保持健康体重或减轻体重的非治疗性方法与流程

1.本文披露的发明涉及用于在消瘦型受试者中保持健康体重或减轻体重的非治疗性方法。本发明进一步涉及用于增加受试者的远端结肠中短链脂肪酸(scfa)的浓度的非治疗性方法。本发明还涉及用于在受试者中预防超重或预防与超重相关的病症的2
’‑
岩藻糖基乳糖和抗性淀粉(rs)，并且涉及包含2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)和rs的组合物、这种组合物的用途。


背景技术：

2.对于健康受试者，出于美学原因和/或为了保持健康体重和/或减轻体重，控制体重通常被认为是重要的。
3.肠道微生物群越来越被认为是脂肪分布、胰岛素敏感性、葡萄糖代谢和脂质代谢的重要因素。因此，肠道微生物群能在控制体重方面发挥重要作用。人微生物群的一个重要功能是膳食纤维(如不易消化的碳水化合物)的发酵。该发酵过程的主要产物是短链脂肪酸(scfa)，例如乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐。
4.人们认识到增加结肠和系统中最丰富的sfca，特别是增加乙酸盐水平，可以在啮齿动物中防止饮食引起的体重增加、抵消肥胖(adiposity)、改善葡萄糖稳态和/或胰岛素敏感性。
5.此外，一项向超重男性的近端或远端结肠施用乙酸钠的研究表明，当向结肠的远端部分施用乙酸钠时，脂肪氧化和饱腹感激素肽yy(pyy)的循环血浆浓度显著增加。相反，当向近端结肠施用乙酸盐时，没有对能量消耗或底物氧化产生影响(van der beek,c.m.等人,clinical science[临床科学]2016,130(22),2073
‑
2082)。在另一项研究中，向远端结肠输注scfa的混合物(其中乙酸盐含量最高)，男性的能量消耗、脂肪氧化和血浆pyy增加(canfora ee等人,sci rep.[科学报告]2017,7:2360)。
[0006]
bindels等人证实了这一点，他表明，远端(而非近端)结肠乙酸盐输注导致代谢标志物变化，即空腹脂肪氧化、空腹pyy水平、餐后葡萄糖和胰岛素水平增加，以及空腹乙酸盐水平具有增加的趋势。几个因素可以解释输注部位的影响。近端结肠和远端结肠在微生物组成、gpr43表达谱和排出系统方面不同，因为远端结肠通过全身循环排出，并且(与近端部分不同)避免了肝脏的首过效应(bindels等人clin sci(lond)[临床科学(伦敦)](2016)130(22):2083
‑
2086https://doi.org/10.1042/cs20160556)。
[0007]
因此，在远端结肠中以足够浓度施用或产生的scfa与控制受试者体重的有益作用相关。
[0008]
us 2016/0310514a1涉及用于治疗代谢障碍(如肥胖症以及肥胖症引起的前驱糖尿病和2型糖尿病)的组合物和方法，其中该组合物包含一种或多种人乳寡糖。它旨在治疗肥胖症患者；不消瘦、健康的受试者。
[0009]
预期提供非治疗性方法以增加受试者的远端结肠中scfa的浓度。
[0010]
此外，预期为受试者提供保持健康体重或减轻体重的非治疗性方法。例如，预期的
非治疗性方法可以包括施用化合物、化合物的组合和/或增加受试者的远端结肠中scfa的浓度的组合物的步骤。
[0011]
另外，预期提供与正常和/或健康饮食相容的非治疗性方法。优选对(食物的)味道和/或口感没有负面影响。合适的非治疗性方法的其他预期特性或效果可以包括但不限于保持受试者总体健康的其他体征(例如，保持正常血压、保持健康肠运动、正常排便等)、易于制备、易于实施、增加微生物群的多样性以及其中使用的化合物、组合和/或组合物的商业可获得性。
[0012]
本发明的目的是提供能够更好地解决至少一个上述预期的非治疗性方法。


技术实现要素：

[0013]
一方面，本发明涉及用于在受试者中保持健康体重或减轻体重的非治疗性方法，其特征在于该非治疗性方法包括向该受试者施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)和抗性淀粉rs的步骤；其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人；并且其中该方法不包括向该受试者施用母乳的步骤。
[0014]
另一方面，本发明涉及用于增加受试者的远端结肠中短链脂肪酸(scfa)、优选乙酸盐的浓度，用于预防饮食引起的体重增加或肥胖，或用于改善葡萄糖稳态和/或胰岛素敏感性的非治疗性方法，其中该非治疗性方法包括向该受试者施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)的步骤，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人；并且其中该方法不包括向该受试者施用母乳的步骤。
[0015]
又一方面，本发明涉及组合物，该组合物包含(i)2
’‑
fl和(ii)抗性淀粉，用于在受试者中预防超重或与超重相关的病症，并且其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人。
[0016]
还一方面，本发明涉及2
’‑
fl和rs用于在受试者中保持健康体重或减轻体重的用途，并且其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人。
[0017]
再一方面，本发明涉及包含2
’‑
fl和抗性淀粉的组合物用于在受试者中保持健康体重或减轻体重的用途，并且其中该受试者是哺乳动物并且具有瘦体重，优选其中该受试者是人。
具体实施方式
[0018]
关于给定疾病或障碍的术语“治疗”包括但不限于抑制疾病或障碍，例如阻止疾病或障碍发展；缓解疾病或障碍，例如引起疾病或障碍消退；或缓解由疾病或障碍引起或由其导致的病状，例如缓解、预防或治疗疾病或障碍的症状。
[0019]
关于给定疾病或障碍的术语“预防”意指预防出现疾病发展(如果尚未发病)、预防疾病或障碍在可能易患该疾病或障碍但尚未确诊患有该疾病或障碍的受试者中发生、和/或预防疾病/障碍进一步发展(如果已患病)。
[0020]
广义上，本发明是基于合理的理解，即向bmi小于25kg/m2的人施用2
’‑
