一种快速去除白杨或桉树细胞壁的酶解方法和应用与流程

技术特征：
1.一种快速去除白杨或桉树细胞壁的酶解方法,其特征在于,至少包括如下步骤：利用配置的酶解溶液将白杨或桉树的叶片进行酶解去除细胞壁，酶解孵育即可；优选，包括如下步骤：白杨、桉树的叶片放置溶液i中浸泡；溶剂i浸泡后的白杨或桉树叶片放置到酶解溶液中进行酶解得酶解液；酶解终止后，再进行过滤和纯化。2.如权利要求1所述的酶解方法，其特征在于，所述酶解溶液的组成，包括下述质量百分比或浓度的组分：1-2％(w/v)纤维素酶r-10，0.4-0.8％(w/v)离析酶r-10，0.2-1.0％(w/v)果胶酶y-23,0.4-0.8mol/l甘露醇、18-22mmol/l氯化钾kcl、18-22mmol/l2-(n-吗啉基)乙磺酸(mes)、8-12mmol/l氯化钙、0.03-0.08mmol/lβ-巯基乙醇、0.08-0.12％(w/v)牛血清白蛋白(bsa)；优选，所述的酶解溶液的组成，包括下述质量百分比或浓度的组分：1.5％(w/v)纤维素酶r-10，0.4％(w/v)离析酶r-10，0.5％(w/v)果胶酶y-23,0.6mol/l甘露醇、20mmol/l氯化钾kcl、20mmol/l2-(n-吗啉基)乙磺酸(mes)、10mmol/l氯化钙、0.05mmol/lβ-巯基乙醇、0.1％(w/v)牛血清白蛋白(bsa)。3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述溶剂i为甘露醇溶液，优选浓度为0.4-1.2mol/l。4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述的酶解条件为黑暗条件下，放置于水平摇床上，20-24℃，酶解3-5小时。5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述酶解终止的方法为向所述酶解液中加入w5溶液。6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述过滤采用200-400目滤网过滤，所述纯化采用多次离心和清洗进行纯化；优选，所述清洗包括向经过滤和离心后的所述酶解液中加入w5溶液并离心去上清，并执行多次。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述w5溶液配方为下述质量百分比组分:154mmol/l氯化钠,125mmol/l氯化钙,5mmol/l氯化钾,2mmol/l2-(n-吗啉基)乙磺酸,5mmol/l葡萄糖。8.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：其中所述白杨或桉树叶片是通过培养基对白杨或桉树组培苗无菌继代和培养得到的。9.一种白杨或桉树的原生质体，其特征在于，是由权利要求1-8所述的方法制得。10.一种在白杨或桉树原生质体对外源dna质粒的转化中应用，其特征在于：权利要求9制备得到的原生质体、外源dna质粒、peg/ca
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和mmg溶液进行孵育转化。

技术总结
本发明涉及一种快速去除白杨或桉树细胞壁的酶解方法，利用特定配置的酶解溶液,将通过质壁分离预处理的白杨或桉树叶片,放入酶解溶液中,室温，处理,就能够获得完整度为90％的白杨或桉树原生质体。本发明通过快速去除白杨、桉树细胞壁,对于通过基因工程领域培育优良白杨、桉树新品种具有极大的应用价值。桉树新品种具有极大的应用价值。桉树新品种具有极大的应用价值。


技术研发人员：夏新莉 王厚领 刘晓 牛梦雪 于晓倩 张涵
受保护的技术使用者：北京林业大学
技术研发日：2021.11.10
技术公布日：2022/1/6