一种分析检测二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法与流程

1.本发明涉及化学分析技术领域，具体而言，本发明涉及一种分析检测二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法。


背景技术：

2.由于二氯乙酸甲酯为制备氯霉素的起始原料，为了提高氯霉素药品的质量，按照药品生产规范及产品标准，如欧洲药典(ep)的规定，需要对二氯乙酸甲酯的质量进行有效的分析和控制，分析二氯乙酸甲酯的工艺路线，可能存在的几种杂质组分为：
[0003][0004]
而目前，暂未报道能够简便，低成本的分析检测二氯乙酸甲酯及其杂质的方法。
[0005]
张淑琼等(张淑琼,田继军.二氯乙酸甲酯中各组份的gc/msd测定方法[j].广西化工,1998(1):55-56)公开了利用gc/msd的方法检测二氯乙酸甲酯及其杂质的方法，虽然该方法能够检测分离二氯乙酸甲酯相关杂质，但是峰形较差，而且检测过程复杂，成本较高，用于起始物料的控制比较复杂。
[0006]
因此，亟需开发一种能精确检测分析二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法，从而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。


技术实现要素：

[0007]
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种分析检测二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法，利用高效液相色谱分析方法，将二氯乙酸甲酯及其有关物质进行有效分离，从而精确检测分析二氯乙酸甲酯的纯度，进而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。
[0008]
为此，本发明第一方面提供了一种分析检测二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法。根据本发明的实施例，利用高效液相色谱法对待测样品进行检测，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，获得待测样品中二氯乙酸甲酯的含量；
[0009]
其中，所述高效液相色谱法的色谱条件如下所述：
[0010]
色谱柱采用纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]或其衍生物作为固定相；
[0011]
以正己烷、异丙醇、三氟乙酸作为流动相；
[0012]
洗脱方式为等度洗脱。
[0013]
采用该分析检测方法可将二氯乙酸甲酯与其生产过程中存在的杂质a(二氯乙酸)、杂质b(氯乙酸甲酯)以及杂质c(三氯乙酸甲酯)分离，以实现对二氯乙酸甲酯的质量控制，从而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。
[0014]
根据本发明实施例的分析检测二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法，还可以具有以下附加技术特征的至少之一：
[0015]
根据本发明的实施例，所述流动相中，正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为85:15:0.1～90:10:0.1。若正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比不在此范围内，则会导致最终获得的色谱图中主峰与杂质峰、杂质峰与杂质峰之间分离不开，空白有干扰。
[0016]
根据本发明的实施例，所述流动相中，正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为85:15:0.1～87:13:0.1。
[0017]
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中色谱柱为chiralcel oj-h色谱柱，所述色谱柱的柱温为25～35℃，优选25～30℃。
[0018]
根据本发明的实施例，所述流动相的流速为0.7～0.9ml/min，优选为0.7～0.8ml/min。
[0019]
在本发明提供的高效液相色谱法中，色谱柱的柱温和/或流动相的流速只有在上述范围内，才能保证获得的色谱图中主峰与杂质峰，以及各个杂质峰之间分离开。
[0020]
根据本发明的实施例，所述高效液相色谱法中检测波长为190～240nm，优选为190～210nm，进一步优选为203nm。
[0021]
根据本发明的实施例，所述方法还包括如下步骤：
[0022]
(1)配制样品溶液：取含二氯乙酸甲酯的样品，用所述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0023]
(2)取步骤(1)中所得样品溶液10μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，完成所述含二氯乙酸甲酯样品的分离检测。
[0024]
本发明第二方面提供第一方面所述的方法在以二氯乙酸甲酯为原料生产氯霉素中分析检测的应用。
[0025]
本发明提供的分析检测待测样品中二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法，可以依照以下方法实现：
[0026]
色谱条件：
[0027]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0028]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为85:15:0.1～90:10:0.1；
[0029]
色谱柱柱温：25～35℃；
[0030]
流动相流速：0.7～0.9ml/min；
[0031]
检测波长：190～240nm；
[0032]
进样量：10μl；
[0033]
等度洗脱运行时间：15min。
[0034]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0035]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0036]
本发明的发明人创造性的发现，采用本发明提供的分析检测待测样品中二氯乙酸甲酯及其有关物质的方法，将二氯乙酸甲酯及其有关物质进行有效分离，从而精确检测分析二氯乙酸甲酯的纯度，进而实现氯霉素原料药及其制剂的质量控制。
[0037]
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
[0038]
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0039]
图1显示了根据本发明的实施例1，所得样品的高效液相色谱图；
[0040]
图2显示了根据本发明的实施例2，所得样品的高效液相色谱图；
[0041]
图3显示了根据本发明的实施例3，所得样品的高效液相色谱图；
[0042]
图4显示了根据本发明的实施例4，所得样品的高效液相色谱图；
[0043]
图5显示了根据本发明的实施例5，所得样品的高效液相色谱图；
[0044]
图6显示了根据本发明的实施例6，所得样品的高效液相色谱图；
[0045]
图7显示了根据本发明的实施例7，所得样品的高效液相色谱图；
[0046]
图8显示了根据本发明的实施例8，所得样品的高效液相色谱图；
[0047]
图9显示了根据本发明的实施例9，所得样品的高效液相色谱图；
[0048]
图10显示了根据本发明的实施例10，所得样品的高效液相色谱图；
[0049]
图11显示了根据本发明的对比例1，所得样品的高效液相色谱图；
[0050]
图12显示了根据本发明的对比例2，所得样品的高效液相色谱图；
