前导序列的制作方法

技术特征：
1.光杆状菌毒力盒(pvc)效应子前导序列用于将有效载荷包装到pvc针状复合物中的用途；其中有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；和其中前导序列和有效载荷形成不同于野生型pvc效应子蛋白的效应子融合体。2.根据权利要求1的用途，其中所述前导序列包含pvc效应子的氨基酸残基1-50。3.根据权利要求1或权利要求2的用途，其中前导序列包含与选自seq id no.:47-seq id no.:92的一个或多个序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列。4.根据之前任一项权利要求中的用途，其中pvc效应子包含选自seq id no.:1-seq id no.:46的一个或多个序列的氨基酸序列。5.根据之前任一项权利要求中的用途，其中pvc效应子包含选自seq id no:4、seq id no:22、seq id no:25、seq id no:30、seq id no:32和seq id no:46的序列。6.根据之前任一项权利要求中的用途，其中前导序列与有效载荷共价融合，优选在有效载荷的n-末端。7.一种用于制造包含有效载荷的pvc针状复合物的方法，该方法包括：a.使pvc针状复合物与包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列的效应子融合体接触；b.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；和c.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。8.根据权利要求7的方法，其中所述接触在细胞内、细胞裂解物中或纯化的细胞裂解物中进行。9.一种用于将有效载荷递送到细胞中的体外和/或离体方法，该方法包括：a.使细胞接触包含效应子融合体的pvc针状复合物；b.其中效应子融合体包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列；c.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；d.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。10.一种用于遏制害虫的方法，该方法包括：a.使害虫或包含害虫的目标区域与包含效应子融合体的pvc针状复合物接触；b.其中效应子融合体包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列；c.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；d.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。11.一种pvc针状复合物，用于处理方法中；a.其中pvc针状复合物包含效应子融合体，该效应子融合体包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列；b.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；和c.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。12.一种包含效应子融合体的pvc针状复合物；a.其中所述效应子融合体包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列；b.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；和c.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。
13.一种效应子融合体，包含与有效载荷融合的pvc效应子前导序列；a.其中所述有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种；和b.其中效应子融合体不同于野生型pvc效应子蛋白。14.一种分离的pvc效应子前导序列。15.根据权利要求7-14任一项的方法、用于使用的pvc针状复合物、pvc针状复合物、效应子融合体，或分离的pvc效应子前导序列，其中前导序列包含pvc效应子的氨基酸残基1-50。16.根据权利要求7-15任一项的方法、用于使用的pvc针状复合物、pvc针状复合物、效应子融合体，或分离的pvc效应子前导序列，其中前导序列包含与选自seq id no.:47-seq id no.:92的一个或多个序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列。17.根据权利要求7-16任一项的方法、用于使用的pvc针状复合物、pvc针状复合物、效应子融合体，或分离的pvc效应子前导序列，其中pvc效应子包含选自seq id no.:1-seq id no.:46的一个或多个序列的氨基酸序列。18.根据权利要求7-17任一项的方法、用于使用的pvc针状复合物、pvc针状复合物、效应子融合体，或分离的pvc效应子前导序列，其中pvc效应子包含选自seq id no:4、seq id no:22、seq id no:25、seq id no:30、seq id no:32和seq id no:46的序列。19.根据权利要求7-18任一项的方法、用于使用的pvc针状复合物、pvc针状复合物、效应子融合体，或分离的pvc效应子前导序列，其中前导序列与有效载荷共价融合。20.一种包含核苷酸序列的分离核酸，所述核苷酸序列编码权利要求14-19任一项的分离的pvc效应子前导序列。21.一种包含权利要求20的分离的核酸分子的表达载体。22.一种包含权利要求20的分离的核酸分子，或权利要求21的表达载体的宿主细胞。23.权利要求22的宿主细胞，其中所述宿主细胞是选自哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞、细菌细胞，和/或植物细胞的一种或多种；优选其中所述细菌细胞是大肠杆菌细胞。24.权利要求22的宿主细胞，其中所述宿主细胞是光杆状菌属细胞。25.权利要求24的宿主细胞，其中所述光杆状菌属细胞包含与诱导型启动子可操作地连接的光杆状菌pvc操纵子。

技术总结
本发明提供了光杆状菌毒力盒(PVC)效应子前导序列的用途，用于将有效载荷包装到PVC针状复合物中，以及用于制造包装的PVC针状复合物的相关方法。有效载荷是选自多肽、核酸或其组合的一种或多种，并且前导序列和有效载荷形成不同于野生型PVC效应子蛋白的效应子融合体。体。体。


技术研发人员：尼古拉斯
受保护的技术使用者：华威大学
技术研发日：2020.06.05
技术公布日：2022/2/7