有机污染物降解菌的筛选方法与流程

技术特征：
1.一种有机污染物降解菌的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法包括以下步骤：s1，将有机污染物污染的土壤样品加入无机盐液体培养基中进行培养并进行第一次富集；s2，将所述第一次富集后的菌液涂布于含有所述有机污染物的固体培养基中进行培养筛选；s3，从培养筛选后的所述固体培养基中挑选单一菌落进行液体培养及第二次富集，获得所述降解菌。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，在所述步骤s1与所述步骤s2之间，所述筛选方法还包括：制备含有所述有机污染物的固体培养基的步骤。3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，制备含有所述有机污染物的固体培养基的步骤包括：在无机盐培养基中加入琼脂，待所述琼脂凝固后得到琼脂培养基；将所述有机污染物涂布于所述琼脂培养基中，得到含有所述有机污染物的固体培养基。4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，将所述有机污染物涂布于所述琼脂培养基中包括：采用稀释剂对所述有机污染物进行稀释，得到稀释有机物；将所述稀释有机物涂布于所述琼脂培养基中。5.根据权利要求4所述的筛选方法，其特征在于，所述稀释剂为石油醚、正己烷、丙酮或乙醇。6.根据权利要求1至5中任一项所述的筛选方法，其特征在于，所述固体培养基中，所述有机污染物与所述菌液的质量体积比为5:1～3:100；优选地，所述有机污染物为原油或柴油时，所述有机污染物与所述菌液的质量体积比为8:1～10:1；优选地，所述有机污染物为多环芳烃时，所述有机污染物与所述菌液的质量体积比为1:100～3:100；优选地，所述有机污染物为烷烃类时，所述有机污染物与所述菌液的质量体积比为5:1～8:1。7.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤s1包括：s11，取0.8～1.5g的所述有机污染物污染的土壤样品加入所述无机盐液体培养基中进行振荡培养2～4天；s12，向所述无机盐液体培养基加入0.4～0.7g所述有机污染物继续培养2～4天；s13，按5％～15％的接种比例进行连续转接富集培养；优选地，所述无机盐液体培养基包括：na2hpo
4 0.5～0.7g/l，k2hpo
4 0.1～0.3g/l，nano
3 3～5g/l，酵母粉0.3～0.7g/l，cacl
2 0.008～0.012g/l，feso
4 0.008～0.012g/l，mgso
4 0.02～0.04g/l，ph值为7.0～7.5。8.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，在所述步骤s2中，将所述第一次富集后的菌液涂布于含有所述有机污染物的固体培养基中，并置于29℃～32℃进行倒置培养筛选。
9.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤s3包括步骤：s31，从培养筛选后的所述固体培养基中挑选单一菌落；s32，将所述单一菌落置于lb液体培养基中进行所述第二次富集；s33，将所述第二次富集后的菌液进行划线纯化，获得所述降解菌；优选地，所述lb液体培养基包括：牛肉膏4～6g/l，蛋白胨8～12g/l，nacl4～6g/l，ph指为7.0～7.5。10.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述有机污染物为柴油、稠油、轻质油或重质油。11.根据权利要求6所述的筛选方法，其特征在于，所述有机污染物为疏水性有机物，优选所述疏水性有机物包括菲、芘、二苯并噻吩及咔唑中的一种或多种。

技术总结
本发明提供了一种有机污染物降解菌的筛选方法，该筛选方法包括以下步骤：S1，将有机污染物污染的土壤样品加入无机盐液体培养基中进行培养并进行第一次富集；S2，将第一次富集后的菌液涂布于含有有机污染物的固体培养基中进行培养筛选；S3，从培养筛选后的固体培养基中挑选单一菌落进行液体培养及第二次富集，获得降解菌。该方法避免了传统筛选方法中利用LB平板将细菌全部分离出来，再经过大量的复筛获取有效降解菌的繁琐过程，极大的缩短了筛选周期，提高了筛选效率，易发现高效功能菌株。而且，也解决了现有技术中采用双层平板分离法中有机溶剂易干扰、污染物与菌株接触不完全、过程繁琐的问题。程繁琐的问题。


技术研发人员：李琳 尚秀芳 孙小杰 赵朝成 刘其友
受保护的技术使用者：中国石油集团安全环保技术研究院有限公司
技术研发日：2020.08.11
技术公布日：2022/2/23