai)评分测量的，在鼠模型中药物疗法对慢性dss诱导的溃疡性结肠炎的比较疗效。
55.图14.如在实施例4a中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的便血发生(a)、大便稠度评分(b)和疾病活动指数(dai)评分(c)。从左至右：如实施例4a中述描的，第1组、第2组、第7组和第6组。*，p《0.05，与第2组相比的dunnett检验；**，p《0.01，与第2组相比的dunnett检验；***，p《0.001，与第2组相比的dunnett检验。
56.图15.如在实施例4a中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的细胞因子表达分析(a，il-6；b，tnfα)。从左至右：如实施例4a中述描的，第1组、第2组、第7组和第6组。*，p《0.05，与第2组相比的dunnett检验。
57.图16.如在实施例4a中描述的治疗后，dss诱导的结肠炎模型的小鼠中的溃疡和炎
或“饮料(beverages)”包括但不限于健康食品和饮料、功能食品和饮料以及用于特定健康用途的食品和饮料。当本发明的这种食品或饮料用于除了人类以外的受试者时，该术语可以用于包括饲料。
70.本文提供了一种用于治疗或预防炎症、或炎性状况或自身免疫性状况或者与炎症、或炎性状况或自身免疫性状况相关的一种或更多种症状的方法，所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
71.如本文使用的，术语“炎性状况”通常指以炎症为特征或者对有害刺激诸如微生物病原体和/或病毒感染的复杂生物响应的状况。炎性状况的临床特征可以取决于有害刺激(或多个刺激)，但可以以受影响器官或组织的发热、疼痛、发红或肿胀为特征。炎性状况可以是急性的或慢性的。
72.本文还提供了一种用于治疗或预防胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的状况的方法，所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans，其中所述状况与所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症相关和/或其中所述状况由所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的感染引起或者与所述胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的感染相关。
73.在以下讨论中，在施用乳杆菌属物种或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液的上下文中，以及在包含乳杆菌属物种或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液的组合物的情况下，术语“乳杆菌属/乳杆菌”不仅可以用于指本文定义的特定乳杆菌属物种本身，而且还更广泛地指来源于在其中已经培养了本文定义的特定乳杆菌属物种的培养基的培养基上清液或无细胞滤液。
74.在特定实施方案中，炎症可以是胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症。炎症可以由感染引起或诱导，或者以其他方式与感染相关，所述感染例如细菌感染、病毒感染或寄生虫感染。在示例性实施方案中，引起感染的病原体是细菌。本文下文描述了导致这种感染的示例性细菌。
75.胃肠炎症可以与影响胃肠道的一种或更多种状况相关，该状况可以以炎症为特征或可以导致炎症，例如食物中毒、腹泻、溃疡诸如胃溃疡和口腔溃疡、龋齿和牙周病。炎症可以是急性发作，或者可以是慢性炎症。
76.与胃肠炎症相关的一种或更多种症状可以包括，例如，腹泻、大便稠度差、存在便血、腹部痉挛、腹胀、腹痛、胃肠上皮衬里诸如口腔、胃或小肠或大肠的溃疡或牙龈肿胀。本领域的技术人员将容易地理解，本公开内容的范围不应限于这些示例性症状，并且本公开内容将涵盖胃肠道炎症的其他症状。
77.状况可以是急性状况或慢性状况。本公开内容涉及的影响胃肠道的炎性状况和自身免疫性状况以及相关状况的实例包括但不限于炎性肠病、肠易激综合征、胃炎、胃肠炎、牙龈炎、咽炎(例如链球菌性咽炎或链球菌性咽喉炎)、回肠炎以及由细菌感染引起的其他状况，例如艰难梭菌性(c.difficile)胃炎和耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病(yersiniosis)。在
示例性实施方案中，状况是炎性肠病。炎性肠病可以是结肠炎，诸如，例如，溃疡性结肠炎、克罗恩病、缺血性结肠炎、小肠结肠炎或抗生素相关的出血性结肠炎(aahc)。aahc可以由克雷伯氏菌属(klebsiella)物种，诸如产酸克雷伯氏菌(klebsiella oxytoca)引起。溃疡性结肠炎可以是急性或慢性溃疡性结肠炎。在示例性实施方案中，溃疡性结肠炎是慢性溃疡性结肠炎。
78.本公开内容的实施方案提供了用于治疗或预防胃肠感染的至少一种症状的方法，所述胃肠感染诸如细菌感染(例如沙门氏菌属(salmonella)、大肠杆菌、李斯特菌属(listeria)、蜡状芽孢杆菌(b.cereus)、病毒感染(例如诺如病毒、轮状病毒)或寄生虫感染(例如，贾第虫属(giardia)、隐孢子虫属(cryptosporidium)、蛔虫属(ascaris)、艾美耳球虫属(eimeria)或旋毛虫属(trichinella))。至少一种症状可以是大便稠度差、腹泻、便血、腹部痉挛、腹胀或腹痛。因此，本公开内容的方法可以证明对于以下是有效的：例如，对于旅行者，作为食物中毒的预防或治疗，或者降低食物中毒的严重程度。至少一种症状可以与例如肠易激综合征相关。
79.可以根据本公开内容治疗的口腔和咽喉的状况和感染包括例如咽炎，诸如链球菌性咽炎、扁桃体炎、口臭和猩红热。
80.泌尿道的炎症或状况可以是例如肾、输尿管、膀胱或尿道的状况。示例性状况包括但不限于泌尿道感染和相关状况，例如膀胱炎、尿道炎、肾盂肾炎、肾脓肿和无症状性细菌尿。泌尿道感染或相关状况可以与引流装置诸如导尿管相关。
81.该方法可以用于治疗与泌尿道感染或相关状况相关的一种或更多种症状。这些症状包括但不限于排尿困难(尿痛)、尿急、排尿犹豫(hesitancy)、尿频、多尿、排尿不完全、血尿、尿失禁、尿混浊或排尿时的烧灼感。本领域的技术人员将容易地理解，本公开内容的范围不应限于这些示例性症状，并且本公开内容将涵盖泌尿道感染的其他症状。
82.皮肤或指甲/趾甲的炎症或状况可以是例如银屑病、皮炎、湿疹、酒渣鼻、痤疮、鱼鳞癣、真菌性皮肤和/或指甲/趾甲感染或以炎症、斑块或皮肤损伤为特征或与炎症、斑块或皮肤损伤相关的其他皮肤状况。银屑病的示例性形式包括斑块型银屑病、滴状银屑病和脓疱状银屑病。皮炎的示例性形式包括特应性皮炎、婴儿皮炎、脂溢性皮炎、接触性皮炎、职业性皮炎、手部皮炎、钱币状皮炎(nummular dermatitis)、淤滞性皮炎、口周皮炎和疱疹样皮炎。示例性的真菌感染包括足癣(脚癣(athlete’s foot))、股癣(腹股沟的癣、股癣)、头癣(头部和头皮的癣)、体癣(身体的癣)和甲癣(手指甲或脚趾甲的癣、甲真菌病(onychomycosis))。皮肤或指甲/趾甲的炎症或炎症状况可以由细菌感染、真菌感染或病毒感染引起或者与细菌感染、真菌感染或病毒感染相关。
83.炎性关节状况可以是关节炎。关节炎可以是例如类风湿性关节炎或骨关节炎。
84.本公开内容的实施方案还提供了抑制或降低炎症或与炎症相关的一种或更多种症状的方法，特别是胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的炎症。术语“抑制(inhibiting)”及其变化形式诸如“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibits)”、“降低(reduces)”、“降低(reducing)”等在本文可互换使用，以表示炎症的严重程度或状况的严重程度或感染的严重程度或者炎症、状况或感染的至少一种症状的改善(即降低)。
85.其他示例性的炎性状况或自身免疫性状况包括，例如，紊乱，诸如风湿热、慢性疲劳综合征、系统性红斑狼疮、干燥综合征、前列腺炎症、盆腔炎性疾病、胰腺炎、血管炎、包括
痛风的足部炎症和经期疼痛。
86.本公开内容的方法还涉及治疗或预防胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节的细菌感染。该方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
87.本公开内容的方法还涉及治疗或预防细菌感染，所述细菌感染引起、诱导胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节(诸如本文描述的那些)的炎症或炎性状况或自身免疫性状况或者以其他方式与胃肠道、泌尿道、皮肤、指甲/趾甲或关节(诸如本文描述的那些)的炎症或炎性状况或自身免疫性状况相关。在本文中，“诱导”是指刺激或促进炎症或炎性状况或自身免疫性状况的发展或恶化，任选地与一种或更多种其他因素一起作用。该方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
