一种高通量提取环境中塑化剂的方法与流程

1.本技术涉及环境污染治理领域，特别是一种高通量提取环境中6种塑化剂的方法。


背景技术：

2.塑化剂(paes)是一类环境激素类污染物，由于其可以改善高分子材料性能，因此通常作为助剂应用于塑料制品中，其添加量可占塑料制品总重的60％。paes应用广泛，近年来我国paes产量和使用量增长明显，paes可通过农用地膜覆盖、肥料施用、污水灌溉、大气干湿沉降等多种途径进入土壤和水体环境，对生态环境和人体健康构成威胁。paes种类较多，邻苯二甲酸二甲酯(dmp)、邻苯二甲酸二乙酯(dep)、邻苯二甲酸二正丁酯(dbp)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(bbp)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(dehp)、邻苯二甲酸二正辛酯(dnop)等6种化合物已被列为优先控制类paes。
3.环境中paes的快速检测技术在环境样品分析、环境风险评估中有重要意义，在水体、土壤等环境样本以及饮料、酱油、食醋、蜂蜜、牛奶等食品中实现paes的快速提取是实现paes快速、高通量检测的关键。目前，环境及食品样本中paes的提取方法主要包括固相萃取法、液-液萃取分离法、超声波萃取法等。国标gb5009.271-2016中规定的食品中邻苯二甲酸酯的提取方法为液-液萃取分离法，步骤如下：1)向提取容器(一般是玻璃试管或离心管)添加0.5～1g(或ml)的试样，加入2～5ml蒸馏水；2)添加10ml的提取剂(依据试样不同可以是正己烷、乙腈、二氯甲烷或组合提取剂等)；3)涡旋混匀、剧烈振摇(各1min)；4)超声提取30min；5)1000～4000r/min离心5min，取上清；6)重复提取步骤(1～3次不等)；7)合并上清液后氮气吹干，正己烷/乙腈等试剂复溶，spe净化后待测。
4.然而，上述液-液萃取分离法有其本身的局限性，如提取过程耗时长、操作繁琐、需要消耗大量的有机溶剂等(黄海智，食品中邻苯二甲酸酯的前处理及检测技术研究进展，分析试验室，2019)；另外，部分操作步骤尚存在缺陷，比如：有机溶剂易挥发、超声萃取时间过长(30～40min)，可导致水温上升，加速提取剂挥发，增大试验误差，高估试样中paes含量(李晓敏.食品纸包装邻苯二甲酸酯类塑化剂检测方法及其安全性研究[d].大连工业大学,2016.)，且会对人体健康造成影响；涡旋时间短(0～1min)，提取剂与试样中的paes未能充分混匀；多次提取后一般需要氮吹浓缩提取液，耗时较长，不适合快速、高通量检测的要求。特别是现有报道的方法不能判断涡旋效果，及时反映提取效率。因此开发更加简单快捷的paes快速提取技术，已成为paes检测中亟待解决的技术难题。


技术实现要素：

[0005]
针对上述问题，本技术首次厘清环境样本前处理过程中影响塑化剂提取效率的主控因子，严控关键步骤、去除冗余步骤，以实现建立简便、快速、高通量提取塑化剂方法的目的。
[0006]
本技术是通过如下步骤实现的：
[0007]
一种高通量提取环境中塑化剂的方法，其具体步骤如下：
[0008]
1)溶解
[0009]
准确移取2ml液体样本于10ml玻璃试管中；向液体样本中添加20μl浓度为10％吐温80，再加入2ml正己烷，备用；
[0010]
或者，称取1.0g固体样本于10ml玻璃试管中，再加入2ml乙腈，备用；
[0011]
2)涡旋
[0012]
将玻璃试管放入多管涡旋混匀仪中，以转速2000rpm涡旋1-2次，每次5min；多管涡旋混匀仪选择间歇涡旋模式，间歇时间优选1s；优选先涡旋5min，将试管架旋转180
°
，相同转速再涡旋5min；
[0013]
3)超声提取
[0014]
经过步骤2)涡旋处理后，对于液体样本，超声提取2min；对于固体样本，超声提取10min；
[0015]
超声频率优选40khz(使用常规超声仪器，如kq-500dv型超声波清洗器，确保超声波清洗器中水层超过试管中的液面)；
[0016]
4)离心
[0017]
