一种可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法与流程

技术特征：
1.一种可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：（1）将碳酸钠加入得到去离子水中，把碳酸钠水溶液稀释调节至ph为 7-10，按50~200g/l的比例将明胶加入碳酸钠溶液中，于35-60
°
c下搅拌溶解，然后加入甲基丙烯酸酐，甲基丙烯酸酐与明胶体积质量比为1-3:1，反应完成后用去离子水在常温下透析，透析结束后，冷冻干燥后得到甲基丙烯酸酰化明胶；（2）按50~200g/l的比例将甲基丙烯酸酰化明胶溶于去离子水中，然后加入丁二酸酐，丁二酸酐与甲基丙烯酸酰化明胶的体积质量比为1-3:1，在25-55℃下搅拌反应24；反应完成后，用去离子水在常温下透析，透析结束后，冷冻干燥后得到得到甲基丙烯酸酰化明胶-cooh；（3）按50~200g/l的比例将甲基丙烯酸酰化明胶-cooh溶于pbs溶液中，然后按0.1~0.5g/l的比例加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和0.1~0.5g/l比例的n-羟基琥珀酰亚胺的混合物，活化反应0.5-4h，按0.1~0.5g/l的比例加入血管内皮生长因子，活化的材料混合搅拌6-24小时，去离子水在常温下透析，透析结束后，冷冻干燥后得到甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子；（4）在避光条件下，按0.25~3g/100ml的比例取苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂，与超纯水混合于35-50℃下磁力搅拌1~8小时配置成苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂溶液，按50~200g/l的比例将步骤（3）制备的甲基丙烯酸酰化明胶-血管内皮生长因子溶于基-2,4,6-三甲基苯甲酰基膦酸锂溶液中，于50℃下磁力搅拌1~8小时，搅拌均匀制成溶液a；在室温下，按5~20g/l的比例取海藻酸钠粉末搅拌溶解于去离子水中，制成溶液b；（5）按溶液a与溶液b体积比为1:0.5-1:2的比例将溶液a与溶液b混合后加入到注射器中，采用质量百分比浓度为1%-5%的可溶性钙盐水溶液作为接收溶液，在无菌的环境下，基于静电纺丝技术使注射器中溶液a与溶液b的混合液向接收溶液中射出，用光灯照射制备好的微球，照射时间10-90s，得到双交联的促血管生成的多肽天然高分子水凝胶微球；（6）将含有水凝胶微球的接收液倒入45-100um的细胞筛网进行过滤，分离得到水凝胶微球；接着，再用无菌的pbs水溶液进行清洗，并进行常温干燥，以去除所述微球表面残留的钙离子，从而得到清洗后的水凝胶微球，即最终可用微球。2.根据权利要求1所述可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）~（3）所述透析的条件为：透析5d，每12h换一次水，透析袋截留分子量为8kda-14kda。3.根据权利要求1所述可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）~（3）所述冷冻干燥的条件为：-80℃。4.根据权利要求1所述可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺与n-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1:1-1:3。5.根据权利要求1所述可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于：所述静电纺丝的条件为：所采用的正电压为15-30kv，负电压为0。6.根据权利要求1所述可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，其特征在于：所述可溶性钙盐为氯化钙、碳酸氢钙和乙酸钙中的至少一种。

技术总结
本发明公开一种可促进血管生成的光固化水凝胶微球的制备方法，属于生物材料制备技术领域。该水凝胶微球是一种高度特异性的促进血管生成材料，具有促进细胞黏附、血管通透性增加、细胞外基质变性、血管内皮细胞迁移、增殖和血管形成等作用，可批量制备。该水凝胶微球是以天然来源的高分子材料明胶为基底材料，通过甲基丙烯酸酐对明胶进行改性，并在此基础上采用共价连接方法将具有血管内皮生长因子（VEGF）接枝到甲基丙烯酸酰化明胶的分子骨架上，再在电场的作用下，批量形成微球。由其制备的可控光固化水凝胶微球具有良好的生物相容性，在体内可降解，具有促进血管化的作用，可以主动诱导细胞黏附，在再生医学及临床治疗中应用前景良好。用前景良好。


技术研发人员：张磊 李勇 李鹏飞 魏景宽 司维 季维智
受保护的技术使用者：昆明理工大学
技术研发日：2021.10.09
技术公布日：2022/2/6