蛋白酶底物和包含蛋白酶切割序列的多肽的制作方法

本公开提供蛋白酶底物、可被蛋白酶切割的肽序列、包含蛋白酶切割序列的多肽及其生产方法、包含包含蛋白酶切割序列的多肽的药物组合物，以及通过切割包含在多肽中的蛋白酶切割序列释放抗原结合结构域或配体的方法。
背景技术：
蛋白酶是一种切割氨基酸残基之间的肽键的酶。已知一些蛋白酶会根据蛋白质中特定氨基酸序列的存在来破坏特定的肽键。蛋白酶天然存在于所有生物体中，并参与各种生理反应，包括简单的降解和高度调控的途径。然而，许多病理状态与蛋白酶的异常表达和/或活性有关。因此，不适当的蛋白水解可能在癌症、心血管疾病、炎症性疾病、神经退行性疾病、真核疾病、细菌性疾病、病毒性疾病和寄生虫病的发生和发展中发挥关键作用。因此，需要鉴定蛋白酶的新底物并在各种治疗、诊断和预防应用中使用底物。引用列表专利文献[PTL1]WO2018/097307[PTL2]WO2018/097308技术实现要素：技术问题鉴于这些情况做出了本公开。本公开的目的是提供蛋白酶底物、可被蛋白酶切割的肽序列、包含蛋白酶切割序列的多肽及其生产方法、包含包含蛋白酶切割序列的多肽的药物组合物，以及通过切割包含在多肽中的蛋白酶切割序列释放抗原结合结构域或配体的方法。解决问题的方案作为实现上述目的的广泛研究的结果，本公开的发明人发现了可用作蛋白酶底物的化合物，特别是可用作蛋白酶底物/可被蛋白酶切割的肽序列，并发现它们对疾病治疗有用，包括施用包含可被蛋白酶切割的肽序列(简称为蛋白酶切割序列)的多肽，并且包含蛋白酶切割序列的多肽可用于生产用于治疗疾病的药物组合物。此外，本公开的发明人已经创造了包含蛋白酶切割序列的多肽及其生产方法，从而完成了本公开。本公开是基于这些发现，且具体包括以下举例说明的实施方案：[1]蛋白酶底物，其蛋白酶切割比率高于包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物的蛋白酶切割比率。[2]根据[1]所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率。[3]根据[1]至[2]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率。[4]根据[1]至[3]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率。[5]根据[1]至[4]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率。[6]根据[1]至[5]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。[7]根据[1]至[6]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。[8]根据[1]至[7]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率与被人血清切割比率的比值。[9]根据[1]至[8]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率与人血清的切割比率的比值。[10]根据[1]至[9]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物不被人血清切割。[11]根据[1]至[10]所述的蛋白酶底物，其中所述底物包含至少一种选自以下的序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[12]蛋白酶底物，其包含至少一种选自以下的序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[13]根据[12]所述的蛋白酶底物，其中所述蛋白酶是蛋白裂解酶(matriptase)和/或尿激酶。[14]根据[12]至[13]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA和小鼠uPA中的至少一种蛋白酶。[15]根据[12]至[14]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被所述蛋白酶的切割比率。[16]根据[12]至[15]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率。[17]根据[12]至[16]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率。[18]根据[12]至[17]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率。[19]根据[12]至[18]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率。[20]根据[12]至[19]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率与人血清的切割比率的比值。[21]根据[12]至[20]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。[22]根据[12]至[21]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。[23]根据[12]至[22]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物比包含SEQIDNO:1、2和3中任一项的序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。[24]根据[12]至[23]中任一项所述的蛋白酶底物，其中所述底物不被人血清切割。[25]选自以下的至少一种序列作为蛋白酶切割序列的用途：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[26]多肽，其包含选自以下的至少一种序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[27]根据[26]所述的多肽，其中选自以下的所述序列是可被蛋白酶切割的蛋白酶切割序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[28]方法，用于生产根据[26]或[27]所述的多肽。[29]多核苷酸，其编码根据[26]或[27]所述的多肽。[30]载体，其包含根据[29]所述的多核苷酸。[31]宿主细胞，其包含根据[29]所述的多核苷酸或根据[30]所述的载体。[32]用于生产根据[26]或[27]所述的多肽的方法，其中所述方法包括培养根据[31]所述的宿主细胞。[33]根据[32]所述用于生产多肽的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[A-1]根据[27]所述的多肽，其中所述多肽包含抗原结合结构域和携带部分(carryingmoiety)，其中所述携带部分具有抑制结构域，所述抑制结构域用于抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。[A-2]根据[A-1]所述的多肽，其中在蛋白酶切割序列被蛋白酶切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制弱于在蛋白酶切割序列未被切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制。[A-3]根据[A-1]或[A-2]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域在血液中的半衰期比未切割的多肽的短。[A-4]根据[A-1]至[A-3]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域在血液中的半衰期比所述携带部分的短。[A-5]根据[A-1]至[A-4]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域的分子量小于所述携带部分的分子量。[A-6]根据[A-1]至[A-5]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域的分子量为60kDa或以下。[A-7]根据[A-1]至[A-6]中任一项所述的多肽，其中所述携带部分具有FcRn结合活性，并且所述抗原结合结构域不具有FcRn结合活性或具有比携带部分弱的FcRn结合活性。[A-8]根据[A-1]至[A-7]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域可以从多肽释放，并且其中所述抗原结合结构域在从多肽中释放的状态下的抗原结合活性比不从多肽中释放的状态下的抗原结合活性高。[A-9]根据[A-1]至[A-8]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域的抗原结合活性通过所述抗原结合结构域与所述携带部分的抑制结构域缔合而受到抑制。[A-10]根据[A-8]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域由于蛋白酶切割蛋白酶切割序列而变得可从所述多肽释放。[A-11]根据[A-9]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域和所述携带部分的抑制结构域之间的缔合通过蛋白酶切割蛋白酶切割序列而被破坏。[A-12]根据[A-1]至[A-11]中任一项所述的多肽，其中所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[A-13]根据[A-1]至[A-11]中任一项所述的多肽，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA和小鼠uPA中的至少一种蛋白酶。[A-14]根据[A-1]至[A-13]中任一项所述的多肽，其中第一柔性接头进一步连接至所述蛋白酶切割序列的一端。[A-15]根据[A-14]所述的多肽，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[A-16]根据[A-14]或[A-15]所述的多肽，其中第二柔性接头进一步连接到所述蛋白酶切割序列的另一端。[A-17]根据[A-16]所述的多肽，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[A-18]根据[A-1]至[A-17]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域包含或是单域抗体，并且其中所述携带部分的抑制结构域抑制单域抗体的抗原结合活性。[A-19]根据[A-18]所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，或通过其单域具有抗原结合活性的VH，或通过其单域具有抗原结合活性的VL。[A-20]根据[A-1]至[A-19]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域包含单域抗体，其中所述携带部分的抑制结构域为VHH、抗体VH或抗体VL，并且其中单域抗体的抗原结合活性被VHH、抗体VH或抗体VL抑制。[A-21]根据[A-1]至[A-20]中任一项所述的多肽，其中所述抗原结合结构域包含单域抗体，其中所述携带部分的抑制结构域为VHH、抗体VH或抗体VL，并且其中单域抗体的抗原结合活性通过其与VHH、抗体VH或抗体VL的缔合而受到抑制。[A-22]根据[A-18]至[A-21]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，或通过其单域具有抗原结合活性的VH，其中携带部分的抑制结构域是抗体VL，并且其中VHH或通过其单域具有抗原结合活性的VH的抗原结合活性通过其与抗体VL的缔合而受到抑制。[A-23]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH在选自氨基酸位置37、44、45和47(均根据Kabat编号)的至少一个位置具有氨基酸取代。[A-24]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自氨基酸37V、44G、45L和47W(均根据Kabat编号)的至少一个氨基酸。[A-25]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自氨基酸取代F37V、Y37V、E44G、Q44G、R45L、H45L、G47W、F47W、L47W、T47W和S47W(均根据Kabat编号)的至少一个氨基酸取代。[A-26]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH在选自37/44、37/45、37/47、44/45、44/47、45/47、37/44/45、37/44/47、37/45/47、44/45/47和37/44/45/47(均根据Kabat编号)的至少一组位置上具有氨基酸取代。[A-27]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自37V/44G、37V/45L、37V/47W、44G/45L、44G/47W、45L/47W、37V/44G/45L、37V/44G/47W、37V/45L/47W、44G/45L/47W和37V/44G/45L/47W(均根据Kabat编号)的至少一组氨基酸。[A-28]根据[A-18]至[A-22]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自F37V/R45L、F37V/G47W、R45L/G47W和F37V/R45L/G47W(均根据Kabat编号)的至少一组氨基酸取代。[A-29]根据[A-18]至[A-21]中任一项所述的多肽，其中所述单域抗体是通过其单域具有抗原结合活性的VL，其中携带部分的抑制结构域是抗体VH，并且其中通过其单域具有抗原结合活性的VL的抗原结合活性通过其与抗体VH的缔合而受到抑制。[A-30]根据[A-1]至[A-29]中任一项所述的多肽，其中所述携带部分具有FcRn结合区。[A-31]根据[A-1]至[A-30]中任一项所述的多肽，其中所述携带部分包含抗体恒定区。[A-32]根据[A-31]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-33]根据[A-31]所述的多肽，其中所述携带部分包含抗体重链恒定区，并且其中所述抗体重链恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-34]根据[A-31]所述的多肽，其中所述携带部分包含抗体轻链恒定区，并且其中所述抗体轻链恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-35]根据[A-33]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体重链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的序列内或比抗体重链恒定区的第122位氨基酸(根据EU编号)更靠近抗原结合结构域的一侧。[A-36]根据[A-34]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体轻链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的序列内或比抗体轻链恒定区的第113位氨基酸(根据Kabat编号)更靠近抗原结合结构域的一侧。[A-37]根据[A-32]至[A-35]中任一项所述的多肽，其中所述携带部分的抗体恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗体恒定区的序列内或比抗原结合结构域的单域抗体的第109位(根据Kabat编号)的氨基酸更靠近抗体恒定区的一侧。[A-38]根据[A-32]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体恒定区之间的边界附近。[A-39]根据[A-33]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体重链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体重链恒定区之间的边界附近。[A-40]根据[A-34]所述的多肽，其中所述携带部分的抗体轻链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体轻链恒定区之间的边界附近。[A-41]根据[A-39]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位(根据Kabat编号)的氨基酸和抗体重链恒定区第122位(根据EU编号)的氨基酸之间。[A-42]根据[A-40]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位(根据Kabat编号)的氨基酸和抗体轻链恒定区第113位(根据Kabat编号)的氨基酸之间。[A-43]根据[A-39]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是由VL产生的单域抗体，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第104位(根据Kabat编号)的氨基酸和抗体重链恒定区第122位(根据EU编号)的氨基酸之间。[A-44]根据[A-40]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是由VL产生的单域抗体，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位(根据Kabat编号)的氨基酸和抗体轻链恒定区第113位(根据Kabat编号)的氨基酸之间。[A-45]根据[A-31]至[A-44]中任一项所述的多肽，其中所述多肽的抗体恒定区是IgG抗体恒定区。[A-46]根据[A-1]至[A-45]中任一项所述的多肽，其中所述多肽是IgG抗体样分子。[A-47]根据[A-1]至[A-46]中任一项所述的多肽，其中在未释放抗原结合结构域的状态下，当使用生物层干涉测量法(BLI)(Octet)测定时未观察到抗原结合结构域与抗原之间的结合。[A-48]根据[A-1]至[A-47]中任一项所述的多肽，其中第二抗原结合结构域进一步连接至所述抗原结合结构域。[A-49]根据[A-48]所述的多肽，其中所述第二抗原结合结构域具有与抗原结合结构域不同的抗原结合特异性。[A-50]根据[A-48]或[A-49]所述的多肽，其中所述第二抗原结合结构域包含第二单域抗体。[A-51]根据[A-50]所述的多肽，其中所述抗原结合结构域是单域抗体，其中所述第二抗原结合结构域是第二单域抗体，其中所述抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域可以从多肽中释放出来，并且其中所述单域抗体和所述第二单域抗体在所述抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域被释放的状态下形成双特异性抗原结合分子。[A-52]根据[A-1]至[A-51]中任一项所述的多肽，其中所述多肽还具有不同于所述抗原结合结构域的其它抗原结合结构域，并且其中所述其它抗原结合结构域的抗原结合活性也通过与所述多肽的携带部分连接而受到抑制。[A-53]根据[A-52]所述的多肽，其中所述其它抗原结合结构域和所述抗原结合结构域具有不同的抗原结合特异性。[A-54]药物组合物，其包含根据[A-1]至[A-53]中任一项所述的多肽。[A-55]方法，其用于生产根据[A-1]至[A-53]中任一项所述的多肽。[A-56]多核苷酸，其编码根据[A-1]至[A-53]中任一项所述的多肽。[A-57]载体，其包含根据[A-56]所述的多核苷酸。[A-58]宿主细胞，其包含根据[A-56]所述的多核苷酸或根据[A-57]所述的载体。[A-59]用于生产根据[A-1]至[A-53]中任一项所述的多肽的方法，其中所述方法包含培养根据[A-58]所述的宿主细胞。[A-60]根据[A-59]所述的用于生产肽的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[A-61]从多肽释放抗原结合结构域的方法，其中所述方法包括用蛋白酶切割包含在包含抗原结合结构域的多肽中并且具有选自以下的至少一个序列的部分：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[A-62]根据[A-61]所述的方法，其中所述多肽还包含携带部分，其中所述携带部分具有抑制结构域，所述抑制结构域用于抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。[A-63]根据[A-62]所述的方法，其中在蛋白酶切割序列被蛋白酶切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制弱于在蛋白酶切割序列未被切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制。[A-64]根据[A-62]或[A-63]所述的方法，其中所述抗原结合结构域在血液中的半衰期比未切割的多肽的短。[A-65]根据[A-62]至[A-64]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域在血液中的半衰期比所述携带部分的短。[A-66]根据[A-62]至[A-65]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域的分子量小于所述携带部分的分子量。[A-67]根据[A-62]至[A-66]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域的分子量为60kDa或以下。[A-68]根据[A-62]至[A-67]中任一项所述的方法，其中所述携带部分具有FcRn结合活性，并且所述抗原结合结构域不具有FcRn结合活性或具有比所述携带部分弱的FcRn结合活性。[A-69]根据[A-62]至[A-68]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域在抗原结合结构域从多肽释放的状态下具有比它未从多肽中释放出来的状态下更高的抗原结合活性。[A-70]根据[A-62]至[A-69]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域的抗原结合活性通过抗原结合结构域与所述携带部分的抑制结构域的缔合而受到抑制。[A-71]根据[A-70]所述的方法，其中所述抗原结合结构域和所述携带部分的抑制结构域之间的缔合通过蛋白酶对蛋白酶切割序列的切割而被破坏。[A-72]根据[A-62]至[A-71]中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[A-73]根据[A-62]至[A-71]中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA和小鼠uPA的至少一种蛋白酶。[A-74]根据[A-62]至[A-73]中任一项所述的方法，其中第一柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的一端。[A-75]根据[A-74]所述的方法，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[A-76]根据[A-74]或[A-75]所述的方法，其中第二柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的另一端。[A-77]根据[A-76]所述的方法，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[A-78]根据[A-62]至[A-77]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域包含或是单域抗体，并且其中所述携带部分的抑制结构域抑制单域抗体的抗原结合活性。[A-79]根据[A-78]所述的方法，其中所述单域抗体是VHH、通过其单域具有抗原结合活性的VH或通过其单域具有抗原结合活性的VL。[A-80]根据[A-62]至[A-79]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域包含单域抗体，其中所述携带部分的抑制结构域是VHH、抗体VH或抗体VL，并且其中单域抗体的抗原结合活性被VHH、抗体VH或抗体VL抑制。[A-81]根据[A-62]至[A-80]中任一项所述的方法，其中所述抗原结合结构域包含单域抗体，其中所述携带部分的抑制结构域是VHH、抗体VH或抗体VL，并且其中所述单域抗体的抗原结合活性通过与VHH、抗体VH或抗体VL缔合而受到抑制。[A-82]根据[A-78]至[A-81]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，或通过其单域具有抗原结合活性的VH，其中所述携带部分的抑制结构域是抗体VL，并且其中VHH或通过其单域具有抗原结合活性的VH的抗原结合活性通过其与抗体VL的缔合而受到抑制。[A-83]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH在选自氨基酸位置37、44、45和47(均根据Kabat编号)的至少一个位置具有氨基酸取代。[A-84]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自氨基酸37V、44G、45L和47W(均根据Kabat编号)的至少一个氨基酸。[A-85]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自氨基酸取代F37V、Y37V、E44G、Q44G、R45L、H45L、G47W、F47W、L47W、T47W和S47W(均根据Kabat编号)的至少一个氨基酸取代。[A-86]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH在选自37/44,37/45,37/47,44/45,44/47,45/47,37/44/45,37/44/47,37/45/47,44/45/47,和37/44/45/47(均根据Kabat编号)的至少一组位置上具有氨基酸取代。[A-87]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自37V/44G,37V/45L,37V/47W,44G/45L,44G/47W,45L/47W,37V/44G/45L,37V/44G/47W,37V/45L/47W,44G/45L/47W和37V/44G/45L/47W(均根据Kabat编号)的至少一组氨基酸。[A-88]根据[A-78]至[A-82]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是VHH，并且其中所述VHH包含选自F37V/R45L,F37V/G47W,R45L/G47W和F37V/R45L/G47W(均根据Kabat编号)的至少一组氨基酸取代。[A-89]根据[A-78]至[A-81]中任一项所述的方法，其中所述单域抗体是通过其单域具有抗原结合活性的VL，其中所述携带部分的抑制结构域是抗体VH，并且其中通过其单域具有抗原结合活性的VL的抗原结合活性通过其与抗体VH的缔合而受到抑制。[A-90]根据[A-62]至[A-89]中任一项所述的方法，其中所述携带部分具有FcRn结合区。[A-91]根据[A-62]至[A-90]中任一项所述的方法，其中所述携带部分包含抗体恒定区。[A-92]根据[A-91]所述的方法，其中所述携带部分的抗体恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-93]根据[A-91]所述的方法，其中所述携带部分包含抗体重链恒定区，并且其中所述抗体重链恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-94]根据[A-91]所述的方法，其中所述携带部分包含抗体轻链恒定区，并且其中所述抗体轻链恒定区通过或不通过接头与抗原结合结构域融合。[A-95]根据[A-93]所述的方法，其中在多肽中，所述携带部分的抗体重链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的序列内或比抗体重链恒定区的第122位氨基酸(根据EU编号)更靠近抗原结合结构域的一侧。[A-96]根据[A-94]所述的方法，其中在多肽中，所述携带部分的抗体轻链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的序列内或比抗体轻链恒定区的第113位氨基酸(根据Kabat编号)更靠近抗原结合结构域的一侧。[A-97]根据[A-92]至[A-95]中任一项所述的方法，其中在多肽中，所述携带部分的抗体恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗体恒定区的序列内或比抗原结合结构域的单域抗体的第109位氨基酸(根据Kabat编号)更靠近抗体恒定区的一侧。[A-98]根据[A-92]所述的方法，其中在多肽中，所述携带部分的抗体恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体恒定区之间的边界附近。[A-99]根据[A-93]所述的多肽，其中在多肽中，所述携带部分的抗体重链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体重链恒定区之间的边界附近。[A-100]根据[A-34]所述的方法，其中在多肽中，所述携带部分的抗体轻链恒定区的N-末端通过或不通过接头与抗原结合结构域的C-末端融合，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和抗体轻链恒定区之间的边界附近。[A-101]根据[A-99]所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位氨基酸(根据Kabat编号)和抗体重链恒定区第122位氨基酸(根据EU编号)之间。[A-102]根据[A-100]所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单域抗体或由VH产生的VHH，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位氨基酸(根据Kabat编号)和抗体轻链恒定区第113位氨基酸(根据Kabat编号)之间。[A-103]根据[A-99]所述的方法，其中所述抗原结合结构域是由VL产生的单域抗体，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第104位氨基酸(根据Kabat编号)和抗体重链恒定区第122位氨基酸(根据EU编号)之间。[A-104]根据[A-100]所述的方法，其中所述抗原结合结构域是由VL产生的单域抗体，并且其中所述蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域的单域抗体的第109位氨基酸(根据Kabat编号)和抗体轻链恒定区第113位氨基酸(根据Kabat编号)之间。[A-105]根据[A-91]至[A-104]中任一项所述的方法，其中所述多肽的抗体恒定区是IgG抗体恒定区。[A-106]根据[A-62]至[A-105]中任一项所述的方法，其中所述多肽是IgG抗体样分子。[A-107]根据[A-62]至[A-106]中任一项所述的方法，其中当使用生物层干涉测量法(BLI)(Octet)测定时，在未释放抗原结合结构域的状态下，未观察到抗原结合结构域与抗原之间的结合。[A-108]根据[A-62]至[A-107]中任一项所述的方法，其中第二抗原结合结构域进一步连接至所述抗原结合结构域。[A-109]根据[A-108]所述的方法，其中所述第二抗原结合结构域具有与抗原结合结构域不同的抗原结合特异性。[A-110]根据[A-108]或[A-109]所述的方法，其中所述第二抗原结合结构域包含第二单域抗体。[A-111]根据[A-110]所述的方法，其中所述抗原结合结构域是单域抗体，其中所述第二抗原结合结构域是第二单域抗体，其中所述抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域可以从多肽中释放出来，并且其中所述单域抗体和所述第二单域抗体在所述抗原结合结构域和所述第二抗原结合结构域被释放的状态下形成双特异性抗原结合分子。[A-112]根据[A-62]至[A-111]中任一项所述的方法，其中所述多肽还具有不同于所述抗原结合结构域的其它抗原结合结构域，并且其中所述其它抗原结合结构域的抗原结合活性也通过与所述多肽的携带部分连接而受到抑制。[A-113]根据[A-112]所述的方法，其中所述其它抗原结合结构域和所述抗原结合结构域具有不同的抗原结合特异性。[B-1]根据[27]所述的多肽，其中所述多肽是能够与配体结合的配体结合分子，其中所述配体结合分子在蛋白酶切割序列被切割的状态下与配体的结合比在蛋白酶切割序列未被切割的状态下配体结合分子与配体的结合弱。[B-2]根据[B-1]所述的配体结合分子，其中，所述配体在蛋白酶切割序列被切割的状态下从所述配体结合分子释放。[B-3]根据[B-1]至[B-2]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[B-4]根据[B-1]至[B-3]中任一项所述的配体结合分子，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA、和小鼠uPA的至少一种蛋白酶。[B-5]根据[B-1]至[B-4]中任一项所述的配体结合分子，其中第一柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的一端。[B-6]根据[B-5]所述的配体结合分子，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[B-7]根据[B-5]或[B-6]所述的配体结合分子，其中第二柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的另一端。[B-8]根据[B-7]所述的配体结合分子，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[B-9]根据[B-1]至[B-8]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子包含抗体VH、抗体VL和抗体恒定区。[B-10]根据[B-9]所述的配体结合分子，其中所述蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体恒定区内。[B-11]根据[B-10]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体重链恒定区的第118位氨基酸(根据EU编号)至抗体重链恒定区的第140位氨基酸(根据EU编号)的序列中的任意位置引入。[B-12]根据[B-10]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体轻链恒定区的第108位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体轻链恒定区的第131位氨基酸(根据Kabat编号)的序列中的任意位置引入。[B-13]根据[B-9]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体VH或抗体VL内。[B-14]根据[B-13]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在选自由以下组成的组中的序列中的任意位置引入：抗体VH中的序列，其跨越：从第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第16位氨基酸(根据Kabat编号)；从第40位氨基酸(根据Kabat编号)到第47位氨基酸(根据Kabat编号)；从第55位氨基酸(根据Kabat编号)到第69位氨基酸(根据Kabat编号)；从第73位氨基酸(根据Kabat编号)到第79位氨基酸(根据Kabat编号)；从第83位氨基酸(根据Kabat编号)到第89位氨基酸(根据Kabat编号)；从第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第99位氨基酸(根据Kabat编号)；和从第101位氨基酸(根据Kabat编号)到第113位氨基酸(根据Kabat编号)。[B-15]根据[B-13]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在选自由以下组成的组中的序列中的任意位置引入：抗体VL中的序列，其跨越：从第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第19位氨基酸(根据Kabat编号)；从第39位氨基酸(根据Kabat编号)到第46位氨基酸(根据Kabat编号)；从第49位氨基酸(根据Kabat编号)到第62位氨基酸(根据Kabat编号)；和从第96位氨基酸(根据Kabat编号)到第107位氨基酸(根据Kabat编号)。[B-16]根据[B-9]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体恒定区和抗体VH之间的边界附近和/或抗体恒定区和抗体VL之间的边界附近。[B-17]根据[B-17]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体VH的第109位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体重链恒定区的第122位氨基酸(根据EU编号)的序列中的任意位置引入。[B-18]根据[B-16]所述的配体结合分子，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体VL的第104位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体轻链恒定区的第113位氨基酸(根据Kabat编号)的序列中的任意位置引入。