用于评估巨噬细胞介导的病理学的组合物和方法与流程

用于评估巨噬细胞介导的病理学的组合物和方法
1.对相关申请的交叉引用
2.本技术要求2019年1月25日提交的美国临时申请号62/796,879的权益，其通过引用整体并入本文。


背景技术：

3.巨噬细胞是主要参与许多炎性病症的免疫细胞。在某些情况下，参与炎症的巨噬细胞变得适应不良和自我繁殖，从而导致慢性病状，例如，但不限于癌症、动脉粥样硬化和类风湿性关节炎(ra)。甘露糖受体(cd206)在表型活化的巨噬细胞上高度上调，所述巨噬细胞在机制上有助于这些疾病的潜在病理学。本领域需要用于评估巨噬细胞在炎症中的参与的非侵袭性的定量成像模态，其不受限于临床观察的主观限制。


技术实现要素：

4.本文公开了评估巨噬细胞在受试者的一个或多个关节的炎症中的参与的组合物和方法。在某些方面，公开的方法包括以下步骤：给受试者施用组合物，所述组合物包含具有与其缀合的成像部分的甘露糖基化的葡聚糖构建体；获取受试者的第一关节的一个或多个平面图像；定义包含第一关节的感兴趣区域(roi)；定义与roi基本相似大小的关节特异性参考区域(rr)，其包含与roi大约相邻的区域；通过评估roi的平均像素强度与rr的平均像素强度的比率来确定关节的martad值；和将第一关节的martad与对应关节的正常martad值进行对比，其中正常martad值源自对多个健康受试者的对应关节的martad值求平均值，且其中巨噬细胞参与由超过正常martad值预定阈值的关节特异性martad值指示。在某些实施方案中，所述缀合的成像部分是放射性的。在一些其它的实施方案中，所述成像部分是荧光的。在某些方面，所述方法还涉及获取受试者的一个或多个额外关节的一个或多个平面图像和针对所述一个或多个额外关节重复前述步骤。
5.根据某些实施方案，所述方法进一步包括确定受试者的总体martad值。在这些实施方案中，通过定量超过预定阈值的受试者的每个关节与对应关节正常martad值的差异之和来确定总体martad值。
6.根据其它方面，所述一个或多个平面图像包含至少两个图像并且所述至少两个图像包含关节的前部图像和后部图像。在这些实施方案的示例性方面，通过对从前部和后部图像确定的martad值求平均值来确定受试者的martad值。在其它示例性方面，对于使用单个平面图像具有在预定阈值的20％以内的martad值的每个关节，使用前部和后部平面图像重新计算martad值。
7.根据某些其它方面，关节特异性rr位于roi的3个roi直径内。在其它方面，关节特异性rr位于roi的2个roi直径内。
8.在其它方面，受试者关节martad值的预定阈值是来自所述多个健康受试者的对应关节的平均martad值的大于或等于两个标准差。在其它方面，受试者关节martad值的预定阈值大于来自所述多个健康受试者的对应关节的平均martad值的95％置信区间。
9.在某些方面，所述甘露糖基化的葡聚糖构建体是tc99m-tilmanocept。在示例性实施方案中，施用的tc99m-tilmanocept的量是在约50μg至约400μg之间。在其它方面，在tc 99m tilmanocept施用和获取受试者的图像之间的时间段为约15分钟至约6小时。
10.本文中进一步公开了定量诊断出类风湿性关节炎(ra)的受试者中的巨噬细胞介导的关节炎症的方法，所述方法包括：给受试者施用组合物，所述组合物包含甘露糖基化的葡聚糖构建体和与所述甘露糖基化的葡聚糖构建体缀合的成像部分；选择受试者中的怀疑有炎症的多个关节；获取所述多个关节中的每个的一个或多个平面图像；对于每个关节图像，定义包含所述关节的感兴趣区域(roi)；对于每个关节，定义与roi基本相似大小的关节特异性参考区域(rr)且包含与roi大约相邻的区域；对于每个关节，通过评估roi的平均像素强度与rr的平均像素强度的比率来确定关节的martad值；对于每个关节，将所述关节的martad与对应关节的正常martad值进行对比，其中正常martad值源自对多个健康受试者的对应关节的martad值求平均值；且其中巨噬细胞参与由超过正常martad值预定阈值的关节特异性martad值指示；和通过确定超过预定阈值的受试者的每个关节与对应关节正常martad值的差异之和来确定所述受试者的总体martad值。
