包含纳曲酮和大麻素的癌症治疗剂的制作方法

1.本发明涉及用于癌症治疗的药物给药方案和药物组合物。


背景技术：

2.大麻素是大麻属(cannabis)植物中大量产生的一类酚类化合物。各种大麻素化合物长期以来一直被认为在人类中表现出精神促进作用，并被广泛用于娱乐，尽管这种使用在许多司法管辖区是非法的。
3.然而，最近研究表明，某些大麻素对各种各样的病症具有治疗价值，如炎性疾病、神经退行性疾病和精神疾病、慢性疼痛、焦虑和ptsd。虽然大麻素目前被用来对抗与癌症治疗相关的消瘦、呕吐和恶心，但有证据表明，某些大麻素化合物可能对治疗癌症的潜在病理是有效的。目前可用的证据表明，它们通过破坏癌细胞迁移、粘附和肿瘤血管化来做到这一点。
4.内源性大麻素介导的信号系统在哺乳动物中发挥作用，在证据的基础上，可能在大多数其他脊椎动物中也是如此。在人类中，两种大麻素受体被鉴定且命名为cb1和cb2，这两种受体都是g蛋白偶联受体超家族的一部分。
5.迄今为止的药理学证据表明，大麻素摄入的精神促进作用主要是由cb1的激活引起的，而治疗作用主要是由cb2介导的。因此，理想的治疗分子将激活cb2优先于cb1，减轻不想要的精神促进副作用。大麻二酚(cbd)，大麻属提取物的组分，是具有这种结合特性的大麻素，最近引起了相当大的关注，但其完整作用机制仍在阐明中。
6.然而，一般来说，天然大麻素不旨在对一种或其他受体表现出高特异性，但新开发的合成大麻素是可用的，它们更特异性地结合，例如jwh-133和sr141716(cridge&rosengren 2013)。这些化合物已被证明在体外和在多种肿瘤植入小鼠模型中抑制肿瘤生长和癌细胞活力。
7.有时，一个信号通路中的受体，响应于特定的配体，它们的表达水平或下游效应可通过另一种看似独立的信号通路的信号输出的变化而改变。这种交叉调节已经被证明，例如，在生长激素和胰岛素受体激活后的信号通路之间。


技术实现要素：

8.本发明人已经发现，用大麻素和化疗剂治疗以抑制癌细胞的增殖是通过与低剂量纳曲酮(ldn)或6-β-纳曲醇(6bn)(纳曲酮的代谢物)联合治疗来更有效地实现的。他们还发现，这种治疗的有效性令人惊讶地取决于ldn或6bn和大麻素的给药顺序，最有效的方案是用ldn或6bn治疗的阶段，随后用大麻素治疗的阶段。
9.本发明人还发现，用ldn或6bn治疗会显著提高癌细胞中cb2受体的水平，从而使大麻素更有效。
10.根据本发明的第一方面，提供了一种药物组合物，其包含纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物，用于治疗受试者内的癌症，其中在治疗
之前、期间或之后对受试者给予化疗剂，并且其中在第一治疗阶段中将对受试者给予治疗有效量的纳曲酮或其代谢物或类似物，并且其中在第一治疗阶段之后，在第二治疗阶段中将对受试者给予治疗有效量的大麻素。
11.根据本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含大麻素，用于治疗受试者内的癌症，其中所述受试者的特征在于经历了第一治疗阶段，在此期间已经对受试者给予治疗有效量的纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物，并且其中在第一治疗阶段之后，将对受试者给予治疗有效量的所述大麻素，并且其中在治疗之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
12.根据本发明的第三方面，提供了一种制剂，其包含纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物以及大麻素和化疗剂，用于治疗受试者内的癌症，其中纳曲酮或其代谢物或类似物以将在第一治疗阶段中给药的治疗有效量提供，其中大麻素以将在第一治疗阶段之后的第二治疗阶段中给药的治疗有效量提供，并且其中在治疗之前、期间或之后，以治疗有效量提供化疗剂。