岩藻糖基乳糖及rs可用于实现一项或多项上述预期。特别地，它增加了受试者远端结肠中短链脂肪酸、特别是乙酸盐的量。rs和2’fl的组合可产生更高水平的乙酸盐和短链脂肪酸。为了仅使用2’fl获得这种效果，将需要更多的2’fl，这使得此类治疗的成本较高。
[0021]
据信与本领域已知的其他纤维相比，本发明中的2
’‑
岩藻糖基乳糖可提供更好结果。
[0022]
已知受试者(即使是同一物种的受试者)的肠道微生物群也可能有很大差异，因此具有健康体重的受试者的肠道微生物群不一定表现出与(相同物种的)肥胖受试者相同的特征。换句话说，向肥胖患者施用治疗剂的效果不一定能预测对具有健康体重的受试者的效果。
[0023]
在第一方面，本发明涉及用于在受试者中保持健康体重或减轻体重的非治疗性方法，其特征在于该非治疗性方法包括向该受试者施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)和抗性淀粉(rs)的步骤；其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人；其中该方法不包括向该受试者施用母乳的步骤。
[0024]
另一方面，本发明涉及用于增加受试者的远端结肠中一种或多种短链脂肪酸(scfa)、优选乙酸盐的浓度的非治疗性方法，其中该非治疗性方法包括向该受试者施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)和rs的步骤，其中所述受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人；并且其中该方法不包括向该受试者施用母乳的步骤。
[0025]
如本文所使用的，母乳是指与待施用2
’‑
fl和rs的受试者相同物种的乳；母乳不是指富含2
’‑
fl和rs的相同物种的乳。
[0026]
可以理解的是，为了获得预期效果，需要施用足够的2
’‑
fl。因此，在一个实施例中，本发明的非治疗性方法包括向受试者施用有效量的2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)的步骤。有效量取决于物种的类型。在一个实施例中，待施用的2
’‑
fl的量为每天至少10mg的2
’‑
fl，优选每天至少100mg，例如至少1g，更优选至少2g，例如每天至少3g、4g、5g、6g、7g、8g、9g、10g、11g、12g、13g、14g、或甚至至少15g。
[0027]
如本文所使用的术语“受试者”是指可通过本发明的方法治疗的哺乳动物受试者(即哺乳动物)，特别是人。除非明确指明性别，否则术语“受试者”是指男性和女性。根据本发明，受试者优选是人受试者。人受试者可以是任何年龄，例如，人受试者可以是婴儿、少年、青少年、成人或老年受试者。在本发明的一个实施例中，受试者是健康受试者，在另一实施例中，受试者不肥胖。在另外优选的实施例中，受试者是非肥胖的人受试者。
[0028]
在本发明的实施例中，人受试者至少为18岁，例如至少为25岁、或至少为30岁、或甚至至少为35岁。在另一实施例中，人受试者为至少55岁，例如至少60岁或至少65岁。尽管在实践中没有具体上限，根据本发明治疗的人受试者通常将最大为100岁，例如年龄最大为95岁或最大为90岁。在一个实施例中，人受试者在18岁至65岁之间，例如，在20岁至60岁之间或在25岁至50岁之间。
[0029]
血糖水平指示糖尿病。在一个实施例中，人受试者在空腹时的血糖水平低于6.1mmol/l、低于6.0mmol/l、低于5.9mmol/l、低于5.8mmol/l、低于5.7mmol/l、低于5.6mmol/l或低于5.5mmol/l。
[0030]
75g摄入量的2小时葡萄糖耐量试验(gtt)指示高血糖。在一个实施例中，如通过75
‑
g口服葡萄糖耐量试验确定的，受试者的2小时血糖水平低于7.8mmol/l、低于7.6mmol/l、低于7.5mmol/l、低于7.4mmol/l、低于7.3mmol/l、低于7.2mmol/l、低于7.1mmol/l或低于7.0mmol/l。应当理解的是，2小时血糖水平与葡萄糖摄入后两小时的血糖水平有关。
[0031]
可以通过不同的方式评估受试者是否具有健康体重，这取决于物种类型。对于人，
通常通过确定受试者的体重指数(bmi)进行评估，体重指数定义为体重(以千克计)除以身高(以米计)的平方。在式中，人受试者的bmi定义为：
[0032][0033]
对于18岁及以上的人，bmi小于18.5kg/m2被认为是体重过轻；对于18岁及以上的人，bmi在至少18.5kg/m2至小于25kg/m2的范围内被认为是健康体重；对于18岁及以上的人，bmi在至少25kg/m2至小于30kg/m2的范围内被认为超重；对于18岁及以上的人，bmi至少为30kg/m2被认为肥胖。
[0034]
本发明中年龄在18岁及以上的人受试者的体重指数(bmi)小于25kg/m2。这种受试者在本文也被称为“消瘦型受试者(lean subject)”或“具有瘦体重的人”。在优选的实施例中，本发明中的人受试者(18岁及以上)的bmi在至少18.5kg/m2至小于25kg/m2的范围内，即所述受试者被认为具有健康体重。
[0035]
对于2岁至18岁的人(儿童和青少年)，使用公式1获得的bmi值需要进行调整，因为男孩和女孩的生长速度不同，并且在不同年龄的体脂量也不同。因此，在儿童期和青春期的bmi测量中要考虑年龄和性别。对于2岁至18岁的儿童和青少年，健康体重被定义为根据表1中列出值的bmi值。
[0036]
表1人受试者的健康体重bmi值的定义[kg/m2]
[0037]
[0038][0039]
具有“瘦体重(lean body weight或lean weight)”的儿童或青少年被定义为具有对应于“如表1中针对性别和年龄定义的健康体重或较低bmi值”的bmi值的儿童或青少年。
[0040]
如本文所使用的，对于非人受试者的“瘦体重”被定义为受试者具有健康体重或具有低于健康体重的重量。对于不同物种，健康体重的定义有所不同，并且各物种的典型值在本领域是熟知的。“瘦体重”意指受试者不肥胖。
[0041]