[0051]
图13显示了根据本发明的对比例3，所得样品的高效液相色谱图；
[0052]
图14显示了对比例3中杂质a的定位色谱图。
具体实施方式
[0053]
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0054]
本发明实施例中的样品购自macklin(麦克林)，高效液相色谱仪：戴安：ultimate3000。
[0055]
实施例1
[0056]
1、色谱条件：
[0057]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0058]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0059]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0060]
色谱柱柱温：30℃；
[0061]
流动相流速：0.8ml/min；
[0062]
检测波长：203nm；
[0063]
进样量：10μl；
[0064]
等度洗脱运行时间：15min。
[0065]
2、实验步骤
[0066]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0067]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0068]
附图1中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.868min左右。
[0069]
实施例2
[0070]
1、色谱条件：
[0071]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0072]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0073]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为85:15:0.1；
[0074]
色谱柱柱温：30℃；
[0075]
流动相流速：0.8ml/min；
[0076]
检测波长：203nm；
[0077]
进样量：10μl；
[0078]
等度洗脱运行时间：15min。
[0079]
2、实验步骤
[0080]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0081]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0082]
附图2中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.662min左右。
[0083]
实施例3
[0084]
1、色谱条件：
[0085]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0086]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0087]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为90:10:0.1；
[0088]
色谱柱柱温：30℃；
[0089]
流动相流速：0.8ml/min；
[0090]
检测波长：203nm；
[0091]
进样量：10μl；
[0092]
等度洗脱运行时间：15min。
[0093]
2、实验步骤
[0094]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0095]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0096]
附图3中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在7.707min左右。
[0097]
实施例4
[0098]
1、色谱条件：
[0099]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0100]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0101]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0102]
色谱柱柱温：25℃；
[0103]
流动相流速：0.8ml/min；
[0104]
检测波长：203nm；
[0105]
进样量：10μl；
[0106]
等度洗脱运行时间：15min。
[0107]
2、实验步骤
[0108]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0109]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0110]
附图4中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在7.317min左右。
[0111]
实施例5
[0112]
1、色谱条件：
[0113]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0114]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0115]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0116]
色谱柱柱温：35℃；
[0117]
流动相流速：0.8ml/min；
[0118]
检测波长：203nm；
[0119]
进样量：10μl；
[0120]
等度洗脱运行时间：15min。
[0121]
2、实验步骤
[0122]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0123]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0124]
附图5中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号
峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.483min左右。
[0125]
实施例6
[0126]
1、色谱条件：
[0127]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0128]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0129]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0130]
色谱柱柱温：30℃；
[0131]
流动相流速：0.7ml/min；
[0132]
检测波长：203nm；
[0133]
进样量：10μl；
[0134]
等度洗脱运行时间：15min。
[0135]
2、实验步骤
[0136]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0137]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0138]
附图6中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在7.852min左右。
[0139]
实施例7
[0140]
1、色谱条件：
[0141]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0142]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0143]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0144]