11.本文中进一步公开了管理诊断出ra的受试者的治疗的方法，所述方法包括下述步骤：给受试者施用组合物，所述组合物包含甘露糖基化的葡聚糖构建体和与所述甘露糖基化的葡聚糖构建体缀合的成像部分；选择受试者中的怀疑有炎症的多个关节；获取所述多个关节中的每个的一个或多个平面图像；对于每个关节图像，定义包含所述关节的感兴趣区域(roi)；对于每个关节，定义与roi基本相似大小的关节特异性参考区域(rr)且包含与roi大约相邻的区域；对于每个关节，通过评估roi的平均像素强度与rr的平均像素强度的比率来确定关节的martad值；对于每个关节，将所述关节的martad与对应关节的正常martad值进行对比，其中正常martad值源自对多个健康受试者的对应关节的martad值求平均值；且其中巨噬细胞参与由超过正常martad值预定阈值的关节特异性martad值指示；通过确定超过预定阈值的受试者的每个关节与对应关节正常martad值的差异之和来确定所述受试者的总体martad值；和对所述受试者施用疗程。在某些方面，在疗程以后，重复前述步骤并评价总体martad评分的变化。在示例性实现中，总体martad值的下降指示疗程的效力。
附图说明
12.图1显示了根据某些实现，受试者手的示例性图像。
13.图2显示了根据某些实现，示例性roi和关节特异性rr。
14.图3显示了根据某些实施方案，来自ra受试者和健康对照的示例性martad值数据。
15.图4显示了根据某些实施方案，来自9位具有活动性ra的受试者的示例性总体martad值。
具体实施方式
16.范围可以在本文中表示为从“约”一个特定值和/或到“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一个方面包括从一个特定值和/或到另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应该理解，特定值形成另一个方面。进一步理解，每个范
围的端点相对于其它端点是显著的，且独立于其它端点。还应理解，本文公开了许多值，并且除了该值本身之外，每个值在本文中还被公开为“约”该特定值。例如，如果公开值“10”，则也公开“约10”。还应理解，还公开了两个特定单元之间的每个单元。例如，如果公开了10和15，则也公开了11、12、13和14。
17.本文公开的某些材料、化合物、组合物和组分可以商业获得或使用本领域技术人员通常已知的技术容易地合成。例如，用于制备公开的化合物和组合物的起始原料和试剂可从商业供应商诸如aldrich chemical co.(milwaukee,wis.)、acros organics(morris plains,n.j.)、fisher scientific(pittsburgh,pa.)或sigma(st.louis,mo.)获得，或通过本领域技术人员已知的方法按照参考文献中所述的规程制备，所述参考文献是诸如fieser and fieser’s reagents for organic synthesis,第1-17卷(john wiley and sons,1991)；rodd’s chemistry of carbon compounds,第1-5卷和增刊(elsevier science publishers,1989)；organic reactions,第1-40卷(john wiley and sons,1991)；march’s advanced organic chemistry,(john wiley and sons,第4版)；和larock’s comprehensive organic transformations(vch publishers inc.,1989)。
18.公开了要用于制备本发明的组合物的组分以及要在本文公开的方法中使用的组合物本身。在本文中公开了这些和其它材料，并且应当理解，当这些材料的组合、子集、相互作用、组等被公开时，虽然不可明确地公开这些化合物的每个不同个体和集体组合和排列的具体参考，但是每个都在本文中被具体涵盖和描述。例如，如果公开和讨论了特定化合物并且讨论了可以对包括所述化合物在内的许多分子进行的许多修饰，则特别涵盖所述化合物的每个和每种组合和排列以及可能的修饰，除非特别指出相反。因此，如果公开了一类分子a、b和c，以及公开了一类分子d、e和f以及组合分子的例子a-d，那么即使每个没有单独叙述，每个都被单独和共同涵盖，意味着组合a-e、a-f、b-d、b-e、b-f、c-d、c-e和c-f被认为公开。同样，还公开了这些的任何子集或组合。因此，例如，a-e、b-f和c-e的亚组将被认为公开。该概念适用于本技术的所有方面，包括、但不限于制备和使用本发明的组合物的方法中的步骤。因此，如果存在可以执行的多种额外步骤，应当理解，这些额外步骤中的每一个可以用本发明方法的任何具体实施方案或实施方案的组合来执行。