13.根据本发明的第四方面，提供了一种方法，用于确定患有癌症的受试者对在第二治疗阶段中用大麻素治疗的适合性，所述受试者的特征在于经历了上述定义的第一治疗阶段，该方法包括以下步骤：
14.i.在恢复阶段之后或期间用cb2特异性探针接触从受试者获得的样本；
15.ii.确定样本内cb2的浓度；和
16.iii.将样本内cb2的浓度与第一治疗阶段之前从受试者获得的样本中确定的cb2的浓度进行比较，
17.其中如果第一治疗阶段之后cb2的浓度增加了至少两倍，则该受试者适合于第二治疗阶段，并且其中给予或已给予受试者化疗剂。
18.根据本发明的第五方面，提供了纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物，在制造用于治疗受试者内癌症的药物中的用途，其中所述药物将在联合治疗方案的第一治疗阶段给予受试者，所述治疗方案包括第一治疗阶段，然后是第二治疗阶段，其中将在第二治疗阶段中给予该受试者大麻素，并且其中在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
19.根据本发明的第六方面，提供了大麻素在制造用于治疗受试者中癌症的药物中的用途，其中所述药物将在联合治疗方案的第二治疗阶段中给药，所述治疗方案包括第一治疗阶段，然后是第二治疗阶段，其中在第一治疗阶段中将对受试者给予纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物，并且其中在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
20.根据本发明的第七方面，提供了纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛啡芬的类似物，在制造第一药物中的用途和大麻素在制造第二药物中的用途，这两种药物都用于治疗癌症，其中在联合治疗方案中第一和第二药物将给予患有癌症的受试者，所述治疗方案包括第一治疗阶段，然后是第二治疗阶段，其中，所述第一药物将在第一治疗阶段期间给予受试者，第二药物将在第二治疗阶段中给予受试者，并且其中在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
21.根据本发明的第八方面，提供了一种用于治疗受试者癌症的方法，包括在第一治
疗阶段中对受试者给予治疗有效量的纳曲酮或其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物，然后在第二治疗阶段中对受试者给予治疗有效量的大麻素，并且其中在治疗之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
附图说明
22.本发明参照附图进行说明，其中：
23.图1显示了用10nm纳曲酮(ldn)、1μm 6-β-纳曲醇(6-1)或10μm 6-β-纳曲醇(6-2)处理mcf7乳腺癌细胞系培养物两天的效果。以gapdh为上样对照，bcl2相关死亡启动子(bad)、p21蛋白、阿片样受体κ1(oprk1)和mu 1(oprm1)和大麻素受体cbr1(cb1)和cbr2(cb2)的水平通过蛋白免疫印迹进行可视化(左)，并通过相对于gapdh的密度分析进行定量(右)。
24.图2显示了多种两阶段治疗对mcf7细胞增殖和存活率的影响。每个治疗持续四天，并且由以下组成：用第一药剂(un＝对照，ldn＝10nm的低剂量纳曲酮，cbd＝大麻二酚，6bn＝6-β-纳曲醇)处理两天，然后引入第二药剂再处理两天。
25.图3显示了根据实施例3，多种两阶段治疗对a549细胞增殖(3a)和存活率(3b)的影响(0＝不给药；lc＝ldn和cbd；g＝吉西他滨；p＝奥沙利铂)。
26.图4显示了根据实施例3，多种两阶段治疗对hct116细胞增殖(4a)和存活率(4b)的影响(0＝不给药；lc＝ldn和cbd；g＝吉西他滨；p＝奥沙利铂)。
具体实施方式