88.本公开内容的实施方案涉及的细菌感染可以由致病性革兰氏阴性细菌或革兰氏阳性细菌引起。示例性致病菌包括但不限于肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，诸如，例如大肠杆菌(escherichia coli)、耶尔森氏菌属(yersinia)物种、肠杆菌属(enterobacter)物种、沙门氏菌属物种、志贺氏菌属(shigella)物种、克雷伯氏菌属物种、变形杆菌属(proteus)物种和柠檬酸杆菌属(citrobacter)物种。示例性肠杆菌科包括粘附-侵入性大肠杆菌(aiec菌株)、肠致病性大肠杆菌(epec菌株)、产肠毒素大肠杆菌(etec菌株)、肠出血性大肠杆菌(ehec菌株)、尿道致病性大肠杆菌(upec菌株)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(yersinia enterocolitica)、阴沟肠杆菌(enterobacter cloacae)、鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)、肠道沙门氏菌(salmonella enterica)、肠炎沙门氏菌(salmonella enteridis)、弗氏志贺氏菌(shigella flexneri)、鲍氏志贺氏菌(shigella boydii)、宋内志贺氏菌(shigella sonnei)、痢疾志贺氏菌(shigella dysenteriae)、产酸克雷伯氏菌和奇异变形杆菌(proteus mirabilis)。可以对其采用本公开内容的方法的其他示例性细菌病原体包括螺杆菌属(helicobacter)物种诸如幽门螺杆菌(helicobacter pylori)、弯曲杆菌属(campylobacter)物种诸如空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni)、假单胞菌属(pseudomonas)物种诸如铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa)、弧菌属(vibrio)物种诸如霍乱弧菌(vibrio cholerae)、梭菌属(clostridium)物种诸如艰难梭菌(clostridium difficile)、链球菌属(streptococcus)物种诸如变异链球菌(streptococcus mutans)、酿脓链球菌(streptococcus pyogenes)以及其他a组(溶血性(haemolytic))链球菌和b组链球菌、葡萄球菌属(staphylococcus)物种诸如金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)和腐生葡萄球菌(staphylococcus saprophyticus)、肠球菌属(enterococcus)物种诸如粪肠球菌(enterococcus faecalis)和屎肠球菌(enterococcus faecium)以及分支杆菌属(mycobacterium)物种诸如鸟分枝杆菌副结核病亚种(mycobacterium avium subspecies paratuberculosis)。
89.可以根据本公开内容治疗的胃肠感染可以由例如以下一种或更多种引起：大肠杆菌、大肠杆菌aiec株、小肠结肠炎耶尔森氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、弗氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、宋内志贺菌、痢疾志贺氏菌、产酸克雷伯氏菌、奇异变形杆菌、幽门螺杆
菌、铜绿假单胞菌、空肠弯曲杆菌、霍乱弧菌、艰难梭菌、变异链球菌、酿脓链球菌、a组(溶血性)链球菌、金黄色葡萄球菌和鸟分枝杆菌副结核病亚种。可以根据本公开内容治疗的口腔和咽喉的感染可以由例如以下的一种或更多种引起：变异链球菌、酿脓链球菌和其他a组(溶血性)链球菌。可以根据本公开内容治疗的泌尿道感染可以由例如以下一种或更多种引起：大肠杆菌upec菌株、粪肠球菌、屎肠球菌、产酸克雷伯氏菌、奇异变形杆菌、铜绿假单胞菌、b组链球菌、金黄色葡萄球菌和腐生葡萄球菌。
90.本文还提供了用于抑制或预防细菌病原体粘附到受试者的胃肠粘膜的方法，以及用于抑制或预防受试者的胃肠上皮细胞被细菌病原体侵入的方法。所述方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
91.在本文中，如本文使用的，“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等是指与不存在本文定义的乳杆菌属物种的情况下将发生的相比，在存在一种或更多种本文定义的乳杆菌属物种的情况下，细菌病原体对胃肠上皮衬里或细胞的粘附和/或侵入的降低。
92.细菌病原体可以能够粘附至胃肠道的任何部分的粘膜上皮衬里和/或能够侵入胃肠道的任何部分衬里的上皮细胞。在示例性实施方案中，细菌病原体可以是肠杆菌科的成员，诸如，例如大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、沙门氏菌属物种或志贺氏菌属物种。大肠杆菌可以是，例如，粘附-侵入性大肠杆菌(aiec)、肠致病性大肠杆菌(epec)、产肠毒素大肠杆菌(etec)或肠出血性大肠杆菌(ehec)。沙门氏菌属物种可以是例如鼠伤寒沙门氏菌、肠道沙门氏菌或肠炎沙门氏菌。志贺氏菌属物种可以是例如弗氏志贺氏菌、鲍氏志贺氏菌、宋内志贺氏菌或痢疾志贺氏菌。
93.本公开内容的方法还涉及治疗或预防胃肠道的细菌感染，例如引起、诱导胃肠道的炎症和炎性状况及自身免疫性状况的感染或者可能以其他方式与胃肠道的炎症和炎性状况及自身免疫性状况相关的感染，诸如上文示例的那些。在本文中，“诱导”是指刺激或促进炎症或炎性状况或自身免疫性状况的发展或恶化，任选地与一种或更多种其他因素一起作用。该方法包括向受试者施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
94.本文还提供了用于促进伤口愈合的方法，所述方法包括施用乳杆菌属物种，和/或来源于在其中已经培养了乳杆菌的培养基的培养基上清液或无细胞滤液，所述乳杆菌属物种选自布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans。
95.如本文在伤口愈合的上下文中使用的，术语“促进(promoting)”、“促进(promotion)”及其变化形式是指本文公开的组合或组合物诱导、增强或以其他方式促进与伤口愈合和/或与伤口愈合相关的组织再生相关的自然过程的能力。在实施方案中，促进可以是相对于在没有施用组合或组合物的情况下观察到的愈合。促进可以是直接的或间接的。将理解的是，在间接促进伤口愈合中，组合或组合物可以影响分子的表达或活性，所述分子本身直接或间接调节或以其他方式影响伤口愈合或组织再生过程。促进可以是定性的、定量的和/或暂时的(temporal)。也就是说，例如，组合或组合物的施用与在没有这样的
施用将发生的情况相比可以导致更快速的伤口愈合和/或组织再生。
96.伤口可以是例如手术伤口、切口或浅表伤口，诸如割伤、擦伤、挫伤或瘀伤。伤口可以是慢性伤口，诸如压疮、压迫性溃疡、糖尿病足溃疡或严重烧伤。
97.本公开内容的方法采用以下一种或更多种的施用：选自类谷糠乳杆菌、布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、l.rapi、类干酪乳杆菌和l.diolivorans的乳杆菌属物种和包含一种或更多种这些物种的组合物。鉴于一些分类上的分歧和不确定性，玉米乳杆菌在别处也可称为干酪乳杆菌(l.casei)。然而，为了本公开内容的目的，保留了玉米乳杆菌的命名。
98.本公开内容的方法可以包括施用乳杆菌属物种布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、lactobacillus rapi、类干酪乳杆菌、类谷糠乳杆菌和lactobacillus diolivorans中的两种、三种、四种、五种或全部六种，或者来源于其中已经培养了所述乳杆菌的两种、三种、四种、五种或全部六种的培养基的培养基上清液或无细胞滤液。在这样的实施方案中，细菌可以一起培养或分开培养。
99.类谷糠乳杆菌可以是先前在wo2013/063658中描述的以登录号v11/022945可得的类谷糠乳杆菌lp18。类谷糠乳杆菌可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31292保藏在比利时微生物协调保藏中心(the belgium co-ordinated collection of micro-organisms，bccm)的类谷糠乳杆菌svt-18(其在别处可以称为替代名称svt-05p2)。
100.布氏乳杆菌可以是先前在wo2013/063658中描述的以登录号v11/022946可得的布氏乳杆菌lb23。布氏乳杆菌可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31293保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)的布氏乳杆菌svt-23(其在别处可以称为替代名称svt-06b1)。
101.玉米乳杆菌可以是先前在wo2013/063658中描述的以登录号v11/022948可得的玉米乳杆菌lz26。玉米乳杆菌可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31295保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)的玉米乳杆菌svt-26(其在别处可以称为替代名称svt-08z1)。
102.l.rapi可以是先前在wo2013/063658中描述的以登录号v11/022947可得的l.rapi lr24。l.rapi可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31294保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)的l.rapi svt-24(其在别处可以称为替代名称svt-07r1)。
103.类干酪乳杆菌可以是先前在wo2014/172758中描述的以登录号v12/022849可得的类干酪乳杆菌lp9(在其中指定为菌株“t9”)。类干酪乳杆菌可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31290保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)的类干酪乳杆菌svt-09(其在别处可以称为替代名称svt-04p1)。
104.lactobacillus diolivorans可以是先前在wo2014/172758中描述的以登录号v12/022847可得的lactobacillus diolivorans ld3(在其中指定为菌株“n3”)。l.diolivorans可以是根据布达佩斯条约于2019年2月27日以登录号lmg p-31287保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)的l.diolivorans svt-03(其在别处可以称为替代名称svt-01d1)。
105.根据本公开内容的方法待被施用的单独乳杆菌属物种的浓度将取决于多种因素，包括所采用的单独物种的身份和数目、待被治疗或预防的炎症、状况或感染的确切性质和严重程度、应用组合物的形式和应用组合物的手段。对于任何给定的病例，适当的浓度可以
由本领域普通技术人员仅使用常规实验确定。仅通过实例的方式，乳杆菌属物种的浓度，或在组合的情况下存在的每种物种的浓度可以是从约1x102cfu/ml至约1x10
11
cfu/ml，并且可以是约1x103cfu/ml、约2.5x103cfu/ml、约5x103cfu/ml、1x104cfu/ml、约2.5x104cfu/ml、约5x104cfu/ml、1x105cfu/ml、约2.5x105cfu/ml、约5x105cfu/ml、1x106cfu/ml、约2.5x106cfu/ml、约5x106cfu/ml、1x107cfu/ml、约2.5x107cfu/ml、约5x107cfu/ml、1x108cfu/ml、约2.5x108cfu/ml、约5x108cfu/ml、1x109cfu/ml、约2.5x109cfu/ml、或约5x109cfu/ml、约1