19.本文中使用的术语“药学上可接受的载体”或“载体”表示无菌的水性或非水性溶液、胶体、分散体、混悬液或乳剂、以及用于在即将使用前重构为无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。合适的水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的例子包括水、乙醇、多元醇(诸如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲纤维素及其合适混合物、植物油(诸如橄榄油)和可注射的有机酯诸如油酸乙酯。例如，通过使用包衣材料诸如卵磷脂，在分散体的情况下通过维持所需的粒度，和通过使用表面活性剂，可以维持适当的流动性。这些组合物还可以含有佐剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂诸如对羟基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等，可以确保微生物的作用的预防。还可能需要包括等渗剂诸如糖、氯化钠等。通过包含延迟吸收的试剂，诸如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射药物形式的延长吸收。通过形成药物在可生物降解的聚合物诸如聚丙交酯-聚乙醇酸交酯、聚(原酸酯)和聚(酸酐)中的微胶囊基体，制备可注射的贮库形式。根据药物与聚合物的比率和使用的特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。还通过将药物包封在与身体组织相容的脂质体或微乳剂中来制备可注射的贮库制剂。可以将可注射制剂灭菌，例如，
通过穿过截留细菌的过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，所述灭菌剂可以在即将使用前溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。合适的惰性载体可以包括糖诸如乳糖。理想地，至少95重量％的活性成分颗粒具有在0.01至10微米范围内的有效粒径。
20.本文中使用的术语“受试者”或“患者”表示施用的靶标，例如动物。因此，本文公开的方法的受试者可以是脊椎动物，诸如哺乳动物、鱼、鸟、爬行动物或两栖动物。可替换地，本文公开的方法的受试者可以是人、非人灵长类动物、马、猪、兔、狗、绵羊、山羊、牛、猫、豚鼠或啮齿动物。该术语不表示特定年龄或性别。因此，成年和新生受试者以及胎儿，无论男性还是女性，都意图被涵盖。在一个方面，受试者是哺乳动物。患者表示患有疾病或障碍的受试者。术语“患者”包括人和兽医受试者。在所公开的方法的一些方面，受试者在施用步骤之前已被诊断需要治疗一种或多种癌症障碍。
21.本文中使用的术语“治疗”表示旨在治愈、改善、稳定或预防疾病、病理学状况或障碍的对患者的医学管理。该术语包括积极治疗，即专门旨在改善疾病、病理学状况或障碍的治疗，并且还包括病因治疗，即旨在除去相关疾病、病理学状况或障碍的病因的治疗。另外，该术语包括姑息治疗，即被设计用来缓解症状而非治愈疾病、病理学状况或障碍的治疗；预防性治疗，即旨在最小化或者部分地或完全地抑制相关疾病、病理学状况或障碍的发展的治疗；和支持性治疗，即用于补充另一种旨在改善相关疾病、病理学状况或障碍的特定疗法的治疗。在不同的方面，该术语涵盖受试者(包括哺乳动物(例如，人类))的任何治疗，并且包括：(i)预防疾病在可能易患该疾病但尚未被诊断为患有该疾病的受试者中发生；(ii)抑制疾病，即阻止其发展；或(iii)减轻疾病，即造成疾病的消退。在一个方面，所述受试者为哺乳动物，诸如灵长类动物，且在另一个方面，所述受试者为人类。术语“受试者”也包括驯化的动物(例如，猫、狗等)、家畜(例如，牛、马、猪、绵羊、山羊等)和实验动物(例如，小鼠、兔、大鼠、豚鼠、果蝇等)。
22.本文中使用的术语“预防”或“阻止”表示排除、避免、消除、防止、停止或阻碍某个事情的发生，特别是通过提前动作。应当理解，在本文中使用减少、抑制或预防的情况下，除非另外特别指出，否则其它两个词的使用也被明确公开。