27.本发明提供了治疗受试者中癌症的具体治疗方案，其中大麻素在给予低剂量纳曲酮(ldn)、纳曲酮的代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物后给药，并且其中在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予化疗剂。
28.本发明人已经发现，分阶段给予ldn然后是大麻素对人体免疫细胞和癌细胞具有启动作用，因此其联合化疗剂比单独或同时给予或分阶段给予大麻素然后是ldn或仅持续给予化疗剂更有效地抑制癌细胞增殖。
29.还发现，用ldn处理后mcf7细胞中cb2受体水平显著增加。在不希望囿于理论，cb2——其为大麻素(如cbd)的治疗靶点——的这种增加，是增加用cbd治疗的有效性的可行的促进因素。
30.本领域技术人员将能够进行如所述的治疗剂的分阶段给药。参考以下定义可进一步理解本发明：
31.如本文所用，“纳曲酮”指化合物17-环丙基甲基-4.5α-环氧基-3,14-二羟基吗啡喃-6-酮(iupac名称为(4r,4as,7ar,12bs)-3-(环丙基甲基)-4a,9-二羟基-2,4,5,6,7a,13-六氢-1h-4,12-亚甲基苯并呋喃[3,2-e]异喹啉-7-酮)，及其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物、外消旋体、立体异构体、笼形包合物、多晶型物和前药。还设想了其类似物用于根据本发明的用途。合适的类似物包括甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬。
[0032]
纳曲酮通常为其盐酸盐的形式。
[0033]“低剂量纳曲酮”(ldn)是指以小于0.5mg/kg的“低”剂量给药的纳曲酮，优选小于0.2mg/kg，更优选0.01mg/kg至0.08mg/kg之间，甚至更优选0.03mg/kg至0.06mg/kg之间，最
优选0.04mg/kg至0.05mg/kg之间。通常，每名患者每天的低剂量总共最高达3mg。
[0034]
纳曲酮的代谢物包括6-β-纳曲醇、2-羟基-3-甲氧基-6β-纳曲醇和2-羟基-3甲氧基-纳曲酮。
[0035]
优选的纳曲酮的代谢物为6-β-纳曲醇(6bn)，如本文所用，它是指化合物n-环丙基甲基-7,8-二氢-14-羟基去甲异吗啡(iupac名称(4r,4as,7r,7ar,12bs)-3-(环丙基甲基)-1,2,4,5,6,7,7a,13-八氢-4,12-亚甲基苯并呋喃[3,2-e]异喹啉-4a,7,9-三醇)，及其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物、外消旋体、立体异构体、笼形包合物、多晶型物和前药。
[0036]
6bn或类似物等还可以“低剂量”给药。在该上下文中，“低剂量”可以与上述纳曲酮所列出的低剂量相同。
[0037]
大麻素是本领域技术人员所了解的一类化合物，它包含由大麻属植物大量制出的那些，以及在动物中合成的内源性大麻素。还设想了针对cb受体的合成的活性化合物。在本文使用时，该术语可指任何大麻素，但优选选自包含以下的列：大麻二酚、大麻二酚酸、大麻酚、大麻萜酚、次大麻酚(cannabivarin)、四氢次大麻酚(tetrahydrocannabivarin)、次大麻二酚、大麻环萜酚、花生四烯乙醇胺、2-花生四烯甘油、2-花生四烯甘油醚、n-花生四烯多巴胺、花生四烯酸(2-氨基乙基)酯(virodhamine)、屈大麻酚、大麻隆、利莫那班、r-( )-甲基花生四烯酸氨基乙醇(r-( )-met-anandamide)、win-55，212-2、hu-210、jwh-133、sr141716、sr144528或其组合，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、水合物、外消旋体、立体异构体、笼形包合物、多晶型物、前药，及其产生等同效果的类似物。
[0038]
如本文所用，“化疗”和“化疗的”具有它们在本领域内的常规含义。术语“抗癌剂”与“化疗剂”同义使用。为避免歧义，在这种情况下，大麻素不是抗癌剂。
