评价患者对MET抑制剂敏感性的试剂盒的制作方法

评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒
技术领域
1.本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒。


背景技术：

2.间质上皮转化因子(met)基因位于人7号染色体长臂，含有21个外显子，是肝细胞生长因子(hgf)的受体络氨酸激酶，met与hgf结合可以激活参与肿瘤发生和转移的ras-mapk和pi3k-akt信号传导途径。c-met是met基因编码产生的具有自主磷酸活性的跨膜受体，是胚胎发育、器官再生以及伤口愈合的关键因素。met基因异常形式有突变、扩增、重排和过表达，met基因异常是导致多种肿瘤的重要因素。
3.met抑制剂能够有效治疗met基因异常导致的多种肿瘤。但是，不同患者对met抑制剂的敏感性不同会导致治疗效果因人而异，因此，亟需筛选出对met抑制剂敏感性较好的患者进行治疗以取得较好的治疗效果。


技术实现要素：

4.本公开的目的是提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，利用该试剂盒能够筛选出对met抑制剂敏感性较好的患者，使患者得到有效治疗。
5.为了实现上述目的，第一方面，本公开提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第一核苷酸序列的第一引物对，和/或，能够与所述第一核苷酸序列特异性结合的第一探针，其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；和/或，
6.该试剂盒包括能够特异性地扩增第二核苷酸序列的第二引物对，和/或，能够与所述第二核苷酸序列特异性结合的第二探针，其中，所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示。
7.可选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列；
8.所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列。
9.可选地，所述患者包括胶质瘤患者和/或胃腺癌患者。
10.第二方面，本公开提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第三核苷酸序列的第三引物对，和/或，能够与所述第三核苷酸序列特异性结合的第三探针，其中，所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；和/或，
11.该试剂盒包括能够特异性地扩增第四核苷酸序列的第四引物对，和/或，能够与所述第四核苷酸序列特异性结合的第四探针，其中，所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示。
12.可选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列；
13.所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列。
14.第三方面，本公开提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括抗第一氨基酸序列的第一抗体，其中，所述第一氨基酸序列如seq id no.13所示；和/或，
15.该试剂盒包括抗第二氨基酸序列的第二抗体，其中，所述第二氨基酸序列如seq id no.16所示。
16.可选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.14所示；优选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.15所示，其中，seq id no.15所示的氨基酸序列由seq id no.9所示的mrna编码得到；
17.所述第二氨基酸序列如seq id no.17所示；优选地，所述第二氨基酸序列如seq id no.18所示，其中，seq id no.18所示的氨基酸序列由seq id no.12所示的mrna编码得到。
18.第四方面，本公开提供一种分子试剂在制备评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒中的用途，所述分子试剂包括如下(1)～(10)中的至少一种：
19.(1)能够特异性扩增第一核苷酸序列的第一引物对；
20.(2)能够与所述第一核苷酸序列特异性结合的第一探针；
21.其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；
22.(3)能够特异性扩增第二核苷酸序列的第二引物对；
23.(4)能够与所述第二核苷酸序列特异性结合的第二探针；
24.其中，所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示；
25.(5)能够特异性扩增第三核苷酸序列的第三引物对；
26.(6)能够与所述第三核苷酸序列特异性结合的第三探针；
27.其中，所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；
28.(7)能够特异性扩增第四核苷酸序列的第四引物对；
29.(8)能够与所述第四核苷酸序列特异性结合的第四探针；
30.其中，所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示；
31.(9)抗第一氨基酸序列的第一抗体；
32.其中，所述第一氨基酸序列如seq id no.13所示；
33.(10)抗第二氨基酸序列的第二抗体；
34.其中，所述第二氨基酸序列如seq id no.16所示。
35.可选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列；
36.所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列；
37.所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列；