[B-19]根据[B-9]至[B-18]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述配体结合分子中的抗体VL与抗体VH缔合，且其中所述缔合通过蛋白酶切割蛋白酶切割序列而被破坏。[B-20]根据[B-1]至[B-19]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述配体的生物学活性通过配体结合分子与配体的结合而被抑制。[B-21]根据[B-1]至[B-20]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述配体是细胞因子或趋化因子。[B-22]根据[B-1]至[B-20]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体是选自白介素、干扰素、造血因子、TNF超家族、趋化因子、细胞生长因子和TGF-β家族的配体。[B-23]根据[B-1]至[B-22]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述配体结合分子是IgG抗体。[B-24]根据[B-1]至[B-23]中任一项所述的配体结合分子，其与配体结合。[B-25]根据[B-1]至[B-23]中任一项所述的配体结合分子，其与配体融合。[B-26]根据[B-25]所述的配体结合分子，在配体结合分子与配体融合的状态下，其不进一步结合不同的配体。[B-27]根据[B-25]或[B-26]所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[B-28]根据[B-27]所述的配体结合分子，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[B-29]复合物，其由配体和与所述配体结合的根据[B-1]至[B-23]中任一项所述的配体结合分子形成。[B-30]融合蛋白，其中配体与根据[B-1]至[B-23]中任一项所述的配体结合分子融合。[B-31]根据[B-30]所述的融合蛋白，其在配体结合分子与配体融合的状态下不进一步与不同的配体结合。[B-32]根据[B-30]或[B-31]所述的融合蛋白，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[B-33]根据[B-32]所述的融合蛋白，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[B-34]根据[B-32]或[B-33]所述的融合蛋白，其中所述接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的接头。[B-35]药物组合物，其包含根据[B-1]至[B-28]中任一项所述的配体结合分子。[B-36]药物组合物，其包含根据[B-1]至[B-24]中任一项所述的配体结合分子和配体。[B-37]药物组合物，其包含根据[B-29]所述的复合物。[B-38]药物组合物，其包含根据[B-30]至[B-34]中任一项所述的融合蛋白。[B-39]方法，其用于生产根据[B-1]至[B-28]中任一项所述的配体结合分子。[B-40]根据[B-39]所述的生产方法，其包括将蛋白酶切割序列引入能够与配体结合的分子中。[B-41]用于生产根据[B-30]至[B-34]中任一项所述的融合蛋白的方法，其中所述方法包括使具有蛋白酶切割序列的配体结合分子与其配体融合。[B-42]多核苷酸，其编码根据[B-1]至[B-28]中任一项所述的配体结合分子。[B-43]载体，其包含根据[B-42]所述的多核苷酸。[B-44]宿主细胞，其包含根据[B-42]所述的多核苷酸或根据[B-43]所述的载体。[B-45]用于生产根据[B-1]至[B-28]中任一项所述的配体结合分子的方法，其中所述方法包含培养根据[B-44]所述的宿主细胞。[B-46]根据[B-45]所述的用于生产配体结合分子的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[B-47]多核苷酸，其编码根据[B-30]至[B-34]中任一项所述的融合蛋白。[B-48]载体，其包含根据[B-46]所述的多核苷酸。[B-49]宿主细胞，其包含根据[B-46]所述的多核苷酸或根据[B-48]所述的载体。[B-50]用于生产根据[B-30]至[B-34]中任一项所述的融合蛋白的方法，其中所述方法包含培养根据[B-49]所述的宿主细胞。[B-51]根据[B-50]所述的用于生产融合蛋白的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[B-52]释放与配体结合分子结合的配体的方法，其中所述方法包括通过蛋白酶切割配体结合分子中包含的能够与配体结合的部分，其中所述部分具有选自以下的至少一个序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[B-53]从配体和配体结合分子的融合蛋白中释放配体的方法，其中所述方法包括通过蛋白酶切割融合蛋白中的配体结合分子中包含的部分，其中所述部分具有选自以下的至少一个序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[B-54]根据[B-53]所述的方法，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[B-55]根据[B-54]所述的方法，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[B-56]根据[B-54]或[B-55]所述的方法，其中所述接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的接头。[B-57]根据[B-53]至[B-56]中任一项所述的方法，其中在配体结合分子与配体融合的状态下，所述配体结合分子不进一步与不同的配体结合。[B-58]根据[B-52]至[B-57]中任一项所述的方法，其中所述配体结合分子在蛋白酶切割序列被切割的状态下与配体的结合比在蛋白酶切割序列未被切割的状态下配体结合分子与配体的结合弱。[B-59]根据[B-52]至[B-58]中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[B-60]根据[B-52]至[B-59]中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA和小鼠uPA的至少一种蛋白酶。[B-61]根据[B-52]至[B-60]中任一项所述的方法，其中第一柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的一端。[B-62]根据[B-61]所述的方法，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[B-63]根据[B-61]或[B-62]所述的方法，其中第二柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的另一端。[B-64]根据[B-63]所述的方法，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[B-65]根据[B-52]至[B-64]中任一项所述的方法，其中所述配体结合分子包含抗体VH、抗体VL和抗体恒定区。[B-66]根据[B-65]所述的方法，其中所述蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体恒定区内。[B-67]根据[B-66]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体重链恒定区的第118位氨基酸(根据EU编号)至抗体重链恒定区的第140位氨基酸(根据EU编号)的序列中的任意位置引入。[B-68]根据[B-66]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体轻链恒定区的第108位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体轻链恒定区的第131位氨基酸(根据Kabat编号)的序列中的任意位置引入。[B-69]根据[B-65]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体VH或抗体VL内。[B-70]根据[B-69]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在选自由以下组成的组中的序列中的任意位置引入：抗体VH中的序列，其跨越：从第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第16位氨基酸(根据Kabat编号)；从第40位氨基酸(根据Kabat编号)到第47位氨基酸(根据Kabat编号)；从第55位氨基酸(根据Kabat编号)到第69位氨基酸(根据Kabat编号)；从第73位氨基酸(根据Kabat编号)到第79位氨基酸(根据Kabat编号)；从第83位氨基酸(根据Kabat编号)到第89位氨基酸(根据Kabat编号)；从第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第99位氨基酸(根据Kabat编号)；和从第101位氨基酸(根据Kabat编号)到第113位氨基酸(根据Kabat编号)。[B-71]根据[B-69]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在选自由以下组成的组中的序列中的任意位置引入：抗体VL中的序列，其跨越：从第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第19位氨基酸(根据Kabat编号)；从第39位氨基酸(根据Kabat编号)到第46位氨基酸(根据Kabat编号)；从第49位氨基酸(根据Kabat编号)到第62位氨基酸(根据Kabat编号)；和从第96位氨基酸(根据Kabat编号)到第107位氨基酸(根据Kabat编号)。[B-72]根据[B-65]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头位于抗体恒定区和抗体VH之间的边界附近和/或抗体恒定区和抗体VL之间的边界附近。[B-73]根据[B-73]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体VH的第109位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体重链恒定区的第122位氨基酸(根据EU编号)的序列中的任意位置引入。[B-74]根据[B-72]所述的方法，其中蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头在跨越抗体VL的第104位氨基酸(根据Kabat编号)至抗体轻链恒定区的第113位氨基酸(根据Kabat编号)的序列中的任意位置引入。[B-75]根据[B-65]至[B-74]中任一项所述的方法，其中，所述配体结合分子中的抗体VL与抗体VH缔合，且其中所述缔合通过蛋白酶切割蛋白酶切割序列而被破坏。[B-76]根据[B-52]至[B-75]中任一项所述的方法，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述配体的生物学活性通过配体结合分子与配体的结合而被抑制。[B-77]根据[B-52]至[B-76]中任一项所述的方法，其中，所述配体是细胞因子或趋化因子。[B-78]根据[B-52]至[B-76]中任一项所述的方法，其中所述配体是选自白介素、干扰素、造血因子、TNF超家族、趋化因子、细胞生长因子和TGF-β家族的配体。[B-79]根据[B-52]至[B-78]中任一项所述的方法，其中，所述配体结合分子是IgG抗体。[C-1]根据[27]所述的多肽，其中所述多肽是能够结合配体的配体结合分子，其中所述配体结合分子包含单域抗体，其中所述单域抗体能够结合配体并被引入至少一个蛋白酶切割序列，并且其中与在蛋白酶切割序列未被切割的状态下配体结合分子与配体的结合与配体的结合相比，在蛋白酶切割序列被切割的状态下配体结合分子与配体的结合减弱。[C-2]根据[C-1]所述的配体结合分子，其中，所述配体在蛋白酶切割序列被切割的状态下从所述配体结合分子释放。[C-3]根据[C-1]或[C-2]所述的配体结合分子，其中，所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[C-4]根据[C-1]至[C-3]中任一项所述的配体结合分子，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA、和小鼠uPA的至少一种蛋白酶。[C-5]根据[C-1]至[C-4]中任一项所述的配体结合分子，其中第一柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的一端。[C-6]根据[C-5]所述的配体结合分子，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[C-7]根据[C-5]或[C-6]所述的配体结合分子，其中第二柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的另一端。[C-8]根据[C-7]所述的配体结合分子，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[C-9]根据[C-1]至[C-8]中任一项所述的配体结合分子，其中单域抗体是VHH、单域VH抗体或单域VL抗体。[C-10]根据[C-9]所述的配体结合分子，其中单域抗体是VHH或单域VH抗体，并且其中切割位点，或蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头，被引入在一个或多个位置处，所述一个或多个位置包含在一个或多个序列中，所述一个或多个序列选自单域抗体的以下序列：跨越单域抗体的第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第17位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第12位氨基酸(根据Kabat编号)到第17位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第31位氨基酸(根据Kabat编号)到第35b位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第40位氨基酸(根据Kabat编号)到第47位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第50位氨基酸(根据Kabat编号)到第65位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第55位氨基酸(根据Kabat编号)到第69位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第73位氨基酸(根据Kabat编号)到第79位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第83位氨基酸(根据Kabat编号)到第89位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第99位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第102位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；和跨越单域抗体的第101位氨基酸(根据Kabat编号)到第113位氨基酸(根据Kabat编号)的序列。[C-11]根据[C-9]所述的配体结合分子，其中单域抗体是单域VL抗体，并且其中切割位点，或蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头，被引入在一个或多个位置处，所述一个或多个位置包含在一个或多个序列中，所述一个或多个序列选自所述单域抗体的以下序列：跨越单域抗体的第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第19位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第24位氨基酸(根据Kabat编号)到第34位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第39位氨基酸(根据Kabat编号)到第46位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第49位氨基酸(根据Kabat编号)到第62位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第50位氨基酸(根据Kabat编号)到第56位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第89位氨基酸(根据Kabat编号)到第97位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；和跨越单域抗体的第96位氨基酸(根据Kabat编号)到第107位氨基酸(根据Kabat编号)的序列。[C-12]根据[C-1]至[C-11]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述配体的生物学活性通过单域抗体与配体的结合而被抑制。[C-13]根据[C-1]至[C-12]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述单域抗体对所述配体具有中和活性。[C-14]根据[C-1]至[C-13]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述配体结合分子仅包含包含切割位点或蛋白酶切割序列的单域抗体。[C-15]根据[C-1]至[C-14]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子还包含抗体Fc区。[C-16]根据[C-1]至[C-15]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子包含从N-末端到C-末端方向由单域抗体-抗体Fc区组成的一系列肽链。[C-17]根据[C-1]至[C-15]所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子是二聚体，所述二聚体包含由单域抗体-抗体铰链区-抗体Fc区组成的两个系列的肽链。[C-18]根据[C-15]至[C-17]所述的配体结合分子，其中所述抗体Fc区是包含选自SEQIDNO:18004-18007所示氨基酸序列中的一个序列的Fc区，或通过修饰这些Fc区获得的Fc区变体。[C-19]根据[C-1]至[C-18]中任一项所述的配体结合分子，其中，所述配体是细胞因子或趋化因子。[C-20]根据[C-1]至[C-19]中任一项所述的配体结合分子，其中所述配体是选自白介素、干扰素、造血因子、TNF超家族、趋化因子、细胞生长因子和TGF-β家族的配体。[C-21]根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子，其与配体结合。[C-22]根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子，其与配体融合。[C-23]根据[C-22]所述的配体结合分子，其中包含在配体结合分子中的单域抗体在配体结合分子与配体融合的状态下不进一步结合至不同的配体。[C-24]根据[C-22]或[C-23]所述的配体结合分子，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[C-25]根据[C-24]所述的配体结合分子，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[C-26]复合物，其由配体和根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子形成。[C-27]融合蛋白，其中配体与根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子融合。[C-28]根据[C-27]所述的融合蛋白，其中在配体结合分子与配体融合的状态下，单域抗体不进一步与不同的配体结合。[C-29]根据[C-27]或[C-28]所述的融合蛋白，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[C-30]根据[C-29]所述的融合蛋白，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[C-31]根据[C-29]或[C-30]所述的融合蛋白，其中配体、接头和配体结合分子在从N-末端到C-端的方向上以该顺序融合。[C-32]药物组合物，其包含根据[C-1]至[C-22]中任一项所述的配体结合分子。[C-33]药物组合物，其包含根据[C-1]至[C-21]中任一项所述的配体结合分子和配体。[C-34]药物组合物，其包含根据[C-26]所述的复合物。[C-35]药物组合物，其包含根据[C-27]至[C-31]中任一项所述的融合蛋白。[C-36]方法，其用于生产根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子。[C-37]根据[C-36]所述的生产方法，其中，所述方法包括将蛋白酶切割序列引入在包含单域抗体的配体结合分子中的单域抗体中。[C-38]用于生产根据[C-27]至[C-31]中任一项所述的融合蛋白的方法，其中所述方法包括使配体结合分子与能够与单域抗体结合的配体融合，所述配体结合分子含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体。[C-39]多核苷酸，其编码根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子。[C-40]载体，其包含根据[C-39]所述的多核苷酸。[C-41]宿主细胞，其包含根据[C-39]所述的多核苷酸或根据[C-40]所述的载体。[C-42]用于生产根据[C-1]至[C-20]中任一项所述的配体结合分子的方法，其中所述方法包含培养根据[C-41]所述的宿主细胞。[C-43]根据[C-42]所述的用于生产配体结合分子的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[C-44]多核苷酸，其编码根据[C-27]至[C-31]中任一项所述的融合蛋白。[C-45]载体，其包含根据[C-43]所述的多核苷酸。[C-46]宿主细胞，其包含根据[C-43]所述的多核苷酸或根据[C-45]所述的载体。[C-47]用于生产根据[C-27]至[C-31]中任一项所述的融合蛋白的方法，其中所述方法包含培养根据[C-46]所述的宿主细胞。[C-48]根据[C-47]所述的用于生产配体结合分子的方法，其中所述方法包括从培养物上清液中分离多肽。[C-49]释放与配体结合分子结合的配体的方法，其中所述方法包括通过蛋白酶切割配体结合分子中单域抗体包含的能够与配体结合的部分，其中所述部分具有选自以下的至少一个序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[C-50]从配体和配体结合分子的融合蛋白中释放配体的方法，其中所述方法包括通过蛋白酶切割配体结合分子中单域抗体包含的能够与配体结合的部分，其中所述部分具有选自以下的至少一个序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。[C-51]根据[C-50]所述的方法，其中所述配体结合分子通过接头与所述配体融合。[C-52]根据[C-51]所述的方法，其中所述接头不包含蛋白酶切割序列。[C-53]根据[C-51]或[C-52]所述的方法，其中所述接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的接头。[C-54]根据[C-50]至[C-53]中任一项所述的方法，其中在配体结合分子与配体融合的状态下，所述配体结合分子不进一步与不同的配体结合。[C-55]根据[C-49]至[C-54]中任一项所述的方法，其中与在蛋白酶切割序列未被切割的状态下配体结合分子与配体的结合相比，所述配体结合分子在蛋白酶切割序列被切割的状态下与配体的结合减弱。[C-56]根据[C-55]所述的方法，其中，所述配体在蛋白酶切割序列被切割的状态下从所述配体结合分子释放。[C-57]根据[C-55]或[C-56]所述的方法，其中，所述蛋白酶是蛋白裂解酶和/或尿激酶。[C-58]根据[C-55]至[C-57]中任一项所述的方法，其中所述蛋白酶是选自人MT-SP1、小鼠MT-SP1、人uPA和小鼠uPA的至少一种蛋白酶。[C-59]根据[C-55]至[C-58]中任一项所述的方法，其中第一柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的一端。[C-60]根据[C-59]所述的方法，其中所述第一柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[C-61]根据[C-59]或[C-60]所述的方法，其中第二柔性接头进一步连接至蛋白酶切割序列的另一端。[C-62]根据[C-61]所述的方法，其中所述第二柔性接头是由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头。[C-63]根据[C-55]至[C-62]中任一项所述的方法，其中单域抗体是VHH、单域VH抗体或单域VL抗体。[C-64]根据[C-63]所述的方法，其中单域抗体是VHH或单域VH抗体，并且其中切割位点，或蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头，被引入在一个或多个位置处，所述一个或多个位置包含在一个或多个序列中，所述一个或多个序列选自单域抗体的以下序列：跨越单域抗体的第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第17位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第12位氨基酸(根据Kabat编号)到第17位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第31位氨基酸(根据Kabat编号)到第35b位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第40位氨基酸(根据Kabat编号)到第47位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第50位氨基酸(根据Kabat编号)到第65位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第55位氨基酸(根据Kabat编号)到第69位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第73位氨基酸(根据Kabat编号)到第79位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第83位氨基酸(根据Kabat编号)到第89位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第99位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第95位氨基酸(根据Kabat编号)到第102位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；和跨越单域抗体的第101位氨基酸(根据Kabat编号)到第113位氨基酸(根据Kabat编号)的序列。[C-65]根据[C-63]所述的方法，其中单域抗体是单域VL抗体，并且其中切割位点，或蛋白酶切割序列，或蛋白酶切割序列和第一柔性接头，或蛋白酶切割序列、第一柔性接头和第二柔性接头，被引入在一个或多个位置处，所述一个或多个位置包含在一个或多个序列中，所述一个或多个序列选自单域抗体的以下序列：跨越单域抗体的第7位氨基酸(根据Kabat编号)到第19位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第24位氨基酸(根据Kabat编号)到第34位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第39位氨基酸(根据Kabat编号)到第46位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第49位氨基酸(根据Kabat编号)到第62位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第50位氨基酸(根据Kabat编号)到第56位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；跨越单域抗体的第89位氨基酸(根据Kabat编号)到第97位氨基酸(根据Kabat编号)的序列；和跨越单域抗体的第96位氨基酸(根据Kabat编号)到第107位氨基酸(根据Kabat编号)的序列。[C-66]根据[C-55]至[C-65]中任一项所述的方法，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述配体的生物学活性通过单域抗体与配体的结合而被抑制。[C-67]根据[C-55]至[C-66]中任一项所述的方法，其中所述配体是具有生物学活性的分子，并且其中所述单域抗体对所述配体具有中和活性。[C-68]根据[C-55]至[C-67]中任一项所述的方法，其中，所述配体结合分子仅包含包含切割位点或蛋白酶切割序列的单域抗体。[C-69]根据[C-55]至[C-68]中任一项所述的方法，其中所述配体结合分子还包含抗体Fc区。[C-70]根据[C-55]至[C-69]中任一项所述的方法，其中所述配体结合分子包含从N-末端到C-末端方向由单域抗体-抗体Fc区组成的一系列肽链。[C-71]根据[C-55]至[C-69]所述的方法，其中所述配体结合分子是二聚体，所述二聚体包含由单域抗体-抗体铰链区-抗体Fc区组成的两个系列的肽链。[C-72]根据[C-69]至[C-71]所述的方法，其中所述抗体Fc区是包含选自SEQIDNO:18004-18007所示氨基酸序列中的一个序列的Fc区，或通过修饰这些Fc区获得的Fc区变体。[C-73]根据[C-55]至[C-72]中任一项所述的方法，其中，所述配体是细胞因子或趋化因子。[C-74]根据[C-55]至[C-73]中任一项所述的方法，其中所述配体是选自白介素、干扰素、造血因子、TNF超家族、趋化因子、细胞生长因子和TGF-β家族的配体。附图说明[图1]图1说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽含有抗原结合结构域和携带部分。(A)多肽半衰期长，在抗原结合结构域和携带部分连接的状态下不与抗原结合。(B)当抗原结合结构域通过例如蛋白酶切割序列的切割而被释放并与抗原结合时，所释放的抗原结合结构域具有短的半衰期。[图2]图2说明了生产图1所示多肽的方法的实施方案。在该实施方案中，目标多肽是IgG样分子。(A)获得与靶抗原结合的单域抗体。(B)单域抗体代替IgG抗体的VH与VL缔合，从而抑制了单域抗体的抗原结合活性。(C)蛋白酶切割序列被引入到IgG抗体样分子的前体中，该分子被引入单域抗体。[图3]图3说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。该图中，多肽为IgG抗体样分子，对应于IgG抗体两个可变区的部分分别提供有抗原结合结构域。两个抗原结合结构域可具有相似或不同的抗原结合特异性。[图4]图4说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，连接的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域包含在多肽中。在该实例中，释放的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域形成双特异性抗原结合分子。(A)说明了未释放状态的多肽。抗原结合结构域的抗原结合活性被抑制。(B)图示了由抗原结合结构域和第二抗原结合结构域形成的双特异性抗原结合分子的释放。(C)例如针对T细胞表面抗原和肿瘤表面抗原的双特异性抗原结合分子被图示为释放的双特异性抗原结合分子的实例。[图5]图5说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是配体和抗配体抗体的融合蛋白。(A)蛋白酶切割序列包含在抗配体抗体中，并且配体在蛋白酶切割序列未被切割的状态下与抗配体抗体结合。(B)在蛋白酶切割序列被切割的状态下，配体和抗配体抗体的一部分从多肽中释放，并且配体变得能够与受体结合。[图6]图6说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是抗配体抗体。(A)蛋白酶切割序列包含在抗配体抗体中，并且抗配体抗体能够在蛋白酶切割序列未被切割的状态下与配体结合。(B)在蛋白酶切割序列被切割的状态下，抗配体抗体的配体结合活性减弱，并且配体从抗配体抗体解离并变得能够与受体结合。[图7]图7说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是包含蛋白酶切割序列的单域抗体。单域抗体在包含在单域抗体中的蛋白酶切割序列未被切割的状态下能够与配体结合，而在蛋白酶切割序列被切割的状态下，单域抗体被切割并且不能与配体结合，配体被释放。[图8]图8说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是由配体和包含蛋白酶切割序列的单域抗体形成的融合蛋白。融合蛋白中的单域抗体在单域抗体中包含的蛋白酶切割序列未被切割的状态下能够与融合蛋白中的配体结合，而在蛋白酶切割序列被切割的状态下，单域抗体被切割并且不能与配体结合，并且包含配体的融合蛋白的一部分被释放。[图9]图9说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是二聚体蛋白，其包含含蛋白酶切割序列的单域抗体-抗体铰链区-抗体Fc区。[图10]图10说明了本公开的包含蛋白酶切割序列的多肽的实例。在该图中，多肽是配体和二聚体蛋白的融合蛋白，所述二聚体蛋白包含含有蛋白酶切割序列的单域抗体-抗体铰链区-抗体Fc区。[图11]图11示出了经蛋白酶处理和未经蛋白酶处理的配体结合分子的SDS-PAGE结果。虽然不包含蛋白酶切割序列的对照分子无论是用蛋白酶处理还是未处理都在相同位置显示条带(泳道12和13)，但引入相应蛋白酶切割序列的配体结合分子显示仅在蛋白酶处理后产生的新条带，表明含有引入各自蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子被蛋白酶处理切割。[图12]图12示出了评估经蛋白酶处理的和未经蛋白酶处理的配体结合分子与IL-6R的结合的实时结合图。每个图的标题是被测样品的名称。纵轴表示配体结合分子与IL-6R的相对结合，横轴示出了时间(s)。灰线示出未经蛋白酶处理的样品数据，黑线示出经蛋白酶处理的样品数据。[图13]图13示出了经蛋白酶处理和未经蛋白酶处理的融合蛋白的SDS-PAGE结果。虽然不包含蛋白酶切割序列的对照分子无论用蛋白酶处理还是未处理都在相同位置显示条带，但是包含含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的各个融合蛋白显示了仅在蛋白酶处理后产生的新条带，因此表明包含含有引入了每个蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白被蛋白酶处理切割。[图14]图14示出了图13的续。[图15]图15示出了图14的续。[图16]图16示出了图15的续。[图17]图17示出了评估含有经蛋白酶处理的或未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液中存在的游离IL-6R与IL6R90-bio的结合的实时图。每个图的标题是被测样品的名称。纵轴表示IL-6R与含有生物素化抗IL-6R单域抗体的分子(IL6R90-bio)的相对结合，横轴示出时间(s)。灰线示出未经蛋白酶处理的样品数据，黑线示出经蛋白酶处理的样品数据。[图18]图18示出了图17的继续。[图19]图19示出了经蛋白酶处理和未经蛋白酶处理的融合蛋白的SDS-PAGE结果。[图20]图20示出了显示包含经蛋白酶处理的或未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液中存在的游离人PD-1与含生物素化抗PD-1单域抗体的分子(PD1-bio)的结合的实时图。每个图的标题是被测样品的名称。纵轴表示PD1与PD1-bio的相对结合，横轴示出时间(s)。灰线示出未经蛋白酶处理的样品数据，黑线示出经蛋白酶处理的样品数据。具体实施方式氨基酸在本说明书中，每个氨基酸由单字母代码或三字母代码或两者表示，例如由Ala/A,Leu/L,Arg/R,Lys/K,Asn/N,Met/M,Asp/D,Phe/F,Cys/C,Pro/P,Gln/Q,Ser/S,Glu/E,Thr/T,Gly/G,Trp/W,His/H,Tyr/Y,Ile/I,或Val/V表示。天然氨基酸在本说明书中，“天然氨基酸”是指蛋白质中含有的20种氨基酸。具体而言，该术语是指Gly,Ala,Ser,Thr,Val,Leu,Ile,Phe,Tyr,Trp,His,Glu,Asp,Gln,Asn,Cys,Met,Lys,Arg和Pro。肽如本文所用，术语“肽”是指化合物，其中两个或多个氨基酸分子在一个分子的氨基和另一个分子的羧基之间通过提取水分子连接。肽中包含的氨基酸数量没有限制。因此，寡肽和多肽都包括在肽中。多肽本公开中使用的术语多肽通常是指长度为约10个氨基酸或更多的肽和蛋白质。当从N-末端到C-末端通过肽键连接的氨基酸链被认为是一系列肽链时，根据本公开的多肽可以是复合蛋白，其中多个系列的肽链由相互作用，例如SS键、疏水相互作用和离子键形成。此外，本公开的多肽通常是由人工设计的序列组成的多肽，但并不特别限于此，例如可以是合成多肽、重组多肽等。此外，上述多肽的片段也包括在本公开的多肽中。分离的多肽本公开的多肽可以指分离的多肽。“分离的”多肽是与其天然环境成分分离的多肽。在一些实施方案中，多肽纯化至纯度超过95％或99％，例如通过电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱法(例如，离子交换色谱法或反相HPLC)确定的。