×
10
10
cfu/ml、约1.5
×
10
10
cfu/ml、约2.5
×
10
10
cfu/ml、约5
×
10
10
cfu/ml或约1
×
10
11
cfu/ml。
106.本公开内容还预期了使用本文描述的乳杆菌属物种的变体。如本文使用的，术语“变体”是指本文公开和例示的物种的天然存在的和特别开发的变体或突变体二者。变体可以具有或可以不具有与本文例示的特定物种鉴定的相同的生物学特征，条件是它们在治疗或预防炎性状况方面共有相似的有利特性。用于制备本文例示的变体的合适方法的说明性实例包括但不限于基因整合技术，诸如通过插入元件或转座子或通过同源重组介导的那些技术，用于修饰、插入、缺失、活化或沉默基因的其他重组dna技术，种内原生质体融合，通过用紫外线或x射线照射或通过用化学诱变剂诸如亚硝基胍、甲基甲烷磺酸酯、氮芥等处理进行诱变，以及噬菌体介导的转导。合适的且可适用的方法在本领域中是熟知的，并且尤其在以下中描述：例如，j.h.miller,experiments in molecular genetics,cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.(1972)；j.h.miller,a short course in bacterial genetics,cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.(1992)；和j.sambrook,d.russell,molecular cloning:a laboratory manual，第3版，cold spring harbor laboratory press,cold spring harbor,n.y.(2001)。
107.如本文使用的术语“变体”还涵盖在系统发育上与本文公开的物种密切相关的微生物菌株，以及在一个或更多个系统发育信息标志物上与本文公开的物种具有大的序列同一性的菌株，所述标志物诸如rrna基因、延伸因子基因和起始因子基因、rna聚合酶亚基基因、dna旋转酶基因、热休克蛋白基因和reca基因。例如，如本文预期的“变体”菌株的16s rrna基因可以与本文公开的菌株共有约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性。
108.根据本公开内容，本文描述的乳杆菌属物种及其组合或来源于培养基的培养基上清液或无细胞滤液通常以组合物的形式施用。在物种的组合或来源于培养多种物种的培养基上清液或无细胞滤液的实施方案中，本领域技术人员将理解，待被施用的每种物种、上清液或滤液不需要包含在相同的组合物中。在施用是分开的情况下，施用可以是顺序性的或同时的。
109.根据本公开内容使用的组合物可以通过混合相关组分并将所得混合物配制成适于施用至受试者的剂型来制备。因此，组合物可以包含药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂和/或佐剂。载体、稀释剂、赋形剂和佐剂在与组合物的其他组分相容方面必须是“可接受的”，并且对接受组合物的受试者无害。制备用于施用的合适组合物的方法以及适于配制用于局部施用、口服施用或舌下施用的组合物的载体、稀释剂、赋形剂和佐剂是本领域技术人员熟知的。在示例性实施方案中，组合物用包含无菌等渗盐水或3％蔗糖的载体配制。
110.组合物可以通过任何方便或合适的途径施用，包括但不限于以下的多种途径：口
服、舌下、含服、经直肠、局部、鼻内、眼内、经粘膜、经肠、肠内、肌肉内、皮下、髓内、鞘内、心室内、脑内、膀胱内、静脉内或腹膜内。适当的途径可以取决于例如待被治疗或预防的炎症、状况或感染的性质和严重程度以及炎症、状况或感染的部位。组合物可以以任何合适的形式施用，通常以固体形式或液体形式施用。例如，可以使用本领域技术人员熟知的方法和技术将组合物配制成片剂、糖锭(troches)、胶囊、囊片(caplet)、酏剂、悬浮液、糖浆、薄片(wafers)、颗粒、粉末、凝胶、糊剂、溶液、乳膏、喷雾剂、悬浮液、可溶性袋剂(soluble sachets)、锭剂、泡腾片、咀嚼片、多层片剂等。对于口服施用，乳杆菌或组合物可以方便地掺入到多种饮料、食品、营养产品、营养补充剂、食品添加剂、药物、非处方药制剂和动物饲料补充剂中。对于局部应用，合适的媒介物包括但不限于洗剂、搽剂、凝胶、乳膏、软膏、泡沫、喷雾剂、油、粉末等。也可以将通常呈液体或半液体形式的组合物浸渍到经皮贴剂、膏药和伤口敷料诸如绷带或水胶体敷料中。
111.如本领域技术人员将理解的，药学上可接受的载体或稀释剂的选择将取决于施用途径以及待被治疗的状况的性质和严重程度和受试者。本领域技术人员可以容易地确定特定的载体或递送系统和施用途径。本领域技术人员将能够使用常规方法容易地确定在本公开内容的方法中有用的适当制剂。
112.例如，本公开内容的组合物可以被配制成用于以含有可接受的稀释剂(诸如盐水和无菌水)的液体形式施用，或者可以呈洗剂、乳膏或凝胶的形式，所述洗剂、乳膏或凝胶包含可接受的稀释剂或载体以赋予期望的质地、稠度、粘度和外观。可接受的稀释剂和载体是本领域技术人员所熟悉的，并且包括但不限于：乙氧基化表面活性剂和非乙氧基化表面活性剂、脂肪醇、脂肪酸、烃油(诸如棕榈油、椰子油和矿物油)、可可脂蜡、硅油、ph平衡剂、纤维素衍生物、乳化剂诸如非离子有机碱和无机碱、防腐剂、蜡酯、类固醇(steroid alcohol)、甘油三酯、磷脂诸如卵磷脂和脑磷脂、多元醇酯、脂肪醇酯、亲水性羊毛脂衍生物和亲水性蜂蜡衍生物。
113.可选地，乳杆菌可使用本领域熟知的药学上可接受的载体容易地被配制成适于口服施用的剂量。这些载体可以选自糖、淀粉、纤维素及其衍生物、麦芽、明胶、滑石、硫酸钙、植物油、合成油、多元醇、海藻酸、磷酸盐缓冲溶液、乳化剂、等渗盐水和无热原水。
114.用于口服使用的合适的载体、稀释剂、赋形剂和佐剂的一些实例包括液体石蜡、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、海藻酸钠、阿拉伯胶、黄蓍胶、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、明胶和卵磷脂。此外，这些口服制剂可以包含合适的调味剂和着色剂。当以胶囊形式使用时，胶囊可以用延迟崩解的化合物诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯包衣。佐剂通常包括润滑剂(emollients)、乳化剂、增稠剂、防腐剂、杀细菌剂和缓冲剂。对于作为可注射溶液或悬浮液施用，无毒的、胃肠外可接受的稀释剂或载体可以包括林格氏溶液、等渗盐水、磷酸盐缓冲盐水、乙醇和1,2丙二醇。
115.用于口服施用的固体形式可以包含人类和兽医制药实践中可接受的粘合剂、甜味剂、崩解剂、稀释剂、调味剂、包衣剂、防腐剂、润滑剂(lubricant)和/或时间延迟剂。合适的粘合剂包括阿拉伯树胶、明胶、玉米淀粉、黄蓍胶、海藻酸钠、羧甲基纤维素或聚乙二醇。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿斯巴甜或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、黄原胶、膨润土、海藻酸或琼脂。合适的稀释剂包括乳糖、山梨醇、甘露醇、右旋糖、高岭土、纤维素、碳酸钙、硅酸钙或磷酸二钙。合适的调味剂包括薄荷
油、冬青油、樱桃调味剂、橙子调味剂或覆盆子调味剂。合适的包衣剂包括丙烯酸和/或甲基丙烯酸和/或它们的酯的聚合物或共聚物、蜡、脂肪醇、玉米醇溶蛋白、虫胶或谷蛋白。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素e、α-生育酚、抗坏血酸、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石。合适的时间延迟剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
116.除了以上剂之外，用于口服施用的液体形式可以包含液体载体。合适的液体载体包括水、油诸如橄榄油、花生油(peanut oil)、芝麻油、葵花油、红花油、花生油(arachis oil)、椰子油、液体石蜡、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、丙醇、异丙醇、甘油、脂肪醇、甘油三酯或其混合物。用于口服施用的悬浮液还可以包含分散剂和/或悬浮剂。合适的悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸钠或乙酰醇。合适的分散剂包括卵磷脂、脂肪酸诸如硬脂酸的聚氧乙烯酯、聚氧乙烯山梨醇单油酸酯或二油酸酯、硬脂酸酯或月桂酸酯、聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯或二油酸酯、硬脂酸酯或月桂酸酯等。用于口服施用的乳液还可以包含一种或更多种乳化剂。合适的乳化剂包括如以上例示的分散剂或天然树胶，诸如瓜尔胶、阿拉伯胶或黄蓍胶。
117.用于制备合适的可胃肠外施用的组合物的方法将是本领域技术人员熟知的，并且更详细描述于例如remington's pharmaceutical science，第15版，mack publishing company,easton,pa.中，在此通过引入并入本文。
118.对于配制用于局部施用的组合物，药学上可接受的稀释剂的实例是脱矿质水或蒸馏水；盐水溶液；基于植物的油，诸如花生油(peanut oil)、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油诸如花生油(peanut oil)、红花油、橄榄油、棉籽油、玉米油、芝麻油、花生油(arachis oil)或椰子油；有机硅油，包括聚硅氧烷，诸如甲基聚硅氧烷、苯基聚硅氧烷和甲基苯基聚硅氧烷；挥发性有机硅；矿物油，诸如液体石蜡、软石蜡或角鲨烷；纤维素衍生物，诸如甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或羟丙基甲基纤维素；低级烷醇，例如乙醇或异丙醇；低级芳烷醇；低级聚亚烷基二醇或低级亚烷基二醇，例如聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇、丙二醇、1,3-丁二醇或甘油；脂肪酸酯，诸如棕榈酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯或油酸乙酯；聚乙烯吡咯烷酮；琼脂；卡拉胶；黄蓍胶或阿拉伯树胶和凡士林胶(petroleum jelly)。
119.在另外的实施方案中，组合物还可以包含悬浮剂和/或湿润剂，诸如聚维酮或丙二醇，和用于调节组合物粘度的中和剂，诸如氢氧化钠、三乙醇胺(tea)或乙二胺四乙酸(edta)。
