猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂及制备方法与流程

1.本发明涉及荧光检测技术领域，具体为猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂及制备方法。


背景技术：

2.促甲状腺激素是腺垂体分泌的促进甲状腺的生长和机能的激素，具有促进甲状腺滤泡上皮细胞增生、甲状腺激素合成和释放的作用，促甲状腺激素的含量有如下临床意义，促甲状腺激素增高：原发性甲状腺功能减退、伴有甲状腺功能低下的桥本病；促甲状腺激素减低：垂体性甲状腺功能低下、非促甲状腺激素瘤所致的甲状腺功能亢进。
3.为了检验猫等宠物的身体状况，经常会对其进行促甲状腺激素检验，但是目前的一些检验技术还存有不足之处，例如，血浆在体外极易受到环境的影响，如果血浆稀释液的配置不合格，则会导致血浆过早凝固，以及血浆内的待检验物发生变性等情况，影响了后续的检验操作，此外检验试剂卡的配置不成功，也会影响抗原的荧光着标率，进而影响检验精度，同时试剂卡保存不当也提高了使用成本。


技术实现要素：

4.(一)解决的技术问题
5.针对现有技术的不足，本发明提供了猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂及制备方法，解决了稀释液配置不当不能维持样本活性以及检验试剂卡配置不当影响抗原荧光着标率的问题。
6.(二)技术方案
7.为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂，包括稀释猫血浆用样本稀释液和搭载待检测物用ftsh检测试剂卡，所述样本稀释液由以下重量份数的物质组成：4％缓冲剂、0.01％抗凝血酶、0.01％叠氮化钠、3％bsa、0.1％维生素c、15％葡萄糖、余下为蒸馏水。
8.优选的，所述ftsh检测试剂卡包括样品垫、结合垫、nc膜和吸水垫，所述样品垫设置在ftsh检测试剂卡的pvc胶板位于加样孔处，所述样品垫的一端下侧搭接在结合垫的一端上侧，所述结合垫的另一端下侧搭接nc膜的一端上侧，所述nc膜的另一端上侧搭接吸水垫的一端下侧。
9.优选的，猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
10.s1、利用第一抗体通过划膜仪在nc膜上靠近结合垫的一侧划线，该线即为t线；
11.s2、利用第二抗体通过划膜仪在nc膜上靠近吸水垫的一侧划线，该线即为c线；
12.s3、利用2％bsa、4％蔗糖、0.5％tritonx-100以及磷酸缓冲盐溶液配置处理液，并将玻璃纤维膜浸泡于上述处理液中10h，之后利用烘干机以40℃条件对浸泡后的玻璃纤维膜进行7h烘干，从而得到结合垫；
13.s4、利用聚氧乙烯蓖麻油、海藻糖、蔗糖以及磷酸根浓度为130mmol/l、ph值为7的
磷酸缓冲液配置封闭用处理剂，其中聚氧乙烯蓖麻油质量浓度百分比为0.3％、海藻糖5％、蔗糖25％；
14.s5、将活化后的荧光微球与待标记抗体溶液充分混合，并在37℃的条件下反应1.5h，之后添加上述封闭用处理剂充分混匀，进而抗体和荧光微球偶联即可得到所需的荧光标记抗体，之后离心分离制得稀释液；
15.s6、利用喷涂设备将制得的稀释液喷涂至处理后的结合垫上，之后利用烘干机以40℃条件对上述结合垫进行3h烘干，进而即可得到可用的检测试剂卡。
16.优选的，在制备完成后，所述ftsh检测试剂卡通过真空密封方式由铝箔袋密封，所述样本稀释液通过密封试管密封。
17.(三)有益效果
18.本发明提供了猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂及制备方法。具备以下有益效果：