色谱柱柱温：30℃；
[0145]
流动相流速：0.9ml/min；
[0146]
检测波长：203nm；
[0147]
进样量：10μl；
[0148]
等度洗脱运行时间：15min。
[0149]
2、实验步骤
[0150]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0151]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0152]
附图7中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.103min左右。
[0153]
实施例8
[0154]
1、色谱条件：
[0155]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0156]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0157]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0158]
色谱柱柱温：30℃；
[0159]
流动相流速：0.8ml/min；
[0160]
检测波长：190nm；
[0161]
进样量：10μl；
[0162]
等度洗脱运行时间：15min。
[0163]
2、实验步骤
[0164]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0165]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0166]
附图8中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.775min左右。
[0167]
实施例9
[0168]
1、色谱条件：
[0169]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0170]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0171]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0172]
色谱柱柱温：30℃；
[0173]
流动相流速：0.8ml/min；
[0174]
检测波长：210nm；
[0175]
进样量：10μl；
[0176]
等度洗脱运行时间：15min。
[0177]
2、实验步骤
[0178]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0179]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0180]
附图9中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.767min左右。
[0181]
实施例10
[0182]
1、色谱条件：
[0183]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0184]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0185]
流动相：正己烷、异丙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0186]
色谱柱柱温：30℃；
[0187]
流动相流速：0.8ml/min；
[0188]
检测波长：240nm；
[0189]
进样量：10μl；
[0190]
等度洗脱运行时间：15min。
[0191]
2、实验步骤
[0192]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0193]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0194]
附图10中实验结果显示，1号峰为杂质c，2号峰为杂质a，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯主峰可以与杂质分离良好，各色谱峰之间分离度能够达到要求(分离度≥1.5)，且二氯乙酸甲酯主峰在6.800min左右。
[0195]
对比例1
[0196]
与实施例1的区别仅在于将色谱柱chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)替换为chiralpak ad-h(250mm
×
4.6mm，5μm)，其他条件不变，获得色谱图11。
[0197]
图11中1号峰为杂质c，2号峰为二氯乙酸甲酯，3号峰为杂质a，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下二氯乙酸甲酯与杂质a分离不开，分离度达不到1.5。
[0198]
对比例2
[0199]
1、色谱条件：
[0200]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0201]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0202]
流动相：正己烷、乙醇的体积比为65:35，其中乙醇溶液中含0.1％三氟乙酸；
[0203]
色谱柱柱温：30℃；
[0204]
流动相流速：0.8ml/min；
[0205]
检测波长：203nm；
[0206]
进样量：10μl；
[0207]
等度洗脱运行时间：15min。
[0208]
2、实验步骤
[0209]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0210]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0211]
图12中1号峰为杂质a，2号峰为杂质c，3号峰为二氯乙酸甲酯，4号峰为杂质b。可以看出在该条件下杂质a与样品中未知杂质分离不开，分离度r＜1.5。
[0212]
对比例3
[0213]
1、色谱条件：
[0214]
色谱柱：chiralcel oj-h(250mm
×
4.6mm，5μm)；
[0215]
固定相：纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]；
[0216]
流动相：正己烷、乙醇与三氟乙酸的体积比为87:13:0.1；
[0217]
色谱柱柱温：30℃；
[0218]
流动相流速：0.8ml/min；
[0219]
检测波长：203nm；
[0220]
进样量：10μl；
[0221]
等度洗脱运行时间：15min。
[0222]
2、实验步骤
[0223]
1)取含二氯乙酸甲酯的样品，用上述流动相溶解样品，配制成浓度为12mg/ml的样品溶液；
[0224]
2)取10μl步骤1)中样品溶液，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
[0225]
图13中1号峰为杂质c，2号主峰的出峰时间为6.525min，3号峰为杂质b。由于未发现杂质a的峰，于是进行杂质a的定位，获得附图14杂质a的定位图谱(以外购的杂质a，即二氯乙酸对照品进行与上述条件相同的hplc，获得定位图谱)，显示出峰时间为6.59min。所以在改变了流动相的条件下，杂质a和二氯乙酸甲酯的出峰时间重叠，无法将二者进行分离。
[0226]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0227]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。