一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用的制作方法

技术特征：
1.一种细菌，该细菌为贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2；保藏地点：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所；保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号为cgmcc no.6662。2.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草镰刀菌根腐病菌(fusarium oxysporum)中的应用。3.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草黑胫病菌(phylophthora nicotianae)中的应用。4.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草灰霉病菌(botrytis cinerea)中的应用。5.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草菌核病菌(sclerotinia sclerotiorum)中的应用。6.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草靶斑病菌(thanatephorus cucumeris)中的应用。7.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草霉变病菌(rhizopus oryzae)中的应用。8.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2在用于抑制烟草赤星病菌(alternaria alternata)中的应用。9.权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2的获取方法，包括分离、筛选及纯化工序，具体包括：a、分离：取经检验表面灭菌彻底的烟株组织0.4～0.6g，与灭菌钢珠一并放入2ml灭菌离心管中，加入400～700μl无菌水，用组织研磨器研磨2～4min，频率为20～40r/s。梯度稀释研磨后的组织液至10-4
，每梯度各取100～300μl匀浆液涂分离培养基，每处理重复4次。25～30℃黑暗培养36～72h后根据菌落形态、颜色等不同挑取单菌落，重新于分离培养基上划线纯化，挑取划线培养的单菌落移入分离培养基试管斜面保存；培养条件为：25～30℃，时间14～30h；分离培养基成分以g/l计为：蛋白胨3.0～7.0，牛肉膏2～4.0，氯化钠6.0～10.0，琼脂15～18，ph 6.8～7.5；b、筛选：采用平板对峙法，用直径0.5～0.8cm的打孔器将烟草根腐病菌尖孢镰刀菌菌丝块贴接于筛选培养基平皿中心，两侧对称划线接种内生细菌，以只接烟草根腐病菌尖孢镰刀菌菌丝的处理为对照；恒温培养，待对照长满全皿时，检查对峙培养结果，记录抑菌带的宽度，根据两菌菌落发展速度、菌落之间有无抑制带、菌落边缘的菌丝是否发生稀疏和萎缩的现象等来判断分离的内生细菌对病原菌有无拮抗作用，每个处理3次重复；培养条件为：26～30℃，时间16～32h；筛选培养基成分以g/l计为：马铃薯180～220，葡萄糖18～25，琼脂15～18，加蒸馏水至1000ml，ph 6.8～7.4；c、纯化：将筛选出的菌株用纯化培养基平板进行划线纯化，获得长势旺盛的单菌落，即贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2；培养条件为：25～30℃，时间14～30h；纯化培养基成分以g/l计为：蛋白胨8.0～12.0、牛肉浸膏2.0～4.0、氯化钠4.0～6.0、
琼脂15.0～19.0，ph 7.0～7.5。10.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2的应用方法，包括发酵和接种工序，具体包括：a、发酵：首先将贝莱斯芽孢杆菌(bacillus velezensis)wy2接种到斜面培养基上，得到发酵种子；培养条件为：25～30℃，时间48～72h；斜面培养基成分以g/l计为：蛋白胨8.0～12.0、牛肉浸膏2.0～4.0、氯化钠4.0～6.0、琼脂15.0～19.0，ph 7.0～7.5；然后将发酵种子接种到种子培养液中，接种量为3～5v/v％，摇瓶装液量为25～35v/v％，得到发酵菌剂；培养条件为：25～30℃，时间48～72h；种子培养液成分以g/l计为：胰蛋白胨8.0～12.0、酵母浸膏4.0～6.0、氯化钠4.0～6.0，ph 7.0～7.5；b、接种：在烟苗移栽后10～14d后，将发酵菌剂稀释1～4倍，按照每株烟50～200ml灌至烟叶根茎处。

技术总结
本发明涉及一种细菌，该细菌为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)WY2；保藏地点：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo.6662。本发明的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)WY2能实现对烟草根腐病的有效控制，相对防效在以上60％；还对黑胫病菌、灰霉病菌、菌核病菌、靶斑病菌、霉变病菌、赤星病菌等具有很好的抑菌作用。本发明的防治效果好，具有较高的推广应用价值。具有较高的推广应用价值。具有较高的推广应用价值。


技术研发人员：盖晓彤 卢灿华 姜宁 夏振远 马俊红 莫笑晗 户艳霞 王继明 何元胜 代快
受保护的技术使用者：云南省烟草农业科学研究院
技术研发日：2021.11.09
技术公布日：2022/1/25