一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法及应用与流程

技术特征：
1.一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分离：将蓝莓花青素粗提物通过大孔树脂进行湿法上柱，静置吸附，然后用蒸馏水洗脱，采用苯酚-硫酸法进行多糖检测，直至洗脱溶液无糖组分流出，再将蓝莓多糖洗脱液进行浓缩，获得蓝莓多糖浸膏；(2)醇沉：用热蒸馏水将步骤(1)的蓝莓多糖浸膏溶解，然后在搅拌状态下加入乙醇，静置过夜后，过滤，收集沉淀；(3)除杂：先用热蒸馏水将步骤(2)的沉淀溶解成多糖溶液，然后用活性炭对溶液脱色，离心过滤，得多糖上清液，再用木瓜蛋白酶对多糖上清液脱蛋白，离心过滤，取上清液，得到蓝莓多糖半成品；(4)纯化：将步骤(3)的蓝莓多糖半成品湿法上样于deae-cellμlosede-52型大孔树脂，用四种不同浓度的溶液通过柱层析色谱法进行梯度洗脱，分别收集各流分，利用苯酚-硫酸法跟踪检测洗脱液，直至无糖分流出，然后将各流分分别用蒸馏水进行透析，透析袋内液分别减压浓缩并真空冷冻干燥，得到fr-a1、fr-a2、fr-a3、fr-a4四种分离纯化的蓝莓多糖。2.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(1)，所述蓝莓花青素粗提物与树脂的质量按照1：30湿法上柱，洗脱时间为60～65min；浓缩的温度为63～68℃。3.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(2)，所述蒸馏水的温度为60～65℃；乙醇的质量分数为90％；所述静置过夜的温度为4℃；过滤是常压过滤。4.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(3)，所述活性炭与多糖溶液的质量比＝1：1，脱色时间为120～130min。5.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(3)，所述无色多糖溶液与木瓜蛋白酶的质量比＝50000～50500：1，脱蛋白的温度为50～55℃，时间为120～130min。6.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(3)，所述离心过滤的转速为8000～8500r/min，离心时间为5min。7.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(4)，所述四种不同浓度的溶液分别是浓度为0mol/l、0.1mol/l、0.3mol/l、0.5mol/l的nacl溶液。8.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(4)，所述梯度洗脱时溶液的流速为1.8～2.2ml/h。9.根据权利要求1所述的一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，其特征在于：在步骤(4)，所述减压浓缩的温度为50℃；所述真空冷冻干燥的温度为-55～-50℃，真空度为0～100pa。10.一种如权利要求1～9任一项所述的绿色分离纯化方法制得的蓝莓多糖在制备抗氧化药物、保健品或食品中的应用。

技术总结
本发明公开了一种蓝莓多糖的绿色分离纯化方法，包括以下步骤：将蓝莓花青素粗提物通过大孔树脂进行湿法上柱，静置吸附，用蒸馏水洗脱，多糖检测，浓缩，用热蒸馏水溶解，搅拌下加乙醇，静置过夜，过滤收集沉淀，溶解成多糖溶液，再经脱色、离心过滤、脱蛋白、离心过滤，取上清液，湿法上样大孔树脂，用四种不同浓度的溶液通过柱层析色谱法进行梯度洗脱，分别收集各流分，分别用蒸馏水进行透析，透析袋内液分别减压浓缩并真空冷冻干燥，得到Fr-A1、Fr-A2、Fr-A3、Fr-A4四种分离纯化的蓝莓多糖。本申请方法分离纯化后得到的蓝莓多糖纯净度高，方法简单不复杂，分离纯化后产品没有有机物残留，产品品质得到了提高。产品品质得到了提高。


技术研发人员：李冰晶 罗丽平 王代波 赵景芳 刘国华 封天洪
受保护的技术使用者：贵州省生物研究所
技术研发日：2021.03.19
技术公布日：2022/3/10