[0039]
在某些实施方案中，化疗涉及给予选自以下的抗癌剂：pi3-激酶抑制剂、akt抑制剂、紫杉烷、抗代谢药、烷化剂、细胞周期抑制剂、拓扑异构酶抑制剂和细胞毒抗体。
[0040]
当化疗剂为pi3-激酶抑制剂时，适合的实例包括但不限于渥曼青霉素、ly294002、去甲氧基绿胶霉素、ic87114、nvp-bez235、bay80-6946、bkm120、gdc-0941、gdc-9080；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药。
[0041]
当抗癌剂为akt抑制剂时，适合的实例包括但不限于mk-2206、gsk690693、哌立福新、pht-427、at7867、和厚朴酚、pf-04691502；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药。
[0042]
当抗癌剂为紫杉烷时，适合的实例包括但不限于紫杉醇和多西紫杉醇；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药。
[0043]
当抗癌剂为抗代谢药时，适合的实例包括但不限于甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、卡培他滨、阿糖胞嘧啶(阿糖胞苷)、吉西他滨、6-硫鸟苷、喷司他丁、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、氟达拉滨和克拉屈滨；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药。
[0044]
当抗癌剂为烷化剂时，适合的实例包括但不限于氯乙胺、环磷酰胺、异环磷酰胺、曲磷胺、美法仑(l-肌溶素)、苯丁酸氮芥、六甲蜜胺、噻替哌、白消安、卡莫司汀(bcnu)、链脲佐菌素(streptozocin、streptozotocin)、达卡巴嗪(dtic；二甲基三氮烯咪唑羧酰胺)替莫唑胺和奥沙利铂；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立
体异构体、包合物和前药。
[0045]
当抗癌剂为细胞周期抑制剂时，适合的实例包括但不限于埃坡霉素、长春新碱、长春碱、ucn-01、17aag、xl844、chir-124、pf-00477736、cep-3891、夫拉平度、小檗碱、p276-00、terameprocol、isoflavone daidzein、bi2536、bi6727、gsk461364、环孢素、on-01910、nms-p937、tak-960、伊斯平斯、monastrol、azd485073、ly2523355、arry-520、mk-0731、sb743921、gsk923295、洛那法尼、protame、硼替佐米、mln9708、onx0912、cep-18770；包括其组合；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药；细胞周期抑制剂的特别适合的实例包括但不限于hespaeradin、zm447439、vx680、mln-8054、pha-739358、at-9283、azd1152、mln8237、enmd2076、su6668；包括其组合；和其他极光激酶抑制剂；以及上述任一种的药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、包合物和前药。
[0046]
抗癌剂可以是检查点抑制剂。检查点抑制剂是一种癌症免疫疗法，目前批准的抑制剂靶向分子ctla4、pd-1和pd-l1。
[0047]
如本文所定义，“同时”给药包括在彼此相隔约2小时或约1小时或更短的时间内、甚至更优选地同时给予物质。
[0048]
如本文所定义，“单独”给药包括相隔超过约12小时，或约8小时，或约6小时或约4小时或约2小时给予物质。