当多肽是抗体时，参见，例如，Flatman等人，J.Chromatogr.B848:79-87(2007)的评价抗体纯度的方法综述。蛋白酶如本文所用，术语“蛋白酶”是指水解肽键的酶，例如内肽酶或外肽酶，通常是指内肽酶。蛋白酶的具体实例包括但不限于半胱氨酸蛋白酶(包括组织蛋白酶家族B、L、S等)、天冬氨酰蛋白酶(组织蛋白酶D、E、K、O等)、丝氨酸蛋白酶(包括蛋白裂解酶包括MT-SP1)、组织蛋白酶A和G、凝血酶、纤溶酶、尿激酶(uPA)、组织纤溶酶原激活物(tPA)、弹性蛋白酶、蛋白酶3、凝血酶、激肽释放酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶)、金属蛋白酶(金属蛋白酶(MMP1-28))包括膜结合形式(MMP14-17和MMP24-25)和分泌形式(MMP1-13、MMP18-23和MMP26-28)、解联蛋白和金属蛋白酶(ADAM)、带有血小板反应蛋白基序的解联蛋白和金属蛋白酶(ADAMTS)、跨膜肽酶(跨膜肽酶α和跨膜肽酶β)、CD10(CALLA)、前列腺特异抗原(PSA)、legumain、TMPRSS3、TMPRSS4、人嗜中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)、β分泌酶(BACE)、成纤维细胞活化蛋白α(FAP)、粒酶B、胍基苯甲酸酶(GB)、hepsin、中性溶酶、NS3/4A、HCV-NS3/4、钙蛋白酶、ADAMDEC1、肾素、组织蛋白酶C、组织蛋白酶V/L2、组织蛋白酶X/Z/P、cruzipain、otubain2、激肽释放酶相关肽酶(KLK(KLK3、KLK4、KLK5、KLK6、KLK7、KLK8、KLK10、KLK11、KLK13和KLK14))、骨形态发生蛋白1(BMP-1)、活化蛋白C、凝血相关蛋白酶(因子VIIa、因子IXa、因子Xa、因子XIa和因子XIIa)、HtrA1、乳铁蛋白、marapsin、PACE4、DESC1、二肽基肽酶4(DPP-4)、TMPRSS2、组织蛋白酶F、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L2、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、粒酶A、Gepsin钙蛋白酶2、谷氨酸羧肽酶2、AMSH样蛋白酶、AMSH、γ分泌酶、抗纤溶酶裂解酶(APCE)、decysin1、N-乙酰化α-连接的酸性二肽酶样1(NAALADL1)，和弗林蛋白酶。本公开的蛋白酶可以是与患病组织密切相关的蛋白酶。例如，它可以指以下任何一种蛋白酶：(1)在患病组织中的表达水平高于在正常组织中的表达水平的蛋白酶；(2)在患病组织中比在正常组织中具有更高活性的蛋白酶；(3)在患病组织细胞中的表达水平高于在正常细胞中的表达水平的蛋白酶；和(4)在患病组织的靶细胞中比在正常细胞中具有更高活性的蛋白酶。患病组织的实例包括癌组织和炎症组织。术语“癌组织”是指含有至少一个癌细胞的组织。因此，考虑到例如癌组织含有癌细胞和血管，意味着有助于形成含有癌细胞和内皮细胞的肿瘤块的每种细胞类型。在本说明书中，肿瘤块是指肿瘤组织的病灶。术语“肿瘤”通常用于表示良性肿瘤或恶性肿瘤。在本说明书中，“炎症组织”的实例包括以下：类风湿性关节炎或骨关节炎的关节，支气管哮喘或COPD中的肺(肺泡)，炎症性肠病、克罗恩病或溃疡性结肠炎中的消化器官，肝、肾或肺纤维化中的纤维化组织，在器官移植中表现出排斥反应的组织，动脉硬化或心力衰竭中的血管或心脏(心肌)，代谢综合征中的内脏脂肪，特应性皮炎和其他皮炎中的皮肤组织，和椎间盘突出或慢性腰痛中的脊神经。尿激酶(uPA)尿激酶(uPA)，也称为尿激酶型纤溶酶原激活物，是一种胞外丝氨酸蛋白酶。术语“尿激酶”、“尿激酶型纤溶酶原激活物”和“uPA”在本文中可互换使用，并且包括可以源自任何优选生物体的任何uPA，其是天然存在的，其是内源性产生的，和/或是重组形式，只要它具有丝氨酸蛋白酶活性。例如，在本公开的一个实施方案中，uPA呈双链活性形式(tc-uPA)。尿激酶进一步包括人uPA和源自不同物种的uPA，例如哺乳动物uPA，包括来自灵长类动物(例如黑猩猩、食蟹猴或恒河猴)；啮齿动物(例如小鼠或大鼠)；兔子(例如兔子)；和偶蹄动物(例如牛、羊、猪或骆驼)的uPA。术语“尿激酶型纤溶酶原激活物”和“uPA”还包括重组产生的uPA，包括“基因重组技术产生的”任何uPA，包括但不限于在哺乳动物细胞系统或细菌或酵母中表达的蛋白质。尿激酶(uPA)被认为与癌组织高度相关，尿激酶(uPA)可切割的肽序列在癌组织中的切割频率高于正常组织。蛋白裂解酶(Matriptase)蛋白裂解酶是一种丝氨酸蛋白酶。本公开的蛋白裂解酶包括可源自任何优选生物体的任何蛋白裂解酶，其是天然存在的、内源性产生的和/或以重组形式存在的，只要其具有丝氨酸蛋白酶活性。蛋白裂解酶进一步包括人蛋白裂解酶和源自不同物种的蛋白裂解酶，例如哺乳动物蛋白裂解酶，包括来自灵长类动物(例如，黑猩猩、食蟹猴或恒河猴)；啮齿动物(例如小鼠或大鼠)；兔子(例如兔子)；或偶蹄动物(例如牛、羊、猪或骆驼)的蛋白裂解酶。蛋白裂解酶进一步包括重组产生的蛋白裂解酶，其包括“通过基因重组技术产生”的任何蛋白裂解酶，包括但不限于在哺乳动物细胞系统、或细菌或酵母中表达的蛋白质。蛋白裂解酶包括MT-SP1，并且MT-SP1包括任何MT-SP1，其可以源自任何优选的生物体，其是天然存在的、内源性产生的和/或是重组形式，只要它具有丝氨酸蛋白酶活性。MT-SP1包括人MT-SP1和来自不同物种的MT-SP1，例如哺乳动物MT-SP1，包括来自灵长类动物(例如黑猩猩、食蟹猴或恒河猴)；啮齿动物(例如小鼠或大鼠)；兔子(例如兔子)；或偶蹄动物(例如牛、羊、猪或骆驼)的MT-SP1。MT-SP1还包括重组产生的MT-SP1，包括“基因重组技术产生”的任何MT-SP1，包括但不限于哺乳动物细胞系统或细菌或酵母中表达的蛋白质。蛋白裂解酶(包括MT-SP1)被认为与癌组织高度相关，蛋白裂解酶(包括MT-SP1)可切割的肽序列在癌组织中的切割频率高于正常组织。由于人MT-SP1和小鼠MT-SP1的序列相当相似，因此它们对相同底物的酶活性被认为是相似的。通过蛋白酶确认切割的方法MolCellProteomics.2014Jun；13(6):1585-97.doi:10.1074/mcp.M113.033308.Epub2014年4月4日中描述的方法是作为评估本申请说明书中记载的蛋白酶对蛋白酶底物或蛋白酶切割序列的切割的方法的实例。待评估的蛋白酶底物或蛋白酶切割序列固定在肽阵列上，用含有待评估蛋白酶的溶液处理肽阵列，切割比率可使用从芯片测得的荧光值如下计算：蛋白酶的切割比率(蛋白水解活性比：PAR)＝仅用PBS处理时的荧光(RFU)/用含蛋白酶溶液处理时的荧光(RFU)可以适当地选择评估使用的蛋白酶的种类和浓度、处理温度和处理时间。例如可以使用含1000nM人uPA的PBS、含1000nM小鼠uPA的PBS、含500nM人MT-SP1的PBS或含500nM小鼠MT-SP1的PBS，37℃处理1小时。此外，可以使用血清(包括人血清、小鼠血清)代替含蛋白酶的溶液来处理肽阵列，并且可以使用从芯片测量的荧光值如下计算切割比率：血清的切割比率(蛋白水解活性比：PAR)＝仅用PBS处理时的荧光(RFU)/用血清处理时的荧光(RFU)可以适当地选择评估使用的血清的种类和浓度、处理温度和处理时间。例如，稀释至80％浓度的人血清可用作处理溶液，37℃过夜处理。如本文所用，短语“不被血清切割”可以指根据上述方法测量和计算的血清切割比为1.5或更小，或血清切割比低于SEQIDNO:4中所示肽的切割比，如根据上述方法测量和计算的。作为定性确认多肽中包含的蛋白酶切割序列是否被蛋白酶切割的方法，可以对含有包含蛋白酶切割序列的多肽的溶液进行SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)来确定片段的分子量，从而允许确认。切割也可以通过比较经蛋白酶处理的和未经蛋白酶处理的多肽之间的分子量来确认。在本说明书中，术语“切割的”是指在蛋白酶改变蛋白酶切割序列和/或蛋白酶切割序列处的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键还原后多肽被破坏的状态。在本说明书中，术语“未切割的”是指在不存在蛋白酶切割序列的蛋白酶切割和/或不存在蛋白酶切割序列处的半胱氨酸-半胱氨酸二硫键的还原的情况下，多肽中蛋白酶切割序列两侧的部分连接的状态。此外，蛋白酶处理后的切割片段可以通过电泳如SDS-PAGE分离并定量以评价蛋白酶切割序列和引入了蛋白酶切割序列的分子的切割比率。评估其中引入了蛋白酶切割序列的分子的切割比率的方法的非限制性实施方案包括以下方法。例如，当使用重组人u-纤溶酶原激活物/尿激酶(人uPA、huPA)(R&DSystems；1310-SE-010)或重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(人MT-SP1、hMT-SP1)(R&DSystems；3946-SE-010)评估其中引入了蛋白酶切割序列的抗体变体的切割比率时，将100μg/mL的抗体变体在37℃时与PBS中的40nMhuPA或3nMhMT-SP1反应1小时，然后进行毛细管电泳免疫分析。毛细管电泳免疫测定可以使用Wes(ProteinSimple)进行，但本方法不限于此。作为毛细管电泳免疫测定的备选方法，可以进行SDS-PAGE等用于分离，然后用蛋白质印迹法检测。本方法不限于这些方法。在切割之前和之后，可以使用抗人λ链HRP标记的抗体(abcam；ab9007)检测轻链，但可以使用任何可以检测切割片段的抗体。用Wes软件(SW指南(CompassforSW)；ProteinSimple)输出蛋白酶处理后得到的各峰面积，可用下式确定抗体变体的切割比率(％)：(切割的轻链峰面积)x100/(切割的轻链峰面积 未切割的轻链峰面积)如果在蛋白酶处理前后可检测到蛋白质片段，则可以确定切割比率。不仅可以确定抗体变体的切割比率，还可以确定其中引入了蛋白酶切割序列的各种蛋白质分子的切割比率。已经引入蛋白酶切割序列的分子的体内切割比率可以通过将分子施用于动物并检测血液样品中的施用分子来确定。例如，将引入了蛋白酶切割序列的抗体变体施用于小鼠，并从它们的血液样本中收集血浆。通过本领域技术人员已知的方法使用DynabeadsProteinA(Thermo；10001D)从血浆中纯化抗体，然后进行毛细管电泳免疫测定以评估抗体变体的蛋白酶切割比率。毛细管电泳免疫测定可以使用Wes(ProteinSimple)进行，但本方法不限于此。作为毛细管电泳免疫测定的备选方法，可以进行SDS-PAGE等用于分离，然后用蛋白质印迹法检测。本方法不限于这些方法。从小鼠收集的抗体变体的轻链可以使用抗人λ链HRP标记的抗体(abcam；ab9007)进行检测，但可以使用可以检测切割片段的任何抗体。一旦使用Wes软件(SW指南；ProteinSimple)输出毛细管电泳免疫测定获得的每个峰的面积，剩余轻链的比例可以计算为[轻链的峰面积]/[重链的峰面积]以确定在小鼠体内未切割的全长轻链的比例。如果可检测到从活生物体收集的蛋白质片段，则可以确定体内切割效率。不仅可以确定抗体变体的切割比率，还可以确定其中引入了蛋白酶切割序列的各种蛋白质分子的切割比率。通过上述方法计算切割比率，例如可以比较引入不同切割序列的抗体变体的体内切割比率，以及比较不同动物模型例如正常小鼠模型和肿瘤移植小鼠模型之间的单一抗体变体的切割比率。蛋白酶底物本公开的一方面涉及蛋白酶底物。在一个实施方案中，蛋白酶底物是指具有被蛋白酶作用水解的氨基酸序列的肽或多肽。在另一个实施方案中，蛋白酶底物是长度为约5-15个氨基酸的肽。本公开的蛋白酶底物可以以约0.001至1500×104M-1S-1或至少0.001,0.005,0.01,0.05,0.1,0.5,1,2.5,5,7.5,10,15,20,25,50,75,100,125,150,200,250,500,750,1000,1250或1500x104M-1S-1的速率被蛋白酶特异性地修饰(切割)。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的蛋白酶切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的人uPA切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物被人uPA的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被人MT-SP1的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物被小鼠uPA的切割比率为1或更多、1.1或更多、1.2或更多、1.3或更多、1.4或更多、1.5或更多、1.6或更多、1.7或更多、1.8或更多、1.9或更多、2或更多、2.5或更多、3或更多、3.5或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物被小鼠MT-SP1的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被人uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、或4或更多。在这些实施方案中，当人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算人uPA的切割比率与人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.5或更多、或2.6或更多。在这些实施方案中，当人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被小鼠uPA的切割比率与被人血清切割比率的比值为0.6或更多、0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.1或更多、1.2或更多、1.3或更多、1.4或更多、1.5或更多、1.6或更多、1.7或更多、1.8或更多、1.9或更多、或2或更多。在这些实施方案中，当被人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被小鼠uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1切割比率与被人血清切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被小鼠MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.5或更多、或2.6或更多。在这些实施方案中，当人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被小鼠MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物不被人血清切割。举例来说，本公开的蛋白酶底物的被人血清切割比率为1.5或以下。再举一个具体的例子，本公开的蛋白酶底物的被人血清切割比率低于SEQIDNO:4所示肽的被人血清的切割比率。作为进一步的具体实例，例如在以下任何序列中示出的肽可用作通过蛋白酶的作用水解的蛋白酶底物：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。作为另一个具体实例，显示具有由从N-末端的顺序为“选自下列A组的序列-选自下列B组的序列”组成的序列的肽也可用作通过蛋白酶的作用水解的蛋白酶底物：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。本公开的蛋白酶底物可以用作例如文库，从中可以选择具有适合目的的特性蛋白酶底物以参入多肽中。具体地，为了通过位于损伤中的蛋白酶选择性地切割多肽，可以评估底物对该蛋白酶的敏感性。当体内施用多肽时，该分子可能在到达损伤之前与各种蛋白酶接触。因此，该分子应优选对定位于损伤处的蛋白酶具有敏感性并且对其他蛋白酶也应具有尽可能高的抗性。为了根据目的选择所需的蛋白酶底物，可以预先综合分析每种蛋白酶底物对各种蛋白酶的敏感性，以发现其蛋白酶抗性。根据获得的蛋白酶抗性谱，可以找到具有必要灵敏度和抗性的蛋白酶底物。或者，已参入蛋白酶底物的多肽在到达损伤之前不仅经历蛋白酶的酶促作用，而且经历各种环境应激，例如pH变化、温度和氧化/还原应激。根据蛋白酶底物对这些外部因素的抗性的比较信息，可以选择具有所需性质的蛋白酶底物。蛋白酶切割序列一方面，本公开涉及蛋白酶切割序列。蛋白酶切割序列是当多肽在水溶液中被蛋白酶水解时被蛋白酶特异性识别的特定氨基酸序列。在本公开中，蛋白酶切割序列可被称为可被蛋白酶切割的肽序列。本公开的蛋白酶切割序列可以以约0.001至1500×104M-1S-1或至少0.001,0.005,0.01,0.05,0.1,0.5,1,2.5,5,7.5,10,15,20,25,50,75,100,125,150,200,250,500,750,1000,1250,或1500x104M-1S-1的速率被蛋白酶特异性地修饰(切割)。例如，以下序列均可用作蛋白酶切割序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中所示的序列。本公开还涉及这些序列作为蛋白酶切割序列的用途。例如，从N-末端开始依次由“选自下述A组的序列-选自下述B组的序列”构成的序列都可用作蛋白酶切割序列。本公开还涉及这些序列作为蛋白酶切割序列的用途：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。在某些实施方案中，蛋白酶切割序列与抗体连接或通过其他方式与其附接。例如，蛋白酶切割序列用于将一种或多种试剂与结合预定靶标的抗体连接，使得当蛋白酶切割序列暴露于蛋白酶，即蛋白裂解酶和/或uPA时，它被切割并且试剂从抗体中释放出来。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的蛋白酶切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被人uPA的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被人MT-SP1的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被小鼠uPA的切割比率，在某些实施方案中，本公开的蛋白酶底物的被小鼠uPA的切割比率为1或更多、1.1或更多、1.2或更多、1.3或更多、1.4或更多、1.5或更多、1.6或更多、1.7或更多、1.8或更多、1.9或更多、2或更多、2.5或更多、3或更多、3.5或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1的切割比率。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被小鼠MT-SP1的切割比率为1.5或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、3.9或更多、或4或更多。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人uPA切割比率与被人血清切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被人uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.6或更多、2.8或更多、3或更多、3.2或更多、3.4或更多、3.6或更多、3.8或更多、或4或更多。在这些实施方案中，当被人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被人uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被人MT-SP1切割比率与被人血清切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被人MT-SP1切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.5或更多、或2.6或更多。在这些实施方案中，当被人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被人MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠uPA切割比率与被人血清切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被小鼠uPA的切割比率与被人血清切割比率的比值为0.6或更多、0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.1或更多、1.2或更多、1.3或更多、1.4或更多、1.5或更多、1.6或更多、1.7或更多、1.8或更多、1.9或更多、或2或更多。在这些实施方案中，当被人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被小鼠uPA的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列比包含SEQIDNO:1、2和3的任一项序列的蛋白酶底物具有更高的被小鼠MT-SP1切割比率与被人血清切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列的被小鼠MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值为0.7或更多、0.8或更多、0.9或更多、0.95或更多、1或更多、1.2或更多、1.4或更多、1.6或更多、1.8或更多、2或更多、2.2或更多、2.4或更多、2.5或更多、或2.6或更多。在这些实施方案中，当被人血清的切割比率为1或更小时，将其转换为1后，可用于计算被小鼠MT-SP1的切割比率与被人血清的切割比率的比值。在某些实施方案中，本公开的蛋白酶切割序列不被人血清切割。举例来说，本公开的蛋白酶切割序列的被人血清切割比率为1.5或以下。再举一个具体的例子，本公开的蛋白酶底物的被人血清切割比率低于SEQIDNO:4所示肽的被人血清切割比率。本公开的蛋白酶切割序列可例如在参入多肽后用作文库，用于选择具有适合于目的的特性的序列。具体而言，为了通过位于疾病病灶中的蛋白酶选择性切割多肽，可以评估其对蛋白酶的敏感性。多肽被施用至生物体后，与各种蛋白酶接触后可到达病灶。因此，希望多肽对定位于疾病病灶的蛋白酶敏感，同时尽可能对其他蛋白酶具有抗性。为了根据预期目的选择所需的蛋白酶切割序列，可以对每个蛋白酶切割序列对多种蛋白酶的敏感性进行初步详尽分析，从而了解该序列的蛋白酶抗性。基于如此获得的蛋白酶抗性谱，可以鉴定具有所需敏感性和抗性的蛋白酶切割序列。或者，引入蛋白酶切割序列的多肽不仅在经历蛋白酶的酶促作用之后，而且在经历各种环境应激，例如pH变化、温度以及氧化和还原应激之后，都会到达疾病的病灶。对于这些外部因素，也可以根据与各蛋白酶切割序列的抗性比较相关的信息，根据预期目的选择具有所需特性的蛋白酶切割序列。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列可以被至少蛋白裂解酶切割。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列可以被至少MT-SP1切割。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列可以被至少uPA切割。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列可以被至少蛋白裂解酶和uPA切割。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列可以被至少MT-SP1和uPA切割。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列是蛋白裂解酶和/或uPA的底物，并且该底物对至少其他蛋白酶的切割具有抗性。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列是蛋白裂解酶和/或uPA的底物，并且该底物对至少纤溶酶的切割具有抗性。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列是蛋白裂解酶和/或uPA的底物，并且该底物对至少组织纤溶酶原激活物(tPA)的切割具有抗性。在一些实施方案中，蛋白酶切割序列是蛋白裂解酶和/或uPA的底物，并且该底物对至少人血清的切割具有抗性。氨基酸改变对于多肽的氨基酸序列中氨基酸的改变，可以适当采用本领域已知的方法例如定点诱变(Kunkeletal.(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1985)82,488-492))或重叠延伸PCR。也可以采用本领域已知的多种方法作为用天然氨基酸以外的氨基酸取代氨基酸的改变方法(Annu.Rev.Biophys.Biomol.Struct.(2006)35,225-249；和Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2003)100(11),6353-6357)。例如，也优选使用含有tRNA的无细胞翻译系统(CloverDirect(蛋白表达(ProteinExpress)))，其中非天然氨基酸与作为终止密码子的UAG密码子(琥珀密码子)互补的琥珀抑制tRNA结合。在本说明书中，用于表示氨基酸改变位点的术语“和/或”意在包括其中“和”和“或”适当组合的每一种组合。具体而言，例如，短语“第37、45和/或47位的氨基酸被取代”包括以下氨基酸改变的变体：(a)位置37，(b)位置45，(c)位置47，(d)位置37和45，(e)位置37和47，(f)位置45和47，和(g)位置37、45和47。在本说明书中，将改变前后的氨基酸的单字母代码或三字母代码写在代表特定位置的数字之前和之后的表达可以适当地用于表示氨基酸改变。例如，用于取代抗体可变区中包含的氨基酸的改变F37V或Phe37Val代表在由Kabat编号定义的第37位Phe被Val取代。具体地，数字代表由Kabat编号定义的氨基酸位置；数字前写的氨基酸的单字母代码或三字母代码表示取代前的氨基酸；数字后面的氨基酸的单字母代码或三字母代码表示取代后的氨基酸。同样地，用于取代抗体恒定区中包含的Fc区中的氨基酸的改变P238A或Pro238Ala表示用Ala取代EU编号定义的238位的Pro。具体地，数字表示由EU编号定义的氨基酸位置；数字前写的氨基酸的单字母代码或三字母代码表示取代前的氨基酸；数字后面的氨基酸的单字母代码或三字母代码表示取代后的氨基酸。将氨基酸序列A“插入”到氨基酸序列B中，是指将氨基酸序列B分为两部分，没有缺失，并将两部分用氨基酸序列A连接起来(即产生“氨基酸序列B的前半部分-氨基酸序列A-氨基酸序列B的后半部分”这样的氨基酸序列)。将氨基酸序列A“引入”氨基酸序列B是指将氨基酸序列B分成两部分，并将这两部分用氨基酸序列A连接起来。这不仅包括如上所述将氨基酸序列A“插入”到氨基酸序列B中，还包括在缺失氨基酸序列B的一个或多个氨基酸残基，包括与氨基酸序列A相邻的氨基酸残基后，将两部分用氨基酸序列A连接起来(即用氨基酸序列A替换氨基酸序列B的一部分)。另外，在本说明书中，术语“A位点与B位点之间的边界附近”是指在多肽中A位点与B位点的连接位点前后，对A位点和/或B位点的二级结构影响不大的位点。抗体和抗体片段在本说明书中，术语“抗体”以最广泛的含义使用并涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)和抗体片段，只要该抗体表现出所需的抗原结合活性。“抗体片段”是指除完整抗体之外的分子，包括完整抗体的一部分并结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、双抗体、线性抗体、单链抗体分子(例如，scFv)和由抗体片段形成的多特异性抗体。术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本说明书中可彼此互换使用，是指具有与天然抗体结构基本相似的结构或具有含有本说明书中定义的Fc区的重链的抗体。本说明书包括其中抗体包含蛋白酶切割序列的实施方案，无论是否包含蛋白酶切割序列，其都可以表述为“抗体”。可变区术语“可变区”或“可变结构域”是指参与抗体与其抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。通常，抗体重链和轻链可变结构域(分别为VH和VL)具有相似的结构，并且每个结构域包含4个保守构架区(FR)和3个互补决定区(CDR)(参见，例如Kindtetal.,KubyImmunology,6thed.,W.H.FreemanandCo.,page91(2007))。一个VH或VL结构域应该足以赋予抗原结合特异性。CDR本说明书中使用的术语“互补决定区”或“CDR”在序列中是高变的，和/或形成结构决定的环(“高变环”)，和/或指抗原接触残基(“抗原接触”)或抗体可变结构域或单域抗体的每个区域。通常，抗体包含6个CDR：三个在VH(H1、H2和H3)中，三个在VL(L1、L2和L3)中。在本说明书中，示例性抗体CDR包括以下：(a)出现在氨基酸残基26至32(L1)，50至52(L2)，91至96(L3)，26至32(H1)，53至55(H2)和96至101(H3)处的高变环(ChothiaandLesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；(b)出现在氨基酸残基24至34(L1)，50至56(L2)，89至97(L3)，31至35b(H1)，50至65(H2)和95至102(H3)处的CDR(Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))；(c)出现在氨基酸残基27c至36(L1)，46至55(L2)，89至96(L3)，30至35b(H1)，47至58(H2)和93至101(H3)处的抗原接触(MacCallumetal.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包含CDR氨基酸残基46至56(L2)，47至56(L2)，48至56(L2)，49至56(L2)，26至35(H1)，26至35b(H1)，49至65(H2)，93至102(H3)和94至102(H3)。通常，单域抗体包含三个CDR：CDR1、CDR2和CDR3。当单域抗体为VHH或单域VH抗体时，单域抗体CDR示例性地包含以下：(a)出现在氨基酸残基26至32(CDR1),53至55(CDR2)，和96至101(CDR3)处的高变环(ChothiaandLesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；(b)出现在氨基酸残基31至35b(CDR1),50至65(CDR2)，和95至102(CDR3)处的CDR(Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))；(c)出现在氨基酸残基30至35b(CDR1),47至58(CDR2)，和93至101(CDR3)处的抗原接触(MacCallumetal.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包含CDR氨基酸残基26至35(CDR1)、26至35b(CDR1)、49至65(CDR2)、93至102(CDR3)或94至102(CDR3)。当单域抗体为单域VL抗体时，单域抗体CDR示例性地包含以下：(a)出现在氨基酸残基26至32(CDR1),50至52(CDR2)，和91至96(CDR3)处的高变环(ChothiaandLesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987))；(b)出现在氨基酸残基24至34(CDR1)，50至56(CDR2)，和89至97(CDR3)处的CDR(Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))；(c)出现在氨基酸残基27c至36(CDR1),46至55(CDR2)，和89至96(CDR3)处的抗原接触(MacCallumetal.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和(d)(a)、(b)和/或(c)的组合，包含CDR氨基酸残基46至56(CDR2)、47至56(CDR2)、48至56(CDR2)或49至56(CDR2)。在本说明书中，可变结构域中的CDR残基和其他残基(例如，FR残基)根据上述Kabat等编号，除非另有说明。FR术语“构架”或“FR”是指除互补决定区(CDR)残基之外的可变结构域残基或单域抗体残基。可变结构域或单域抗体中的FR通常由4个FR结构域组成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，CDR和FR的序列通常按以下顺序出现在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。在单域抗体中，CDR和FR的序列通常按以下顺序出现：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。“人共有构架”是代表一系列人免疫球蛋白VL或VH构架序列中最常见的氨基酸残基的构架。通常，所述人免疫球蛋白VL或VH序列的系列来自可变结构域序列的亚组。通常，序列亚组是Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NIHPublication91-3242,BethesdaMD(1991),vols.1-3中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，该亚组是上述Kabat等人的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是上述Kabat等人的亚组III。恒定区在本说明书中，术语“恒定区”或“恒定结构域”是指抗体中除可变区之外的部分。例如，IgG抗体是约150,000Da的异源四聚体糖蛋白，由通过二硫键连接的两条相同的轻链和两条相同的重链构成。每条重链从N末端到C末端都有可变区(VH)，也称为可变重链结构域或重链可变结构域，接着是重链恒定区(CH)，其包含CH1结构域、铰链区、CH2结构域和CH3结构域。同样，每条轻链从N末端到C末端都有可变区(VL)，也称为可变轻链结构域或轻链可变结构域，然后是恒定轻链(CL)结构域。根据其恒定结构域的氨基酸序列，天然抗体的轻链可归因于称为κ(κ)和λ(λ)的两种类型之一。术语“包含/包含恒定区”可以包括整个恒定区或可以包括恒定区的一部分。除非本文另有特别说明，抗体可变区和抗体轻链和重链恒定区中氨基酸残基的编号是根据Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD1991中描述的Kabat编号系统。抗体的“类别”是指抗体重链所携带的恒定结构域或恒定区的类型。抗体有5大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些类别中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别免疫球蛋白的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。Fc区在本说明书中，术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C-末端区域，包括至少一部分恒定区。该术语包括具有天然序列的Fc区和突变的Fc区。在一个实施方案中，人IgGl的重链Fc区从重链的Cys226或Pro230跨越到羧基末端。然而，Fc区的C-末端赖氨酸(Lys447)或甘氨酸-赖氨酸(Gly446-Lys447)可能存在或不存在。在本说明书中，Fc区或抗体重链恒定区中的氨基酸残基根据Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD1991中描述的EU编号系统(也称为EU索引)编号，除非另有说明。铰链区术语“铰链区”或“抗体铰链区”可以指由抗体重链中由根据EU编号第216至第230个氨基酸组成的区域，或其一部分。单域抗体在本说明书中，“单域抗体”是能够单独通过该结构域表现出抗原结合活性的抗体。单域抗体的结构没有限制，只要它可以单独通过该结构域发挥抗原结合活性即可。以IgG抗体等为示例的普通抗体在通过VH和VL配对形成可变区的状态下显示抗原结合活性，而单域抗体不与其他结构域配对，并且已知域单域抗体的结构域结构本身可以发挥抗原结合活性。单域抗体通常分子量相对较低，以单体形式存在。在几个实施方案中，单域抗体的形式类似于抗体重链可变区或抗体轻链可变区的形式。单域抗体的实例包括但不限于来自骆驼科动物的重链抗体的可变区(VHH)、先天性缺乏轻链的抗原结合分子(例如鲨鱼VNAR)或包括全部或部分抗体VH结构域或全部或部分抗体VL结构域的抗体片段。作为包含全部或部分抗体VH/VL结构域的抗体片段的单域抗体的实例包括但不限于从人抗体VH或人抗体VL开始的人工生产的单域抗体(以下称为单域VH抗体、单域VL抗体)，如美国专利号6,248,516B1中所述，等等。单域抗体可以从能够产生单域抗体的动物或通过免疫能够产生单域抗体的动物获得。能够产生单域抗体的动物的实例包括但不限于骆驼科动物和携带能够产生单域抗体的基因的转基因动物。骆驼科(Camelidae)的动物包括骆驼、驼马(lamas)、羊驼、单峰骆驼和大羊驼(guanacos)等。携带能够产生单域抗体的基因的转基因动物的实例包括但不限于：WO2015/143414和美国专利公开号US2011/0123527A1中描述的转基因动物。可以将从动物获得的单域抗体的构架序列转化为人种系序列或与其相似的序列，以获得人源化单域抗体。人源化单域抗体(例如，人源化VHH)也是本说明书的单域抗体的一个实施方案。或者，可以通过ELISA、淘选等从包含单域抗体的多肽文库中获得单域抗体。包含单域抗体的多肽文库的实例包括但不限于从各种动物或人类获得的幼稚抗体文库(例如，MethodsinMolecularBiology2012911(65-78)和BiochimicaetBiophysicaActa-ProteinsandProteomics20061764：8(1307-1319))，通过免疫各种动物获得的抗体文库(例如，JournalofAppliedMicrobiology2014117：2(528-536))，以及从各种动物或人类的抗体基因制备的合成抗体文库(例如，JournalofBiomolecularScreening201621：1(35-43)，JournalofBiologicalChemistry2016291：24(12641-12657)和AIDS201630:11(1691-1701))。