25℃，离心步骤3)超声处理后的样本，离心机转速3500rpm，离心时间5min；
[0018]
5)获取gc/gc-ms分析样本
[0019]
对于液体样本，取离心后的上清液，即为提取后的塑化剂样本，供后续gc/gc-ms分析；
[0020]
对于固体样本，取离心后的上层有机相1ml，加入含25mg psa的玻璃管中，2000rpm涡旋1min，再过0.22μm有机相针式过滤器，即获得提取后的塑化剂样本，可供后续gc/gc-ms分析。
[0021]
进一步而言，上述高通量提取环境中塑化剂的方法中，所述环境包括水体、土壤。
[0022]
进一步而言，上述高通量提取环境中塑化剂的方法中，所述塑化剂包括dbp或dehp。
[0023]
上述“gc/gc-ms分析”是指利用本领域常规的gc/gc-ms分析技术，进行塑化剂检测，如文献(马磊，气相色谱-串联质谱法测定甜瓜中的16种塑化剂，分析仪器，2018)或国标gb5009.271-2016中公开的方法。
[0024]
与现有技术相比，本技术提取方法具有以下有益效果：
[0025]
1、本发明使用的提取剂正己烷和乙腈毒性相对较小，提取剂使用量小，节约了有机试剂废液处理费用，对生态环境造成的危害降低；
[0026]
2、本发明提取水体和土壤中6种优控paes方法简便、快速，仅需要3～4个前处理步骤即可完成，单人操作1小时内可完成约50个样品的提取，适宜于大规模样品处理且加标回收率较高。
[0027]
3、本技术首次实现提取过程可视性，直接依据皂化反应程度可判断提取效率高低，便于后续操作。
[0028]
4、本发明建立的提取方法所用试剂易获取、价格便宜，gc的运行成本相对较低，适合在各类实验室推广应用。
附图说明
[0029]
图1为超声影响提取效率检测结果示意图；
[0030]
图2为离心温度影响提取效率检测结果示意图；
[0031]
图3为氮吹容器影响提取效率检测结果示意图；
[0032]
图4为塑料管因素影响提取效率检测结果示意图；
[0033]
图5为玻璃管因素影响提取效率检测结果示意图；
[0034]
图6为提取次数、氮吹因素影响提取效率检测结果示意图；
[0035]
图7为涡旋时间因素影响提取效率检测结果示意图；
[0036]
图8为涡旋混合仪影响提取效率检测结果示意图；
[0037]
图9加入吐温-80后涡旋效果照片；
[0038]
图10为吐温-80浓度影响提取效率检测结果示意图；
[0039]
图11为水体样本提取流程示意图；
[0040]
图12为6种塑化剂含量检测结果示意图；
[0041]
图13为土壤样本提取流程示意图。
具体实施方式
[0042]
本发明研究的是塑化剂的前处理方法，应该避免使用塑料器皿(含有塑化剂)，选择塑料离心管作为研究对象之一是因为塑料离心管在离心等操作过程中更便捷，而玻璃管离心时容易碎裂；此外，以同批次玻璃管作为对照组，可以明确塑料离心管对塑化剂的回收率产生何种影响。
[0043]
本发明开发的是6种优控塑化剂的提取方法，试验前期以dbp和dehp这2种塑化剂作为代表进行研究，dbp和dehp分别是低分子量和高分子量塑化剂的典型代表，且这两种塑化剂是我国产量最高的2种塑化剂种类。
[0044]
实施例中涉及的试剂、仪器、样本来源：
[0045]
1、含paes水体样本制备：准确称取适量的2种paes(dbp和dehp)标准品，用乙腈定容，制成10000mg/l的2种paes混合标准储备液，于棕色玻璃瓶中，4℃冰箱贮存；准确移取混合标准储备液，用超纯水(millipore超纯水机，法国，电阻值18.25mω.cm)定容配制成浓度为10mg/l的液体试样，以下实施例中提到的水体样本均由此方法制得。
[0046]
2、水体中6种paes的gc定量检测方法
[0047]
1)标准储备液的配制：准确称取适量的6种paes标准品，用正己烷定容，制成10000mg/l的单个塑化剂标准储备液及6种paes混合标准储备液，于棕色玻璃瓶中，4℃冰箱贮存；
[0048]