120.根据待被治疗或预防的状况、状况的严重程度和期望的结果，本公开内容的组合物可以施用例如一周一次或更多次，任选地例如一周一次、每两天一次、一天一次、一天两次或一天三次。受试者的施用持续时间也将根据待被治疗或预防的状况、状况的严重程度和期望的结果而变化。待被受试者施用的组合物的量将根据一系列因素而变化，包括所施用的微生物的身份、待被治疗或预防的状况的性质和严重程度、受试者的年龄和一般健康状况以及期望的结果。合适的剂量方案可以由熟练的受授人员(skilled addressee)容易地确定。
121.在示例性实施方案中，可以将约1ml至约25ml的乳杆菌属物种的液体制剂以约105cfu/ml与10
11
cfu/ml之间的最终浓度以每天一次、每天两次或更频繁的基础施用至受试
者。液体制剂的体积可以是例如约1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml、9ml、10ml、11ml、12ml、13ml、14ml、15ml、16ml、17ml、18ml、19ml、20ml、21ml、22ml、23ml、24ml或25ml。
122.乳杆菌可以与其他治疗剂组合，例如但不限于抗生素、抗微生物剂、防腐剂、麻醉剂、抗感染剂、抗炎剂、免疫抑制剂和其他指示用于治疗炎性状况的治疗剂，诸如甾体和nsaid。关于包含本公开内容主题的微生物的组合物，这种另外的剂的施用可以在相同时间或在不同时间，即同时或顺序性的，并且可以通过相同或不同的途径被施用。另外的治疗剂可以与该方法中使用的微生物共同配制。
123.可以采用的另外的抗炎剂的非限制性实例包括甾体化合物和非甾体化合物，诸如丙酸氯倍他索(clobetasol propionate)、二丙酸倍他米松、丙酸卤倍他索(halobetasol propionate)、双醋酸二氟拉松(diflorasone diacetate)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、哈西奈德(halcinonide)、安西奈德(amcinonide)、去羟米松(desoximetasone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、二丙酸倍他米松(betamethasone dipropionate)、醋酸氟轻松(fluocinolone acetonide)、戊酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、氟氢缩松(flurandrenolide)、曲安奈德、糠酸莫米松、曲安奈德、丙酸氟替卡松、地奈德(desonide)、醋酸氟轻松、戊酸氢化可的松、泼尼卡酯(prednicarbate)、曲安奈德、地奈德、氢化可的松(hydrocorti-sone)、醋酸丙酸氢可的松(hydrocortisone aceponate)、丁酸丙酸氢化可的松(hydrocortisone buteprate)、醋丙甲泼尼龙(methylprednisolone aceponate)、糠酸莫米松和泼尼卡酯。合适的非甾体抗炎化合物的非限制性实例包括吲哚美辛(indomethacin)、酮洛芬(ketoprofen)、联苯乙酸(felbinac)、双氯芬酸(diclofenac)、布洛芬(ibuprofen)、吡罗昔康(piroxicam)、苄达明(benzydamin)、乙酰水杨酸(acetylsalicylic acid)、二氟尼柳(diflunisal)、双水杨酯(salsalate)、萘普生(naproxen)、非诺洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、奥沙普秦(oxaprozin)、洛索洛芬(loxoprofen)、吲哚美辛、舒林酸(sulindac)、依托度酸(etodolac)、酮咯酸(ketorolac)、双氯芬酸(diclo-fenac)、萘丁美酮(nabumetone)、吡罗昔康(piroxicam)、美洛昔康(meloxicam)、替诺昔康(tenoxicam)、屈噁昔康(droxicam)、氯诺昔康(lornoxicam)、伊索昔康(isoxicam)、甲芬那酸(mefenamic acid)、甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、氟苯那酸(flufenamic acid)、托芬那酸(tolfenamic acid)、非罗考昔(firocoxib)和利克飞龙(licofelone)、半合成的糖胺聚糖醚、黄烷醇(flavanols)、类黄酮(flavonoids)、异黄酮(isoflavones)及衍生物。抗炎剂可以是细胞因子信号传导的抑制剂，诸如，例如环孢菌素a、6-硫鸟嘌呤、柳氮磺吡啶、美沙拉嗪(5-氨基水杨酸)、依那西普、泼尼松龙或巴柳氮。
124.抗感染剂可以是治疗受试者的感染的任何剂。在特定的实施方案中，抗感染剂能够杀死或抑制感染性生物体的生长，该感染性生物体能够通过凋亡小体在细胞之间整体地或部分地转移。合适的抗感染剂包括但不限于抗病毒剂、抗细菌剂、抗原生动物剂、抗真菌剂或其组合。
125.说明性的抗病毒剂包括但不限于：硫酸阿巴卡韦(abacavir sulfate)、阿昔洛韦(acyclovir)特别是阿昔洛韦钠、阿德福韦(adefovir)、金刚烷胺(amantadine)特别是盐酸金刚烷胺、安普那韦(amprenavir)、安普利近(ampligen)、阿扎那韦(atazanavir)、西多福
韦(cidofovir)、地瑞那韦(darunavir)、地拉韦啶(delavirdine)特别是甲磺酸地拉韦啶、地达诺新(didanosine)、二十二烷醇(docosanol)、度鲁特韦(dolutegravir)、依度尿苷(edoxudine)、依法韦仑(efavirenz)、恩曲他滨(emtricitabine)、埃替格韦(elvitegravir)、恩夫韦地(enfuvirtide)、恩替卡韦(entecavir)、泛昔洛韦(famciclovir)、福米韦生(fomivirsen)特别是福米韦生纳、膦甲酸(foscarnet)特别是膦甲酸钠、更昔洛韦(ganciclovir)、伊巴他滨(ibacitabine)、碘苷(idoxuridine)、咪喹莫特(imiquimod)、茚地那韦(indinavir)特别是硫酸茚地那韦、异丙肌苷(inosine pranobex)、拉米夫定(lamivudine)、洛匹那韦(lopinavir)、马拉维若(maraviroc)、美替沙腙(methisazone)、吗啉胍(moroxydine)、奈非那韦(nelfinavir)特别是甲磺酸奈非那韦、奈韦拉平(nevirapine)、硝唑尼特(nitazoxanide)、奥司他韦(oseltamivir)特别是磷酸奥司他韦、喷昔洛韦(penciclovir)、帕拉米韦(peramivir)、普拉康纳利(pleconaril)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、雷特格韦(raltegravir)、利巴韦林(ribavirin)、金刚乙胺(rimantadine)特别是盐酸金刚乙胺、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)特别是甲磺酸沙奎那韦、索非布韦(sofosbuvir)、司他夫定(stavudine)、telaprivir、替诺福韦(tenofovir)、替拉那韦(tipranavir)、曲氟尿苷(trifluridine)、曲金刚胺(tromantadine)、乌芬诺韦(umifenovir)、伐昔洛韦(valaciclovir)特别是盐酸伐昔洛韦、缬更昔洛韦(valganciclovir)、维立韦罗(vicriviroc)、阿糖腺苷(vidarabine)、韦拉米啶(viramidine)、扎西他滨(zalcitabine)、扎那米韦(zanamivir)、齐多夫定(zidovudine)、以及其药学上可接受的盐及其组合。
126.说明性的抗菌剂包括但不限于喹诺酮类(quinolones)(例如，氨氟沙星(amifloxacin)、西诺沙星(cinoxacin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、依诺沙星(enoxacin)、氟罗沙星(fleroxacin)、氟甲喹(flumequine)、洛美沙星(lomefloxacin)、萘啶酸(nalidixic acid)、诺氟沙星(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、左氧氟沙星(levofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、噁喹酸(oxolinic acid)、培氟沙星(pefloxacin)、罗索沙星(rosoxacin)、替马沙星(temafloxacin)、托氟沙星(tosufloxacin)、司帕沙星(sparfloxacin)、克林沙星(clinafloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)和加雷沙星(garenoxacin))、四环素类(tetracyclines)、甘氨环素类(glycylcyclines)和噁唑烷酮类(oxazolidinones)(例如，金霉素(chlortetracycline)、地美环素(demeclocycline)、多西环素(doxycycline)、赖甲环素(lymecycline)、美他环素(methacycline)、米诺环素(minocycline)、氧四环素(oxytetracycline)、四环素(tetracycline)、替加环素(tigecycline)；利奈唑胺(linezolide)、依哌唑胺(eperezolid))、糖肽类(glycopeptides)、氨基糖苷类(aminoglycosides)(例如，阿米卡星(amikacin)、阿贝卡星(arbekacin)、丁苷菌素(butirosin)、地贝卡星(dibekacin)、福提霉素(fortimicins)、庆大霉素(gentamicin)、卡那霉素(kanamycin)、新霉素、奈替米星(netilmicin)、核糖霉素(ribostamycin)、西索米星(sisomicin)、壮观霉素(spectinomycin)、链霉素(streptomycin)、妥布霉素(tobramycin))、β-内酰胺类(例如，亚胺培南(imipenem)、美罗培南(meropenem)、比阿培南(biapenem)、头孢克洛(cefaclor)、头孢羟氨苄(cefadroxil)、头孢羟唑(cefamandole)、头孢曲秦(cefatrizine)、头孢西酮(cefazedone)、头孢唑啉