在本公开中，存在单域抗体中包含蛋白酶切割序列的实施方案，但是无论是否包含蛋白酶切割序列都可以使用表述“单域抗体”。在若干实施方案中，本说明书的单域抗体通常可定义为包含以下的多肽：a)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第11位的氨基酸残基选自由L、M、S、V和W组成的组，优选为L)，和/或b)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第37位的氨基酸残基选自由F、Y、H、I、L，和V组成的组，优选为F或Y)，和/或c)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第44位的氨基酸残基选自由G、E、A、D、Q、R、S和L组成的组，优选为G、E或Q，更优选为G或E)，和/或d)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第45位的氨基酸残基选自由L、R、C、I、L、P、Q和V组成的组，并且优选为L或R)，和/或e)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第47位的氨基酸残基选自由W、L、F、A、G、I、M、R、S、V和Y组成的组，优选为W、L、F或R)，和/或f)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第83位的氨基酸残基选自由R、K、N、E、G、I、M、Q和T组成的组，优选为K或R，更优选为K)，和/或g)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第84位的氨基酸残基选自由P、A、L、R、S、T、D和V组成的组，优选为P)，和/或h)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第103位的氨基酸残基选自由W、P、R和S组成的组，优选为W)，和/或i)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(根据Kabat编号第104位的氨基酸残基为G或D，优选为G)，和/或j)由四个构架区/序列组成的氨基酸序列，所述构架区/序列之间插入了三个互补决定区/序列(Kabat编号第108位的氨基酸残基选自由Q、L和R组成的组，优选为Q或L)。更具体地，但不排他地，单域抗体可以定义为包含由四个构架区/序列组成的氨基酸序列中的任一个的多肽，四个构架区/序列中插入有以下三个互补决定区/序列：k)氨基酸序列，其中根据Kabat编号的第43至46位氨基酸残基为KERE或KQRE；l)氨基酸序列，其中根据Kabat编号的第44至47位的氨基酸残基为GLEW；和，m)氨基酸序列，其中根据Kabat编号的第83至84位的氨基酸残基为KP或EP。嵌合抗体术语“嵌合”抗体是指重链和/或轻链的一部分源自特定来源或物种，而重链和/或轻链的其余部分源自不同来源或物种的抗体。术语“嵌合单域抗体”是指单域抗体，其中单域抗体的一部分源自特定来源或物种，而单域抗体的其余部分源自不同来源或物种。人源化抗体“人源化”抗体是指包含来自非人CDR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在一些实施方案中，人源化抗体包括基本上所有的、至少一个且通常为两个可变结构域，其中所有或基本上所有的CDR对应于非人抗体的那些CDR，并且所有或基本上所有的FR对应于人抗体的那些FR。“人源化单域抗体”是指包含来自非人CDR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合单域抗体。在一些实施方案中，在人源化单域抗体中，所有或基本上所有的CDR对应于非人抗体的那些CDR，并且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些FR。在人源化抗体中，即使FR中的一些残基不对应于人抗体的FR，也可以认为是基本上所有FR对应于人抗体的FR的实例。例如，当人源化VHH时(它是单域抗体的一个实施方案)，需要将FR中的一些残基变成与人抗体的残基不对应的残基(CVinckeetal.,TheJournalofBiologicalChemistry284,3273-3284.)。人源化抗体可任选地包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。抗体(例如，非人抗体)的“人源化形式”是经过人源化的抗体。缔合在本说明书中，“缔合”可以指例如两个或更多个多肽区域彼此相互作用的状态。一般而言，在目标多肽区域之间形成疏水键、氢键、离子键等以形成缔合物。作为共同缔合的一个实例，已知以天然抗体为代表的抗体通过其间的非共价键等保留重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的配对结构。取消缔合可以指例如取消两个或多个多肽区域彼此相互作用的全部或部分状态。取消VH和VL之间的缔合可以包括取消VH和VL之间的整体相互作用，或者取消VH和VL之间的部分相互作用。FcRn结合区本说明书中的“FcRn结合区”是指对FcRn具有结合活性的区域，可以具有任何结构，只要所使用的区域对FcRn具有结合活性。含有FcRn结合区的分子能够被细胞吸收，然后通过FcRn的补救途径带回血浆。例如，IgG分子在血浆中的循环时间相对较长(缓慢消失)，因为被称为IgG分子的补救受体的FcRn起作用。通过胞饮作用进入内体的IgG分子在内体内酸性条件下与内体中表达的FcRn结合。未能与FcRn结合的IgG分子被移动到溶酶体并在其中降解，而与FcRn结合的IgG分子被转移到细胞表面，然后在血浆中的中性条件下与FcRn解离，从而回到血浆中。FcRn结合区优选是直接与FcRn结合的区域。FcRn结合区的优选实例可包括抗体Fc区。然而，能够结合具有FcRn结合能力的多肽如白蛋白或IgG的区域能够通过白蛋白、IgG等间接结合FcRn。因此，根据本公开的FcRn结合区可以是与这种具有FcRn结合能力的多肽结合的区域。根据本公开的FcRn结合区对FcRn，特别是人FcRn的结合活性可以通过本领域技术人员已知的方法测量，如上文关于结合活性的章节所述。其条件可由本领域技术人员适当地确定。对人FcRn的结合活性可以用KD(解离常数)、表观KD(表观解离常数)、kd(解离速率)或表观kd(表观解离速率)等来评价。这些值可以通过本领域技术人员已知的方法测量。例如，可以使用Biacore(GEHealthcareJapanCorp.)、Scatchardplot、流式细胞仪等。FcRn结合区对FcRn的结合活性的测定条件没有特别限定，可以由本领域技术人员适当地选择。如WO2009/125825中所述，结合活性可以在涉及例如MES缓冲液和在37℃的条件下测量。此外，本公开的FcRn结合区对FcRn的结合活性可以通过本领域技术人员已知的方法测量并且可以使用例如Biacore(GEHealthcareJapanCorp.)测量。在测量FcRn结合区对FcRn的结合活性中，FcRn和FcRn结合区或包含FcRn结合区的携带部分可以作为分析物注入到芯片中，所述芯片上分别固定有含有FcRn结合区和FcRn的FcRn结合区或分子，然后进行评估。对于在测定条件中使用的pH，可以在4.0至6.5的任意pH下评价FcRn结合区对FcRn的结合亲和力。优选地，使用接近体内早期内体pH的5.8至6.0的pH来确定FcRn结合区对人FcRn的结合亲和力。对于在测定条件中使用的温度，可以在10℃至50℃的任意温度下评价FcRn结合区对FcRn的结合亲和力。优选地，使用15℃至40℃的温度确定FcRn结合区对人FcRn的结合亲和力。更优选地，使用20℃至35℃的任何温度，例如20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34和35℃中的任何一个温度确定FcRn结合区对FcRn的结合亲和力。25℃的温度是本公开的实施方案的一个非限制性实例。FcRn结合区的一个实例包括但不限于IgG抗体Fc区。在使用IgG抗体Fc区的情况下，其类型没有限制，例如，可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc区。例如，可以使用包含选自由SEQIDNO:18004、18005、18006和18007表示的氨基酸序列的一个序列的Fc区。可以使用天然IgG抗体Fc区以及具有一个或多个氨基酸取代的Fc区变体，只要该Fc区具有FcRn结合活性。例如，可以使用如下Fc区变体，所述Fc区变体包含通过用另一种氨基酸取代选自EU编号位置237,238,239,248,250,252,254,255,256,257,258,265,270,286,289,297,298,303,305,307,308,309,311,312,314,315,317,325,332,334,360,376,380,382,384,385,386,387,389,424,428,433,434和436的至少一个氨基酸而衍生自IgG抗体Fc区的氨基酸序列。更具体地，在IgG抗体Fc区中，包含选自以下的至少一个氨基酸取代的Fc区变体，可用作FcRn结合区：用Met取代第237位的Gly的氨基酸取代，用Ala取代第238位的Pro的氨基酸取代，用Lys取代第239位的Ser的氨基酸取代，用Ile取代第248位的Lys的氨基酸取代，用Ala、Phe、Ile、Met、Gln、Ser、Val、Trp或Tyr取代第250位的Thr的氨基酸取代，用Phe、Trp或Tyr取代第252位的Met的氨基酸取代，用Thr取代第254位的Ser的氨基酸取代，用Glu取代第255位的Arg的氨基酸取代，用Asp、Glu或Gln取代第256位的Thr的氨基酸取代，用Ala、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Ser、Thr或Val取代第257位的Pro的氨基酸取代，用His取代第258位的Glu的氨基酸取代，用Ala取代第265位的Asp的氨基酸取代，用Phe取代第270位的Asp的氨基酸取代，用Ala或Glu取代第286位的Asn的氨基酸取代，用His取代第289位的Thr的氨基酸取代，用Ala取代第297位的Asn的氨基酸取代，用Gly取代第298位的Ser的氨基酸取代，用Ala取代第303位的Val的氨基酸取代，用Ala取代第305位的Val的氨基酸取代，用Ala,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Val,Trp或Tyr取代第307位的Thr的氨基酸取代，用Ala、Phe、Ile、Leu、Met、Pro、Gln或Thr取代第308位的Val的氨基酸取代，用Ala、Asp、Glu、Pro或Arg取代第309位的Leu或Val的氨基酸取代，用Ala、His或Ile取代第311位的Gln的氨基酸取代，用Ala或His取代第312位的Asp的氨基酸取代，用Lys或Arg取代第314位的Leu的氨基酸取代，用Ala或His取代第315位的Asn的氨基酸取代，用Ala取代第317位的Lys的氨基酸取代，用Gly取代第325位的Asn的氨基酸取代，用Val取代第332位的Ile的氨基酸取代，用Leu取代第334位的Lys的氨基酸取代，用His取代第360位的Lys的氨基酸取代，用Ala取代第376位的Asp的氨基酸取代，用Ala取代第380位的Glu的氨基酸取代，用Ala取代第382位的Glu的氨基酸取代，用Ala取代第384位的Asn或Ser的氨基酸取代，用Asp或His取代第385位的Gly的氨基酸取代，用Pro取代第386位的Gln的氨基酸取代，用Glu取代第387位的Pro的氨基酸取代，用Ala或Ser取代第389位的Asn的氨基酸取代，用Ala取代第424位的Ser的氨基酸取代，用Ala,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Asn,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp或Tyr取代第428位的Met的氨基酸取代，用Lys取代第433位的His的氨基酸取代，用Ala、Phe、His、Ser、Trp或Tyr取代第434位的Asn的氨基酸取代，和用His取代第436位的Tyr或Phe的氨基酸取代(全部根据EU编号)。从另一个角度来看，在IgG抗体的Fc区中，包含选自以下的至少一个氨基酸的Fc区可用作FcRn结合区：Met作为第237位的氨基酸，Ala作为第238位的氨基酸，Lys作为第239位的氨基酸，Ile作为第248位的氨基酸，Ala、Phe、Ile、Met、Gln、Ser、Val、Trp或Tyr作为第250位的氨基酸，Phe、Trp或Tyr作为第252位的氨基酸，Thr作为第254位的氨基酸，Glu作为第255位的氨基酸，Asp、Glu或Gln作为第256位的氨基酸，Ala、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Ser、Thr或Val作为第257位的氨基酸，His作为第258位的氨基酸，Ala作为第265位的氨基酸，Phe作为第270位的氨基酸，Ala或Glu作为第286位的氨基酸，His作为第289位的氨基酸，Ala作为第297位的氨基酸，Gly作为第298位的氨基酸，Ala作为第303位的氨基酸，Ala作为第305位的氨基酸，Ala,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Met,Asn,Pro,Gln,Arg,Ser,Val,Trp或Tyr作为第307位的氨基酸，Ala、Phe、Ile、Leu、Met、Pro、Gln或Thr作为第308位的氨基酸，Ala、Asp、Glu、Pro或Arg作为第309位的氨基酸，Ala、His或Ile作为第311位的氨基酸，Ala或His作为第312位的氨基酸，Lys或Arg作为第314位的氨基酸，Ala或His作为第315位的氨基酸，Ala作为第317位的氨基酸，Gly作为第325位的氨基酸，Val作为第332位的氨基酸，Leu作为第334位的氨基酸，His作为第360位的氨基酸，Ala作为第376位的氨基酸，Ala作为第380位的氨基酸，Ala作为第382位的氨基酸，Ala作为第384位的氨基酸，Asp或His作为第385位的氨基酸，Pro作为第386位的氨基酸，Glu作为第387位的氨基酸，Ala或Ser作为第389位的氨基酸，Ala作为第424位的氨基酸，Ala,Asp,Phe,Gly,His,Ile,Lys,Leu,Asn,Pro,Gln,Ser,Thr,Val,Trp,或Tyr作为第428位的氨基酸，Lys作为第433位的氨基酸，Ala、Phe、His、Ser、Trp或Tyr作为第434位的氨基酸，以及His作为第436位的氨基酸(全部根据EU编号)。亲和力“亲和力”是指分子(例如，抗体)的单个结合位点与其结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总和的强度。除非另有说明，如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对的成员(例如，抗体和抗原)之间的1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其伴侣Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)表示。亲和力可以通过本领域已知的常用方法测量，包括本文所述的那些。下面描述了用于测量结合亲和力的具体说明性和示例性实施方案。单克隆抗体如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体中获得的抗体，即，组成群体的个体抗体是相同的和/或结合相同的表位，除了可能的变体抗体，例如，含有天然发生突变或在单克隆抗体制备生产过程中出现，此类变体通常以少量存在。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相反，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因此，修饰语“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体中获得的抗体的特征，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本公开使用的单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文描述的用于制备单克隆抗体的此类方法和其他示例性方法。抗体生产方法产生具有所需结合活性的抗体的方法是本领域技术人员已知的。以下例示了与IL-6R结合的抗体(抗IL-6R抗体)的生产方法。与IL-6R以外的抗原结合的抗体也可以根据以下实施例适当地生产。在生产单域抗体时，虽然免疫动物等存在差异，但可以根据以下实施例适当地生产单域抗体。抗IL-6R抗体可以通过使用本领域已知的方法以多克隆或单克隆抗体获得。哺乳动物来源的单克隆抗体可以优选制备为抗IL-6R抗体。哺乳动物来源的单克隆抗体包括，例如，由杂交瘤产生的那些单克隆抗体和由通过基因工程方法用含有抗体基因的表达载体转化的宿主细胞产生的那些单克隆抗体。本申请中描述的抗体包括“人源化抗体”和“嵌合抗体”。产生单克隆抗体的杂交瘤可以通过使用本领域已知的技术来制备，例如，如下所讨论的。根据通常的免疫方法，用用作致敏抗原的IL-6R蛋白对哺乳动物进行免疫。如此获得的免疫细胞通过通常的细胞融合方法与已知的亲代细胞融合。接着，通过常规筛选方法筛选产生单克隆抗体的细胞以选择产生抗IL-6R抗体的杂交瘤。具体而言，例如如下所讨论的制备单克隆抗体。首先，可以表达IL-6R基因以获得IL-6R蛋白，该IL-6R蛋白用作抗体获得的致敏抗原。具体而言，将编码IL-6R的基因序列插入到已知的表达载体中，然后用该表达载体转化合适的宿主细胞。通过本领域已知的方法从宿主细胞或其培养物上清液中纯化所需的人IL-6R蛋白。为了从培养物上清液中获得可溶性IL-6R，例如，表达Mullberg等人(J.Immunol.(1994)152(10),4958-4968)描述的可溶性IL-6R。或者，纯化的天然IL-6R蛋白也可以用作致敏抗原。纯化的IL-6R蛋白可用作致敏抗原，用于哺乳动物免疫。IL-6R的部分肽也可用作致敏抗原。部分肽可由人IL-6R的氨基酸序列通过化学合成获得。或者，部分肽可以通过将IL-6R基因的一部分掺入表达载体然后表达来获得。此外，部分肽也可以通过用蛋白水解酶降解IL-6R蛋白来获得。用作部分肽的IL-6R肽的区域和大小不受具体实施方案的特别限制。构成用作致敏抗原的肽的氨基酸数优选为至少5个或更多，例如6个或更多，或7个或更多。更具体地，8至50个，优选10至30个残基的肽可用作致敏抗原。此外，包含与不同多肽融合的IL-6R蛋白的所需部分多肽或肽的融合蛋白可用作致敏抗原。例如，抗体Fc片段或肽标签可优选用于生产用作致敏抗原的融合蛋白。用于表达融合蛋白的载体可以通过将编码两种或更多种类型的所需多肽片段的基因在框内融合，并将融合基因插入到如上所述的表达载体中来制备。制备融合蛋白的方法描述于MolecularCloning2nded.(Sambrook,J.etal.,MolecularCloning2nded.,9.47-9.58(1989),ColdSpringHarborLab.Press)。获得用作致敏抗原的IL-6R的方法和使用它的免疫方法也具体描述于WO2003/000883、WO2004/022754、WO2006/006693等中。用致敏抗原免疫的哺乳动物不限于特定动物，并且优选考虑与用于细胞融合的亲代细胞的相容性来选择。通常，优选使用啮齿动物(例如小鼠、大鼠和仓鼠)、兔、猴等。在获得单域抗体时，优选使用骆驼科动物或携带能够产生单域抗体的基因的转基因动物。根据本领域已知的方法用致敏抗原免疫上述动物。例如，作为一般的方法，通过腹膜内或皮下施用向哺乳动物施用致敏抗原来进行免疫。具体地，将用PBS(磷酸盐缓冲盐水)、生理盐水等以适当稀释比稀释的致敏抗原根据需要与常用佐剂例如弗氏完全佐剂混合并乳化。然后，将产生的致敏抗原以4至21天的间隔多次施用于哺乳动物。另外，在致敏抗原的免疫中可以使用合适的载体。特别地，在使用具有小分子量的部分肽作为致敏抗原的情况下，在某些情况下可能希望用与载体蛋白如白蛋白或匙孔血蓝蛋白结合的致敏抗原肽进行免疫。或者，也可以如下所述通过使用DNA免疫来制备产生所需抗体的杂交瘤。DNA免疫是一种免疫方法，它涉及通过在免疫动物体内表达致敏抗原来免疫刺激免疫的动物，所述免疫的动物已被施用载体DNA，所述载体DNA以能够在免疫动物中表达编码抗原蛋白的基因的形式构建。可以预期DNA免疫优于一般免疫方法，所述一般免疫方法中将蛋白质抗原施用于待免疫的动物，如下所述：-DNA免疫可以提供免疫刺激，同时保持膜蛋白(例如，IL-6R)的结构；和-DNA免疫不需要纯化免疫抗原。为了通过DNA免疫获得本公开的单克隆抗体，首先将表达IL-6R蛋白的DNA施用于待免疫动物。编码IL-6R的DNA可以通过本领域已知的方法例如PCR合成。将获得的DNA插入适当的表达载体中，然后将其施用于待免疫的动物。例如，可优选使用可商购的表达载体例如pcDNA3.1作为表达载体。作为将载体施用于活体的方法，可以使用通常使用的方法。例如，用基因枪将吸附有表达载体的金颗粒转染到待免疫的动物个体的细胞中，从而进行DNA免疫。此外，识别IL-6R的抗体也可以通过使用WO2003/104453中描述的方法来制备。在如此免疫的哺乳动物的血清中证实了与IL-6R结合的抗体的效价升高。然后，从哺乳动物收集免疫细胞并进行细胞融合。特别地，脾细胞可用作优选的免疫细胞。哺乳动物骨髓瘤细胞用作与免疫细胞融合的细胞。骨髓瘤细胞优选具有合适的选择标记用于筛选。选择标记是指在特定培养条件下能够存活(或不能存活)的性状。例如，已知次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺乏症(以下简称为HGPRT缺乏症)或胸苷激酶缺乏症(以下简称为TK缺乏症)作为选择标记。具有HGPRT或TK缺乏症的细胞对次黄嘌呤氨基蝶呤胸苷(以下简称为HAT-敏感的)敏感。HAT敏感细胞在HAT选择性培养基中被杀死，因为细胞无法合成DNA。相比之下，这些细胞与正常细胞融合时，即使在HAT选择性培养基中也能生长，因为融合细胞可以通过使用正常细胞的补救途径继续DNA合成。具有HGPRT或TK缺乏症的细胞可以分别在含有6-硫鸟嘌呤或8-氮鸟嘌呤(以下简称为8AG)或5'-溴脱氧尿苷的培养基中选择。正常细胞通过将这些嘧啶类似物掺入其DNA中而被杀死。相比之下，缺乏这些酶的细胞可以在选择性培养基中存活，因为细胞不能掺入嘧啶类似物。此外，称为G418抗性的选择标记通过新霉素抗性基因赋予对2-脱氧链霉胺抗生素(庆大霉素类似物)的抗性。适用于细胞融合的多种骨髓瘤细胞是本领域已知的。例如，P3(P3x63Ag8.653)(J.Immunol.(1979)123(4),1548-1550),P3x63Ag8U.1(CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology(1978)81,1-7),NS-1(C.Eur.J.Immunol.(1976)6(7),511-519),MPC-11(Cell(1976)8(3),405-415),SP2/0(Nature(1978)276(5685),269-270),FO(J.Immunol.Methods(1980)35(1-2),1-21),S194/5.XX0.BU.1(J.Exp.Med.(1978)148(1),313-323)和R210(Nature(1979)277(5692),131-133)可以优选用作这样的骨髓瘤细胞。基本上，免疫细胞与骨髓瘤细胞的细胞融合是根据本领域已知的方法进行的，例如Kohler和Milstein等人(MethodsEnzymol.(1981)73,3-46)的方法。更具体地，细胞融合可以在例如通常的营养培养基中在细胞融合促进剂的存在下进行。例如，聚乙二醇(PEG)或日本血凝病毒(HVJ)用作融合启动子。此外，如果需要，可以向其中加入辅助剂如二甲基亚砜，以提高融合效率，然后使用。免疫细胞与所用的骨髓瘤细胞之间的比值可任意设定。例如，免疫细胞的量优选设定为骨髓瘤细胞的量的1至10倍。例如，适用于骨髓瘤细胞系生长的RPMI1640培养基或MEM培养基以及用于这种细胞培养的常用培养基用作细胞融合中的培养基。优选地，可以进一步向培养基中加入补充有血清(例如胎牛血清(FCS)的溶液。对于细胞融合，将预定量的免疫细胞和骨髓瘤细胞在培养基中充分混合，然后向其中加入预热至约37℃的PEG溶液(例如，PEG的平均分子量为约1000至6000)，通常浓度为30％到60％(w/v)。轻轻混合混合溶液，从而形成所需的融合细胞(杂交瘤)。随后，依次加入上述合适的培养基，离心除去上清液。可以重复该操作以去除对杂交瘤生长不利的细胞融合剂等。如此获得的杂交瘤可以在常用的选择培养基，例如HAT培养基(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培养基)中培养，用于选择。使用HAT培养基的培养可以持续足够的时间(通常，足够的时间为数天至数周)以杀死所需杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)。随后，可以通过通常的有限稀释方法筛选产生所需抗体的杂交瘤并进行单细胞克隆。由此获得的杂交瘤可以通过使用选择性培养基根据细胞融合中使用的骨髓瘤细胞所具有的选择标记来选择。例如，可以通过在HAT培养基(含有次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的培养基)中培养来选择具有HGPRT或TK缺乏症的细胞。具体而言，在细胞融合中使用HAT敏感的骨髓瘤细胞的情况下，与正常细胞成功融合的细胞可以在HAT培养基中选择性地生长。使用HAT培养基的培养继续足够长的时间以杀死所需杂交瘤以外的细胞(非融合细胞)。具体而言，培养通常可进行数天至数周以选择所需的杂交瘤。随后，可以通过通常的有限稀释方法筛选产生所需抗体的杂交瘤并进行单细胞克隆。所需抗体的筛选和单细胞克隆可以优选通过基于已知抗原-抗体反应的筛选方法进行。例如，与IL-6R结合的单克隆抗体可以与细胞表面表达的IL-6R结合。例如，可以通过FACS(荧光激活细胞分选)筛选这样的单克隆抗体。FACS是一种能够通过使用激光束分析与荧光抗体接触的细胞并测量从个体细胞发出的荧光来测量抗体与细胞表面的结合的系统。为了通过FACS筛选产生本公开的单克隆抗体的杂交瘤，首先制备表达IL-6R的细胞。优选用于筛选的细胞是被迫表达IL-6R的哺乳动物细胞。用作宿主细胞的未转化哺乳动物细胞可用作对照，以选择性检测抗体对细胞表面的IL-6R的结合活性。具体而言，通过选择产生与被迫表达IL-6R的细胞结合但不与宿主细胞结合的抗体的杂交瘤，可以获得产生IL-6R单克隆抗体的杂交瘤。或者，可以基于ELISA原理评价抗体对固定的表达IL-6R的细胞的结合活性。表达IL-6R的细胞被固定在例如ELISA板的每个孔上。杂交瘤培养物上清液与孔中的固定细胞接触以检测与固定细胞结合的抗体。当单克隆抗体来源于小鼠时，可以使用抗小鼠免疫球蛋白抗体检测与细胞结合的抗体。可以通过有限稀释法等克隆通过筛选选出的产生具有抗原结合能力的所需抗体的杂交瘤。如此制备的产生单克隆抗体的杂交瘤可以在常用培养基中传代培养。此外，杂交瘤可以在液氮中长期保存。杂交瘤按照常规方法培养，可以从其培养物上清液中获得所需的单克隆抗体。或者，可以将杂交瘤施用于与其相容的哺乳动物并使其生长，并且可以从哺乳动物的腹水中获得单克隆抗体。前一种方法适用于获得高纯度抗体。也可以优选使用由从抗体产生细胞例如杂交瘤克隆的抗体基因编码的抗体。将克隆的抗体基因整合到合适的载体中，然后将其转染到宿主中，从而表达由该基因编码的抗体。例如，Vandamme等人(Eur.J.Biochem.(1990)192(3),767-775)已经建立了用于分离抗体基因、将基因整合到载体以及转化宿主细胞的方法。生产重组抗体的方法也是已知的，如下所述。例如，从产生抗IL-6R抗体的杂交瘤细胞中获得编码抗IL-6R抗体可变区(V区)的cDNA。为此，通常首先从杂交瘤中提取总RNA。例如，可以使用以下方法作为从细胞中提取mRNA的方法：-胍超速离心法(Biochemistry(1979)18(24),5294-5299)，和-AGPC方法(Anal.Biochem.(1987)162(1),156-159)。提取的mRNA可以使用mRNA纯化试剂盒(GEHealthcareBio-SciencesCorp.制造)等进行纯化。或者，从细胞中直接提取总mRNA的试剂盒也可商购获得，例如QuickPrepmRNA纯化试剂盒(由GEHealthcareBio-SciencesCorp.制造)。可以使用这样的试剂盒从杂交瘤中获得mRNA。从获得的mRNA，可以使用逆转录酶合成编码抗体V区的cDNA。可以使用例如AMV逆转录酶第一链cDNA合成试剂盒(由SeikagakuCorp.制造)合成cDNA。或者，使用SMARTRACEcDNA扩增试剂盒(由ClontechLaboratories,Inc.制造)和PCR的5'-RACE方法(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)85(23),8998-9002；和NucleicAcidsRes.(1989)17(8),2919-2932)可以适当地用于cDNA合成和扩增。在这样的cDNA合成过程中，可以在cDNA的两端进一步引入后述的合适的限制性酶切位点。从获得的PCR产物中纯化目标cDNA片段，然后与载体DNA连接。将如此制备的重组载体转染到大肠杆菌等中。菌落选择后，可以从形成菌落的大肠杆菌中制备所需的重组载体。然后，通过本领域已知的方法，例如双脱氧核苷酸链终止法，确认重组载体是否具有目标cDNA的核苷酸序列。使用引物扩增可变区基因的5'-RACE方法可以方便地用于获得编码可变区的基因。首先，使用从杂交瘤细胞中提取的RNA作为模板，通过cDNA合成获得5'-RACEcDNA文库。5'-RACEcDNA文库的合成中适当使用可商购的试剂盒例如SMARTRACEcDNA扩增试剂盒。使用获得的5'-RACEcDNA文库作为模板，通过PCR扩增抗体基因。可以根据已知的抗体基因序列设计用于扩增小鼠抗体基因的引物。这些引物的核苷酸序列因免疫球蛋白亚类而不同。因此，希望使用可商购的试剂盒例如IsoStrip小鼠单克隆抗体同种型试剂盒(RocheDiagnosticsK.K.)预先确定亚类。具体地，例如，出于获得编码小鼠IgG的基因的目的，可以使用能够扩增编码γ1、γ2a、γ2b和γ3重链和κ和λ轻链的基因的引物。为了扩增IgG可变区基因，通常使用与接近可变区的恒定区对应的部分退火的引物作为3'引物。另一方面，5'RACEcDNA文库制备试剂盒附带的引物用作5'引物。如此通过扩增获得的PCR产物可用于重构由重链和轻链组合组成的免疫球蛋白。可以使用重构的免疫球蛋白对IL-6R的结合活性作为指标来筛选所需的抗体。更优选地，抗体与IL-6R的结合是特异的，例如出于获得针对IL-6R的抗体的目的。例如，可以通过以下步骤筛选与IL-6R结合的抗体：(1)使表达IL-6R的细胞与含有由杂交瘤获得的cDNA编码的V区的抗体接触；(2)检测抗体与表达IL-6R的细胞的结合；和(3)选择与表达IL-6R的细胞结合的抗体。检测抗体(包括单域抗体)与表达IL-6R的细胞的结合的方法是本领域已知的。具体而言，抗体与表达IL-6R的细胞的结合可以通过上述方法例如FACS进行检测。表达IL-6R的细胞的固定制剂可以适当地用于评价抗体的结合活性。使用噬菌体载体的淘选方法也优选用作使用结合活性作为指标筛选抗体的方法。同样在筛选单域抗体的情况下，可以根据以下实施例适当地进行筛选。当从表达多克隆抗体的细胞群中获得作为重链和轻链亚类文库的抗体基因时，使用噬菌体载体的筛选方法是有利的。编码重链和轻链可变区的基因可以通过合适的接头序列连接以形成单链Fv(scFv)。可以将编码scFv的基因插入噬菌体载体，获得表面表达scFv的噬菌体。使噬菌体与所需抗原接触后，可以回收与抗原结合的噬菌体以回收编码具有目标结合活性的scFv的DNA。可以根据需要重复该操作以富集具有所需结合活性的scFv。获得编码目标抗IL-6R抗体V区的cDNA后，用识别插入在cDNA两端的限制性位点的限制酶消化该cDNA。限制酶优选识别并消化在构成抗体基因的核苷酸序列中出现频率低的核苷酸序列。优选地，插入提供粘性末端的限制酶位点以将一个拷贝的消化片段以正确的方向插入到载体中。可以将如此消化的编码抗IL-6R抗体V区的cDNA插入合适的表达载体中以获得抗体表达载体。在这种情况下，编码抗体恒定区(C区)的基因和编码V区的基因在框内融合以获得嵌合抗体。在这种情况下，“嵌合抗体”意味着恒定区和可变区的起源不同。因此，异源(例如，小鼠-人)嵌合抗体以及人-人同源嵌合抗体也包括在根据本公开的嵌合抗体中。可以将V区基因插入到预先具有恒定区基因的表达载体中，以构建嵌合抗体表达载体。具体地，例如，可以将消化V区基因的限制酶的识别序列适当地置于携带编码所需抗体恒定区(C区)的DNA的表达载体的5'侧。两者都用相同组合的限制酶消化并在框内融合以构建嵌合抗体表达载体。为了生产抗IL-6R单克隆抗体，将抗体基因整合到表达载体中，使得抗体基因在表达控制区的控制下表达。抗体表达的表达控制区包括例如增强子和启动子。此外，可以将适当的信号序列添加到氨基末端，使得表达的抗体在细胞外分泌。例如，具有氨基酸序列MGWSCIILFLVATATGVHS(SEQIDNO：18008)的肽可以用作信号序列，并且可以添加其他合适的信号序列。表达的多肽在上述序列的羧基末端部分被切割。切割的多肽可以作为成熟多肽在细胞外分泌。随后，可以用该表达载体转化合适的宿主细胞以获得表达编码抗IL-6R抗体的DNA的重组细胞。多核苷酸(核酸)如本文可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸的聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应掺入聚合物的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸及其类似物。核苷酸序列可能被非核苷酸成分中断。多核苷酸可包含合成后进行的修饰，例如与标记缀合。其他类型的修饰包括例如“帽(caps)”、用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸、核苷酸间修饰例如具有不带电荷的键的那些(例如，甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和带电荷的键(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)，含有悬垂部分的那些，例如蛋白质(例如核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)，带有嵌入剂的那些(例如，吖啶，补骨脂素等)，含有螯合剂的那些(例如，金属，放射性金属，硼，氧化金属等)，含有烷基化剂的那些，带有修饰的键的那些(例如，α异头核酸等)，以及未修饰形式的多核苷酸。此外，糖中通常存在的任何羟基可以被例如膦酸酯基团、磷酸酯基团替代，被标准保护基团保护，或被激活以制备与额外核苷酸的额外连接，或可以缀合到固体或半固相支持体。5'和3'末端OH可以被磷酸化或被胺或1至20个碳原子的有机封端基团部分取代。其他羟基也可以衍生为标准保护基团。多核苷酸还可以包含本领域公知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基-、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-异头糖、差向异构糖如阿拉伯糖、木糖或来苏糖、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和碱性核苷类似物如甲基核苷。一个或多个磷酸二酯键可以被备选的连接基团替代。这些备选的连接基团包括但不限于其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺酸酯”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛(formacetal)”)替代的实施方案，其中每个R或R'独立地为H或取代或未取代的烷基(1-20C)，任选包含醚(-O-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有键都需要相同。前述描述适用于本文提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。载体如本文所用，术语“载体”是指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自我复制核酸结构的载体，以及掺入宿主细胞基因组中的载体，所述宿主细胞中已被引入所述载体。某些载体能够指导与它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。宿主细胞等术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括初级转化细胞和由其衍生的后代，不考虑传代次数。后代在核酸含量上可能与亲本细胞不完全相同，而是可能包含突变。在最初转化的细胞中筛选或选择的具有相同功能或生物学活性的突变后代包括在本文中。包含蛋白酶切割序列的多肽本公开的一方面涉及包含蛋白酶切割序列的多肽。本公开的另一方面涉及包含选自以下的至少一个序列的多肽：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。本公开的另一方面涉及多肽，所述多肽包含从N末端起按此顺序由“选自下列A组的序列-选自下列B组的序列”组成的序列中的任一种：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。在本公开多肽的某些实施方案中，所述多肽中含有选自下面所列序列中的至少一个序列，并且所述多肽中的所述序列可以被蛋白酶切割，即所述序列在多肽中作为蛋白酶切割序列起作用：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。此外，在本公开的多肽的某些实施方案中，从N-末端起按此顺序由“选自下列A组的序列-选自下列B组的序列”组成的任何序列包含在多肽中，多肽中的所述序列可以被蛋白酶切割，即所述序列在多肽中起到蛋白酶切割序列的作用：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。在本公开的多肽的一个实施方案中，柔性接头进一步连接到蛋白酶切割序列的一端或两端。蛋白酶切割序列一端的柔性接头可称为“第一柔性接头”，另一端的柔性接头可称为“第二柔性接头”。在特定实施方案中，蛋白酶切割序列和柔性接头具有下式中的任一个：(蛋白酶切割序列)，(第一柔性接头)-(蛋白酶切割序列)，(蛋白酶切割序列)-(第二柔性接头)，和(第一柔性接头)-(蛋白酶切割序列)-(第二柔性接头)。根据本实施方案的柔性接头优选为肽接头。