6种paes标准品包括邻苯二甲酸二甲酯(dmp)、纯度99％，购自macklin；邻苯二甲酸二乙酯(dep)、纯度99.5％，购自macklin；邻苯二甲酸二正丁酯(dbp)、纯度99.5％，购自上海凌峰化学试剂有限公司；邻苯二甲酸丁基苄基酯(bbp)、纯度98％，购自aladdin；邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(dehp)、纯度99％，购自macklin；邻苯二甲酸二正辛酯(dnop)、纯度98％，购自aladdin；
[0049]
2)标准工作液配制：准确移取步骤1)中配制的混合标准工作液，用正己烷逐级稀释后配制成浓度为0.5、1、5、10、20mg/l系列混合标准工作溶液，供gc测试；
[0050]
3)仪器工作条件：仪器型号nexis gc-2030，sh-rtx-5色谱柱(30m
×
0.25mm,0.25μm)；载气为高纯氮气(纯度大于99.999％)，辅助气体为高纯氢气(纯度99.999％)和普通空气(纯度99.9％)，色谱柱流量1.21ml/min；分流比2.0，进样量1.0μl，进样口温度280℃。柱箱升温程序：初始温度120℃，保持1min；以20℃/min速率升温至220℃；以5℃/min速率升温至235℃；以10℃/min速率升温至245℃；以5℃/min速率升温至255℃，保持2min；再以10℃/min速率升温至275℃，保持2min；
[0051]
4)paes定量分析：由步骤3)中可获得6种paes的色谱图，通过塑化剂单标的色谱图确定6种塑化剂的保留时间，以混合标准储备液中6种paes的峰面积为横坐标，以标准工作液的质量浓度为纵坐标，绘制6种paes的标准工作曲线，获得线性方程y＝ax b，以水体样本中测出的paes峰面积代入x，计算出的y值即为水体样本中的paes含量。
[0052]
3、土壤中6种paes的gc定量检测方法
[0053]
1)标准储备液的配制：准确称取适量的6种paes标准品，用乙腈定容，制成10000mg/l的单个塑化剂标准储备液及6种paes混合标准储备液，于棕色玻璃瓶中4℃冰箱贮存；所述6种paes标准品与水体样本中的相同；
[0054]
2)标准工作液配制：准确移取1)中配制的混合标准工作液，用乙腈逐级稀释后配制成浓度为0.5、1、5、10、20mg/l系列混合标准工作溶液，供gc测试；
[0055]
3)仪器参数及工作条件与以上所述水体样本中相同；
[0056]
4)paes定量分析方法与以上所述水体样本中相同。
[0057]
实施例1提取参数筛选
[0058]
本实施例针对gb5009.271-2016(食品中邻苯二甲酸酯的测定)公开的提取步骤，研究了提取容器(玻璃管、塑料离心管)、提取试剂(正己烷、正己烷：二氯甲烷1:1)、涡旋时间(20s～10min)、超声时间(0～2min)，提取次数(1～3次)，氮吹容器(玻璃管、塑料离心管)对塑化剂提取效率的影响。
[0059]
1、超声对塑化剂提取效果的影响
[0060]
本实施例研究了未超声、超声2min(超声频率40khz)对dbp和dehp提取效率的影响。
[0061]
提取步骤如下：移取2ml水体样本，于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，wh-3型旋涡混合仪(上海沪西分析仪器厂有限公司)涡旋2min，2个处理组分别作不超声和超声提取2min(超声频率40khz)处理，离心5min(25℃、3500rpm)，取上层有机相，gc分析paes含量。
[0062]
检测结果如附图1所示，超声后dbp和dehp提取效率分别增加了3.9％、2％，但与不超声组没有显著性差异，说明超声不是影响paes回收率的主控因子。
[0063]
paes的回收率计算方法：回收率＝(a/b)
×
100％；其中，a为使用本实施例提取方法后测定浓度值，b为paes添加浓度值。
[0064]
2、温度对塑化剂提取效果的影响
[0065]
本实施例研究了常温(25℃)离心与4℃离心对塑化剂提取效果的影响。提取步骤如下：移取2ml水体样本，于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，wh-3型旋涡混合仪涡旋2min，超声提取2min(超声频率40khz)处理，分别在4℃和25℃条件下离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相，gc分析paes含量。
