一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的ICP-MS检测方法与流程

一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法
技术领域
1.本发明属于药物分析检测领域，具体涉及一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，尤其涉及一种回收率高的含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法。


背景技术：

2.药品中的元素杂质可能有多个来源，可以在合成中有意添加，或者通过与生产设备的相互作用，或通过药品的组分存在，因此可在药品中被检测到。由于元素杂质不能给患者提供任何治疗益处，所以药品中元素杂质尤其是重金属元素的含量应该被控制在可接受的限度。
3.电感耦合等离子质谱法(icp-ms)是一种抗干扰能力强、检测灵敏度高、分析速度快、消耗样品量少、动态线性范围宽的检测方法，常用于检测样品中含量稀少的元素杂质。但对于高盐样品而言，存在基质效应导致检测结果忽高忽低的情况时有发生，严重影响了检测效果。
4.cn103364482b公开了一种微波消解icp-ms测定药用铝箔中铅含量的方法，包括如下步骤：1)吸取浓度为100μg
·
ml-1
的铅标准溶液适量至50ml容量瓶中，加入4ml硝酸，用去离子水分别稀释制成每1ml含铅分别为0、10ng、20ng、50ng、100ng的溶液；2)取剪碎的药品包装用铝箔样品并称量重量，置于聚四氟乙烯消解内罐中，加入水1ml，消解用酸4ml，在110℃中预消20min，密闭罐盖，转至消解炉中；在微波工作站中进行消解；消解完成后，罐内温度冷却至室温，压力降至0.1mpa以下，将消解液转移到50ml容量瓶中，用超纯水少量多次清洗内罐，清洗液合并至容量瓶中，定容至刻度；然后在约85℃水浴中加热60min，离心处理，并将上清液用于icp-ms分析。该发明可以快速、准确地测定药品包装用铝箔中的铅含量。但其并未涉及对于高盐样品的检测。
5.cn102692470b公开了一种测定含雄黄的药物中可溶性砷含量的方法包括步骤：(1)用仿生溶剂-超声处理和/或磁力搅拌提取含雄黄的药物中的可溶性砷；(2)可选的对步骤(1)提取得到的溶液进行净化；(3)icp-ms法测定含雄黄的药物中可溶性砷的含量。该发明通过采用模拟体内的提取方式以及采用icp-ms和hplc-icp-ms建立了雄黄药效和毒性主要成分的测定方法，该方法灵敏、准确。但其同样未涉及对高盐样品的检测过程。
6.由于icp-ms对于高盐含量的样品检测存在一定的不准确性，而药品中元素杂质尤其是重金属元素的含量的检测又是至关重要的质量控制内容。因此，如何提供一种准确性高的高盐含量样品中元素杂质含量的检测方法，成为了亟待解决的问题。


技术实现要素：

7.针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，尤其提供一种回收率高的含高盐基质的结合雌激素原料
药中元素杂质的icp-ms检测方法。本发明提供的检测方法具有专属性强，分析快速，抗干扰性强，灵敏度高，回收率高的优点。
8.为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
9.本发明提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，所述检测方法包括以下步骤：将结合雌激素原料药与消解剂混合消解，之后稀释得到供试品溶液；将标准对照品与经过消解的雌激素原料药混合稀释，得到对照品溶液；将供试品溶液和对照品溶液采用icp-ms分别检测，计算其中元素杂质含量。
10.上述方法通过将标准对照品与经过消解的雌激素原料药混合得到对照品溶液，在检测时能够减少高盐基质对检测结果的影响，使检测结果更精确，抗干扰性强，回收率高。
11.优选地，所述消解剂包括硝酸、盐酸或双氧水中任意一种或至少两种的组合，例如硝酸和盐酸的组合、硝酸和双氧水的组合或盐酸和双氧水的组合等，但不限于以上所列举的组合，上述组合范围内其他未列举的组合同样适用。
12.上述特定消解剂能够将供试品充分消解，提高检测准确度；
13.优选地，所述消解剂包括硝酸、盐酸或双氧水中至少两种的组合，优选硝酸和盐酸的组合、硝酸和双氧水的组合。
14.上述特定消解剂的组合进一步提高了检测的准确度。
15.优选地，所述供试品溶液以质量百分比计包括结合雌激素0.05-0.15％、硝酸0.1-0.5％、双氧水0-0.3％、盐酸0-0.3％和水。