通常，出于非医学原因，例如出于美容目的，实施本发明的非治疗性方法。因此，在本发明的实施例中，非治疗性方法用于在如本文定义的受试者中控制体重、减轻体重、减少体重、防止体重增加、限制体重增加、引起体重减轻、增加体重减轻、管理体重和/或保持健康体重。
[0042]
在本发明的具体实施例中，该非治疗性方法是在预定的时间间隔内减轻体重(例如，在12个月内、6个月内、4个月内、3个月内、2个月内、1个月内、4周内、3周内、2周内或1周内减轻体重)的方法。
[0043]
如本文所使用的，受试者的远端结肠中短链脂肪酸(scfa)的浓度增加是指乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐的总水平增加。这些水平可以使用如本领域已知的并且如本文其他处(例如，参见实例)所述的tim
‑
2模型系统进行确定。scfa增加定义为如通过使用tim
‑
2模型测量实验的最近16个小时产生的scfa总量(代表远端结肠产生的量)确定的，scfa与参考饮食相比增加至少10％、优选至少20％、更优选至少40％、甚至更优选至少50％。
[0044]
如本文所使用的，人的“远端结肠”是指降结肠(结肠的左侧)和乙状结肠(与直肠相连的s形结肠部分)，或其他哺乳动物结肠的相应部分。
[0045]
本发明的方法可以同时获得在体重和scfa水平上的上述效果。因此，在一个实施例中，本发明涉及非治疗性方法，该非治疗性方法用于：i)在受试者中保持健康体重或减轻
体重，和ii)增加受试者的远端结肠中scfa、优选乙酸盐的浓度；其特征在于该非治疗性方法包括向该受试者施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)和rs的步骤；其中该方法不包括向该受试者施用母乳的步骤；其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人，其中该受试者是具有瘦体重的人。
[0046]
如本文所使用的，一种“短链脂肪酸(short chain fatty acids)”(scfa)和多种“短链脂肪酸(short chain fatty acids)”(scfa)可以互换使用，是指乙酸盐、丙酸盐和丁酸盐。
[0047]
在另一实施例中，被施用2
’‑
fl和rs的受试者是2岁或以上的人，且其体重指数(bmi)等于或小于表1中所示的针对该受试者年龄和性别的健康体重的上限值。
[0048]2’‑
fl和rs的施用优选为口服施用，因为这是正常进食方式。
[0049]
在另一实施例中，本发明的非治疗性方法包括施用2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)的步骤，并且包括施用抗性淀粉的步骤。在又一实施例中，本发明的非治疗性方法包括同时施用2
’‑
fl和抗性淀粉的步骤。在再一实施例中，本发明的非治疗性方法包括施用2
’‑
fl和抗性淀粉的步骤，其中该2
’‑
fl和抗性淀粉是顺序施用，即先施用2
’‑
fl、然后施用抗性淀粉，或先施用抗性淀粉、然后施用2
’‑
fl。
[0050]
在一个有利的实施例中，本发明的非治疗性方法包括施用2
’‑
岩藻糖基乳糖的步骤，其中2
’‑
岩藻糖基乳糖包含在组合物中，该组合物另外包含抗性淀粉。此类组合物可以包含另外组分，如维生素、气味调味剂和颜色调味剂。
[0051]
据信2
’‑
fl与抗性淀粉的组合改善了结肠远端部分的scfa释放。如本领域技术人员将理解的，本发明的益处还可以通过顺序或同时施用一方面2
’‑
fl、另一方面抗性淀粉(可能以两种单独的组合物的形式存在，每种组合物包含这些组分之一)来实现。此类方法、用途和治疗也在本发明的范围内。然而，设想到该组合作为产品中单一组合物的一部分具有特别优势。
[0052]
不希望受到理论的束缚，诸位发明人目前认为，结肠微生物群首先发酵抗性淀粉作为能量源。因此，据信(更多的)2
’‑
fl可以到达远端结肠，在远端结肠被其他肠道微生物发酵，从而在该区域产生scfa(特别是乙酸盐)，其中该乙酸盐可以局部发挥有益作用和/或可以进入体循环，因此导致其代谢作用。
[0053]2’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)是一种寡糖，更准确地说是一种岩藻糖基化的中性三糖，由l
‑
岩藻糖、d
‑
半乳糖和d
‑
葡萄糖单元组成，与fuc(α1
‑
2)gal(β1
‑
4)glc、cas nr 41263
‑
94
‑
9连接。它是人乳中天然存在的最普遍的人乳寡糖(hmo)，约占全部hmo的30％。hmo是不可消化的碳水化合物，并且是人乳中仅次于乳糖和脂肪的第三大组分。目前已在人乳中鉴定出200多种不同的寡糖。临床试验表明，2
’‑
fl在保护和促进新生婴儿的健康，特别是在免疫系统方面起着关键作用。研究表明，在婴儿配方制品中添加2
’‑
fl是安全且耐受性良好的。此外，对于所有其他年龄段的人(尤其是成年人)，2
’‑
fl是安全且耐受性良好的。
[0054]
可以使用本领域技术人员已知的方法获得hmo。例如，hmo可以从人乳中纯化获得。可以使用本领域已知的方法(如毛细管电泳、hplc(例如，配有脉冲安培检测的高性能阴离子交换色谱；hpaec
‑
pad)和薄层色谱)进一步分离单独的hmo。参见，例如，美国专利申请号2009/0098240。替代性地，可以使用酶促方法合成hmo。生产hmo的另一方法是通过工程细菌中的生物合成。例如，wo 2012/112777披露了制备2
’‑
fl的方法。替代性地，2
’‑
fl可商购获
得，例如，可商购自皇家菲仕兰公司(frieslandcampina)或其他公司。
[0055]2’‑
fl是一种膳食纤维。对于大多数人来说，每天可以摄入的膳食纤维量有最大量。如本发明中使用的组合物中2
’‑
fl的量还取决于受试者的体重(即重量)。因此，在一个实施例中，如本发明中使用的组合物中2
’‑
fl的量大于0.1克。在另一实施例中，该量在0.1至30克的范围内、优选在0.5至25克的范围内、更优选在1至20克的范围内、最优选在2至10克的范围内。
[0056]
lnnt可以被认为是膳食纤维。在一个实施例中，根据本发明使用的组合物不包含乳
‑
n
‑
新四糖(lnnt)。
[0057]
抗性淀粉可用于本发明中。淀粉是由多个α
‑
d
‑