23.本文中使用的术语“诊断”是指已经由技术人员(例如，医师)进行体格检查，并且被发现患有可以通过本文公开的化合物、组合物或方法诊断或治疗的病症。例如，“诊断患有类风湿性关节炎”是指已经由技术人员(例如，医师)进行体格检查，并且被发现患有可以通过减少关节炎症和/或与其有关的疼痛的化合物或组合物诊断或治疗的病症。
24.本文中使用的术语“施用”表示向受试者提供药物制品的任何方法。这样的方法是本领域技术人员众所周知的，并且包括、但不限于口服施用、透皮施用、通过吸入施用、鼻施用、局部施用、阴道内施用、眼部施用、耳内施用、大脑内施用、直肠施用、舌下施用、含服施用和胃肠外施用(包括注射，诸如静脉内施用、动脉内施用、通过侵入施用至特定器官、肌肉内施用、肿瘤内施用和皮下施用。施用可以为连续的或间歇的。在不同的方面，可以治疗性地施用制剂；即施用以治疗现有疾病或病症。在进一步的各个方面，可以预防性地施用制剂；即施用以预防疾病或病症。
[0025]“tilmanocept”表示诊断剂的非放射性地标记的前体。tilmanocept是一种甘露糖基氨基葡聚糖。它具有葡聚糖主链，多个氨基封端的链(-o(ch2)
3s(ch2)2nh2)连接至核心葡萄糖元件。此外，甘露糖部分缀合至许多链的氨基，并且螯合剂二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)可以缀合至不含甘露糖的其它链的氨基。tilmanocept通常具有葡聚糖主链，其中多个葡萄糖残基包含氨基封端的链：
[0026][0027]
甘露糖部分通过脒接头缀合至链的氨基：
[0028][0029]
螯合剂二亚乙基三胺五乙酸(dtpa)通过酰胺接头缀合至链的氨基：
[0030][0031]
tilmanocept具有化学名称葡聚糖3-[(2-氨基乙基)硫基]丙基17-羧基-10,13,16-三(羧甲基)-8-氧代-4-硫杂-7,10,13,16-四氮杂十七-1-基3-[[2-[[1-亚氨基-2-(d-吡喃型甘露糖基硫基)乙基]氨基]乙基]硫基]丙基醚复合物，并且tilmanocept tc99m具有以下分子式：
[0032]
[c6h10o5]n.(c19h28n4o9s99mtc)b.(c13h24n2o5s2)c.(c5h11ns)a且含有3-8个缀合的dtpa分子(b)；12-20个缀合的甘露糖分子(c)；和0-17个保持游离的胺侧链(a)。tilmanocept具有以下一般结构：
[0033][0034]
某些葡萄糖部分可能没有连接的氨基封端的链。
[0035]
本文公开了一种方法，其用于定量感兴趣的特定解剖区域中参与疾病活动性的巨噬细胞的量，并定量地确定巨噬细胞参与如何随时间和响应于治疗而变化。本文描述的某些实施方案公开了成像剂tc99m-tilmanocept用于定量巨噬细胞在感兴趣的特定位点处的炎症中的参与的用途。tilmanocept是一种甘露糖基化的葡聚糖合成分子构建体，其对甘露糖受体cd206具有高亲和力和特异性。某些实施方案公开了定量巨噬细胞在具有ra的患者的手和手腕的发炎关节中的参与。但是，所公开的方法的效用不限于这些实施例。本发明描述了使用任何甘露糖基化的葡聚糖构建体定量在炎症部位处的巨噬细胞参与的方法，其可以通过与许多不同放射性同位素或荧光部分的缀合或缔合来检测。本发明公开的方法可用于评价巨噬细胞在除ra之外的许多疾病状态(包括癌症和动脉粥样硬化)中的参与。
[0036]
在某些实施方案中，所公开的方法测量ra患者中的所有或基本上所有相关关节中总巨噬细胞参与的疾病活动性。在典型的ra患者中，大部分被评价的关节，但很少所有被评价的关节，都涉及疾病活动性(即ra引起的炎症)。随着时间的推移，任何单个关节中的疾病活动性可能增加或减少，且以前未涉及的关节可能发展为ra炎症。在本发明中，公开了评估和定量所有关节中巨噬细胞介导的ra疾病参与的量的方法。该方法可用于监测ra患者随时间的疾病活动性，并用于提供对新开始的ra治疗的应答的定量测量。此外，对所有评价的关节中巨噬细胞参与程度的定量总测量可能有助于选择单个ra患者最可能有应答的多种ra
疗法中的那种。
[0037]
