使用整联蛋白激动剂的改进培养方法与流程

技术特征：
1.一种用于培养上皮干细胞或包含上皮干细胞的类器官的方法，其中所述方法包括在适用于上皮干细胞的培养基中培养所述上皮干细胞，其中所述培养方法还包括使所述细胞或类器官与整联蛋白激动剂接触。2.如权利要求1所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂与整联蛋白的β亚基相互作用，任选地其中所述β亚基是β1、β2、β3或β7。3.如权利要求2所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂与β1亚基相互作用。4.如权利要求1所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂与整联蛋白的α亚基相互作用。5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂选自抗整联蛋白抗体、踝蛋白、kindlin蛋白、二硫苏糖醇和氧固醇25-羟基胆固醇。6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂是抗整联蛋白抗体，任选地其中所述抗整联蛋白抗体是：jbs2、hp1/3、snaka51、pts25-2、pmi-1、mem-83、nki-l16、496b、12g10、8a2、ts2/16、15/7、huts-4、8e3、n29、9eg7、mab 24、mem-148、kim127、cbr lfa-1/2、mem-48、kim185、ap3、ap5、libs6、libs2、10f8、2b8、2g3。7.如权利要求6所述的方法，其中所述抗整联蛋白抗体是ts2/16、12g10、8a2、15/7、huts-4、8e3、n29或9eg7，进一步任选地其中所述抗整联蛋白抗体是ts2/16、12g10、huts-4或8a2，进一步任选地其中所述抗整联蛋白抗体是ts2/16、12g10、huts-4。8.如权利要求6或权利要求7中任一项所述的方法，其中所述抗体是人源化的。9.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述整联蛋白激动剂是：a.踝蛋白，任选地，其中所述踝蛋白与kindlin蛋白组合使用；b.还原剂，诸如二硫苏糖醇；或c.脂质，诸如氧固醇25-羟基胆固醇。10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述方法导致a.类器官的生长；和/或b.相对于不使用所述整联蛋白激动剂的相同方法，4天内上皮干细胞生长至少增加10％、20％、50％。11.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括培养与细胞外基质接触的所述细胞，任选地其中所述细胞外基质是基底膜提取物或matrigel。12.如任一前述权利要求所述的方法，其中所述方法还包括培养与合成基质接触的所述细胞，任选地其中所述合成基质包含聚合物，任选地聚酯、聚乙二醇或水凝胶。13.如权利要求12所述的方法，其中所述合成基质包含：a.交联聚乙二醇(peg)水凝胶；和/或b.生物材料，优选地细胞外基质成分，任选地其中所述生物材料是一种或多种糖蛋白(任选地选自胶原蛋白、层粘连蛋白、串珠蛋白聚糖、纤连蛋白或纤连蛋白的rgd附着配体)和/或一种或多种碳水化合物(任选地透明质酸)。14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述细胞外基质或合成基质是三维的和/或呈悬浮液。15.如权利要求1-10和12-14中任一项所述的方法，其中所述培养方法不涉及使所述细胞与外源性细胞外基质接触。16.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述上皮干细胞选自结肠直肠、小肠、
胃、胰腺、肝、肺、乳腺、前列腺、肾、口腔、鼻咽、咽喉、下咽、喉、气管、皮肤、输卵管、卵巢、唾液腺、食道、毛囊和/或耳蜗细胞。17.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述适用于上皮干细胞的培养基包含wnt激动剂、bmp抑制剂、促有丝分裂生长因子和tfg-β抑制剂中的一种或多种。18.一种如权利要求17所定义的培养基，其中所述培养基还包含如权利要求2-9中所定义的整联蛋白激动剂。19.一种如权利要求11-15中任一项所定义的细胞外基质或合成基质，其中所述基质还包含如权利要求2-9中所定义的整联蛋白激动剂。20.一种类器官，其是通过权利要求1-17中任一项所述的方法可获得的或所获得的。21.一种组合物，其包含根据权利要求18所述的培养基，和细胞外基质或合成基质，任选地如权利要求11-15中任一项所定义。22.整联蛋白激动剂用于培养细胞的用途。23.整联蛋白激动剂用于在移植入受试者之前预处理细胞的用途。24.一种在细胞移植方法中用作细胞粘附增强剂的整联蛋白激动剂。25.根据权利要求20所述的类器官，其在治疗中使用或在诊断中使用。

技术总结
本发明涉及用于培养上皮干细胞或包含上皮干细胞的类器官的改进方法。本发明还涉及适合与所述方法一起使用的培养基；通过所述方法可获得的或所获得的类器官；以及所述培养方法、培养基和类器官在药物发现和验证、毒性测定、诊断和治疗中的用途。诊断和治疗中的用途。


技术研发人员：威利布罗杜斯
受保护的技术使用者：荷兰皇家科学院
技术研发日：2020.05.18
技术公布日：2022/3/4