(cefazolin)、头孢克肟(cefixime)、头孢甲肟(cefmenoxime)、头孢地秦(cefodizime)、头孢尼西(cefonicid)、头孢哌酮(cefoperazone)、头孢雷特(ceforanide)、头孢噻肟(cefotaxime)、头孢替安(cefotiam)、头孢咪唑(cefpimizole)、头孢匹胺(cefpiramide)、头孢泊肟(cefpodoxime)、头孢磺啶(cefsulodin)、头孢他啶(ceftazidime)、头孢特仑(cefteram)、头孢替唑(ceftezole)、头孢布烯(ceftibuten)、头孢唑肟(ceftizoxime)、头孢曲松(ceftriaxone)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢唑南(cefuzonam)、头孢乙氰(cephacetrile)、头孢氨苄(cephalexin)、头孢来星(cephaloglycin)、头孢噻啶(cephaloridine)、头孢噻吩(cephalothin)、头孢匹林(cephapirin)、头孢拉定(cephradine)、头孢美唑(cefinetazole)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢替坦(cefotetan)、氨曲南(azthreonam)、卡芦莫南(carumonam)、氟氧头孢(flomoxef)、拉氧头孢(moxalactam)、美西林(amidinocillin)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄青霉素(ampicillin)、阿洛西林(azlocillin)、羧苄青霉素(carbenicillin)、苄基青霉素(benzylpenicillin)、卡非西林(carfecillin)、氯唑西林(cloxacillin)、双氯西林(dicloxacillin)、甲氧西林(methicillin)、美洛西林(mezlocillin)、萘夫西林(nafcillin)、苯唑西林(oxacillin)、青霉素g(penicillin g)、哌拉西林(piperacillin)、磺苄西林(sulbenicillin)、替莫西林(temocillin)、替卡西林(ticarcillin)、头孢托仑(cefditoren)、sc004、ky-020、头孢地尼(cefdinir)、头孢布烯(ceftibuten)、fk-312、s-1090、cp-0467、bk-218、fk-037、dq-2556、fk-518、头孢唑兰(cefozopran)、me1228、kp-736、cp-6232、ro 09-1227、opc-20000、ly206763)、利福霉素(rifamycins)、大环内酯类(macrolides)(例如阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、红霉素(erythromycin)、竹桃霉素(oleandomycin)、罗他霉素(rokitamycin)、罗沙米星(rosaramicin)、罗红霉素(roxithromycin)、醋竹桃霉素(troleandomycin))、酮内酯类抗生素(ketolides)(例如泰利霉素(telithromycin)、喹红霉素(cethromycin))、香豆霉素(coumermycins)、林可酰胺类抗生素(lincosamides)(例如，克林霉素(clindamycin)、林可霉素(lincomycin))、氯霉素(chloramphenicol)、氯法齐明(clofazimine)、环丝氨酸(cycloserine)、氨苯砜(dapsone)、盐酸乙胺丁醇(ethambutol hydrochloride)、异烟肼(isoniazid)、吡嗪酰胺(pyrazinamide)、利福布汀(rifabutin)、利福平(rifampin)、利福喷丁(rifapentine)和硫酸链霉素。
127.说明性的抗原生动物剂包括但不限于阿托伐醌(atovaquone)、甲硝唑(metronidazole)(包括盐酸甲硝唑)、喷他脒(pentamidine)(包括羟乙基磺酸喷他脒)、氯喹(chloroquine)(包括盐酸氯喹和磷酸氯喹)、多西环素、硫酸羟基氯喹(hydroxychloroquine sulfate)、甲氟喹(mefloquine)(包括盐酸甲氟喹)、伯氨喹(primaquine)(包括磷酸伯氨喹)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)、乙胺嘧啶(pyrimethamine)与磺胺多辛(sulfadoxine)、甲氧苄啶(trimethoprim)、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、克林霉素、奎宁(quinine)、奎尼丁(quinidine)、磺胺嘧啶(sulfadiazine)、蒿甲醚(artemether)、苯芴醇(lumefantrine)、青蒿琥酯(artesunate)、硝唑尼特、苏拉明(suramin)、美拉胂醇(melarsoprol)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、硝呋莫司(nifurtimox)、葡萄糖酸锑盐(stibogluconate)(包括葡萄糖酸锑钠)、两性霉素b(amphotericin b)(包括两性霉素b脂质体)、米替福辛(miltefosine)、巴龙霉素
(paromomycin)、酮康唑(ketoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、氟康唑(fluconazole)、以及其药学上可接受的盐及其组合。
128.说明性的抗真菌剂包括但不限于阿巴芬净(abafungin)、阿巴康唑(albaconazole)、阿莫罗芬(amorolfine)、两性霉素b、两性霉素b硫酸胆固醇酯复合物、两性霉素b脂质复合物、两性霉素b脂质体、阿尼芬净(anidulafungin)、联苯苄唑(bifonazole)、布替萘芬(butenafine)、布康唑(butoconazole)、杀念珠菌素(candicidin)、卡泊芬净(caspofungin)、克霉唑(clotrimazole)、益康唑(econazole)、艾氟康唑(efinaconazole)、芬替康唑(fenticonazole)、氟康唑(fluconazole)、氟胞嘧啶(flucytosine)、微粉化灰黄霉素(griseofulvin microsize)、超微粉化灰黄霉素(griseofulvin ultramicrosize)、哈霉素(hamycin)、艾莎康唑(isavuconazole)、异康唑(isoconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoconazole)、卢立康唑(luliconazole)、米卡芬净(micafungin)、咪康唑(miconazole)、萘替芬(naftifine)、那他霉素(natamycin)、制霉菌素(nystatin)、奥莫康唑(omoconazole)、奥昔康唑(oxiconazole)、泊沙康唑(posaconazole)、丙环唑(propiconazole)、雷夫康唑(ravuconazole)、舍他康唑(sertaconazole)、硫康唑(sulconazole)、特比萘芬(terbinafine)(包括盐酸特比萘芬)、特康唑(terconazole)、噻康唑(tioconazole)、伏立康唑(voriconazole)、以及其药学上可接受的盐及其组合。
129.说明性的免疫抑制剂包括但不限于：皮质类固醇，诸如，例如布地奈德(budesonide)、泼尼松(prednisone)和泼尼松龙(prednisolone)；mtor抑制剂，诸如，例如西罗莫司(sirolimus)和依维莫司(everolimus)；以及单克隆抗体，诸如例如阿达木单抗(adalimumab)、英利昔单抗(infliximab)、赛妥珠单抗(certolizumab)、那他珠单抗(natalizumab)、乌司奴单抗(ustekinumab)和维多组单抗(vedolizumab)及其生物仿制品(biosimilars)。
130.在示例性实施方案中，本文描述的乳杆菌以微生物生物治疗组合物的形式被提供和施用。这样的组合物还可以包含一种或更多种另外的微生物，诸如，例如鼠李糖乳杆菌(lactobacillus rhamnosus)、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、保加利亚乳杆菌(lactobacillus bulgaricus)、干酪乳杆菌(lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)、发酵乳杆菌(lactobacillus fermentum)、乳酸乳球菌(lactococcus lactis)、嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)、短双歧杆菌(bifidobacterium breve)、两岐双岐杆菌(bifidobacterium bifidum)、乳双歧杆菌(bifidobacterium lactis)和动物双歧杆菌(bifidobacterium animalis)。
131.微生物生物治疗组合物可以包含一种或更多种益生元组分。合适的益生元包括，例如，聚右旋糖、菊糖、果寡糖(fos)、木寡糖(xos)、半乳糖寡糖(gos)、甘露寡糖、基于蛋白的绿唇贻贝提取物，以及各种含益生元的视频，诸如生洋葱、生韭菜、生菊苣根(raw chickory root)和生朝鲜蓟(raw artichoke)。在某些实施方案中，益生元是果寡糖。
132.如本文描述的包含乳杆菌的组合物可以以任何合适的形式(以上描述的任何剂型)施用。微生物生物治疗组合物可以以粉末的形式被提供至使用者，适于由使用者混合到任何类型的饮料或食品(例如水、果汁或酸奶)中，或者适合于在没有饮料或另外的食品的情况下作为粉末消耗。因此，微生物生物治疗组合物可以被方便地掺入多种食品和/或饮料
产品、营养产品、补充剂、食品添加剂和非处方药制剂中。食品或食品添加剂可以是固体形式诸如粉末，或液体形式。饮料或食品的类型的具体实例包括但不限于基于水的、基于牛奶的、基于酸奶的、基于其他乳制品的、基于乳替代品诸如豆奶或燕麦奶的或者基于果汁的饮料、水、软饮料、碳酸饮料和营养饮料(包括饮料的浓缩原液和用于制备这样的饮料的干粉)；烤焙产品诸如薄脆饼干(cracker)、面包、松饼、面包卷、百吉饼、饼干，谷物，棒状物(bar)诸如燕麦坚果能量棒(muesli bars)、健康食物棒等，调味品，调味酱，蛋奶沙司，酸奶，布丁，预包装的冷冻的餐品，汤和糖果。