38.所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列；
39.所述第一氨基酸序列如seq id no.14所示；优选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.15所示，其中，seq id no.15所示的氨基酸序列由seq id no.9所示的mrna编码得到；
40.所述第二氨基酸序列如seq id no.17所示；优选地，所述第二氨基酸序列如seq id no.18所示，其中，seq id no.18所示的氨基酸序列由seq id no.12所示的mrna编码得到。
41.第五方面，本公开提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的系统，该系统包括扩增装置、测序装置、计算装置和输出装置；
42.所述扩增装置含有采集单元和扩增单元，所述采集单元用于采集模板核酸片段和扩增引物，所述扩增单元用于利用所述扩增引物对所述模板核酸片段进行扩增，得到扩增产物；
43.所述测序装置用于对所述扩增产物进行核酸序列测序，得到扩增产物序列；
44.所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下判别：
45.若所述扩增产物序列中含有第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列或第四核苷酸序列中的至少一种，则判定患者对met抑制剂敏感；
46.其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；更优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列；
47.所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；更优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列；
48.所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；更优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列；
49.所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；更优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列。
50.第六方面，本公开提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的方法，该方法包括检测肿瘤样本细胞中是否含有如上所述的第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列、第四核苷酸序列、第一氨基酸序列或者第二氨基酸序列的步骤，如果检测到检测肿瘤样本细胞中含有如上所述的第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列、第四核苷酸序列、第一氨基酸序列或者第二氨基酸序列中的至少一种，则判定所述肿瘤样本细胞对应的患者对met抑制剂敏感。
51.通过上述技术方案，利用本公开提供的试剂盒能够快速筛选出对met抑制剂敏感的患者，使患者得到有效治疗。
52.本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
53.附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
54.图1为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a的met基因9～11号外显子读段数示意图；
55.图2为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本b的met基因9～11号外显子读段数示意图；
56.图3为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本c的met基因9～11号外显子读段数示意图；
57.图4为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本d的met基因9～11号外显子读段数示意图；
58.图5为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a的met基因18～20号外显子读段数示意图；
59.图6为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本b的met基因18～20号外显子读段数示意图；
60.图7为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本c的met基因18～20号外显子读段数示意图；
61.图8为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本d的met基因18～20号外显子读段数示意图；
62.图9为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的pcr扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；
63.图10为本公开实施例提供的又一胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的pcr扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图；
64.图11为本公开实施例提供的不同浓度tmz处理后的各胶质母细胞瘤pdc样本的细胞相对存活率曲线图；
65.图12为本公开实施例提供的不同浓度克唑替尼处理后的各胶质母细胞瘤pdc样本的细胞相对存活率曲线图。
具体实施方式
66.以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