本文公开了评估巨噬细胞在受试者的一个或多个关节的炎症中的参与的组合物和方法。在某些方面，所公开的方法包括以下步骤：给受试者施用组合物，所述组合物包含甘露糖基化的葡聚糖构建体和与所述甘露糖基化的葡聚糖构建体缀合的放射性成像部分；获取受试者的第一关节的一个或多个平面图像；定义包含所述第一关节的感兴趣区域(roi)；定义与roi基本相似大小的关节特异性参考区域(rr)，其包含与roi大约相邻的区域；通过评估roi的平均像素强度与rr的平均像素强度的比率来确定关节的martad值；和将第一关节的martad与对应关节的正常martad值进行对比，其中正常martad值源自对多个健康受试者的对应关节的martad值求平均值且其中巨噬细胞参与由超过正常martad值预定阈值的关节特异性martad值指示。在某些方面，所述方法还涉及获取受试者的一个或多个额外关节的一个或多个平面图像和针对所述一个或多个额外关节重复前述步骤。
[0038]
甘露糖基化的葡聚糖构建体
[0039]
在某些方面，本文中公开的化合物采用包含聚合的(例如碳水化合物)主链的载体构建体，所述主链具有与其缀合的甘露糖结合c-凝集素型受体靶向部分(例如甘露糖)以递送一种或多种活性治疗剂。这样的构建体的例子包括甘露糖基氨基葡聚糖(mad)，其包含葡聚糖主链，该葡聚糖主链具有缀合至主链的葡萄糖残基的甘露糖分子并且具有缀合至主链的葡萄糖残基的活性药物成分。tilmanocept是mad的一个具体例子。作为没有与其缀合dtpa的tilmanocept的tilmanocept衍生物是mad的另一个例子。
[0040]
在某些实现中，本公开内容提供了一种化合物，其包含基于葡聚糖的部分或主链，该部分或主链具有一个或多个甘露糖结合c-型凝集素受体靶向部分和一个或多个与其连接的治疗剂。基于葡聚糖的部分通常包含类似于在美国专利号6,409,990('990专利)中描述的葡聚糖主链，其通过引用并入本文。因此，主链包含主要通过α-1,6糖苷键连接的多个葡萄糖部分(即，残基)。也可能存在其它键，诸如α-1,4和/或α-1,3键。在某些实施方案中，并非每个主链部分都被取代。在某些实施方案中，甘露糖结合c-型凝集素受体靶向部分连接至约10％至约50％之间的葡聚糖主链的葡萄糖残基，或约20％至约45％之间的葡萄糖残基，或约25％至约40％之间的葡萄糖残基。
[0041]
根据其它方面，甘露糖结合c-型凝集素受体靶向部分选自、但不限于甘露糖、岩藻糖和正乙酰基葡糖胺。在某些实施方案中，所述靶向部分连接至约10％至约50％之间的葡聚糖主链的葡萄糖残基，或约20％至约45％之间的葡萄糖残基，或约25％至约40％之间的葡萄糖残基。本文提及的分子量，以及受体底物、链和连接到葡聚糖主链的诊断/治疗部分的缀合的数目和程度表示给定数量的载体分子的平均量，因为合成技术会导致一些变化。
[0042]
根据某些实施方案，一个或多个甘露糖结合c-型凝集素受体靶向部分和一个或多个可检测试剂(例如放射性地标记的成像部分)通过接头连接至基于葡聚糖的部分。接头可以在约50％至约100％或约70％至约90％的主链部分处连接。接头可以相同或不同。在某些实施方案中，氨基封端的接头。在某些实施方案中，接头可包含-o(ch2)3s(ch2)2nh-。在某些实施方案中，接头可以是1至20个选自碳、氧、硫、氮和磷的主原子的链。接头可以是直链的或支链的。接头还可以被一个或多个取代基取代，所述取代基包括、但不限于卤素基团、全氟烷基、全氟烷氧基、烷基诸如c1-4烷基、烯基诸如c1-4烯基、炔基诸如c1-4炔基、羟基、氧代基团、巯基、烷硫基、烷氧基、硝基、叠氮化物烷基、芳基或杂芳基、芳氧基或杂芳氧基、
芳烷基或杂芳烷基、芳烷氧基或杂芳烷氧基、ho-(c＝o)-基团、杂环基团、环烷基、氨基、烷基-和二烷基-氨基、氨甲酰基、烷基羰基、烷基碳酰氧基、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、-nh-nh2；＝n-h；＝n-烷基；-sh；-s-烷基；-nh-c(o)-；-nh-c(＝n)-等。本领域技术人员显而易见，其它合适的接头是可能的。
[0043]
所公开的化合物可以包括成像部分或可检测标记物。本文中使用的术语“成像部分”是指原子、同位素或化学结构，其：(1)能够连接到载体分子；(2)对人类或其它哺乳动物受试者无毒；和(3)提供直接或间接可检测的信号，特别是不仅可以被测量而且其强度与成像部分的量相关(例如，成比例)的信号。所述信号可以通过任何合适的方式检测到，包括光谱、电、光、磁、听觉、无线电信号或触诊检测方式。
[0044]
成像部分包括、但不限于放射性的同位素(放射性同位素)、荧光分子(又名荧光染料和荧光团)、化学发光试剂(例如，鲁米诺)、生物发光试剂(例如，萤光素和绿色荧光蛋白(gfp))和金属(例如，金纳米颗粒)。可以基于成像方法的选择来选择合适的成像部分。例如，检测标记可以是用于光学成像的近红外荧光染料、用于mri成像的钆螯合物、用于pet或spect成像的放射性核素或用于ct成像的金纳米颗粒。