16.其中结合雌激素的含量可以是0.05％、0.06％、0.7％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％或0.15％等，硝酸的含量可以是0.1％、0.2％、0.3％、0.4％或0.5％等，双氧水的含量可以是0％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％或0.3％等，盐酸的含量可以是0％、0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％或0.3％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
17.优选地，所述消解的具体流程为：将结合雌激素原料药与消解剂混合物第一次升温并保温，之后第二次升温并保温。
18.优选地，所述第一次升温至温度为110-130℃，保温的时间为4-6min。
19.优选地，所述第二次升温至温度为180-200℃。
20.优选地，总保温时间为0.5-1.5h。
21.上述特定消解参数及消解流程能够将待测样品充分消解，提高检测的准确度和回收率。
22.所述标准对照品包括镉、铅、砷、汞、钴、钒或镍中任意一种或至少两种的组合，例如镉和铅的组合、铅和砷的组合或汞和钴的组合等，但不限于以上所列举的组合，上述组合范围内其他未列举的组合同样适用。
23.其中，第一次升温至温度可以是110℃、112℃、114℃、116℃、118℃、120℃、122℃、124℃、126℃、128℃或130℃等，保温的时间可以是4min、4.5min、5min、5.5min或6min等，第二次升温至温度可以是180℃、182℃、184℃、186℃、188℃、190℃、192℃、194℃、196℃、198℃或200℃等，总保温时间可以是0.5h、0.6h、0.7h、0.8h、0.9h、1h、1.1h、1.2h、1.3h、1.4h或1.5h等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
24.优选地，所述元素杂质包括镉、铅、砷、汞、钴、钒或镍中任意一种或至少两种的组
合，例如镉和铅的组合、铅和汞的组合或钴和镍的组合等，但不限于以上所列举的组合，上述组合范围内其他未列举的组合同样适用。
25.优选地，所述icp-ms检测的元素杂质为铅时采用ked模式(动能歧视模式)。
26.优选地，所述高盐基质包括硫酸盐，所述高盐基质在原料药中的质量分数为1-3％，例如1％、1.5％、2％、2.5％或3％等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。
27.与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
28.本发明提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，通过将标准对照品与经过消解的雌激素原料药混合得到对照品溶液，在检测时能够减少高盐基质对检测结果的影响，使检测结果更精确，抗干扰性强，回收率高；采用特定消解剂能够将供试品充分消解，提高检测准确度。
具体实施方式
29.为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
30.以下示例中，结合雌激素原料药购自于南通联科药业有限公司。
31.实施例1
32.本实施例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤如下：
33.(1)仪器与条件
34.电感耦合等离子体质谱(icp-ms)：perklinelmer,型号：nexion 2000b
[0035][0036]
停留时间(dwell time)：50.0ms。
[0037]
(2)实验步骤
[0038]
空白溶液的配制：
[0039]
取65％质量分数硝酸3ml和30％质量分数双氧水2ml，置聚四氟乙烯消解瓶中，盖紧。
[0040]
置微波消解仪中，按以下程序进行消解：第15分钟升温至120℃，保持5分钟；第20分钟升温至180℃，保持20分钟。
[0041]
冷却至室温，将消解液转移至50ml量瓶中，将聚四氟乙烯消解瓶用水润洗至少2次，润洗液合并至上述50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为空白贮备液。
[0042]
精密量取空白贮备液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为空白溶液。
[0043]
供试品溶液的配制：
[0044]
取结合雌激素原料药1g，置聚四氟乙烯消解瓶中，用氮气吹干，向固体残渣中，加入65％质量分数硝酸3ml和30％双氧水2ml，盖紧。
[0045]
置微波消解仪中，按以下程序进行消解：第15分钟升温至120℃，保持5分钟；第20分钟升温至180℃，保持20分钟。
[0046]
冷却至室温，将消解液转移至50ml量瓶中，将聚四氟乙烯消解瓶用水润洗至少2次，润洗液合并至上述50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为供试品贮备液。