133.在本说明书中对任何先前的出版物(或来源于其的信息)或对任何已知的事项的引用不是并且不应当被视为确认或承认或以任何形式暗示该先前的出版物(或来源于其的信息)或已知的事项构成本说明书所涉及的领域中的公知常识的一部分。
134.现在将参考以下具体实施例来描述本公开内容，这些实施例不应被解释为以任何方式限制本发明的范围。
实施例
135.以下实施例是对本发明的说明，并且不应被解释为以任何方式限制遍布本说明书描述的公开内容的一般性质。
136.实施例1
–
aiec的粘附和侵入
137.测试乳杆菌属物种类谷糠乳杆菌lp18、布氏乳杆菌lb23、l.rapi lr24、玉米乳杆菌lz26、类干酪乳杆菌lp 9和l.diolivorans ld3竞争性抑制致病性大肠杆菌aiec菌株在消化道上皮中的粘附和侵入(和易位)的能力。将乳杆菌属菌株在-80℃维持在具有20％甘油的de man、rogosa、sharpe(mrs)肉汤中。它们在mrs琼脂上生长为工作培养物，并且在每次粘附或侵入测定之前在mrs肉汤中于37℃再生长18小时。
138.aiec菌株(菌株f44a-1)是从患有炎性肠病的患者中分离的野生菌株，并且包含与aiec相关的所有毒力基因，并且符合aiec对caco-2细胞的扩散粘附模式以及巨噬细胞中的存活和复制。
139.为了评估每种乳杆菌属物种抑制这些物种与人类消化道上皮相互作用的能力，使用代表消化道上皮的细胞系caco-2(atcc htb-37)和ht29(atcc htb-38)mtx。caco-2细胞可以在培养基中分化，形成具有紧密连接和微绒毛的极化细胞单层，类似于人类肠成熟肠细胞的重要特征。将ht29-mtx突变以产生粘蛋白，类似于消化道上皮的杯状细胞。将细胞在50ml培养瓶中在补充有20％(v/v)的胎牛血清(fbs)(对于caco-2细胞)和15％(v/v)fbs(对于ht29-mtx细胞)以及1％(v/v)的青霉素-链霉素的eagle最小必需培养基中培养至汇合。将细胞培养物在5％二氧化碳的气氛中在37℃维持。密切监测培养基并且每48h更换一次培养基。在汇合时，将细胞传代培养到8孔室载玻片用于粘附测定和无菌96孔平底板中用于侵入测定。
140.粘附测定
141.在粘附测定之前，将细胞系接种到8孔玻璃室载玻片系统上。将细胞生长至～75％汇合，并且在检测之前，培养基被改为无抗生素培养基。使用15ml管，将aiec分离株在lb肉汤中培养4小时，将乳杆菌菌株在mrs肉汤中于37℃伴随搅拌(140冲程/min)培养过夜。使细胞悬浮液以3,500rpm离心12分钟并且弃去上清液。将沉淀物重悬于磷酸盐缓冲盐水(pbs)
(ph7.4)中，并且将100μl悬浮液(～1.0
×
109cfu/ml，在600nm处od＝1)接种到适当的室中。
142.对于竞争性粘附，将乳杆菌和aiec一起接种，然后在37℃孵育90min。对于乳杆菌排除aiec的能力，将乳杆菌悬浮液(～1.0
×
109cfu/ml)接种60min，然后感染相同浓度的aiec，然后在37℃孵育90min。孵育之后，将未粘附的细菌细胞用pbs(ph 7.4)洗去，将细胞用95％乙醇(v/v)固定5min，并且使用革兰氏染料染色以区分革兰氏阳性的乳杆菌和革兰氏阴性的aiec，并且在光学显微镜下观察。对细胞系的微生物粘附百分比通过对100个随机选择的细胞中显示粘附的细胞进行计数来确定，而每细胞粘附细菌的数目通过对附着至25个随机选择的细胞上的细菌的数目进行计数来确定。
143.侵入测定
144.对于侵入测定，如粘附测定中描述的培养细菌，并且接种到在96孔板中生长至汇合的caco-2细胞和ht29-mtx细胞上。对于侵入测定，类似于粘附测定培养细菌分离株，区别在于细菌的浓度被调节至(～1
×
108cfu/ml)。对于竞争性侵入，将乳杆菌和aiec同时接种，随后于37℃孵育2小时。对于乳杆菌抑制/降低aiec侵入速率的能力，首先接种乳杆菌并培养60min，然后接种aiec并于37℃培养另外2小时。
145.孵育之后，将单层用pbs洗涤三次，然后在含庆大霉素(150μg/ml)的emem中于37℃孵育1小时，以杀死非侵入细胞。然后将单层用pbs洗涤3次，并用0.1％(v/v)triton x-100裂解，以释放侵入的aiec。然后将裂解物连续稀释，并且将100μl体积铺板在macconkey琼脂3号板上，并于37℃孵育24小时，然后对菌落进行计数。计算菌落形成单位的平均值
±
sem，并对稀释因子进行适当校正。大肠杆菌菌株46-4用作两种测定的阴性对照。
146.统计分析
147.所有实验以一式三份进行。统计分析使用graphpad prism统计软件(8.0.0版)进行。使用双向anova随后是tukey多重比较检验来确定所有测试组菌株间粘附和侵入的平均水平的差异。使用pearson相关系数评估菌株的粘附与侵入能力之间的关系，并且如果p《0.05，则差异被认为是统计学上显著的。
148.结果
149.在两种细胞系上接种后，aiec定殖了55％的细胞，这显著多于所测试的乳杆菌属菌株(32％-52％)，l.rapi svt-24除外。乳杆菌属菌株的共接种和预接种二者都显著减少了aiec对ht29-mtx细胞系(图1)和caco-2细胞系(图2)二者的粘附。在所有情况下，预接种比共接种更大程度地降低了aiec的粘附。
150.还测量了乳杆菌属物种降低aiec侵入的能力。乳杆菌属菌株的共接种和预接种二者都显著减少了ht29-mtx细胞系中aiec的侵入，除了svt 06b1之外，大多数情况下预接种都在更大程度上降低了侵入(图3)。无论是共接种还是预接种，在caco-2细胞系中观察到aiec侵入不存在显著降低(数据未示出)。
151.如本实施例所示，在本研究中测试的六种乳杆菌属物种与两种不同的消化道上皮细胞系相互作用，显著降低aiec的粘附和侵入。将细胞系与乳杆菌预孵育，随后用这种病原体攻击，更有利于竞争性地排除aiec，这表明这些乳杆菌可用作预防措施。
152.实施例2-致病性大肠杆菌hmln-1的粘附、侵入和易位
153.使用与实施例1中描述相同的测定和程序，确定六种乳杆菌属菌株对致病性大肠杆菌菌株hmln-1的粘附和侵入的影响。hmln-1菌株从一名住院患者致命病例(fatal case)
的血液和肠系膜淋巴结中分离，并且已在许多出版物中被显示为专门的易位菌株。
154.此外，还评估了易位。具体地，使用双室模型来评估hmln-1细胞在存在乳杆菌属菌株的情况下跨越caco-2细胞和ht29-mtx细胞的易位能力。将细胞在补充有20％(v/v)fbs(对于caco-2细胞)和15％(v/v)fbs(对于ht29-mtx细胞)二者都与1％(v/v)的青霉素-链霉素组合的emem中生长到24孔板的具有多孔膜的插入物上。将细胞系培养至汇合，并且将培养基替换为无抗生素的emem培养基，然后接种细菌。在存在乳杆菌属菌株的情况下测试hmln-1易位的抑制，乳杆菌属菌株与hmln-1共接种或在hmln-1感染之前预接种。孵育之后，从外孔中采集100μl emem并接种到macconkey琼脂板上于37℃孵育24h，并且对细胞进行计数并表示为平均值
±
sem。
155.大肠杆菌jm109菌株用作粘附、侵入和易位测定的阴性对照。粘附和侵入以一式三份进行，并且易位以一式两份进行。
156.显示单独的或在存在乳杆菌属的情况下的大肠杆菌hmln-1粘附的ht29-mtx细胞和caco-2细胞的百分比示于图4中。用所有乳杆菌属菌株共接种和预接种二者都显示粘附至ht29-mtx细胞系的hmln-1细胞的百分比和数目的统计学上显著降低。乳杆菌属菌株的共接种和预接种二者都显著减少了hmln-1在ht29-mtx细胞系中的侵入(图5)。在大多数情况下，共接种和预接种二者中的两种细胞系中hmln-1的易位存在显著降低(图6)。
157.实施例3-在改进的消化道上皮模型中致病性大肠杆菌的粘附和侵入
158.通过分别以9与1的比例共培养caco-2细胞和ht29-mtx细胞，开发改进的消化道上皮模型。该模型具有许多类似于人类消化道上皮的特征。在该模型中测试乳杆菌属物种类谷糠乳杆菌、布氏乳杆菌、玉米乳杆菌、类干酪乳杆菌和l.diolivorans竞争性抑制两种致病性大肠杆菌菌株大肠杆菌aiec(f44a-1)和大肠杆菌hmln-1的粘附和侵入(和易位)的能力。
159.实验条件如在实施例1和2中描述的。
160.作为阳性对照，将大肠杆菌菌株aiec和hmln-1与共培养的caco-2细胞系和ht29-mtx细胞系一起孵育，并且以cfu/ml计测量粘附和侵入水平。作为阴性对照，将jm109大肠杆菌细胞替代aiec和hmln-1菌株与caco-2/ht29-mtx细胞一起孵育。测试的乳杆菌属物种与caco-2/ht29-mtx细胞连同大肠杆菌菌株共孵育，或者在添加大肠杆菌菌株之前与caco-2/ht29-mtx细胞预孵育。
161.当共接种和预接种时，所有乳杆菌属菌株的共培养细胞系上的hmln-1和aiec粘附百分比二者都存在统计学上显著降低(参见图7a错误！未找到引用源。)。然而，对于共接种和预接种二者，仅svt 04p1显示出每共培养细胞的hmln-1和aeic细胞粘附的统计学上显著降低(参见图7b)。当与所有乳杆菌属菌株共接种和预接种时，hmln-1侵入存在统计学上显著降低(参见图8)。与乳杆菌属菌株共接种和预接种时的hmln-1和aiec二者的易位当与阳性对照相比时存在统计学上显著降低(图9)。
162.实施例1、2和3中描述的结果显示，所研究的乳杆菌属菌株显示出对所有测试的胃肠样细胞系的良好粘附能力，并且在统计学上降低了致病性大肠杆菌菌株f44a-1(aiec)和hmln-1对所有细胞系的粘附。乳杆菌属菌株显著降低了aiec对ht29-mtx细胞系和共培养细胞系的侵入；降低了hmln-1对所有细胞系的侵入，并且显著降低了两种大肠杆菌菌株跨越所有测试细胞系的易位。结果表明，这些乳杆菌属菌株具有降低人类胃肠道中致病性大肠
杆菌感染和侵入血流的治疗潜力。
163.实施例4
–
dss诱发的结肠炎模型
164.然后，本发明人在右旋糖酐硫酸酯钠(dss)诱导的小鼠慢性结肠炎模型中检查了类干酪乳杆菌(svt04p1)、布氏乳杆菌(svt06b1)和玉米乳杆菌(svt08z1)的作用。dss来自mp biomedicals，储存于室温。基于所用的dss浓度(3％)和其间有两个7天的清除期的三个5天周期的dss施用，本研究中使用的模型是特别有效的严重慢性结肠炎模型。根据该方案施用3％dss的小鼠显示出结肠中溃疡、水肿、炎症和隐窝损失的明显组织病理学迹象(数据未示出)。
165.将60只雌性c57bl/6ntac小鼠分为6个治疗组：
166.·
第1组
–
非治疗组(阴性对照组)。n＝10。
167.·
第2组
–
3％dss 媒介物(9％无菌盐水)。n＝10。
168.·
第3组
–
3％dss 剂量为1.5
×
10
10
cfu/ml的svt04p1。n＝10。
169.·
第4组
–
3％dss 剂量为1.5
×
10
10
cfu/ml的svt06b1。n＝10。
170.·
第5组
–
3％dss 剂量为1.5
×
10
10
cfu/ml的svt08z1。n＝10。