第一柔性接头和第二柔性接头各自独立且任意地存在并且是相同或不同的含有至少一个柔性氨基酸(Gly等)的柔性接头。柔性接头包含例如足以使蛋白酶切割序列获得所需的蛋白酶可及性的残基数(任意选自Arg,Ile,Gln,Glu,Cys,Tyr,Trp,Thr,Val,His,Phe,Pro,Met,Lys,Gly,Ser,Asp,Asn,Ala等，特别是Gly、Ser、Asp、Asn和Ala，更特别是Gly和Ser，特别是Gly等的氨基酸)。适用于在蛋白酶切割序列的两端使用的柔性接头通常是改善蛋白酶接近蛋白酶切割序列并提高蛋白酶切割效率的柔性接头。可以容易地选择合适的柔性接头并且其可以优选地选自不同的长度，例如1个氨基酸(Gly等)至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、或3个氨基酸至12个氨基酸，包括4个氨基酸至10个氨基酸，5个氨基酸至9个氨基酸，6个氨基酸至8个氨基酸，或7个氨基酸至8个氨基酸。在本公开的一些实施方案中，柔性接头是1至7个氨基酸的肽接头。柔性接头的实例包括但不限于甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(包括例如(GS)n、(GSGGS：SEQIDNO：18018)n和(GGGS：SEQIDNO：18009)n，其中n是至少为1的整数)，甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物和常规技术中众所周知的其他柔性接头。其中，甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物受到关注，因为这些氨基酸相对非结构化，可以很容易地作为组分之间的中性系链发挥功能。由甘氨酸-丝氨酸聚合物组成的柔性接头的实例可包括但不限于，SerGly·Ser(GS)Ser·Gly(SG)Gly·Gly·Ser(GGS)Gly·Ser·Gly(GSG)Ser·Gly·Gly(SGG)Gly·Ser·Ser(GSS)Ser·Ser·Gly(SSG)Ser·Gly·Ser(SGS)Gly·Gly·Gly·Ser(GGGS,SEQIDNO:18009)Gly·Gly·Ser·Gly(GGSG,SEQIDNO:18010)Gly·Ser·Gly·Gly(GSGG,SEQIDNO:18011)Ser·Gly·Gly·Gly(SGGG,SEQIDNO:18012)Gly·Ser·Ser·Gly(GSSG,SEQIDNO:18013)Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(GGGGS,SEQIDNO:18014)Gly·Gly·Gly·Ser·Gly(GGGSG,SEQIDNO:18015)Gly·Gly·Ser·Gly·Gly(GGSGG,SEQIDNO:18016)Gly·Ser·Gly·Gly·Gly(GSGGG,SEQIDNO:18017)Gly·Ser·Gly·Gly·Ser(GSGGS,SEQIDNO:18018)Ser·Gly·Gly·Gly·Gly(SGGGG,SEQIDNO:18019)Gly·Ser·Ser·Gly·Gly(GSSGG,SEQIDNO:18020)Gly·Ser·Gly·Ser·Gly(GSGSG,SEQIDNO:18021)Ser·Gly·Gly·Ser·Gly(SGGSG,SEQIDNO:18022)Gly·Ser·Ser·Ser·Gly(GSSSG,SEQIDNO:18023)Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(GGGGGS,SEQIDNO:18024)Ser·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly(SGGGGG,SEQIDNO:18025)Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(GGGGGGS,SEQIDNO:18026)Ser·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly·Gly(SGGGGGG,SEQIDNO:18027)(Gly·Gly·Gly·Gly·Ser(GGGGS,SEQIDNO:18014))n(Ser·Gly·Gly·Gly·Gly(SGGGG,SEQIDNO:18019))n其中n是1或更大的整数。然而，本领域技术人员可以根据目的适当地选择肽接头的长度和序列。包含本公开的蛋白酶切割序列的多肽可以具有任何组成，只要它包含选自以下的至少一个序列：跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列；和SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列。此外，包含本公开的蛋白酶切割序列的多肽可以具有任何组成，只要它包含从N-末端按此顺序由“选自以下所列A组的序列-选自以下所列B组的序列”组成的任何序列：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。包含本公开的蛋白酶切割序列的多肽可以是可激活的抗体。例如，可激活的抗体包括以下：(i)与靶标特异性结合的抗体；(ii)当蛋白酶切割序列以未切割状态存在时抑制抗体与靶标结合的掩蔽部分；和(iii)与抗体偶联的可切割部分，其中可切割部分是选自本公开的蛋白酶切割序列的至少一个序列。包含抗原结合结构域和携带部分的多肽在本公开多肽的一个实施方案中，所述多肽包括抗原结合结构域和携带部分，所述携带部分具有抑制结构域，用于抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。本公开还涉及用于从多肽释放抗原结合结构域的方法，包括通过蛋白酶切割包含本文所述的抗原结合结构域和携带部分的多肽中的蛋白酶切割序列。在本说明书中，“抗原结合结构域”仅限于与目标抗原结合。抗原结合结构域可以是具有任何结构的结构域，只要所使用的结构域与目标抗原结合即可。这种结构域的例子包括但不限于抗体重链可变区(VH)、抗体轻链可变区(VL)、单域抗体(sdAb)、包含在体内细胞膜蛋白avimer中的大约35个氨基酸的称为A结构域的模块(WO2004/044011和WO2005/040229)，作为蛋白结合结构域来源于在细胞膜上表达的糖蛋白纤连蛋白的含有10Fn3结构域的adnectin(WO2002/032925)，含有构成由蛋白A的58个氨基酸组成的三螺旋束的IgG结合结构域支架的Affibody(WO1995/001937)，DARPins(设计的锚蛋白重复蛋白)，其是锚蛋白重复(AR)的分子表面暴露区域，每个区域具有33个氨基酸残基结构，其折叠成转角、两个反平行螺旋和环的亚基(WO2002/020565)，anticalin，其具有四个环的区域，所述环连接着在脂质运载蛋白分子例如中性粒细胞明胶酶相关运载蛋白(NGAL)中高度保守的桶状结构一端向中心轴弯曲的8条反平行链(WO2003/029462)，以及在无颌脊椎动物如七鳃鳗或盲鳗的获得性免疫系统中看到的无免疫球蛋白结构的可变淋巴细胞受体(VLR)的由重复的富含亮氨酸重复(LRR)模块组成的马蹄形折叠的内部平行片状结构中的凹陷区域(WO2008/016854)。本公开的抗原结合结构域的优选实例包括可以通过仅由抗原结合结构域构成的分子发挥抗原结合功能的抗原结合结构域和可以在从与其相连的额外肽释放后自身发挥抗原结合功能的抗原结合结构域。这种抗原结合结构域的实例包括但不限于单域抗体、scFv、Fv、Fab、Fab'和F(ab')2。本公开的抗原结合结构域的一个优选实例包括具有60kDa或更小的分子量的抗原结合结构域。这种抗原结合结构域的实例包括但不限于单域抗体、scFv、Fab和Fab'。分子量为60kDa或更小的抗原结合结构域在作为单体存在于血液中时通常很可能被肾脏清除(参见JBiolChem.1988Oct15；263(29):15064-70)。从另一观点来看，本公开的抗原结合结构域的一个优选实例包括在血液中的半衰期为12小时或更短的抗原结合结构域。这种抗原结合结构域的实例包括但不限于单域抗体、scFv、Fab和Fab'。本公开的抗原结合结构域的一个优选实例包括单域抗体(sdAb)。在本说明书中，“抗原”仅限于包含与抗原结合结构域结合的表位。抗原的优选实例包括但不限于动物或人来源的肽、多肽和蛋白质。抗原的优选实例包括但不限于在靶细胞(例如癌细胞和炎症细胞)表面表达的分子、在含有靶细胞的组织中的其他细胞表面表达的分子、在对靶细胞和含有靶细胞的组织具有免疫作用的细胞表面表达的分子，以及在含有靶细胞的组织基质中存在的大分子。抗原的实例可包括以下分子：17-IA、4-1BB、4Dc、6-酮-PGF1a、8-异-PGF2a、8-氧-dG、A1腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、激活蛋白、激活蛋白A、激活蛋白AB、激活蛋白B、激活蛋白C、激活蛋白RIA、激活蛋白RIAALK-2、激活蛋白RIBALK-4、激活蛋白RIIA、激活蛋白RIIB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAM8、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-1-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、ARC、ART、青蒿琥酯(artemin)、抗-Id、ASPARTIC、心房钠尿肽、av/b3整联蛋白、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B-淋巴细胞刺激剂(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bcl、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BIM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3骨生成蛋白、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a,OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMP、b-NGF、BOK、铃蟾肽、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、C10、CA125、CAD-8、降钙素、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌症相关抗原、组织蛋白酶A、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL,CCI,CCK2,CCL,CCL1,CCL11,CCL12,CCL13,CCL14,CCL15,CCL16,CCL17,CCL18,CCL19,CCL2,CCL20,CCL21,CCL22,CCL23,CCL24,CCL25,CCL26,CCL27,CCL28,CCL3,CCL4,CCL5,CCL6,CCL7,CCL8,CCL9/10,CCR,CCR1,CCR10,CCR10,CCR2,CCR3,CCR4,CCR5,CCR6,CCR7,CCR8,CCR9,CD1,CD2,CD3,CD3E,CD4,CD5,CD6,CD7,CD8,CD10,CD11a,CD11b,CD11c,CD13,CD14,CD15,CD16,CD18,CD19,CD20,CD21,CD22,CD23,CD25,CD27L,CD28,CD29,CD30,CD30L,CD32,CD33(p67蛋白)、CD34,CD38,CD40,CD40L,CD44,CD45,CD46,CD49a,CD52,CD54,CD55,CD56,CD61,CD64,CD66e,CD74,CD80(B7-1),CD89,CD95,CD123,CD137,CD138,CD140a,CD146,CD147,CD148,CD152,CD164,CEACAM5,CFTR,cGMP,CINC，肉毒杆菌毒素、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)毒素、CKb8-1,CLC,CMV,CMVUL,CNTF,CNTN-1,COX,C-Ret,CRG-2,CT-1,CTACK,CTGF,CTLA-4,PD-1,PD-L1,LAG3,TIM3,半乳凝集素-9、CX3CL1,CX3CR1,CXCL,CXCL1,CXCL2,CXCL3,CXCL4,CXCL5,CXCL6,CXCL7,CXCL8,CXCL9,CXCL10,CXCL11,CXCL12,CXCL13,CXCL14,CXCL15,CXCL16,CXCR,CXCR1,CXCR2,CXCR3,CXCR4,CXCR5,CXCR6,细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(1-3)-IGF-I(脑IGF-1)、Dhh、地高辛、DNAM-1、DNA酶、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、ENA、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸细胞活化趋化因子1、EpCAM、肝配蛋白B2/EphB4、ePO、ERCC、E-选择蛋白、ET-1、因子IIa、因子VII、因子VIIIc、因子IX、成纤维细胞激活蛋白(FAP)、Fas、FcR1、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、纤维蛋白、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14,CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12,CDMP-3)、GDF-8(肌生成抑制素)、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-α1、GFR-α2、GFR-α3、gITR、胰高血糖素、Glut4、糖蛋白IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)、GM-CSF、gp130、gp72、GRO、生长激素释放因子、半抗原(NP帽或NIP帽)、HB-EGF、HCC、HCMVgB包膜糖蛋白、HCMVgH包膜糖蛋白、HCMVUL、造血生长因子(HGF)、HepBgp120、乙酰肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSVgD糖蛋白、HGFA、高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIVgp120、HIVIIIBgp120V3环、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFGPEM、HRG、Hrk、人心脏肌球蛋白、人巨细胞病毒(HCMV)、人生长激素(HGH)、HVEM、I-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-18、IL-18R、IL-21、IL-23、IL-27、干扰素(INF)-α、INF-β、INF-γ、抑制素、iNOS、胰岛素链A、胰岛素链B、胰岛素样生长因子1、整联蛋白α2、整联蛋白α3、整联蛋白α4、整联蛋白α4/β1、整联蛋白α4/β7、整联蛋白α5(αV)、整联蛋白α5/β1、整联蛋白α5/β3、整联蛋白α6、整联蛋白β1、整联蛋白β2、干扰素γ、IP-10、I-TAC、JE、激肽释放酶2、激肽释放酶5、激肽释放酶6、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶L1、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质形成细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在的TGF-1、潜在的TGF-1bp1、LBP、LDGF、LECT2、lefty、路易斯-Y抗原、路易斯-Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择蛋白、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面、促黄体素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、金属蛋白酶、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、黏蛋白(Muc1)、MUC18、米勒管抑制物质(mullerian-inhibitingsubstance)、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NCAD、N-C黏附素、NCA90、NCAM、NCAM、中性溶酶、神经营养蛋白-3、-4或-6、神经秩蛋白(neurturin)、神经生长因子(NGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、p150、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙黏着蛋白、PCNA、PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、PlGF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素原、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、RANTES、松弛素A链、松弛素B链、肾素、呼吸合胞病毒(RSV)F、RSVFgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、泛特异性TGF-β、TGF-βRI(ALK-5)、TGF-βRII、TGF-βRIIb、TGF-βRIII、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、胸腺Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-α/β、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAILR1Apo-2、DR4)、TNFRSF10B(TRAILR2DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAILR3DcR1,LIT,TRID)、TNFRSF10D(TRAILR4DcR2,TRUNDD)、TNFRSF11A(RANKODFR,TRANCER)、TNFRSF11B(OPGOCIF,TR1)、TNFRSF12(TWEAKRFN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFFR)、TNFRSF14(HVEMATAR,HveA,LIGHTR,TR2)、TNFRSF16(NGFRp75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITRAITR)、TNFRSF19(TROYTAJ,TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF1A(TNFRICD120a,p55-60)、TNFRSF1B(TNFRIICD120b,p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbRTNFRIII,TNFCR)、TNFRSF4(OX40ACT35,TXGP1R)、TNFRSF5(CD40p50)、TNFRSF6(FasApo-1,APT1,CD95)、TNFRSF6B(DcR3M68,TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-1BBCD137,ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DcTRAILR2TNFRH2)、TNFRST23(DcTRAILR1TNFRH1)、TNFRSF25(DR3Apo-3,LARD,TR-3,TRAMP,WSL-1)、TNFSF10(TRAILApo-2配体,TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAKApo-3配体,DR3配体),TNFSF13(APRILTALL2)、TNFSF13B(BAFFBLYS,TALL1,THANK,TNFSF20)、TNFSF14(LIGHTHVEM配体,LTg)、TNFSF15(TL1A/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体,TL6)、TNFSF1A(TNF-a连接蛋白,DIF,TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-bLTa,TNFSF1)、TNFSF3(LTbTNFC,p33)、TNFSF4(OX40配体gp34,TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-1BB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAILR、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转铁蛋白受体、TRF、Trk、TROP-2、TLR(toll样受体)1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原Ca125、路易斯-Y相关碳水化合物的肿瘤相关抗原表达、TWEAK、TXB2、Ung、uPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙黏着蛋白、VE-钙黏着蛋白-2、VEFGR-1(flt-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VIM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整联蛋白、冯维勒布兰德因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD、HMGB1、IgA、A、CD81、CD97、CD98、DDR1、DKK1、EREG、Hsp90、IL-17/IL-17R、IL-20/IL-20R、氧化的LDL、PCSK9、激肽释放酶原、RON、TMEM16F、SOD1、嗜铬粒蛋白A、嗜铬粒蛋白B、tau、VAP1、高分子量激肽原、IL-31、IL-31R、Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.4、Nav1.5、Nav1.6、Nav1.7、Nav1.8、Nav1.9、EPCR、C1、C1q、C1r、C1s、C2、C2a、C2b、C3、C3a、C3b、C4、C4a、C4b、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8、C9、因子B、因子D、因子H、备解素、硬化蛋白、纤维蛋白原、纤维蛋白、凝血酶原、凝血酶、组织因子、因子V、因子Va、因子VII、因子VIIa、因子VIiI、因子VIIIa、因子IX、因子IXa、因子X、因子Xa、因子XI、因子XIa、因子XII、因子XIIa、因子XIII、因子XIIIa、TFPI、抗凝血酶III、EPCR、血栓调节蛋白、TAPI、tPA、纤维蛋白溶酶原、纤溶酶、PAI-1、PAI-2、GPC3、黏结蛋白聚糖-1、黏结蛋白聚糖-2、黏结蛋白聚糖-3、黏结蛋白聚糖-4、LPA、S1P和激素或生长因子的受体。尽管上面列出的抗原的实例还包括受体，但甚至以可溶形式存在于体液中的这些受体也可以用作本发明的抗原结合结构域所结合的抗原。上面列出的抗原的实例包括在细胞膜上表达的膜分子和从细胞分泌到细胞外的可溶性分子。当本公开的抗原结合结构域与细胞分泌的可溶性分子结合时，抗原结合结构域优选具有中和活性。对含有可溶性分子的溶液没有限制，该可溶性分子可以存在于体液中，即每一种血管液体或每一种填充在活体的组织或细胞之间的液体。在非限制性方面，本公开的抗原结合结构域所结合的可溶性分子可以存在于细胞外液中。细胞外液是指脊椎动物中血浆、细胞间液、淋巴液、紧密结缔组织、脑脊液、脊髓液、抽吸物、滑液或骨和软骨中的此类成分、肺泡液(支气管肺泡灌洗液)、腹水、胸腔积液、心包积液、囊液、眼房水(水状液)或此类跨细胞液(由于细胞的主动运输或分泌活动而产生的腺腔中的各种液体，以及肠腔和其他体腔中的液体)的总称。在本说明书中，术语“携带部分”是指多肽中除抗原结合结构域之外的部分。本公开的携带部分通常为由氨基酸构成的肽或多肽。在具体实施方案中，多肽中的携带部分通过蛋白酶切割序列与抗原结合结构域连接。本公开的携带部分可以是一系列通过酰胺键连接的肽或多肽，也可以是由多个肽或多肽通过共价键如二硫键或非共价键例如氢键或疏水相互作用形成的复合物。本公开的携带部分具有抑制抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制结构域。在本说明书中，术语“抑制结构域”仅限于抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。抑制结构域可以是具有任何结构的结构域，只要所使用的结构域可以抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。这种抑制结构域的实例包括但不限于抗体重链可变区(VH)、抗体轻链可变区(VL)、前B细胞受体和单域抗体。抑制结构域可以构成整个携带部分或可以构成携带部分的一部分。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，在蛋白酶切割序列被蛋白酶切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制弱于在蛋白酶切割序列未被切割的状态下抑制结构域对抗原结合结构域的抗原结合活性的抑制。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域比未切割的多肽具有更短的血液半衰期。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域比携带部分具有更短的血液半衰期。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域比携带部分具有更低的分子量。在某些实施方案中，抗原结合结构域的分子量为60kDa或更小。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分具有FcRn结合活性，而抗原结合结构域不具有FcRn结合活性或比携带部分具有较弱的FcRn结合活性。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，包含抗原结合结构域和携带部分的多肽比单独存在的抗原结合结构域具有更长的血液中的半衰期。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分被设计为为了多肽的半衰期更长，具有更长的血液中的半衰期。在这样的实施方案中，延长携带部分在血液中的半衰期的方法的实例包括但不限于大分子量的携带部分、携带部分具有的FcRn结合活性、携带部分具有的白蛋白结合活性，以及携带部分的聚乙二醇化。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分比抗原结合结构域在血液中的半衰期更长(换言之，抗原结合结构域比携带部分具有更短的在血液中的半衰期)。在本公开中，单独的抗原结合结构域和多肽的半衰期，或抗原结合结构域和携带部分在血液中的半衰期优选与人类中其在血液中的半衰期进行比较。如果血液中的半衰期在人类难以测量，则可以根据其在小鼠(例如，正常小鼠、表达人类抗原的转基因小鼠和表达人FcRn的转基因小鼠)或猴子(例如食蟹猴)血液中的半衰期来预测在人类血液中的半衰期。在一个实施方案中，延长携带部分在血液中的半衰期的方法包括大分子量的携带部分。在一个实施方案中，使携带部分在血液中的半衰期长于抗原结合结构域的方法包括使携带部分的分子量高于抗原结合结构域的分子量。在一个实施方案中，延长携带部分在血液中的半衰期的方法包括赋予携带部分FcRn结合活性。通过在携带部分中建立FcRn结合区的方法，携带部分通常可以具有FcRn结合活性。携带部分具有的FcRn结合活性并不意味着抗原结合结构域没有FcRn结合活性。在携带部分比抗原结合结构域具有更长的血液半衰期的实施方案中，抗原结合结构域当然可以不具有FcRn结合活性，或者抗原结合结构域可以具有FcRn结合活性，只要FcRn结合活性弱于携带部分的FcRn结合活性。在一个实施方案中，延长携带部分的血液中的半衰期的方法涉及使携带部分与白蛋白结合。由于白蛋白不经过肾脏排泄并具有FcRn结合能力，其在血液中的半衰期长达17天至19天(JClinInvest.1953Aug；32(8):746-768)。因此，据报道，与白蛋白结合的蛋白质变得庞大并能够间接与FcRn结合，因此在血液中的半衰期增加(Antibodies2015,4(3),141-156)。在一个实施方案中，用于延长携带部分在血液中的半衰期的备选方法涉及使携带部分聚乙二醇化。蛋白质的聚乙二醇化被认为会使蛋白质变大，还可以抑制血液中蛋白酶引起的降解，从而延长蛋白质在血液中的半衰期(JPharmSci.2008Oct；97(10):4167-83)。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分包含抗体Fc区。在具体实施方案中，携带部分包含人IgG抗体的CH2结构域和CH3结构域。在具体实施方案中，携带部分包含从人IgG1抗体重链Cys226或Pro230延伸至重链羧基末端的部分。然而，Fc区的C-末端赖氨酸(Lys447)或甘氨酸-赖氨酸(Gly446-Lys447)可能存在也可能不存在。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分包含抗体恒定区。在更优选的实施方案中，携带部分包含IgG抗体恒定区。在进一步优选的实施方案中，携带部分包含人IgG抗体恒定区。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分包含：结构上与抗体重链恒定区基本相似的区域；和在结构上与抗体轻链基本相似的区域，所述区域通过共价键如二硫键或非共价键如氢键或疏水相互作用连接到该区域。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域可以从多肽中释放出来，并在抗原结合结构域从多肽中释放出来的状态下比其不从多肽中释放出来的状态下的抗原结合结构域具有更高的抗原结合活性。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，由于蛋白酶切割蛋白酶切割序列，抗原结合结构域变得可从多肽释放。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，从多肽释放的抗原结合结构域比释放前具有更高的抗原结合活性。换言之，抗原结合结构域的抗原结合活性在抗原结合结构域未从多肽释放的状态下被抑制结构域抑制。抗原结合结构域的抗原结合活性是否被抑制结构域抑制通过方法例如FACS(荧光激活细胞分选)、ELISA(酶联免疫吸附测定)、ECL(电致化学发光)、SPR(表面等离振子共振)方法(Biacore)、BLI(生物层干涉)(Octet)方法确认。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，从多肽释放的抗原结合结构域的抗原结合活性的值为等于或大于未从多肽释放的抗原结合结构域的结合活性的两倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、2000倍或3000倍。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，当抗原结合结构域的抗原结合活性通过从上述方法中选择的一种方法来测量时，未观察到释放前抗原结合结构域与抗原的结合。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，蛋白酶切割序列被切割，使得抗原结合结构域变得能够从多肽释放。因此，在这些方面，可以比较多肽切割之前和之后的抗原结合活性。具体地，使用切割的多肽测量的抗原结合活性是等于或大于使用未切割多肽测量的抗原结合活性的2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、2000倍或3000倍的值。在一些更具体的实施方案中，当通过选自上述方法中的一种方法测量抗原结合活性时，未观察到未切割多肽的抗原结合结构域与抗原的结合。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，蛋白酶切割序列被蛋白酶切割。因此，在这些方面，可以比较多肽的蛋白酶处理之前和之后的抗原结合活性。具体地，使用蛋白酶处理后的多肽测定的抗原结合活性为等于或大于使用未经蛋白酶处理的多肽测得的抗原结合活性的2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍、100倍、200倍、300倍、400倍、500倍、600倍、700倍、800倍、900倍、1000倍、2000倍或3000倍的值。在一些更具体的实施方案中，当通过选自上述方法中的一种方法测量抗原结合活性时，未观察到未经蛋白酶处理的多肽的抗原结合结构域与抗原的结合。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域的抗原结合活性通过抗原结合结构域与携带部分的抑制结构域的缔合而受到抑制。在某些实施方案中，当本公开内容的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域和携带部分的抑制结构域之间的缔合通过蛋白酶对蛋白酶裂解序列的切割而消除。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域包含或是单域抗体，并且携带部分的抑制域抑制单域抗体的抗原结合活性。单域抗体可以是VHH，或通过其单域具有抗原结合活性的VH，或通过其单域具有抗原结合活性的VL。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分的抑制结构域与抗原结合结构域缔合。抑制结构域可以构成携带部分的一部分或可以构成携带部分的全部。从另一个角度来看，抑制结构域也可以定义为携带部分中与抗原结合结构域缔合的部分。在更具体的实施方案中，作为单域抗体的抗原结合结构域和作为VL、VH或VHH的抑制结构域形成抗体VH和抗体VL之间发现的缔合。在进一步具体的实施方案中，作为单域抗体的抗原结合结构域和作为VL、VH或VHH的抑制结构域形成抗体VH和抗体VL之间所发现的缔合，在处于如此形成的缔合状态下，抑制结构域在构象上抑制抗原结合结构域与抗原的结合或在构象上改变抗原结合结构域的抗原结合位点，使得单域抗体的抗原结合活性被VL、VH或VHH抑制。在使用VHH作为单域抗体的实施方案中，当VHH的主要抗原结合位点CDR3或其邻近位点存在于与抑制结构域缔合的界面时，认为VHH与抗原的结合受到抑制结构域的构象抑制。例如，可以通过切割切割位点来消除抗原结合结构域与抑制结构域的缔合。缔合的消除可以与例如两个或更多个多肽区域彼此相互作用的状态的消除互换使用。两个或多个多肽区域之间的相互作用可以完全消除，或者两个或多个多肽区域之间的相互作用可以部分消除。在本说明书中，“界面”通常是指两个区域相互关联或相互作用的表面。形成界面的氨基酸残基通常是指进行缔合的每个多肽区域中包含的一个或多个氨基酸残基，更优选地是指缔合时彼此接近并参与相互作用的氨基酸残基。具体地，相互作用包括非共价键，例如氢键、静电相互作用或缔合时彼此接近的氨基酸残基之间的盐桥形成。在本说明书中，“形成界面的氨基酸残基”具体指构成界面的多肽区域中所含的氨基酸残基。作为一个实例，构成界面的多肽区域是指负责抗体、配体、受体、底物等中分子内或分子间选择性结合的多肽区域。抗体中此类多肽区域的具体实例可以包括重链可变区和轻链可变区。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，实例包括抗原结合结构域和抑制结构域。形成界面的氨基酸残基的实例包括但不限于在缔合时彼此接近的氨基酸残基。例如，通过分析多肽的构象和检查多肽缔合时形成界面的多肽区域的氨基酸序列，可以发现缔合时彼此接近的氨基酸残基。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域中参与缔合的氨基酸残基，或抑制结构域中参与缔合的氨基酸残基可以被改变/修饰以促进抗原结合结构域与抑制结构域的缔合。在进一步具体实施方案中，在抗原结合结构域中形成与抑制结构域的界面的氨基酸残基，或在抑制结构域中与抗原结合结构域形成界面的氨基酸残基可以被改变。在优选的实施方案中，形成界面的氨基酸残基可以通过将突变引入界面氨基酸残基的方法来改变，使得形成界面的两个或更多个氨基酸残基具有不同的电荷。导致不同电荷的氨基酸残基的改变包括带正电荷的氨基酸残基改变为带负电荷的氨基酸残基或不带电荷的氨基酸残基、带负电荷的氨基酸残基改变为带正电荷的氨基酸残基或不带电荷的氨基酸残基，以及不带电荷的氨基酸残基改变为带正电荷或带负电荷的氨基酸残基。这样的氨基酸改变是出于促进缔合的目的而进行的，只要能够达到促进缔合的目的，就不受氨基酸改变的位置或氨基酸的种类的限制。改变的实例包括但不限于取代。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，作为抗原结合结构域的VHH与作为抑制结构域的VL缔合。在VHH中与VL缔合的氨基酸残基可以指例如形成VHH和VL之间的界面的氨基酸残基。VHH中与VL缔合的氨基酸残基的实例包括但不限于第37、44、45和47位的氨基酸残基(J.Mol.Biol.(2005)350,112-125)。VHH的活性通过促进VHH和VL之间的缔合而受到抑制。同样，VL中与VHH缔合的氨基酸残基可以指例如形成VHH和VL之间界面的氨基酸残基。可以改变在VHH中与VL缔合的氨基酸残基，以促进VHH和VL之间的缔合。这种氨基酸取代的实例包括但不限于F37V、Y37V、E44G、Q44G、R45L、H45L、G47W、F47W、L47W、T47W或/和S47W。代替改变VHH中的每个残基，也可以使用最初具有氨基酸残基37V、44G、45L或/和47W的VHH。代替VHH氨基酸，VL中参与与VHH缔合的氨基酸残基可以被改变，也可以将氨基酸改变引入VHH和VL两者，只要是出于实现促进VHH和VL之间的缔合的目的。