[0047]
精密量取供试品贮备液5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为供试品溶液。
[0048]
对照品溶液的配制：
[0049]
取市售各元素杂质对照品溶液，加水稀释至目标浓度(镉：12.5ng/ml，铅：12.5ng/ml，砷：37.5ng/ml，汞：75ng/ml，钴：125ng/ml，钒：250ng/ml，镍：500ng/ml)。此为混合对照品贮备液。
[0050]
精密量取供试品贮备液5ml，混合对照品贮备液4ml，置同一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为对照品溶液。
[0051]
使用电感耦合等离子体质谱分别测定空白溶液、对照品溶液和供试品溶液，计算供试品中元素杂质含量。
[0052]
按以下公式计算各元素含量：
[0053]
元素含量(ppm)＝ru/(rs-ru)
×
(cs/cu)
[0054]
其中，
[0055]
ru：供试品溶液中元素的响应值(经空白溶液校正)；
[0056]
rs：对照品溶液中元素的响应值(经空白溶液校正)；
[0057]
cs：对照品溶液中标准加入的各元素的浓度，以ng/ml计；
[0058]
cu：供试品溶液的浓度，以mg/ml计。
[0059]
测定结果
[0060]
结合雌激素原料药中各重金属元素杂质含量：
[0061][0062]
实施例2
[0063]
本实施例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤如下：
[0064]
(1)仪器与条件
[0065]
与实施例1一致
[0066]
(2)实验步骤
[0067]
空白溶液的配制：
[0068]
取3ml混合酸(体积比硝酸:盐酸＝3:1，硝酸质量分数65％，盐酸质量分数36％)，置聚四氟乙烯消解瓶中，盖紧。
[0069]
置微波消解仪中，按以下程序进行消解：第15分钟升温至120℃，保持5分钟，第20分钟升温至190℃，保持40分钟。
[0070]
冷却至室温，将消解液转移至20ml量瓶中，将聚四氟乙烯消解瓶用水润洗至少2次，润洗液合并至上述20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为空白贮备液。
[0071]
精密量取空白贮备液2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为空白溶液。
[0072]
供试品溶液的配制：
[0073]
取结合雌激素原料药适量，使用旋蒸仪蒸干，取干品粉末100mg，置消加入3ml混合酸(体积比硝酸:盐酸＝3:1，硝酸质量分数65％，盐酸质量分数36％)，盖紧。
[0074]
置微波消解仪中，按以下程序进行消解：15分钟升温至120℃，保持5分钟；20分钟升温至180℃，保持20分钟。
[0075]
冷却至室温，将消解液转移至20ml量瓶中，将聚四氟乙烯消解瓶用水润洗至少2次，润洗液合并至上述20ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为供试品贮备液。
[0076]
精密量取供试品贮备液2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。此为供试品溶液。
[0077]
线性对照品溶液的配制：
[0078]
取市售各元素杂质对照品溶液，加水稀释至目标浓度(镉：12.5ng/ml，铅：12.5ng/ml，砷：37.5ng/ml，汞：75ng/ml，钴：125ng/ml，钒：250ng/ml，镍：500ng/ml)，作为对照品贮备液。
[0079]
精密量取供试品贮备液2ml，对照品贮备液适量，置同一100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按照此法配制一系列线性对照品溶液(对照品贮备液体积分别为2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，范围包括限度的50％-150％)。
[0080]
使用电感耦合等离子体质谱分别测定空白溶液、各对照品溶液和供试品溶液，结果如下：
[0081][0082]
实施例3
[0083]
本实施例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤中，除将双氧水替换为等体积的硝酸(质量分数65％)外，其余与实施例1一致。
[0084]
结果如下：
[0085][0086]
实施例4
[0087]
本实施例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤中，除将硝酸和双氧水替换为等体积的盐酸(质量分数36％)外，其余与实施例1一致。
