一种慢性牙周炎动物模型构建方法与流程

1.本发明属于动物模型制作技术领域，具体涉及一种慢性牙周炎动物模型构建方法。


背景技术：

2.牙周病是口腔常见疾病，其中牙周炎是引起矢牙的主要原因，另外牙龈是雌激素作用的靶器官之一，如果孕妇在孕前就有牙周炎，那么孕期由于激素水平的上升，会加重其炎症反应；牙周炎复杂的致病因子、发病机制及某些防治措施等常无法直接在人体上进行研究；因此，动物实验成了研究牙周病的基本实验方法之一，建立稳定、可靠的牙周病动物模型，可以为牙周病的研究，牙周病治疗方法的研究，牙周病治疗药物的研究提供可信的研究工具；
3.小鼠除切牙牙根持续生长外，其牙周组织如牙龈、牙槽骨、牙周膜的解剖结构及相互关系与人类相似；其口腔菌斑的形成及其生长发育、滋生、繁殖等都与人类相似；
4.目前小鼠牙周炎模型的建立方法主要有高糖喂养法、注射激素法、应激刺激法等，但是这些方法大多受外部干扰因素多、操作复杂、成功率低、花费多等缺点。


技术实现要素：

5.为了解决上述技术问题，本发明提供了一种利用改良的丝线结扎法构建小鼠牙周炎模型，提供改良的丝线结扎法制作牙周炎小鼠模型，相较于高糖喂养法，无需接种特定的特异菌，无需特定的控制口腔环境，而牙周细菌大多厌氧，制作过程中很难使小鼠口腔形成厌氧环境；相较于激素注射法，制作成本较少，且受到干扰因素影响的情况少；
6.为了达到上述技术效果，本发明是通过以下技术方案实现的，一种慢性牙周炎动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
7.s1：选取4-5周龄，体重18-20克的雄性小鼠，适应性喂养一周，自由饮水，进食；
8.s2：对小鼠双侧上颌第一磨牙行排龈处理；
9.s3：4-0不可吸收丝线环上颌第一磨牙一周后，在腭侧结扎固定并置于龈下；
10.s4：聚羧酸锌水门汀封固以确保研究期内丝线不脱落；
11.优选的，所述s1中选取的小鼠为及免疫缺陷小鼠；
12.优选的，所述排龈处理采用排龈膏，清洁干燥牙体制备区后，慢慢注射排龈膏至龈沟内，注射器尖端与牙齿颈部贴合，并与牙龈边缘形成一个封闭空间，针管长轴渐渐平行与牙体长轴，绕龈沟注射一周。
13.本发明的有益效果是：
14.本发明提供的一种利用改良的丝线结扎法构建牙周炎小鼠模型，直接在第一磨牙上进行丝线缠绕结扎后固封，一次成型，操作简单，牙周炎形成周期短；相较于高糖喂养法，无需向小鼠口腔内引入牙周细菌，也无需刻意维持小鼠口腔内适宜牙周细菌生长的环境，且小鼠口腔内也很难形成厌氧环境可供牙周细菌生长；相较于激素注射法，干扰因素影响
较小，炎症发生十分明显，可以达到用于实验研究的目的；本发明使用免疫缺陷小鼠做动物模型，由于免疫缺陷小鼠的免疫细胞中不仅淋系细胞完全缺失，其髓系细胞(如巨噬细胞)功能也严重缺失，所以其模型制作成功率更高，其症状表现更贴合需求。
具体实施方式
15.为了更加清楚的反应本发明的技术方案及技术效果，下面通过具体实施例来进行详细说明。
16.实施例1
17.一种慢性牙周炎动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
18.s1：选取4-5周龄，体重18-20克的雄性小鼠，适应性喂养一周，自由饮水，进食；
19.s2：对小鼠双侧上颌第一磨牙行排龈处理；
20.s3：4-0不可吸收丝线环上颌第一磨牙一周后，在腭侧结扎固定并置于龈下；
21.s4：聚羧酸锌水门汀封固以确保研究期内丝线不脱落；
22.优选的，所述s1中选取的小鼠为及免疫缺陷小鼠；
23.优选的，所述排龈处理采用排龈膏，清洁干燥牙体制备区后，慢慢注射排龈膏至龈沟内，注射器尖端与牙齿颈部贴合，并与牙龈边缘形成一个封闭空间，针管长轴渐渐平行与牙体长轴，绕龈沟注射一周。
24.实施例2
25.下面通过对照动物实验来说明本发明方法及效果；
26.实验分组：改良丝线结扎组、高糖喂养组、激素注射组、空白对照组；每组设4-5周龄，体重18-20克的雄性小鼠各20只；
27.实验方法：改良丝线结扎组牙周炎小鼠模型按照本发明提供的方法进行制作；
28.高糖喂养组：由果糖56％，脱质奶粉28％，面粉6％，酵母4％，苜蓿粉3％，动物肝粉1％，食盐2％组成的配方喂养小鼠，一天喂食两次，早晚各一次，持续10天；
29.激素注射组：按照5ml/kg的剂量注射醋酸泼尼松龙，每日2次，持续7日，之后每日3次，持续2日；
30.实验结果：每日观察记录小鼠口腔牙龈组织有无探诊出血、牙周袋有无形成；
31.空白对照组：均未发现牙龈红肿及探诊出血；未探及牙周袋；x线片示牙槽嵴顶未见吸收；
32.高糖喂养组：有不同程度的红肿及探诊出血；有牙周袋形成；x线片示第一二磨牙间牙槽嵴顶低平；
33.激素注射组：牙龈红肿及探诊出血不明显；未探及明显牙周袋；x线片未见明显牙槽嵴顶吸收；
34.改良丝线结扎组：牙周炎体征明显,牙龈明显红肿；探诊易出血；x线片示牙槽嵴顶有不同程度吸收；探及深牙周袋。
35.在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合
适的方式结合。
36.以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。