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域和抑制结构域可以通过使用VHH作为抗原结合结构域并使用VH或VHH作为抑制结构域彼此缔合。可以鉴定和改变在作为抗原结合结构域的VHH中与作为抑制结构域的VH或VHH缔合中涉及的氨基酸残基，以促进抗原结合结构域VHH与抑制结构域VH或VHH的缔合。此外，可以鉴定和改变作为抑制结构域的VH或VHH中，与作为抗原结合结构域的VHH缔合中涉及的氨基酸残基。在使用VHH以外的单域抗体作为抗原结合结构域的情况下，也可以与上述类似地鉴定和改变抗原结合结构域或抑制结构域中参与缔合的氨基酸残基。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分和抗原结合结构域通过接头融合。在更具体的实施方案中，携带部分和抗原结合结构域通过含有蛋白酶切割序列的接头融合。在备选的具体实施方案中，携带部分和抗原结合结构域通过接头融合，由此形成的融合蛋白含有蛋白酶切割序列。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分和抗原结合结构域在没有接头的情况下融合。在更具体的实施方案中，在携带部分的N端氨基酸与抗原结合结构域的C端氨基酸之间形成氨基键以形成融合蛋白。形成的融合蛋白包含蛋白酶切割序列。在特定的实施方案中，携带部分的一到数个N端氨基酸或/和抗原结合结构域的一到数个C端氨基酸被改变，并且携带部分的N端和抗原结合结构域的C端融合以在融合位置附近形成蛋白酶切割序列。更具体地，当使用LSGRSDNH(SEQIDNO:18031)作为蛋白酶切割序列时，可以通过例如将抗原结合结构域的四个C端氨基酸转化为LSGR序列并将携带部分的四个N端氨基酸转化为SDNH序列来形成蛋白酶切割序列。当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，蛋白酶切割序列可以置于多肽中的任何位置，只要抗原结合结构域被蛋白酶切割释放并且在释放后不失去其抗原结合活性。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分包含抗体恒定区，抗体恒定区的N端并且抗原结合结构域的C端通过接头或不通过接头融合。在特定的实施方案中，蛋白酶切割序列位于携带部分中包含的抗体恒定区内。在这种情况下，蛋白酶切割序列可以位于抗体恒定区内，从而通过蛋白酶切割释放抗原结合结构域。在具体的实施方案中，蛋白酶切割序列位于携带部分中包含的抗体重链恒定区内，更具体地，位于抗体重链恒定区内更靠近抗原结合结构域的一侧，超过第140位的氨基酸(EU编号)，或在抗体重链恒定区中靠近抗原结合结构域的一侧，超过122位的氨基酸(EU编号)。在备选的具体实施方案中，蛋白酶切割序列位于携带部分中包含的抗体轻链恒定区内，更具体地位于抗体轻链恒定区内靠近抗原结合域的一侧，超过130位的氨基酸(Kabat编号)，或在抗体轻链恒定区中靠近抗原结合结构域的一侧，超过113位氨基酸(Kabat编号)。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域是单域抗体，并且单域抗体的C端和携带部分的N端通过接头或不通过接头融合。在特定的实施方案中，蛋白酶切割序列位于单域抗体内。在更具体的实施方案中，单域抗体为由VH或VHH制备的单域抗体，蛋白酶切割序列位于单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过35b位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过95位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过109位的氨基酸(Kabat编号)。在备选的具体实施方案中，单域抗体是由VL制备的单域抗体，蛋白酶切割序列位于单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过32位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过91位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中靠近携带部分的一侧，超过104位的氨基酸(Kabat编号)。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，携带部分包含抗体恒定区，抗原结合结构域为单域抗体，并且抗体恒定区和单域抗体通过接头或不通过接头融合。在更具体的实施方案中，抗体恒定区的N端和单域抗体的C端通过接头或不通过接头融合。在备选的具体实施方案中，抗体恒定区的C端和单域抗体的N端通过接头或不通过接头融合。在特定的实施方案中，蛋白酶切割序列位于携带部分中包含的抗体恒定区内。在更具体的实施方案中，蛋白酶切割序列位于抗体重链恒定区中更靠近单域抗体的一侧，超过第140位的氨基酸(EU编号)，或在抗体重链恒定区中更靠近单域抗体的一侧，超过122位的氨基酸(EU编号)。在备选的具体实施方案中，蛋白酶切割序列位于抗体轻链恒定区中更靠近抗原结合结构域的一侧，超过130位的氨基酸(Kabat编号)，或在抗体轻链恒定区中更靠近抗原结合结构域的一侧，超过113位的氨基酸(Kabat编号)。在特定的实施方案中，蛋白酶切割序列位于单域抗体内。在更具体的实施方式中，单域抗体是由VH或VHH制备的单域抗体，蛋白酶切割序列位于单域抗体中更靠近抗体恒定区的一侧，超过35b位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中更靠近抗体恒定区一侧，超过95位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中更靠近抗体恒定区的一侧，超过109位的氨基酸(Kabat编号)。在备选的实施方案中，单域抗体是由VL制备的单域抗体，蛋白酶切割序列位于单域抗体中更靠近抗体恒定区的一侧，超过32位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中更靠近抗体恒定区一侧，超过91位的氨基酸(Kabat编号)，或在单域抗体中更靠近抗体恒定区的一侧，超过104位的氨基酸(Kabat编号)。在特定的实施方案中，蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域和携带部分之间的边界附近。短语“抗原结合结构域和携带部分之间的边界附近”是指位于抗原结合结构域和携带部分之间连接位点上游或下游的部分，并且不会很大地影响抗原结合结构域的二级结构。在更具体的实施方式中，抗原结合结构域与携带部分中包含的抗体恒定区连接，蛋白酶切割序列位于抗原结合结构域与抗体恒定区之间的边界附近。短语“抗原结合结构域和抗体恒定区之间的边界附近”可以指靠近抗原结合结构域和抗体重链恒定区之间的边界，或靠近抗原结合结构域和抗体轻链恒定区之间的边界。当抗原结合结构域是由VH或由VHH制备的单域抗体，并且与抗体重链恒定区连接时，短语“抗原结合结构域与抗体恒定区之间的边界附近”可以指在单域抗体的101位的氨基酸(Kabat编号)与抗体重链恒定区的140位的氨基酸(EU编号)之间或可以指单域抗体的109位的氨基酸(Kabat编号)和抗体重链恒定区的122位氨基酸(EU编号)之间。当抗原结合结构域是由VH或由VHH制备的单域抗体并且与抗体轻链恒定区连接时，短语“抗原结合结构域与抗体轻链恒定区之间的边界附近”可以指在单域抗体的101位的氨基酸(Kabat编号)与抗体轻链恒定区的130位的氨基酸(Kabat编号)之间或可以指单域抗体的109位(Kabat编号)的氨基酸和抗体轻链恒定区的113位氨基酸(Kabat编号)之间。当抗原结合结构域是由VL制备的单域抗体时，短语“抗原结合结构域和抗体恒定区之间的边界附近”是指单域抗体的96位的氨基酸(Kabat编号)和抗体恒定区的规定位置之间，或单域抗体的104位的氨基酸(Kabat编号)和抗体恒定区的规定位置之间。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，该多肽是IgG抗体样分子。此类实施方案的实例包括但不限于：其中携带部分包含IgG抗体恒定区、用作抗原结合结构域的单域抗体代替IgG抗体的VH，以及抗原结合活性被VL抑制的实施方案；其中携带部分包含IgG抗体恒定区，作为抗原结合结构域的单域抗体代替了IgG抗体的VL，并且抗原结合活性被VH抑制的实施方案；以及其中携带部分包含IgG抗体恒定区，用作抗原结合结构域的单域抗体代替IgG抗体的VH和VL之一，并且额外的单域抗体抑制抗原结合结构域的抗原结合活性代替了IgG抗体的其它结构域的实施方案。本说明书中使用的术语“IgG抗体样分子”用于定义具有在结构上与IgG抗体中的恒定结构域或恒定区基本相似的部分，以及在结构上与IgG抗体中可变结构域或可变区基本相似的部分，并且与IgG抗体具有基本相似的构象的分子。在IgG抗体样分子中，与抗体CH1相似的结构域和与CL相似的结构域可以互换使用；即，只要结构域之间存在类似于IgG抗体的CH1和CL之间相互作用的相互作用，与抗体铰链区相似部分连接的结构域可以是抗体CH1结构域或抗体CL结构域。然而，在本说明书中，“IgG抗体样分子”可以在保留与IgG抗体类似的结构的同时发挥或不发挥抗原结合活性。当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，该多肽可包含一个或多个抗原结合结构域。一个或多个抑制结构域可以抑制多个抗原结合结构域的抗原结合活性。多个抗原结合结构域可以各自与抑制结构域缔合。多个抗原结合结构域可以各自与携带部分融合。多个抗原结合结构域可以各自能够从多肽中释放。用于释放多个抗原结合结构域的蛋白酶切割序列可以是与抗原结合结构域的数量相对应的多个蛋白酶切割序列。当多肽为IgG抗体样分子时，可以在对应于IgG抗体的两个可变区的部分分别建立抗原结合结构域，如图3所示。本领域技术人员参考本公开应该理解这样的实施方案。掺入两个臂的抗原结合结构域可以具有相同的抗原结合特异性或可以在抗原结合特异性方面不同。本领域技术人员参考本公开应该理解这样的实施方案。显然，这些实施方案包括在本公开的范围内。在某些实施方案中，当本公开的多肽包含抗原结合结构域和携带部分时，抗原结合结构域进一步连接至第二抗原结合结构域。第二抗原结合结构域的实例包括但不限于单域抗体，抗体片段，包含在体内细胞膜蛋白avimer中的大约35个氨基酸的称为A结构域的模块(WO2004/044011和WO2005/040229)，作为蛋白结合结构域来源于在细胞膜上表达的糖蛋白纤连蛋白的含有10Fn3结构域的adnectin(WO2002/032925)，含有构成由蛋白A的58个氨基酸组成的三螺旋束的IgG结合结构域支架的Affibody(WO1995/001937)，DARPins(设计的锚蛋白重复蛋白)，其是锚蛋白重复(AR)的分子表面暴露区域，每个区域具有33个氨基酸残基结构，其折叠成转角、两个反平行螺旋和环的亚基(WO2002/020565)，anticalin，其具有四个环区域，连接着在桶状结构一端向中心轴弯曲的8条反平行链，所述桶状结构在脂质运载蛋白分子例如中性粒细胞明胶酶相关运载蛋白(NGAL)中高度保守(WO2003/029462)，以及在无颌脊椎动物如七鳃鳗或盲鳗的获得性免疫系统中看到的无免疫球蛋白结构的可变淋巴细胞受体(VLR)的由重复的富含亮氨酸重复(LRR)模块组成的马蹄形折叠的内部平行片状结构中的凹陷区域(WO2008/016854)。在优选的实施方案中，第二抗原结合结构域具有与抗原结合结构域不同的抗原结合特异性。在优选的实施方案中，连接的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的分子量为60kDa或更小。在一些更具体的实施方案中，抗原结合结构域和第二抗原结合结构域是抗原结合特异性不同的单域抗体，连接的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域能够从多肽中释放出来，释放后抗原结合结构域和第二抗原结合结构域形成双特异性抗原结合分子。这种双特异性抗原结合分子的实例包括但不限于具有特异性结合靶细胞表面抗原的抗原结合结构域和特异性结合免疫细胞表面抗原的第二抗原结合结构域的双特异性抗原结合分子，具有结合同一抗原的不同亚基的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的双特异性抗原结合分子，以及具有与同一抗原中的不同表位结合的抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的双特异性抗原结合分子。这种双特异性抗原结合分子可以将免疫细胞募集到靶细胞附近，因此被认为可用于治疗由靶细胞引起的疾病。第二抗原结合结构域的抗原结合活性可以被或可以不被携带部分抑制。第二抗原结合结构域可以与或不与携带部分的部分结构相缔合。特别地，当抗原结合结构域和第二抗原结合结构域的抗原结合特异性不同时，未释放状态的抗原结合结构域不能发挥抗原结合活性，例如，如图4所示，即使第二抗原结合结构域的抗原结合活性不会受到抑制，即使第二抗原结合结构域不与携带部分的部分结构缔合。这种包含与第二抗原结合结构域连接的抗原结合结构域的双特异性抗原结合分子不能发挥与两种类型的抗原双特异性结合的功能。图4示出了一种示例性形式，其中抗原结合结构域进一步连接到第二抗原结合结构域。在本说明书中，术语“特异性”是指一种特性，通过该特性，特异性结合分子之一基本上不与除其一个或多个结合伴侣分子以外的分子结合。当抗原结合结构域对包含在特定抗原中的表位具有特异性时，也使用该术语。当抗原结合结构域对抗原中包含的多个表位中的特定表位具有特异性时，也使用该术语。在本文中，术语“基本上不结合”是根据关于结合活性的章节中描述的方法确定的，并且是指特异性结合分子对结合伴侣以外的分子的结合活性为其对结合伴侣分子的结合活性的80％或更少，通常50％或更少，优选30％或更少，特别优选15％或更少。SEQIDNO:5-18003中任一项所示的序列，或包含在那些序列中的可用作蛋白酶切割序列的部分序列(跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4个至第15个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第13个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第12个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第11个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第10个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第14个氨基酸的序列；跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第12个氨基酸的序列；和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第10个氨基酸的序列)可以用作图1所示多肽中的蛋白酶切割位点。而且，从N-末端开始顺序为“选自下述A组的序列-选自下述B组的序列”组成的序列可以用作图1所示的多肽中的蛋白酶切割位点：(A组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第1至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第2至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第3至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第4至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第5至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第6至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第8至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第1至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第2至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第3至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第4至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第5至第6个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第1至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第2至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第3至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第4至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第5至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第6至第8个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列；(B组)跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:5-17201的序列的N端第10至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第11个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第10个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第9个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17202-17993的序列的N端第7至第8个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第15个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第14个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第13个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第12个氨基酸的序列，跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第11个氨基酸的序列，和跨越选自SEQIDNO:17994-18003的序列的N端第9至第10个氨基酸的序列。图1所示的分子在是抗原结合结构域和携带部分连接的状态的多肽时，其具有长半衰期。在该状态下，抗原结合结构域的抗原结合活性被抑制，分子不与抗原结合(A)。抗原结合结构域释放后，抗原结合活性恢复，半衰期变短(B)。尽管图1所示的多肽有许多变化，但当使用IgG抗体样分子时，可以按照图2所示的生产方法生产。最初，获得与靶抗原结合的单域抗体(例如，VH或VHH)(A)。具有种系序列的IgG抗体的VH和VL中的任何一个被所获得的单域抗体替换，然后与VH和VL中的另一个缔合以形成IgG抗体样分子(B)。将蛋白酶切割序列引入IgG抗体样分子(C)。引入位置例如可以是引入的单域抗体(VH或VHH)与恒定区(CH1或CL)之间的边界附近。单域抗体在作为单域存在时具有抗原结合活性；然而，当它与例如VL/VH/VHH形成可变区时，它会失去抗原结合活性。考虑到VL/VH是具有种系序列的天然人抗体序列，免疫原性风险低，诱导识别VL/VH的抗药物抗体的可能性极低。此外，当使用VHH与单域抗体一起形成可变区时，VHH的人源化可以降低免疫原性风险，并且可以降低诱导识别人源化VHH的抗药物抗体的可能性。单域抗体通过蛋白酶切割插入IgG抗体样分子中的蛋白酶切割序列而释放。如此释放的单域抗体具有抗原结合活性。IgG抗体样分子在被蛋白酶切割前具有与一般IgG分子相似的结构，因此在血液中具有长的滞留性，而蛋白酶切割释放的单域抗体不具有任何Fc区，其分子量大约13kDa，因此通过肾脏排泄迅速清除。事实上，虽然全长IgG的半衰期约为2-3周(Blood.,Mar31,2016,127(13):1633-41)，但单域抗体的半衰期约为2小时(Antibodies，2015，4(3)：141-156)。因此，被蛋白酶激活的抗原结合分子在血液中的半衰期较短，与正常组织中的抗原结合的可能性较小。当单域抗体是VL时，可以通过例如在VL和CL之间的边界附近引入蛋白酶切割序列来获得相同的概念。本公开还涉及当多肽包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域时生产多肽的方法。一种生产包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的本公开多肽的方法是包括以下步骤的方法：获得具有抗原结合活性的抗原结合结构域；将抗原结合结构域与携带部分连接，使得抗原结合结构域的抗原结合活性被抑制结构域抑制，以形成多肽前体；进一步将蛋白酶切割序列插入多肽前体或将多肽前体的一部分改变为蛋白酶切割序列。引入蛋白酶切割序列的方法可以是插入蛋白酶切割序列和改变多肽前体的一部分中的任何一种，只要蛋白酶切割序列可以被引入多肽前体中。或者，可以通过两种方法的组合将蛋白酶切割序列引入多肽前体中。这样的实施方案对于本领域技术人员参考本说明书应该是显而易见的，并且包括在本公开的范围内。包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的本公开多肽的另一种生产方法是包括以下步骤的方法：获得具有抗原结合活性的抗原结合结构域；通过蛋白酶切割序列将抗原结合结构域与携带部分连接，使得抗原结合结构域的抗原结合活性被抑制结构域抑制，以形成多肽。当抗原结合结构域通过蛋白酶切割序列与携带部分连接时，蛋白酶切割序列可以夹在抗原结合结构域和携带部分之间，或抗原结合结构域的一部分或/和携带部分的一部分可以被改变并用作蛋白酶切割序列的一部分。在使用单域抗体作为抗原结合结构域的实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法如下所述。在本公开的一个实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；(b)将步骤(a)中获得的单域抗体与携带部分连接，使得单域抗体的抗原结合活性被携带部分的抑制结构域抑制，形成多肽前体；和(c)将蛋白酶切割序列引入多肽前体中。在本公开的一个实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；(b)将步骤(a)中获得的单域抗体与携带部分连接，使得单域抗体的抗原结合活性被携带部分的抑制结构域抑制，以形成多肽前体；和(c)在单域抗体和携带部分之间的边界附近引入蛋白酶切割序列。在本公开的一个实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；和(b)将步骤(a)中获得的单域抗体通过蛋白酶切割序列与携带部分连接，使得单域抗体的抗原结合活性被携带部分的抑制结构域抑制，以形成多肽。在特定实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法是还包括以下步骤的生产方法：(d)确认掺入多肽或多肽前体中的单域抗体对靶抗原的结合活性减弱或丧失。在本公开中，短语“结合活性减弱”是指与连接前相比，对靶抗原的结合活性降低，并且该降低的程度没有限制。在特定实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的多肽的生产方法是还包括以下步骤的生产方法：(e)通过蛋白酶切割蛋白酶切割序列释放单域抗体并确认释放的单域抗体与抗原结合。在本公开的一个实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；(b)使步骤(a)中获得的单域抗体与VL缔合作为IgG抗体的VH的替代物，或使单域抗体与VH缔合作为IgG抗体的VL的替代物，从而抑制单域抗体的抗原结合活性，以形成包含单域抗体的IgG抗体样分子前体；和(c)将蛋白酶切割序列引入含有单域抗体的IgG抗体样分子前体中。在本公开的一个实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；(b)使步骤(a)中获得的单域抗体与VL缔合作为IgG抗体的VH的替代物，或使单域抗体与VH缔合作为IgG抗体的VL替代物，从而抑制单域抗体的抗原结合活性，以形成包含单域抗体的IgG抗体样分子前体；和(c)在IgG抗体样分子前体中的单域抗体和抗体恒定区之间的边界附近引入蛋白酶切割序列。在本公开的一个实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)获得与靶抗原结合的单域抗体；和(b)通过蛋白酶切割序列将步骤(a)中获得的单域抗体作为IgG抗体VH或VL的替代物与IgG抗体重链恒定区或轻链恒定区连接，使得单域抗体的抗原结合活性被抑制，形成含有单域抗体的IgG抗体样分子。在特定实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是进一步包括以下步骤的生产方法：(d)确认引入IgG抗体样分子或IgG抗体样分子前体的单域抗体对靶抗原的结合活性减弱或丧失。在本公开中，短语“结合活性减弱”是指与缔合或连接前相比，对靶抗原的结合活性降低，该降低的程度没有限制。在特定实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是进一步包括以下步骤的生产方法：(e)通过蛋白酶切割序列的蛋白酶切割释放单域抗体并确认释放的单域抗体与靶抗原结合。在使用VH、VL或VHH作为抑制结构域的情况下，通过携带部分的抑制结构域抑制单域抗体的抗原结合活性的方法包括使单域抗体与VH、VL或VHH缔合。可以通过允许已知的VH、VL或VHH与单域抗体缔合并比较缔合之前和之后单域抗体的抗原结合活性来筛选抑制所提供的单域抗体的抗原结合活性的VH、VL或VHH。在通过特定VH、VL或VHH抑制单域抗体的抗原结合活性的另一种方法中，可以取代单域抗体中与VH、VL或VHH缔合中参与的氨基酸残基以促进缔合，或者通过使用最初具有这样的氨基酸残基(可以促进缔合的氨基酸)的单域抗体，也可以提供在缔合之前和之后具有期望水平的抗原结合活性差异的单域抗体/抑制结构域对。在本公开的一个实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)取代参与与抗体VH缔合中的单域抗体中的氨基酸残基，或取代参与与抗体VL缔合的单域抗体中的氨基酸残基，以制备变体单域抗体，所述变体单域抗体保留单域抗体对靶抗原的结合活性；(b)使步骤(a)中制备的变体单域抗体与抗体VH缔合，或使变体单域抗体与抗体VL缔合，使得变体单域抗体的抗原结合活性被抑制，以形成含有变体单域抗体的IgG抗体样分子前体；和(c)将蛋白酶切割序列引入含有变体单域抗体的IgG抗体样分子前体中。在本公开的一个实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)取代参与与抗体VH缔合的单域抗体中的氨基酸残基，或取代参与与抗体VL缔合的单域抗体中的氨基酸残基，以制备变体单域抗体，所述变体单域抗体保留单域抗体对靶抗原的结合活性；(b)允许步骤(a)中制备的变体单域抗体与抗体VH缔合，或允许变体单域抗体与抗体VL缔合，使得变体单域抗体的抗原结合活性被抑制，以形成含有变体单域抗体的IgG抗体样分子前体；和(c)在变体单域抗体和IgG抗体样分子前体中的恒定区之间的边界附近引入蛋白酶切割序列。在本公开的一个实施方案中，为包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是包括以下步骤的生产方法：(a)取代参与与抗体VH缔合的单域抗体中的氨基酸残基，或取代参与与抗体VL缔合的单域抗体中的氨基酸残基，以制备变体单域抗体，所述变体单域抗体保留单域抗体对靶抗原的结合活性；和(b)通过蛋白酶切割序列将步骤(a)中制备的变体单域抗体与IgG抗体重链恒定区连接，或通过蛋白酶切割序列将变体单域抗体与IgG抗体轻链恒定区连接，使得变体单域抗体的抗原结合活性被抑制，以形成包含变体单域抗体的IgG抗体样分子。在特定实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是进一步包括以下步骤的生产方法：(d)确认IgG抗体样分子或IgG抗体样分子前体中含有的变体单域抗体对靶抗原的结合活性减弱或丧失。在本公开中，短语“结合活性减弱”是指与缔合或连接前相比，对靶抗原的结合活性降低，该降低的程度没有限制。在特定实施方案中，包含具有抑制结构域的携带部分和抗原结合结构域的IgG抗体样分子的多肽的生产方法是进一步包括以下步骤的生产方法：(e)通过蛋白酶切割序列的蛋白酶切割释放变体单域抗体并确认释放的变体单域抗体与靶抗原结合。配体结合分子在本公开多肽的一个实施方案中，所述多肽为能够结合配体的配体结合分子，其中所述配体结合分子在蛋白酶切割序列被切割的状态下与配体的结合比在蛋白酶切割序列未被切割的状态下，配体结合分子与配体的结合弱。本公开还涉及用于释放与配体结合分子结合的配体的方法，该方法包括通过蛋白酶切割本文所述的配体结合分子中包含的蛋白酶切割序列。本公开还涉及用于从本文所述的配体和配体结合分子的融合蛋白中释放配体的方法，该方法包括通过蛋白酶切割配体结合分子中包含的蛋白酶切割序列。本说明书中的术语“配体结合分子”是指能够与配体结合的分子，特别是能够与未切割状态的配体结合的分子。在本文中，“结合”通常是指通过主要基于非共价键如静电力、范德华力或氢键的相互作用而结合。本公开的配体结合分子的配体结合形式的优选实例包括但不限于抗原-抗体反应，通过该反应，抗原结合区、抗原结合分子、抗体、抗体片段等与抗原结合。短语“能够结合配体”是指即使配体结合分子和配体是分开的分子，配体结合分子也能够结合配体，并且不是指配体结合分子和配体通过共价键连接。例如，配体和配体结合分子通过接头共价结合的事实不称为“能够结合配体”。此外，短语“配体结合减弱”是指上述结合能力(结合容量)减弱。例如，当配体和配体结合分子通过接头共价结合时，接头的切割并不意味着配体结合的减弱。在本公开中，配体结合分子可以通过接头等与配体连接，只要配体结合分子能够与配体结合。本公开的配体结合分子仅受其与未切割状态的配体的结合所限制，并且可以是具有任何结构的分子，只要其能够与未切割状态的目标配体结合。这种配体结合分子的实例包括但不限于抗体重链可变区(VH)、抗体轻链可变区(VL)、单域抗体(sdAb)、包含在体内存在的细胞膜蛋白avimer中的大约35个氨基酸的称为A结构域的模块(WO2004/044011和WO2005/040229)，含有10Fn3结构域的adnectin，所述10Fn3结构域是与在细胞膜上表达的糖蛋白纤连蛋白中的蛋白结合的结构域(WO2002/032925)，含有构成由蛋白A的58个氨基酸组成的三螺旋束的IgG结合结构域支架的Affibody(WO1995/001937)，DARPins(设计的锚蛋白重复蛋白)，其是锚蛋白重复(AR)的分子表面暴露区域，所述锚蛋白重复具有其中包含33个氨基酸残基、转角、两个反平行螺旋和环的亚基重复堆叠的结构(WO2002/020565)，具有四个环区域的anticalin，所述四个环区域支撑桶状结构一侧，所述桶状结构由向中心轴弯曲的8条反平行链形成，在脂质运载蛋白分子例如中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)中高度保守(WO2003/029462)，以及在无颌脊椎动物如七鳃鳗或盲鳗的获得性免疫系统中看到的无免疫球蛋白结构的可变淋巴细胞受体(VLR)的由富亮氨酸重复(LRR)模块的重复的堆叠组成的马蹄形结构的内部平行片状结构中的凹陷区域(WO2008/016854)。当本公开的多肽为配体结合分子时，蛋白酶切割序列可置于多肽中的任何位置，只要配体结合分子与配体的结合因序列切割而减弱。多肽中包含的蛋白酶切割序列的数量可以是一个或多个。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，与未切割状态相比，配体结合分子在切割状态下更弱地结合配体(即，配体结合减弱)。在配体结合分子的配体结合基于抗原-抗体反应的实施方案中，可以基于配体结合分子的配体结合活性评价配体结合的减弱。配体结合分子与配体的结合活性可以通过众所周知的方法，例如FACS、ELISA形式、使用放大发光邻近均相测定(ALPHA)筛选或表面等离振子共振(SPR)现象的BIACORE方法或生物层干涉测量(BLI)(Octet)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)来评估。ALPHA筛选是基于以下原理根据ALPHA技术进行的，该技术使用两种珠子、供体和受体。只有当与供体珠结合的分子和与受体珠结合的分子相互作用并且当两个珠子彼此靠近时，才会检测到发光信号。供体珠中的激光激发光敏剂将环境氧转化为激发态的单线态氧。单线态氧分子在供体珠周围扩散，当它们到达附近的受体珠时，它们会在珠子中引发化学发光反应，从而导致光发射。当与供体珠结合的分子和与受体珠结合的分子不相互作用时，不会发生化学发光反应，因为供体珠产生的单线态氧没有到达受体珠。例如，生物素标记的配体结合分子与供体珠结合，谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的配体与受体珠结合。在不存在竞争性未标记配体结合分子的情况下，配体结合分子与配体相互作用以产生520至620nm的信号。未标记的配体结合分子与标记的配体结合分子竞争与配体的相互作用。可以量化竞争导致的荧光降低以定量确定相对结合亲和力。使用磺基-NHS-生物素等对配体结合分子例如抗体进行生物素化是本领域已知的。包括，例如，将编码框中配体的多核苷酸与编码GST的多核苷酸融合以形成融合基因，在携带允许表达融合基因的载体的细胞等中表达GST融合配体，使用谷胱甘肽柱纯化GST融合配体的方法，可以适当地采用作为用GST标记配体的方法。优选地使用例如适用于基于非线性回归分析的单点竞争模型的软件GRAPHPADPRISM(GraphPadSoftware，Inc.，SanDiego)分析获得的信号。将待观察相互作用的物质的一个(配体)固定在传感器芯片的金薄膜上。从传感器芯片的背面照射光使得在金薄膜和玻璃之间的界面发生全反射。结果，在一部分反射光中形成了反射强度(SPR信号)下降的位点。将待观察相互作用的另一种物质(分析物)倒在传感器芯片的表面上，当分析物与配体结合时，固定的配体分子的质量增加并导致传感器芯片表面上的溶剂的折射率变化。折射率的这种变化会改变SPR信号的位置(相反，发生解离时信号的位置会返回)。Biacore系统在纵坐标上绘制上述位移量，即传感器芯片表面上的质量变化，并显示时间依赖性的质量变化作为测定数据(传感图)。动力学(结合速率常数(ka)和解离速率常数(kd))由传感图的曲线确定，而解离常数(KD)由两个常数之间的比率确定。在BIACORE方法中也优选使用抑制测定或平衡分析。Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010中描述了抑制测定的实例，以及在MethodsEnzymol.2000；323:325-40中描述了平衡分析的实例。短语“配体结合分子与配体结合的功能减弱”是指基于上述测量方法，每个测试配体结合分子结合的配体的量是对照配体结合分子结合的配体的量的，例如，50％或更少，优选45％或更少，40％或更少、35％或更少、30％或更少、20％或更少、或15％或更少，特别优选10％或更少、9％或更少、8％或更少、7％或更少、6％或更少、5％或更少、4％或更少、3％或更少、2％或更少、或1％或更少。可以适当地使用期望的指数作为结合活性指数，并且可以使用解离常数(KD)。在使用解离常数(KD)作为评价结合活性的指数的情况下，测试配体结合分子对配体的解离常数(KD)大于对照配体结合分子对配体的解离常数(KD)是指测试配体结合分子对配体的结合活性比对照配体结合分子弱。短语“与配体结合的功能减弱”是指测试配体结合分子对配体的解离常数(KD)为对照配体结合分子对配体的解离常数(KD)的例如2倍或更多，优选5倍或更多，或10倍或更多，特别优选100倍或更多。对照配体结合分子的实例包括未切割形式的配体结合分子。在本说明书中，术语“配体”是具有生物学活性的分子。具有生物学活性的分子通常通过与细胞表面的受体相互作用而发挥作用，从而以其他方式进行生物刺激、抑制或调节。这些功能通常被认为参与携带受体的细胞的细胞内信号通路。在本说明书中，配体包括通过与生物分子相互作用而发挥生物学活性的所需分子。例如，配体不仅指与受体相互作用的分子，还包括通过与该分子相互作用而发挥生物学活性的分子，例如与该分子相互作用的受体或其结合片段。例如，已知为受体的蛋白质的配体结合位点，以及包含与另一分子相互作用的受体位点的蛋白质，包括在根据本公开的配体中。具体地，可溶性受体、受体的可溶性片段、跨膜受体的胞外结构域和含有它们的多肽等都包括在根据本公开的配体中。本公开的配体通常可以通过与一种或多种结合伴侣结合来发挥所需的生物学活性。配体的结合伴侣可以是细胞外、细胞内或跨膜蛋白。在一个实施方案中，配体的结合伴侣是胞外蛋白，例如可溶性受体。在另一个实施方案中，配体的结合伴侣是膜结合受体。本公开的配体可以以10μM,1μM,100nM,50nM,10nM,5nM,1nM,500pM,400pM,350pM,300pM,250pM,200pM,150pM,100pM,50pM,25pM,10pM,5pM,1pM,0.5pM或0.1pM或更少的解离常数(KD)与结合伴侣特异性结合。具有生物学活性的分子的实例包括但不限于细胞因子、趋化因子、多肽激素、生长因子、凋亡诱导因子、PAMP、DAMP、核酸及其片段。在具体实施方案中，白介素、干扰素、造血因子、TNF超家族成员、趋化因子、细胞生长因子、TGF-β家族成员、myokine、adipokine或神经营养因子可以用作配体。在更具体的实施方案中，CXCL10,IL-2,IL-7,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,IFN-α,IFN-β,IFN-g,MIG,I-TAC,RANTES,MIP-1a,MIP-1b,IL-1R1(白介素1受体，I型)、IL-1R2(白介素1受体，II型)、IL-1RAcP(白介素1受体辅助蛋白)或IL-1Ra(蛋白质登陆号NP_776214,mRNA登陆号NM_173842.2)可以用作配体。趋化因子是7至16kDa的同质血清蛋白家族，最初的特征在于它们能够诱导白细胞迁移。