[0088]
结果如下：
[0089][0090]
实施例5
[0091]
本实施例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤中，除消解程序为：第20分钟升温至180℃，保持20分钟外，其余与实施例1一致。
[0092]
结果如下：
[0093][0094]
对比例1
[0095]
本对比例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤中除对照品溶液配制方法如下：取市售各元素杂质对照品溶液，加水稀释至目标浓度(镉：12.5ng/ml，铅：12.5ng/ml，砷：37.5ng/ml，汞：75ng/ml，钴：125ng/ml，钒：
250ng/ml，镍：500ng/ml)。此为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液4ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，此为对照品溶液外，其余与实施例1一致。
[0096]
结果如下：
[0097][0098]
对比例2
[0099]
本对比例提供了一种含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，具体步骤中除对铅的检测采用标准模式(standard)外，其余与实施例2一致。
[0100]
结果如下：
[0101][0102]
方法学考察：
[0103]
回收率：
[0104]
对实施例1-5和对比例1的检测方法，考查了三种浓度水平下(限度的50％、100％和150％)的回收率，结果如下：
[0105][0106]
[0107][0108][0109][0110][0111]
[0112][0113]
以上数据显示，本发明提供的方法回收率好，符合限度要求(平均回收率：70％-150％，rsd：不得大于20％)；比较实施例1和对比例1可以发现，本发明通过将标准对照品与经过消解的雌激素原料药混合得到对照品溶液，在检测时能够减少高盐基质对检测结果的影响，使检测结果更精确，抗干扰性强，提高了回收率；比较实施例1-5可以发现，本发明通过采用特定的消解剂和消解程序，能够提高消解的程度，减少消解不完全造成的不确定性，提高了检测方法的回收率。
[0114]
重复性：
[0115]
将上述各实施例1-5和对比例1的方法，分别配制六份100％限度水平回收率溶液，计算rsd值，汇总如下：
[0116][0117]
以上结果表明本发明提供的方法具有优秀的重复性，符合限度要求(rsd：不得大于20％)；比较实施例1-5可以发现，本发明通过采用特定的消解剂和消解程序，能够提高消解的程度，减少消解不完全造成的不确定性，提高了检测方法的重复性。
[0118]
精密度：
[0119]
将上述各实施例1-5和对比例1的方法，由两位实验员在不同的工作日分别配制六份100％限度水平回收率溶液并测定，计算12份回收率结果的rsd值，汇总如下：
[0120]
[0121][0122]
以上结果表明本发明提供的方法具有优秀的精密度，符合限度要求(rsd：不得大于25％)；比较实施例1-5可以发现，本发明通过采用特定的消解剂和消解程序，能够提高消解的程度，减少消解不完全造成的不确定性，提高了检测方法的精密度。
[0123]
线性：
[0124]
对实施例2和对比例2提供的检测方法中铅元素的线性进行考察，结果如下：
[0125][0126]
以上结果表明，本发明通过采用ked模式对铅元素进行检测，相比标准模式显著提高了检测的线性，提高了检测的准确度。
[0127]
以上结果表明本发明提供的检测方法能够对含高盐基质的结合雌激素原料药中的元素杂质进行有效地检测；比较实施例1-4可以发现，本发明通过选择特定的消解剂的组合，进一步提高了消解的效果，进而提高了检测结果的准确度；比较实施例1和5可以发现，本发明通过采用特定消解程序，进一步提高了消解的效果，进而提高了检测结果的准确度；比较实施例1和对比例1可以发现，本发明通过将供试品与标准品混合制备得到对照品溶液，能够降低高盐基质供试品的干扰，提高检测的准确度和回收率；比较实施例2和对比例2可以发现，本发明通过采用ked模式检测铅元素，可以提高铅元素的线性，提高检测的准确度。
[0128]
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的含高盐基质的结合雌激素原料药中元素杂质的icp-ms检测方法，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
[0129]
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0130]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。