技术特征：
1.一种慢性牙周炎动物模型构建方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：选取4-5周龄，体重18-20克的雄性小鼠，适应性喂养一周，自由引水，进食；s2：对小鼠双侧上颌第一磨牙行排龈处理；s3：4-0不可吸收丝线环上颌第一磨牙一周后，在腭侧结扎固定并置于龈下；s4：聚羧酸锌水门汀封固以确保研究期内丝线不脱落。2.根据权利要求1所述一种慢性牙周炎动物模型构建方法，其特征在于，所述s1中选取的小鼠为scid及nod-scid免疫缺陷小鼠。3.根据权利要求1所述一种慢性牙周炎动物模型构建方法，其特征在于，所述排龈处理采用排龈膏，清洁干燥牙体制备区后，慢慢注射排龈膏至龈沟内，注射器尖端与牙齿颈部贴合，并与牙龈边缘形成一个封闭空间，针管长轴渐渐平行与牙体长轴，绕龈沟注射一周。4.根据权利要求1-3任意一项所述一种慢性牙周炎动物模型构建方法，公开了其在牙周炎动物模型构建领域的应用。

技术总结
本发明公开了一种慢性牙周炎动物模型构建方法，利用改良的丝线结扎方法对小鼠的第一磨牙造成牙周炎症反应，相较于高糖喂养法，无需接种特定的特异菌，无需特定的控制口腔环境，而牙周细菌大多厌氧，制作过程中很难使小鼠口腔形成厌氧环境；相较于激素注射法，制作成本较少，且受到干扰因素影响的情况少。且受到干扰因素影响的情况少。


技术研发人员：郑旭 郭竹玲 殷忠平 符方满 李光武 司熙 郑程峰 肖旭 谢琛 陈向琼 周美燕 孙小春 梅杰 郭湘 石挺珍 刘泽鑫 吴欣桐 陈梅讯 李进
受保护的技术使用者：海南医学院第一附属医院
技术研发日：2021.10.18
技术公布日：2022/1/21