葡萄糖分子通过(1
‑
4)和/或(1
‑
6)键连接而成的多糖。淀粉由以下两个主要结构组分组成：直链淀粉(基本上是线性聚合物，其中α
‑
d
‑
葡萄糖残基与
‑
(1
‑
4)连接，在大多数淀粉中通常占15％至20％)，和支链淀粉(它是α
‑
d
‑
葡萄糖单元之间具有(1
‑
4)和d
‑
(1
‑
6)键的支链分子，并且是大多数淀粉的主要组分)。淀粉在未预先暴露于分散剂的情况下，当与酶孵育时，可以根据其性能进行分类。根据该系统，淀粉可以分类为快速消化淀粉(rds)、缓慢消化淀粉(sds)和抗性淀粉(rs)。1982年，englyst等人首先使用了术语“抗性淀粉”，用于描述可在体外抵抗被α
‑
淀粉酶和支链淀粉酶耗尽处理水解的一小部分淀粉。rs是孵育1min后未水解的淀粉。然而，由于到达大肠的淀粉或多或少会被肠道菌群发酵，rs在本文中现在被定义为膳食淀粉的一部分，其在小肠中无法消化。化学测量为从均质和化学处理的样品中获得的总淀粉(ts)与通过酶消化从非均质食物样品中产生的rds和sds之和之间的差(rs＝ts
‑
(rds sds))。抗性淀粉通常进一步分类为rs1、rs2、rs3或rs4。
[0058]
rs1是指由于其被锁定在植物物质细胞壁内从而在物理上不能被利用的淀粉，并且因此可以称为抗性淀粉。rs1型抗性淀粉例如存在于部分碾磨的谷物、种子和豆类中。rs1在大多数正常的烹饪操作中具有热稳定性，并且可以用作多种常规食物的成分。
[0059]
rs2是指天然抗性淀粉，其是淀粉颗粒(如在香蕉(尤其是绿色香蕉)和生马铃薯中发现的淀粉颗粒)的组分。香蕉和生马铃薯具有相对较低的糊化温度，通常在约60℃至约80℃的数量级，这在食品的配制中通常存在实质性问题。导致颗粒对淀粉酶消化的抗性增加的颗粒内聚合物重排也包括在该类别中。该抗性增加可能是热处理和/或湿处理或者完整颗粒退火的结果。化学测量为由煮沸的均质食物样品的酶消化释放的葡萄糖与由未煮沸的非均质食物样品的酶消化释放的葡萄糖之间的差。在生淀粉颗粒中，淀粉以放射形紧密填充并且相对脱水。这种紧凑结构限制了消化酶、各种淀粉酶的可及性，并解释了rs2(如未糊化的淀粉)的抗性。在饮食中，生淀粉在香蕉等食物中消耗。rs1和rs2代表淀粉形式的残余物，它们在小肠中的消化极缓慢且不完全。
[0060]
rs3是指退化的非颗粒状淀粉或结晶性非颗粒状淀粉，如在经烹饪和冷却的马铃薯、面包皮和谷物(例如，玉米片)中存在的淀粉，以及经过大量加工(通过反复烹饪和冷却)的淀粉糊。化学测量为可抵抗被沸腾和酶消化两者分散的部分。它仅能被koh或二甲亚砜分散。rs3完全抵抗被胰淀粉酶消化。
[0061]
rs4是指经过化学修饰和/或再聚合(可能包括降低分子量)的特定淀粉，如醚、酯和交联淀粉，以及链键改变的糊精、焦糊精和麦芽糖糊精。
[0062]
在本发明中使用的抗性淀粉可以是任何抗性淀粉，如rs1、rs2、rs3或rs4抗性淀粉
中的任一种或者其两种或多种的任何组合。优选地，用于本发明的抗性淀粉选自rs2、rs3和rs4，更优选地选自rs2和rs3。最优选地，抗性淀粉是rs2。
[0063]
根据本发明，可以合适使用的抗性淀粉衍生自以下来源：如玉米、小麦、稻、豆类、豌豆、香蕉、大麦、黑小麦、高粱、蜀黍、木薯、燕麦、马铃薯、树薯、西米、甘薯(ocarina)等。在本发明的优选实施例中，抗性淀粉衍生自玉米、马铃薯或香蕉，更优选衍生自玉米或马铃薯。在本发明的实施例中，抗性淀粉选自包含以下的组：抗性糯玉米淀粉、抗性常规或普通玉米淀粉、抗性小麦淀粉、抗性大米淀粉、抗性豆类、豌豆或干豆淀粉、抗性大麦淀粉、抗性黑小麦淀粉、抗性高粱淀粉、抗性蜀黍淀粉、抗性木薯淀粉、抗性香蕉淀粉、抗性燕麦淀粉、抗性马铃薯淀粉、抗性树薯淀粉、和抗性西米淀粉；更优选选自包含以下的组：抗性玉米淀粉、抗性马铃薯淀粉和抗性香蕉淀粉；最优选选自抗性玉米淀粉和抗性马铃薯淀粉。
[0064]
在本发明的实施例中，抗性淀粉的特征在于其特定直链淀粉含量。在本发明的一个实施例中，抗性淀粉的特征在于高直链淀粉含量，如基于淀粉总干重至少35wt.％，例如至少40wt.％、至少45wt.％、至少50wt.％或至少55wt.％的直链淀粉含量。没有具体上限，尽管实际上抗性淀粉基于淀粉总干重具有小于75wt.％、小于70wt.％、小于65wt.％或小于60wt.％的直链淀粉含量。当前，可获得直链淀粉含量高达70wt.％的高直链玉米淀粉。
[0065]
基于x射线衍射图，淀粉可以分为a型、b型和c型。a型结构具有链长为23个至29个葡萄糖单位的支链淀粉。支链淀粉分子链的羟基之间的氢键导致形成外部双螺旋结构。在这些胶束之间，直链淀粉部分的直链通过与支链淀粉的外直链形成氢键而堆积。该模式在谷物中非常普遍。b型结构由链长为30至44个葡萄糖分子的支链淀粉组成，其中水相互扩散。这是生马铃薯和香蕉中淀粉的常见模式。c型结构由链长为26至29个葡萄糖分子的支链淀粉组成，是a型和b型组合，其对于豌豆和豆类而言是典型的。
[0066]
对酶有抗性的原因之一是天然b型淀粉颗粒的结晶性。根据本发明，优选抗性淀粉是b型(抗性)淀粉。在本发明的实施例中，抗性淀粉的特征在于其具有特定粒度分布。在本发明的实施例中，抗性淀粉的特征在于体积加权平均直径d[4,3]为至少5μm、至少7.5μm、至少10μm、至少12.5μm、至少15μm、至少17.5μm、至少20μm、至少22.5μm或至少25μm。在本发明的实施例中，抗性淀粉的特征在于体积加权平均直径d[4,3]小于150μm、小于100μm、小于75μm、小于50μm、小于40μm、小于35μm、小于30μm或小于25μm。体积加权平均直径d[4,3]例如可以使用马尔文(malvern)mastersizer系统确定。
[0067]
在本发明的实施例中，抗性淀粉是高直链玉米淀粉。高直链淀粉的一些合适的但非穷尽性实例是himaize
tm
高直链淀粉(购自美国威彻斯特的宜瑞安公司(ingredion))，如260。
[0068]
在本发明的实施例中，抗性淀粉是颗粒状马铃薯淀粉。其合适的实例包括马铃薯淀粉食品级品质的2型抗性淀粉，其衍生自马铃薯；它是一种颗粒状浅米色粉末，用于食品中，并且具有gras(通常公认安全)状态(购自荷兰芬丹的艾维贝公司(avebe))。
[0069]
