一种植物来源外泌体的中试提取方法及其应用与流程

技术特征：
1.一种植物来源外泌体的提取方法，其特征在于，所述方法包括：取植物材料，加入缓冲液经震荡，使植物材料中的外泌体释放到缓冲液中，离心，收集上清，通过微滤中空纤维柱进行微滤除杂，通过超滤中空纤维柱进行超滤浓缩，获得所述植物来源外泌体；其中，所述缓冲液为pbs缓冲液、hbss、dpbs、复方氯化钠注射液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述震荡的条件选自如下特征中的一个或多个：(a)以植物材料的初始质量为准计算缓冲液的加入量，其中所述植物材料的初始质量(g)与缓冲液的体积(ml)比值为1:1～1:5；(b)所述震荡的温度为15℃～30℃；(c)所述震荡的时间为18-48小时；(d)所述震荡的转速为50-150rpm；(e)所述震荡在通气环境下进行。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心的条件为：(a)所述离心的转速为2000-20000rpm；和/或，(b)所述离心的时间为10-60min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微滤中空纤维柱的过滤精度为0.1-0.8um。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超滤浓缩的条件选自如下特征中的一个或多个：(a)采用100-500kda超滤中空纤维柱进行超滤浓缩；(b)所述超滤浓缩是指浓缩至原微滤后获得的液体体积的1/10-1/20；(c)所述超滤浓缩后还包括超速离心纯化的步骤，所述超速离心的参数为4℃，140000g，60-120min。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述震荡前还包括均质获得均质液，去除死细胞、细胞残渣的步骤；其中，所述均质是指将植物材料粉碎成直径1厘米以下的碎片；其中，所述去除死细胞、细胞残渣的步骤通过将所述均质液经纱布过滤、梯度低速离心或滤膜过滤中的一种或几种方式实现。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述超滤浓缩后还包括沉淀、重悬和分装的步骤，包括如下特征中的一个或多个：(a)所述沉淀是指，所述浓缩液与peg8000/nacl混匀后，在2-8℃条件下沉淀；(b)所述浓缩液与peg8000/nacl的体积比为3:1-8:1；(c)所述离心转速为2000-8000rpm；(d)所述离心的时间为5-40min；(e)在重悬后，包括过滤除菌的步骤，所述过滤除菌采用0.22-0.45um滤膜实现；(f)在重悬后，包括在重悬液中加入海藻糖然后冻干的步骤，所述海藻糖的浓度为5-10％。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)清洗
取植物材料，进行清洗；(2)均质将所述植物材料粉碎，进行均质，获得均质液；(3)过滤过滤均质液，去除死细胞和/或残渣；(4)震荡向经步骤(3)处理后的均质液中加入缓冲液，震荡，使外泌体释放到缓冲液中；同时，细胞在培养过程中，植物细胞会继续产生大量外泌体；(5)离心将震荡后的混合液离心，收集上清液；(6)微滤除杂采用微滤中空纤维柱去除上清液中的细胞或细胞碎片；(7)超滤浓缩采用超滤中空纤维柱对外泌体进行浓缩；(8)重悬向所述浓缩液中加入peg8000/nacl，混匀，4℃放置；(9)重悬、分装离心，收集沉淀，用生理盐水重悬，分装。9.根据权利要求1-8中任一所述的方法获得的植物来源外泌体。10.根据权利要求9所述的植物来源外泌体在制备日化用品或药品中的应用。

技术总结
本发明属于生物技术和生物工程领域，公开了一种从植物中提取外泌体的方法，所述方法包括：取植物的任意部位，粉碎，然后加入PBS缓冲液浸泡与渗透处理，使植物中的外泌体释放到缓冲液中，离心收集上清，然后分别通过中空纤维柱进行微滤、超滤浓缩，获得所需外泌体；其中，所述浸泡与渗透处理在摇床上震荡进行，温度为22-25℃，转速为90-120rpm。本发明提取外泌体的方法可以实现对植物中外泌体的高效提取，提取步骤少，提取时间短，获得的外泌体含量高，具有后处理简单，可放大生产等优点。可放大生产等优点。可放大生产等优点。


技术研发人员：李军
受保护的技术使用者：卡替睿舒（上海）医疗科技有限公司
技术研发日：2021.10.19
技术公布日：2022/2/8