19.本发明通过缓冲剂、抗凝血酶、叠氮化钠、bsa等物质配置样本稀释液，可以在猫血浆稀释时维持所需待检验物质的活性，其中缓冲剂可以起到保护溶液ph值的能力，避免所含的蛋白质等变质，抗凝血酶延长血液的凝固时间，方便检验，叠氮化钠作为防腐剂用，可以避免血液在体外腐坏，bsa可以维持血液中物质的活性，进一步提高后续检验的精度，将活化后的荧光微球与待标记抗体溶液充分混合后喷涂在处理后的结合垫上，便于提高后续的抗原荧光着标率，利用荧光检测仪，检测层析完成后的试剂条，根据荧光的强度即可得出样本溶液中抗原的浓度，使用便捷、检验精准，同时ftsh检测试剂卡由铝箔袋真空密封，样本稀释液通过密封试管密封，完善的密封措施，便于延长本检验试剂的使用寿命，提高后续使用的检验精度。
具体实施方式
20.下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
21.实施例：
22.本发明实施例提供猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂及制备方法，包括稀释猫血浆用样本稀释液和搭载待检测物用ftsh检测试剂卡，样本稀释液由以下重量份数的物质组成：4％缓冲剂、0.01％抗凝血酶、0.01％叠氮化钠、3％bsa、0.1％维生素c、15％葡萄糖、余下为蒸馏水，缓冲剂可以起到保护溶液ph值的能力，避免所含的蛋白质等变质，抗凝血酶延长血液的凝固时间，方便检验，叠氮化钠作为防腐剂，可以避免血液在体外腐坏，bsa可以维持血液中物质的活性，提高检验精度。
23.ftsh检测试剂卡包括样品垫、结合垫、nc膜和吸水垫，样品垫设置在ftsh检测试剂卡的pvc胶板位于加样孔处，样品垫的一端下侧搭接在结合垫的一端上侧，结合垫的另一端下侧搭接nc膜的一端上侧，nc膜的另一端上侧搭接吸水垫的一端下侧。
24.猫促甲状腺激素荧光定量检测试剂的制备方法，包括以下步骤：
25.s1、利用第一抗体通过划膜仪在nc膜上靠近结合垫的一侧划线，该线即为t线；
26.s2、利用第二抗体通过划膜仪在nc膜上靠近吸水垫的一侧划线，该线即为c线，其中第二抗体为能够与第一抗体特异性结合的抗体；
27.s3、利用2％bsa、4％蔗糖、0.5％tritonx-100以及磷酸缓冲盐溶液配置处理液，并将玻璃纤维膜浸泡于上述处理液中10h，之后利用烘干机以40℃条件对浸泡后的玻璃纤维膜进行7h烘干，从而得到结合垫；
28.s4、利用聚氧乙烯蓖麻油、海藻糖、蔗糖以及磷酸根浓度为130mmol/l、ph值为7的磷酸缓冲液配置封闭用处理剂，其中聚氧乙烯蓖麻油质量浓度百分比为0.3％、海藻糖5％、蔗糖25％；
29.s5、将活化后的荧光微球与待标记抗体溶液充分混合，并在37℃的条件下反应1.5h，之后添加上述封闭用处理剂充分混匀，进而抗体和荧光微球偶联即可得到所需的荧光标记抗体，之后离心分离制得稀释液；
30.s6、利用喷涂设备将制得的稀释液喷涂至处理后的结合垫上，之后利用烘干机以40℃条件对上述结合垫进行3h烘干，进而即可得到可用的检测试剂卡。
31.在制备完成后，ftsh检测试剂卡通过真空密封方式由铝箔袋密封，样本稀释液通过密封试管密封，密封保存，便于延长本检验试剂的使用寿命，提高后续使用的检验精度。
32.检测方法：
33.本试剂采用双抗体夹心法检测猫类血浆中的ftsh(抗原)浓度，室温将采集的edta抗凝血3000rpm离心5min，用移液器取50μl上层血浆，加入到样本稀释液中，反复颠倒数次混匀，用移液器取80μl上述稀释样本，逐滴加入于试剂卡的加样孔中，抗原会随着样本稀释液扩散到结合垫上，并与荧光标记的抗体相结合，形成复合物，该复合物会继续随着溶液扩散到nc膜的t线上，进而被固定在t线上的包被抗体所捕获，结合形成双抗体-抗原复合物，t线上捕获的抗原越多，t线的荧光信号就越强，而没有被捕获的荧光微球复合物将继续沿着nc膜扩散到c线，进而被包被在c线上的抗体所捕获，形成c线，加样完成后将试剂卡插入到仪器卡槽内即可，仪器孵化10分钟后，利用xq-1000荧光检测仪，检测层析完成后的试剂条，根据荧光的强度即可得出样本溶液中抗原的浓度。
34.检测结果临床意义比对表：
35.检测项目正常轻度甲减中度甲减重度甲减ftsh(ng/ml)(0,2](2,10](10,50]》50
36.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。