[0049]
如本文所定义，“依次”给药包括每次以多个等分试样和/或剂量和/或在不同的时机给予物质。
[0050]
可在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予抗癌剂。在治疗方案期间，可以在任何时间对受试者给予抗癌剂，例如在第一治疗阶段期间或在第二治疗阶段期间。
[0051]
在第一治疗阶段期间，可以在给予纳曲酮或其代谢物或其类似物之前和/或之后对患者给予抗癌剂。可同时、依次、单独，优选同时给予抗癌剂和纳曲酮或其代谢物或其类似物。还可以在停止用纳曲酮治疗之后继续对患者给予抗癌剂，因此在第一治疗阶段和第二治疗阶段给予抗癌剂。
[0052]
在第二治疗阶段期间，可以在给予大麻素之前和/或之后对患者给予抗癌剂。可同时、依次、单独，优选同时给予抗癌剂和大麻素。还可以在停止用大麻素治疗之后继续对患者给予抗癌剂，因此还在治疗方案之后给予抗癌剂。
[0053]
在另一个实施方案中，治疗还可以包括对受试者给予维生素d。可以在治疗方案之前、期间或之后对受试者给予维生素d。在治疗方案期间，可以在任何时间对受试者给予维生素d，例如在第一治疗阶段或在第二治疗阶段。优选地，应在公开的治疗方案开始之前对患者给予维生素d。
[0054]
在第一治疗阶段期间，可在给予纳曲酮或其代谢物或其类似物之前和/或之后对患者给予维生素d。可同时、依次、单独，优选同时给予维生素d和纳曲酮或其代谢物或其类似物。还可以在停止用纳曲酮治疗之后继续对患者给予维生素d，因此在第一治疗阶段和第二治疗阶段给予维生素d。
[0055]
在第二治疗阶段期间，可以在给予大麻素之前和/或之后对患者给予维生素d。可同时、依次、单独，优选同时给予维生素d和大麻素。还可以在停止用大麻素治疗之后继续对患者给予维生素d，因此还可以在治疗方案之后给予维生素d。
[0056]
优选在治疗方案期间，应每日向受试者给予维生素d以在治疗的所有阶段维持正确的维生素d水平。
[0057]
如本文所用，“维生素d”是指维生素d和维生素d代谢途径的任何中间体或产物，其产生能够增强细胞生长抑制作用的活性代谢物。代谢物可以指维生素d前体，其可被掺入到受试者体内自然发生的维生素d合成途径以进行本发明的治疗。或者，代谢物可以指由利用维生素d的合成代谢或分解代谢方法获得的分子。维生素d代谢物的非限制性实例包括麦角钙化醇、胆钙化醇、骨化二醇和骨化三醇、1a-羟基胆钙化醇、25-羟基胆钙化醇、1a,25-羟基胆钙化醇、24,25-羟基胆钙化醇。“活性”代谢物是可以在本发明的上下文中使用的代谢物。维生素d或其活性代谢物的剂量方案为本领域技术人员所熟知。术语维生素d还包括上述任一种的药学上可接受的盐。特别适合用于本发明的维生素d代谢物是骨化三醇。
[0058]
在某些实施方案中，其中药剂为6-β-纳曲醇，6-β-纳曲醇将以使6-β-纳曲醇的血浆浓度增加至至少0.34ng/ml、优选至少3.4ng/ml、更优选至少34ng/ml、或最优选至少340ng/ml的有效量给予。在某些实施方案中，6-β-纳曲醇将以使6-β-纳曲醇的血浆浓度增加至0.3ng/ml至3,400ng/ml的范围内、优选在34ng/ml至3,400ng/ml的范围内、更优选在340ng/ml至3,400ng/ml的范围内的有效量给予。达到这一量的有效量可以使用任何数目的本领域技术人员已知的常规技术来确定。例如，本领域技术人员可以对从受试者获得的血浆样本进行质谱分析，以确定在给予6-β-纳曲醇后样本中6-β-纳曲醇浓度的增加。有效量是确定使血浆浓度达到所需的增加的量。通常情况下，纳曲醇将以每名患者每天最高达3mg的量给药。
[0059]
大麻素可以基于特定的大麻素和患者的细节，以常规的量给药。在某些实施方案中，大麻素将以在10mg至1000mg之间、优选在200至800mg之间、更优选在300至500mg之间的剂量每天给药。
[0060]
化疗剂可以根据特定的化疗剂和患者的详细情况按常规量给药。在某些实施方案中，每天按标准实践中使用的剂量给予化疗剂。
[0061]