171.·
第6组
–
3％dss 剂量为1.5
×
10
10
cfu/ml的svt04p1、svt06b1和svt04p1的组合。n＝10。
172.第2组至第6组的动物在第1天至第5天、第13天至第17天和第25天至第29天通过无菌饮用水自由接受3％的dss，而第1组的动物持续仅接受无菌水作为饮用水。第2组至第6组的动物在第1天至第28天还以1ml的剂量体积通过口服管饲接受媒介物或乳杆菌属(1.5
×
10
10
cfu/ml)。在没有向第2组至第6组提供dss的日子里，动物接受无菌水。乳杆菌属处于无菌盐水和2％-3％蔗糖中(储存于4℃直至使用)。给药之前，分析每种细菌制剂的细胞活力/计数。在给药的第1天，通过将dss溶解在无菌水中，新鲜制备3％dss溶液。
173.dss诱导的结肠炎的症状/特征(大便稠度和发生便血)通过从第1天至第29天每隔一天测量的生命终点来评估。在给药当天，评估在给药之后1至2小时进行。
174.从第1天开始收集每只小鼠的粪便，并且检查其稠度。大便稠度分级如下：正常＝0；软，但仍然形成＝1；非常软＝2；腹泻＝4。粪便中的便血使用hemoccult tape测试试剂盒(beckman coulter，根据制造商的说明)来检测。便血的评分如下：阴性hemoccult＝0；阳性hemoccult(条带上轻微的颜色)＝1；阳性hemoccult(条带上较深的颜色)＝2；可见的血迹＝3；直肠大出血＝4。还从第1天开始测量体重减轻百分比，分级为0(无)、1(1％-5％)、2(》5％-10％)和3(》10％-20％)。
175.大便稠度评分、便血发生评分和体重减轻评分被汇总，以给出总体疾病状态的加权生命评分，即疾病活动指数(dai)。
176.如图10中示出的，与第2组相比，治疗组3至6的小鼠大便稠度显著改善。与第2组相比，第3组、第4组和第6组的便血发生降低，最显著为治疗组6，所述治疗组6代表了svt-09、svt-23和svt-26的组合(图11)。与第2组相比，治疗组4和治疗组6的dai也被改善，同样最显著的为组合治疗组(第6组)(图12)。
177.在第29天时处死小鼠。终末血液样品显示，与对照组2相比，第3组、第5组和第6组中血清il-6浓度轻微减少，并且与对照组2相比，第3组和第5组中kc/gro(il-8的啮齿动物等价物)减少(数据未示出)。如表1中示出的，与对照组2相比，治疗组3至6中的每一组中还
存在结肠长度增加的趋势。
178.表1.结束时的结肠长度
179.组结肠长度，以mm计(sem)第1组94.6(1.34)第2组67.8(1.67)第3组70.6(1.34)第4组70.7(1.56)第5组70.1(2.15)第6组72.9(1.13)
180.临床上用于治疗炎性肠病(诸如溃疡性结肠炎)的许多治疗剂(包括环孢菌素a、柳氮磺胺吡啶和泼尼松龙)先前已在如本研究中使用的相同dss诱导的结肠炎模型中由相同的测试实验室(charles river laboratories(crl))进行了测试。，这些药物都没有在统计学上改善生命疾病评分达到本研究的乳杆菌属治疗中观察到的程度。例如，如本文显示的，将第6组的dai评分与crl获得的先前数据进行比较，该先前数据在dss鼠模型中评估了用于临床治疗溃疡性结肠炎的典型化合物的功效。柳氮磺吡啶、泼尼松龙、5-氨基水杨酸和6-硫代鸟嘌呤未能显示出治疗功效，而在慢性dss模型中，仅40mg/kg和80mg/kg的环孢菌素a显示出dai评分的一些减少，但不如本实施例的第6组有效(图13)。未示出5-氨基水杨酸和6-硫鸟嘌呤的数据。重要的是，选择的药物的功效在2％dss模型中测试，这是比本研究中使用的(3％dss)严重度更低的疾病模型。当与现有疗法相比时，本研究获得的结果代表了溃疡性结肠炎前瞻性治疗的显著进步。
181.实施例4a
182.如以上描述的，在dss诱导的溃疡性结肠炎模型中测试乳杆菌属菌株的另外的组合：
183.·
第7组
–
3％dss 剂量为1.5
×
10
10
cfu/ml的svt01d1、svt05p2和svt06b1的组合。n＝10
184.如以上对第1组至第6组描述的，确定第7组的便血发生、大便稠度和dai。图14中显示了与第1组、第2组和第6组(每组如实施例4描述的)相比的数据。观察到便血发生的统计学上显著的降低和dai的改善。
185.还测量了细胞因子表达。与第1组相比，在第2组中观察到il-6和tnfα的统计学上显著的增加。与第2组相比，在第6组和第7组中观察到il-6表达的降低，并且与第2组相比，在第6组和第7组中观察到tnfα表达的统计学上显著的降低(分别为p《0.001和p《0.05)(图15)。
186.分析结肠样品的总体溃疡程度，受任何炎性变化侵害的切片的百分比，受正常结构消失、糜烂/溃疡和/或隐窝脓肿的严重炎性变化侵害的切片的百分比，以及由每个结肠区段的三个单独评分之和计算的总综合评分。计算结肠样品的近端、中间和远端切片的每一个的评分。整个总体综合评分显示，与第2组相比，第7组的溃疡和炎症统计学上显著降低，并且观察到，第6组与第2组相比近端区段评分以及第7组与第2组相比远端区段评分的统计学上显著的降低(参见图16)。
187.实施例5
–
抑制病原体的生长
27853)和大肠杆菌k12生长的能力。这些病原体在营养琼脂中在需氧条件下于37℃生长。生长的抑制使用如以上描述的琼脂孔扩散测定来确定。此外，还测试了来源于乳杆菌属种培养物的无细胞上清液。简言之，培养24小时之后，将乳杆菌属的培养物以10,000
×
g离心，并且将上清液通过0.2μm膜过滤灭菌。将100μl无细胞上清液添加至包含病原体的孔中。结果示于下文表2和表3中。
194.表3.使用乳杆菌活培养物的抑制区域/生长降低区域(mm)。值是六个实验的平均值(来自三个重复中每个重复的两个读数)。读数包括9mm的孔直径。
[0195][0196]
表4.使用来源于乳杆菌培养物的无细胞上清液的抑制区域/生长降低区域(mm)。值是六个实验的平均值(来自三个重复中每个重复的两个读数)。读数包括9mm的孔直径。
[0197][0198]
实施例6
[0199]
一名45岁的男性因颞下颌关节失调症而经历周期性但明显的下颌疼痛。受试者每天将2ml的包含布氏乳杆菌lb23的液体制剂置于舌下，然后吞咽。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％的蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。4至5天之后，疼痛已经减轻，并且没有经历进一步的不适。
[0200]
实施例7
[0201]
一名61岁的女性抱怨持续的肠道问题，包括刺激、疼痛、胀气以及结肠和直肠炎症。受试者每天口服摄入2ml的包含玉米乳杆菌lz26的液体制剂。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％的蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。3至4天之后，肠道问题有所改善，并且所有症状都被减轻。受试者持续使用该制剂，并且发现在采取治疗时经历了最小的消化问题。
[0202]
实施例8
[0203]
一名19岁的男性多年来一直罹患中度至重度面部痤疮，使用局部乳膏和抗生素仅取得轻微成功。受试者使用包含类干酪乳杆菌lp9的液体制剂每天在面部区域涂抹(rub)约1ml。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％的蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。一周之后，丘疹的数目和尺寸减少，并且特别是与肿胀和发炎区域相关的疼痛被极大地降低。受试者评论说，在治疗期间，有斑点(blemished)和疼痛的区域不明显得
多。
[0204]
实施例9
[0205]
一名48岁的男性因多年从事竞技和社交足球和网球而罹患右膝疼痛。疼痛不频发，但总是发生在大量使用关节之后，并且伴有明显的炎症。每次出现炎症和疼痛时，受试者每天将2ml的包含布氏乳杆菌lb23、玉米乳杆菌lz26和类干酪乳杆菌lp9的组合物的液体制剂置于舌下数分钟，然后吞咽。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。在2-3天内，膝盖周围的疼痛和肿胀开始减少，并且受试者通常可以行走和移动膝盖，而没有任何大的疼痛或不适。
[0206]
实施例10
[0207]
一名56岁的男性经历了几年明显的胃肠不适，与此同时，他正在东南亚地区进行广泛的旅行。受试者遭受反复腹部痉挛，偶尔恶心，并且bristol粪便评分为6-7。建立了治疗方案，包括每天两次2.5ml 1
×
107cfu/ml剂量的类干酪乳杆菌lp9液体制剂。治疗后三天，受试者报告胃肠症状明显改善。受该改善的鼓舞，受试者选择在方案中包括每天一次5ml剂量的2.5
×
109布氏乳杆菌lb23。2周治疗之后，受试者的bristol粪便评分提高至4分，报告的胃肠不适可以忽略不计。
[0208]
实施例11
[0209]
一名62岁的女性患有中度骨关节炎，主要位于膝盖和手关节中。她的医生推荐的管理方法是按需使用扑热息痛。然而，受试者仍然经历明显的僵硬和活动能力丧失，尤其是手指。口服摄入5
×
109cfu/ml类谷糠乳杆菌lp18的液体制剂。剂量方案为每天一次摄入5ml。治疗一周后，受试者注意到受影响关节的疼痛和肿胀有明显改善。治疗方案升级为1
×
109cfu/ml的10ml lactobacillus diolivorans ld03、玉米乳杆菌lz26和类谷糠乳杆菌lp18的液体制剂。一个月的组合治疗之后，受试者经历显著较少的关节僵硬，报告手指活动能力基本恢复，并且膝关节疼痛减少。
[0210]
实施例12
[0211]
一名80岁的男性罹患严重的膝关节骨关节炎，导致活动能力丧失且生活质量恶化。受试者一直在医生的指导下使用非甾体抗炎药(nsaid)来管理其状况。试验了每天一次口服摄入15ml 1
×
109cfu/ml类谷糠乳杆菌lp18的液体制剂的治疗。治疗四周之后，受试者经历较少的膝盖疼痛和肿胀，并且能够再次进行短距离散步。受试者包括第二次15ml 2.5
×
107cfu/ml每天剂量的组合制剂；类谷糠乳杆菌lp18、玉米乳杆菌lz26和lactobacillus rapi lr24。两周的组合治疗产生了持续的改善，并且受试者能够恢复每周几次的轻度园艺。
[0212]
实施例13
[0213]
一名25岁的女性罹患衰弱性乳腺炎，伴有明显的疼痛和肿胀，并且令她痛苦的是，无法母乳喂养她的新生儿。受试者持续连续7天每天早上口服5ml包含1
×
108cfu/ml类干酪乳杆菌lp9的液体制剂。她的症状改善，这样在另外的7天里，她将剂量增加至每天10ml，并且注意到她的状况进一步改善。两周治疗后，受试者感觉她的乳腺炎得到了显著改善，并且此外令她高兴的是，她能够继续母乳喂养她的新生儿。
[0214]
实施例14
[0215]
一名35岁的女性罹患类风湿性关节炎，每周接受20mg甲氨蝶呤的治疗方案，遭受