大多数趋化因子具有四种特征半胱氨酸(Cys)，根据前两个半胱氨酸展示的基序，分为CXC或α、CC或β、C或γ和CX3C或δ趋化因子类别。第一个和第三个半胱氨酸之间以及第二个和第四个半胱氨酸之间形成两个二硫键。一般来说，二硫键被认为是必要的。Clark-Lewis及其合作者报道说，二硫键对于至少CXCL10的趋化因子活性至关重要(Clark-Lewisetal.,J.Biol.Chem.269:16075-16081,1994)。具有四个半胱氨酸的唯一一个例外是lymphotactin，它只有两个半胱氨酸残基。因此，lymphotactin仅通过一个二硫键勉强维持其功能结构。根据第一个半胱氨酸之前是否存在ELR基序(Glu-Leu-Arg)，CXC或α亚家族进一步分为两组：ELR-CXC趋化因子和非ELR-CXC趋化因子(参见例如，Clark-Lewis，同上；和Belperioetal.,\"CXCChemokinesinAngiogenesis\",J.Leukoc.Biol.68:1-8,2000)。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体是细胞因子。细胞因子是一种参与免疫调节和炎症过程的分泌细胞信号蛋白家族。这些细胞因子由神经系统的神经胶质细胞和免疫系统的许多细胞分泌。细胞因子可分为蛋白质、肽和糖蛋白，包括庞大而多样的调节因子家族。细胞因子可通过与其细胞表面受体结合，诱导细胞内信号转导，从而引起酶活性的调节，一些基因及其转录因子的上调或下调，或反馈抑制等。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，本公开的细胞因子包括免疫调节因子，例如白介素(IL)和干扰素(IFN)。合适的细胞因子可以包含源自以下类型中的一种或多种的蛋白质：四个α-螺旋束家族(其包括IL-2亚家族、IFN亚家族和IL-10亚家族)；IL-1家族(其包括IL-1和IL-8)；和IL-17家族。细胞因子还可以包括分类为增强细胞免疫应答的1型细胞因子(例如，IFN-γ和TGF-β)，或有利于抗体反应的2型细胞因子(例如，IL-4、IL-10和IL-13)的那些细胞因子。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体是趋化因子。趋化因子通常充当将免疫效应细胞动员到趋化因子表达位点的趋化剂。这被认为有利于将特定趋化因子基因与例如细胞因子基因一起表达，以将其他免疫系统成分动员到治疗部位。此类趋化因子包括CXCL10、RANTES、MCAF、MIP1-α和MIP1-β。本领域技术人员应该知道，某些细胞因子也具有趋化作用，并且承认此类细胞因子可以通过术语“趋化因子”进行分类。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子、细胞因子变体、趋化因子变体等(例如，AnnuRevImmunol.2015；33：139-67)或包含它们的融合蛋白时(例如，StemCellsTranslMed.2015Jan；4(1):66-73)可用作配体。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体选自CXCL10、PD-1、IL-12、IL-6R、IL-1R1、IL-1R2、IL-1RAcP和IL-1Ra。CXCL10、PD-1、IL-12、IL-6R、IL-1R1、IL-1R2、IL-1RAcP和IL-1Ra可能分别具有与天然存在的CXCL10、PD-1、IL-12、IL-6R、IL-1R1、IL-1R2、IL-1RAcP和IL-1Ra相同的序列，或者可以是与天然存在的CXCL10、PD-1、IL-12、IL-6R、IL-1R1、IL-1R2、IL-1RAcP和IL-1Ra序列不同，但保留了相应天然配体的生理活性的配体变体。为了获得配体变体，出于各种目的，可以人为地向配体序列添加改变。优选地，向其中添加抵抗蛋白酶切割的改变(蛋白酶抗性改变)以获得配体变体。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，在配体结合分子中，配体通过切割位点的切割从配体结合分子释放。在此上下文中，当配体通过接头与配体结合分子的一部分结合并且接头不具有蛋白酶切割序列时，配体在与配体结合分子的一部分通过接头连接时被释放(参见例如图5)。即使配体与上述配体结合分子的一部分一起释放，只要配体从大部分配体结合分子中释放出来，就可以得出结论：配体从配体结合分子中释放出来。通过切割位点的切割来检测配体从配体结合分子释放的方法包括使用例如识别配体的用于配体检测的抗体来检测配体的方法。当配体结合分子是抗体片段时，用于配体检测的抗体优选结合与配体结合分子相同的表位。使用用于配体检测的抗体检测的配体可以通过众所周知的方法例如FACS、ELISA形式、使用放大发光邻近均相测定(ALPHA)筛选或表面等离振子共振(SPR)现象的BIACORE方法或生物层干涉测量(BLI)(Octet)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(2006)103(11),4005-4010)来确认。在使用例如Octet检测配体释放的情况下，识别配体的用于配体检测的抗体被生物素化并与生物传感器接触。然后，可以测量样品中与配体的结合以检测配体的释放。具体地，在蛋白酶处理之前或蛋白酶处理之后，使用用于配体检测的抗体，在含有配体和配体结合分子的样品中测量配体的量。可以在蛋白酶处理前后比较样品中检测到的配体的量以检测配体的释放。或者，在含有蛋白酶、配体结合分子和配体的样品和含有配体结合分子和配体、不含有蛋白酶的样品中，使用用于配体检测的抗体测量配体的量。可以比较在有或没有蛋白酶的样品中检测到的配体的量来检测配体的释放。更具体地，可以通过本申请实施例中描述的方法检测配体的释放。当配体结合分子与配体融合形成融合蛋白时，在蛋白酶处理前或蛋白酶处理后含有融合蛋白的样品中，使用用于配体检测的抗体测量配体的量。可以比较在蛋白酶处理前后的样品中检测到的配体的量以检测配体的释放。或者，在含有蛋白酶和融合蛋白的样品和含有融合蛋白但不含蛋白酶的样品中，使用用于配体检测的抗体测量配体的量。可以比较在有或没有蛋白酶的样品中检测到的配体的量来检测配体的释放。更具体地，可以通过本申请实施例中描述的方法检测配体的释放。在配体的生理活性在与配体结合分子结合时被抑制的实施方案中，检测配体从配体结合分子释放的方法包括测量样品中配体的生理活性以检测配体释放。具体地，可以在蛋白酶处理之前或蛋白酶处理之后在含有配体和配体结合分子的样品中测量配体的生理活性，然后进行比较以检测配体的释放。或者，可以在含有蛋白酶、配体结合分子和配体的样品和含有配体结合分子和配体、不含有蛋白酶的样品中测量和比较配体的生理活性以检测配体的释放。当配体结合分子与配体融合形成融合蛋白时，可以在蛋白酶处理之前或蛋白酶处理之后在含有融合蛋白的样品中测量和比较配体的生理活性，以检测配体的释放。或者，可以在含有蛋白酶和融合蛋白的样品和含有融合蛋白但不含蛋白酶的样品中测量和比较配体的生理活性以检测配体的释放。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子包含Fc区。在使用IgG抗体Fc区的情况下，其类型没有限制，例如，可以使用IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的Fc区。例如，可以使用包含选自由SEQIDNO:18004、18005、18006和18007表示的氨基酸序列的一个序列的Fc区，或通过对Fc区添加改变而制备的Fc区突变体。在本公开的一些实施方案中，配体结合分子包含抗体恒定区。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子是抗体。在使用抗体作为配体结合分子的情况下，通过可变区实现与配体的结合。在一些进一步的具体实施方案中，配体结合分子是IgG抗体。在使用IgG抗体作为配体结合分子的情况下，其种类没有限制，可以使用IgG1、IgG2、IgG3、IgG4等。在使用IgG抗体作为配体结合分子的情况下，与配体的结合也是通过可变区实现的。IgG抗体的两个可变区之一或两者均可实现与配体的结合。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子中具有配体结合活性的结构域被配体结合分子中蛋白酶切割序列的切割分开，并且与配体的结合减弱。在使用IgG抗体作为配体结合分子的情况下，示例性实施方案包括将蛋白酶切割序列置于抗体可变区中并由于缺乏形成完整抗体可变区的能力而减弱与处于切割状态的配体的结合。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体的生物学活性通过与未切割的配体结合分子结合而受到抑制。配体的生物学活性被抑制的实施方案的实例包括但不限于其中配体与未切割的配体结合分子的结合实质上或显著地干扰配体与其结合伴侣的结合或与配体与其结合伴侣的结合竞争。在使用具有配体中和活性的抗体或其片段作为配体结合分子的情况下，与配体结合的配体结合分子能够通过发挥其中和活性来抑制配体的生物学活性。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，优选地，未切割的配体结合分子可以通过与配体结合而充分中和配体的生物学活性。即，与未切割的配体结合分子结合的配体的生物学活性优选低于未与未切割的配体结合分子结合的配体的生物学活性。与未切割的配体结合分子结合的配体的生物学活性可以是未与未切割的配体结合分子结合的配体的生物学活性的，例如，90％或更少，优选80％或更少，70％或更少，60％或更少，50％或更少，40％或更少，或30％或更少，特别优选20％或更少，10％或更少，9％或更少，8％或更少，7％或更少，6％或更少，5％或更少，4％或更少，3％或更少、2％或更少、或1％或更少，但不限于此。通过充分中和配体的生物学活性，可以预期配体结合分子的施用防止配体在到达患病组织之前发挥其生物学活性。或者，本公开提供用于中和配体的生物学活性的方法。本公开的方法包括将本公开的配体结合分子与生物学活性应该被中和的配体接触，并收集两个分子结合的产物的步骤。收集到的结合产物中配体结合分子的切割可以恢复配体的中和的生物学活性。因此，根据本公开的用于中和配体生物学活性的方法可以进一步包括通过切割由配体和配体结合分子组成的结合产物中的配体结合分子来恢复配体生物学活性(换句话说，取消配体结合分子的中和活性)的步骤。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，切割的配体结合分子对配体的结合活性优选低于体内天然配体结合伴侣(例如，配体的天然受体)对配体的结合活性。切割的配体结合分子对配体的结合活性表现出，与体内天然结合伴侣结合的配体的量(每单位结合伴侣)的例如，90％或更少，优选80％或更少，70％或更少，60％或更少，50％或更少，40％或更少，或30％或更少，特别优选20％或更少、10％或更少、9％或更少、8％或更少、7％或更少、6％或更少、5％或更少、4％或更少、3％或更少、2％或更少、或1％或更少，但不限于此。期望的指标可以适当地用作结合活性的指标。例如，可以使用解离常数(KD)。在使用解离常数(KD)作为评价结合活性的指标的情况下，切割的配体结合分子对配体的解离常数(KD)大于体内天然结合伴侣对配体的解离常数(KD)意味着切割的配体结合分子对配体的结合活性比体内天然结合伴侣的结合活性弱。切割的配体结合分子对配体的解离常数(KD)是体内天然结合伴侣对配体的解离常数(KD)的例如1.1倍或更多，优选1.5倍或更多、2倍或更多、5倍或更多或10倍或更多，特别优选100倍或更多。对配体仅具有低结合活性或在切割后对配体几乎不具有结合活性的配体结合分子保证配体通过配体结合分子的切割被释放，并且可以预期防止再次与另一个配体分子结合。希望配体在配体结合分子切割后恢复被抑制的生物学活性。切割的配体结合分子与配体的结合的减弱理想地导致配体结合分子抑制配体生物学活性的功能减弱。本领域技术人员可以通过已知方法，例如检测配体与其结合伴侣的结合的方法来确认配体的生物学活性。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，未切割的配体结合分子通过抗原-抗体结合与配体形成复合物。在更具体的实施方案中，配体结合分子和配体的复合物通过配体结合分子和配体之间的非共价键，例如抗原-抗体结合而形成。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，未切割的配体结合分子与配体融合以形成融合蛋白。融合蛋白中的配体结合分子部分与配体部分进一步通过抗原-抗体结合彼此相互作用。配体结合分子和配体可以通过接头或不通过接头融合。即使当融合蛋白中的配体结合分子和配体通过或不通过接头融合时，配体结合分子部分和配体部分之间仍然存在非共价键。换言之，即使在配体结合分子与配体融合的实施方案中，配体结合分子部分与配体部分之间的非共价键与配体结合分子不与配体融合的实施方案中的类似。非共价键由于配体结合分子的切割而减弱。简而言之，配体结合分子的配体结合减弱。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子和配体通过接头融合。例如，可以通过基因工程引入的任意肽接头，或作为合成化合物接头公开的接头(参见例如，ProteinEngineering,9(3),299-305,1996)可以用作在配体结合分子与配体融合中的接头。在本实施方案中，优选肽接头。肽接头的长度没有特别限制，并且可以由本领域技术人员根据目的适当地选择。肽接头的实例可包括但不限于甘氨酸-丝氨酸聚合物的接头。然而，本领域技术人员可以根据目的适当地选择肽接头的长度和序列。合成化合物接头(化学交联剂)是肽的交联中通常所用的交联剂，例如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、辛二酸二琥珀酰亚胺酯(DSS)、辛二酸双(磺基琥珀酰亚胺基)酯(BS3)、二硫代双(丙酸琥珀酰亚胺酯)(DSP)、二硫代双(丙酸磺基琥珀酰亚胺酯)(DTSSP)、乙二醇双(琥珀酸琥珀酰亚胺酯)(EGS)、乙二醇双(琥珀酸磺基琥珀酰亚胺酯)(磺基-EGS)、酒石酸二琥珀酰亚胺酯(DST)、酒石酸二磺基琥珀酰亚胺酯(磺基-DST)、双[2-(琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(BSOCOES)或双[2-(磺基琥珀酰亚胺氧基羰基氧基)乙基]砜(磺基-BSOCOES)。这些交联剂是可商购的。在本公开的一些实施方案中，配体结合分子和配体的融合蛋白是其中配体结合分子的N-末端和配体的C-末端通过或不通过接头融合的融合蛋白。当本公开的配体结合分子是多聚体时，配体可以是融合蛋白，其中配体通过或不通过接头融合在配体结合分子中任意肽链的N-或C-末端。例如，当配体结合分子是IgG抗体时，配体可以通过或不通过接头融合在VH的N-末端或VL的N-末端。下面列出了当本公开的配体结合分子包含单域抗体时，配体结合分子和配体的融合蛋白的结构的几个实施方案。以下实施方案以从N-末端到C-末端的顺序显示。对于受益于本公开的本领域技术人员而言显而易见的是融合蛋白可以是单体或多聚体(包括二聚体)。配体-单域抗体配体-接头-单域抗体配体-单域抗体-抗体恒定区(或其片段)配体-接头-单域抗体-抗体恒定区(或其片段)配体-单域抗体-抗体铰链区-抗体CH2-抗体CH3配体-接头-单域抗体-抗体铰链区-抗体CH2-抗体CH3包含VH和VL的配体结合分子在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子包含抗体VH和抗体VL。包含VH和VL的配体结合分子的实例包括但不限于Fv、scFv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2和完整抗体。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子中包含的VH和VL彼此缔合。抗体VH和抗体VL之间的缔合可以被取消，例如，通过蛋白酶切割序列的切割。本公开的配体结合分子包括这样的配体结合分子，其中配体结合分子中的抗体VL或其部分与抗体VH或其部分之间的缔合通过蛋白酶对蛋白酶切割序列的切割而被取消。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子包括抗体VH和抗体VL，并且配体结合分子中的抗体VH和抗体VL在配体结合分子的蛋白酶切割序列未被切割的状态彼此缔合，而配体结合分子中抗体VH和抗体VL之间的缔合被蛋白酶切割序列的切割取消。配体结合分子中的蛋白酶切割序列可以位于配体结合分子中的任何位置，只要配体结合分子与配体的结合可以通过蛋白酶切割序列的切割减弱。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子包含抗体VH、抗体VL和抗体恒定区。正如Rothlisberger等人(JMolBiol.2005Apr8；347(4):773-89)所提到的，已知抗体的VH和VL结构域或CH和CL结构域通过许多氨基酸侧链相互作用。已知VH-CH1和VL-CL能够作为Fab结构域形成稳定的结构。据报道，VH和VL之间的氨基酸侧链通常以10-5M至10-8M范围内的解离常数相互作用。当仅存在VH和VL结构域时，只有一小部分可能形成缔合状态。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子被设计成在包含抗体VH和抗体VL的配体结合分子中提供蛋白酶切割序列，以及整个重链-轻链相互作用存在于切割前的Fab结构中的两个肽之间，而含有VH(或VH的一部分)的肽与含有VL(或VL的一部分)的肽之间的相互作用通过蛋白酶切割序列的切割减弱，从而取消VH和VL之间的缔合。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列位于抗体恒定区内。在更具体的实施方案中，蛋白酶切割序列位于相对于抗体重链恒定区中氨基酸位置140(EU编号)的可变区侧，或相对于抗体重链恒定区的氨基酸位置122(EU编号)的可变区侧。在一些具体实施方案中，蛋白酶切割序列被插入到从抗体重链恒定区中的氨基酸118(EU编号)到抗体重链恒定区中的氨基酸140(EU编号)的序列内的任何位置。在另一个更具体的实施方案中，蛋白酶切割序列位于抗体轻链恒定区中氨基酸位置130(Kabat编号)的可变区侧，或抗体轻链恒定区的氨基酸位置113(Kabat编号)的可变区侧或在相对于抗体轻链恒定区中氨基酸位置112(Kabat编号)的可变区侧。在一些具体实施方案中，蛋白酶切割序列被插入到从抗体轻链恒定区中的氨基酸108(Kabat编号)到抗体轻链恒定区中的氨基酸131(Kabat编号)的序列内的任何位置。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列位于抗体VH内或抗体VL内。在更具体的实施方案中，蛋白酶切割序列相对于抗体VH的氨基酸位置7(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VH的氨基酸位置40(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VH的氨基酸位置101(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VH的氨基酸位置109(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VH的氨基酸位置111(Kabat编号)位于抗体恒定区侧。在更具体的实施方案中，切割位点或蛋白酶切割序列相对于抗体VL的氨基酸位置7(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VL的氨基酸位置39(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VL的氨基酸位置96(Kabat编号)位于抗体恒定区侧，或相对于抗体VL的氨基酸位置104(Kabat编号)位于抗体恒定区侧或相对于抗体VL的氨基酸位置105(Kabat编号)位于抗体恒定区侧。在某些实施方案中，当本公开的多肽为配体结合分子时，蛋白酶切割序列插入在抗体VH或抗体VL中形成环结构的残基，以及靠近环结构的残基位置。抗体VH或抗体VL中的环结构是指在抗体VH或抗体VL中不形成二级结构例如α-螺旋或-β片层的部分。具体地，形成环结构的残基和靠近环结构的残基的位置可以指抗体VH的氨基酸位置7(Kabat编号)至氨基酸位置16(Kabat编号)、氨基酸位置40(Kabat编号)至氨基酸位置47(Kabat编号)，氨基酸位置55(Kabat编号)至氨基酸位置69(Kabat编号)，氨基酸位置73(Kabat编号)至氨基酸位置79(Kabat编号)，氨基酸位置83(Kabat编号)至氨基酸位置89(Kabat编号)，氨基酸位置95(Kabat编号)至氨基酸位置99(Kabat编号)，或氨基酸位置101(Kabat编号)至氨基酸位置113(Kabat编号)，或抗体VL的氨基酸位置7(Kabat编号)至氨基酸位置19(Kabat编号)、氨基酸位置39(Kabat编号)至氨基酸位置46(Kabat编号)、氨基酸位置49(Kabat编号)至氨基酸位置62(Kabat编号)或氨基酸位置96(Kabat编号)至氨基酸位置107(Kabat编号)的范围。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列插入在抗体VH的氨基酸位置7(Kabat编号)至氨基酸位置16(Kabat编号)，氨基酸位置40(Kabat编号)至氨基酸位置47(Kabat编号)，氨基酸位置55(Kabat编号)至氨基酸位置69(Kabat编号)，氨基酸位置73(Kabat编号)至氨基酸位置79(Kabat编号)，氨基酸位置83(Kabat编号)至氨基酸位置89(Kabat编号)，氨基酸位置95(Kabat编号)至氨基酸位置99(Kabat编号)，或氨基酸位置101(Kabat编号)至氨基酸位置113(Kabat编号)的序列中的任何位置。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列插入在抗体VL的氨基酸位置7(Kabat编号)至氨基酸位置19(Kabat编号)，氨基酸位置39(Kabat编号)至氨基酸位置46(Kabat编号)，氨基酸位置49(Kabat编号)至氨基酸位置62(Kabat编号)，或氨基酸位置96(Kabat编号)至氨基酸位置107(Kabat编号)的序列中的任何位置。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列位于抗体VH和抗体恒定区之间的边界附近。短语“抗体VH和抗体重链恒定区之间的边界附近”可以指抗体VH的氨基酸位置101(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置140(EU编号)之间或可指抗体VH的氨基酸位置109(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置122(EU编号)之间，或抗体VH的氨基酸位置111(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置122(EU编号)之间。当抗体VH连接到抗体轻链恒定区时，短语“抗体VH和抗体轻链恒定区之间的边界附近”可以指抗体VH的氨基酸位置101(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置130(Kabat编号)之间或可指抗体VH的氨基酸位置109(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置113(Kabat编号)之间，或抗体VH的氨基酸位置111(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置112(Kabat编号)之间。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，蛋白酶切割序列位于抗体VL和抗体恒定区之间的边界附近。短语“抗体VL和抗体轻链恒定区之间的边界附近”可以指抗体VL的氨基酸位置96(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置130(Kabat编号)之间或可指抗体VL的氨基酸位置104(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置113(Kabat编号)之间，或抗体VL的氨基酸位置105(Kabat编号)和抗体轻链恒定区的氨基酸位置112(Kabat编号)之间。当抗体VL与抗体重链恒定区连接时，短语“抗体VL与抗体重链恒定区之间的边界附近”可以指抗体VL的氨基酸位置96(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置140(EU编号)之间或可以指抗体VL的氨基酸位置104(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置122(EU编号)之间，或抗体VL的氨基酸位置105(Kabat编号)和抗体重链恒定区的氨基酸位置122(EU编号)之间。可以在配体结合分子中的多个位置提供蛋白酶切割序列，例如，在选自以下的多个位置：抗体恒定区内、抗体VH内、抗体VL内、抗体VH和抗体恒定区之间的边界附近，和抗体VL和抗体恒定区之间的边界附近。参考本公开的本领域技术人员可以改变包含抗体VH、抗体VL和抗体恒定区的分子的形式，例如通过抗体VH和抗体VL互换。这种分子形式不脱离本公开的范围。包含单域抗体的配体结合分子在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，配体结合分子包含单域抗体。配体结合分子中的蛋白酶切割序列可以位于配体结合分子中的任何位置，只要配体结合分子与配体的结合因序列的切割而减弱。在某些实施方案中，当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，蛋白酶切割序列被引入配体结合分子内的单域抗体中。在一些更具体的实施方案中，蛋白酶切割序列被引入单域抗体内形成环结构的残基位置和靠近环结构的残基位置。单域抗体内的环结构是指单域抗体内不形成二级结构例如α-螺旋、β-折叠的部分。当本根据的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，在单域抗体为VHH或单域VH抗体的实施方案中，形成环结构的残基和接近环结构的残基的位置可以具体指以下范围：单域抗体的氨基酸7(Kabat编号)至氨基酸17(Kabat编号)；氨基酸12(Kabat编号)至氨基酸17(Kabat编号)；氨基酸31(Kabat编号)至氨基酸35b(Kabat编号)；氨基酸40(Kabat编号)至氨基酸47(Kabat编号)；氨基酸50(Kabat编号)至氨基酸65(Kabat编号)；氨基酸55(Kabat编号)至氨基酸69(Kabat编号)；氨基酸73(Kabat编号)至氨基酸79(Kabat编号)；氨基酸83(Kabat编号)至氨基酸89(Kabat编号)；氨基酸95(Kabat编号)至氨基酸99(Kabat编号)；氨基酸95(Kabat编号)至氨基酸102(Kabat编号)；和氨基酸101(Kabat编号)至氨基酸113(Kabat编号)。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，在单域抗体为VHH或单域VH抗体的实施方案中，蛋白酶切割序列被引入一个或多个位置，所述一个或多个位置包含在选自以下单域抗体的序列的一个或多个序列中：单域抗体的氨基酸7(Kabat编号)至氨基酸17(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸12(Kabat编号)至氨基酸17(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸31(Kabat编号)至氨基酸35b(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸40(Kabat编号)至氨基酸47(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸50(Kabat编号)至氨基酸65(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸55(Kabat编号)至氨基酸69(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸73(Kabat编号)至氨基酸79(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸83(Kabat编号)至氨基酸89(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸95(Kabat编号)至氨基酸99(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸95(Kabat编号)至氨基酸102(Kabat编号)的序列；以及单域抗体的氨基酸101(Kabat编号)至氨基酸113(Kabat编号)的序列。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，在单域抗体是单域VL抗体的实施方案中，形成环结构的残基和接近环结构的残基位置可以具体指以下范围：单域抗体的氨基酸7(Kabat编号)至氨基酸19(Kabat编号)；氨基酸24(Kabat编号)至氨基酸34(Kabat编号)；氨基酸39(Kabat编号)至氨基酸46(Kabat编号)；氨基酸49(Kabat编号)至氨基酸62(Kabat编号)；氨基酸50(Kabat编号)至氨基酸56(Kabat编号)；氨基酸89(Kabat编号)至氨基酸97(Kabat编号)；以及氨基酸96(Kabat编号)至氨基酸107(Kabat编号)的范围。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，在单域抗体是单域VL抗体的实施方案中，蛋白酶切割序列被引入一个或多个位置，所述一个或多个位置包含在选自以下单域抗体序列的一个或多个序列中：单域抗体的氨基酸7(Kabat编号)至氨基酸19(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸24(Kabat编号)至氨基酸34(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸39(Kabat编号)至氨基酸46(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸49(Kabat编号)至氨基酸62(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸50(Kabat编号)至氨基酸56(Kabat编号)的序列；单域抗体的氨基酸89(Kabat编号)至氨基酸97(Kabat编号)的序列；以及单域抗体的氨基酸96(Kabat编号)至氨基酸107(Kabat编号)的序列。可以在配体结合分子内，例如在配体结合分子中的单域抗体内的多个位置提供多个蛋白酶切割序列。在某些实施方案中，当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，未切割的配体结合分子比单独的单域抗体具有更长的半衰期。使配体结合分子的血液半衰期比单独的单域抗体的血液半衰期长的实施方案的实例包括但不限于增加配体结合分子的分子量，或将具有FcRn结合能力的部分与单域抗体融合，或将具有白蛋白结合能力的部分与单域抗体融合，或将聚乙二醇化部分与单域抗体融合。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，当比较单独的单域抗体的半衰期和配体结合分子的半衰期时，优选使用人中的血液半衰期。当人中的血液半衰期难以测量时，可以根据小鼠(例如，正常小鼠、表达人类抗原的转基因小鼠、具有人FcRn表达的转基因小鼠等)或猴中(例如食蟹猴)中的血液半衰期来预测人中的血液半衰期。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，相对于单独的单域抗体的血液半衰期增加配体结合分子的血液半衰期的一个实施方案包括增加配体结合分子的分子量。在优选的实施方案中，配体结合分子的分子量为60kDa或更大。当存在于血液中时，分子量为60kDa或更大的分子通常不太可能被肾脏清除，并且可能具有长的血液半衰期(参见JBiolChem.1988Oct.15；263(29):15064-70)。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，与单独的单域抗体的血液半衰期相比增加配体结合分子的血液半衰期的一个实施方案包括使单域抗体与FcRn结合区融合。当本公开的多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，作为与单独的单域抗体的血液半衰期相比增加配体结合分子的血液半衰期的一个实施方案，存在使单域抗体与具有白蛋白结合特性的部分融合的方法。白蛋白不经过肾脏排泄并且还具有FcRn结合能力，它在血液中具有17至19天的长半衰期(JClinInvest.1953Aug；32(8)：746-768)。因此，与白蛋白结合的蛋白质变大，也可以间接与FcRn结合，据报道血液中的半衰期增加(Antibodies2015,4(3),141-156)。此外，作为与单独的单域抗体的血液半衰期相比增加配体结合分子的血液半衰期的一种实施方案，存在使单域抗体与聚乙二醇化部分融合的方法。认为使蛋白质聚乙二醇化会使蛋白质变大，同时抑制血液蛋白酶的分解，从而延长蛋白质的血液半衰期(JPharmSci.2008Oct；97(10):4167-83)。将蛋白酶切割序列引入能够与配体结合的分子中的方法的实例包括将蛋白酶切割序列插入能够与配体结合的多肽的氨基酸序列中的方法，以及用蛋白酶切割序列替换能够与配体结合的多肽的氨基酸序列一部分的方法。获得能够与配体结合的分子的方法的实例包括获得具有与配体结合能力的配体结合区的方法。通过使用例如本领域已知的抗体制备方法的方法获得配体结合区。通过该制备方法得到的抗体可以直接用于配体结合区，也可以只使用得到的抗体中的Fv区。当单链(也称为“sc”)形式中的Fv区能够识别抗原时，可以仅使用单链。或者，可以使用包含Fv区的Fab区。在能够结合配体的分子中引入了蛋白酶切割序列的分子作为本公开的配体结合分子。可以任选地确认配体结合分子是否通过用适合蛋白酶切割序列的蛋白酶处理而被切割。蛋白酶切割序列的切割的存在或不存在可以通过例如使蛋白酶与将蛋白酶切割序列引入能够与配体结合的分子中的分子接触，并通过电泳方法例如SDS-PAGE确定蛋白酶处理的产物的分子量来确认。在某些实施方案中，当本公开的多肽是配体结合分子时，提供了产生配体-配体结合分子的方法。例如，提供产生配体和配体结合分子的复合物的方法，所述方法包括使配体结合分子与配体接触，回收由配体结合分子和配体组成的复合物。该复合物可以与药学上可接受的载体一起配制以提供药物组合物。本公开还涉及产生配体结合分子或者配体结合分子与配体融合的融合蛋白的方法，当配体结合分子被切割时，其与配体的结合减弱。当本公开的多肽是配体结合分子时，在一个实施方案中，本公开提供了产生配体结合分子或融合蛋白的方法，包括将蛋白酶切割序列引入能够结合到配体的分子中。生产多肽的方法本公开还涉及编码包含蛋白酶底物或蛋白酶切割序列的多肽的多核苷酸。根据本公开的多核苷酸通常由合适的载体携带(或插入)并转染到宿主细胞中。载体没有特别限制，只要载体可以稳定地保留插入的核酸。例如，当使用大肠杆菌作为宿主时，pBluescript载体(由StratageneCorp.制造)等优选作为用于克隆的载体，尽管可以使用各种市售载体。在为了产生本公开的多肽而使用载体的情况下，表达载体特别有用。表达载体没有特别限制，只要该载体允许多肽在体外、在大肠杆菌、培养细胞或在个体生物体中表达。表达载体优选为例如用于体外表达的pBEST载体(由PromegaCorp.制造)、用于在大肠杆菌中表达的pET载体(由InvitrogenCorp.制造)、用于在培养细胞中表达的pME18S-FL3载体(GenBank登陆号AB009864)，以及用于在个体生物体中表达的pME18S载体(MolCellBiol.8:466-472(1988))。本公开的DNA插入载体可以通过常规方法进行，例如使用限制性位点的连接酶反应(CurrentprotocolsinMolecularBiologyedit.Ausubeletal.(1987)Publish.JohnWiley&Sons.Section11.4-11.11)。宿主细胞没有特别限制，可以根据目的使用各种宿主细胞。用于表达多肽的细胞的实例可以包括细菌细胞(例如，链球菌属(Streptococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、大肠杆菌(E.coli)、链霉菌属(Streptomyces)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis))、真菌细胞(例如，酵母和曲霉属(Aspergillus))、昆虫细胞(例如，果蝇S2(DrosophilaS2)和灰翅夜蛾属SF9(SpodopteraSF9))、动物细胞(例如CHO、COS、HeLa、C127、3T3、BHK、HEK293和Bowes黑色素瘤细胞)和植物细胞。载体向宿主细胞的转染可以通过本领域已知的方法进行，例如磷酸钙沉淀法、电穿孔法(CurrentprotocolsinMolecularBiologyedit.Ausubeletal.,(1987)Publish.JohnWiley&Sons.Section9.1-9.9)、Lipofectamine方法(由GIBCO-BRL/ThermoFisherScientificInc.制造)或显微注射方法。可以将合适的分泌信号参入目标多肽中，以便将在宿主细胞中表达的多肽分泌到内质网腔、周质空间或细胞外环境中。信号可以是目标多肽的内源性信号，或者可以是外源信号。当本公开的多肽被分泌到培养基中时，上述生产方法中多肽的回收包括培养基的回收。当本公开的多肽在细胞中产生时，首先裂解细胞，然后回收多肽。包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羟基磷灰石层析和凝集素层析的本领域已知的方法可用于从重组细胞培养物回收和纯化本公开的多肽。治疗本说明书中使用的“治疗(treatment)”(及其语法派生词，例如“治疗(treat)”和“治疗(treating)”)是指旨在改变待治疗个体的自然病程的临床干预，并且用于预防和在临床病理状况期间进行。治疗的理想效果包括但不限于预防疾病的发展或复发、减轻症状、减轻疾病的任何直接或间接病理影响、预防转移、减少疾病进展的速度，疾病状况的恢复或缓解，以及改良或改善的预后。在一些实施方案中，包含蛋白酶切割序列的本公开的多肽可用于延迟疾病的发病或延迟疾病的进展。