在某些实施方案中，对患者给予维生素d产品，其量足以使受试者的维生素d血浓度达到至少40ng/ml，更优选至少50ng/ml。优选地，维生素d液浓度提高至40至220ng/ml，更优选维生素d液浓度提高至40至90ng/ml。
[0062]
技术人员可以通过对患者的某些参数进行常规评估以确定足够的量来进行给药，例如但不限于年龄、体重、性别、病史和/或其他生活方式因素，包括吸烟、饮酒和运动水平。此外，技术人员可以通过对从受试者获得的生物样本进行常规生化和分析测定来确定剂量是否足以将维生素d血浓度提高至足够的浓度。优选地，对其进行所述分析的样本是血液。这种众所周知的测定实例包括但不限于质谱法，其中可以定量测量维生素d或其活性代谢物的水平。因此，足够的量是指达到所需的维生素d血浓度的量。在单次给予或重复给予一定剂量的维生素d或其活性代谢物之后，可实现所需浓度。当同时给予维生素d产品和纳曲酮产品时，在给予纳曲酮产品之前，维生素d血浓度是否在所需范围内并不重要，前提是给予维生素d产品的量足以使维生素d血浓度提高至所需的浓度范围内。确定从患者获得的生物样本中维生素d或其活性代谢物的浓度的其他方法是技术人员熟知的。在某些实施方案中，足以将维生素d血浓度提高至超过某一水平的维生素d的量称为维生素d产品的“治疗有效量”。
[0063]
如本文所用，“制剂”可指一种物质或多种物质的集合，其形式为一种或多种组合物，旨在用于同时或非同时使用。
[0064]
对任一种治疗剂而言，给药方法不特别限制，但在本发明的多种实施方案中，ldn、大麻素和化疗剂通过口服、颊、舌下、鼻、肺、静脉、直肠、局部和经皮途径给药。对于ldn给药优选口服，对于大麻素优选舌下，以及对于化疗剂优选口服或静脉。
[0065]
设想的治疗方案包括“第一治疗阶段”和“第二治疗阶段”。在第一治疗阶段中，给予治疗有效量的ldn、其代谢物或任一种类似物。在第二治疗阶段中，给予有效量的一种或多种大麻素。在治疗方案之前、期间或之后可以给予化疗剂。
[0066]
在一个优选的实施方案中，在治疗方案之后给予化疗剂。这可以是有利的，因为它使得免疫细胞和癌细胞能够被“启动”(激活)，因此在随后给予化疗剂时更有效地减少癌症。
[0067]
优选地，第二治疗阶段在第一治疗阶段开始1至7天后才开始，更优选1至4天，最优选1至2天，“天”是24小时的连续时间。
[0068]
在本发明的另一个优选实施方案中，在第一治疗阶段结束和第二治疗阶段开始之间有一个“恢复阶段”。在恢复阶段，没有给予ldn、大麻素或化疗剂。在一个实施方案中，恢复阶段的持续时间为至少两天，优选间隔不超过1周，最优选持续时间为两天。
[0069]
如本文所用，术语“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”以及“治疗(to treat)”指治愈、减缓和/或停止所诊断出的病理学病况或疾病的进展的治疗措施，还指预防和/或减缓目标病理学病况或疾病的发展的预防性(prophylactic)措施或防止性(preventative)措施。因此，需要治疗的那些受试者包括已经患有所述病症的那些，易于患有所述病症的那些，以及待预防所述病症的那些。在一些情况下，如果受试者显示出下述中的一种或多种，则根据本发明受试者的肿瘤/癌症被成功地“治疗”：癌细胞的数量减少或者完全缺失；肿瘤尺寸的减小；癌细胞至外周器官(包括，例如，癌扩散至软组织和骨骼)的浸润的抑制或缺失；肿瘤转移的抑制或缺失；肿瘤生长的抑制或缺失；发病率和死亡率降低；肿瘤的致肿瘤性、肿瘤发生的频率或肿瘤发生的能力降低；肿瘤中癌干细胞的数量或频率降低；肿瘤发生细胞分化为非肿瘤发生状态；或所述效果的一些组合。
[0070]
如本文所用，术语“受试者”指将成为癌症治疗的接受者的任何动物，包括，但不限于，人类、非人类灵长类动物、马、犬科动物、猫科动物、啮齿动物和其他脊椎动物。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。
[0071]