在本发明的实施例中，抗性淀粉是抗性木薯淀粉。其合适的实例包括c*actistar 11700(购自法国赛力事达公司(cerestar))。
[0070]
如本文所述的非治疗性方法和治疗包括以有效量向受试者施用2
’‑
fl与抗性淀粉(均如本文所述)。通常，非治疗性方法需要以单位剂型施用2
’‑
fl。通常也以单位剂型施用抗性淀粉。这种单位剂量可以采取任何形式，包括包含2
’‑
fl和抗性淀粉的膳食产品的形
式，其中该膳食产品以单份的形式提供，每份包含单位剂量的2
’‑
fl和抗性淀粉。单份可以单独包装。单位剂量在本文中定义为以单剂量向受试者施用的成分的量。根据单位剂量，一天中可以施用一个或多个单份。
[0071]
如本文所使用的，术语“单份(single serving)”是指一定量和/或大小的产品，其足以作为单个部分供单人食用。此类产品可以是即食型或即用型的形式，或者可以是需要进一步处理(如加热或添加一定量的热水或冷水)的形式。
[0072]
在一个实施例中，如本发明的方法中使用的组合物是包含2
’‑
fl和抗性淀粉的食品，优选为单份形式。单份可以单独包装。
[0073]
在优选的实施例中，2
’‑
fl的单位剂量为至少0.5克、至少1克、至少1.5克、至少2克、至少2.5克、至少3克、至少3.5克或至少4克。
[0074]
在另一实施例中，2
’‑
fl的单位剂量为最多25克，例如最多20克、最多15克、最多12.5克、最多10克、最多9克、最多8克、最多7克、最多6克或甚至最多5克。
[0075]
在又一实施例中，2
’‑
fl的单位剂量在0.5克至10克、优选在1克至8克、更优选在2克至4克的范围内。在实施例中，2
’‑
fl的单位剂量为3克至8克、优选为3克至7克、更优选为3克至6克。
[0076]
在再一实施例中，抗性淀粉的单位剂量为至少0.5克，例如至少1克、至少1.5克、至少2克、至少2.5克、至少3克、至少3.5克或至少4克。在一个实施例中，抗性淀粉的单位剂量为最多25克，例如最多20克、最多15克、最多12.5克、最多10克、最多9克、最多8克、最多7克、最多6克或最多5克。在具体实施例中，抗性淀粉的单位剂量为0.5克至10克。
[0077]
在再一实施例中，2
’‑
fl的单位剂量在0.5克至15克的范围内，并且抗性淀粉的单位剂量为0.5克至15克，优选地2
’‑
fl的单位剂量在1克至10克的范围内，并且抗性淀粉的单位剂量为1克至10克，更优选地2
’‑
fl的单位剂量在2克至8克的范围内，并且抗性淀粉的单位剂量为1克至8克。
[0078]
在另一实施例中，用于本发明的方法的组合物包含的2
’‑
岩藻糖基乳糖的量为至少0.5克，例如至少1.0克，如至少2.0克、4.0克、6.0克、8.0克、10.0克、12克或甚至至少15克。在再一实施例中，组合物进一步包含的抗性淀粉的量为至少0.5克，例如至少1.0克，如至少2.0克、4.0克、6.0克、8.0克、10.0克、12克或甚至至少15克。
[0079]
如本领域技术人员将理解的，基于本教导，本发明方法中的施用优选以单一组合物的形式口服进行，或替代性地，以同时或顺序施用两种组合物的方式施用2
’‑
fl和抗性淀粉。在其中顺序施用2
’‑
fl和任选的抗性淀粉的实施例中，优选地，各组合物的施用间隔时间为最多5小时，优选最多4小时、最多3小时、最多2小时、最多1小时、最多30分钟、最多20分钟、最多15分钟、最多10分钟或最多5分钟。在顺序施用的情况下，优选在施用2
’‑
fl之前施用抗性淀粉。
[0080]2’‑
fl和抗性淀粉的组合物或单位剂量优选每周至少施用一次，优选每3天至少施用一次、每隔一天至少施用一次、每天至少施用一次。在本发明的优选实施例中，非治疗性方法包括每天施用单位剂量的2
’‑
fl、或2
’‑
fl和抗性淀粉，优选每天一次、每天两次、每天三次或每天四次，更优选每天一次或两次，最优选每天一次。
[0081]
根据本发明，如本文定义的非治疗性方法优选持续至少两周，更优选至少3周、至少4周、至少1个月、至少两个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月的时间段。
[0082]
在本发明的实施例中，非治疗性方法包括以平均每天0.5克至32克的量、优选以平均每天1克至24克的量、更优选以平均每天4克至16克(例如，每天约12克)的量，优选在至少2周、优选至少3周、至少4周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月的时间段内施用2
’‑
fl。
[0083]
在其他实施例中，如本文定义的非治疗性方法包括以平均每天0.5克至32克的量、优选以平均每天2克至24克的量、更优选以平均每天3克至16克的量、更优选每天4克至12克(例如，每天约7.5克)的量，优选在至少2周、优选至少3周、至少4周、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月的时间段内施用抗性淀粉。
[0084]
在另外的实施例中，2
’‑
fl包含在组合物中。当2
’‑
fl包含在组合物中时，与组合物的总重量相比，2
’‑
fl优选以至少5wt.％、至少10wt.％、至少20wt.％、至少30wt.％、至少40wt.％、至少50wt.％、至少60wt.％、至少70wt.％、至少80wt.％、至少90wt.％或至少95wt.％的量存在。在优选的实施例中，与组合物的总重量相比，2
’‑
fl以5wt.％至95wt.％的范围、更优选以10wt.％至90wt.％的范围、甚至更优选以20wt.％至80wt.％的范围、更优选以25wt.％至75wt.％的范围、最优选以30wt.％至60wt.％的范围存在。
[0085]
在特别有利的实施例中，组合物包含2
’‑
fl和抗性淀粉。其中，2
’‑
fl以如上定义的wt％
‑
量存在，并且抗性淀粉以相对于组合物总重量的至少5wt.％的量存在。优选地，与组合物的总重量相比，2
’‑
fl以至少5wt.％的量存在于组合物中，而抗性淀粉以至少5wt.％的量存在。更优选地，与组合物的总重量相比，抗性淀粉以至少10wt.％、至少20wt.％、至少30wt.％、至少40wt.％、至少50wt.％、至少60wt.％、至少70wt.％、至少80wt.％、至少90wt.％或至少95wt.％的量存在。