[0045]
成像部分可以选自、例如放射性核素、放射学造影剂、顺磁离子、金属、荧光标记、化学发光标记、超声造影剂、光敏剂或它们的组合。成像部分的非限制性例子包括放射性核素诸如
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sn或其它γ-、β-或正电子-发射体。可以使用γ颗粒检测装置检测来自放射性同位素的γ辐射。在某些实施方案中，所述γ颗粒检测装置是gamma装置(senorx,irvine calif.)。在某些实施方案中，所述γ颗粒检测装置是gdsγ检测系统(dublin,ohio)。
[0046]
使用的顺磁离子可以包括铬(iii)、锰(ii)、铁(h)、铁(ii)、钴(ii)、镍(ii)、铜(ii)、钕(iii)、钐(iii)、镱(iii)、钆(iii)、钒(ii)、铽(iii)、镝(iii)、钬(iii)或铒(iii)。金属造影剂可以包括镧(iii)、金(iii)、铅(ii)或铋(iii)。超声造影剂可以包含脂质体，例如充气脂质体。
[0047]
其它合适的标记包括，例如，荧光标记(诸如gfp和它的类似物、荧光素、异硫氰酸盐、罗丹明、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛和荧光胺和荧光金属诸如eu或来自镧系元素系列的其它金属)、近红外染料、量子点、磷光标记、化学发光标记或生物发光标记(诸如鲁米诺、异鲁米诺、theromatic吖啶酯、咪唑、吖啶鎓盐、草酸酯或二氧杂环丁烷)。
[0048]
在某些方面，所述甘露糖基化的葡聚糖构建体是tc99m-tilmanocept。在这些实施方案的示例性实现中，tc 99m tilmanocept的预期施用途径是静脉内(iv)。在某些实施方案中，iv放置的部位是左或右肘前静脉。在某些实施方案中，iv放置部位是在肘部和腕部之间。在某些实施方案中，iv施用的tilmanocept的量是在约50μg至约400μg之间。在某些实施方案中，tc99m放射性标记范围为约1mci至约10mci。在某些实施方案中，以一剂iv施用tc 99m tilmanocept。在某些实施方案中，以超过一剂iv施用tc99m tilmanocept。在某些实施方案中，在施用tc 99m tilmanocept之后，施用无菌盐水。在其它方面，在tc 99m tilmanocept施用和获取受试者的图像之间的时间段为约15分钟至约6小时。
[0049]
获取一个或多个平面图像
[0050]
根据某些实施方案，在施用甘露糖基化的葡聚糖化合物之后的限定时间间隔后获取一个或多个平面图像。在某些实施方案中，在施用和图像获取之间的时间是在约15分钟至约6小时之间。在某些实施方案中，在施用和图像获取之间的时间是在约15分钟至约3小时之间。在某些实施方案中，在施用和图像获取之间的时间是在约1小时至约3小时或更多之间。在某些实施方案中，在施用和图像获取之间的时间是在约4小时至约6小时或更多之间。
[0051]
在某些实施方案中，用于获取分析用平面图像的照相机是双头spect或spect/ct照相机，其配备具有15％窗口(如果15％设置不可用，可以使用20％)的低能量高分辨率准直仪，并且在某些其中施用tc99m-tilmanocept的实现中，以140kev峰为中心。在某些实施方案中，使用技术水平2头照相机(标称20”x 15”fov)获得5-7百万计数的目标。根据其它实现，将单头照相机用于图像获取。根据某些替代实施方案，图像获取周期是基于时间而不是计数。在示例性实现中，图像获取发生在例如约5至约20分钟的窗口期间。更短或更长的时间段是可能的。在某些实施方案中，进行全身扫描。在其它实施方案中，仅手、仅脚或仅手和脚被扫描。在仅扫描手和/或脚的前述实施方案中，图像获取时间段通常是比扫描全身时更短的持续时间。
[0052]
定义roi
[0053]
根据某些实施方案，在图像获取之后，定义一个或多个感兴趣区域(roi)。在某些方面，roi是含有要评估的解剖学区域(例如，关节)的完整图像的像素子集。在某些实施方案中，roi由保健提供者定义。在替代实施方案中，roi由计算机实现的算法定义或在计算机实现的算法的辅助下定义。在这些实施方案的示例性方面，算法可以采用机器学习来提高roi选择的准确度。
[0054]