如本文所用，术语“肿瘤/癌症”指由过度的细胞生长、增殖和/或存活所产生的任何组织块，其为良性的(非癌性的)或恶性的(癌性的)，包括癌前病变。
[0072]
本发明可治疗的癌症类型不以任何方式限制，并包括，例如癌(carcinoma)、肉瘤、腺癌、黑素瘤、神经癌(胚细胞瘤、胶质瘤)、间皮瘤和网状内皮、淋巴或造血肿瘤性疾病(例如骨髓瘤、淋巴瘤或白血病)。在具体实施方案中，肿瘤可包括肺腺癌、肺癌、弥漫性或间质性胃癌、结肠癌、前列腺腺癌、食管癌、乳腺癌、胰腺腺癌、卵巢腺癌、肾上腺腺癌、子宫内膜腺癌或子宫腺癌，但癌症类型优选为乳腺癌。
[0073]
在一个优选的实施方案中，待治疗的癌症选自脑癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌和胰腺癌以及白血病。待治疗的癌症优选为乳腺癌、肺癌或结肠癌。待治疗的癌症最优选为乳腺癌。
[0074]“乳腺癌”的定义在医学科学中是众所周知的。本领域技术人员会理解乳腺癌是指男性或女性乳腺组织的任何恶性肿瘤，包括，例如癌和肉瘤。乳腺癌的具体实施方案包括导管原位癌(dcis)、小叶原位癌(lcis)或粘液癌。乳腺癌还指浸润性导管(idc)、小叶瘤变或浸润性小叶癌(ilc)。
[0075]
类似地，“肺癌”和“结肠癌”的定义在医学科学中是众所周知的。技术人员会理解肺癌和结肠癌分别是指男性或女性的肺和结肠组织的任何恶性肿瘤，包括例如癌和肉瘤。
[0076]
如本文所用，术语“癌细胞”是指从肿瘤或癌症中衍生出来的细胞或永生化细胞系。
[0077]
在本发明的一个方面，提供了一种用于确定患有癌症并已用ldn治疗的受试者是否适合用大麻素治疗的方法。受试者可能已经用化疗剂治疗。在这方面，样本将从受试者获得并与cb2特异性探针接触。从而确定样本中cb2的浓度，并与第一治疗阶段前的参考测量值进行比较。
[0078]
如本文所用，“适合性”是指与那些被测试认为不适合的受试者相比，具有上述定义的治疗成功可能性高的特性。通过本发明某一方面设想的方法进行测试的受试者子集将被认为不适合第二阶段的治疗。本发明的任何部分绝不允许用于这些受试者。确定适合性的方法旨在由本领域技术人员与他们已知的其他测试一起并运用他们的直觉和判断进行考虑。
[0079]
在某些实施方案中，从受试者获得的用于该方法的生物“样本”为血液、血浆、血清、淋巴液、组织或来自组织样本的细胞。然而，优选地，样本为从受试者获得的肿瘤活检。
[0080]
如本文所用，“探针”是任何部分，在接触从受试者获得的样本时，其允许以某种方式测量样本中cb2的浓度。在一个实施方案中，该探针是抗体或其他cb2结合分子，用于提供更纯的cb2溶液，该溶液可以用分光光度法进行分析，并通过使用本领域技术人员已知的方法进行校准，可以确定原始样本中cb2的浓度。
[0081]
在另一个方面，提供了纳曲酮、其代谢物或选自甲基纳曲酮、纳洛酮、纳美芬和纳洛芬的类似物以及大麻素在制造待作为“联合治疗方案”的一部分给药的药物中的用途，本文使用的“联合治疗方案”是指由上述定义的第一治疗阶段——优选恢复阶段——和第二治疗阶段组成的方案，并且其中联合治疗方案包括用上文所述的方式给予化疗剂。
[0082]
现在将参考以下非限制性实施例描述本发明。
[0083]
实施例
[0084]
实施例1
[0085]
对mcf7(乳腺癌)细胞的培养物进行了一个说明性和非限制性实验。简而言之，体外给予10nm的ldn或1μm或10μm的6bn至培养物持续两天，通过蛋白免疫印记分析bad、p21、阿片样受体κ和mu、cb1、cb2和gapdh(作为上样对照)的表达水平之后，随后通过条带的密度测量进行定量。
[0086]
完全地，将mcf7细胞接种到6孔板中，密度为1x105/孔，并留待粘附过夜。在细胞中加入纳曲酮(10nm)或6-β-纳曲醇(1μm或10μm)，然后收集细胞进行蛋白免疫印记分析。初级探测是用产生的针对bad、p21、oprk1、oprk2、cbr-1和cbr-2的特异性抗体进行的。bad是blc2相关的死亡启动子，一种促凋亡蛋白，如果在癌细胞中上调，其会增加它们被各种疗法杀死的倾向。抗gapdh用作上样对照。所有抗体均在1：1000的稀释度下使用，然后适当的hrp