[0066]
结果如图2所示，25℃条件下dbp和dehp提取效率较4℃分别增加了1.9％、0.2％，
但2个处理组差异不显著，说明离心温度不是影响paes回收率的主控因子。
[0067]
3、氮吹容器对塑化剂提取效果的影响试验
[0068]
提取步骤如下：移取2ml水体样本，于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，wh-3型旋涡混合仪涡旋2min，超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相1ml，分别置于塑料离心管和玻璃离心管中，氮气吹干，1ml乙腈复溶，gc分析paes含量。
[0069]
检测结果如图3所示，使用玻璃管氮吹，dbp和dehp回收率分别为100.7％和101.3％；使用塑料管氮吹，dbp和dehp回收率分别为81.8％和88.7％，说明使用塑料管氮吹可导致塑化剂提取效率显著降低，而使用玻璃管氮吹时2种paes回收率较高。
[0070]
4、提取试剂、提取次数及提取容器对塑化剂提取效果的影响试验
[0071]
基于以上氮吹容器试验结果，本实施例提取步骤如下：移取2ml水体样本，分别于10ml塑料离心管和玻璃试管中，加入2ml正己烷或2ml正己烷：二氯甲烷(1:1)，wh-3型旋涡混合仪涡旋2min，超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相置于玻璃离心管中，重复上述提取步骤2～3次，合并上层有机相，氮气吹干，1ml乙腈复溶，gc分析paes含量。
[0072]
结果发现，使用塑料离心管提取塑化剂，dbp和dehp提取效率低(平均提取效率分别为38％～66％、42％～77％)且提取稳定性差(图4)；使用玻璃管提取，dbp和dehp提取效率高(提取效率分别为95％～97％、101％～104％)且稳定性较好(图5)；提取剂正己烷和提取剂正己烷：二氯甲烷1:1的提取效率没有显著性差异，正己烷或正己烷：二氯甲烷1:1提取2次，dbp和dehp的回收率均较高(图5)。
[0073]
5、提取次数、氮吹因素影响试验
[0074]
基于以上4中对提取容器的研究结果，提取容器只能使用玻璃管；提取剂选择毒性相对更低的正己烷；进一步研究了正己烷提取1次和2次，以及氮吹与否对塑化剂提取效果的影响。
[0075]
提取步骤如下：移取2ml水体样本于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，wh-3型旋涡混合仪涡旋2min，超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相置于玻璃离心管中；对于正己烷提取2次组，重复上述提取步骤，合并上层有机相；获得的有机相，一部分氮气吹干，乙腈复溶后gc检测paes含量，另一部分直接gc分析paes含量。
[0076]
研究结果发现，正己烷提取1次和2次，dbp和dehp的提取效率均无显著差异，说明正己烷提取1次即可(图6)；此外，氮吹组与直接测定组dbp提取效率(104％～110％)和dehp的提取效率(88％～97％)没有显著差异，说明氮吹步骤对塑化剂回收率的影响较小(图6)。
[0077]
5、涡旋时间对塑化剂提取效果的影响试验
[0078]
提取步骤如下：移取2ml水体样本于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，wh-3型旋涡混合仪涡旋20秒～2分钟，超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相gc分析paes含量。
[0079]
结果发现，涡旋时间对dbp回收率影响不大，但对dehp回收率影响较大，涡旋时间越长，dehp提取效率越高(图7)。
[0080]
此外，本实施例使用微型涡旋混合仪(wh-3型)对单个样品涡旋2min或以上，工作