[0086]
在优选的实施例中，在包含2
’‑
fl和抗性淀粉的组合物中，2
’‑
fl和抗性淀粉以在0.5:10至10:0.5范围内的重量比提供、优选以在1:8至8:1范围内的重量比提供、更优选以在2:6至6:2范围内的重量比提供、最优选以在3:5至5:3范围内的重量比提供。在优选的实施例中，2
’‑
fl和抗性淀粉以约1:1的重量比提供于组合物中。
[0087]
在再一实施例中，如本发明的非治疗性方法中使用的组合物中2
’‑
fl和抗性淀粉的组合量为最多30克、优选最多25克、更优选最多20、最优选最多15克。如在该实施例中提及的2
’‑
fl和抗性淀粉的最大组合量涉及成年受试者每天可消耗的最大量，而不会干扰正常排便。通常，较高量会导致腹泻或液体/水样排便。
[0088]
在另一实施例中，组合物基本上由2
’‑
fl和抗性淀粉以如上定义的量或比率组成。
[0089]
在本发明的非治疗性方法的再一实施例中，2
’‑
fl包含于食品中，该食品优选选自包含以下的组：乳制品，例如作为奶制品、奶昔、巧克力奶、酸奶、布丁、奶油、奶酪、冰淇淋等；棒(bar)，如作为营养棒、能量棒、零食棒(snack bar)、谷物棒、针对糖尿病的棒等；液体产品，如营养饮料、低糖饮料、液体代餐(liquid meal replacer)、运动饮料和其他强化饮料；甜点类产品，如布丁、酸奶；美味小吃(savory snack)，如薯片、玉米饼、膨化和烘烤的小吃、饼干、咸脆饼干；美味饼干(savory biscuit)，焙烤食品，如松饼、蛋糕、饼干；意式面食，如意大利式细面条；以及食品补充剂，如丸剂、胶囊剂或干粉。食品补充剂可以随时食用，或者可能需要溶解在液体(如水)中。干粉形式的产品可以与如汤匙之类的装置一起使用，以测量所需量的粉末(例如每日或单位剂量)。食品补充剂可以进一步包含通常用于食品补充剂中的其他成分，如维生素、矿物质、盐等。食品优选选自由乳制品、液体产品和食品补充剂
组成的组。
[0090]
如本文定义的组合物或如本文定义的食品可以在罐、瓶、小袋、纸箱、包装纸等中提供。
[0091]
在优选的实施例中，如本发明的方法中使用的组合物或食品包含与该组合物或食品的总重量相比至少10wt.％、至少20wt.％、至少30wt.％、至少40wt.％、至少50wt.％、至少60wt.％、至少70wt.％、至少80wt.％、至少90wt.％或100wt.％的量的如本文定义的2
’‑
fl和任选地抗性淀粉。
[0092]
在一个实施例中，食品或饮食产品以单份形式，优选每份包含0.5克至25克的2
’‑
fl、更优选1克至20克的2
’‑
fl；更优选每份包含0.5克至15克的2
’‑
fl和0.5克至10克的抗性淀粉，甚至更优选每份包含0.5克至10克(如2克至8克)的2
’‑
fl和0.5克至10克抗性淀粉；特别优选每份包含0.5克至10克(如2克至8克)的2
’‑
fl和1克至6克的抗性淀粉。任选地，每个单份可以单独包装。
[0093]
本发明中的特定食品中所含的如本文定义的2
’‑
fl或包含2
’‑
fl和抗性淀粉的组合物的量取决于食品的种类，特别是其尺寸和组成，以及取决于产品消耗或应该消耗的频率和数量。
[0094]
在特别优选的实施例中，在本发明的方法中使用的食品或饮食产品的几份单份可以包装在容器中，以在数天(例如，一周或一个月)中提供足够的单份。
[0095]
另一方面，本发明涉及用于在受试者中预防超重或与超重相关的病症的2
’‑
岩藻糖基乳糖，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人，更优选其中该受试者是2岁或以上的人，且其体重指数(bmi)等于或小于表1中所示的针对该受试者的年龄和性别的最大值。
[0096]
一方面，本发明涉及2
’‑
岩藻糖基乳糖在受试者中预防超重或与超重相关的病症中的用途，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人，更优选其中该受试者是2岁或以上的人，且其体重指数(bmi)等于或小于表1中所示的针对该受试者的年龄和性别的最大值。
[0097]
再一方面，本发明涉及包含(i)2
’‑
岩藻糖基乳糖和(ii)抗性淀粉的组合物，其用于在受试者中预防超重或与超重相关的病症，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人，更优选其中该受试者是2岁或以上的人，且其体重指数(bmi)等于或小于表1中所示的针对该受试者的年龄和性别的最大值。又一方面，本发明涉及这种组合物在受试者中保持健康体重或减轻体重的用途，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人。再一方面，本发明涉及这种组合物用于增加受试者的远端结肠中短链脂肪酸(scfa)、优选乙酸盐的浓度的用途，其中该受试者是具有瘦体重的哺乳动物，优选其中该受试者是人。
[0098]
根据本发明的包含2
’‑
fl和抗性淀粉的组合物的治疗用途通常将依赖于相同化合物、组合物和产物的使用和其量，以及相同施用途径和相同剂量方案，如上文关于非治疗性方法所定义的。
[0099]
如本文前面已经指出的，本发明一方面在于发现向受试者(口服)施用本发明的组合导致结肠远端部分中scfa水平的增加。不希望受理论的束缚，可以理解的是，scfa水平的这种增加有利于预防多种疾病或病症，包括特别是超重和与超重相关的疾病和病症。
[0100]
因为超重与其他疾病的发作或进展有关，所以本发明的组合和方法可另外用于减少与超重相关的并发症的方法中，该并发症包括血管疾病、高血压、胰岛素抵抗、糖尿病和肌肉骨骼疾病。在各种实施例中，本发明提供了用于在如本文定义的受试者中预防这些与超重相关的疾病或病症的方法中使用的组合。
[0101]
本发明还涉及用于预防如本文定义的超重和/或与超重相关的病症的方法，所述方法包括向如本文定义的受试者施用2
’‑
fl和rs的步骤。在一个实施例中，在用于预防超重和/或与超重相关的病症的方法中，2
’‑
fl包含在组合物中，该组合物进一步包含抗性淀粉。在根据本发明的预防超重和/或与超重相关的病症的方法中，以与本文所定义的相同的量、比率、剂量方案、饮食产品等使用2