67.本公开的第一方面提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第一核苷酸序列的第一引物对，和/或，能够与所述第一核苷酸序列特异性结合的第一探针，其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；和/或，该试剂盒包括能够特异性地扩增第二核苷酸序列的第二引物对，和/或，能够与所述第二核苷酸序列特
异性结合的第二探针，其中，所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示。
68.可选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列；所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列。
69.可选地，所述患者包括胶质瘤患者和/或胃腺癌患者。
70.上述技术方案中，seq id no.1所示的序列为包含人met基因10号外显子缺失位点的cdna片段，seq id no.2所示的序列为包含seq id no.1所示的序列的cdna片段；seq id no.4所示的序列为包含人met基因19号外显子缺失位点的cdna片段，seq id no.5所示序列为包含seq id no.4所示的序列的cdna片段。
71.本公开的发明人发现，当肿瘤细胞的mrna可逆转录出具有10号外显子和/或19号外显子缺失位点的met基因cdna时，肿瘤细胞对met抑制剂的敏感性更强，因此，可以通过检测肿瘤细胞中met基因cdna的10号外显子和19号外显子的缺失状态，来确定肿瘤细胞对met抑制剂的敏感性，并以此来筛选出适合使用met抑制剂的患者，由此得到本公开。
72.其中，能特异性扩增含seq id no.1所示的核苷酸序列的第一引物对均可用于本公开，例如，所述第一引物对可以含有如seq id no.19所示的上游引物和seq id no.20所示的下游引物。能与seq id no.1所示的核苷酸序列特异性结合的第一探针均可用于本公开，例如，所述第一探针的序列中可以含有如seq id no.21所示的序列。
73.能特异性扩增含seq id no.4所示的核苷酸序列的第二引物对均可用于本公开，例如，所述第二引物对可以含有如seq id no.22所示的上游引物和seq id no.23所示的下游引物。能与seq id no.4所示的核苷酸序列特异性结合的第二探针均可用于本公开，例如，所述第二探针的序列中可以含有如seq id no.24所示的序列。
74.本公开的第二方面提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第三核苷酸序列的第三引物对，和/或，能够与所述第三核苷酸序列特异性结合的第三探针，其中，所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；和/或，该试剂盒包括能够特异性地扩增第四核苷酸序列的第四引物对，和/或，能够与所述第四核苷酸序列特异性结合的第四探针，其中，所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示。
75.可选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列；所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列。
76.上述技术方案中，seq id no.7所示的序列为包含人met基因10号外显子缺失位点的mrna片段，seq id no.8所示的序列为包含seq id no.7所示的序列的mrna片段；seq id no.10所示的序列为包含人met基因19号外显子缺失位点的mrna片段，seq id no.11所示序列为包含seq id no.10所示的序列的mrna片段。
77.其中，能特异性扩增seq id no.7所示的核苷酸序列的第三引物对均可用于本公开，例如，所述第三引物对可以含有如seq id no.25所示的上游引物和seq id no.26所示
的下游引物。能与seq id no.7所示的核苷酸序列特异性结合的第三探针均可用于本公开，例如，所述第三探针的序列中可以含有如seq id no.27所示的序列。
78.能特异性扩增seq id no.10所示的核苷酸序列的第四引物对均可用于本公开，例如，所述第四引物对可以含有如seq id no.28所示的上游引物和seq id no.29所示的下游引物。能与seq id no.10所示的核苷酸序列特异性结合的第四探针均可用于本公开，例如，所述第四探针的序列中可以含有如seq id no.30所示的序列。
79.本公开的第三方面提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒，该试剂盒包括抗第一氨基酸序列的第一抗体，其中，所述第一氨基酸序列如seq id no.13所示；和/或，该试剂盒包括抗第二氨基酸序列的第二抗体，其中，所述第二氨基酸序列如seq id no.16所示。
80.可选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.14所示；优选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.15所示，其中，seq id no.15所示的氨基酸序列由seq id no.9所示的mrna编码得到；所述第二氨基酸序列如seq id no.17所示；优选地，所述第二氨基酸序列如seq id no.18所示，其中，seq id no.18所示的氨基酸序列由seq id no.12所示的mrna编码得到。
81.其中，抗第一氨基酸序列和第二氨基酸序列的抗体可以外单克隆抗体和/或多克隆抗体。