效率低、工作量大，使用数显型多管式旋涡混合仪(购自talboys)替换wh-3型旋涡混合仪对试样中的塑化剂进行提取，并试验了涡旋时间2～10min对paes回收率的影响。结果发现，涡旋时间由2min提高至5min，dbp和dehp提取效率逐渐增加；比较了转速2000rpm条件下，涡旋5min和涡旋10min(5min，2次)对塑化剂提取效果的影响，结果发现涡旋5min，dbp和dehp提取效率分别为96.5％和92.9％；涡旋10min时，dbp和dehp提取效率分别达97.4％和96.8％，涡旋10min时dehp回收率显著高于涡旋5min(图8)。
[0081]
7、吐温80添加量筛选
[0082]
基于上述6种因素影响的检测结果，针对涡旋时间(涡旋效率)是决定dehp回收率的主控因子，涡旋效果差可导致dehp回收率低于70％(图7)；
[0083]
通过以上影响因素实验不难发现，在提取过程中，多种因素可导致涡旋效率降低。本实施例向水体样本中添加表面活性剂吐温80(1-4号管中吐温-80添加的终浓度均为0.1％)，可使塑化剂的涡旋效果可视化(图9)。
[0084]
提取步骤如下：移取2ml水体样本于10ml玻璃试管中，加入20μl浓度为10％吐温80，加入2ml正己烷，talboys数显型多管式旋涡混合仪2000rpm涡旋5min，重复涡旋1次，然后超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相gc分析paes含量。
[0085]
图9中编号1、4的玻璃管皂化反应明显，涡旋后水相与有机相呈固-液界面(上层固体界面呈“果冻状”)，说明涡旋效率好，dehp回收率较高(77.8～97.3％)；而编号为2、3的玻璃管中皂化反应程度低，涡旋后水相与有机相仍呈现液-液界面，提示涡旋效率差，dehp回收率仅27.1～29.8％；通过皂化反应可视化，筛选出皂化反应不明显的玻璃管重新涡旋5min后，dehp回收率显著提升至92.5～98.2％。
[0086]
本实施例进一步研究了吐温80添加量对塑化剂回收率的影响。提取步骤如下：移取2ml水体样本于10ml玻璃试管中，添加2～20μl 10％吐温80，加入2ml正己烷，talboys数显型多管式旋涡混合仪2000rpm涡旋5min，重复涡旋1次，超声提取2min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相gc分析paes含量。结果发现，吐温80添加量为0.1％时，dbp和dehp的回收率最好(97.4％和96.8％，图10)；
[0087]
基于以上7个影响因素的研究结果，发现塑化剂的提取过程中，塑料制品可导致水体样本中塑化剂回收率下降，提取次数、离心温度、超声时间、氮吹等步骤对塑化剂回收率影响较小；涡旋效率是影响dehp回收率的主控因素，添加吐温80可使提取效率可视化。基于这些结果，最终获得水体样本中快速、高通量、可视化提取paes(优选dbp和dehp)的方法，具体提取流程步骤(图11)如下：
[0088]
1)移取2ml水体样本，于10ml玻璃试管中，向水体样本中添加20μl 10％吐温80；
[0089]
2)加入2ml正己烷，多管涡旋混匀仪2000rpm转速下涡旋1-2次，每次5min；
[0090]
通过皂化反应程度判断涡旋效率，对于涡旋效率差的样本重新涡旋1次；
[0091]
3)超声提取2min(超声频率40khz)，离心5min(25℃、3500rpm)，取上清供gc/gc-ms分析。
[0092]
将该前处理方法应用于提取水体样本中dmp、dep、dbp、bbp、dehp和dnop等6种优控塑化剂，以不含塑化剂的去离子水为对象，分别添加1、5、20mg/l的6种paes混合物，每个添加水平设3组重复，按照前述前处理步骤对样品进行提取，采用外标法gc定量分析水体样本
中6种塑化剂含量。
[0093]
检测结果如图12所示，可见6种paes均可实现基线分离，线性范围0.5～20mg/l；线性相关系数r2范围0.9987～0.9997。6种paes的添加回收率见表1。