数次其近端指间关节肿胀的频繁发作(flare-up)。除了其现有的治疗之外，受试者还口服了10ml包含1
×
109cfu/m玉米乳杆菌lz26的液体制剂，每天两次，持续几周。大约两周之后，受试者注意到目前受影响的关节中的疼痛和肿胀降低，并且一个月治疗后，注意到没有另外的发作。受试者觉得附加的微生物治疗有助于稳定其状况。
[0216]
实施例15
[0217]
一名多年来一直报告有慢性腹痛和不适的27岁的女性被给予包含布氏乳杆菌lb23的液体制剂。该制剂包括在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。在持续连续7天每天早上吃早餐时服用10ml之后，她报告在第4天之后其症状显著改善。她还报告在第7天时的无痛日。
[0218]
实施例16
[0219]
一名由泰国4周公路旅行归来的19岁男性报告他回家后反复腹泻发作。提供了一种液体制剂，其包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的106至108cfu/ml的微生物菌株布氏乳杆菌lb23、玉米乳杆菌lz26和类干酪乳杆菌lp9的组合(储存于4℃直至使用)。他服用3ml，每天三次，并且在第二天观察到他的状况改善。他在第四天时完全恢复。
[0220]
实施例17
[0221]
一名在其食用当地的鱼和薯条之后罹患食物中毒的55岁的妇女被给予单个剂量(35ml)的在无菌盐水和2％-3％蔗糖中以约108cfu/ml配制的lactobacillus diolivorans ld03的液体制剂(储存于4℃直至使用)。她报告，在治疗后10小时，她的症状显著改善，并且第二天恢复至正常的消化运输(digestive transit)。
[0222]
实施例18
[0223]
一名18岁的男性报告经历中度寻常痤疮持续大约一年，报告在任何时候都有50-80个病灶(粉刺[～60]和炎性病灶[～20]的组合)，这些病灶非常红且疼痛。他曾试图通过使用非处方痤疮洗面奶、乳膏和凝胶来降低病变数目，但收效甚微且皮肤变得干燥。他首先开始通过喷雾应用(在盐水/蔗糖载体中每ml 5次喷雾)应用1ml的1
×
108cfu/ml浓度的类干酪乳杆菌lp9，使他能够覆盖其整个面部表面。他每天在清洁之后应用两次细菌，并且在7天之后开始注意到炎性病灶和粉刺二者降低，发红和疼痛明显降低。他在第7天报告大约10个炎性病灶和40个粉刺，在第14天进一步降低至5个炎性病灶和25个粉刺。在第14天之后，他将布氏乳杆菌lb23和玉米乳杆菌lz26以1
×
108cfu/ml分别添加至类干酪乳杆菌中，并且持续在另外的14天每天两次应用喷雾(每次应用1ml)。在第28天，他报告存在5个粉刺，并且没有炎性病灶。在28天时间期间，他没有使用任何痤疮软乳膏或凝胶，并且仅用他常用的洗面奶洗脸。
[0224]
实施例19
[0225]
一名23岁的女性报告，从15岁开始经历中度痤疮，症状越来越严重。她被她的妇科医生诊断为患有子宫内膜异位症伴随月经不规律和疼痛。她已经服用口服避孕药4年了，但报告她的痤疮症状没有改善。在她的全科医师的建议下，她已经服用了一个疗程的四环素，并且在每个疗程持续14天服用抗生素的同时注意到她的皮肤有所改善，但是当她完成疗程后，她的痤疮症状再次出现。此外，她经历了中度胃肠紊乱，诸如胀气和痉挛伴随腹泻，这使她无法继续进行这种治疗。她最初开始在清洁之后每天两次应用在盐水/蔗糖的载体中的1ml的玉米乳杆菌lz26(1
×
109cfu/ml)，总计5次喷雾(1ml)以覆盖她的面部表面。在治疗之
前，她报告大约80个粉刺(开放和闭合)和30个炎性病灶，这些都是红色且疼痛的。应用7天之后，她注意到病灶计数降低，大约50个粉刺和20个病灶。她每周持续报告她的皮肤的改善，同时继续应用lz26持续另外49天(总计8周)。到了第56天，她报告最少的粉刺(10个)，并且没有炎性病灶。
[0226]
实施例20
[0227]
一名45岁的男性一直在经历脚趾之间的复发性癣(脚癣)，主要在每只脚的中趾、四趾和小趾之间。受试者连续三天每天将～1ml的包含布氏乳杆菌lb23的液体制剂置于感染区域的表面。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约106至108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。3天之后症状已经改善，并且5天之后真菌感染已经消失。
[0228]
实施例21
[0229]
一名44岁的男性在其下背部患有癣(ringworm)真菌感染，这是在健身房的公共冲击垫上训练的结果。受试者连续三天每天将～1ml的包含玉米乳杆菌lz26的液体制剂置于感染区域的表面。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约大约1
×
108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。5天之后，真菌感染已经消失。
[0230]
实施例22
[0231]
一名44岁的女性在其右脚大脚趾的趾甲上出现早期趾甲真菌的迹象。受试者连续五天每天将～1ml的包含玉米乳杆菌lz26的液体制剂置于感染区域的表面。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约大约1
×
108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。5天之后，真菌感染的直接迹象已经消失，并且趾甲能够随着时间的推移自然愈合并正常生长。
[0232]
实施例23
[0233]
一名48岁的男性，从六个月大时就被诊断为患有特应性皮炎(ad)，其平均处于中度严重程度，偶尔在有压力时变得严重。皮炎病灶极度干燥、发红且非常痒(瘙痒)，引起了足够的不适，严重影响了他的睡眠质量。他目前正在专业的皮肤科医师的医疗护理下，该皮肤科医师已开处局部皮质类固醇治疗急性炎性发作，特别是肘前窝和腘窝二者上并且有时其躯干上的急性炎性发作。ad影响他身体的大约30％。他从儿童期就间歇地使用局部皮质类固醇。他已经接受了广泛的抗生素疗程(口服和局部二者)，以治疗持续的金黄色葡萄球菌感染。他的日常方案包括用无皂qv洁面乳清洁，并且每天两次在他的躯干和四肢涂抹qv flare up乳膏。尽管他坚持推荐的医学治疗，但他持续经历中度症状，特别是当他在工作中经历压力发作以及春季和夏季的湿热情况时。他继续每天两次应用在盐水/蔗糖载体中的包含类干酪乳杆菌lp9的制剂，每次0.2ml喷雾覆盖大约20cm2的面积，并且每次应用处理的总面积高达200cm2。每个0.2ml喷雾包含1
×
109cfu。在此时间期间，他避免将qv乳膏应用在治疗部位。5天治疗之后，他注意到他的病灶的严重程度明显改善，其中发红和瘙痒降低了大约30％，并且他还已经注意到由于抓挠减少，他的睡眠质量已经改善。在应用类干酪乳杆菌lp9的另外14天之后，他报告他的皮肤状况显著改善，并且将他的ad病灶的严重程度评定为非常轻微，没有明显的金黄色葡萄球菌感染迹象。他已经经历了病灶发红、干燥和瘙痒降低高达80％。
[0234]
实施例24
[0235]
50岁的女性在30岁的年龄时被诊断为患有银屑病。强烈的红色鳞状皮肤斑块主要
影响她的发际线、颈背和耳后，斑块影响她的肘部。她通常使用局部皮质类固醇来降低炎性发作，已经经历过许多需要局部和口服抗生素二者的金黄色葡萄球菌感染。她通常向受影响的区域应用qv软膏。她继续将布氏乳杆菌lb23应用在她的发际线、颈背和耳后的斑块上，每天两次，剂量为1
×
109cfu/0.2ml喷雾，每次喷雾覆盖20cm2的面积。她每天两次应用总计8次喷雾。在第7天结束时，她注意到她耳后的斑块已经完全消失，而她发际线和颈部上的斑块的严重程度降低了约50％。她持续应用布氏乳杆菌lb23持续另外14天，此时所有斑块都已经消失，仅残留发红。
[0236]
实施例25
[0237]
一名39岁的女性罹患多种与过量链球菌属细菌相关的健康并发症，包括复发性链球菌性咽喉炎、扁桃体炎、口臭和胃肠不适。受试者连续五天每天吞咽～1-2ml的包含玉米乳杆菌lz26的液体制剂，并且然后连续两周每隔一天受试者将2ml的包含布氏乳杆菌lb23、玉米乳杆菌lz26和类干酪乳杆菌lp9的组合物的液体制剂置于舌下持续几分钟，然后吞咽。该制剂包含在无菌盐水和2％-3％蔗糖中的约大约108cfu/ml的微生物菌株(储存于4℃直至使用)。受试者报告在治疗时间期间咽喉疼痛降低，口臭改善，并且胃肠功能改善。
[0238]
实施例26
[0239]
一名45岁的女性被诊断为患有幽门螺杆菌感染。在开始用类干酪乳杆菌lp9和玉米乳杆菌lz26的组合治疗之前，对受试者进行的
14
c尿素呼气测试返回了每分钟1356次分解(disintegration)(dpm)的结果，这是胃中存在幽门螺杆菌的高度阳性结果。受试者开始一个治疗疗程，每天口服施用总浓度为2
×
108cfu/ml的10ml类干酪乳杆菌lp9和玉米乳杆菌lz26，持续一个月。在此时间结束时，
14
c尿素呼气测试返回了654dpm的结果，降低多于50％。
[0240]
保藏详情
[0241]
根据布达佩斯条约保藏的生物材料的详细情况已经在说明书中在前文提供。总之：
[0242]
根据布达佩斯条约，类谷糠乳杆菌svt-18于2019年2月27日以登录号lmg p-31292保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000(8,rue de la science b-1000,brussels,belgium)。
[0243]
根据布达佩斯条约，布氏乳杆菌svt-23于2019年2月27日以登录号lmg p-31293保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000。
[0244]
根据布达佩斯条约，玉米乳杆菌svt-26于2019年2月27日以登录号lmg p-31295保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000。
[0245]
根据布达佩斯条约，l.rapi svt-24于2019年2月27日以登录号lmg p-31294保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000。
[0246]
根据布达佩斯条约，类干酪乳杆菌svt-09于2019年2月27日以登录号lmg p-31290保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000。
[0247]
根据布达佩斯条约，lactobacillus diolivorans svt-03于2019年2月27日以登录号lmg p-31287保藏在比利时微生物协调保藏中心(bccm)，比利时微生物协调保藏中心(bccm)联邦公共规划服务科学政策，比利时布鲁塞尔科学街8号b-1000。