82.本公开的第四方面提供一种分子试剂在制备评价患者对met抑制剂敏感性的试剂盒中的用途，所述分子试剂包括如下(1)～(10)中的至少一种：(1)能够特异性扩增第一核苷酸序列的第一引物对；(2)能够与所述第一核苷酸序列特异性结合的第一探针；其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；(3)能够特异性扩增第二核苷酸序列的第二引物对；(4)能够与所述第二核苷酸序列特异性结合的第二探针；其中，所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示；(5)能够特异性扩增第三核苷酸序列的第三引物对；(6)能够与所述第三核苷酸序列特异性结合的第三探针；其中，所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；(7)能够特异性扩增第四核苷酸序列的第四引物对；(8)能够与所述第四核苷酸序列特异性结合的第四探针；其中，所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示；(9)抗第一氨基酸序列的第一抗体；其中，所述第一氨基酸序列如seq id no.13所示；(10)抗第二氨基酸序列的第二抗体；其中，所述第二氨基酸序列如seq id no.16所示。
83.可选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列。所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列。所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列。所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列。所述第一氨基酸序列如seq id no.14所示；优选地，所述第一氨基酸序列如seq id no.15所示，其中，seq id no.15所示的氨基酸序列由seq id no.9所示的mrna编码得到。所述第二氨基酸序列如seq id no.17所示；优选地，所述第二氨基酸序列如seq id no.18所示，其中，seq id no.18所示的氨基酸序列由seq id no.12所示的mrna编码得到。
84.本公开的第五方面提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的系统，该系统包括扩增装置、测序装置、计算装置和输出装置；所述扩增装置含有采集单元和扩增单元，所述采集单元用于采集模板核酸片段和扩增引物，所述扩增单元用于利用所述扩增引物对所述模板核酸片段进行扩增，得到扩增产物；所述测序装置用于对所述扩增产物进行核酸序列测序，得到扩增产物序列；所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下判别：若所述扩增产物序列中含有第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列或第四核苷酸序列中的至少一种，则判定患者对met抑制剂敏感；其中，所述第一核苷酸序列如seq id no.1所示；优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.2所示；更优选地，所述第一核苷酸序列如seq id no.3所示，其中，seq id no.3所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的cdna序列；所述第二核苷酸序列如seq id no.4所示；优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.5所示；更优选地，所述第二核苷酸序列如seq id no.6所示，其中，seq id no.6所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的cdna序列；所述第三核苷酸序列如seq id no.7所示；优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.8所示；更优选地，所述第三核苷酸序列如seq id no.9所示，其中，seq id no.9所示的核苷酸序列为10号外显子缺失的met基因的mrna序列；所述第四核苷酸序列如seq id no.10所示；优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.11所示；更优选地，所述第四核苷酸序列如seq id no.12所示，其中，seq id no.12所示的核苷酸序列为19号外显子缺失的met基因的mrna序列。
85.本公开的第六方面提供一种评价患者对met抑制剂敏感性的方法，该方法包括检测肿瘤样本细胞中是否含有如上所述的第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列、第四核苷酸序列、第一氨基酸序列或者第二氨基酸序列的步骤，如果检测到检测肿瘤样本细胞中含有如上所述的第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列、第四核苷酸序列、第一氨基酸序列或者第二氨基酸序列中的至少一种，则判定所述肿瘤样本细胞对应的患者对met抑制剂敏感。其中，可以通过pcr、rt-rpa、核酸杂交或者高通量测序的方法检测上述第一核苷酸序列、第二核苷酸序列、第三核苷酸序列和第四核苷酸序列，可以通过免疫杂交检测上述第一氨基酸序列和第二氨基酸序列。
86.下面通过实施例来进一步说明本公开，但是本公开并不因此而受到任何限制。
87.制备实施例
88.本制备实施例用于获取胶质母细胞瘤的pdc(病人来源细胞)样本及总rna和总cdna。
89.使用符合医学伦理委员会标准的操作，收集胶质母细胞瘤样本4例，其中，收集样本的每一位患者都在收集样本之前得到本人及其治疗专家的同意，并具有书面的证明材料。
90.对上述收集到的4例胶质母细胞瘤样本分别进行酶解，得到胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d。
91.使用rna提取试剂盒(购自qiagen)，按照其使用说明书分别提取上述胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的总rna。提取到的各总rna经完整性分析仪检测，确认其rna完整性指数(rna integrity number,rin)大于7.0。使用反转录试剂盒(购自invitrogen)按照其使用说明书分别以各总rna为模板合成各双链cdna。
92.实施例1
93.本实施例对制备实施例合成得到的各胶质母细胞瘤pdc样本的总cdna进行验证。
94.(1)利用二代测序技术验证10号外显子缺失的cdna