[0094]
表1水体中6种paes的添加回收率
[0095][0096]
可见，利用本技术提取方法检测6种paes回收率范围为82.7％～104.5％，优于文献(苗萌等，饮品中邻苯二甲酸酯类物质的检测技术进展，分析试验室，2021)报道的paes回收率范围(70.2％～120.4％)，说明本发明建立的水体中6种塑化剂提取方法准确可靠。另外，本发明提出的6种paes提取方法在简便、快速、高通量、可视化等方面有明显优势，仅需要涡旋混匀、超声、离心3个步骤，可在20min内批量完成50个样品的paes提取，可依据皂化反应程度判断涡旋效率，优于国标gb5009.271-2016及文献(沈斐等，固相萃取-气相色谱法测定水环境中邻苯二甲酸酯，中国环境监测，2014；黄海智，食品中邻苯二甲酸酯的前处理及检测技术研究进展，分析试验室，2019)中提及的6种paes液-液萃取法。
[0097]
实施例2土壤paes提取方法
[0098]
本实施例中土壤样本(表3中所述的棕壤和砖红壤)，分别采集自江苏省农科院水稻田和蔬菜大棚，经自然阴干、敲碎、去杂质，研磨后过60目筛(不锈钢材质)备用，土壤不能含有水分，一般研磨后即使用。若研磨过筛后的土壤长时间放置有少量水分，需要冷冻干燥机冻干1～2天，完全去除水分后提取。
[0099]
基于实施例1水体中建立的6种paes提取方法，本实施例进一步研究了该方法在土壤塑化剂提取中的应用效果，提取步骤如下：准确称取1.000g土壤样本于10ml玻璃试管中，加入2ml正己烷，talboys数显型多管式旋涡混合仪2000rpm涡旋5min，重复涡旋1次，超声提取10min(超声频率40khz)，25℃离心5min(转速为3500rpm)，取上层有机相1ml，加入含25mg psa的玻璃管中，涡旋1min后过有机相针式过滤器(0.22μm，上海安谱科学仪器有限公司)，gc分析paes含量。
[0100]
研究发现，正己烷对土壤中塑化剂提取效果差，6种paes回收率均低于10％。因此进一步研究了不同提取剂对土壤塑化剂的提取效果。
[0101]
基于上述提取步骤，在加标水平10mg/l条件下，以正己烷：二氯甲烷(1:1)、乙腈替换上述步骤中的提取剂正己烷，研究了这2种提取剂对土壤中塑化剂的提取效果，6种paes的回收率见表2。
[0102]
表2土壤中6种paes的添加回收率
[0103][0104][0105]
表2检测结果表明，乙腈作为提取剂时，6种paes的回收率较好，满足国内标准gb/t 39234-2020要求。
[0106]
基于上述研究结论，土壤中6种paes的提取步骤如下，其检测流程如图13所示：
[0107]
1)准确称取1.000g土壤样本，于10ml玻璃试管中，玻璃管置于10ml塑料试管架(三层可拆装，50孔)中；
[0108]
2)加入2ml乙腈，多管涡旋混匀仪涡旋1-2次，每次5min；转速2000rpm；(间歇涡旋模式，间歇间隔1s)；对于1次涡旋效率差的样本，优选1次涡旋后，将试管架旋转180
°
，相同转速重新涡旋5min；
[0109]
3)超声提取10min(超声频率40khz)，确保超声波清洗器中水层超过试管中的液面；
[0110]
4)将完成超声的玻璃管置于离心机角转子适配器(聚四氟乙烯材质、100ml转10ml、2孔)中，离心5min，离心温度25℃、转速3500rpm；
[0111]
5)取离心后上清有机相1ml，加入含25mg psa的玻璃管中，2000rpm涡旋1min后过0.22μm有机相针式过滤器，过滤后的样本即为提取后的塑化剂样本，可供常规gc/gc-ms分析。
[0112]
选取2种类型的土壤(棕壤、砖红壤)，分别添加1、5mg/l的6种paes混合物，每个添加水平设3组重复，按照前述前处理步骤对土壤样品进行提取，采用外标法gc定量分析2种土壤样本中6种塑化剂含量，6种paes的添加回收率见表3。
[0113]
表3 2种土壤中6种paes的添加回收率
[0114][0115]
以上6种paes回收率均符合国内标准gb/t 39234-2020要求(60～130％)，说明本发明建立的土壤中6种塑化剂提取方法准确可靠。