在某些实施方案中，方式间(intermeans)阈值用于选择roi。在某些实施方案中，通过绘制区域来手动选择roi。在某些实施方案中，例如在ra中，围绕关节手动绘制roi。在某些实施方案中，紧密地围绕关节绘制手动roi以最小化来自外来软组织的潜在信号稀释。从这些roi,获得了平均和/或最大像素强度,其代表在roi内的疾病特异性的激活的巨噬细胞活性的定量。
[0055]
几种商业和开源软件包可用于医学图像的定量。例如，imagej是由国立卫生研究院(nih)开发的开放式架构、基于java的程序，与macintosh、linux和windows操作系统兼容。它配备的处理功能包括：从定义的区域计算面积和像素值统计，图像窗口化(即调整亮度/对比度)以在不修改真实定量数据的情况下实现更大的可视化，以及剪切、复制或粘贴图像或选择的能力。imagej可以打开和保存多种图像文件扩展名，包括dicom(医学数字成像和通信)图像。
[0056]
定义rr
[0057]
在某些方面，所公开的方法包括定义参考区域。在示例性实施方案中，参考区域是关节特异性的参考区域。即，选择的参考区域在解剖学接近度和/或大小方面与roi特别匹配。根据某些实现，关节特异性的rr与roi相邻。在其它实现中，rr大约与roi大约相邻。在这些实施方案的示例性实现中，rr距离roi的最近边缘为约3个roi直径或更小。在其它实现中，rr距离roi的最近边缘为约2个roi直径或更小。
[0058]
根据某些实施方案，关节特异性的参考区域与roi相同大小或基本相同大小。
[0059]
根据某些替代实施方案，和具体地，其中roi是手或脚的一个或多个关节的某些实施方案，rr被定义为含有手或脚的多个关节的区域，减去在rr内的roi的像素强度值。根据这些实施方案的某些实现，rr被定义为整只手，减去mcp和pip的像素强度。在其它实施方案中，rr被定义为含有mcp和/或pip的子集的区域，减去被包含在rr区域中的mcp和pip的像素强度。在某些实现中，与较小的关节特异性参考区域相比，这些较大的mcp特异性参考区域可以具有相对于单独mcp更少的观察变化。可以为pip和腕关节类绘制类似的关节类型特异性参考区域。减少参考区域中的观测变异可能减少关节特异性martad值的观测变异。
[0060]
确定martad值
[0061]
在某些方面，roi和rr的像素强度被用于推导归一化区域特异性的甘露糖受体靶向的定位确定(martad)值。martad值是可归因于平面图像中的疾病活动性的成像剂定位的量的定量指标。从广义上定义，通过评估roi的平均像素强度与rr的平均像素强度的比率来确定martad值。在某些替代实施方案中，通过评估roi的最大像素强度与rr的最大像素强度的比率来确定martad值。
[0062]
通过本领域已知的可用于定量医学图像的许多商业和开源软件包，可以做出像素强度确定。例如，radiant dicom查看器软件(v.5.0.2)。可替换地，imagej程序可以用于定量roi和rr，并将面积和强度值汇总为像素统计数据。这些像素统计数据包括roi和/或rr的像素面积、平均强度、最小强度、最大强度和中值强度。
[0063]
确定巨噬细胞参与
[0064]
在确定一个关节或多个关节的martad值后，martad值可以用于通过将第一关节的martad与对应关节的正常martad值进行对比(例如，rtpip2 ra相对于rtpip2健康)来确定巨噬细胞参与。在某些实现中，通过聚集来自健康受试者(例如，未患有ra)的库的每个关节的martad值来确定正常martad值。在示例性实现中，用于定义健康受试者的库中的关节特异性rr的方法将与用于患者群体的方法相同。受试者中的巨噬细胞参与由超过正常martad值预定阈值的关节特异性martad值指示。在某些实现中，当受试者关节martad值大于或等于来自多个健康受试者的对应关节的平均martad值的两个标准差时，超过预定阈值。在某些替代实现中，受试者关节martad值的预定阈值大于来自所述多个健康受试者的对应关节的平均martad值的95％置信区间。
[0065]
根据某些实施方案，所述方法进一步包括确定受试者的总体martad值。在这些实施方案中，通过定量超过预定阈值的受试者的每个关节与对应关节正常martad值的差异之和来确定总体martad值。总体martad值至少在以下方面为管理ra患者的那些人提供实用性。首先，在他们的ra炎症中具有低巨噬细胞参与的ra患者可能不太可能对某些特定ra疗法产生应答。总体martad值有助于鉴定这些疗法最可能对哪些ra患者有效。其次，巨噬细胞数量在对新开始的治疗有应答的那些ra患者的临床症状减轻之前迅速下降，从而允许martad值的变化提供治疗有效的早期定量指示。第三，由于总体martad值是定量的，它们提供了一种客观手段来监测ra患者随时间推移的他们的巨噬细胞参与ra炎症的程度。