’‑
fl和抗性淀粉。
[0102]
再一方面，本发明涉及2
’‑
fl和rs在生产用于治疗超重或与超重相关的病症的药物中的用途。
[0103]
又一方面，本发明涉及包含至少5wt％的2
’‑
fl和至少5wt％的抗性淀粉的组合物，其中wt％是基于组合物的总固体确定的。优选地，在本发明的这个方面中，基于总固体，不溶的、不可消化的碳水化合物的总量为10％
‑
100％至95wt.％。更优选地，在本发明的这个方面中，2
’‑
fl和抗性淀粉的总量为基于总固体的25wt.％至75wt.％。
[0104]
本发明的组合物或如本发明的用途或方法中使用的组合物可以进一步包含可有助于受试者的总体健康的其他成分。在一个实施例中，这些其他成分包括益生菌，特别是可以帮助受试者减轻体重的益生菌，如发酵乳杆菌(lactobacillus fermentum)、淀粉乳杆菌(lactobacillus amylovorus)或加氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)。在另一实施例中，此类其他成分可以包含一种或多种选自由菊粉、寡聚果糖(即低聚果糖(fos))、木聚糖(即低聚木糖(xos))、甘露聚糖(即甘露寡糖(mos))、β
‑
葡聚糖(即β1
‑
3、β1
‑
4和/或1
‑
6β
‑
葡聚糖)、果胶、维生素和低聚半乳糖(gos)组成的组的成分。优选地，此类其他成分包括一种或多种选自由菊粉和寡聚果糖(即低聚果糖(fos))组成的组的成分。
[0105]
本发明的另一方面涉及通过施用有效量的2
’‑
fl、优选通过施用有效量的2
’‑
fl和抗性淀粉来治疗患有非期望体重增加的人的方法。2
’‑
fl和抗性淀粉的每天量、剂量、单位或份量是如本文其他处所定义的。在这个方面的一个实施例中，受试者具有瘦体重，优选受试者的年龄为18岁或以上。
[0106]
本发明的另一方面涉及通过施用有效量的2
’‑
fl、优选通过施用有效量的2
’‑
fl和抗性淀粉来治疗预期减轻体重或保持健康体重的人的方法。2
’‑
fl和抗性淀粉的量是如本文其他处所定义的。在这个方面的一个实施例中，受试者具有瘦体重，优选受试者的年龄为18岁或以上。
[0107]
除在实施例中或另外明确指出的以外，在说明书中所有指示材料量或者反应和/或使用条件的数值应理解为在描述本发明的最广泛范围时由词语“约”修饰。通常优选在所述的数值限度内实施本发明。另外，除非明确说明与此相反，否则：百分比、“份数”和比率值按重量计；适合于或优选用于与本发明有关的给定目的的材料的组或类的描述意味着该组或类的任何两个或更多个组成部分的混合物可以同样地是适合的或优选的；化学术语中成分的描述是指附加到说明书中指定的任何组合时的成分,并且不一定排除一旦混合后混合物的成分之间的化学相互作用；首字母缩写词或其他缩写词的第一个限定适用于相同缩写的本文所有的后续使用，并且将必要的修改应用于最初限定的缩写的正常语法变化；并且，
除非明确说明与此相反，否则特性的测量通过与先前或以后引用的同一特性相同的技术确定。
[0108]
还应理解的是，本发明不限于本文描述的特定实施例和方法，因为具体的组分和/或条件当然可以变化。此外，本文所使用的术语仅出于描述本发明的特定实施例的目的而使用，并不旨在以任何方式进行限制。
[0109]
还必须注意，如说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数个对象，除非上下文另外明确指出。例如，以单数形式提及的组分旨在包含多种组分。
[0110]
将理解的是，在本披露内容中，对重量、重量比等的任何提及均涉及干物质，特别是涉及组合物的干物质。
[0111]
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语一般具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。
[0112]
如本文所使用的，术语“包含”与“包括”或“含有”同义，是开放式的，并且不排除其他未叙述的要素、成分或方法步骤；而术语“由
……
组成”是封闭式术语，不包括未明确叙述的任何其他元素、步骤或成分。
[0113]
如本文所使用的，术语“基本上由
……
组成”是部分开放式术语，不排除其他未叙述的要素、步骤或成分，只要这些其他要素、步骤或成分未对本发明的基础特性和新颖特性产生实质性影响。
[0114]
因此，如本文所使用的，术语“包含”包括术语“由
……
组成”和术语“基本上由
……
组成”。因此，在本技术中，术语“包含”意味着更具体地涵盖术语“由
……
组成”和术语“基本上由
……
组成”。
[0115]
在整个本技术中，在引用了出版物的情况下，这些出版物的披露内容通过援引以其整体特此并入本技术，以更充分地描述本发明所属的技术水平。
[0116]
在下文中，参考以下非限制性实例说明本发明。
[0117]
实例
[0118]
体外发酵模型tim
‑2[0119]
使用tim
‑
2模型进行体外发酵研究。这是经过验证的动态计算机控制模型，其模仿人结肠，模拟体温、管腔ph，通过模型内部的半透膜吸收水和微生物代谢物，通过蠕动运动混合和运输肠内容物，使用人源厌氧微生物群，它基本上对应于如minekus,m.等人,appl.microbiol.biotechnol.[应用微生物学与生物技术]1999 53,108
‑
114.doi:10.1007/s002530051622和kortman等人,frontiers in microbiology[微生物学前沿]2016,6,1481所述的模型。
[0120]
tim
‑
2系统中内容物的运动特征是使用该系统中ph增加和内容物的蠕动运动(使用蠕动泵)进行模拟，如minekus,m(1998.development and validation of a dynamic model of the gastrointestinal tract[胃肠道动力学模型的开发和验证].phd thesis[博士论文],delft university of technology[代尔夫特理工大学],荷兰)所述。
[0121]
scfa分析
[0122]
scfa分析在荷兰芬洛的布赖特实验室(brightlabs b.v.)根据(s