95.利用二代测序技术分别对胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的总cdna进行测序，然后利用igv(integrative genomics viewer)软件识别支持met基因9～10号外显子、10～11号外显子及9～11号外显子的读段数，若读段数大于等于3，说明存在10号外显子缺失的met基因cdna。测试见过见图1～4。
96.其中，图1为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a的met基因9～11号外显子读段数示意图；图2为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本b的met基因9～11号外显子读段数示意图；图3为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本c的met基因9～11号外显子读段数示意图；图4为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本d的met基因9～11号外显子读段数示意图。
97.由图1～4可知，胶质母细胞瘤pdc样本a和胶质母细胞瘤pdc样本b的总cdna中均存在10号外显子缺失的met基因cdna。
98.(2)利用二代测序技术验证19号外显子缺失的cdna
99.利用二代测序技术分别对胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的总cdna进行测序，然后利用igv(integrative genomics viewer)软件识别支持met基因18～19号外显子、19～20号外显子及18～20号外显子的读段数，若读段数大于等于3，说明存在19号外显子缺失的met基因cdna。测试见过见图5～8。
100.其中，图5为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a的met基因18～20号外显子读段数示意图；图6为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本b的met基因18～20号外显子读段数示意图；图7为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本c的met基因18～20号外显子读段数示意图；图8为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本d的met基因18～20号外显子读段数示意图。
101.由图5～8可知，胶质母细胞瘤pdc样本a的总cdna中存在19号外显子缺失的met基因cdna。
102.(3)利用pcr技术验证10号外显子缺失的cdna
103.pcr验证所用的引物为如seq id no.19所示的上游引物和如seq id no.20所示的下游引物。pcr的操作按照合成引物和pcr试剂盒的说明书进行。pcr的产物经过琼脂糖凝胶核酸电泳展示扩增条带的有无，扩增结果如图9所示。
104.图9为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的pcr扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。
105.由图9可知，胶质母细胞瘤pdc样本a和胶质母细胞瘤pdc样本b的总cdna中均存在10号外显子缺失的met基因cdna。
106.(4)利用pcr技术验证19号外显子缺失的cdna验证
107.pcr验证所用的引物为如seq id no.22所示的上游引物和如seq id no.23所示的下游引物。pcr的操作按照合成引物和pcr试剂盒的说明书进行。pcr的产物经过琼脂糖凝胶核酸电泳展示扩增条带的有无，扩增结果如图9所示。
108.图10为本公开实施例提供的胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d的pcr扩增产物的琼
脂糖凝胶电泳图。
109.由图10可知，胶质母细胞瘤pdc样本a的总cdna中存在19号外显子缺失的met基因cdna。
110.实施例2
111.本实施例用于验证制备实施例制备得到的各胶质母细胞瘤的pdc样本对抗肿瘤药物替莫唑胺(tmz)和met抑制剂克唑替尼的敏感性。
112.取上述胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d，使用专用培养基重悬，然后分别接种到96孔细胞培养板中，使得每个培养孔中含有3000个细胞。接种完成后，将96孔细胞培养板置于含有5％co2的37℃培养箱中培养24小时。培养结束后，在各培养孔中加入不同浓度的tmz或克唑替尼，每个浓度梯度设10个重复孔。加药后继续培养72小时，然后使用cck-8测量每个培养孔中的活细胞数，结果见表1和表2，图11和图12。
113.表1不同浓度tmz处理后的活细胞数
[0114][0115]
表2不同浓度克唑替尼处理后的活细胞数
[0116][0117]
由表1和图11可以看出，胶质母细胞瘤pdc样本a和b对抗肿瘤药物替莫唑胺(tmz)不敏感，胶质母细胞瘤pdc样本c和d对抗肿瘤药物替莫唑胺(tmz)较敏感。
[0118]
由表2和图12可以看出，胶质母细胞瘤pdc样本a、b、c和d均对met抑制剂克唑替尼敏感；而且，胶质母细胞瘤pdc样本a和b对克唑替尼的敏感性强于胶质母细胞瘤pdc样本c和d；此外，胶质母细胞瘤pdc样本a对克唑替尼的敏感性强于胶质母细胞瘤pdc样本b。
[0119]
由此可见，当肿瘤细胞中存在met基因的10号外显子缺失和19号外显子缺失时，肿瘤细胞对met抑制剂具有较强的敏感性，而且，当肿瘤细胞中同时存在met基因的10号外显子缺失和19号外显子缺失时，肿瘤细胞对met抑制剂的敏感性最强。
[0120]
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
[0121]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0122]
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。