共轭次级抗体也在1：1000的稀释度下使用。用超信号化学发光检测系统对条带进行可视化，用adobe photoshop cs3,v10.0确定条带强度的密度测定，并将其归一化到上样对照。
[0087]
在对所有三种处理的响应中，cb2和bad水平相对于未给药的对照组上升。对于cb2，在对给予10μm 6bn的响应中这一增长是最高的。这可在图1中看出。
[0088]
实施例2
[0089]
对mcf7(乳腺癌)细胞的培养物进行了另一个说明性和非限制性实验。简而言之，培养物用ldn或6bn处理两天，给予大麻素之后再处理两天。第四天评估细胞数量和存活率。每个治疗剂的给药顺序颠倒，并重复实验。
[0090]
完全地，将mcf7细胞接种到6孔板中，密度为1.5x104/孔，并留待至粘附。然后用纳曲酮(10nm)、6-β-纳曲醇(10μm)或大麻二酚(10μm)培养细胞。含药介质在48h后被去除，细胞用不含药的介质轻轻冲洗。然后将新鲜培养基添加到补充有纳曲酮(10nm)、6-β-纳曲醇(10μm)或大麻二酚(10μm)的细胞，如图所示。再48小时后评估细胞数量和存活率，用台盼蓝染料排除法区分活细胞和死细胞的百分比。然后对数据进行合并，以比较顺序对整体效果的影响。
[0091]
如从图2中可看出的，发现在大麻素之前使用ldn或6bn的时间安排对抑制癌症的增殖有更大的影响。
[0092]
实施例3
[0093]
·
按照表1中的时间表，将a549(肺癌)和hct116(结肠癌)细胞与药物一起培育。时间表总共持续96小时。
[0094]
·
治疗分为两个区块，每个区块持续48小时。由于在三个不同的治疗阶段使用三种不同的药物进行细胞测试的复杂性，在一个治疗阶段一起给予cbd和ldn，而在另一个治疗阶段给予化疗剂。
[0095]
·
在两个区块之间有个冲洗阶段，其中去除含有药物的耗尽培育基，之后清洗细胞，然后添加包含下一个治疗区块的新鲜培育基。
[0096]
·
化疗剂为吉西他滨(gem)或奥沙利铂(oxp)，并以～ic20浓度(1μm)使用。低剂量纳曲酮(ldn)以10nm使用，以及大麻素(cbd)以1μm使用。“0”意指没有给药并用作对照。
[0097]
·
在96小时评估细胞数量和细胞存活率百分比。然后合并数据以比较序列对整体效果的影响。
[0098]
区块1(0-48小时)区块2(48-96小时)00ldn cbdldn cbd0gemldn cbd0ldn cbdgemgem00ldn cbdgemldn cbdgemgem0oxp(p)
ldn cbdoxp(p)oxp(p)0oxp(p)ldn cbdoxp(p)oxp(p)
[0099]
表1：显示测试的时间表。
[0100]
如图3和图4所示，化疗前使用cbd ldn是有效的。在96小时内，使用ldn cbd后使用化疗剂产生比仅连续使用化疗(其因而使用比联合治疗更高的化疗剂总量)改善或类似的效果。对于测试的两种细胞类型(a549和hct116)和两种化疗剂(gem和oxp)都观察到了这些结果。与未接受预治疗的细胞相比，在化疗前使用ldn cbd治疗细胞使得细胞数量减少和细胞存活率％降低。
[0101]
因此，实施例3表明，预治疗产生与96小时的化疗类似的效果。这允许一种有效的治疗方案，其保持与连续化疗相比更好或相当的整体疗效，但使用显著减少的化疗剂量，这是有益的，因为它可以减小患者遭受的化疗相关的毒性。
[0102]
参考文献
[0103]
cridge,b.&rosengren,r(2013)critical appraisal of the potential use of cannabinoids in cancer management.cancer management and research 2013:5 301
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