á
yago
‑
ayerdi sg等人,food research international[国际食物研究],电子发表日期2017年12月13日；
sayago ayerdi等人food research international[国际食物研究]118(2019)89
‑
95)进行。
[0123]
接种
[0124]
将来自11名没有任何代谢性疾病的健康消瘦型受试者的合并粪便微生物群样品用于接种tim
‑
2体外发酵模型。
[0125]
维生素混合物
[0126]
使用的维生素混合物含有(每升)：1mg甲萘醌、2mg d
‑
生物素、0.5mg维生素b12、10mg泛酸酯、5mg烟酰胺、5mg对氨基苯甲酸和4mg硫胺素。
[0127]
透析液
[0128]
tim
‑
2系统中使用的透析液含有(每升)：2.5g k2hpo4·
3h2o、4.5g nacl、0.005g feso4·
7h2o、0.5g mgso4·
7h2o、0.45g cacl2·
2h2o、0.05g胆汁和0.4g半胱氨酸
·
hcl，加1ml的维生素混合物。
[0129]
实例1
[0130]
新鲜取样粪便微生物群并在厌氧条件下于冰上直接保存(2h内)。接下来，在厌氧箱中，将样品用透析液按1:1稀释，并以大约相等的重量合并，然后添加甘油(终浓度为12
‑
13w/w)，并将等分试样(30ml/管)冷冻在液氮中且于
‑
80℃储存。
[0131]
接种前，从
‑
80℃冰箱中取出4x30
‑
ml等分试样，并在37℃的水浴中解冻整整1小时(仍在无氧条件下)。在厌氧箱中，合并来自4个管的微生物群，并添加相同体积的预先还原的(即无氧的)透析液，轻轻混合并分到4个注射器中，每个注射器包含约60ml含微生物群的液体。用小软管密封注射器，软管用管夹封闭。每个tim
‑
2单元均用4个注射器中的1个(即60ml微生物群/透析液混合物)进行接种，并使用一个单个样品端口接种tim
‑
2单元。将微生物群引入该单元后，将另外的60ml预还原的透析液添加到tim
‑
2单元中，以使终体积为每单元(即系统)120ml。
[0132]
为了模拟结肠近端区域、横结肠和结肠远端部分的状况，在24小时的时间段内，使用1m naoh将微生物群/透析液混合物的ph从ph 5.8增加至ph 7.0。ph增加模拟了24小时实验期间纤维通过结肠运输(其中最近16小时模拟了远端结肠位置(即横结肠 远端结肠))。
[0133]
在插入试验品后的1、2、4、6、8和24h后，取样品(1ml)用于scfa分析；确定scfa的累积绝对量。
[0134]
将样品以14,000rpm离心10min，通过0.45μm pfte过滤器过滤，并在流动相(1.5mm硫酸水溶液)中稀释。使用自动进样器730(万通公司(metrohm)，海利绍(herisa)，瑞士)，将十微升装入柱中。根据它们的pka洗脱酸。使用配备了transgenomic ic sep ice
‑
ion
‑
300柱(30cm
×
7.8mm
×
7μm)和metrosep rp2 guard的883色谱仪(ic，万通公司)通过离子排阻色谱法(iec)进行分析。使用0.4ml/min柱流速和65℃柱温度。使用抑制型电导检测法来检测酸的含量。分析由布赖特实验室(brightlabs)(芬洛，荷兰)进行。
[0135]
试验品的添加：
[0136]
在40h的适应期后，将7.5克2
’‑
岩藻糖基乳糖(2
’‑
fl)或7.5克2
’‑
fl和7.5克抗性淀粉(rs2树薯淀粉，荷兰芬丹的艾维贝公司(avebe))通过样品端口(周三)引入tim
‑
2单元中。
[0137]
实验周包含以下步骤：
[0138]
周一：启动tim
‑
2系统的所有4个单元(ph 5.8)。
[0139]
周二：模拟回肠流出物培养基(siem)进食(maathuis等人2009journal of the american college of nutrition[美国营养学院学报]28(6):657
‑
66doi:10.1080/07315724.2009.10719798)；
[0140]
模拟回肠流出物培养基(siem)包含5.7克/升bd bacto胰蛋白(bd公司)、2.4克/升d
‑
葡萄糖(西格玛
‑
奥德里奇公司(sigma
‑
aldrich))、6.14克/升nacl(罗士公司(roth)，德国)、0.68克/升kh2po4(默克公司(merck)，德国)、0.3克/升nah2po4(默克公司，德国)、1.01克/升nahco3(默克公司，德国)、5.6克/升胆盐3号(difco公司)、0.2克/升溶菌酶(赛瓦公司(serva)，德国)、1,000uα
‑
淀粉酶(fluka公司，德国)、110u胰蛋白酶(西格玛
‑
奥德里奇公司)、380u胰凝乳蛋白酶(calbiochem公司，德国)和960u脂肪酶(西格玛
‑
奥德里奇公司)。在添加前将d( )
‑
葡萄糖和酶过滤除菌。
[0141]
周三：饥饿期3h，然后单次插入试验品；[通过样品端口添加2
’‑
fl(7.5克2
’‑
fl或7.5克2
’‑
fl 7.5克抗性淀粉)]；引入试验品后，在1h、2h、4h、6h和8h后取样品用于scfa分析。
[0142]
周四：插入试验品后24h：取最后一个样品用于scfa分析；
[0143]
周五：清洁。(实验在一周内进行)。
[0144]
结果
[0145]
在最后两个采样点之间(即，在插入样品后8至24小时之间)乙酸盐浓度增加被视为指示远端结肠中scfa和乙酸盐增加。
[0146]
实验结果显示在下表2中。
[0147]
表2.使用来自仅施用2
’‑
fl、或施用2
’‑
fl和抗性淀粉(rs)的组合的消瘦型受试者的微生物群样品的tim
‑
2实验的结果。
[0148][0149]
在表2中，乙酸盐和短链脂肪酸(scfa)的量是指在插入试验品后8小时至24小时内产生的量；代表远端结肠产生的乙酸盐和scfa的量。
[0150]
实验表明，在消瘦型受试者(bmi在至少18.5kg/m2至小于25kg/m2的范围内)中，当添加2
’‑
fl时，远端结肠的scfa水平并且特别是乙酸盐水平升高。当添加2
’‑
fl和抗性淀粉两者时，scfa并且特别是乙酸盐的量甚至更高。