[0066]
根据其它方面，评价至少包括一个关节及其关节特异性参考区域的前部图像和后部图像的平面图像。在这些实施方案的示例性方面，通过对从前部和后部图像确定的martad值求平均值来确定受试者的martad值。在其它示例性方面，针对前视图和后视图两
rheum.31:315-324 1988)。根据acr标准的ra诊断要求患者满足最少数量的列出标准，诸如触痛或肿胀关节计数、僵硬、疼痛、放射摄影指征和血清类风湿因子的测量。单个患者报告的ra患者的残疾度量是健康评估问卷调查残疾指数(health assessment questionnaire disability index，haq-di)。haq-di评分根据患者报告的执行日常任务的能力来表示身体功能，包括他们在进行活动时经历的困难水平。通过记录患者的进行日常活动的能力，haq-di评分可以用作其生活质量的一种量度。在某些实施方案中，所述像素强度值是最大像素强度值。在某些实施方案中，所述像素强度值是平均像素强度值。
[0071]
实施例：
[0072]
提出以下实施例来给本领域普通技术人员提供关于如何制备和评价本文要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的某些实施例的完整公开和描述，并且意图是本发明的纯粹示例，且无意将发明人考虑的内容的范围限制为他们的发明。但是，本领域技术人员考虑到本公开内容以后应该理解，可以在所公开的具体实施方案中做出许多改变且仍然获得类似或相似的结果，而不背离本发明的精神和范围。
[0073]
在实施例中描述的所有结果均得自从已经静脉内地(iv)注射的受试者获取的图像，所述已用10mci of 99m-锝标记。lymphoseek是一种商购可得的成像剂药物产品，其中tilmanocept是活性成分。注射到受试者体内的tilmanocept的质量剂量为125μg至400μg。单独的研究(未显示)证实，在这个范围内改变质量剂量不会影响图像质量。在实施例中评价的所有图像都在iv施用tc99m-tilmanocept后45-75分钟获得；但是，在相同受试者注射后180-240分钟获得的重复图像产生了统计学上相似的martad值。位于不同成像设施的不同γ照相机已用于对ra受试者和健康对照受试者进行成像。使用siemens symbia intevo照相机获取了在图1和2中显示的图像。研究之间的图像获取时间是5-10分钟。martad值对在此范围内变化的图像获取时间不敏感。更短或更长的图像获取时间也已经是可接受的。
[0074]
如在图1中最佳显示的，给ra受试者(顶行:a、b、c)或没有ra的健康对照受试者(底行：d、e、f)静脉内地(iv)注射200(a)或400(所有其它)微克用10mci的99m锝(tc99m)标记的tilmanocept。在注射后60分钟获取平面γ图像。
[0075]
图2显示了在患有ra的受试者的左手和右手的平面图像上绘制的示例性roi(关节)和关节特异性rr。箭头指示手腕和mcp1的rr和rio。
[0076]
表1显示了从5位健康受试者计算的数据平均martad值及其标准差(s.d.)的分析，给每位受试者静脉内地注射用10mci的99mtc标记的tilmanocept。用于确定巨噬细胞参与ra炎症的截止值设定为在关节特异性平均值以上大于2个标准差的martad值。
[0077]
如在图3中所示，表2显示了从9位患有活动性ra的受试者的图像得出的观察到的martad值的对比。在健康受试者中观察到的关节特异性平均martad值以上大于2个标准差的值被确定为有巨噬细胞参与的炎症(带阴影)。
[0078]
如在图4中所示，表3显示了通过确定ra受试者中所有具有巨噬细胞参与的关节(mji)的观察到的martad值与在健康受试者中观察到的各个关节的关节特异性平均martad之间的差异(dif.)而计算的总体martad值。然后将ra受试者的所有mji的这些差异相加以确定总体martad值。在9位ra受试者的该样品中，总体martad值的范围为从受试者9中的
0.00(无mji)到受试者8中的3.91。
[0079][0080]