药物组合物本公开还涉及药物组合物(药剂)，其包含含有蛋白酶切割序列的多肽和药学上可接受的载体；药物组合物(药剂)，其包含含有蛋白酶切割序列的多肽、配体和药学上可接受的载体；以及药物组合物(药剂)，其包含融合蛋白和药学上可接受的载体，其中融合蛋白中包含蛋白酶切割序列的多肽与配体融合。在本公开中，药物组合物一般是指用于治疗或预防疾病的药剂，或用于检查或诊断的药剂。在本公开中，术语“包含包含蛋白酶切割序列的多肽的药物组合物”可以改述为“用于治疗疾病的方法，包括向待治疗的受试者施用包含蛋白酶切割序列的多肽”，或改述为“包含蛋白酶切割序列的多肽用于治疗疾病的用途”，或“包含蛋白酶切割序列的多肽在生产用于治疗疾病的药物中的用途”。在本公开中，术语“包含配体和包含蛋白酶切割序列的多肽的药物组合物”可以改述为“用于治疗疾病的方法，包括向待治疗的受试者施用配体和包含蛋白酶切割序列的多肽”，或改述为“配体和包含蛋白酶切割序列的多肽用于治疗疾病的用途”，或改述为“配体和包含蛋白酶切割序列的多肽在生产用于治疗疾病的药物中的用途”。在本公开中，术语“包含融合蛋白的药物组合物”可以改述为“用于治疗疾病的方法，包括向待治疗的受试者施用融合蛋白”，或改述为“融合蛋白用于治疗疾病的用途”，或改述为“融合蛋白在生产治疗疾病的药物中的用途”。本公开的药物组合物可以通过使用本领域技术人员已知的方法来配制。例如，药物组合物可以以无菌溶液或混悬液与水或任何其他药学上可接受的液体的注射液的形式肠胃外使用。药物组合物可以例如通过与药理学上可接受的载体或介质，具体地，无菌水或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味剂、赋形剂、运载体、抗菌剂、粘合剂等适当组合，并将它们混合成通常接受的药物实践所需的单位剂型来配制。这些制剂中的活性成分的量设定为在规定范围内提供合适的体积。注射用无菌组合物可以根据通常的药学实践使用运载体如可注射蒸馏水来配制。可注射水溶液的实例包括含有生理盐水、葡萄糖或其他佐剂(例如，D-山梨糖醇、D-甘露糖、D-甘露糖醇和氯化钠)的等渗溶液。水溶液可与适当的增溶剂，例如醇(乙醇等)、多元醇(丙二醇、聚乙二醇等)或非离子表面活性剂(Polysorbate80TM,HCO-50,等)组合使用。油状液体的实例包括芝麻油和大豆油，并且可以组合使用苯甲酸苄酯和/或苯甲醇作为增溶剂。油状液体可以与缓冲液(例如磷酸盐缓冲液和醋酸钠缓冲液)、安抚剂(soothingagent)(例如盐酸普鲁卡因)、稳定剂(例如苯甲醇和苯酚)或抗氧化剂组合。通常将配制好的注射溶液装入合适的安瓿中。本公开的药物组合物优选通过肠胃外途径施用。例如，施用用于注射、经鼻施用、经肺施用或经皮施用的组合物。药物组合物可以通过例如静脉内注射、肌内注射、腹腔内注射或皮下注射全身或局部施用。可以根据患者的年龄和症状适当地选择施用方法。本公开的药物组合物的剂量可以确定在例如0.0001mg至1000mg/kg体重/剂量的范围内。或者，剂量可确定为例如每位患者0.001至100000mg。然而，本公开不必受限于这些数值。剂量和施用方法根据患者的体重、年龄、症状等而变化，本领域技术人员可以考虑这些情况来确定合适的剂量和施用方法。当本公开的多肽是配体结合分子时，在一些实施方案中，含有配体结合分子的组合物可以被施用于个体。施用至个体的配体结合分子与个体中原本存在的配体结合，例如在血液或组织中，处于与配体结合的状态的配体结合分子进一步在体内转运。转运至患病组织的配体结合分子可以在患病组织中被切割，从而可以减弱其与配体的结合以在患病组织中释放结合的配体。释放的配体可以在患病组织中发挥生物学活性并治疗起源于患病组织的疾病。在其中配体结合分子在与配体结合时抑制配体的生物学活性并且在患病组织中被特异性切割的实施方案中，配体在运输过程中不发挥生物学活性并且仅当配体-结合分子在患病组织中被切割时发挥生物学活性。因此，可以减少全身不良反应来治疗疾病。当本公开的多肽是配体结合分子时，在一些实施方案中，可以分别或同时向个体施用含有配体结合分子的组合物和含有配体的组合物。或者，可以将含有配体结合分子和配体两者的组合物施用于个体。在将含有配体结合分子和配体两者的组合物施用于个体的情况下，组合物中的配体结合分子和配体可以形成复合物。在将配体结合分子和配体两者施用至个体的情况下，施用至个体的配体结合分子与配体结合，处于与配体结合的状态的配体结合分子在体内被运输。运输至患病组织的配体结合分子可以在患病组织中切割，从而减弱其与配体的结合以在患病组织中释放结合的配体。释放的配体可以在患病组织中发挥生物学活性并治疗起源于患病组织的疾病。在其中配体结合分子在与配体结合时抑制配体的生物学活性并且在患病组织中被特异性切割的实施方案中，配体在运输过程中不发挥生物学活性并且仅当配体-结合分子在患病组织中被切割时发挥生物学活性。因此，治疗疾病的全身不良反应减少。除了施用于个体的配体之外，施用于个体的配体结合分子还能够结合最初存在于个体中的配体。处于与最初存在于个体中的配体或施用至个体的配体结合的状态下的配体结合分子可以在体内转运。当本公开的多肽是配体结合分子时，在一些实施方案中，可以将配体结合分子与配体融合的融合蛋白施用于个体。在这些实施方案中，融合蛋白中的配体结合分子和配体通过或不通过接头融合。非共价键仍然存在于配体结合分子部分和配体部分之间。在将与配体融合的配体结合分子的融合蛋白施用于个体的情况下，融合蛋白在体内转运，然后融合蛋白中的配体结合分子部分在患病组织中被切割，使得配体结合分子部分与配体的非共价键减弱，以从融合蛋白释放配体和配体结合分子的一部分。释放的配体和释放的配体结合分子的一部分可以在患病组织中发挥配体的生物学活性，治疗起源于患病组织的疾病。在配体结合分子与配体结合时抑制配体的生物学活性并在患病组织中被特异性切割的实施方案中，融合蛋白中的配体在运输过程中不发挥生物学活性而仅当融合蛋白在患病组织中被切割时发挥生物学活性。因此，可以减少全身不良反应来治疗疾病。由于本公开多肽中所含的蛋白酶切割序列被蛋白裂解酶和/或尿激酶切割，因此其预期在癌组织中被切割，这允许在减少全身副作用的同时治疗癌症。本领域技术人员应当理解，只要基于本领域的公知技术知识不存在技术矛盾，本说明书中描述的一个或多个实施方案的任意组合也包括在本公开中。此外，被排除在本公开之外的发明(其是本说明书中描述的一个或多个实施方案的任意组合)应被视为本说明书中意图或描述的发明，只要基于本领域技术常识不存在技术矛盾即可。[实施例]以下是本公开的方法和组合物的实施例。应当理解，根据上述一般描述可以执行各种其他实施方案。[实施例1]利用肽阵列探索蛋白酶切割序列1-1.多肽文库的设计与构建基于序列TSTSGRSANPRG(SEQIDNO:1)设计了15个氨基酸的肽库，该序列可以被uPA和MP-SP1切割。向SEQIDNO：1所示序列的N-和C-末端之一或两者添加Gly或Ser，或两者，并且进一步改变SEQIDNO：1所示序列的部分氨基酸以使其具有除C、R和K之外的任何天然存在的氨基酸，从而设计文库1：GGSXXXXXRSANPRG(SEQIDNO：18079)、文库2：TSTSGRXXXXXGGGS(SEQIDNO：18080)和文库3：GGGSXXXRXXGGGSG(SEQIDNO:18081)(X表示除C、R和K之外的17个天然存在的氨基酸中的任何一个)。肽库文库1、文库2和文库3根据MolCellProteomics,2014Jun,13(6):1585-97；doi:10.1074/mcp.M113.033308；Epub2014Apr4中描述的方法合成，并制备了其上固定这些肽库的肽阵列。1-2.肽的切割和数据分析根据MolCellProteomics，2014Jun，13(6)：1585-97；doi：10.1074/mcp.M113.033308；Epub2014Apr4中描述的方法进行蛋白酶对阵列上肽的切割的评估。为了评估蛋白酶的切割，每个肽阵列都用重组人u-纤溶酶原激活物/尿激酶(人uPA、huPA)(R&DSystems；1310-SE-010)、重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(人MT-SP1、hMT-SP1)(R&DSystems；3946-SE-010)和重组小鼠u-纤溶酶原激活物/尿激酶(小鼠uPA、muPA)(abcam；ab92641)处理。为了评估血清中肽的切割，每个肽阵列都用人血清(hserum)(ValleyBiomedical；HS1004C)处理。处理条件见表1和表2。作为蛋白酶切割的对照(阳性对照)，文库1中使用了GGSTSTSGRSANPRG(SEQIDNO：2)，文库2和3中使用了TSTSGRSANPRGGS(SEQIDNO：3)。作为非特异性切割的对照(阴性对照)，使用GGGSGGGSGGGSGGG(SEQIDNO：4)。切割比率(蛋白水解活性率，缩写为PAR)根据下式计算：仅用PBS处理后的荧光(RFU)/用蛋白酶处理后的荧光(RFU)。[表1]蛋白酶切割的处理条件蛋白酶蛋白酶浓度缓冲液反应时间反应温度人uPA1000nMPBS1小时37℃人MT-SP1500nMPBS1小时37℃小鼠uPA1000nMPBS1小时37℃[表2]用血清切割的处理条件蛋白酶反应溶液反应时间反应温度人血清稀释至80％的人血清过夜37℃在文库1中，对于人uPA和人MT-SP1的切割，17,197个序列显示出比SEQIDNO：2所示序列更高的切割比率(SEQIDNO：5-17201)，对于人uPA、人MT-SP1和小鼠uPA的所有切割，3,200个序列显示出比SEQIDNO：2所示序列更高的切割比率(SEQIDNO：5-3204)。其中，人血清中，452个序列显示出比SEQIDNO：4所示序列更低的切割比率(SEQIDNO:5-456)。对于人uPA和人MT-SP1的切割，在显示出比SEQIDNO：2所示序列更高的切割比率的17,197个序列中，有7,567个序列通过被人uPA、人MT-SP1和小鼠uPA的切割比率除以被人血清的切割比率(当人血清的切割比率小于1时，将其转换为1后)获得的所有值的得分都高于SEQIDNO：2所示序列，且对人uPA和人MT-SP1，切割比率也高于SEQIDNO：2所示序列(SEQIDNO:5-1811和3205-8964)。在文库2中，对于被人uPA和人MT-SP1的切割，792个序列显示出比SEQIDNO：3所示的序列更高的切割比率(SEQIDNO:17202-17993)。其中，对小鼠uPA，两个序列还显示出比SEQIDNO：3所示序列更高的切割比率(SEQIDNO:17202和17203)。在对人uPA和人MT-SP1显示出比SEQIDNO:3所示序列更高切割比率的792个序列中，175个序列在人血清中显示出比SEQIDNO:4低的切割比率(SEQIDNO:17204-17378)。在文库3中，对于被人uPA和人MT-SP1的切割，10个序列显示出比SEQIDNO：3所示序列更高的切割比率(SEQIDNO:17994-18003)。其中，6个序列还显示出比SEQIDNO：3所示序列更高的被对小鼠uPA的切割比率(SEQIDNO:17994-17999)。在对人uPA和人MT-SP1显示出比SEQIDNO:3所示的序列更高的切割比率的10个序列中，有7个序列在人血清中显示出比SEQIDNO:4所示序列更低的切割比率(SEQIDNO:17994-17996和18000-18003)。[实施例2]导入了蛋白酶切割序列的配体结合分子的实施例图5和图6示出了分子的例子，其中当多肽是配体结合分子时，抗体被用作配体结合分子。在这些实施例中，最初获得了针对配体的中和抗体。随后，蛋白酶切割序列被引入到抗配体中和抗体的可变区(VH或VL)和恒定区(CH1或CL)之间的边界附近。确认了在引入蛋白酶切割序列后抗配体抗体的配体结合活性的保留。在配体与抗配体中和抗体结合的状态下证实了通过蛋白酶切割的配体的解离。证实了由此解离的配体的生物学活性的发挥。在图5中，配体的C-末端和抗配体抗体的VH的N-末端通过接头连接，在VH和CH1的边界附近引入了蛋白酶切割序列。当抗配体抗体对配体具有足够强的亲和力时，配体的生物学活性被充分抑制。这种配体-抗-配体抗体融合体在全身施用时不发挥其生物学活性，因为配体被中和。配体-抗-配体抗体融合体具有Fc区；因此，它的半衰期很长。从全身施用的配体-抗配体抗体融合体中，当位于VH和CH1边界附近的蛋白酶切割序列被肿瘤组织中高度表达的蛋白酶切割时，配体-接头-抗配体抗体的VH分子被释放。由于单独的VH或VL不能与配体结合(VH和VL都是与配体结合所必需的)，因此配体的中和作用被消除，配体能够在肿瘤组织中发挥其生物学活性。另外，配体-接头-抗-配体抗体的释放的VH分子缺少Fc区，具有小分子量；因此，它的半衰期很短，并能被迅速全身清除。因此，可以最小化由配体引起的全身副作用。在图6中，与图5不同，配体和抗配体抗体不通过接头连接，并且在VH和CH1之间的边界附近的位置引入了蛋白酶切割序列的抗配体抗体与配体混合，然后被施用。当抗配体抗体对配体具有足够强的亲和力并且相对于配体浓度有足够的抗配体抗体时，配体的生物学活性被充分抑制。这种配体-抗-配体抗体复合物在全身施用时不发挥其生物学活性，因为配体被中和。配体-抗-配体抗体复合物具有Fc区；因此，它的半衰期很长。从全身施用的配体-抗配体抗体复合物，当位于VH和CH1之间边界附近的蛋白酶切割序列被肿瘤组织中高表达的蛋白酶切割时，抗配体抗体的VH分子被释放。由于单独的VH或VL不能与配体结合(VH和VL都是与配体结合所必需的)，因此配体的中和作用被消除，配体能够在肿瘤组织中发挥其生物学活性。另外，释放的配体分子没有Fc区，分子量小；因此，它的半衰期很短，并能被迅速全身清除。因此，可以最小化由配体引起的全身副作用。因此，使用在VH和CH1之间的边界附近引入蛋白酶切割序列的抗配体抗体可以允许配体在蛋白酶表达组织中选择性释放，从而使配体发挥其生物学活性。当配体是细胞因子时，可以允许细胞因子在蛋白酶表达组织中选择性地发挥其作用。当配体为趋化因子时，趋化因子可使表达趋化因子受体的细胞迁移到表达蛋白酶的组织中，因为趋化因子在蛋白酶表达组织中以高浓度存在，而外周血中趋化因子浓度降低。[实施例3]含有导入蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的实施例图7-10说明了当多肽是包含单域抗体的配体结合分子时，包含引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的实例。图7说明了仅包含单域抗体的配体结合分子的实例，在该单域抗体中引入了蛋白酶切割序列。在蛋白酶切割序列未被切割的状态下，单域抗体能够与配体结合，并且当单域抗体对配体具有足够强的亲和力时，配体的生物学活性被充分抑制。即使全身施用配体结合分子和配体，由于配体-配体结合分子复合物中的配体被中和，该配体也不会发挥其生物学活性。配体-配体结合分子复合物比单独的配体具有更长的半衰期。在全身施用由配体和配体结合分子形成的复合物中，当放置在单域抗体中的蛋白酶切割序列被肿瘤组织中高表达的蛋白酶切割时，单域抗体不再能够结合于配体，配体的中和作用被消除，并且配体能够在肿瘤组织中发挥其生物学活性。图8示出了融合多肽的实例，其中配体与配体结合分子融合，该配体结合分子仅包含蛋白酶切割序列被引入其中的单域抗体。在蛋白酶切割序列未被切割的状态下，融合多肽中的单域抗体能够与配体结合，当单域抗体对配体的亲和力足够强时，配体的生物学活性被充分抑制。即使当全身施用融合多肽时，融合多肽中的配体也不会发挥其生物学活性，因为它被中和了，并且融合多肽的半衰期比单独的配体更长。在全身施用的融合多肽中，当放置在单域抗体中的蛋白酶切割序列被肿瘤组织中高表达的蛋白酶切割时，融合多肽中的单域抗体不再能够与配体结合，配体的中和作用被消除，含有配体的融合多肽的一部分被释放，配体能够在肿瘤组织中发挥其生物学活性。图9和图10说明了配体结合分子以及配体结合分子和配体的融合多肽的实例，所述配体结合分子包含引入了蛋白酶切割序列的单域抗体、抗体铰链区和抗体Fc区。如在图7和图8中所示的实施方案中那样，配体可以在未切割状态下被单域抗体中和，在切割状态下释放以发挥其生物学活性。在图9和图10所示的实例中，考虑到抗体Fc区包含在未切割状态的复合物或融合多肽中，融合多肽在未切割状态下的半衰期预计比图7和8所示的实例中的更长。[实施例4]导入了蛋白酶切割序列的含有抗人IL-6R单域抗体的配体结合分子4-1.通过将蛋白酶切割序列引入含有抗人IL-6R单域抗体的多肽中来制备配体结合分子通过将蛋白酶切割序列插入包含在多肽IL6R90-G1T3dCHdC(SEQIDNO：18030)中的单域抗体中，制备了含引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子，所述多肽IL6R90-G1T3dCHdC通过使针对人IL-6R的单域抗体的C-末端(SEQIDNO：18028)和SEQIDNO：18029所示的抗体铰链区和Fc区序列的N-末端融合来制备。首先，将含有据报道被癌症特异性表达的MT-SP1切割的肽序列(LSGRSDNH，SEQIDNO：18031)的序列插入多肽IL6R90-G1T3dCHdC中，并制备表3中所示的配体结合分子。这些分子使用Expi293(LifeTechnologies)通过瞬时表达表达并通过本领域技术人员已知的基于蛋白A的方法进行纯化。作为不含蛋白酶切割序列的对照分子，表达并纯化了IL6R90-G1T3dCHdC。如此制备的配体结合分子和对照分子是如图9所示的二聚体蛋白质。[表3]配体结合分子4-2.包含引入蛋白酶切割序列的抗人IL-6R单域抗体的配体结合分子与人IL-6R的结合评价4-2-1.蛋白酶处理向0.1mg/mL实施例4-1中制备的配体结合分子中加入终浓度为25nM的重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(hMT-SP1，R&Dsystemsm3946-SE-010)，并在37℃温育过夜，从而制备含有经蛋白酶处理的配体结合分子的溶液。制备含有未经蛋白酶处理的配体结合分子的溶液的条件是加入相同体积的PBS代替蛋白酶并在相同条件下储存。4-2-2.配体结合分子的蛋白酶切割的确认(SDS-PAGE)进行SDS-PAGE以确认配体结合分子是否被实施例4-2-1中进行的蛋白酶处理切割。将9μL含有实施例4-2-1中制备的经蛋白酶处理的配体结合分子/未经蛋白酶处理的配体结合分子的溶液与3μL样品缓冲液混合并在95℃下温育1分钟。随后，使用Mini-PROTEANTGX凝胶(4-20％15孔)(Bio-Rad#456-1096)进行电泳，并用SampleBlueSafeStain(novex，LC6065)对蛋白质进行染色。结果如图11所示。如图11所示，虽然无论用蛋白酶处理还是未用蛋白酶处理，不含蛋白酶切割序列的对照分子都在相同位置显示条带(泳道12和13)，但引入相应蛋白酶切割序列的配体结合分子仅在用蛋白酶处理时才显示出新的条带，这表明含有引入各自的蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子被蛋白酶处理切割。4-2-3.经蛋白酶处理的配体结合分子/未经蛋白酶处理的配体结合分子与人IL-6R结合的评价向20μL的含有实施例4-2-1中制备的经蛋白酶处理的配体结合分子/未经蛋白酶处理的配体结合分子的溶液中加入60μL的PBS以制备用于评价IL-6R结合的样品。使用生物层干涉测量法(BLI方法)对样品的IL-6R结合进行评估。将IL-6R结合评估样品和IL-6R分配到倾斜底部(TW384)微孔板(Fortebio,18-5076)中。蛋白质G传感器(ForteBio，18-0022)用PBS水合，并使用OctetRED384在25度的设置下进行测量。在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后让抗体与蛋白G传感器结合200秒。再次，在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后在含有500nM人IL-6R的孔中测量结合180秒，在含有PBS的孔中测量解离180秒。图12显示了显示结合的实时结合图。如图12所示，与使用未经蛋白酶处理的配体结合分子相比，使用每个都导入了蛋白酶切割序列的配体结合分子时，人IL-6R的结合量减少。[实施例5]人IL-6R与含有导入了蛋白酶切割序列的抗人IL-6R单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的制备及评价(配体结合分子-IL-6R融合蛋白)5-1.人IL-6R与含有引入了蛋白酶切割序列的抗人IL-6R单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的制备配体结合分子-IL-6R融合蛋白通过将实施例4-1中制备的配体结合分子的N-末端与人IL-6R(SEQIDNO：18037)的C-末端通过由甘氨酸和丝氨酸组成的各种接头(表4)融合而制备。这些融合蛋白通过本领域技术人员已知的方法使用Expi293(LifeTechnologies)通过瞬时表达表达，并使用本领域技术人员已知的基于蛋白A的方法进行纯化。如此制备的融合蛋白是二聚体蛋白，每个蛋白具有两条肽链，其序列如表4所示。[表4]配体结合分子-IL6R融合蛋白名称SEQIDNO：IL6RaG4S.6R90H12I001-G1T3dCH1dC18038IL6RaG4Sx2.6R90H12I001-G1T3dCH1dC18039IL6RaG4Sx3.6R90H12I001-G1T3dCH1dC18040IL6RaG4Sx4.6R90H12I001-G1T3dCH1dC18041IL6RaG4Sx5.6R90H12I001-G1T3dCH1dC18042IL6RaG4S6R90H13I001-G1T3dCH1dC18043IL6RaG4Sx2.6R90H13I001-G1T3dCH1dC18044IL6RaG4Sx3.6R90H13I001-G1T3dCH1dC18045IL6RaG4Sx4.6R90H13I001-G1T3dCH1dC18046IL6RaG4Sx5.6R90H13I001-G1T3dCH1dC18047IL6RaG4S.6R90H14IG001-G1T3dCH1dC18048IL6RaG4Sx2.6R90H14IG001-G1T3dCH1dC18049IL6RaG4Sx3.6R90H14IG001-G1T3dCH1dC18050IL6RaG4Sx4.6R90H14IG001-G1T3dCH1dC18051IL6RaG4Sx5.6R90H14IG001-G1T3dCH1dC18052IL6RaG4S.6R90H15I001-G1T3dCH1dC18053IL6RaG4Sx2.6R90H15I001-G1T3dCH1dC18054IL6RaG4Sx3.6R90H15I001-G1T3dCH1dC18055IL6RaG4Sx4.6R90H15I001-G1T3dCH1dC18056IL6RaG4Sx5.6R90H15I001-G1T3dCH1dC18057IL6RaG4S.6R90H16IG001-G1T3dCH1dC18058IL6RaG4Sx2.6R90H16IG001-G1T3dCH1dC18059IL6RaG4Sx3.6R90H16IG001-G1T3dCH1dC18060IL6RaG4Sx4.6R90H16IG001-G1T3dCH1dC18061IL6RaG4Sx5.6R90H16IG001-G1T3dCH1dC18062作为不含蛋白酶切割序列的对照分子，制备其中IL6R90-G1T3dCHdC(SEQIDNO：18030)的N-末端与IL-6R的C-末端通过接头融合的分子(表5)，并进行表达和纯化。如此制备的对照分子也是二聚体蛋白质，其各自具有两条肽链，其序列如表5所示。[表5]不含蛋白酶切割序列的对照分子名称SEQIDNO：IL6RaG4S.IL6R90-G1T3dCH1dC18063IL6RaG4Sx2.IL6R90-G1T3dCH1dC18064IL6RaG4Sx3.IL6R90-G1T3dCH1dC18065IL6RaG4Sx4.IL6R90-G1T3dCH1dC18066IL6RaG4Sx5.IL6R90-G1T3dCH1dC180675-2.配体结合分子-IL-6R融合蛋白的蛋白酶切割的评价5-2-1.蛋白酶处理向0.1mg/mL的实施例5-1中制备的配体结合分子-IL-6R融合蛋白中加入终浓度25nM的重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(hMT-SP1，R&Dsystemsm3946-SE-010)并在37℃下温育过夜，从而制备含有经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液。制备含有未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液的条件是加入相同体积的PBS代替蛋白酶并在相同条件下储存。5-2-2.确认抗IL-6R单域抗体-IL-6R融合蛋白的蛋白酶切割(SDS-PAGE)进行SDS-PAGE以确认配体结合分子-IL-6R融合蛋白是否被实施例5-2-1中进行的蛋白酶处理切割。将9μL含有实施例5-2-1中制备的经蛋白酶处理的融合蛋白/未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液与3μL样品缓冲液混合并在95℃下温育1分钟。随后，使用Mini-PROTEANTGX凝胶(4-20％15孔)(Bio-Rad#456-1096)进行电泳，并用SampleBlueSafeStain(novex，LC6065)对蛋白质进行染色。结果示于图13和图16中。如图13-16所示，虽然不含蛋白酶切割序列的对照分子无论经蛋白酶处理还是未经蛋白酶处理都在相同位置显示条带，但包含含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白仅在用蛋白酶处理后才显示新条带，表明包含含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白被蛋白酶处理切割。5-2-3.含有生物素化抗IL-6R单域抗体的分子的制各作为检测与配体结合分子融合的IL-6R的释放的方法，使用以下方法：将生物素添加到识别IL-6R的含有单域抗体的分子中；检测游离IL-6R与含生物素化抗IL-6R单域抗体的分子的结合。如下制备含生物素化抗IL-6R单域抗体的分子：制备含有抗IL-6R单域抗体的分子，其单域抗体的部分序列与IL6R90-G1T3dCH1dC(SEQIDNO:18030)相同，制备了IL6R90-FcBAPdC(SEQIDNO:18069)，其在其C-末端添加了生物素额外序列(AviTag序列，SEQIDNO:18068)。制备编码IL6R90-FcBAPdC的基因片段，然后通过本领域技术人员已知的方法将其导入用于在动物细胞中表达的载体。同时将表达EBNA1和生物素连接酶的基因同时导入载体，加入生物素进行生物素标记。导入基因的细胞在37℃、8％CO2条件下培养，目标含生物素化抗IL-6R单域抗体的分子(IL6R90-bio)被分泌到培养上清液中。使用本领域技术人员已知的方法从培养上清液中纯化IL6R90-bio。5-2-4.通过蛋白酶处理评估IL-6R从融合蛋白的释放使用实施例5-2-3中制备的含生物素化抗IL-6R单域抗体的分子(IL6R90-bio)通过生物层干涉测量法(BLI法)评价通过用蛋白酶处理融合蛋白的IL-6R释放。将实施例5-2-1中制备的经蛋白酶处理的融合蛋白、未经蛋白酶处理的融合蛋白和IL6R90-bio中的每一种分配到倾斜底(TW384)微板(ForteBio，18-5076)的不同孔中。链霉亲和素生物传感器(ForteBio,18-5021)用PBS水合，并使用OctetRED384在27℃的设置下进行测量。在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后使IL6R90-bio与链霉亲和素传感器结合200秒。再次，在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后在含有经蛋白酶处理的融合蛋白或未经蛋白酶处理的融合蛋白的孔中测量结合180秒，然后在含有PBS的孔中测量解离180秒。图17和18示出了显示结合的实时结合的图。如图17和18所示，在IL-6R和含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的情况下，与未用蛋白酶处理时相比，当用蛋白酶处理时与IL6R90-bio结合的人IL-6R的量增加。因此，融合蛋白中的单域抗体与IL-6R的结合活性被蛋白酶处理减弱，并且IL-6R从融合蛋白中释放。[实施例6]人PD-1与含有引入了蛋白酶切割序列的抗人PD-1单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的制备及评价(配体结合分子-PD-1融合蛋白)6-1.人PD-1与含有引入了蛋白酶切割序列的抗人PD-1单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的制备使用本领域技术人员已知的方法制备PD102C3-G1T3noCyshinge(SEQIDNO：18070)和PD102C12-G1T3noCyshinge(SEQIDNO：18071)，其中人抗体恒定区与结合人PD-1的单域抗体融合。然后，在引入蛋白酶切割序列后，PD102C3-G1T3noCyshinge和PD102C12-G1T3noCyshinge中的每一个都在其N-末端与人PD-1胞外域的C-末端(SEQIDNO：18072)通过由甘氨酸和丝氨酸组成的接头融合，从而制备配体结合分子-PD-1融合蛋白(表6)。这些融合蛋白通过本领域技术人员已知的方法使用Expi293(LifeTechnologies)通过瞬时表达表达，并使用本领域技术人员已知的基于蛋白A的方法进行纯化。如此制备的融合蛋白是二聚体蛋白，每个蛋白具有两条肽链，其序列如表6所示。[表6]配体结合分子-人PD1融合蛋白名称SEQIDNO：hPD1PD102C3H12-G1T3noCyshinge18073hPD1PD102C3H13-G1T3noCyshinge18074hPD1PD102C12H12-G1T3noCyshinge18075hPD1PD102C12H14-G1T3noCyshinge180766-2.配体结合分子-PD-1融合蛋白的蛋白酶切割评估6-2-1.蛋白酶处理向0.1mg/mL的实施例6-1中制备的配体结合分子-PD-1融合蛋白中加入终浓度25nM的重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(hMT-SP1，R&Dsystemsm3946-SE-010)并在37℃下温育过夜，从而制备含有经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液。制备含有未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液的条件是加入相同体积的PBS代替蛋白酶并在相同条件下储存。6-2-2.确认抗PD-1单域抗体-PD-1融合蛋白的蛋白酶切割(SDS-PAGE)进行SDS-PAGE以确认配体结合分子-PD-1融合蛋白是否被实施例6-2-1中进行的蛋白酶处理切割。将9μL含有实施例6-2-1中制备的经蛋白酶处理的融合蛋白/未经蛋白酶处理的融合蛋白的溶液与3μL样品缓冲液混合并在95℃下温育1分钟。随后，使用Mini-PROTEANTGX凝胶(4-20％15孔)(Bio-Rad#456-1096)进行电泳，并用SampleBlueSafeStain(novex，LC6065)对蛋白质进行染色。结果如图19所示。如图19所示，含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白只有在蛋白酶处理后才显示出新的条带，表明含有含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白被蛋白酶处理切割。6-2-3.含生物素化抗PD-1单域抗体的分子的制备作为检测与配体结合分子融合的PD-1的释放的方法，使用以下方法：将生物素添加到识别PD-1的含有单域抗体的分子中；检测游离PD-1与含生物素化抗PD-1单域抗体分子的结合。如下制备含生物素化抗PD-1单域抗体的分子：制备含有单域抗体的分子，其具有与PD102C3-G1T3noCyshinge的序列相同的单域抗体的部分序列，制备了在C-末端添加了生物素额外序列(AviTag序列，SEQIDNO:18068)的PD102C3-FcBAPdC(SEQIDNO:18077)。而且，制备含抗PD-1单域抗体的分子，其具有与PD102C12-G1T3noCyshinge的序列相同的单域抗体的部分序列，制备了通过在C-末端添加了生物素额外序列(AviTag序列，SEQIDNO:18068)的PD102C12-FcBAPdC(SEQIDNO:18078)。分别制备编码PD102C3-FcBAPdC和PD102C12-FcBAPdC的基因片段，然后通过本领域技术人员已知的方法将其导入用于在动物细胞中表达的载体。同时将表达EBNA1和生物素连接酶的基因同时导入载体，加入生物素进行生物素标记。导入基因的细胞在37℃、8％CO2条件下培养，目标含生物素化抗PD-1单域抗体的分子(PD1-bio)被分泌到培养上清液中。使用本领域技术人员已知的方法从培养上清液中纯化PD1-bio。6-2-4.通过蛋白酶处理PD-1从融合蛋白的释放的评估使用实施例6-2-3中制备的含生物素化抗PD-1单域抗体的分子(PD1-bio)通过生物层干涉测量法(BLI法)评价通过用蛋白酶处理融合蛋白的PD-1的释放。将实施例6-2-1中制备的经蛋白酶处理的融合蛋白、未经蛋白酶处理的融合蛋白和PD1-bio中的每一种分配到倾斜底(TW384)微板(ForteBio，18-5076)的不同孔中。适当地选择PD102C3-FcBAPdC或PD102C12-FcBAPdC，使得PD1-bio可以与测量样品中的单域抗体结合的相同表位结合。链霉亲和素生物传感器(ForteBio,18-5021)用PBS水合，并使用OctetRED384在27℃的设置下进行测量。在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后使PD1-bio与链霉亲和素传感器结合200秒。再次，在含有PBS的孔中进行基线测量30秒，然后在含有经蛋白酶处理的融合蛋白或未经蛋白酶处理的融合蛋白的孔中测量结合180秒，然后在含有PBS的孔中测量解离180秒。图20示出了实时结合的图，该图示出了结合。如图20所示，在PD-1和含有引入了蛋白酶切割序列的单域抗体的配体结合分子的融合蛋白的情况下，与未用蛋白酶处理时相比，当它们用蛋白酶处理时，与PD1-bio结合的人PD-1的量增加。因此，融合蛋白中的单域抗体与PD-1的结合活性被蛋白酶处理减弱，并且PD-1从融合蛋白中释放。为有助于清楚的理解，以上发明参考实际实例和图示进行了详细说明。然而，本说明书中提供的描述和图示不应被解释为限制本公开的范围。在此引用的所有专利文献和科学文献的公开均明确地通过引用整体纳入本文。[实施例7]插入了各种蛋白酶切割序列的抗体的评价7-1.插入了蛋白酶切割序列的抗体变体的制备将表7中列出的蛋白酶切割序列插入G7(重链：G7H-G1T4(SEQIDNO：18079)；轻链：G7L-LT0(SEQIDNO：18080))的轻链可变区的位置106a(根据Kabat编号)和轻链恒定区的位置107a(根据Kabat编号)之间，G7是一种中和人CXCL10的抗体。上述制备的抗体轻链变体与重链组合的表7所示抗体变体，通过本领域技术人员已知的方法使用Expi293细胞(LifeTechnologies)通过瞬时表达表达，并使用本领域技术人员已知的基于蛋白A的方法纯化。[表7]插入的序列和抗体变体7-2.对插入了蛋白酶切割序列的抗体变体的蛋白酶切割的评价为了评估实施例7-1中制备的抗体变体是否被蛋白酶处理切割，每个抗体变体用重组人u-纤溶酶原激活物/尿激酶(人uPA、huPA)(R&DSystems；1310-SE-010)、重组人蛋白裂解酶/ST14催化结构域(人MT-SP1、hMT-SP1)(R&DSystems；3946-SEB-010)和重组小鼠u-纤溶酶原激活物/尿激酶(小鼠uPA、muPA)(abcam；ab92641)中的每一种处理。在37℃下，使100μg/mL的抗体变体与huPA、hMT-SP1或muPA在PBS中反应1小时后，通过还原毛细管电泳评估抗体变体。Wes(ProteinSimple)用于毛细管电泳，抗人λ链HRP标记抗体(abcam；ab9007)用于检测。结果，在蛋白酶处理的抗体变体中，36kDa附近的峰消失，并在20kDa附近观察到新峰。因此，36kDa和20kDa附近的峰被认为分别对应于未切割的轻链和切割的轻链。蛋白酶处理后得到的各峰面积由Wes专有软件(CompassforSW；ProteinSimple)输出，根据下式计算抗体变体的切割比率(％)：(切割的轻链的峰面积)*100/(切割的轻链的峰面积 未切割的轻链的峰面积)。在huPA处理、hMT-SP1处理和muPA处理中使用的蛋白酶浓度以及抗体变体的切割比率(％)总结在表8、9、10、11、12、13、14和15中。在评估切割比率的抗体变体中，包含G7L.106a.12aa的71种抗体再次进行类似的蛋白酶处理。结果示于表16中。其中，与G7L.106a.12aa相比，在huPA、hMT-SP1和muPA处理中显示相同或更高切割比率的抗体变体显示在表17中。[表8]抗体变体的蛋白酶切割比率(％)[表9]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表10]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表11]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表12]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表13]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表14]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表15]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表16]蛋白酶对抗体变体的切割比率(％)[表17][工业适用性]本公开的肽序列可用作蛋白酶底物，并且这些底物可用于各种治疗、诊断和预防应用。此外，包含本公开的肽序列作为蛋白酶切割序列的多肽可用于各种治疗、诊断和预防应用。当本公开的多肽是包含抗原结合结构域和具有抑制结构域的携带部分的多肽时，该多肽和包含它们的药物组合物允许在血液中递送抗原结合结构域，同时抑制抗原结合结构域的抗原结合活性。此外，多肽的使用允许抗原结合结构域在患病部位特异性地发挥抗原结合活性。此外，与递送时相比，多肽在发挥其抗原结合活性时具有更短的半衰期，这减少了对全身作用的担忧；因此，它们对治疗疾病非常有用。当本公开的多肽为配体结合分子时，配体结合分子在体内递送同时与配体结合并在患病组织中切割，这削弱了与配体的结合并允许配体的患病组织特异性释放，因此，患病组织可以以特定方式暴露于配体。此外，由于在配体结合分子的递送过程中配体的生物学活性受到抑制，因此可以减少配体可能全身作用的担忧；因此，它们对治疗疾病非常有用。当前第1页12